本發(fā)明涉及產(chǎn)生毛發(fā)纖維生長益處的口服或局部組合物。具體地說，所述口服或局部組合物包含核因子紅細(xì)胞-2相關(guān)因子2(nuclearfactorerythroid-2relatedfactor2)激動劑和肝x受體激動劑，其中所述核因子紅細(xì)胞-2相關(guān)因子2激動劑和所述肝x受體激動劑的每一種的量均產(chǎn)生毛發(fā)纖維生長的協(xié)同益處。毛囊的主要功能是產(chǎn)生毛發(fā)纖維。毛囊從胚表皮發(fā)育為表皮指(epidermalfinger)，其分化成纖維、外根鞘(ors)和內(nèi)根鞘(irs)。圖1圖解說明成熟毛囊如何經(jīng)歷以下階段毛囊循環(huán)：3-7年的器官生長和毛發(fā)纖維產(chǎn)生(生長期)、約2周的纖維生長停止和器官退化(退行期)和持續(xù)約3個月的靜止期(休止期)，其中所述器官休止并且所述毛發(fā)纖維保持錨定，但不再生長，然后毛發(fā)纖維脫落(脫落期)并且再生以再次開始所述循環(huán)(dry,jgenet16,281-340(1926),chase,physiolrev34,1,113-26(1954)和kligman,jinvestdermatol33,307-16(1959))。moi等(proc.natl.acad.sci.u.s.a,.91,21,9926–30(1994年10月))公開了核因子紅細(xì)胞-2相關(guān)因子2(被稱為nrf2)是在人中由nfe2l2基因編碼的轉(zhuǎn)錄因子(蛋白質(zhì))。根據(jù)lee等(j.ofbiochem&molbiol.37,139-143(2004))和hybertson等(molaspectsmed.32,234-46(2011))，已證明nrf2參與防御各種組織中的氧化損傷。在基礎(chǔ)條件下，nrf2在細(xì)胞質(zhì)中無活性并且被細(xì)胞溶質(zhì)調(diào)控蛋白質(zhì)kelch樣ech-相關(guān)蛋白1(keap1)結(jié)合。根據(jù)itoh等(genesdev.,13,1,76–86(1999年1月))，蛋白質(zhì)cullin3通過泛素化降解nrf2。根據(jù)kobayashi等(mol.cell.biol.,24,16,7130–9(2004年8月))，keap1幫助cullin3泛素化nrf2。當(dāng)nrf2被泛素化時，其被轉(zhuǎn)運至蛋白酶體，其于此處被降解，并且其組分被再循環(huán)，使得在正常條件下，nrf2具有僅20分鐘的半衰期。yamamoto等(mol.cell(biol.,28,8,2758–70(2008年4月))和sekhar等(toxicol.appl.pharmacol.,244,1,21–6(2009年6月))公開了氧化應(yīng)激或親電子應(yīng)激破壞keap1中的關(guān)鍵半胱氨酸殘基，從而破壞keap1-cullin3泛素化體系。當(dāng)nrf2不被泛素化時，其在細(xì)胞質(zhì)中累積并轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核中。itoh等(biochem.biophys.res.commun.,236,2,313–22(1997年7月))公開了在細(xì)胞核中，nrf2(形成異二聚體)與小maf蛋白(轉(zhuǎn)錄因子)組合并且結(jié)合至許多抗氧化基因的上游啟動子區(qū)域中的小dna區(qū)域(被稱為抗氧化應(yīng)答元件(are))，并起始它們的轉(zhuǎn)錄。因此are的誘導(dǎo)是nrf2上調(diào)的標(biāo)記。根據(jù)lee等和hybertson等，抗氧化基因包括“ii期”酶，如nadp(h)：醌氧化還原酶(nqo-1)和血紅素加氧酶-1(ho-1)。已證明增加的氧化應(yīng)激對毛發(fā)色素沉著具有不利影響(lu等，jinvestdermatol,129,1790-804(2009)；arck等，fasebj.2,1567-9(2006))。因此，nqo-1和ho-1的上調(diào)也是nrf2上調(diào)的標(biāo)記。毛發(fā)衰老是與年齡相關(guān)的主要消費者問題(脫發(fā)、毛發(fā)稀疏、光澤減退、灰發(fā)數(shù)量增加等)。用于毛發(fā)生長或防止毛發(fā)變灰的生物學(xué)途徑為靶向消費者毛發(fā)問題提供了有效的機會。當(dāng)前，米諾地爾tm和非那特利(finasteride)tm是唯一在臨床上被證明可用于毛發(fā)生長的輕微有效的產(chǎn)品并且兩者均可被分類為藥物且因此不適于化妝用途。鑒別能夠促進毛發(fā)生長、維持生長期和/或預(yù)防退行期的化妝品成分可證明是預(yù)防或減弱與毛發(fā)衰老相關(guān)的一些癥狀的有效抗衰老治療。wo2014/095289(unilever等)公開了觀察到nrf2激動劑(通過測量毛囊細(xì)胞中的nqo-1和ho-1蛋白質(zhì)上調(diào)來確定)促進毛發(fā)生長模型中的毛發(fā)纖維生長。實施例5公開了在內(nèi)毛囊根鞘和外毛囊根鞘中檢測到nqo-1，并且用萊菔硫烷(nrf2激動劑)處理毛囊導(dǎo)致間充質(zhì)結(jié)締組織鞘中ho-1的上調(diào)。根據(jù)wo2004/103320(unilever等)，肝x受體α/β(lxrα/β)是已知存在于人角質(zhì)形成細(xì)胞中的核受體，其中其在表皮內(nèi)的細(xì)胞增殖和分化以及脂質(zhì)代謝的調(diào)控中起主要作用。數(shù)據(jù)庫gnpdmintel項目xp002741680(“drdennisgrossskincare:nourishingscalpconditioner”)公開了含有數(shù)十種成分的毛發(fā)護理組合物?！瓣P(guān)鍵成分”被鑒別為：腺苷、α硫辛酸、銅肽、原花青素b2和視黃醇。其它成分包括蘋果皮提取物和β-谷固醇。蘋果皮提取物含有槲皮素糖苷，但基本上沒有槲皮素糖苷配基。數(shù)據(jù)庫gnpdmintel項目xp002741681(“dennisgross:anti-agingscalpserum”)公開了包含與xp002741680相同的“關(guān)鍵成分”的類似組合物，但另外將鋸葉棕列為關(guān)鍵成分。mundada和shivhare(“pharmacologyoftridaxprocumbensaweed:review”,intl.j.ofpharmtechresearch2,第2期第1391-1394頁)綜述了歸屬于長柄菊(tridaxprocumbens)的一些藥理學(xué)活性。所述植物的葉子被認(rèn)為“預(yù)防毛發(fā)脫落”并“促進毛發(fā)生長”，化學(xué)分析(由sawant和godghate,“preliminaryphytochemicalanalysisofleavesoftridaxprcumbenslinn.”,intl.j.ofscience,environmentandtechnology2,第3期第388-394頁所述)揭示所述植物的葉子不含有任何植物固醇，如菜籽固醇等。數(shù)據(jù)庫gnpdmintel項目xp002741682(swansonhealthproducts:“all-in-onenutrientformuladietarysupplement”)公開了“具有超過400種成分”的即飲式(ready-to-drink)液體組合物。非常大量的成分中有葉黃素(1mg/30ml，大約0.003w/v％)和植物固醇復(fù)合物(包括β-谷固醇、豆固醇和菜籽固醇)(25mg/30ml(大約0.075w/v％))。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明人已觀察到are(使用熒光素酶測定)在用1μm大葉土木香內(nèi)酯(nrf2激動劑)和1μm22(r)-羥基膽固醇(肝x受體α/β激動劑)的組合處理的hacat永生化人角質(zhì)形成細(xì)胞中的協(xié)同誘導(dǎo)。對于5μm大葉土木香內(nèi)酯和1μm22(r)-羥基膽固醇的組合、1μm大葉土木香內(nèi)酯和10μm22(r)-羥基膽固醇的組合以及5μm大葉土木香內(nèi)酯和10μm22(r)-羥基膽固醇的組合也觀察到協(xié)同作用。當(dāng)使用3-[3-[[[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基](2,2-二苯基乙基)氨基]丙氧基]苯乙酸鹽酸鹽(也被稱為gw3965鹽酸鹽并且得自tocris)和豆固醇作為肝x受體α/β激動劑時，也觀察到協(xié)同作用。本發(fā)明人還觀察到在用1μm萊菔硫烷(nrf2激動劑)和10μm22(r)-羥基膽固醇(肝x受體α/β激動劑)的組合處理的hacat永生化人角質(zhì)形成細(xì)胞中血紅素加氧酶1蛋白的上調(diào)。對于0.05μm萊菔硫烷和10μm22(r)-羥基膽固醇的組合還觀察到協(xié)同作用。對于0.01μm萊菔硫烷和10μm22(r)-羥基膽固醇的組合、1μm萊菔硫烷和1μm22(r)-羥基膽固醇的組合、0.05μm萊菔硫烷和1μm22(r)-羥基膽固醇的組合以及0.01μm萊菔硫烷和1μm22(r)-羥基膽固醇的組合未見協(xié)同作用。本發(fā)明人還觀察到用10μm萊菔硫烷和5μm22(r)-羥基膽固醇處理的人毛囊細(xì)胞中nqo-1mrna的顯著上調(diào)。因此，在本發(fā)明的第一方面，提供了一種口服或局部組合物，所述口服或局部組合物包含核因子紅細(xì)胞-2相關(guān)因子2激動劑和肝x受體激動劑，其中所述核因子紅細(xì)胞-2相關(guān)因子2激動劑和所述肝x受體激動劑的每一種的量均產(chǎn)生毛發(fā)纖維生長的協(xié)同益處，其中所述口服或局部組合物包含≤9％w/wβ-谷固醇、優(yōu)選≤8％w/wβ-谷固醇，其中當(dāng)所述口服或局部組合物包含兒茶素時，所述口服或局部組合物包含0.001至90％w/w兒茶素、優(yōu)選0.005至70％w/w兒茶素、最優(yōu)選0.01至50％w/w兒茶素，其中所述口服或局部組合物不包含孕烯醇酮、4,5-二氫呋喃二烯-6-酮、環(huán)氧裂葉苣莢萊內(nèi)酯、氫醌、木豆芪、莫納可林(monacolin)k、原白頭翁素、n-(2,2,2-三氟-乙基)-n-[4-(2,2,2-三-氟-1-羥基-1-三氟甲基-乙基)-苯基]-苯磺酰胺、二氫假荊芥內(nèi)酯、蟻素和二氫獼猴桃內(nèi)酯，其中當(dāng)所述口服或局部組合物包含沒藥固酮和表沒食子兒茶素沒食子酸酯時，所述口服或局部組合物中的沒藥固酮與表沒食子兒茶素沒食子酸酯的重量比不是1:28，并且其中當(dāng)所述口服或局部組合物包含二月桂酰胺谷氨酰胺賴氨酸鈉時，所述口服或局部組合物中的二月桂酰胺谷氨酰胺賴氨酸鈉不是0.3％w/w。在本發(fā)明的第二方面，提供了一種口服或局部組合物，所述口服或局部組合物包含核因子紅細(xì)胞-2相關(guān)因子2激動劑和肝x受體激動劑，其中所述核因子紅細(xì)胞-2相關(guān)因子2激動劑和所述肝x受體激動劑的每一種的量均產(chǎn)生協(xié)同的hacat永生化人角質(zhì)形成細(xì)胞中抗氧化應(yīng)答元件的誘導(dǎo)和/或血紅素加氧酶1的上調(diào)和/或人毛囊細(xì)胞中nad(p)h脫氫酶(醌)1的上調(diào)，其中所述口服或局部組合物包含≤9％w/wβ-谷固醇、優(yōu)選≤8％w/wβ-谷固醇，其中當(dāng)所述口服或局部組合物包含兒茶素時，所述口服或局部組合物包含0.001至90％w/w兒茶素、優(yōu)選0.005至70％w/w兒茶素、最優(yōu)選0.01至50％w/w兒茶素，其中所述口服或局部組合物不包含孕烯醇酮、4,5-二氫呋喃二烯-6-酮、環(huán)氧裂葉苣莢萊內(nèi)酯、氫醌、木豆芪、莫納可林k、原白頭翁素、n-(2,2,2-三氟-乙基)-n-[4-(2,2,2-三-氟-1-羥基-1-三氟甲基-乙基)-苯基]-苯磺酰胺、二氫假荊芥內(nèi)酯、蟻素和二氫獼猴桃內(nèi)酯，其中當(dāng)所述口服或局部組合物包含沒藥固酮和表沒食子兒茶素沒食子酸酯時，所述口服或局部組合物中的沒藥固酮與表沒食子兒茶素沒食子酸酯的重量比不是1:28，并且其中當(dāng)所述口服或局部組合物包含二月桂酰胺谷氨酰胺賴氨酸鈉時，所述口服或局部組合物中的二月桂酰胺谷氨酰胺賴氨酸鈉不是0.3％w/w。優(yōu)選地，在本發(fā)明的組合物中，所述組合物中核因子紅細(xì)胞-2相關(guān)因子2激動劑的濃度為至少0.09w/w％或0.09w/v％，優(yōu)選為0.1–49w/w％或0.1–49w/v％，更優(yōu)選為0.2–25w/w％或w/v％；并且其中所述組合物中所述肝x受體激動劑的濃度為至少0.09w/w％或0.09w/v％，優(yōu)選為0.1–49w/w％或0.1–49w/v％，更優(yōu)選為0.2–25w/w％或w/v％。在第三方面，本發(fā)明提供包含核因子紅細(xì)胞-2相關(guān)因子2激動劑和肝x受體激動劑的口服或局部組合物，其中所述口服或局部組合物包含≤9w/wβ-谷固醇、優(yōu)選≤8％w/wβ-谷固醇，其中當(dāng)所述口服或局部組合物包含兒茶素時，所述口服或局部組合物包含0.001至90％w/w兒茶素、優(yōu)選0.005至70％w/w兒茶素、最優(yōu)選0.01至50％w/w兒茶素；其中所述口服或局部組合物不包含孕烯醇酮、4,5-二氫呋喃二烯-6-酮、環(huán)氧裂葉苣莢萊內(nèi)酯、氫醌、木豆芪、莫納可林k、原白頭翁素、n-(2,2,2-三氟-乙基)-n-[4-(2,2,2-三-氟-1-羥基-1-三氟甲基-乙基)-苯基]-苯磺酰胺，二氫假荊芥內(nèi)酯、蟻素和二氫獼猴桃內(nèi)酯；并且其中當(dāng)所述口服或局部組合物包含沒藥固酮和表沒食子兒茶素沒食子酸酯時，所述口服或局部組合物中的沒藥固酮與表沒食子兒茶素沒食子酸酯的重量比不是1:28，并且其中當(dāng)所述口服或局部組合物包含二月桂酰胺谷氨酰胺賴氨酸鈉時，所述口服或局部組合物中的二月桂酰胺谷氨酰胺賴氨酸鈉不是0.3％w/w；其中所述組合物中核因子紅細(xì)胞-2相關(guān)因子2激動劑的濃度為至少0.09w/w％或0.09w/v％，優(yōu)選為0.1–49w/w％或0.1–49w/v％，更優(yōu)選為0.2–25w/w％或w/v％；并且其中所述組合物中所述肝x受體激動劑的濃度為至少0.09w/w％或0.09w/v％，優(yōu)選為0.1–49w/w％或0.1–49w/v％，更優(yōu)選為0.2–25w/w％或w/v％。在第四方面，本發(fā)明提供包含核因子紅細(xì)胞-2相關(guān)因子2激動劑和肝x受體激動劑的口服或局部組合物，所述激動劑在所述組合物中組合而對抗氧化應(yīng)答元件(“are”)的誘導(dǎo)施加協(xié)同作用，其中所述口服或局部組合物包含≤9％w/wβ-谷固醇、優(yōu)選≤8％w/wβ-谷固醇，其中當(dāng)所述口服或局部組合物包含兒茶素時，所述口服或局部組合物包含0.001至90％w/w兒茶素、優(yōu)選0.005至70％w/w兒茶素、最優(yōu)選0.01至50％w/w兒茶素；其中所述口服或局部組合物不包含孕烯醇酮、4,5-二氫呋喃二烯-6-酮、環(huán)氧裂葉苣莢萊內(nèi)酯、氫醌、木豆芪、莫納可林k、原白頭翁素、n-(2,2,2-三氟-乙基)-n-[4-(2,2,2-三-氟-1-羥基-1-三氟甲基-乙基)-苯基]-苯磺酰胺，二氫假荊芥內(nèi)酯、蟻素和二氫獼猴桃內(nèi)酯；并且其中當(dāng)所述口服或局部組合物包含沒藥固酮和表沒食子兒茶素沒食子酸酯時，所述口服或局部組合物中的沒藥固酮與表沒食子兒茶素沒食子酸酯的重量比不是1:28，并且其中當(dāng)所述口服或局部組合物包含二月桂酰胺谷氨酰胺賴氨酸鈉時，所述口服或局部組合物中的二月桂酰胺谷氨酰胺賴氨酸鈉不是0.3％w/w；其中所述組合物中核因子紅細(xì)胞-2相關(guān)因子2激動劑的濃度為至少0.09w/w％或0.09w/v％，優(yōu)選為0.1–49w/w％或0.1–49w/v％，更優(yōu)選為0.2–25w/w％或w/v％；并且其中所述組合物中所述肝x受體激動劑的濃度為至少0.09w/w％或0.09w/v％，優(yōu)選為0.1–49w/w％或0.1–49w/v％，更優(yōu)選為0.2–25w/w％或w/v％。在本發(fā)明的第五方面，提供根據(jù)本發(fā)明的第一至第四方面中任一方面的口服或局部抗衰老組合物用于促進毛發(fā)纖維生長。在第六方面，本發(fā)明提供核因子紅細(xì)胞-2相關(guān)因子激動劑和肝x受體激動劑作為口服或局部組合物中的活性劑用于有益于毛發(fā)纖維生長和/或誘導(dǎo)抗氧化應(yīng)答元件(are)的用途。所述用途可單純地用于化妝和非醫(yī)學(xué)目的。優(yōu)選地，核因子紅細(xì)胞-2相關(guān)因子激動劑以高于0.09w/w％或0.09w/v％的濃度，更優(yōu)選以0.1–49w/w％或w/v％的濃度且通常以0.2–25w/w％或w/v％的濃度用于所述組合物中。所述肝x受體激動劑類似地優(yōu)選以高于0.09w/w％或0.09w/v％的濃度，更優(yōu)選以0.1–49w/w％或w/v％的濃度且通常以0.2–25w/w％或w/v％的濃度用于所述組合物中。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，所述組合物可以是固體或液體。本說明書中其它地方詳述了優(yōu)選的核因子紅細(xì)胞-2相關(guān)因子激動劑和肝x受體激動劑的實例，如本說明書其它地方所詳述的，如所述組合物的其它任選組分。核因子紅細(xì)胞-2相關(guān)因子激動劑和肝x受體激動劑可以是所述組合物中的唯一活性劑。附圖簡述參考以下各圖來舉例說明本發(fā)明：圖1，其顯示經(jīng)過器官生長和毛發(fā)纖維產(chǎn)生(生長期)、纖維生長停止和器官退化(退行期)以及靜止期(休止期)的階段的毛囊循環(huán)；和圖2，其顯示通過間接免疫熒光在人毛囊中在毛球的基質(zhì)區(qū)域(2b)內(nèi)和毛囊球區(qū)域的外根鞘(ors)(2c)(dp為真皮乳頭)中的nqo-1蛋白表達(dá)的定位。發(fā)明詳述核因子紅細(xì)胞-2相關(guān)因子2激動劑可選自：異硫氰酸烯丙酯、穿心蓮內(nèi)酯、芹黃素、亞細(xì)亞酸、黃芩黃素、叔丁基羥基醌、(+)-兒茶素、柯因、柯因二甲醚、姜黃素、二十二碳六烯酸、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、七葉亭、秦皮素、高良姜精、染料木黃酮、大葉土木香內(nèi)酯、愈創(chuàng)木酚、橙皮素、4-羥基-3-甲氧基苯乙酮、茉莉酸、山柰酚、(s)-(+)-酮洛芬、激動素、激動素核苷、γ亞麻酸、硫辛酸、葉黃素、木犀草素、番茄紅素、去甲二氫愈創(chuàng)木酸、小白菊內(nèi)酯、氯化芍藥素、間苯三酚甲醛、喬松素、喬松酮、原兒茶酸(protocatechinicacid)、紫檀芪、槲皮素、蛇根堿、白藜蘆醇、水飛薊賓、水飛薊丁(silichristin)、萊菔硫烷、紫杉葉素、茶黃素、香草基丙酮、反式-玉米素核苷、甘菊油、歐芹皮乙醇提取物、鼠尾草皮乙醇提取物、酸橙皮乙醇提取物、陳皮乙醇提取物和百里香皮乙醇提取物。優(yōu)選地，核因子紅細(xì)胞-2相關(guān)因子2激動劑選自：異硫氰酸烯丙酯、芹黃素、亞細(xì)亞酸、兒茶素、姜黃素、二十二碳六烯酸、表沒食子兒茶素沒食子酸酯、七葉亭、染料木黃酮、橙皮素、山柰酚、硫辛酸、葉黃素、木犀草素、番茄紅素、喬松素、喬松酮、槲皮素、白藜蘆醇、萊菔硫烷、茶黃素、香草基丙酮、甘菊油、酸橙皮乙醇提取物和陳皮乙醇提取物。優(yōu)選地，在根據(jù)上述方面中任一方面的組合物中，核因子紅細(xì)胞-2相關(guān)因子2激動劑包括桉烷倍半萜類和/或環(huán)a-羥基化異阿蘭內(nèi)酯。桉烷倍半萜類的實例特別包括：α-桉葉醇、β-桉葉醇、γ-桉葉醇、(+)-4-表-柳杉二醇(cryptomeridiol)、(1r,2r,4as,5r,8ar)-2-異丙基-4a-甲基-8-亞甲基十氫化萘-1,5-二醇、1β-羥基-6,7α-二羥基胺葉-4(15)-烯、10-表-γ-桉葉醇、1β,6α-二羥基-4(14)-桉葉烯、4(15)-桉葉烯-1β,7α-二醇、4,6-二烯-1β,14-二羥基桉葉-3-酮、α-香附酮(chebi:80919)紫堇酮(corymbolone)(chebi:65659)、柳杉二醇(chebi:67796)、環(huán)桉葉醇chebi:4001)、香附醇(chebi:80813)甜香附醇c(cyperusolc)(chebi:69847)二氫沉香呋喃、encelin(chebi:4790)桉葉醇厚樸酚a粉狀菊內(nèi)酯(eudesobovatolafarinosin)(chebi:4977)大葉土木香內(nèi)酯chebi:5536)異阿蘭內(nèi)酯(chebi:5981)、異香附醇(chebi:80836)、豚草素(ivalin)(chebi:6077)、kikkanola(chebi:81209)、kikkanolb(chebi:81210)、kikkanolc(chebi:81211)和samboginone(chebi:67795)優(yōu)選的實例是大葉土木香內(nèi)酯。肝x受體激動劑可選自以下通式化合物、植物提取物、3-[3-[[[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基](2,2-二苯基乙基)氨基]丙氧基]苯乙酸鹽酸鹽、β-谷固醇和其混合物：或其中；r表示氫、羥基、酮基、乙?；⑷〈蛭慈〈?、支化或非支化的、飽和或不飽和的c1至c7烷基、或取代或未取代的、支化或非支化的、不飽和的c8烷基；r1表示低級烷基、氫或cor6；r2表示氫、鹵素或羥基；r3表示氫、羥基、鹵素、酮基或低級烷基；r4表示氫、羥基或酮基；r5表示氫、羥基、鹵素或低級烷基；r6表示低級烷基；x表示氫、甲基或鹵素；y表示氫、羥基、乙酰基或酮基；其中所述植物提取物選自：血竭樹脂(daemorgosdraco)的丙酮提取物、達(dá)瑪膠(damargum)的乙酸乙酯提取物、蕁麻(短柄野芝麻(lamiumalbim))的非皂化甲醇提取物、breuzihno樹脂的甲醇提取物、紅海藻的己烷提取物、乳香膠(masticgum)(乳香黃連木(pistacialentiscus))的甲醇提取物、花楸果的二氯甲烷提取物、車前草葉的二氯甲烷提取物和其混合物。如本文所用的“低級烷基”包括最多達(dá)4個碳原子的直鏈基團和支鏈基團兩者，適合的基團的實例概述于上文。優(yōu)選地，r表示氫、羥基、酮基或取代或未取代的c1至c4烷基，最優(yōu)選地，r表示取代的非支化的c1至c4烷基?；蛘遰表示-h、-oh、＝o、-coch3、＝cohch3、＝chch3、＝chch2oh和–ococh3，特別是r表示-c(ch3)(ch2)3c(ch3)2。優(yōu)選地，當(dāng)肝x受體激動劑為通式a時，y是酮基。優(yōu)選地，當(dāng)肝x受體激動劑為通式b時，r1表示氫并且y表示羥基、氫或乙?；?。r基團借以連接至17位的碳的鍵將取決于r基團(以波浪鍵指示)的性質(zhì)。當(dāng)r為烷基時，該基團可通過飽和或不飽和鍵、優(yōu)選不飽和鍵連接至17位的碳。出于本發(fā)明的目的，r可表示羥基、酮基或乙酰基。r還可表示取代或未取代的、飽和或不飽和的、支化或非支化的c1至c7(即包含c1、c2、c3、c4、c5、c6和c7)烷基。優(yōu)選地，所述c1至c7烷基包括至少一個選自羥基、酮基和乙?；娜〈鶊F，并且r可特別表示具有兩個和三個所述取代的取代的烷基。更優(yōu)選地，所述烷基已經(jīng)歷一個或多個酮基或羥基的取代。進一步優(yōu)選在一個或多個對應(yīng)或等同于下圖中所示的c20、c21、c22和c23的位置取代的烷基r：當(dāng)取代是利用酮基進行時，這最優(yōu)選鍵合至c20，而當(dāng)取代是利用羥基進行時，這最優(yōu)選鍵合至c21和/或c22處的碳。優(yōu)選烷基r保持非支化，因為這有助于維持有利的線性構(gòu)型，然而在烷基為支化的情況下，所述支鏈優(yōu)選包含2個碳、更優(yōu)選1個碳。當(dāng)r基團是如上文所述的烷基時，這將優(yōu)選具有一定的不飽和度。優(yōu)選地，不飽和以一個或多個取代酮基的形式發(fā)生。當(dāng)r表示不飽和的c1至c8烷基時，最優(yōu)選該基團具有式-c(ch3)(ch2)3c(ch3)2。雖然不希望受任何理論束縛，但據(jù)信是根據(jù)本文所提供的通式的分子的r基團的構(gòu)象決定了與活性位點的正確相互作用，并由此決定了肝x受體α的活化。更特別地，從分子結(jié)構(gòu)的計算機建模據(jù)信，當(dāng)所述r基團為碳鏈時，為了允許正確的活性位點相互作用，r基團應(yīng)當(dāng)優(yōu)選采取基本上線性的構(gòu)象。這可以在其中r基團是基本上線性的碳鏈和/或具有至少一個不飽和c-c鍵的那些分子中實現(xiàn)。還據(jù)信肝x受體α的更有效的激動劑包含小r基團。在優(yōu)選的實施方案中，因此肝x受體α激動劑的r基團表示氫、羥基、酮基或未取代的或更優(yōu)選取代的c1至c4烷基。優(yōu)選取代發(fā)生在烷基內(nèi)的c20或c21。當(dāng)r基團是烷基時，優(yōu)選這與環(huán)結(jié)構(gòu)的c17形成不飽和鍵。在優(yōu)選的實施方案中，r表示氫、羥基、酮基或取代/未取代的c1至c4烷基。適合的未取代基團包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或叔丁基。在優(yōu)選的實施方案中，r1為氫。r2表示氫、鹵素(優(yōu)選氯)或羥基。優(yōu)選地，r2表示氫。r3表示氫、鹵素(優(yōu)選氟或氯)、酮基或低級烷基。優(yōu)選地，r3為酮基或氫。在最優(yōu)選的實施方案中，r3為氫。優(yōu)選地，r4和r5表示羥基或氫。最優(yōu)選地，這些表示氫。r6表示低級烷基，優(yōu)選甲基。x優(yōu)選表示氫、氟或氯，最優(yōu)選地，x為氫。優(yōu)選地，y表示氫、羥基或酮基。當(dāng)y為氫時，在根據(jù)通式a的化合物中，雙鍵可在c16和c17之間形成。在根據(jù)式b的化合物中，當(dāng)y為氫時，r1優(yōu)選為氫或-cor6。優(yōu)選地，當(dāng)y為酮基時，肝x受體激動劑符合通式a，而當(dāng)y為羥基時，肝x受體激動劑優(yōu)選符合通式b。在最優(yōu)選的實施方案中，肝x受體激動劑符合式a，其中y為酮基。當(dāng)r為氫或羥基時，y優(yōu)選在根據(jù)式a的肝x受體激動劑中為酮基。當(dāng)r為-coch3時，y優(yōu)選在根據(jù)式a或b、優(yōu)選根據(jù)式a的肝x受體激動劑中為氫或酮基。當(dāng)r為＝chch3或-ococh3時，y最優(yōu)選在根據(jù)通式a的肝x受體激動劑中為酮基。當(dāng)r為＝chch2oh時，y優(yōu)選：(a)在根據(jù)通式a的肝x受體激動劑中為氫，其中r4優(yōu)選為羥基；或(b)在根據(jù)式b的肝x受體激動劑中為羥基，其中r1為氫。當(dāng)r為-c(ch3)(ch2)3c(ch3)2時，y優(yōu)選在根據(jù)式b的肝x受體激動劑中為氫，其中r1也為氫。優(yōu)選地，肝x受體激動劑選自：4-雄烯-3,16-二酮、雄-4-烯-3,6,16-三酮、4-雄烯-17β-醇-3,16-二酮乙酸酯、16-酮睪酮、3β-乙酰氧基孕-5,16-二烯-20-酮、3β-乙酰氧基孕-5-烯-20-酮、3β-羥基孕-5,16-二烯-20-酮、3β-羥基孕-5-烯-20-酮、5,16-二烯-孕烷-3,20-二醇、4,16-二烯孕-3,20-二酮、4,17(20)-(反式)-孕二烯-3,16-二酮、4-孕烯-3,16,20-三酮、4,17(20)-孕二烯-11β,21-二醇-3-酮、5,17(20)-孕二烯-3,16-二醇、5-孕烯-3β,16α,21-三醇-20-酮、24-羥基膽固-4-烯-3-酮、膽固-5,24-二烯-3β-醇、(3β)-3-羥基熊果-12-烯-28酸((3β)-3-hydroxyurs-12-en-28oicacid)、順式-沒藥固酮(guggulsterone)、去氫膽固醇、22(r)-羥基膽固醇、豆固醇、菜籽固醇、7-羥基膽固醇和其混合物。更優(yōu)選地，肝x受體激動劑選自去氫膽固醇、豆固醇、菜籽固醇、β-谷固醇和其混合物，或選自：22(r)-羥基膽固醇、豆固醇和3-[3-[[[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基](2,2-二苯基乙基)氨基]丙氧基]苯乙酸(在本文中也被稱為gw3965)和/或其鹽(尤其是鹽酸鹽)和上述化合物的混合物。本發(fā)明第一至第四方面的局部組合物將包含用作稀釋劑、分散劑和/或載體的皮膚病學(xué)上可接受的媒介物，所述媒介物不僅用于本發(fā)明所必需的成分，而且還用于任何其它任選但經(jīng)常優(yōu)選的成分。皮膚病學(xué)上可接受的媒介物可以是基于水或油的、無水的或乳液，通常優(yōu)選油包水或水包油乳液。如果是基于水的或乳液，則皮膚病學(xué)上可接受的媒介物占局部組合物的5至99％w/w、最優(yōu)選40至80％w/w，包括其中所包含的所有范圍。皮膚病學(xué)上可接受的媒介物還可包括有機溶劑，如烷醇和酯油。烷醇的典型實例是乙醇和異丙醇。酯油的典型實例是肉豆蔻酸異丙酯、肉豆蔻酸鯨蠟酯、肉豆蔻酸2-辛基十二烷基酯、鱷梨油、杏仁油、橄欖油和新戊二醇二癸酸酯。皮膚病學(xué)上可接受的媒介物還可包括0.1至50％w/w潤膚劑，如醇(例如鯨蠟醇)、硅油和硅酯以及酯。硅油包括含有3至9個、優(yōu)選4至5個硅原子的環(huán)狀或線性聚二甲基硅氧烷。非揮發(fā)性硅油包括聚烷基硅氧烷(例如聚二甲基硅氧烷)、聚烷基芳基硅氧烷和聚醚硅氧烷共聚物。酯包括具有10至20碳原子的脂肪酸的烯基酯或烷基酯(例如新戊酸異花生酯、異壬酸異壬酯、肉豆蔻酸油烯基酯、硬脂酸油烯基酯和油酸油烯基酯)，醚-酯(例如乙氧基化脂肪醇的脂肪酸酯)、多元醇酯(例如乙二醇單脂肪酸酯和乙二醇二脂肪酸酯、二乙二醇單脂肪酸酯和二乙二醇二脂肪酸酯、聚乙二醇(200-6000)單脂肪酸酯和聚乙二醇(200-6000)二脂肪酸酯、丙二醇單脂肪酸酯和丙二醇二脂肪酸酯、聚丙二醇2000單油酸酯、聚丙二醇2000單硬脂酸酯、乙氧基化丙二醇單硬脂酸酯、單脂肪酸甘油酯和二脂肪酸甘油酯、聚甘油聚脂肪酯、乙氧基化單硬脂酸甘油酯、1,3-丁二醇單硬脂酸酯、1,3-丁二醇二硬脂酸酯、聚氧乙烯多元醇脂肪酸酯、脫水山梨糖醇脂肪酸酯和聚氧乙烯脫水山梨糖醇脂肪酸酯)、蠟酯(例如蜂蠟、鯨蠟、硬脂酸硬脂基酯和山崳酸花生酯)和固醇酯(例如膽固醇脂肪酸酯)。皮膚病學(xué)上可接受的媒介物還可包括具有10至30個碳原子的脂肪酸(例如壬酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、異硬脂酸、油酸、亞油酸、花生酸、山萮酸和芥酸)。皮膚病學(xué)上可接受的媒介物還可包括0.2至25％w/w、優(yōu)選0.5至15％w/w的濕潤劑，所述濕潤劑增加潤膚劑的有效性，減少脫皮，刺激積累的皮屑的去除并改善皮膚感覺。通常，潤濕劑是多元醇(例如甘油、聚亞烷基二醇且更優(yōu)選亞烷基多元醇和它們的衍生物，包括丙二醇、二丙二醇、聚丙二醇、聚乙二醇和其衍生物、山梨糖醇、羥丙基山梨糖醇、己二醇、1,3-丁二醇、1,2,6-己三醇、乙氧基化甘油、丙氧基化甘油和其混合物)。優(yōu)選地，濕潤劑是甘油。皮膚病學(xué)上可接受的媒介物還可包括0.0001至5％w/w、優(yōu)選0.001至1％w/w、最優(yōu)選0.01至0.5％w/w稠化劑(例如交聯(lián)的丙烯酸酯如卡波普982、疏水改性的丙烯酸酯如卡波普1382、纖維素衍生物(如羧甲基纖維素鈉、羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、羥乙基纖維素、乙基纖維素和羥甲基纖維素)和天然膠(如瓜爾膠、黃原膠、菌類植物膠、角叉菜膠和果膠))。本發(fā)明的第一和第二方面的局部組合物還可包含0.001至40％w/w、優(yōu)選0.001至20％w/w、最優(yōu)選0.01至5％w/w表面活性劑，所述表面活性劑選自陰離子型表面活性劑、非離子型表面活性劑、陽離子型表面活性劑、兩性表面活性劑和其混合物。優(yōu)選的非離子型表面活性劑包括與每摩爾疏水物2至100摩爾氧化乙烯或氧化丙烯縮合的c10-c20脂肪醇疏水物或脂肪酸疏水物、乙二醇單肪酸酯和乙二醇二脂肪酸酯、脂肪酸甘油單酯、脫水山梨糖醇單c8-c20脂肪酸和脫水山梨糖醇二c8-c20脂肪酸、嵌段共聚物(如氧化乙烯/氧化丙烯)、聚氧乙烯脫水山梨糖醇和烷基聚糖苷和糖脂肪酰胺(如甲基葡糖酰胺)。優(yōu)選的陰離子表面活性劑包括皂、烷基醚硫酸鹽和烷基醚磺酸鹽、烷基硫酸鹽和烷基磺酸鹽、烷基苯磺酸鹽、烷基磺基琥珀酸鹽和二烷基磺基琥珀酸鹽、c8-c20酰基羥乙磺酸鹽、?；劝彼猁}和c8-c20烷基醚磷酸鹽。本發(fā)明的第一和第二方面的局部組合物還可包含其它任選的成分，如香料、填料(如滑石和二氧化硅)、α-羥基酸、β-羥基酸(如水楊酸)、鋅鹽(如巰氧吡啶鋅)、防腐劑、防曬劑(有機和無機兩者)(如對氨基苯甲酸(paba)、肉桂酸酯和水楊酸酯的衍生物(例如阿伏二苯甲酮(avobenzophenone)、甲氧肉桂酸辛酯和2-羥基-4-甲氧基二苯甲酮、氧化鋅和二氧化鈦)和去頭屑活性物(如酮康唑、氯咪巴唑和巰氧吡啶鋅)。本發(fā)明的第一和第二方面的局部組合物還可包含0.01至10％w/w、更優(yōu)選0.1至5％w/w、最優(yōu)選0.5至3％w/w調(diào)節(jié)硅酮(如二甲基硅氧烷醇、硅橡膠和氨基官能硅酮)。與調(diào)節(jié)硅酮組合，本發(fā)明的局部組合物將通常包含0.01至5％w/w、優(yōu)選0.05至1％w/w、更優(yōu)選0.08至0.5％w/w用于增強硅酮在毛發(fā)纖維上的沉積的陽離子型聚合物(如二甲基二烯丙基氯化銨均聚物(聚季銨鹽6)、丙烯酰胺和二甲基二烯丙基氯化銨的共聚物(聚季銨鹽7)、具有3至5個碳原子的不飽和羧酸的均聚物和共聚物的氨基烷基酯的礦物酸鹽(如us4009256中所述)、陽離子型聚丙烯酰胺(如wo95/22311中所述)和陽離子型多糖聚合物(例如與月桂基二甲基銨取代的環(huán)氧化物反應(yīng)的羥乙基纖維素的聚合季銨鹽(聚季銨鹽24)和瓜爾膠羥丙基三甲基氯化銨))。本發(fā)明的第一和第二方面的局部組合物可通過以非特定順序且通常在70至80℃以及在大氣壓力下混合成分來制造。用于本發(fā)明的局部組合物的包裝可以是貼片、瓶、管、滾珠施藥器(roll-ballapplicator)、推進劑驅(qū)動的氣溶膠裝置、擠壓容器或帶蓋子的罐。本發(fā)明還提供用于促進毛發(fā)纖維生長的方法，其包含向毛發(fā)纖維和/或頭皮施加本發(fā)明的第一或第二方面的局部組合物的步驟。本發(fā)明的第一和第二方面的口服組合物可呈固體、漿料、溶液、懸浮液、凝膠或乳液的形式。當(dāng)為固體時，本發(fā)明的第一方面的口服抗衰老組合物可呈一個或多個單位劑量的補充劑的形式，所述單位劑量如膠囊、扁囊劑、錠劑、丸劑、片劑、囊片，各自包含預(yù)定量的本發(fā)明的基本成分。更具體地，本發(fā)明的第一和第二方面的口服組合物可選自以下食料：飲料(例如基于水果或茶(例如山茶(camelliasinensis))的飲料、補充劑、湯劑(呈干燥、糊劑或液體形式)、人造黃油、即飲式(ready-to-eat)膳食、調(diào)料、蛋黃醬、芥末、基于蕃茄的調(diào)味品、調(diào)味醬(sauce)、調(diào)味料(seasoning)(例如作為呈以下形式的單位劑量：粉末、呈例如立方體形式的壓制粉末、液體或懸浮液、或凝膠)、酸奶和冷凍甜食?！袄鋬鎏鹗场币庵敢庠谟诶鋬鰻顟B(tài)下(即在其中食料的溫度小于0℃的條件下，并且優(yōu)選在其中食料包含大量的冰的條件下)食用的制作的甜味食料。冷凍甜食包括冰淇淋、果汁冰糕、冰凍果子露、冷凍酸奶、水冰、乳冰等。優(yōu)選地，冷凍甜食具有至少20％、更優(yōu)選至少25％的總固體含量(即除水以外的所有成分的重量的總和，表示為總重量的百分比)。冷凍甜食可以是充氣的或未充氣的。優(yōu)選地，冷凍甜食是充氣的。冷凍甜食可通過任何適合的工藝制造，通常通過制備成分的混合物；然后對所述混合物進行巴氏殺菌和任選地均質(zhì)化；然后對所述混合物進行冷凍和任選地充氣以產(chǎn)生所述冷凍甜食。本發(fā)明還提供用于促進毛發(fā)纖維生長的方法，其包括浸潤本發(fā)明的第一或第二方面的口服組合物的步驟。實施例1進行抗氧化應(yīng)答元件(are)報道基因測定的hacat細(xì)胞將hacat(永生人角質(zhì)形成細(xì)胞)細(xì)胞(p42)儲存在液氮中并且在含有10％fbs的dmem中復(fù)蘇。將所述細(xì)胞傳代培養(yǎng)并且在含有10％dmso的10％dmem中從前兩次傳代制得冷凍原液(cryostock)。為了產(chǎn)生穩(wěn)定的細(xì)胞系，確定最佳的抗生素濃度用于選擇穩(wěn)定的細(xì)胞集落。使用未轉(zhuǎn)染的hacat細(xì)胞完成殺滅曲線以評價它們的潮霉素b敏感性(因為待用于轉(zhuǎn)染的are-熒光素酶構(gòu)建體含有潮霉素b抗性基因)。將hacat細(xì)胞以每孔約80,000個細(xì)胞的細(xì)胞密度平鋪在24孔組織培養(yǎng)板中。24小時后，用不同濃度的潮霉素b(100μg/ml至800μg/ml，持續(xù)7天)處理所述細(xì)胞。將pgl4.37(luc2p/are/hygro)載體(promega目錄編號e3641)轉(zhuǎn)化為dh5α感受態(tài)細(xì)胞(invitrogen目錄編號18263-012)。然后將這些平鋪至lb-氨芐西林板上并且在孵育箱中在37℃保持過夜。第二天，挑取單集落并將其接種在5mllbamp培養(yǎng)基中并且在振蕩孵育箱中以250rpm在37℃保持8小時。然后將起子培養(yǎng)物以1:100接種于100mllbamp培養(yǎng)基中。24小時后，收獲培養(yǎng)物并且使用sigma’splasmidmidiprep試劑盒(目錄編號pld35-1kt)制備轉(zhuǎn)染級質(zhì)粒。將hacat細(xì)胞以每孔500,000個細(xì)胞的細(xì)胞密度平鋪在6孔組織培養(yǎng)板中。24小時后，根據(jù)制造商方案使用lipofectamine2000試劑(invitrogen)用2μg無內(nèi)毒素的轉(zhuǎn)染級pgl4.37[luc2p/are/hygro]載體以一式兩份轉(zhuǎn)染細(xì)胞。轉(zhuǎn)染后，使hacat細(xì)胞在非選擇性條件下生長并且表達(dá)潮霉素b抗性蛋白24小時。轉(zhuǎn)染后一天，用400μg/ml濃度的潮霉素b處理細(xì)胞以起始抗生素選擇壓力。對于穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞的選擇來說，使hacat細(xì)胞在含有400μg/ml潮霉素b的10％dmem培養(yǎng)基中生長。在潮霉素b選擇性條件下，抗性細(xì)胞將長得超出非抗性細(xì)胞，由此產(chǎn)生穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞的多克隆群體。每2-3天用400μg/ml潮霉素b選擇培養(yǎng)基進給穩(wěn)定表達(dá)的hacat細(xì)胞。在用400μg/ml潮霉素b培養(yǎng)基選擇3周后，在板上觀察到穩(wěn)定的匯集物。使用克隆環(huán)挑取單個克隆并將其轉(zhuǎn)移至96-孔板并且擴增直至t25cm2燒瓶中。在12個單個克隆中，選擇克隆7并驗證在用d,l-萊菔硫烷處理后熒光素酶的表達(dá)。將hacat_are_luc2p_clone_7細(xì)胞以每孔約7.5x103個細(xì)胞的細(xì)胞密度接種于96孔板中。24小時后，以遞增濃度(0μm、0.2μm、0.4μm、0.6μm、0.8μm和1μm)添加d,l-萊菔硫烷。產(chǎn)生用于熒光素酶測定的標(biāo)準(zhǔn)曲線以獲得用遞增濃度的d,l-萊菔硫烷處理的hacat_are_clone_7細(xì)胞的相對光單位(rlu)。將hacat_are_luc2p_clone_7細(xì)胞以每孔約7,500個細(xì)胞的細(xì)胞密度接種在96孔板中。將所有測試化合物以1:1000的最終稀釋度添加至細(xì)胞中并進行熒光素酶測定。在測定中評價以下測試化合物的組合：(a)大葉土木香內(nèi)酯(nrf2激動劑)和22(r)-羥基膽固醇(肝x受體α/β激動劑)；(b)大葉土木香內(nèi)酯和3-[3-[[[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基](2,2-二苯基乙基)氨基]丙氧基]苯乙酸鹽酸鹽(也被稱為gw3965鹽酸鹽且得自tocris)(肝x受體α/β激動劑)；和(c)大葉土木香內(nèi)酯和豆固醇(肝x受體α/β激動劑)。結(jié)果結(jié)果匯總于表1中，從表1顯而易見are(使用熒光素酶測定)在用1μm大葉土木香內(nèi)酯(nrf2激動劑)和1μm22(r)-羥基膽固醇(肝x受體α/β激動劑)的組合處理的hacat永生化人角質(zhì)形成細(xì)胞中的協(xié)同誘導(dǎo)。對于5μm大葉土木香內(nèi)酯和1μm22(r)-羥基膽固醇的組合、1μm大葉土木香內(nèi)酯和10μm22(r)-羥基膽固醇的組合以及5μm大葉土木香內(nèi)酯和10μm22(r)-羥基膽固醇的組合也觀察到協(xié)同作用。當(dāng)使用3-[3-[[[2-氯-3-(三氟甲基)苯基]甲基](2,2-二苯基乙基)氨基]丙氧基]苯乙酸鹽酸鹽(也被稱為gw3965鹽酸鹽并且得自tocris)和豆固醇作為肝x受體α/β激動劑時，也觀察到協(xié)同作用。表1：用大葉土木香內(nèi)酯(nrf2激動劑)和肝x受體α/β激動劑(22(r)-羥基膽固醇、gw3965鹽酸鹽和豆固醇)處理具有抗氧化應(yīng)答元件(are)報道基因的hacat細(xì)胞的結(jié)果(n＝3)。結(jié)論大葉土木香內(nèi)酯(nrf2激動劑)似乎與肝x受體α/β激動劑(22(r)-羥基膽固醇、gw3965鹽酸鹽和豆固醇)組合協(xié)同上調(diào)hacat永生化人角質(zhì)形成細(xì)胞中的are誘導(dǎo)。實施例2進行抗氧化應(yīng)答元件(are)報道基因測定的hacat細(xì)胞將hacat(永生人角質(zhì)形成細(xì)胞)細(xì)胞(p42)儲存在液氮中并且在含有10％fbs的dmem中復(fù)蘇。將所述細(xì)胞傳代培養(yǎng)并且在含有10％dmso的10％dmem中從前兩次傳代制得冷凍原液。將細(xì)胞以于2ml完全培養(yǎng)基/孔中約5000個細(xì)胞/cm2的接種密度常規(guī)地鋪展(platedout)于6孔組織培養(yǎng)皿中并保持24小時，并且在37℃在5％co2中孵育。在乙醇或dmso中制備測試溶液并將其直接添加至所述細(xì)胞中并且處理24小時。用如表2中所示的所選濃度的測試材料制備測試溶液。然后沉淀所述細(xì)胞。將所有細(xì)胞沉淀于冰上以每2.5x106個細(xì)胞1ml細(xì)胞溶解緩沖液裂解30分鐘。所述溶解緩沖液含有1％np-40、0.1％脫氧膽酸鈉、0.1％sds、6mm氯化鈉和0.05mtris(ph7.6)。在使用前以每ml溶解緩沖液10μl的水平添加蛋白酶抑制劑混合劑(1000x；sigmap8340)。將澄清的細(xì)胞裂解物在-80℃冷凍直到需要。使用piercebca蛋白質(zhì)測定試劑盒測量每種細(xì)胞裂解物的總蛋白質(zhì)濃度。從所供應(yīng)的2mg/mlbsa母液制備成一組8個0至1200μg/ml蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)溶液。將10μl標(biāo)準(zhǔn)品或細(xì)胞裂解物添加至平底96孔微量滴定板的一式兩份孔中。根據(jù)試劑盒說明書從50份試劑a和1份試劑b制備試劑溶液。將200μl最終試劑添加至微量滴定板的各孔中。將板混合，覆蓋并在37℃孵育30分鐘并且在562nm處讀取吸光度。構(gòu)建蛋白質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線并用于確定每種細(xì)胞裂解物的蛋白質(zhì)濃度。ho-1elisa(r&dsystems)使用duosethumantotalho-1/hmox1測定(r&dsystemsdyc3776)根據(jù)制造商說明書測定每種細(xì)胞裂解物的血紅素氧化酶-1(ho-1)蛋白濃度。以0.15625至10ng/ml的濃度在試劑稀釋劑(0.5％trition-x100和1mmedta，于pbs中，ph7.2)中制備8種ho-1標(biāo)準(zhǔn)品，包括陰性對照。將ho-1捕獲抗體在pbs中稀釋至8μg/ml的濃度，并在室溫下與微量滴定板(greinerbio-one)結(jié)合過夜。然后通過在自動洗板機上用洗滌緩沖液(pbs中的0.05％tween20)洗滌3次來去除未結(jié)合的抗體。將板用每孔300μl于pbs中的1％牛血清白蛋白(bsa)封閉1小時，并在洗滌緩沖液中洗滌3次。將100μl以1/5稀釋的細(xì)胞裂解物或標(biāo)準(zhǔn)品添加至一式兩份孔中。將板在室溫下孵育2小時，然后用洗滌緩沖液洗滌三次。將100μl稀釋至200ng/ml濃度的ho-1檢測抗體添加至每個孔中，并將板在室溫下孵育2小時。如之前一樣洗滌板。將100μl以1/200稀釋的鏈霉抗生物素蛋白辣根過氧化物酶(hrp)添加至每個孔中，并在室溫下在黑暗中孵育20分鐘。如之前一樣洗滌板，然后將100μl底物溶液(r&dsystemsdy999，colorreagenta和colorreagentb的1:1混合物)添加至每個孔中，并在室溫下在黑暗中孵育直至顯色(大約20分鐘)。將50μl終止溶液(2mh2so4)加至每個孔中，并且在450nm處在微板讀數(shù)器(dynexmrx)上對板讀數(shù)，波長校正設(shè)定為540nm。繪制平均od相對于ho-1濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線并通過回歸分析計算最佳擬合線。由此計算所有樣品中ho-1蛋白質(zhì)的未知濃度。使用總蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)對結(jié)果進行歸一化，并將其表示為ngho-1/μg蛋白質(zhì)。測試化合物為萊菔硫烷(nrf2激動劑)和22(r)-羥基膽固醇(肝x受體α/β激動劑)和其混合物。結(jié)果結(jié)果匯總于表2中，從表2顯而易見在用1μm萊菔硫烷(nrf2激動劑)和10μm22(r)-羥基膽固醇(肝x受體α/β激動劑)的組合處理的hacat永生化人角質(zhì)形成細(xì)胞細(xì)胞中存在血紅素加氧酶1蛋白的上調(diào)。對于0.05μm萊菔硫烷和10μm22(r)-羥基膽固醇的組合還觀察到協(xié)同作用。對于0.01μm萊菔硫烷和10μm22(r)-羥基膽固醇的組合、1μm萊菔硫烷和1μm22(r)-羥基膽固醇的組合、0.05μm萊菔硫烷和1μm22(r)-羥基膽固醇的組合以及0.01μm萊菔硫烷和1μm22(r)-羥基膽固醇的組合未見協(xié)同作用。表2：從用萊菔硫烷(nrf2激動劑)和22(r)-羥基膽固醇(肝x受體α/β激動劑)處理的hacat細(xì)胞表達(dá)的ho-1蛋白質(zhì)(ngho-1/μg蛋白質(zhì))(n＝3)。結(jié)論萊菔硫烷(nrf2激動劑)似乎與22(r)-羥基膽固醇(肝x受體α/β激動劑)組合協(xié)同上調(diào)hacat永生化人角質(zhì)形成細(xì)胞中的ho-1蛋白。實施例3毛囊細(xì)胞的nadp(h):醌氧化還原酶(nqo-1)基因表達(dá)測定在經(jīng)知情同意和倫理學(xué)批準(zhǔn)的情況下，從經(jīng)歷美容整形術(shù)(face-lift)或毛發(fā)移植手術(shù)的受試者獲得顳部或枕部人頭皮皮膚。根據(jù)philpott等(j.cellsci97,463-471(1990))中所述的方法分離并維持生長期vi毛囊。dhurat等(intjtrichology,2(2),96-100(2010年7月至12月))描述通常將生長期分為6個階段，即生長期i-v(前生長期)，此時毛干在毛囊內(nèi)生長；和生長期vi(后生長期)，此時毛干的尖端從毛囊出現(xiàn)。使毛囊在rnalater中穩(wěn)定(用于pcr)。每個培養(yǎng)條件/患者使用5個單個的生長期vi毛囊。為了評價nrf2激動劑對毛囊的作用，測試組(n＝4名供體受試者)接受nrf2激動劑(萊菔硫烷或叔丁基羥基醌(tbhq))保持24小時并且對照組(n＝4名供體受試者)僅接受二甲亞砜媒介物。使用qiagenrneasymicrokit提取rna(每次提取最多5mg組織)。根據(jù)制造商說明書，使用invitrogenclonedamvfirststrandsynthesis試劑盒對100ngrna進行逆轉(zhuǎn)錄。從invitrogen存貨測定(inventoriedassay)(lifetechnologies有限公司)獲得用于ho-1(hs01110250_m1)、nqo-1(hs00168547_m1)和nrf2(hs00232352_m1)的taqman引物組。將cdna在無rnase的水中以1:10稀釋。每個反應(yīng)由1μl20xtaqman測定、10μltaqmanfastadvancemastermix、5μl無rnase水和2ngcdna組成。將板在appliedbiosystemssteponeplustm實時pcr機上運行。使用快速循環(huán)條件，利用在95℃的2分鐘聚合酶活化步驟、之后在95℃變性1秒和在60℃退火/延伸20秒的45個循環(huán)。將所有pcr反應(yīng)均歸一化為持家對照ppia，其顯示處理之間沒有差異。通過δδct方法分析數(shù)據(jù)測試化合物為萊菔硫烷(nrf2激動劑)和22(r)-羥基膽固醇(肝x受體α/β激動劑)和其混合物。結(jié)果將結(jié)果呈現(xiàn)于表3中，其顯示了用萊菔硫烷和22(r)-羥基膽固醇處理的毛囊中的nqo-1基因表達(dá)(與18s相比的倍數(shù)變化)。與次最有效的nqo-1激動劑(其為10μm萊菔硫烷)相比，觀察到用10μm萊菔硫烷和5μm22(r)-羥基膽固醇處理的人毛囊細(xì)胞中nqo-1mrna的顯著(p≤0.01)上調(diào)。表3：用萊菔硫烷或22(r)-羥基膽固醇或其組合處理24小時后，毛囊細(xì)胞的nqo-1基因表達(dá)(與18s相比的倍數(shù)變化)。p-值涉及在95％置信限下萊菔硫烷或tbhq相對于媒介物對照的顯著性(n＝3)。nqo-1與18s相比的倍數(shù)變化媒介物1.01±0.0410μm萊菔硫烷5.44±0.505μm22(r)-羥基膽固醇1.04±0.0510μm萊菔硫烷+5μm22(r)-羥基膽固醇6.77±0.48結(jié)論萊菔硫烷(nrf2激動劑)似乎與22(r)-羥基膽固醇(肝x受體α/β激動劑)組合協(xié)同上調(diào)人毛囊細(xì)胞中的nqo-1蛋白。實施例4毛囊中nadp(h)：醌氧化還原酶(nqo-1)的免疫組織化學(xué)分析在獲得倫理批準(zhǔn)和知情的患者同意書(intertekcrs，manchester，uk)后，從患者獲得頭皮活檢標(biāo)本(4mm)。在6μm頭皮冷凍切片上進行nqo-1蛋白表達(dá)和定位的免疫組織化學(xué)染色。簡單地說，將冷凍切片在丙酮中固定，然后在0.1％tritonx100(辛基苯酚乙氧基化物)中滲透化。在磷酸鹽-或tris-緩沖鹽水(pbs、tbs)中進行洗滌。將一抗(1:100抗-nqo-1抗體[a180](ab28947；abcam,cambridge,uk))在4℃孵育過夜，然后與二抗(1:200；488驢抗-小鼠igg(h+l)抗體(a-21202；lifetechnologies,paisley,uk))孵育60分鐘。使用zeisslsm共聚焦顯微鏡進行免疫定位成像。結(jié)果結(jié)果示在圖2中，其顯示了通過間接免疫熒光在人毛囊中nqo-1蛋白表達(dá)的定位。特別是在毛球的基質(zhì)區(qū)域(2b)內(nèi)和毛囊球區(qū)域的外根鞘(ors)(2c)中觀察到nqo-1的陽性染色(白色)。在圖2中，dp是真皮乳頭。結(jié)論毛囊中的nadp(h)：醌氧化還原酶(nqo-1)的免疫組織化學(xué)分析證實，特別是在毛球的基質(zhì)區(qū)域內(nèi)和毛囊球區(qū)域的外根鞘中觀察到nqo-1。當(dāng)前第1頁12