本創(chuàng)作系指一種氧氣療法的使用并結(jié)合化療給藥和/或放療的反復(fù)運(yùn)用。創(chuàng)作背景放射增敏劑是一種使腫瘤細(xì)胞對放射治療更加敏感的藥物。放療的一大主要限制作用就是讓實(shí)體腫瘤的細(xì)胞在氧氣中變得稀少。實(shí)體腫瘤的增長速度超過血液供應(yīng)速度，因而會(huì)造成一種低氧狀態(tài)(稱為組織缺氧)。氧氣是一種強(qiáng)有力的放射增敏劑，通過形成損壞DNA的自由基來增加一次放射的有效性。缺氧環(huán)境中的腫瘤細(xì)胞可能比正常氧氣環(huán)境下的細(xì)胞對輻照損傷具有超出3倍的耐受力。創(chuàng)作圖式的簡要描述為讓本創(chuàng)作更能明顯易懂，下文特配合所附圖式和標(biāo)示的內(nèi)含元素作詳細(xì)說明如下：其中，圖1A顯示了在老鼠中9個(gè)Hs-766T胰腺癌腫瘤異種移植物的氧氣水平。不同的跡線代表了在9個(gè)不同老鼠中的9種腫瘤。每個(gè)老鼠都被注射了一個(gè)劑量的NVX-108：0.3mL/kg(藍(lán)色跡線)，0.45mL/kg(綠色跡線)或0.6mL/kg(紅色跡線)；圖1B顯示了3種不同劑量NVX-108水平下，老鼠中Hs-766T胰腺癌腫瘤異種移植物的平均和標(biāo)準(zhǔn)差氧氣水平：0.3mL/kg(藍(lán)色跡線，n＝2)，0.45mL/kg(綠色跡線，n＝3)或0.6mL/kg(紅色跡線，n＝4)；圖2A顯示了3組老鼠中腫瘤增長百分比對比圖；圖2B系圖2A中兩個(gè)治療組的放大圖。較佳實(shí)施例的詳細(xì)描述本創(chuàng)作在下文中通過較佳實(shí)施例并參考圖表進(jìn)行了描述，在圖表中同類數(shù)字代表相同或相似的元素。本說明書中所指“一個(gè)實(shí)施例”，“某實(shí)施例”或類似用語系指本實(shí)施例描述的某個(gè)具體特征、結(jié)構(gòu)或特點(diǎn)被包含在本創(chuàng)作的至少一個(gè)實(shí)施例中。因此，“一實(shí)施例”，“某實(shí)施例”和貫穿本說明書的類似用語均可能(但不一定)指同一實(shí)施例。本創(chuàng)作中描述的特征，結(jié)構(gòu)或特點(diǎn)可能以任何合適的方式與一個(gè)或多個(gè)實(shí)施例相結(jié)合。在下列描述中，許多具體細(xì)節(jié)被反復(fù)引用以便于充分理解本創(chuàng)作的實(shí)施例。不過，熟悉此項(xiàng)技術(shù)之人士當(dāng)可在缺乏一個(gè)或多個(gè)具體細(xì)節(jié)的情況下，或采用其他方法，成分和材料等實(shí)施本創(chuàng)作。在其他情況下，熟知的結(jié)構(gòu)，材料或操作并未詳細(xì)展示或描述，以避免對本創(chuàng)作引起歧義。十二氟戊烷乳劑(DDFPe)曾作為一種放療增敏劑在單次放療中進(jìn)行測試。腫瘤(異種移植)被輻射，然后從動(dòng)物中移除，細(xì)胞被分解并測試其生存能力。腫瘤的增長或存活都沒有被評估，并且，腫瘤pO2也沒有被直接評估?；熤袑?shí)施DDFPe的效果也沒有被評估。分割放療中DDFPe的多劑量實(shí)施也沒有被評估。在某些實(shí)施例中，被治療的動(dòng)物是哺乳動(dòng)物。在某些實(shí)施例中，被治療的動(dòng)物是人。在某些實(shí)施例中，劑量在大約0.01cc/kg到大約1.0cc/kg(2％w/volDDFPe)之間變化。在某些實(shí)施例中，劑量在大約0.05cc/kg到0.3cc/kg之間變化，并通過長達(dá)30分鐘的注入或單次彈丸推注的方式給藥。熟悉此項(xiàng)技術(shù)之人士應(yīng)當(dāng)會(huì)承認(rèn)，如果乳劑中DDFP的濃度增加(例如5％或10％，按體重計(jì))，則用藥量一般會(huì)隨之減少。優(yōu)選情況下，研究對象吸入氧氣或氧氣與二氧化碳的混合氣體，例如碳合氣，其比例為95％氧氣混合5％二氧化碳與98％氧氣混合2％二氧化碳之間。申請人發(fā)現(xiàn)碳合氣和氧氣的使用效果相當(dāng)，但碳合氣有些問題。它必須專門訂購，而氧氣隨處可得。每次放療前都靜脈注射DDFPe。在某些實(shí)施例中，DDFPe作為一種當(dāng)前臨床研發(fā)中的用藥產(chǎn)品以NVX-108命名。在先前技術(shù)中，相對較高分子量的碳氟化合物已經(jīng)作為放射增敏劑進(jìn)行研究。已經(jīng)作為放射增敏劑研究的材料包括：F-1,3-二甲基金剛烷，F(xiàn)-trimethylbicyclo[3.3.1]壬烷，F(xiàn)-三丁胺(FC-43,3M公司)，全氟萘烷和液態(tài)氟碳。創(chuàng)作者發(fā)現(xiàn)，低分子量的碳氟化合物(FC)，尤其是沸點(diǎn)在大約-4攝氏度到大約100攝氏度之間的FC，比更高分子量、更高沸點(diǎn)的FC更加有效。更優(yōu)選的是沸點(diǎn)在大約20到80攝氏度之間的FC，而更為優(yōu)選的是沸點(diǎn)在大約28到60攝氏度之間的FC。本創(chuàng)作中使用的FC包括：全氟丁烷，全氟戊烷，全氟己烷，全氟庚烷和全氟辛烷。在最優(yōu)選的全氟戊烷和全氟己烷中，最優(yōu)選的是全氟戊烷。最優(yōu)選情況下，F(xiàn)C通過高壓、溫控同質(zhì)化被制成一種乳劑。多種表面活化劑可以被用來制備乳劑。優(yōu)選的表面活化劑是磷脂，而優(yōu)選的磷脂成分包括dioleoylphosphatidylcholine(DOPC)和二油酰磷脂酰乙醇胺-PEG-5000(DOPE-PEG5k)。另一種優(yōu)選的磷脂混合物包括二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)和二棕櫚酰磷脂酰乙醇胺-PEG-5000(DPPE-PEG5k)。油脂的優(yōu)選比例是92分子百分?jǐn)?shù)DPPC和8分子百分?jǐn)?shù)DPPE-PEG。同比例的油脂也可優(yōu)選用于未飽和磷脂?；鶊F(tuán)。其他磷脂，例如膽固醇，磷脂酸，硬脂酸，棕櫚酸，油酸和磷脂酰乙醇胺，可以與上述油脂混合。其他有用的表面活化劑包括含氟表面活性劑，如PEG調(diào)聚物B和CAPSTONE(杜邦)?？梢允褂昧字秃砻婊钚詣┑幕旌衔铩Ｆ渌砻婊罨瘎┌ň垩跻蚁?聚氧丙烯共聚物表面活化劑，例如“普朗尼克”F-68。優(yōu)選情況下，將黏精納入配方中來增加產(chǎn)品中的粘性以減少納米乳劑的沉淀。黏精包括蔗糖，羧甲基纖維素，海藻糖，淀粉，人造血漿溶液黃原膠，丙二醇，甘油和聚乙二醇，其分子量在大約400到8000MV之間。優(yōu)選情況下，配方包含一種緩沖劑，如磷酸鈉，以此將pH值穩(wěn)定在中性左右，也就是pH＝7.0。由于本創(chuàng)作使用更低沸點(diǎn)的FC來獲得更大的功效，用更低的劑量就可以有效逆轉(zhuǎn)耐輻照性。例如，NVX-108只有2％w/vol的DDFP。先前的材料擁有大于10％w/vol的FC。對于本創(chuàng)作而言，優(yōu)選的FC重量范圍是從大約1％到5％w/vol，其中最優(yōu)選的是2％w/vol的FC，例如2％w/vol的DDFP或全氟。在患有異種移植腫瘤的動(dòng)物身上的實(shí)驗(yàn)表明，對于呼吸碳合氣和氧氣的動(dòng)物來說NVX-108對pO2腫瘤的效果相當(dāng)。但是對于呼吸室內(nèi)空氣的動(dòng)物來說對pO2腫瘤產(chǎn)生的效果會(huì)降低。因此，就本創(chuàng)作而言，研究對象在給予乳劑過程之中和之后，以及在放療或化療用藥期間，都可以呼吸碳合氣或者補(bǔ)充氧氣。這種材料可以與放療同時(shí)施用，或者在放療前施用，例如，在放療前多達(dá)120分鐘時(shí)施用。作為一種選項(xiàng)，除了放療或者單獨(dú)使用以外，化療可以與DDFPe同時(shí)施用。各種抗腫瘤藥都可以在本創(chuàng)作中使用，包括但不限于：烷化劑，抗代謝藥物，蒽環(huán)類藥物，拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑，有絲分裂抑制劑，皮質(zhì)類固醇，各種各樣的化療藥物，靶向治療，激素治療和免疫治療藥物。NVX-108包含的一種劑型由表1中所列的組分組成。表1成分規(guī)格作用濃度(毫克/毫升)戊烷醫(yī)用級活性20蔗糖醫(yī)用級輔藥300PEG聚合物B純化的化學(xué)級輔藥3注射用水USP溶劑適量至1毫升氮醫(yī)用級頭部空間吹氣適量磷酸鈉USP緩沖劑0.01M鹽酸USP輔藥適量一般情況下，申請人的氟碳乳液不包含任何酰氨基胺氧化合物。更具體而言，申請人的氟碳乳液不包含任何氟化酰胺基胺氧化物。烷化劑包括但不限于氮芥：例如二氯甲基二乙胺(氮芥)，苯丁酸氮芥，環(huán)磷酰胺(環(huán)磷酰胺)，異環(huán)磷酰胺和苯丙氨酸氮芥；亞硝基脲：包括鏈脲佐菌素，亞硝(基)脲氮芥(BCNU)，和環(huán)己亞硝脲；烷基磺酸鹽：甲磺酸丁二醇二酯；三嗪：氮烯唑胺(DTIC)和替莫唑胺(TEMODAR)；乙烯亞胺:噻替哌和六甲蜜(六甲蜜胺)。鉑類藥物(順鉑，卡鉑，奧沙利鉑)有時(shí)和烷化劑歸為一類，因?yàn)樗鼈円韵嗨频姆绞綒⑺兰?xì)胞?？勾x物的樣例包括：5-氟尿嘧啶(5-FU)，6-巰嘌呤(6-MP)，卡培他濱(XELODA)，克拉屈濱，氯法拉濱，阿糖胞苷(ARA-C)，氟尿苷，氟達(dá)拉濱，吉西他濱(GEMZAR)，羥基脲，氨甲葉酸，培美曲塞(ALIMTA)，噴司他丁和硫鳥嘌呤。蒽環(huán)類包括：柔紅霉素，阿霉素(ADRIAMYCIN)和表柔比星。非蒽環(huán)霉素的伊達(dá)比星抗腫瘤抗生素包括：放線菌素博萊霉素和絲裂霉素-C。米托蒽醌是一種許多方面都和阿霉素相似的抗腫瘤抗生素。拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑的樣例包括拓?fù)涮婵岛鸵懒⑻婵?CPT-11)。拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑的樣例包括依托泊苷(VP-6)和替尼泊苷。米托蒽醌也抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶II。有絲分裂抑制劑的樣例包括：紫杉烷類：紫杉醇(TAXOI)和多西他賽(TAXOTERE)。埃博霉素包括伊沙匹隆(IXEMPRA)。長春花生物堿包括長春花堿(VELBAN)，長春新堿(ONCOVIN)，和長春瑞濱(NAVELBINE)和雌莫司汀(EMCYT)。皮質(zhì)類固醇樣例包括潑尼松，甲潑尼龍(SOLUMEDROL)，和地塞米松(DECADRON)。射靶療法樣例包括伊馬替尼(GLEEVEC)，吉非替尼(IRESSA)，舒尼替尼(SUTENT)和硼替佐米(VELCADE)。分化誘導(dǎo)劑樣例包括維甲酸，維A酸(ATRA或ATRALIN)和貝沙羅汀(TARGRETIN)，以及三氧化二砷(ARSENOX)。激素治療劑樣例包括抗雌激素：氟維司群(FASLODEX)，他莫昔芬，和托瑞米芬(FARESTON)。芳香抑制劑包括：阿那曲唑(ARIMIDEX)，依西美坦(AROMASIN)，和來曲唑(FEMARA)。孕激素包括醋酸甲地孕酮(MEGACE)和雌激素?？剐奂に匕ū瓤敯?CASODEX)，氟他胺(EULEXIN)，和尼魯米特(NILANDRON)。促性腺激素釋放激素(GnRH)，也叫作促黃體生成激素釋放激素(LHRH)激動(dòng)劑或類似物，包括亮丙瑞林(LUPRON)和戈舍瑞林(ZOLADEX)。免疫治療種類及其樣例包括：單克隆抗體療法(被動(dòng)免疫治療)，例如利妥昔單抗(RITUXAN)和阿侖單抗(CAMPATH)。非特定免疫治療和佐劑(提高免疫反應(yīng)的其他物質(zhì)和細(xì)胞)包括BCG，白細(xì)胞介素-2(IL-2)，和α-干擾素。免疫調(diào)節(jié)藥，例如，沙利度胺和來那度胺(REVLIMID)。癌癥疫苗(特定主動(dòng)免疫治療)，如針對晚期前列腺癌的PROVENGE疫苗，可以和DDFPe以及其他當(dāng)前研制中的疫苗一起使用。FC的使用增加了免疫治療的活力，例如作為免疫細(xì)胞的(易普利姆瑪)在通過腫瘤復(fù)氧獲得的氧化環(huán)境下變得更加活躍。其他可以和FC乳劑一起使用的免疫調(diào)節(jié)藥物包括PD-L1表達(dá)抑制劑。單克隆抗體在本創(chuàng)作中尤其有用。這些抗體可以被用作疫苗來激發(fā)排斥癌癥的免疫反應(yīng)。免疫系統(tǒng)的非特定刺激物可以在本創(chuàng)作中使用。樣例包括細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素和干擾素(如干擾素-α和白介素-2)。在本創(chuàng)作中有用的抗體包括阿侖單抗，貝伐單抗，Brentuximabvedotin，西妥昔單抗，吉妥珠單抗奧佐米星，替伊莫單抗，易普利姆瑪，Nivolumab，Ofatumumab，帕尼單抗，利妥昔單抗，托西莫單抗和曲妥珠單抗。本創(chuàng)作可以與過繼性T細(xì)胞療法抗-CD47抗體，抗-GD2抗體，免疫反制點(diǎn)阻斷劑和EGF受體抗體一起使用。乳劑的使用可以增加腫瘤組織中的氧氣，以便通過氧化應(yīng)激促進(jìn)免疫機(jī)制，并使得免疫系統(tǒng)更加有效，當(dāng)然也可以通過改變基因表達(dá)來實(shí)現(xiàn)。通過減少缺氧相關(guān)的基因表達(dá)，這種氧氣療法將侵略性缺氧介導(dǎo)的表型轉(zhuǎn)換成更容易被免疫系統(tǒng)擊敗的低侵略性表型。在某些實(shí)施例中，申請人的創(chuàng)作包括一種改變基因表達(dá)的方法，即通過給有需要的病人施用有效治療劑量的氧氣治療劑，例如，但不限于NVX-108。優(yōu)選情況下，在呼吸補(bǔ)充氧氣或碳合氣的同時(shí)使用DDFPe，這會(huì)增加腫瘤氧化，使得化療藥物的作用更加有效。同時(shí)進(jìn)行放療則可以獲得協(xié)同優(yōu)勢。以下案例旨在向熟悉此項(xiàng)技術(shù)之人士進(jìn)一步證明如何作出和使用本創(chuàng)作。不過，這些案例無意限制本創(chuàng)作所界定的范圍。案例1十二氟戊烷乳劑的制備在室溫下通過在注射用水中溶入適量USP等級的蔗糖制備一種30％蔗糖溶液，隨后加入磷酸二氫鈉加以中和，使系統(tǒng)pH值為7。在第二個(gè)容器中，一種DDDFP：PEG調(diào)聚物B比例為7：1的DDFP(十二氟戊烷)Peg調(diào)聚物B的懸浮液按如下方法制備出來。在一個(gè)冷卻至4℃的夾套容器中，PEG調(diào)聚物B通過攪拌分散在注射用水中。預(yù)冷(4℃)的DDFP被加入到攪拌好的PEG調(diào)聚物B中，然后進(jìn)行攪拌直至獲得一種均勻的乳狀懸浮液。在一個(gè)Avestin型C50均質(zhì)器中對這種懸浮液進(jìn)行長達(dá)18分鐘的高壓均質(zhì)化處理，并保持溫度低于7℃。這種乳劑通過均質(zhì)器在低壓下被轉(zhuǎn)移到一個(gè)包含30％蔗糖的水溶液容器中；對產(chǎn)生的溶液進(jìn)行長達(dá)20分鐘的攪拌，然后通過均質(zhì)器在低壓下轉(zhuǎn)移至第二個(gè)容器中。然后，這種溶液通過一個(gè)0.2微米的過濾器轉(zhuǎn)移至第三個(gè)容器中。這種產(chǎn)品被分配到加蓋的波紋狀小瓶中。由于活性成分(DDFP)的揮發(fā)性，這些操作均在低于8℃的冷夾套容器中完成。處理過程中的損耗通過使用超額活性成分加以補(bǔ)償。產(chǎn)品灌裝體積也經(jīng)過嚴(yán)格控制，以便生產(chǎn)的小瓶滿足發(fā)送和保質(zhì)期規(guī)格。所產(chǎn)生的產(chǎn)品包含2％w/volDDPE。Nycomps提供的粒度測量顯示平均顆粒尺寸大約為250納米。案例2在老鼠上實(shí)施了Hs-766t胰腺癌異種移植物的移植實(shí)驗(yàn)。用于此研究的Hs-766T(胰腺；ATCCCat#HTB-134)細(xì)胞系來自美國菌種保藏中心(ATCC，位于弗吉尼亞州馬納薩斯)，由亞利桑那大學(xué)實(shí)驗(yàn)鼠共享服務(wù)中心(EMSS，亞利桑那大學(xué))進(jìn)行處理，存儲和管理。細(xì)胞在DMEM(Mediatech)中用高葡萄糖，L-谷氨酰胺和10％胎牛血清進(jìn)行培養(yǎng)，并保持在37攝氏度條件下，二氧化碳濃度為5％。腫瘤細(xì)胞由ATCC細(xì)胞認(rèn)證檢測服務(wù)部門通過PCR/短串聯(lián)重復(fù)序列位點(diǎn)(STR)進(jìn)行認(rèn)證。運(yùn)用通用支原體檢測試劑盒(ATCC,30-1012K)對細(xì)胞進(jìn)行支原體常規(guī)檢測，沒有發(fā)現(xiàn)污染。29只5-8周的雌性SCID老鼠被應(yīng)用于這些研究。所有老鼠的喂食、飼養(yǎng)和獸醫(yī)服務(wù)均按照IACUC批準(zhǔn)的準(zhǔn)則和規(guī)程由EMSS進(jìn)行管理。老鼠分成4組或4組以下關(guān)在鼠籠里，以自由給飼的方式喂食和喂水。在注射之前，將老鼠剃毛，為腫瘤異種移植準(zhǔn)備適當(dāng)?shù)奈恢?。腫瘤細(xì)胞(10x106個(gè)細(xì)胞，MatrigelTM中；BDBioscience公司)在每個(gè)老鼠的左后側(cè)進(jìn)行皮下注射。使用電子卡尺測定腫瘤尺寸((a2xb2)/2)，每周兩次進(jìn)行腫瘤負(fù)荷評估。當(dāng)腫瘤達(dá)到500-700mm3的平均體積時(shí)，老鼠被隨機(jī)分到6組中的一組：3組老鼠用于腫瘤氧氣的測定，3組老鼠用于腫瘤生長的測定。在9只老鼠中進(jìn)行腫瘤pO2的測定。施用了0.3(2只老鼠)，0.45(3只老鼠)，和0.6(4只老鼠)mL/kg(2％w/vol乳劑)劑量的NVX-108。在其他20只老鼠中進(jìn)行了腫瘤生長速度的研究。這些老鼠被分到如下3個(gè)治療組：第1組：未治療(4只老鼠)，第2組：呼吸碳合氣并用12Gy輻照量進(jìn)行治療(8只老鼠)，第3組：使用NVX-108(0.6cc每kg，2％w/vol的DDFP靜脈注射，超過30分鐘以上，注射結(jié)束時(shí)進(jìn)行輻照)加以治療，并在呼吸碳合氣時(shí)施用12Gy輻照量(8只老鼠)。每只老鼠都接受了含賽拉嗪(5mg/kgIP)的氯胺酮(20mg/kgIP)以使其身體保持固定狀態(tài)，并且安裝了尾靜脈導(dǎo)管以便通過尾靜脈注射(TVI)給藥。尾靜脈導(dǎo)管插入通過一個(gè)裝配的27號針頭改造的PE50管來完成。這根導(dǎo)管通過尾部兩側(cè)的3-0縫合線和專用膠帶牢牢系附在每只老鼠的尾部。在導(dǎo)管插入之后，這些老鼠被放入定制的氣室內(nèi)，導(dǎo)入碳合氣(95％氧氣，5％二氧化碳)并10分鐘換氣一次。使用定制的約束裝置將其固定以便放置在一個(gè)鉛屏板下方，這些鉛屏板隔離側(cè)面的腫瘤異種移植物，以便于輻照分割。在一個(gè)引入碳合氣(95％氧氣，5％二氧化碳)并10分鐘換氣一次的定制氣室內(nèi)，對所有老鼠進(jìn)行一次12Gy的腫瘤分割。XRT劑量持續(xù)時(shí)間的計(jì)算是基于“處方劑量/劑量率”＝(1200cGy)/(87.9cGy/min)，這等于對腫瘤進(jìn)行13.65分鐘(13分39秒)的單次分割。針對組別2#，200微升的無菌生理鹽水通過尾靜脈注射(TVI)方式注入(時(shí)間0:00)，并且用于碳合氣吸入前十分鐘和輻射前16.35分鐘的假注射。針對組別3#，200微升的NVX-108在碳合氣吸入前十分鐘和輻射前16.35分鐘時(shí)通過TVI(時(shí)間0:00)方式注射。尾靜脈注射通過一種多注射器泵進(jìn)行，以便對每組同時(shí)給藥。在時(shí)間0:00分鐘時(shí)同時(shí)注射NVX-108和生理鹽水后，開始進(jìn)行研究。然后，在10分鐘時(shí)吸入碳合氣，并在16.35分鐘時(shí)進(jìn)行輻照。在輻照完成之后，可以讓這些老鼠通過自由飲食和飲水的方式進(jìn)行恢復(fù)。對腫瘤尺寸的二維測定每周進(jìn)行兩次。當(dāng)腫瘤尺寸大于2000mm3，老鼠被處死。腫瘤氧化和血流量水平通過定向插入所有腫瘤的OxyLab(OxfordOptronics,Oxford,UK)三參數(shù)E-系列光纖探針來監(jiān)測。使用一個(gè)在WindowsTM(版本5.02ADIstuments，澳大利亞)ChartTM下運(yùn)行的多通道數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)(PowerLab8SP，ADIstruments，澳大利亞)將來自這些監(jiān)視器的氧分壓信號實(shí)時(shí)記錄下來。麻醉后的老鼠(異氟醚100％氧氣)被限制在一個(gè)定制的固定平臺上以防止移動(dòng)，并且平臺用加熱墊進(jìn)行改造以維持核心體溫。采取了預(yù)防措施來防止缺氧探頭的任何移動(dòng)，并且消除外來光源的干擾以防止探頭假象問題。使用19號針頭穿入腫瘤約2-4毫米，探針(OD約450微米)通過針頭被送入腫瘤異種移植物，并且用定向方法固定到位。所有探針被小心標(biāo)記好刻度以便在所有腫瘤中達(dá)到同樣深度。一旦探針穩(wěn)定并被固定住，則對輸出信號進(jìn)行監(jiān)測(5-10分鐘)直至觀測到穩(wěn)定的基線。在基線處對碳合氣進(jìn)行10分鐘的實(shí)時(shí)測量，隨后，在動(dòng)物繼續(xù)吸入碳合氣時(shí)以0.3,0.45或0.6cc/kg劑量的NVX-108(NuvOxPharmaTucson，亞利桑那)進(jìn)行200微升尾靜脈注射。案例3膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GMB)的治療對一位GBM病人進(jìn)行手術(shù)治療。術(shù)后釓增強(qiáng)MRI掃描顯示存在殘余的增強(qiáng)腫瘤。病人持續(xù)6周進(jìn)行30次放療，每次2格雷(Gy)，一共60Gy，從放療第一天到最后一天每周七天、每天口服每平方米75mg劑量的替莫唑胺。此病人接受了一根靜脈PICC導(dǎo)管。從每個(gè)放療階段前大約30分鐘開始，以靜脈滴注的方式和0.05cc/kg(2％w/vol)的劑量持續(xù)超過30分鐘施用DDFPe。實(shí)施磁共振TOLD掃描來顯示腫瘤缺氧的逆轉(zhuǎn)情況。隨后通過靜脈釓造影的MRI掃描顯示，與沒有使用DDFPe治療的病人相比，腫瘤數(shù)量得以減少。基線術(shù)后MRI掃描顯示于下圖左側(cè)。白色箭頭標(biāo)示了左內(nèi)側(cè)顳葉內(nèi)可見的殘留增強(qiáng)腫瘤。右側(cè)的掃描顯示了完成化療照射和DDFPe治療4周之后的情形。白色箭頭標(biāo)示了殘留的增強(qiáng)腫瘤。增強(qiáng)腫瘤減少了大約80％。病人現(xiàn)在仍然存活，并且治療完成后6個(gè)多月康復(fù)情況良好。案例4膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GBM)的治療另一位患有膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的病人接受了手術(shù)，在造影增強(qiáng)MRI上可見殘余腫瘤。除了使用0.1cc/kg的DDFPe以外，此病人采用與案例1(上文)一樣的方式治療。此病人很好地接受了這次治療。當(dāng)前正在征求下一個(gè)病人的同意，該病人將會(huì)在每次化療照射期間用0.17cc/kg劑量的DDFPe進(jìn)行治療。預(yù)示案例1一位患有非小細(xì)胞性肺癌的病人使用Belani等人的方案中所述的胸部放療和合并化療法進(jìn)行治療。序貫化療包括兩個(gè)持續(xù)3周的療程，每個(gè)療程中持續(xù)超過3小時(shí)施用200mg/m2的紫杉醇，緊接著通過靜脈滴注的方式持續(xù)超過30分鐘在血藥濃度-時(shí)間曲線下面積(AUC)＝6mg/mL·min時(shí)施用卡鉑。胸部放療在第42天開始，每天劑量1.8Gy，每周5次(在5周內(nèi)對初始區(qū)域施用45.0Gy目標(biāo)劑量)，之后對縮減區(qū)域的初始腫瘤體積，但也包括≥2.0cm的腫大淋巴結(jié)施用，每天2.0Gy，一共18Gy劑量(全部劑量為63.0Gy，分34次在7周以上的時(shí)間內(nèi)施用)。對于每次放療，從放療開始前30分鐘，以靜脈滴注方式持續(xù)超過15分鐘施用DDFPe。用DDFPe治療過的病人對治療方案的反應(yīng)有所改善。預(yù)示案例2一位患有階段I非小細(xì)胞肺癌的病人在一周內(nèi)按照大分割放療計(jì)劃實(shí)施三次分割放療，每次15Gy，共45Gy。這代表112.5Gy的生物等價(jià)劑量(BED)。在每個(gè)輻照劑量前的30～60分鐘，對病人施用0.17cc/kg靜脈彈丸注射劑量的NVX-108(2％w/volDDFPe)。跟進(jìn)研究顯示，治療后的腫瘤比沒有施用DDFPe的腫瘤消除得更多。預(yù)示案例3一位患有宮頸癌的女性病人同時(shí)用放療和化療+NVX-108進(jìn)行治療。輻照劑量為20次共計(jì)45格雷(Gy)，隨后，對宮頸區(qū)腔內(nèi)低劑量施用30Gy。化療包括每周40mg/m2的靜脈內(nèi)注射順鉑，持續(xù)達(dá)6個(gè)療程。在每次輻照前60分鐘，對病人施用0.2cc/kg靜脈彈丸推注劑量的NVX-108(2％w/volDDFPe)。跟進(jìn)研究顯示了對治療的完全反應(yīng)。預(yù)示案例4一位患有頭部和頸部鱗狀上皮細(xì)胞癌的病人每周兩次靜脈滴注0.50單位/kg(20單位/m2)的博萊霉素。在每次施用博萊霉素期間，病人吸入碳合氣(98％氧氣/2％二氧化碳)的同時(shí)施用0.2cc/kg的2％w/vol全氟己烷乳劑。在腫瘤組織中獲得的更高氧氣水平增加了博萊霉素的活性，藥物反應(yīng)得到了改善。預(yù)示案例5一位患有生殖細(xì)胞卵巢癌的成年病人按每四周五天施用500mcg/天的更生霉素。每瓶更生霉素包含0.5mg(500mcg)的更生霉素和20mg的甘露醇，將其靜脈注射給病人。每次施用更生霉素時(shí)都會(huì)靜脈彈丸推注DDFPe(0.2cc/kg，2％w/volDDFP)。在注射過程中及注射之后，病人吸入碳合氣30分鐘。這在腫瘤組織中獲得了更高的氧氣水平，增強(qiáng)了藥物的活性。預(yù)示案例6一位患有橫紋肌肉瘤的成年病人以1.4mg/m2的劑量靜脈注射長春新堿進(jìn)行治療。在病人呼吸室內(nèi)空氣的同時(shí)相繼施用了0.1cc/kg的DDFPe。盡管病人吸入的是室內(nèi)空氣，但腫瘤組織中仍然獲得了更高的氧氣含量，帶來了藥物活性的增強(qiáng)。預(yù)示案例7一位患有多骨髓瘤的病人用BiCNU(注射用亞硝(基)脲氮芥)，亞硝脲(1,3-雙(2-氯)-1-亞硝脲)并結(jié)合強(qiáng)的松進(jìn)行治療。對此之前，這位未接受治療的病人每六周靜脈注射200mg/m2BiCNU。這些劑量被分配到連續(xù)兩天，每天注射100mg/m2。在注射每劑量BiCNU的同時(shí)靜脈彈丸推注(劑量＝0.2cc/kg，2％w/volDDFP)DDFPe，在此同時(shí)病人吸入補(bǔ)充氧氣60分鐘。6周內(nèi)，一旦循環(huán)血液元素重回到可接受水平(血小板高于100,000/mm3，白細(xì)胞高于4,000/mm3)，再次重復(fù)施用BiCNU，同時(shí)伴隨BiCNU施用DDFPe。預(yù)示案例8一位患有前列腺癌的病人結(jié)合使用外部放射治療和高臨時(shí)種子植入的高劑量率近距離放射治療。在對前列腺癌使用45Gy的外部放射治療三周后，使用高臨時(shí)種子植入及高劑量率近距離放射治療。病人被帶入手術(shù)室并麻醉。一個(gè)直腸超聲探頭被導(dǎo)入直腸，然后探頭固定到一個(gè)落地式踩踏裝置。一根導(dǎo)針/一個(gè)會(huì)陰模板系附在踩踏裝置上并向上抵靠在會(huì)陰部皮膚上。二十個(gè)金屬針頭通過模板安裝好，經(jīng)過會(huì)陰部推進(jìn)到中前列腺。這些針頭用塑料導(dǎo)管替換。在恢復(fù)之后，病人被帶到放射腫瘤科進(jìn)行CT掃描，以確保導(dǎo)管安放準(zhǔn)確。這個(gè)電腦控制的高劑量放療裝置包含一種源驅(qū)動(dòng)機(jī)制，此機(jī)制根據(jù)劑量計(jì)劃確定的加載模式依次移動(dòng)放射性銥絲通過填隙導(dǎo)管。此高劑量率放射治療耗時(shí)10-15分鐘，其中放射性銥絲被推進(jìn)到每一根填隙導(dǎo)管中。此治療再重復(fù)一次，然后病人被轉(zhuǎn)移到醫(yī)院房間6個(gè)小時(shí)，然后此過程再次重復(fù)以便再進(jìn)行兩次高劑量率放射治療，例如，銥絲被推進(jìn)到每根導(dǎo)管，一共4次，早上兩次，下午兩次，每個(gè)階段耗時(shí)大約30分鐘。在每個(gè)治療階段，對病人使用0.2cc/kg劑量的DDFPe超過30分鐘，在此期間吸入碳合氣。http://prostate-cancer.org/temporary-seed-implant-with-high-dose-rate-brachytherapy/預(yù)示案例9一位患有第四階段腎母細(xì)胞瘤的兒科病人使用更生霉素，阿霉素，環(huán)磷酰胺和長春新堿治療65周。藥用量如下：更生霉素(15mcg/kg/d[IV])，長春新堿(1.5mg/m2wk[IV])，阿霉素(阿霉素20mg/m2/d[IV])以及環(huán)磷酰胺(10mg/kg/d[IV])。在術(shù)后以及第13，26，39，52和65周提供更生霉素療程。每個(gè)阿霉素療程的第1天和第8天給予長春新堿。在第6，19，32，45和58周給予三天劑量的阿霉素。除了術(shù)后的更生霉素療程以外，在每個(gè)阿霉素和更生霉素療程期間給予三天劑量的環(huán)磷酰胺。在每次使用更生霉素和長春新堿期間，在病人吸入補(bǔ)充氧氣的同時(shí)施用0.2cc/kg劑量的DDFPe。見Dangio,GiulioJ.等“TreatmentofWilms’tumor.ResultsofthethirdnationalWilms’tumorstudy.”Cancer64.2(1989):349-360.預(yù)示案例10一位患有不能切除的肝細(xì)胞癌的病人使用索拉非尼進(jìn)行治療。病人每天口服400mg索拉非尼(2×200mg)。在單一設(shè)置條件下病人也使用玻璃微球進(jìn)行治療。玻璃微球包括不溶的玻璃微珠，微珠內(nèi)系縛有釔-90。肝動(dòng)脈中插入導(dǎo)管，腫瘤血管床用玻璃微球進(jìn)行栓塞，通過肝動(dòng)脈進(jìn)行注射來遞送100Gy目標(biāo)劑量的玻璃微球。在栓塞過程中，0.1cc/kg劑量的DDFPe與氧氣混合，并且也注入到肝動(dòng)脈中。預(yù)示案例11老鼠體內(nèi)的移植瘤是用之前描述過的UTSCC33(口腔癌)，F(xiàn)ADUDD(FaDu的亞系，一種未分化的喉咽癌)和SiHa子宮宮頸癌，HPV-陽性(從美國菌種保藏中心獲得)等細(xì)胞系生成的。見Toustrup,Kasper,etal.“Developmentofahypoxiageneexpressionclassifierwithpredictiveimpactforhypoxicmodificationofradiotherapyinheadandneckcancer.”Cancerresearch71.17(2011):5929-5931(下文中見“Toustrup”)。攜帶各種腫瘤的老鼠被隨機(jī)分成兩組，DDFPe治療組和控制組(注射相同量的生理鹽水)。DDFPe治療包括每天以靜脈彈丸推注的方式施用0.3cc/kg的DDFPe，共用十四天。十四天后老鼠被處死并針對缺氧相關(guān)基因的表達(dá)進(jìn)行腫瘤測定。見ToustrupRNAfromfresh-frozentissuewasextractedbyusingRNeasy-kit(Qiagen)accordingtothemanufacturer’sinstructions.cDNA通過使用大容量cDNA檔案包生成(應(yīng)用生物系統(tǒng)；ABI)，而基因表達(dá)通過利用qPCR進(jìn)行量化。根據(jù)FFPE樣本，cDNA在實(shí)時(shí)qPCR之前根據(jù)制造商的明細(xì)(TaqManPreAmp，ABI)進(jìn)行前置放大。為了檢測出感興趣的轉(zhuǎn)錄物，TaqMan基因表達(dá)測定(ABI)應(yīng)用于所有潛在的分類器和參考基因。感興趣的基因(被認(rèn)為在缺氧腫瘤中上調(diào)并與最可能演變的腫瘤相關(guān))包括以下幾類：ADM(應(yīng)激反應(yīng))，ALDOA(糖代謝)，ANKRD37(蛋白質(zhì)相互作用)，BNIP3(細(xì)胞凋亡)，BNIP3L(細(xì)胞凋亡)，C3orf28(未知)，EGNL3(HIF-1活性調(diào)節(jié))，KCTD11(細(xì)胞凋亡)，LOX(細(xì)胞外基質(zhì)代謝)，NDRG1(應(yīng)激反應(yīng))，P4HA1(細(xì)胞外基質(zhì)代謝)，P4HA2(細(xì)胞外基質(zhì)代謝)，PDK1(能量代謝)，PFKFB3(葡萄糖代謝)以及SLC2A1(葡萄糖代謝)。在使用DDFPe治療過的動(dòng)物的異種移植腫瘤中，其基因表達(dá)測定發(fā)現(xiàn)，缺氧相關(guān)基因的表達(dá)明顯低于用鹽水控制注射治療的動(dòng)物腫瘤組織樣本中的表達(dá)。預(yù)示案例12下列預(yù)示案例旨在顯示DDFPe的使用如何下調(diào)在缺氧腫瘤組織中表達(dá)過度的基因表達(dá)以及上調(diào)含氧量正常組織中的基因表達(dá)(即：規(guī)范基因的表達(dá))。Fischer344只老鼠(F344/Ncr；美國國家癌癥研究所，弗雷德里克，馬里蘭州)用來生成9L神經(jīng)膠質(zhì)瘤模型。部分9L神經(jīng)膠質(zhì)瘤如之前所述被嵌入上腹部動(dòng)脈/靜脈對中。動(dòng)物每天靜脈注射0.45cc/kgDDFPe或者鹽水直至腫瘤大約重達(dá)1.5g，然后將動(dòng)物安樂死，取下腫瘤并速凍。按照上述類似的方式對腫瘤里的基因表達(dá)進(jìn)行測定。在控制組中看到的上調(diào)基因包括：BCL2/腺病毒E1B19kDa-相互作用的蛋白質(zhì)3，血紅素加氧酶(decycling)1，激活轉(zhuǎn)錄因子3，熱休克蛋白(HSP27)，N-myc下游調(diào)節(jié)基因1，碳酸酐酶9等。在控制組中下調(diào)的基因包括：Ly6-C抗原，溶質(zhì)載體系列44(成員2)，包含9-L的無菌α基序域，DEAD(Asp-Glu-Ala-Asp)盒多肽60以及CD3分子δ多肽等等。對使用DDFPe治療的動(dòng)物身上的9-L神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織的基因表達(dá)對比顯示：控制組動(dòng)物中上調(diào)的基因表達(dá)明顯減少，而下調(diào)的基因表達(dá)明顯增加。也就是說，使用DDFPe治療的動(dòng)物的腫瘤里具有規(guī)范化的基因表達(dá)。詳見Marotta，Diane，etal.“InvivoprofilingofhypoxicgeneexpressioningliomasusingthehypoxiamarkerEF5andlaser-capturemicrodissection.”Cancerresearch71.3(2011):779-789。預(yù)示案例13按照案例1所述制備一份30％的蔗糖溶液。在第二個(gè)容器中通過在水里加熱使其溫度高于所有油脂的相變溫度，制備一份含下列成份的磷脂混合物懸浮液：92％DPPC和8％DPPE-PEG(摩爾比例)的DPPC和DPPE-PEG5k。一旦油脂分散開來，則將懸浮液冷卻到4℃，然后在一個(gè)夾套容器里攪拌。按照重量比7:1將預(yù)冷的(4℃)DDFP加入攪拌好的磷脂懸浮液中，然后攪拌，直到獲得均勻的乳白色懸浮液。在Avestin型C50均質(zhì)器中對懸浮液進(jìn)行長達(dá)18分鐘的高壓均質(zhì)化處理，并保持溫度低于7℃。通過均質(zhì)器在低壓下將乳狀液轉(zhuǎn)移到一個(gè)裝有30％蔗糖水溶液的容器里；將獲得的溶液攪拌二十分鐘，然后通過均質(zhì)器在低壓下將攪拌后的溶液轉(zhuǎn)移到第二個(gè)容器中。隨后，溶液通過一個(gè)0.2微米的過濾器過濾到第三個(gè)容器中。這種產(chǎn)品被分配到加蓋的波紋狀小瓶中。由于活性成分(DDFP)的揮發(fā)性，這些操作均在低于8℃的冷夾套容器中完成。處理過程中的損耗通過使用超額活性成分加以補(bǔ)償。產(chǎn)品灌裝體積也經(jīng)過嚴(yán)格控制，以便生產(chǎn)的小瓶滿足發(fā)送和保質(zhì)期規(guī)格。預(yù)示案例14按照案例1所述制備一份30％的蔗糖溶液。在第二個(gè)容器中通過在水里加熱使其溫度高于所有油脂的相變溫度，制備一份含下列成份的磷脂混合物懸浮液：DPPC和DPPE-PEG5k。一旦油脂分散開來，則將懸浮液冷卻到4℃，然后在一個(gè)夾套容器里攪拌。按照重量比7:1將預(yù)冷的(4℃)全氟己烷加入攪拌好的磷脂懸浮液中，然后攪拌，直到獲得均勻的乳白色懸浮液。在Avestin型C50均質(zhì)器中對懸浮液進(jìn)行長達(dá)18分鐘的高壓均質(zhì)化處理，并保持溫度低于7℃。通過均質(zhì)器在低壓下將乳狀液轉(zhuǎn)移到一個(gè)裝有30％蔗糖水溶液的容器里；將獲得的溶液攪拌二十分鐘，然后通過均質(zhì)器在低壓下將攪拌后的溶液轉(zhuǎn)移到第二個(gè)容器中。隨后，溶液通過一個(gè)0.2微米的過濾器過濾到第三個(gè)容器中。這種產(chǎn)品被分配到加蓋的波紋狀小瓶中。由于活性成分(全氟己烷)的揮發(fā)性，這些操作均在低于8℃的冷夾套容器中完成。處理過程中的損耗通過使用超額活性成分加以補(bǔ)償。產(chǎn)品灌裝體積也經(jīng)過嚴(yán)格控制，以便生產(chǎn)的小瓶滿足發(fā)送和保質(zhì)期規(guī)格。預(yù)示案例15按照案例1所述制備一份30％的蔗糖溶液。在第二個(gè)容器中通過在水里加熱使其溫度高于所有油脂的相變溫度，制備一份含下列成份的磷脂混合物懸浮液：DPPC，膽固醇和DPPE-PEG5k。一旦油脂分散開來，則將懸浮液冷卻到4℃，然后在一個(gè)夾套容器里攪拌。按照重量比7:1將預(yù)冷的(4℃)全氟庚烷加入攪拌好的磷脂懸浮液中，然后攪拌，直到獲得均勻的乳白色懸浮液。在Avestin型C50均質(zhì)器中，對懸浮液進(jìn)行長達(dá)18分鐘的高壓均質(zhì)化處理，并保持溫度低于7℃。通過均質(zhì)器在低壓下將乳狀液轉(zhuǎn)移到一個(gè)裝有30％蔗糖水溶液的容器里；將獲得的溶液攪拌二十分鐘，并通過均質(zhì)器在低壓下將攪拌后的溶液轉(zhuǎn)移到第二個(gè)容器中。然后，溶液通過一個(gè)0.2微米的過濾器過濾到第三個(gè)容器中。這種產(chǎn)品被分配到加蓋的波紋狀小瓶中。由于活性成分(全氟庚烷)的揮發(fā)性，這些操作均在低于8℃的冷夾套容器中完成。處理過程中的損耗通過使用超額活性成分加以補(bǔ)償。產(chǎn)品灌裝體積也經(jīng)過嚴(yán)格控制，以便生產(chǎn)的小瓶滿足發(fā)送和保質(zhì)期規(guī)格。預(yù)示案例16按照案例1所述制備一份30％的蔗糖溶液。在第二個(gè)容器中通過在水里加熱使其溫度高于所有油脂的相變溫度，制備一份含下列成份的磷脂混合物懸浮液：DPPC，磷脂酸(DPPA)和DPPE-PEG5k。一旦油脂分散開來，則將懸浮液冷卻到4℃，然后在一個(gè)夾套容器里攪拌。按照重量比7:1將預(yù)冷的(4℃)全氟辛烷加入攪拌好的磷脂懸浮液中，然后攪拌，直到獲得均勻的乳白色懸浮液。在Avestin型C50均質(zhì)器中，對懸浮液進(jìn)行長達(dá)18分鐘的高壓均質(zhì)化處理，并保持溫度低于7℃。通過均質(zhì)器在低壓下將乳狀液轉(zhuǎn)移到一個(gè)裝有30％蔗糖水溶液的容器里；將獲得的溶液攪拌二十分鐘，并通過均質(zhì)器在低壓下將攪拌后的溶液轉(zhuǎn)移到第二個(gè)容器中。然后，溶液通過一個(gè)0.2微米的過濾器過濾到第三個(gè)容器中。這種產(chǎn)品被分配到加蓋的波紋狀小瓶中。由于活性成分(全氟辛烷)的揮發(fā)性，這些操作均在低于8℃的冷夾套容器中完成。處理過程中的損耗通過使用超額活性成分加以補(bǔ)償。產(chǎn)品灌裝體積也經(jīng)過嚴(yán)格控制，以便生產(chǎn)的小瓶滿足發(fā)送和保質(zhì)期規(guī)格。預(yù)示案例17通過在水里加熱使其溫度高于所有油脂的相變溫度制備一份含下列成份的磷脂混合物懸浮液：二油酰磷脂酰膽堿(DOPC)，膽固醇和二油酰磷脂酰乙醇胺-PEG-5,OOO。產(chǎn)生的油脂懸浮液懸浮在丙二醇/甘油混合物中，從而獲得80:10:10重量百分比的磷酸鹽緩沖鹽水：丙二醇：甘油。一旦油脂分散開來，則將懸浮液冷卻到4℃，然后在一個(gè)夾套容器里攪拌。按照重量比7:1將預(yù)冷的(4℃)全氟己烷加入攪拌好的磷脂懸浮液中，然后攪拌，直到獲得均勻的乳白色懸浮液。在Avestin型C50均質(zhì)器中，對懸浮液進(jìn)行長達(dá)18分鐘的高壓均質(zhì)化處理，并保持溫度低于7℃。通過均質(zhì)器在低壓下將乳狀液轉(zhuǎn)移到一個(gè)裝有30％蔗糖水溶液的容器里；將獲得的溶液攪拌二十分鐘，并通過均質(zhì)器在低壓下將攪拌后的溶液轉(zhuǎn)移到第二個(gè)容器中。然后，溶液通過一個(gè)0.2微米的過濾器過濾到第三個(gè)容器中。這種產(chǎn)品被分配到加蓋的波紋狀小瓶中。由于活性成分(全氟辛烷)的揮發(fā)性，這些操作均在低于8℃的冷夾套容器中完成。處理過程中的損耗通過使用超額活性成分加以補(bǔ)償。產(chǎn)品灌裝體積也經(jīng)過嚴(yán)格控制，以便生產(chǎn)的小瓶滿足發(fā)送和保質(zhì)期規(guī)格。前文系針對本創(chuàng)作之較佳實(shí)施例進(jìn)行具體之說明，不過，熟悉此項(xiàng)技術(shù)之人士當(dāng)可在不脫離本創(chuàng)作之精神與原則下對本創(chuàng)作進(jìn)行變更與修改，而此等變更與修改皆應(yīng)涵蓋于如下申請專利范圍所界定之范疇中。當(dāng)前第1頁1 2 3