本發(fā)明涉及皮膚美容光反應(yīng)組合物，更詳細(xì)地，涉及通過復(fù)合添加膠原蛋白提取物及葉綠素提取物，從而當(dāng)照射發(fā)光二極管(LED，lightemittingdiode)光時，可確保不引起皮膚刺激的穩(wěn)定性，并且可使光吸收量極大化的光吸收增強效果良好的皮膚美容光反應(yīng)組合物。
背景技術(shù)：
：最近，多用于照明的發(fā)光二極管(LED)作為光治療的主要光源正受到矚目。發(fā)光二極管作為在接通電流就進(jìn)行發(fā)光的半導(dǎo)體，具有不僅可發(fā)出紫外線、可見光、紅外線等所有光，而且還可調(diào)節(jié)功率和顏色的優(yōu)點。并且，由于其能量低且可以僅發(fā)出所需要的波長的光，因而負(fù)作用小且不會對其他人體組織產(chǎn)生傷害，從而還可適合用作醫(yī)療用機構(gòu)。正因為如此，美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)允許將可見光和近紅外線領(lǐng)域的發(fā)光二極管用于人體治療。最近，皮膚科也利用發(fā)光二極管對皮膚進(jìn)行治療，作為其例，由于波長短的藍(lán)光攻擊細(xì)胞和病菌，因而用于治療痤瘡或脂溢性皮炎，紅光通過刺激細(xì)胞來促進(jìn)作為形成皮膚的蛋白質(zhì)的“膠原蛋白”和“彈性蛋白”的生成，從而以阻止老化的用途來使用，紅外線有助于細(xì)胞的再生，因而使用于傷口的治愈。最近，無論男女，對美容的關(guān)心度日益增加，但因忙碌的現(xiàn)代生活模式而對美容儀的需求日益增加，因而采用光療法的美容儀被開發(fā)并銷售。一般情況下，美容儀可分為個人用和醫(yī)院治療用，相比于醫(yī)院治療用美容儀，個人用美容儀光的強度低，在過于降低光的強度的情況下，若因能量低而無法穿入皮膚的表皮，則無法通過照射發(fā)光二極管光來獲得正面效果。并且，在個人用美容儀產(chǎn)品及醫(yī)院治療用美容儀產(chǎn)品的情況下，由于伴隨破壞皮膚細(xì)胞的生物學(xué)方面的安全問題，因而需要一種既安全且可提高效果的有助于光功能的物質(zhì)。因此，為了增強光療法的效果，最近開發(fā)并使用光敏劑(photosensitizer)，上述光敏劑若投入于體內(nèi)并照射光線，則表現(xiàn)出與體內(nèi)的氧相結(jié)合，并與光進(jìn)行反應(yīng)的功能。代表性的光敏劑有5-氨基乙酰丙酸(5-ALA，5-aminolevulinicacid)及甲基氨基乙酰丙酸(MAL，methylaminolevulinicacid)，上述光敏劑分別稱為氨基-γ-酮戊酸和美特維克來得到普遍使用，由于上述光敏劑需要在?？漆t(yī)生的處方下進(jìn)行使用，因而不便使用于個人用光療法設(shè)備。除此之外，在進(jìn)行光療法時為了防止皮膚受刺激而使用的體外涂敷用產(chǎn)品不適合于利用普通超聲波凝膠或基礎(chǔ)化妝品類來使用的光源，反而因涂敷而降低吸光度，從而可能降低所要獲得的光療法的效果。并且，當(dāng)基于光療法來照射光時，因光的70％通過皮膚反射而消失，從而難以快速且實際獲得所要獲得的光效果。在韓國公開專利公報第10-2002-0075687號(2002年10月05日公開)中公開了與本發(fā)明相關(guān)的現(xiàn)有文獻(xiàn)，上述文獻(xiàn)中記載有皮膚美容組合物及其制備方法。技術(shù)實現(xiàn)要素：本發(fā)明要解決的技術(shù)問題本發(fā)明的目的在于，提供如下的光吸收增強效果良好的皮膚美容光反應(yīng)組合物，即，通過復(fù)合添加膠原蛋白提取物及葉綠素提取物，從而當(dāng)照射發(fā)光二極管光時，確保不引起皮膚刺激的穩(wěn)定性以及可使光吸收量極大化。技術(shù)方案用于實現(xiàn)上述目的的本發(fā)明實施例的光吸收增強效果良好的皮膚美容光反應(yīng)組合物，涂敷于使用人員的人體皮膚來增強光吸收效果，其特征在于，相對于皮膚美容光反應(yīng)組合物的總重量，以固體成分為基準(zhǔn)，分別添加0.25～2.00重量％的膠原蛋白提取物(Collagenextract)及0.25～2.00重量％的葉綠素提取物(Chlorophyllextract)。有益效果本發(fā)明的光吸收增強效果良好的皮膚美容光反應(yīng)組合物具有如下效果：通過被特定波長范圍的光刺激所活性化，因而在目標(biāo)部位中，并非利用以作用物質(zhì)中心的化學(xué)作用來呈現(xiàn)效果的光敏劑，而是增強對被照射的特定波長范圍的吸光度，從而通過以光為中心的物理作用來增強光療法效果。因此，在本發(fā)明光吸收增強效果良好的皮膚美容光反應(yīng)組合物的情況下，復(fù)合添加作為天然材質(zhì)的發(fā)色團(tuán)(chromphore)的膠原蛋白提取物及葉綠素提取物，發(fā)色團(tuán)能夠與生物學(xué)上公知的既安全又具有美容效果的600～700nm的光源進(jìn)行反應(yīng)來吸收光子(photon)，因而當(dāng)照射發(fā)光二極管光時，可確保不引起皮膚刺激的穩(wěn)定性且可使光吸收量極大化。附圖說明圖1至圖6為表示按膠原蛋白和葉綠素的添加量測定的吸光度的測定結(jié)果的曲線圖。圖7為在照射發(fā)光二極管光以及涂敷試樣前后對6周齡的雄鼠的背部進(jìn)行拍攝的照片。圖8為表示在按各實驗組照射發(fā)光二極管光以及涂敷實驗試樣之前和實驗最后一天為了觀察耳朵的浮腫而測定耳朵厚度的測定結(jié)果的圖。圖9為對分別在按各實驗組照射發(fā)光二極管光以及涂敷實驗試樣之前和實驗最后一天測定的耳朵浮腫測定結(jié)果進(jìn)行比較來表示的圖。圖10為通過蘇木精-伊紅(hematoxylinandeosin)組織染色來觀察組織病理學(xué)變化的照片。圖11為通過馬松三色染色法(Massontrichrome)組織染色來觀察組織病理學(xué)變化的照片。具體實施方式若參照與附圖一同詳細(xì)后述的實施例，則可以明確本發(fā)明的優(yōu)點、特征及實現(xiàn)這些的方法。但是，本發(fā)明并不局限于以下所公開的實施例，而能夠以互不相同的多種形態(tài)來體現(xiàn)，本實施例僅使本發(fā)明得以更加完整地公開，本發(fā)明為了向本發(fā)明所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員完整地說明本發(fā)明的范疇而提供，且本發(fā)明僅由發(fā)明要求保護(hù)范圍的范疇所定義。在整個說明書中，相同的附圖標(biāo)記表示相同的結(jié)構(gòu)要素。以下，參照附圖，對本發(fā)明優(yōu)選實施例的光吸收增強效果良好的皮膚美容光反應(yīng)組合物詳細(xì)說明如下。皮膚美容光反應(yīng)組合物本發(fā)明實施例的光吸收增強效果良好的皮膚美容光反應(yīng)組合物涂敷于使用人員的皮膚來增強光吸收，相對于皮膚美容光反應(yīng)組合物的總重量，以固體成分為基準(zhǔn)，分別添加0.25～2.00重量％的膠原蛋白提取物及0.25～2.00重量％的葉綠素提取物。膠原蛋白提取物及葉綠素提取物分別為如下的物質(zhì)，即，能夠與生物學(xué)上公知的既安全又具有美容效果的光源(630nm)進(jìn)行反應(yīng)來吸收光子的作為天然材質(zhì)的發(fā)色團(tuán)。相對于本發(fā)明的皮膚美容光反應(yīng)組合物的整體100重量％，以固體成分為基準(zhǔn)，優(yōu)選地，以0.25～2.00重量％的含量比來添加上述膠原蛋白提取物，更優(yōu)選地，可提出0.25～1.00重量％。在膠原蛋白提取物的添加量小于0.25重量％的情況下，由于與葉綠素提取物之間的復(fù)合添加效果甚微，因而可能使光吸收增強效果甚微。相反，在膠原蛋白提取物的添加量大于2.00重量％的情況下，由于制備費用上升，因而并不經(jīng)濟。相對于本發(fā)明的皮膚美容光反應(yīng)組合物的整體100重量％，以固體成分為基準(zhǔn)，優(yōu)選地，以0.25～2.00重量％的含量比來添加上述葉綠素提取物，更優(yōu)選地，可提出0.25～1.00重量％。在葉綠素提取物的添加量小于0.25重量％的情況下，由于與膠原蛋白提取物之間的復(fù)合添加效果甚微，因而可能難以正常發(fā)揮光吸收增強效果。相反，在葉綠素提取物的添加量大于1.00重量％的情況下，由于制備費用上升，因而并不經(jīng)濟。尤其，優(yōu)選地，以1：0.8～1：1.2的重量比添加膠原蛋白提取物及葉綠素提取物，通過實驗確認(rèn)到，當(dāng)以上述范圍來添加膠原蛋白提取物及葉綠素提取物時，可使光吸收量極大化。并且，本發(fā)明實施例的光吸收增強效果良好的皮膚美容光反應(yīng)組合物可由蘆薈膠(aloeveragel)、甘油(glycerin)、蠟(wax)、精油(essentialoil)、膠原蛋白提取物(Collagenextract)、葉綠素提取物(Chlorophyllextract)及溶劑組成，但并不局限于此。即，在本發(fā)明實施例的光吸收增強效果良好的皮膚美容光反應(yīng)組合物的情況下，只要以上述含量范圍來添加膠原蛋白提取物及葉綠素提取物，則使用多種凝膠型的基礎(chǔ)化妝品組合物也無妨。在此情況下，當(dāng)照射500～900nm波長的光時，確認(rèn)到本發(fā)明實施例的光吸收增強效果良好的皮膚美容光反應(yīng)組合物的光吸收量為2.4～4.8mW/cm2。因此，當(dāng)使用發(fā)光二極管搭載型皮膚按摩儀、發(fā)光二極管搭載型皮膚治療儀、發(fā)光二極管搭載型電刺激裝置等時，若在使用人員的皮膚涂敷本發(fā)明實施例的光吸收增強效果良好的皮膚美容光反應(yīng)組合物，則可在特定波長范圍增強光吸收量，因而具有頭皮、皺紋、美白等皮膚治療效果，并且可在分解腹部脂肪等方面發(fā)揮良好的效果。即，在本發(fā)明中，在涂敷皮膚美容光反應(yīng)組合物之后，以利用發(fā)光二極管的非接觸式照射光，因而可在不造成使用人員的反感或不適感的情況下進(jìn)行治療，并與600～700nm的光源進(jìn)行反應(yīng)來實現(xiàn)光吸收增強效果，因而可在短時間內(nèi)有效地對皮膚炎癥及皮膚皺紋等進(jìn)行治療。上述本發(fā)明實施例的光吸收增強效果良好的皮膚美容光反應(yīng)組合物通過被特定波長范圍的光刺激所活性化，因而在目標(biāo)部位中，并非利用以作用物質(zhì)中心的化學(xué)作用來呈現(xiàn)效果的光敏劑，而是增強對被照射的特定波長范圍的吸光度，從而通過以光為中心的物理作用來增強光療法效果。因此，在本發(fā)明的光吸收增強效果良好的皮膚美容光反應(yīng)組合物的情況下，復(fù)合添加作為天然材質(zhì)的發(fā)色團(tuán)的膠原蛋白提取物及葉綠素提取物，發(fā)色團(tuán)能夠與生物學(xué)上公知的既安全又具有美容效果的600～700nm的光源進(jìn)行反應(yīng)來吸收光子，因而當(dāng)照射發(fā)光二極管光時，可確保不引起皮膚刺激的穩(wěn)定性且可使光吸收量極大化。在此情況下，由于太陽光包含紫外線、可見光及紅外線，因而為了排除對人體有害的紫外線而將600～700nm的光作為光源來利用。實驗材料及方法I.膠原蛋白和葉綠素復(fù)合物的光吸收效果1.吸光度的測定將滅菌蒸餾水作為溶劑來使用，并將膠原蛋白(Hanamai，fishcollagen，AFC-HDAMSLifeScience.CO.Ltd，Japan)和葉綠素l(DeSouzaLiquidChlorophyll，DeSouzaInternationalInc，USA)以在表1中記載的組成比例進(jìn)行溶解，并使用分光光度計(UV/VISspectrophotometer，Uvicon)來按各配合條件對混合試樣的500～900nm內(nèi)的吸光度(Abs：Absorbance，Opticaldensity)進(jìn)行了測定。表1(單位：重量％)。在基于是否含有在表1中示出的膠原蛋白和葉綠素來按表2的組成比例制備光吸收皮膚美容組合物，并通過使用光譜輻射亮度計(FieldSpec4，ASDInc，USA)分別對向聚苯乙烯材質(zhì)(Cellcultruedish，SPLLifeScienceCO.，Ltd，Korea)的100φ盤子(dish)表面的4×4cm面積照射發(fā)光二極管光時的吸光度(baseirradiance)和向100φ盤子(dish)表面的4×4cm面積涂敷2g的光吸收皮膚美容組合物并照射發(fā)光二極管光時的吸光度(sampleirradiance)的光吸收量(mW/cm2)進(jìn)行了測定。表2(單位：重量％)II.處理膠原蛋白和葉綠素復(fù)合物的發(fā)光二極管光療法時的皮膚安全性評價1.設(shè)定實驗動物及實驗組在本實驗中使用的實驗動物為被報告為具有與人類皮膚最為接近的皮膚的6周齡雄鼠(20～27g，HR-1hairlessmouse，JapanSLCInc，Shizuoka，Japan)，從中央實驗動物株式會社(Seoul，Korea)購買并使上述雄鼠在動物實驗公司適應(yīng)一星期之后用于實驗。在實驗期間內(nèi)，使上述雄鼠自由地攝入飼料和水，并將飼養(yǎng)室的溫度保持在22±2℃，將濕度保持在55±15％，且將明暗保持在以12小時為一個周期。如表3所示，將實驗組分為4個組并在每實驗組各分配了5只上述雄鼠。上述動物實驗遵守(財)韓國大邱科技園區(qū)生物健康中心融合中心動物實驗倫理委員會(InstitutionalAnimalCareandUseCommittee，IACUC)的原則，且考慮倫理性方面進(jìn)行上述動物實驗。表32.照射發(fā)光二極管光及對試樣的處理通過制備基礎(chǔ)凝膠樣本以及添加有膠原蛋白和葉綠素的皮膚美容組合物來用作實驗試樣。并分別在未經(jīng)過任何處理的正常組(NO)、未涂敷基礎(chǔ)凝膠樣本而僅照射發(fā)光二極管光的對照組(CO)、在涂敷基礎(chǔ)凝膠樣本之后照射發(fā)光二極管光的實驗組(BL)、在涂敷皮膚美容組合物之后照射發(fā)光二極管光的實驗組(DL)的腹部涂敷了200mg的相應(yīng)的試樣。作為用于照射的發(fā)光二極管光，自行制造了由18×6排列的108個發(fā)光二極管構(gòu)成的光照機，并以同時向除正常組之外的所有實驗組照射10分鐘的630nm和830nm波長為條件(各波長光量分別為12.5J/cm2和86.7J/cm2)進(jìn)行了實驗。如上所述的涂敷基礎(chǔ)凝膠樣本、皮膚美容組合物以及照射發(fā)光二極管光的過程以1次/日進(jìn)行了4周。3.皮膚反應(yīng)評價為了對基于照射發(fā)光二極管光及試樣處理的各實驗組的皮膚刺激反應(yīng)進(jìn)行評價，在整個實驗期間內(nèi)每天通過肉眼進(jìn)行了觀察，由此以符合藥品等毒性試驗基準(zhǔn)且在表4中示出的皮膚刺激反應(yīng)評價表為基準(zhǔn)，按照無任何紅斑(0分)、非常輕微的紅斑(1分)、明顯的紅斑(2分)、略嚴(yán)重的紅斑(3分)、嚴(yán)重的紅斑以及輕度結(jié)痂(4分)來對各實驗動物進(jìn)行了打分，之后計算各實驗組的平均值并以一周為間隔來對計算值(得分)進(jìn)行了比較。表4說明得分無任何紅斑(Noerythema)0非常輕微的紅斑(Veryslighterythema)1明顯的紅斑(Well-definederythema)2略嚴(yán)重的紅斑(Moderatetosevereerythema)3嚴(yán)重的紅斑(SevereerythematoslightescharFormation)44.耳朵厚度的測定為了對基于照射發(fā)光二極管光及試樣處理的各實驗組進(jìn)行皮膚刺激及受損評價，在開始照射發(fā)光二極管光及試樣處理之前和結(jié)束之后對各實驗動物的耳朵厚度進(jìn)行測定來對實驗前后的耳朵的浮腫程度進(jìn)行了評價。使用數(shù)顯卡尺(Digitalcaliper，CD-10CPX，Mitutoyo，Kawasaki，Japan)來對耳朵的厚度進(jìn)行了測定。5.皮膚測定為了確認(rèn)基于照射發(fā)光二極管光及試樣處理的各實驗組的皮膚指數(shù)變化，每周一次利用皮膚測定設(shè)備(多探頭適配器系統(tǒng)(MultiprobeAdapterSystem)，MPA5580，Courage&KhazakaGmbh，Cologne，Germany)對皮膚紅斑指數(shù)(Mexameter，MX18)、皮膚水分指數(shù)(Corneometer，CM825)及皮膚油分指數(shù)(Sebumeter，SM815)進(jìn)行了測定。在保持室內(nèi)溫度為22℃、濕度為45％的條件下進(jìn)行了測定，并以連續(xù)三次對6周齡雄鼠(HR-1hairlessmouse)的腹部皮膚進(jìn)行測定的平均值作為結(jié)果來表示。6.組織病理學(xué)檢查為了對基于照射發(fā)光二極管光及試樣處理的各實驗組進(jìn)行皮膚組織病理學(xué)觀察，在實驗結(jié)束后對各實驗動物的腹部組織進(jìn)行了采樣，并在10％的中性福爾馬林(formalin)溶液中固定了24小時。在得到固定的組織中取包含整個皮膚層的切片來經(jīng)過脫水之后，用石蠟(paraffin)塊包埋并利用組織切片機(RM2125，Leica，Wetzlar，Germany)以4μm的厚度進(jìn)行切割，之后粘貼于以多聚賴氨酸(polylysine)涂敷的載玻片(slide)來使用。利用二甲苯(xylene)去除組織切片的石蠟(paraffin)后使用酒精和蒸餾水使組織切片含水10分鐘并利用蒸餾水清洗后，為了觀察皮膚組織的變化形態(tài)以及蘇木精-伊紅染色和真皮中膠原質(zhì)的纖維形態(tài)，通過實施馬松三色染色法染色并利用光學(xué)顯微鏡(Axioimager，CarlZeiss，USA)進(jìn)行了觀察。7.統(tǒng)計分析實驗結(jié)果的分析利用社會科學(xué)統(tǒng)計軟件包(SPSS，StatisticalPackageforSocialScience，win12.0version)程序來對技術(shù)性統(tǒng)計值進(jìn)行了計算。其結(jié)果按各實驗組的平均值來表示。結(jié)果及考察I.膠原蛋白和葉綠素復(fù)合物的光吸收效果1.光吸收效果圖1至圖6為表示按蛋白和葉綠素的添加量測定吸光度的測定結(jié)果的曲線圖。如圖1至圖6所示，利用分光光度計按膠原蛋白和葉綠素的配合條件下通過測定500～900nm范圍內(nèi)的吸光度，從而以數(shù)值對光吸收增強程度進(jìn)行了確認(rèn)，其結(jié)果，與膠原蛋白和葉綠素的添加量成正比，在500～700nm波長中吸光度數(shù)值增加，尤其在630nm波長中的吸光度的數(shù)值增加量最高。尤其，可以確認(rèn)到，在膠原蛋白及葉綠素中對光吸收增強產(chǎn)生主要影響的材質(zhì)為葉綠素，并且相對于單獨添加，以復(fù)合的方式配合膠原蛋白時可更加增強吸光度。在此情況下，當(dāng)配合膠原蛋白及葉綠素時，膠原蛋白的添加對葉綠素的光吸收增強效果起到協(xié)同的作用，但相對于葉綠素，未因過量添加而呈現(xiàn)明顯增強的光吸收增強效果，當(dāng)少量添加時，可以確認(rèn)到未對增強光吸收起到協(xié)同作用，得出在復(fù)合物組成比中能夠呈現(xiàn)光吸收增強效果的最佳的配合條件為以1：1的重量比配合膠原蛋白和葉綠素的添加比率。在此情況下，以與作為溶劑來使用的滅菌蒸餾水相比較來分別添加1wt％的膠原蛋白和葉綠素來制備的復(fù)合物在630nm下的光吸收增強效果進(jìn)行了確認(rèn)，其結(jié)果，如圖5所示，可確認(rèn)到光吸收增強效果明顯增加。因此，確認(rèn)到可通過與630nm的發(fā)光二極管光源進(jìn)行反應(yīng)來期待呈現(xiàn)光子吸收增強效果的葉綠素和膠原蛋白復(fù)合物的光吸收增強效果，由此上述復(fù)合物起到適合于630nm的發(fā)光二極管光療法的天然光吸收劑的作用。2.光吸收效果為了確認(rèn)添加有膠原蛋白和葉綠素的產(chǎn)品是否具有光吸收增強效果，在利用這些材質(zhì)提取物來制備出最終分別添加有1wt％、0.25wt％的凝膠型化妝品之后，定量涂敷于實驗用盤子(dish)來對吸收630nm波長的發(fā)光二極管光的光量(mW/cm2)。其結(jié)果，在未添加有膠原蛋白及葉綠素的基礎(chǔ)凝膠樣本的情況下，光量為0.27mW/cm2，在最終添加有1wt％的膠原蛋白和葉綠素的樣本的情況下，光量為4.74mW/cm2，在添加有0.25wt％的膠原蛋白和葉綠素的樣本的情況下，光量為2.41mW/cm2，由此確認(rèn)到，光吸收增強效果依賴于膠原蛋白和葉綠素的配合比來呈現(xiàn)。II.對膠原蛋白和葉綠素復(fù)合物進(jìn)行處理的光療法時的皮膚安全性評價1.照射發(fā)光二極管光及處理實驗試樣后對皮膚刺激反應(yīng)的觀察發(fā)光二極管光療法對人體無害這一點被人們所公知，但考慮到因通過吸光度增強材質(zhì)來得到增強的光吸收而可能引起皮膚刺激或皮膚受損，利用公知的具有與人類皮膚類似的皮膚的6周齡雄鼠(無毛小鼠(Hairlessmice))進(jìn)行了皮膚安全性評價。如表5所示，在總4周的觀察期間中，用肉眼對未經(jīng)過任何處理的正常組(NO)和僅照射發(fā)光二極管光的對照組(CO)進(jìn)行了觀察，觀察結(jié)果，在整個實驗期間中，兩個實驗組的皮膚刺激反應(yīng)評價分?jǐn)?shù)均表示出“0”分，并且均未觀察到因照射發(fā)光二極管光而形成紅斑。并且，對涂敷基礎(chǔ)凝膠樣本之后照射發(fā)光二極管光的實驗組(BL)和涂敷以復(fù)合的方式添加膠原蛋白和葉綠素的皮膚美容組合物之后照射發(fā)光二極管光處理的實驗組(DL)進(jìn)行了觀察，觀察結(jié)果，也未觀察到紅斑的形成。在圖7中示出了在照射發(fā)光二極管光及涂敷試樣前后拍攝6周齡雄鼠(HR-1無毛小鼠)的背部的照片。參照圖7，皮膚包括表皮、真皮、皮下組織，且為通過覆蓋整個身體來從外部防御化學(xué)物質(zhì)、機械性受損及熱的首要防御組織。因此，觀察到皮膚刺激的共同癥狀有血管擴張和發(fā)熱、疼痛、浮腫等，當(dāng)進(jìn)行皮膚刺激試驗時，因血管擴張而引起的紅斑和浮腫程度成為評價的重要基準(zhǔn)。因此，按各實驗組向6周齡雄鼠(HR-1無毛小鼠)的腹部照射發(fā)光二極管光以及涂敷實驗試樣后對紅斑形成等用肉眼觀察了是否產(chǎn)生皮膚刺激，結(jié)果確認(rèn)到在進(jìn)行實驗的所有組中未發(fā)現(xiàn)紅斑形成及其他皮膚刺激的受損，從而認(rèn)為，除了照射發(fā)光二極管光之外，還與添加有光吸收材質(zhì)的試樣并行的發(fā)光二極管照射光對皮膚刺激無害。表5組0周1周2周3周4周正常組(NO)00000對照組(CO)00000實驗組(BL)00000實驗組(DL)000002.對基于照射發(fā)光二極管光及處理實驗試樣的耳朵浮腫的觀察圖8為表示為了觀察耳朵浮腫而按各實驗組分別在照射發(fā)光二極管光以及涂敷實驗試樣之前和實驗最后一天對耳朵厚度進(jìn)行測定的測定結(jié)果的圖，圖9為按各實驗組分別在照射發(fā)光二極管光以及涂敷實驗試樣之前和實驗最后一天測定的耳朵浮腫的測定結(jié)果進(jìn)行比較來表示的圖。如圖8及圖9所示，在正常組和對照組的情況下，經(jīng)過測定的結(jié)果，在照射發(fā)光二極管光之前的耳朵厚度分別為0.15mm和0.16mm，在照射發(fā)光二極管光并經(jīng)過4周之后的耳朵厚度分別為0.17mm和0.18mm，因而呈現(xiàn)出小幅增加的傾向，但未表現(xiàn)出顯著差異。在實驗組(BL)和實驗組(DL)的情況下，在照射發(fā)光二極管光以及涂敷實驗試樣之前的耳朵厚度分別為0.16mm和0.16mm，在照射發(fā)光二極管光以及涂敷實驗試樣并經(jīng)過4周之后測定出的耳朵厚度分別為0.17mm和0.16mm，因而未表現(xiàn)出顯著的耳朵厚度變化。因此可確認(rèn)到，在所有實驗組中均未形成浮腫。若因外部因素而使皮膚受到刺激，則發(fā)生皮膚細(xì)胞及組織的受損，與此同時，免疫細(xì)胞會誘導(dǎo)使受損最小化進(jìn)而還原受損部位的一系列炎癥反應(yīng)。即，隨著在存在于受損部位周邊的毛細(xì)血管中流動的血流量增加，血管的直徑變寬，由此導(dǎo)致紅斑和浮腫。因此，為了通過對各實驗組的6周齡雄鼠(無毛小鼠)的耳朵厚度進(jìn)行測定，來確認(rèn)因照射發(fā)光二極管光及處理實驗試樣而引起的皮膚刺激和皮膚受損，因而對形成浮腫的結(jié)果進(jìn)行了比較及確認(rèn)，從而確認(rèn)到在所有實驗組中未發(fā)現(xiàn)顯著的浮腫形成。由此，掌握到除了照射發(fā)光二極管光外，還與添加有光吸收材質(zhì)的試樣并行的照射發(fā)光二極管光對皮膚刺激無害。3.測定因照射發(fā)光二極管光及處理實驗試樣而引起的皮膚指數(shù)的變化表6表示通過向各實驗組的6周齡雄鼠照射發(fā)光二極管光及處理實驗試樣后對紅斑發(fā)生進(jìn)行測定的測定結(jié)果，表7及表8分別表示通過向各實驗組的6周齡雄鼠照射發(fā)光二極管光及處理實驗試樣后對油水分含量進(jìn)行測定的測定結(jié)果。表6組0周1周2周3周4周正常組(NO)290.4247.7233.5211.3213.5對照組(CO)259.4251.7228.5203.0213.5實驗組(BL)275.4256.2258.7247.1217.6實驗組(DL)280.7273.8236.6227.2222.3表7組0周1周2周3周4周正常組(NO)43.139.738.238.237.3對照組(CO)36.337.039.842.734.2實驗組(BL)36.035.637.738.437.0實驗組(DL)36.439.040.842.039.2表8組0周1周2周3周4周正常組(NO)0.070.130.130.130.13對照組(CO)0.000.130.200.270.20實驗組(BL)0.070.200.270.130.13實驗組(DL)0.070.270.330.200.33如表6至表8所示，在測定皮膚紅斑指數(shù)的測定結(jié)果中，未觀察到因照射發(fā)光二極管光及處理實驗試樣而使皮膚紅斑發(fā)生顯著變化。在照射發(fā)光二極管光以及涂敷實驗試樣后測定皮膚水分含量的測定結(jié)果中也未表示出各實驗組之間的顯著差異。與紅斑及水分含量的測定結(jié)果相同，在測定皮膚油分含量的測定結(jié)果中也未觀察到因照射發(fā)光二極管光及處理實驗試樣而在各實驗組之間發(fā)生顯著差異。若皮膚因紫外線及抗原等外部刺激而受損，則引起角質(zhì)層的脂質(zhì)氧化，從而使皮膚組織內(nèi)的水分和油分減少。并且，因加深的炎癥反應(yīng)和血管內(nèi)血流量增加而發(fā)生紅斑。皮膚刺激大致可通過兩個方面來確認(rèn)。首先，因皮膚角質(zhì)層的受損及脂質(zhì)受損而引起的皮膚屏障功能的下降可通過測定表皮的水分及油分含量、經(jīng)表皮水分流失量來進(jìn)行評價。并且，因真皮內(nèi)血管擴張及炎癥因子的分泌而引起的皮膚紅斑或浮腫等反應(yīng)可利用測定血流速度或利用色度計(colorimeter)測定紅斑程度等來進(jìn)行評價。因此，在本發(fā)明中，利用皮膚測定設(shè)備來每周一次對皮膚紅斑、水分含量、油分含量進(jìn)行了調(diào)查。與正常組相比較，在其他所有實驗組中未表示出顯著差異，由此，可確認(rèn)到未因照射發(fā)光二極管光及涂敷試樣而使皮膚受損。4.組織染色結(jié)果圖10為通過蘇木精-伊紅組織染色來觀察組織病理學(xué)變化的照片，圖11為通過馬松三色染色法組織染色來觀察組織病理學(xué)變化的照片。如圖10及圖11所示，為了確認(rèn)皮膚組織的受損程度，通過蘇木精-伊紅及馬松三色染色法組織染色，對組織病理學(xué)的變化進(jìn)行了觀察。在此情況下，通過蘇木精-伊紅組織染色觀察的結(jié)果，相對于正常組(NO)和對照組(CO)，實驗組(BL)和實驗組(DL)的表皮表現(xiàn)得更光滑，并且觀察到四個組均未對構(gòu)成真皮層的細(xì)胞及組織排列表現(xiàn)出異常。結(jié)論在本發(fā)明中，作為可起到增強吸光度的天然材質(zhì)，選定膠原蛋白和葉綠素，并分別使用分光光度計和分光輝度計來測定了630nm波長范圍的光吸收程度，測定結(jié)果確認(rèn)到這些材質(zhì)為可增強光吸收的材質(zhì)。并且，利用6周齡雄鼠(HR-1無毛小鼠)來對復(fù)合添加作為天然材質(zhì)的膠原蛋白和葉綠素的皮膚美容組合物進(jìn)行了皮膚刺激安全性評價，實驗結(jié)果，通過上述臨床評價確認(rèn)到在具有光吸收增強效果的同時確保在照射光時不引起皮膚刺激的穩(wěn)定性。以上，以本發(fā)明的實施例為中心進(jìn)行了說明，但具有本發(fā)明所屬
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的普通技術(shù)人員的水平的人員可以對本發(fā)明進(jìn)行多種變更或變形。在不脫離本發(fā)明所提供的技術(shù)思想的范圍內(nèi)，上述變更和變形可屬于本發(fā)明。因此，本發(fā)明的保護(hù)范圍應(yīng)以以下記載的發(fā)明要求保護(hù)范圍來進(jìn)行判斷。當(dāng)前第1頁1 2 3