高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷的方法：取3g人參干燥粉末，加入50mL蒸餾水；再加入1-3％的β-葡萄糖苷酶液；在高壓脈沖電場作用下酶水解，電場強(qiáng)度為5-25kV/cm，處理的脈沖數(shù)為6-12個(gè)；待上述反應(yīng)完成，100℃加熱5min，使其鈍化；用水飽和正丁醇萃取反應(yīng)液，離心分離，取上清液；將人參總皂苷提取液于55℃真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，樣品溶解于甲醇。本方法由于在酶解反應(yīng)過程中引入高壓脈沖電場，提高酶制劑活性，加速酶解反應(yīng)速度，快速、高效地促進(jìn)人參中總皂苷物質(zhì)溶出。
【專利說明】高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種制備人參總皂苷的方法，特別是涉及一種高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷的方法。

【背景技術(shù)】
[0002]人參(Panax ginseng C.A.Meyer)是五加科人參屬植物,是傳統(tǒng)的名貴中藥。人參具有大補(bǔ)元?dú)?，補(bǔ)脾益肺，生津止渴，安神增智等功效。人參中含有人參皂苷、揮發(fā)油、有機(jī)酸、酯類及多糖類等多種成分活性成分，其中人參皂苷是人參的主要活性成分。目前，從人參中至少分離出了 40余種人參皂苷單體。
[0003]人參皂苷是由苷元和糖基相連構(gòu)成的植物糖苷類物質(zhì)，廣泛存在于人參的根、莖、葉、花中。人參皂苷均屬于三萜皂苷，按其皂苷元結(jié)構(gòu)不同可分為三種類型:齊墩果酸型皂苷如Ro ;原人參二醇型皂苷；原人參三醇型皂苷。后兩類均屬于達(dá)瑪烷型的四環(huán)三萜皂苷，是人參的主要活性成分之一。
[0004]目前，人參皂苷的傳統(tǒng)提取方法包括有機(jī)溶劑提取法、加熱回流法、索氏提取法和水蒸氣蒸餾法等。但是存在提取周期長、溶劑用量高、有效成分損失大、能耗高等問題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的是提出一種高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷的方法，以克服目前傳統(tǒng)提取方法中提取溫度高，提取時(shí)間長等缺點(diǎn)。
[0006]本發(fā)明采用以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
[0007]—種高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷的方法，包括以下步驟:
[0008]I)取人參干燥粉末，加入蒸餾水，
[0009]2)再加入酶制劑，
[0010]3)在高壓脈沖電場作用下酶水解；
[0011]4)待上述反應(yīng)完成，加熱鈍化，
[0012]5)加入有機(jī)溶劑萃取，離心分離，取上清液，
[0013]6)濃縮提取液，樣品溶解于甲醇。
[0014]一種高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷的方法的改進(jìn)方案，所述步驟I)具體指:取3g人參干燥粉末，加入50mL蒸餾水。
[0015]一種高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷的方法的改進(jìn)方案，所述步驟2)中加入的酶制劑為葡萄糖苷酶。
[0016]一種高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷的方法的改進(jìn)方案，所述步驟2)中酶制劑的添加量為1_3%。
[0017]一種高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷的方法的改進(jìn)方案，所述步驟3)中高壓脈沖電場的電場強(qiáng)度為5_25kV/cm,處理的脈沖數(shù)為6_12個(gè)。
[0018]一種高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷的方法的改進(jìn)方案，所述步驟4)具體指將通過所述步驟3)酶解后的溶液100°C加熱5min，使其鈍化。
[0019]一種高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷的方法的改進(jìn)方案，所述步驟5)中加入的有機(jī)溶劑為正丁醇，且使用水飽和溶液。
[0020]—種高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷的方法的改進(jìn)方案，步驟6)中濃縮提取液，具體指將人參總皂苷提取液于55°C真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。
[0021]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):
[0022]本方法由于在酶解反應(yīng)過程中引入高壓脈沖電場，提高酶制劑活性，加速酶解反應(yīng)速度，快速、高效地促進(jìn)人參中總皂苷物質(zhì)溶出。
[0023]本發(fā)明利用高壓脈沖電場技術(shù)輔助商業(yè)化酶制劑水解制備人參總皂苷，具有無需加熱、反應(yīng)速度快、提取率高、成本低等優(yōu)點(diǎn)。
[0024]本發(fā)明方法具有條件溫和、不破壞皂甙結(jié)構(gòu)、提取時(shí)間短、工藝條件簡單、樣品純度高等優(yōu)點(diǎn)，并且采用的酶為價(jià)格低廉的商業(yè)化用酶。

【具體實(shí)施方式】
[0025]結(jié)合以下給出的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明方法作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0026]一種高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷的方法:取3g人參干燥粉末，加入50mL蒸餾水；再加入1-3%的β -葡萄糖苷酶液；在高壓脈沖電場作用下酶水解，電場強(qiáng)度為5-25kV/cm，處理的脈沖數(shù)為6-12個(gè)；待上述反應(yīng)完成，100°C加熱5min，使其鈍化；用水飽和正丁醇萃取反應(yīng)液，離心分離，取上清液；將人參總皂苷提取液于55°C真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，樣品溶解于甲醇。
[0027]實(shí)施例1
[0028]本發(fā)明高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷，取3g人參粉末樣品，加入50mL蒸餾水，磁力攪拌器攪拌均勻，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.0，加入I % β -葡萄糖苷酶液，底物濃度為0.5mg/mL，在PEF作用下酶解，電場強(qiáng)度為lOkV/cm，脈沖數(shù)為6 ;用水飽和正丁醇萃取反應(yīng)液，離心分離，上清液揮發(fā)除去溶劑，經(jīng)高效液相色譜分析人參皂苷Rd的得率為
2.36%。
[0029]實(shí)施例2
[0030]本發(fā)明高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷，取3g人參粉末樣品，加入50mL蒸餾水，磁力攪拌器攪拌均勻，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.0，加入I % β -葡萄糖苷酶液，底物濃度為1.0mg/mL，在PEF作用下酶解，電場強(qiáng)度為lOkV/cm，脈沖數(shù)為6 ;用水飽和正丁醇萃取反應(yīng)液，離心分離，上清液揮發(fā)除去溶劑，經(jīng)高效液相色譜分析人參皂苷Rd的得率為
3.43%。
[0031]實(shí)施例3
[0032]本發(fā)明高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷，取3g人參粉末樣品，加入50mL蒸餾水，磁力攪拌器攪拌均勻，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.0，加入2% β -葡萄糖苷酶液，底物濃度為1.0mg/mL，在PEF作用下酶解，電場強(qiáng)度為lOkV/cm，脈沖數(shù)為8。用水飽和正丁醇萃取反應(yīng)液，離心分離，上清液揮發(fā)除去溶劑，經(jīng)高效液相色譜分析人參皂苷Rd的得率為3.52%。
[0033]實(shí)施例4
[0034]本發(fā)明高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷，取3g人參粉末樣品，加入50mL蒸餾水，磁力攪拌器攪拌均勻，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.0，加入I % β -葡萄糖苷酶液，底物濃度為1.0mg/mL，在PEF作用下酶解，電場強(qiáng)度為5kV/cm，脈沖數(shù)為6。用水飽和正丁醇萃取反應(yīng)液，離心分離，上清液揮發(fā)除去溶劑，經(jīng)高效液相色譜分析人參皂苷Rd的得率為
2.18%。
[0035]實(shí)施例5
[0036]本發(fā)明高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總阜苷，取3g人參粉末樣品,加入5OmL蒸餾水，磁力攪拌器攪拌均勻，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.0，加入I % β -葡萄糖苷酶液，底物濃度為1.0mg/mL,在PEF作用下酶解，電場強(qiáng)度為20kV/cm，脈沖數(shù)為6。用水飽和正丁醇萃取反應(yīng)液，離心分離，上清液揮發(fā)除去溶劑，經(jīng)高效液相色譜分析人參皂苷Rd的得率為3.38%。
[0037]實(shí)施例6
[0038]本發(fā)明高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷，取3g人參粉末樣品，加入50mL蒸餾水，磁力攪拌器攪拌均勻，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.0，加入I % β -葡萄糖苷酶液，底物濃度為1.0mg/mL，在PEF作用下酶解，電場強(qiáng)度為lOkV/cm，脈沖數(shù)為12。用水飽和正丁醇萃取反應(yīng)液，離心分離，上清液揮發(fā)除去溶劑，經(jīng)高效液相色譜分析人參皂苷Rd的得率為3.94%。
[0039]實(shí)施例7
[0040]本發(fā)明高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷，取3g人參粉末樣品，加入50mL蒸餾水，磁力攪拌器攪拌均勻，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.0，加入I % β -葡萄糖苷酶液，底物濃度為1.0mg/mL,在PEF作用下酶解，電場強(qiáng)度為25kV/cm，脈沖數(shù)為6。用水飽和正丁醇萃取反應(yīng)液，離心分離，上清液揮發(fā)除去溶劑，經(jīng)高效液相色譜分析人參皂苷Rd的得率為
3.06%。
[0041]實(shí)施例8
[0042]本發(fā)明高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷，取3g人參粉末樣品，加入50mL蒸餾水，磁力攪拌器攪拌均勻，用冰醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.0，加入3% β -葡萄糖苷酶液，底物濃度為1.0mg/mL，在PEF作用下酶解，電場強(qiáng)度為lOkV/cm，脈沖數(shù)為8。用水飽和正丁醇萃取反應(yīng)液，離心分離，上清液揮發(fā)除去溶劑，經(jīng)高效液相色譜分析人參皂苷Rd的得率為
3.55%。
【權(quán)利要求】
1.一種高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷的方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)取人參干燥粉末，加入蒸餾水， 2)再加入酶制劑， 3)在高壓脈沖電場作用下酶水解； 4)待上述反應(yīng)完成,加熱鈍化， 5)加入有機(jī)溶劑萃取，離心分離，取上清液， 6)濃縮提取液，樣品溶解于甲醇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷的方法，其特征在于，所述步驟I)具體指:取3g人參干燥粉末，加入50mL蒸餾水。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷的方法，其特征在于，所述步驟2)中加入的酶制劑為葡萄糖苷酶。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷的方法，其特征在于，所述步驟2)中酶制劑的添加量為1_3%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷的方法，其特征在于，所述步驟3)中高壓脈沖電場的電場強(qiáng)度為5-25kV/cm，處理的脈沖數(shù)為6_12個(gè)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷的方法，其特征在于，所述步驟4)具體指將通過所述步驟3)酶解后的溶液100°C加熱5min，使其鈍化。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷的方法，其特征在于，所述步驟5)中加入的有機(jī)溶劑為正丁醇，且使用水飽和溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高壓脈沖電場輔助酶水解制備人參總皂苷的方法，其特征在于，步驟6)中濃縮提取液，具體指將人參總皂苷提取液于55°C真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。
【文檔編號(hào)】A61K36/258GK104398549SQ201410639581
【公開日】2015年3月11日 申請(qǐng)日期:2014年11月11日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月11日
【發(fā)明者】盧丞文, 殷涌光 申請(qǐng)人:長春師范大學(xué)