一種升高白細胞作用的梅花鹿鹿脾提取物的制備及用途
【專利摘要】本發(fā)明公開一種鹿脾提取物的新提取方法及在提高免疫力藥物中的應用，對傳統(tǒng)的鹿脾提取工藝進行了改進，對離心沉淀用復合酶進行進一步提取，多肽和核苷酸的含量均提高了30%，同時提取物中肌苷成分占總核苷酸含量達8%，提高了提取物中肌苷的含量；同時本發(fā)明方法的提取物較原工藝提取的轉移因子的升高白細胞的活性提高了20%。
【專利說明】一種升高白細胞作用的梅花鹿鹿脾提取物的制備及用途
[0001] 【技術領域】： 本發(fā)明公開了一種升高白細胞作用的梅花鹿鹿脾提取物的制備及用途，屬于生物制藥 【技術領域】。
[0002] 技術背景： 白細胞減少在臨床上非常多見，多為繼發(fā)性。白細胞降低的同時，抵抗力也會降低，會 出現頭暈、乏力、心悸、低熱、精神萎靡、失眠、食欲減退、咽喉炎及黏膜潰瘍等癥狀，嚴重影 響人們的生活質量和健康水平。白細胞減少臨床上用激素、鋰鹽治療，療效雖有提高，但副 作用大。對于一種療效好、費用低、無副作用的治療白細胞減少的保健品，市場需求巨大。
[0003] 轉移因子是一種由多肽和低聚核苷酸組成的復合物，對中性粒細胞趨化活性強。 近年來，主要從動物脾臟中進行提取。目前，轉移因子的提取方法多為：取新鮮豬或牛脾臟 除結締組織，用組織搗碎機絞碎，加適量生理鹽水后，用高速組織搗碎機高速（12000r/min) 勻漿，得勻漿液；勻漿液進行凍融數次；離心，取上清；將上清置于透析袋內進行透析，收集 透析袋外的透析液即為制備的轉移因子，或將離心后上清進行超濾，得轉移因子提取物。
[0004] 梅花鹿自古以來具有很高的經濟價值，其為仙獸，全身皆為寶，無一廢棄，鹿制品 都具有極高的藥用價值和保健功效，鹿脾富含多肽、多糖、核酸等人體必須的營養(yǎng)物質。由 梅花鹿的鹿脾為原材料提取的轉移因子，具有熱原低、營養(yǎng)物質高且安全等特點，通過本發(fā) 明方法得到的鹿脾提取物為口服，其在升高白細胞的功能上相比于原有工藝提取的轉移因 子具有更顯著的效果。
【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明公開了鹿脾提取物在升高白細胞藥物中的用途，可用于制備升高白細胞作 用的藥物和保健食品，在劑型方面可采用各種劑型，如口服液、片劑、顆粒劑、散劑、丸劑、膠 囊等劑型或緩釋制劑。
[0006] 本發(fā)明公開的一種鹿脾提取物是通過以下方法制備的： 1) 稱取梅花鹿鹿脾250份，去除表面結締組織； 2) 加入3~8重量的生理鹽水，膠體磨研磨2~5min ; 3) 將鹿脾混懸液升溫至5(T55 °C，調PH值至5?6,加入0. 6?4. 6%重量 的復合酶A保溫0. 5h~2h，保溫完畢后在4000g離心力下進行離心，得上清液 I液； 4) 上一步驟得到的鹿脾沉淀物(約為原鹿脾重量的1/4)繼續(xù)加入等質量的生理鹽水， 升溫至6(T65°C，繼續(xù)加入2?5%重量的復合酶B保溫廣3h，然后在4000g離心力下離心 IOmin,得上清液II液； 5) 將上清I液和II液進行混合,然后用IOKD超濾膜進行超濾，超濾液進行噴霧干燥即 得具有升高白細胞功能的鹿脾提取物干粉。
[0007] 所述的復合酶A為中性蛋白酶：胰蛋白酶：5' -磷酸二酯酶的質量比為廣2 :2~4 : 4?9 ; 所述的復合酶B為中性蛋白酶：木瓜蛋白酶：5' -磷酸二酯酶的質量比為1~2 :2~9 : 4 ?12 ; 所述的鹿脾提取物中含25~32重量份多肽，1.6~2.2重量份核酸，0. 12~0.25重量份 肌苷。
[0008] 本發(fā)明的積極效果在于：對傳統(tǒng)的鹿脾提取工藝進行了改進，增加了步驟4,對離 心沉淀用復合酶B進行進一步提取，多肽和核苷酸的含量均提高了 30%，同時提取物中肌苷 成分占總核苷酸含量達8%，提高了提取物中肌苷的含量；同時本發(fā)明方法的提取物較原工 藝提取的轉移因子的升高白細胞的活性提高了 20%。 【具體實施方式】
[0009] 通過以下實施例進一步舉例描述本發(fā)明，并不以任何方式限制本發(fā)明，在不背離 本發(fā)明的技術解決方案的前提下，對本發(fā)明所作的本領域普通技術人員容易實現的任何改 動或改變都將落入本發(fā)明的權利要求范圍之內。
[0010] 實施例1: s .稱取梅花鹿鹿脾250g，去除表面結締組織； t ?加入750ml生理鹽水，膠體磨研磨5min ; C.將鹿脾混懸液升溫至50°C，調PH值至5,同時加入0. 25g中性蛋白酶，0. 75g胰蛋 白酶和I. 5g 5' -磷酸二酯酶保溫2h，保溫完畢后在4000g離心力下進行離心，得上清液I 液； c .上一步驟得到的鹿脾沉淀物繼續(xù)加入等質量的生理鹽水，升溫至60°C，同時加入 0. 12g中性蛋白酶，0. 48g木瓜蛋白酶和0. 6g 5'-磷酸二酯酶保溫3h，然后在4000g離心力 下離心IOmin,得上清液II液； e.將上清I液和II液進行混合，然后用IOKD超濾膜進行超濾，超濾液進行噴霧干 燥即得具有升高白細胞功能的梅花鹿鹿脾提取物干粉，多肽含量為28. 32%，核酸含量為 1. 76%〇
[0011] 實施例2: ￡ .稱取梅花鹿鹿脾250g，去除表面結締組織； t ?加入1200ml生理鹽水，膠體磨研磨5min; c .將鹿脾混懸液升溫至55°C，調PH值至5,同時加入0. 51g中性蛋白酶，1.48g胰蛋 白酶和3. Ig 5' -磷酸二酯酶保溫保溫2h，保溫完畢后在4000g離心力下進行離心，得上清 液I液； c .上一步驟得到的鹿脾沉淀物繼續(xù)加入等質量的生理鹽水，升溫至60°C，同時加入 0. 22g中性蛋白酶，0. 78g木瓜蛋白酶和1.05g 5'-磷酸二酯酶保溫lh，然后在4000g離心 力下離心IOmin,得上清液II液； e.將上清I液和II液進行混合，然后用IOKD超濾膜進行超濾，超濾液進行噴霧干 燥即得具有升高白細胞功能的梅花鹿鹿脾提取物干粉，多肽含量為29. 18%，核酸含量為 1. 85%。
[0012] 實施例3: ￡ .稱取梅花鹿鹿脾250g，去除表面結締組織； t .加入1400ml生理鹽水，膠體磨研磨4min ; c .將鹿脾混懸液升溫至50°C，調PH值至5,同時加入0. 54g中性蛋白酶，I. 62g胰蛋 白酶和3. 52g 5' -磷酸二酯酶保溫lh，保溫完畢后在4000g離心力下進行離心，得上清液I 液； c .上一步驟得到的鹿脾沉淀物繼續(xù)加入等質量的生理鹽水，升溫至60°C，同時加入 0. 28g中性蛋白酶，0. 89g木瓜蛋白酶和I. 45g 5' -磷酸二酯酶保溫2h，然后在4000g離心 力下離心IOmin,得上清液II液； e.將上清I液和II液進行混合，然后用IOKD超濾膜進行超濾，超濾液進行噴霧干 燥即得具有升高白細胞功能的梅花鹿鹿脾提取物干粉，多肽含量為28. 79%，核酸含量為 1. 91%。
[0013] 實施例4: S .稱取梅花鹿鹿脾250g，去除表面結締組織； t ?加入1500ml生理鹽水，膠體磨研磨3min ; C.將鹿脾混懸液升溫至50°C，調PH值至5,同時加入0.70g中性蛋白酶，2. Olg胰蛋 白酶和4. 32g 5' -磷酸二酯酶保溫2h，保溫完畢后在4000g離心力下進行離心，得上清液I 液； c .上一步驟得到的鹿脾沉淀物繼續(xù)加入等質量的生理鹽水，升溫至65°C，同時加入 0. 33g中性蛋白酶，0. 93g木瓜蛋白酶和I. 45g 5' -磷酸二酯酶保溫2h，然后在4000g離心 力下離心IOmin,得上清液II液； e.將上清I液和II液進行混合，然后用IOKD超濾膜進行超濾，超濾液進行噴霧干 燥即得具有升高白細胞功能的梅花鹿鹿脾提取物干粉，多肽含量為29. 38%，核酸含量為 1. 96%〇
[0014] 實施例5 : s .稱取梅花鹿鹿脾250g，去除表面結締組織； t ?加入2000ml生理鹽水，膠體磨研磨5min C.將鹿脾混懸液升溫至50°C，調PH值至5,同時加入0.91g中性蛋白酶，1.82g胰蛋 白酶和7. 38g 5' -磷酸二酯酶保溫I. 5h，保溫完畢后在4000g離心力下進行離心，得上清液 I液 c .上一步驟得到的鹿脾沉淀物繼續(xù)加入等質量的生理鹽水，升溫至60°C，同時加入 0. 32g中性蛋白酶，I. 04g木瓜蛋白酶和I. 46g 5' -磷酸二酯酶保溫2h，然后在4000g離心 力下離心IOmin,得上清液II液； e.將上清I液和II液進行混合，然后用IOKD超濾膜進行超濾，超濾液進行噴霧干 燥即得具有升高白細胞功能的梅花鹿鹿脾提取物干粉，多肽含量為29. 26%，核酸含量為 1. 86%〇
[0015] 對照例1(物理法提?。?a. 稱取250g新鮮梅花鹿鹿脾，去除表面結締組織，剪刀剪碎備用； b. 加入250ml超純水，制備脾臟勻漿； c. 取勻漿，-20°C反復凍融5次，4°C 4000rpm離心30min，取上清液； d. 上清液放入到透析袋中，按比例加入超純水，4°C透析，透析外液0. 22 y m微控濾膜 過濾除菌，即得轉移因子溶液。噴霧干燥得鹿脾提取物干粉，多肽含量為28. 79%，核酸含量 為 1. 18%。
[0016] 對照例2 (物理法提取）： a. 稱取250g新鮮豬脾，去除表面結締組織，剪刀剪碎備用； b. 加入250ml超純水，制備脾臟勻漿； c. 取勻漿，-20°C反復凍融5次，4°C 4000rpm離心30min，取上清液； d. 上清液放入到透析袋中，按比例加入超純水，4°C透析，透析外液0. 22 y m微控濾膜 過濾除菌，即得轉移因子溶液。噴霧干燥得豬脾提取物干粉，多肽含量為17. 64%，核酸含量 為 0? 94%。
[0017] 以下試驗表明通過工藝改進后采用本發(fā)明工藝，梅花鹿鹿脾提取物干粉中多肽和 核苷酸的含量均提高了 30%，同時提取物中肌苷成分占總核苷酸含量達8%。
[0018] 表1各提取方法得到鹿脾提取物干粉中各有效成分的含量結果
【權利要求】
1. 一種梅花鹿鹿脾提取物，是通過以下方法制成的： 1) 稱取梅花鹿鹿脾250份，去除表面結締組織； 2) 加入:Γ8重量的生理鹽水，膠體磨研磨2~5min; 3) 將梅花鹿鹿脾混懸液升溫至5(T55 °C，調PH值至5?6,加入0. 6?4. 6%重 量的復合酶A保溫0.5tT2h，保溫完畢后在4000g離心力下進行離心，得上清液 I液； 4) 將步驟3)得到的鹿脾沉淀物繼續(xù)加入等質量的生理鹽水，升溫至6(T65°C，繼續(xù)加 入2?5%重量的復合酶B保溫1?3h，然后在4000g離心力下離心lOmin，得上清液II液； 5) 將上清I液和II液進行混合,然后用IOKD超濾膜進行超濾，超濾液進行噴霧干燥即 得具有升高白細胞功能的鹿脾提取物干粉； 所述的復合酶A為中性蛋白酶：胰蛋白酶：5' -磷酸二酯酶的質量比為廣2 :2~4 :4~9 ; 所述的復合酶B為中性蛋白酶：木瓜蛋白酶：5' -磷酸二酯酶的質量比為1~2 :2~9 : 4 ?12。
2. 權利要求1所述的梅花鹿鹿脾提取物可用于制備升高白細胞作用的藥物和保健食 品，在劑型方面可采用各種劑型，如口服液、片劑、顆粒劑、散劑、丸劑、膠囊等劑型或緩釋制 劑。
3. 權利要求1所述的梅花鹿鹿脾提取物在制備升高白細胞藥物中的用途。
【文檔編號】A61P7/00GK104306401SQ201410614994
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年11月5日 優(yōu)先權日:2014年11月5日
【發(fā)明者】逯家輝, 王迪, 劉洋, 彭小君, 滕樂生, 王貞佐, 滕利榮, 孟慶繁, 劉艷, 賈東旭, 周毓麟, 程瑛琨 申請人:吉林大學