一種納米鉆石靶向藥物的制備方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的納米鉆石靶向藥物的制備方法和應(yīng)用。將轉(zhuǎn)鐵蛋白Tf溶于PBS緩沖溶液中，再加入DOX反應(yīng)得到Tf-DOX復(fù)合物；將羧基化的納米鉆石和Tf-DOX復(fù)合物反應(yīng)得到納米鉆石靶向藥物ND-(Tf-DOX)。該靶向藥物與HepG2作用，用低溫、不同抑制劑和游離Tf處理細(xì)胞，表明其具有能量依賴；用人正常HEK293做對比，研究細(xì)胞對其吸收，表明其具有靶向選擇性；用人HepG2和人HeLa做對比，MTT法檢測其細(xì)胞毒性，表明其對癌細(xì)胞具有靶向抗腫瘤效應(yīng)和選擇性；以荷瘤小鼠為模型，研究其在體內(nèi)的抑制腫瘤效應(yīng)，表明其能抑制腫瘤并相對阿霉素具有較低毒副作用。其可在制備靶向抗腫瘤藥物中應(yīng)用。
【專利說明】一種納米鉆石靶向藥物的制備方法和應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及靶向納米藥物，具體涉及一種轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的納米鉆石靶向藥物的制 備方法，以及該方法制備的藥物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 目前用于癌癥治療的手段主要有手術(shù)、放療、化療和生物治療等，但各種治療手段 都給患者帶來極大的痛苦，而且對中晚期癌癥病人作用不明顯，因此研究有效且低傷害的 靶向治療方法尤為迫切。近年來隨著納米科學(xué)與生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)等學(xué)科的有機結(jié)合，納米生 物醫(yī)學(xué)已經(jīng)成為引人矚目的新興交叉學(xué)科之一。
[0003] 由于納米顆粒的尺寸效應(yīng)，多適用于納米載體，基于轉(zhuǎn)鐵蛋白-轉(zhuǎn)鐵蛋白受體高 親和力作用，可將轉(zhuǎn)鐵蛋白與藥物載體偶聯(lián)，通過與腫瘤細(xì)胞表面轉(zhuǎn)鐵蛋白受體相互作用 特性來實現(xiàn)抗癌藥物的主動靶向輸送。基于這個策略，量子點、金納米顆粒和納米鉆石等納 米顆粒與轉(zhuǎn)鐵蛋白偶聯(lián)，然后與轉(zhuǎn)鐵蛋白受體過量表達(dá)的腫瘤細(xì)胞系相互作用證實其具有 靶向輸送特性?？梢姲邢蜉d體制備的重要性，但靶向載體材料是否能真正實現(xiàn)靶向運輸藥 物是人們急切關(guān)注的焦點，據(jù)我們了解，目前這樣的報道很少見。由于納米鉆石具有特殊的 生物相容性好、無毒性、尺寸小與化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定和表面易修飾等優(yōu)點，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng) 用潛力引起了人們廣泛關(guān)注。因此，我們展開了針對轉(zhuǎn)鐵蛋白偶聯(lián)納米鉆石且攜帶化療藥 物制成的納米藥物系統(tǒng)是否能實現(xiàn)靶向輸送藥物目的的研究。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種具有主動靶向特性的轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的納米鉆石靶向 藥物的制備方法，以及該方法制備的納米鉆石靶向藥物在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明提供的一種轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的納米鉆石靶向藥物的制備方法，包括如下步 驟：
[0006] (1)按每lmg轉(zhuǎn)鐵蛋白溶于每lmL硼酸緩沖溶液（PBS)中，接著按轉(zhuǎn)鐵蛋白（Tf) 與阿霉素（D0X)質(zhì)量比100 : 6-10加入D0X，搖勻，室溫下避光，在搖勻儀上反應(yīng)過夜得到 Tf-DOX復(fù)合物；
[0007] (2)稱取干燥的羧基化的納米鉆石，按每毫克羧基化的納米鉆石加入1-1. 5ml的 MES(0. 1M，pH6. 00)緩沖溶液中，超聲分散形成懸濁液，再按每毫克羧基化的納米鉆石中加 入0. 2mg EDC與0. 3mg NHS，室溫攪拌反應(yīng)6h，以15000rpm離心5min，除去上清液，繼而用 pH 7.4 PBS緩沖液洗滌兩次，棄去上清液，得到活化羧基的納米鉆石沉淀物；把活化羧基的 納米鉆石沉淀物重新分散到PBS緩沖液溶液（pH7. 4)中，超聲分散形成懸濁液，加入制備的 Tf-DOX復(fù)合物，室溫下避光在搖勻儀上反應(yīng)12h ;然后于15000rpm離心5min，用PBS緩沖 液清洗沉淀直至上清液無色為止，制得轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的納米鉆石靶向藥物ND- (Tf-DOX)，冷 藏；ND-(Tf-DOX)粒徑大小約為235nm。
[0008] 與現(xiàn)有技術(shù)相比本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明選用的納米鉆石材料具有生物相容 性好、無毒、化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定、表面易修飾等諸多優(yōu)點。制備的ND-(Tf-DOX)納米藥物，經(jīng)體 外腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)運機制表明ND-(Tf-DOX)具有能量依賴，是由網(wǎng)格蛋白決定、轉(zhuǎn)鐵蛋白受 體介導(dǎo)機制進入細(xì)胞；用人肝癌細(xì)胞（HepG2)和人正常胚胎腎細(xì)胞（HEK293)做對比，表 明ND-(Tf-DOX)納米藥物進入細(xì)胞具有選擇性；用人肝癌細(xì)胞（HepG2)和人宮頸癌細(xì)胞 (HeLa)做對比，MTT法檢測ND-(Tf-DOX)納米藥物對細(xì)胞活性的影響，表明該藥物對癌細(xì)胞 具有靶向抗腫瘤效應(yīng)且具有選擇性。以荷瘤小鼠為模型，將上述納米藥物通過尾部靜脈注 射至小鼠體內(nèi)，檢測其治療腫瘤的效果（以阿霉素作為對照），定期測量實驗小鼠的體重和 腫瘤體積，證實了納米材料ND-(Tf-DOX)在生物體內(nèi)的高生物兼容性，通過瘤體變化率對 比說明ND-(Tf-DOX)藥物注射組的瘤體增長較D0X組緩慢；實驗后期處死動物，測得的各 器官指數(shù)證實了 ND-(Tf-DOX)藥物對小鼠肝臟和脾臟的毒副作用明顯低于傳統(tǒng)化療藥物 D0X。上述實驗結(jié)果揭示了 ND-(Tf-DOX)納米藥物可在制備抗腫瘤藥物中應(yīng)用。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0009] 圖1A低溫及不同抑制劑條件下細(xì)胞對ND-(Tf-DOX)納米藥物吸收的影響 [0010] 圖1B不同游離轉(zhuǎn)鐵蛋白濃度條件，細(xì)胞內(nèi)吞ND-(Tf-DOX)納米藥物差異
[0011] 圖1C IfepG2和HEK293細(xì)胞攝取ND-(Tf-DOX)納米藥物的差異
[0012] 圖2 ND-(Tf-DOX)納米藥物對H印G2、HeLa細(xì)胞活性的影響
[0013] 圖3A不同藥物組對腫瘤抑制的代表示意圖（治療期為31天）
[0014] 圖3B不同藥物組對腫瘤體積變化率抑制柱狀圖，（PBS組（n = 5)，D0X組 (100mg/20g mice) (n = 5)和 ND-(Tf-DOX)組（100mg of D0X equivalent per 20g mice) (n = 5)，n =小鼠只數(shù)。通過靜脈注射，每7天一次。
[0015] 圖3C不同藥物組對荷瘤小鼠體重的影響（藥物組和劑量同圖3B)
[0016] 圖3D不同藥物組對荷瘤小鼠各器官指數(shù)的影響（藥物組和劑量同圖3B)

【具體實施方式】
[0017] 載體為納米鉆石（ND，元素六，直徑大約140nm, Ireland)。
[0018] 阿霉素（D0X)是鹽酸多柔比星，分子式為C27H29N0 n ?HC1，分子量為579. 99,深圳萬 樂藥業(yè)有限公司，規(guī)格按C27H29N〇n ? HC1計算為10mg。
[0019] 人轉(zhuǎn)鐵蛋白（Tf，分子量80000)為Sigma公司。
[0020] 實施例1 :
[0021] (1)轉(zhuǎn)鐵蛋白-阿霉素（Tf-D0X)復(fù)合物的制備
[0022] 準(zhǔn)確稱取2mgTf，加入2mL PBS(pH7.4)緩沖溶液，搖勻，再向其中加入200iig D0X，室溫下，在搖勻儀上反應(yīng)過夜以制備Tf-D0X復(fù)合物室溫下避光，在搖勻儀上反應(yīng)過夜 以制備Tf-D0X復(fù)合物。
[0023] (2)納米鉆石_(轉(zhuǎn)鐵蛋白-阿霉素）納米藥物的制備
[0024] 稱取干燥的2mg羧基化的納米鉆石，接著加入2. 0ml的MES (0. 1M，pH6. 00)緩沖 溶液，超聲分散30min形成懸濁液，再加入0. 4mg EDC與0. 6mg NHS，室溫攪拌反應(yīng)6h，以 15000rpm離心5min，除去上清液，繼續(xù)用pH 7. 4PBS緩沖液洗滌兩次，棄去上清液，得到活 化羧基的納米鉆石沉淀物；把活化羧基的納米鉆石沉淀物重新分散到PBS緩沖液溶液中， 超聲分散形成懸濁液，加入制備的Tf-DOX復(fù)合物，室溫下避光在搖勻儀上反應(yīng)12h。待反應(yīng) 結(jié)束后，于15000rpm離心5min，用PBS緩沖液清洗沉淀直至上清夜無色為止，制得轉(zhuǎn)鐵蛋白 修飾的納米鉆石靶向藥物ND- (Tf-DOX)，冷藏。用紫外可見光分光光譜法測定并計算得出每 毫克納米鉆石上偶聯(lián)Tf的量為（751 ±42)微克；計算D0X的吸附量，經(jīng)計算可知每毫克納 米鉆石吸附阿霉素質(zhì)量約（54±5.0)微克。
[0025] 實施例2 :
[0026] (1)轉(zhuǎn)鐵蛋白-阿霉素（Tf-DOX)復(fù)合物的制備
[0027] 準(zhǔn)確稱取2mgTf，加入2mL PBS(pH7. 4)緩沖溶液，搖勻，再向其中加入160iig D0X，室溫下，在搖勻儀上反應(yīng)過夜以制備Tf-DOX復(fù)合物室溫下避光，在搖勻儀上反應(yīng)過夜 以制備Tf-DOX復(fù)合物。
[0028] (2)納米鉆石_(轉(zhuǎn)鐵蛋白-阿霉素）納米藥物的制備
[0029] 稱取干燥的2mg羧基化的納米鉆石，接著加入2. 0ml的MES (0. 1M，pH6. 00)緩沖 溶液，超聲分散30min形成懸濁液，再加入0. 4mg EDC與0. 6mg NHS，室溫攪拌反應(yīng)6h，以 15000rpm離心5min，除去上清液，繼續(xù)用pH 7. 4PBS緩沖液洗滌兩次，棄去上清液，得到活 化羧基的納米鉆石沉淀物；把活化羧基的納米鉆石沉淀物重新分散到PBS緩沖液溶液中， 超聲分散形成懸濁液，加入制備的Tf-DOX復(fù)合物，室溫下避光在搖勻儀上反應(yīng)12h。待反應(yīng) 結(jié)束后，于15000rpm離心5min，用PBS緩沖液清洗沉淀直至上清夜無色為止，制得轉(zhuǎn)鐵蛋白 修飾的納米鉆石靶向藥物ND- (Tf-DOX)，冷藏。用紫外可見光分光光譜法測定并計算得出每 毫克納米鉆石上偶聯(lián)Tf的量為（730±23)微克；計算D0X的吸附量，經(jīng)計算可知每毫克納 米鉆石吸附阿霉素質(zhì)量約（40±8)微克。
[0030] 實施例3 :
[0031] (1)轉(zhuǎn)鐵蛋白-阿霉素（Tf-DOX)復(fù)合物的制備
[0032] 準(zhǔn)確稱取2mgTf，加入lmL PBS(pH7.4)緩沖溶液，搖勻，再向其中加入120iig D0X，室溫下，在搖勻儀上反應(yīng)過夜以制備Tf-DOX復(fù)合物室溫下避光，在搖勻儀上反應(yīng)過夜 以制備Tf-DOX復(fù)合物。
[0033] (2)納米鉆石_(轉(zhuǎn)鐵蛋白-阿霉素）納米藥物的制備
[0034] 稱取干燥的2mg羧基化的納米鉆石，接著加入2. 0ml的MES (0. 1M，pH6. 00)緩沖 溶液，超聲分散30min形成懸濁液，再加入0. 4mg EDC與0. 6mg NHS，室溫攪拌反應(yīng)6h，以 15000rpm離心5min，除去上清液，繼續(xù)用pH 7. 4PBS緩沖液洗滌兩次，棄去上清液，得到活 化羧基的納米鉆石沉淀物；把活化羧基的納米鉆石沉淀物重新分散到PBS緩沖液溶液中， 超聲分散形成懸濁液，加入制備的Tf-DOX復(fù)合物，室溫下避光在搖勻儀上反應(yīng)12h。待反應(yīng) 結(jié)束后，于15000rpm離心5min，用PBS緩沖液清洗沉淀直至上清夜無色為止，制得轉(zhuǎn)鐵蛋白 修飾的納米鉆石靶向藥物ND- (Tf-DOX)，冷藏。用紫外可見光分光光譜法測定并計算得出每 毫克納米鉆石上偶聯(lián)Tf的量為（713±62)微克；計算D0X的吸附量，經(jīng)計算可知每毫克納 米鉆石吸附阿霉素質(zhì)量約（29±5)微克。
[0035] 實施例4 :
[0036] 流式細(xì)胞儀檢測體外H印G2細(xì)胞攝取納米鉆石靶向藥物ND-(Tf-DOX)的機制
[0037] 為了探究細(xì)胞內(nèi)吞ND-(Tf-DOX)納米顆粒的轉(zhuǎn)運機制，選用低溫和不同抑制劑研 究了 ND-(Tf-DOX)納米顆粒與細(xì)胞的作用（本實驗中用實施例1制備的ND-(Tf-DOX)納米 顆粒），結(jié)果如圖1A。由圖可見，與4°C相比，在37°C培養(yǎng)時，ND-(Tf-DOX)進入H印G2細(xì)胞內(nèi) 顆粒數(shù)明顯增加，4°C時抑制率達(dá)90%，這種現(xiàn)象與在4°C下，受到細(xì)胞膜脂流動性的影響， 外源物質(zhì)進入細(xì)胞量減少一致。用影響內(nèi)吞需要能量的抑制劑NaN 3 (消耗細(xì)胞內(nèi)ATP)、網(wǎng)格 蛋白破壞劑鹿糖（Sucrose)分別對HepG2細(xì)胞進行預(yù)處理。結(jié)果表明經(jīng)過NaN3預(yù)處理的細(xì) 胞熒光強度顯著降低，抑制率達(dá)64%，由此得出HepG2細(xì)胞內(nèi)吞ND-(Tf-DOX)需要能量，是 一個能量決定的主動運輸。Sucrose對H印G2細(xì)胞攝入ND-(Tf-DOX)的抑制率達(dá)70%，由此 推斷ND-(Tf-DOX)是網(wǎng)格蛋白決定的內(nèi)吞途徑進入細(xì)胞。綜合以上，結(jié)果表明ND-(Tf-DOX) 進入細(xì)胞具有溫度、能量依賴性，以網(wǎng)格蛋白決定的內(nèi)吞途徑進入H印G2細(xì)胞。
[0038] 轉(zhuǎn)鐵蛋白（Tf)與轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（TfR)是一種高親和力配體-受體，那么，HepG2細(xì) 胞攝取ND-(Tf-DOX)是TfR受體介導(dǎo)機制嗎？為了證實這一假設(shè)，使用游離Tf作為競爭劑 以阻止ND-(Tf-DOX)與細(xì)胞表面上的TfR結(jié)合。結(jié)果如圖1B所示，隨著游離Tf濃度的增 力口，細(xì)胞內(nèi)熒光強度逐漸減少，說明納米顆粒ND-(Tf-DOX)進入細(xì)胞逐漸減少。當(dāng)游離Tf 濃度達(dá)到5 y M時，抑制率達(dá)到62%。這是由于游離Tf占據(jù)了細(xì)胞表面的TfR，所以細(xì)胞攝 取ND-(Tf-DOX)靶向藥物的量降低，即Tf和ND-(Tf-DOX)占據(jù)細(xì)胞表面相同的位點（即轉(zhuǎn) 鐵蛋白受體）。該結(jié)果表明ND-(Tf-DOX)是通過TfR介導(dǎo)進入細(xì)胞的。
[0039] 為了進一步說明ND-(Tf-DOX)納米藥物與細(xì)胞表面受體表達(dá)量有關(guān)，選取TfR表 達(dá)量較少的J1EK293細(xì)胞與TfR表達(dá)量較多的H印G2作對比，分別與ND-(Tf-D0X)相互作用 2h，結(jié)果如圖1C所示。由圖可以看出隨著納米顆粒ND-(Tf-D0X)濃度的逐漸增加，HEK293細(xì) 胞和H印G2細(xì)胞的平均熒光強度也逐漸增強，但H印G細(xì)胞的平均熒光強度增加幅度明顯比 HEK293細(xì)胞的大，加入相同濃度的ND-(Tf-DOX)時，HEK293細(xì)胞的平均熒光強度比H印G2 細(xì)胞的平均熒光強度明顯弱，且表明HepG2細(xì)胞的攝取量大約是HEK293細(xì)胞的3倍。說明 內(nèi)吞ND-(Tf-DOX)與細(xì)胞表面受體表達(dá)量有關(guān)。
[0040] 實施例5 :
[0041] 為了進一步證明ND-(Tf-DOX)的靶向性，選用HepG2細(xì)胞為模型，HeLa細(xì)胞為對 照，用ND-(Tf-DOX)、ND-Tf與細(xì)胞作用30h，如圖2所示。ND-Tf對兩種細(xì)胞增殖都沒有顯 著影響，而HeLa細(xì)胞和H印G2細(xì)胞經(jīng)過ND-(Tf-DOX)靶向藥物處理后，細(xì)胞存活率都有所 下降，且H印G2細(xì)胞的存活率大于HeLa細(xì)胞的存活率。計算得到HeLa細(xì)胞的IC50值為 6 ii g/mL，IfepG2細(xì)胞的IC50值為8 ii g/mL，表明細(xì)胞表面受體數(shù)越多（HeLa>H印G2)，藥物 殺死一半細(xì)胞時所需的藥物濃度越小。由此得ND-(Tf-DOX)復(fù)合物進入細(xì)胞后D0X分子從 ND解離，然后D0X遷移到細(xì)胞核，抑制DNA復(fù)制和細(xì)胞增殖，該功能與ND-D0X復(fù)合物的功能 類似，ND-(Tf-DOX)納米藥物可以緩釋藥物。因此，ND-(Tf-DOX)靶向藥物具有靶向腫瘤細(xì) 胞和藥物緩釋雙重特性。
[0042] 實施例6 :納米鉆石靶向藥物ND- (Tf-D0X)體內(nèi)抗腫瘤效應(yīng)
[0043] 所有的動物實驗，按照中國輻射防護研究院藥物安全評價中心（生產(chǎn)許可證號： SYXK(晉）2013-0002)的協(xié)議進行的。取8-9周齡雄性裸鼠，每只小鼠體重約20克，由軍事 醫(yī)學(xué)科學(xué)院動物實驗室提供（北京）。
[0044] (1)裸鼠移植性肝癌HepG2細(xì)胞的接種
[0045] (a)接種量：細(xì)胞懸液調(diào)整為1.0X106/mL人肝癌細(xì)胞〇fepG2細(xì)胞），接種量為 〇. lmL/鼠，接種于右腋部皮下（每只動物的接種量為1. OX 105)
[0046] (b)分組：模型組、D0X組、ND- (Tf-DOX)組，每組5只小鼠。
[0047] (c)給藥方法及劑量：接種后10天通過尾部靜脈注射給藥，模型組不給藥（注射 lmLPBS)，D0X組給予體重每20克小鼠注射100ii g DOXdOOii g/20g)，取實施例1制得的 ND-(Tf-DOX)給予體重每20克小鼠注射1. 85mgND含100 ii g D0X。此后，每7天尾靜脈注 射1次，實驗結(jié)束時處死動物。
[0048] ⑷觀察方法：注射藥物后，對裸鼠進食、行動及感染等進行觀察。
[0049] 每次注射前對各組進行腫瘤長和寬的測量，根據(jù)腫瘤體積公式「獲得各組 腫瘤體積變化率，如圖3B，由圖可見，隨著時間的延長，ND-(Tf-DOX)藥物組與阿霉素組對 腫瘤均具有抑制效應(yīng)，使腫瘤體積減小為對照組的一半，且納米藥物組相對阿霉素組腫瘤 體積略小一些；處死動物后各組進行動物解剖，取腫瘤組織，各組典型的腫瘤代表如圖3A 所示。每次注射前進行小鼠體重稱重，各組體重隨時間的延長如圖3C所示，由圖可見，隨 時間的延長，阿霉素組體重有所減少，而納米藥物組小鼠體重相對對照組有所增長，表明納 米藥物毒副作用比阿霉素明顯降低。
[0050] 處死動物后各組進行動物解剖，取肝、腎、脾、心臟和肺，對臟器分別稱重，根據(jù)器 官指數(shù)公式（器官指數(shù)=器官濕重/小鼠體重）獲得各組器官指數(shù)的差異（圖3D)，由圖可 見納米藥物組相對阿霉素對肝臟和脾臟的毒副作用減小。
[0051] 通過與阿霉素藥物比較，充分表明我們制備得ND-(Tf-DOX)藥物具有細(xì)胞選擇性 特性，表達(dá)轉(zhuǎn)鐵蛋白受體多的癌細(xì)胞對納米藥的吸收大于表達(dá)轉(zhuǎn)鐵蛋白受體少的正常細(xì) 胞；該納米藥物具有主動靶向作用，能夠有效抑制腫瘤，對肝臟和脾的毒副作用減小，因此 ND-(Tf-D0X)納米藥物既能降低化療藥物對正常細(xì)胞的毒副作用，又能提高對腫瘤細(xì)胞的 殺傷力。ND-(Tf-D0X)藥物可在制備抗腫瘤藥物中應(yīng)用。
【權(quán)利要求】
1. 一種轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的納米鉆石靶向藥物的制備方法，其特征在于，包括如下步驟： ⑴按每lmg轉(zhuǎn)鐵蛋白Tf溶于lmL PBS緩沖溶液中，接著按Tf與DOX質(zhì)量比100 : 6-10加入DOX，搖勻，室溫下避光，在搖勻儀上反應(yīng)過夜得到Tf-DOX復(fù)合物； (2)稱取干燥的羧基化的納米鉆石，按每毫克羧基化的納米鉆石加入1-1. 5ml濃度為 0. 1M pH6. 00的MES緩沖溶液中，超聲分散形成懸濁液，再按每毫克羧基化的納米鉆石中加 入0. 2mg EDC與0. 3mg NHS，室溫攪拌反應(yīng)6h，以15000rpm離心5min，除去上清液，繼而用 pH 7.4 PBS緩沖液洗滌兩次，棄去上清液，得到活化羧基的納米鉆石沉淀物；把活化羧基的 納米鉆石沉淀物重新分散到PH7. 4的PBS緩沖液溶液中，超聲分散形成懸濁液，加入制備的 Tf-DOX復(fù)合物，室溫下避光在搖勻儀上反應(yīng)12h ;然后于15000rpm離心5min，用PBS緩沖 液清洗沉淀直至上清液無色為止，制得轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的納米鉆石靶向藥物ND- (Tf-DOX)，冷 藏。
2. 如權(quán)利要求1所述的一種轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的納米鉆石靶向藥物的制備方法，其特征在 于，步驟⑴中轉(zhuǎn)鐵蛋白（Tf)與阿霉素（D0X)質(zhì)量比為100 : 10。
3. 如權(quán)利要求1或2所述方法制備的轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的納米鉆石靶向藥物在制備抗腫瘤 藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K31/704GK104382919SQ201410594509
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年10月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月29日
【發(fā)明者】李英奇, 王志琴, 田志梅 申請人:山西大學(xué)