Myc的調(diào)節(jié)劑、其使用方法和鑒別調(diào)節(jié)myc的試劑的方法
【專利摘要】本文揭示調(diào)節(jié)細(xì)胞活力的方法。本文進(jìn)一步揭示調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的方法。本文進(jìn)一步揭示鑒別能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞活力或免疫應(yīng)答的試劑的方法。本文進(jìn)一步揭示能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞活力或免疫應(yīng)答的試劑和組合物。
【專利說(shuō)明】MYC的調(diào)節(jié)劑、其使用方法和鑒別調(diào)節(jié)MYC的試劑的方法
[0001] 本申請(qǐng)涉及申請(qǐng)日為2009年8月28日、申請(qǐng)?zhí)枮?00980127166. 7、發(fā)明名稱為 "MYC的調(diào)節(jié)劑、其使用方法和鑒別調(diào)節(jié)MYC的試劑的方法"的發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
[0002] 奪叉參考
[0003] 本申請(qǐng)案主張2008年8月28日申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)案第61/092, 708號(hào)的權(quán)益， 該申請(qǐng)案按全文引用并入本文中。

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0004] 本申請(qǐng)涉及MYC的調(diào)節(jié)劑、其使用方法和鑒別調(diào)節(jié)MYC的試劑的方法。

【背景技術(shù)】
[0005] 疫苗存在多種類型：含有死亡微生物的疫苗（例如流感和霍亂疫苗）；含有減毒微 生物的疫苗（例如MMR疫苗）；含有類毒素的疫苗（例如DPT疫苗）；含有病原體亞單位的 疫苗（例如HPV疫苗）；和核酸（例如RNA和DNA)疫苗（例如禽流感疫苗、西尼羅河病毒 (West Nile Virus)疫苗和多種癌癥疫苗）。疫苗佐劑是刺激免疫系統(tǒng)并增加免疫系統(tǒng)對(duì) 疫苗的應(yīng)答的試劑。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 需要能增強(qiáng)對(duì)抗原的免疫應(yīng)答的疫苗佐劑。本
【發(fā)明者】發(fā)現(xiàn)，增加 MYC的表達(dá)或MYC 肽的活性將增強(qiáng)對(duì)抗原的免疫應(yīng)答。為了增加細(xì)胞核中MYC的濃度而具有最小副作用，本
【發(fā)明者】已經(jīng)設(shè)計(jì)出一種能穿透細(xì)胞核的融合肽。這種肽可局部投予以便降低全身作用。這 種肽還增加白細(xì)胞（包括T細(xì)胞和B細(xì)胞）的活力。另外，本
【發(fā)明者】還設(shè)計(jì)出了數(shù)種鑒別 其它試劑的分析法，這些試劑可滿足所述未獲滿足的需求。
[0007] 還需要治療自體免疫性病癥的方法。本
【發(fā)明者】發(fā)現(xiàn)，降低MYC的表達(dá)或MYC肽的 活性可治療自體免疫性病癥。為了實(shí)現(xiàn)這一未獲滿足的需求，本
【發(fā)明者】設(shè)計(jì)出了數(shù)種用于 鑒別可抑制（部分或完全）免疫系統(tǒng)活性的試劑的分析法。在某些情況下，這些抑制免疫 系統(tǒng)的試劑會(huì)降低白細(xì)胞活力或增加無(wú)能B細(xì)胞的比例。
[0008] 在某些實(shí)施例中，本文揭示一種上調(diào)MYC基因的表達(dá)、Myc多肽的活性或其組合的 肽，其包含：(a)轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列；(b)MYC序列；和任選存在的（c) 一個(gè)或一個(gè)以上將轉(zhuǎn)運(yùn)肽序 列與MYC序列相連接的分子。在一些實(shí)施例中，所述肽具有式（I):
[0009] 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-MYC序列。
[0010] 在一些實(shí)施例中，所述肽具有式（II):
[0011] 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-X-MYC序列，
[0012] 其中-X-是將轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列與MYC序列相連接的分子。在一些實(shí)施例中，所述肽具 有式（Π ):
[0013] 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-X-MYC序列，
[0014] 其中X是至少一個(gè)氨基酸。在一些實(shí)施例中，所述肽具有以下氨基酸序列（SEQ ID NO ：2)：
[0015] MRKKRRQRRRMDFFRVVENQQPPATMPLNVSFTNRNYDLDYDSVQPYFYCDEEENFYQQQQQSELQPPA PSEDIWKKFELLPTPPLSPSRRSGLCSPSYVAVTPFSLRGDNDGGGGSFSTADQLEMVTELLGGDMVNQSFICDPDD ETFIKNIIIQDCMWSGFSAAAKLVSEKLASYQAARKDSGSPNPARGHSVCSTSSLYLQDLSAAASECIDPSVVFPYP LNDSSSPKSCASQDSSAFSPSSDSLLSSTESSPQGSPEPLVLHEETPPTTSSDSEEEQEDEEEIDVVSVEKRQAPGK RSESGSPSAGGHSKPPHSPLVLKRCHVSTHQHNYAAPPSTRKDYPAAKRVKLDSVRVLRQISNNRKCTSPRSSDTEE NVKRRTHNVLERQRRNELKRSFFALRDQIPELENNEKAPKVVILKKATAYILSVQAEEQKLISEEDLLRKRREQLKH KLEQLRKGELNSKLEGKPIPNPLLGLDSTRTGHHHHHH。
[0016] 在某些實(shí)施例中，本文揭示一種誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的組合物，其包含融合肽，所述融合 肽包含：(a)轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列；(b)MYC序列；和任選存在的（c) 一個(gè)或一個(gè)以上將所述轉(zhuǎn)運(yùn)肽序 列與所述MYC序列相連接的分子。在一些實(shí)施例中，所述肽具有式（I):
[0017] 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-MYC序列。
[0018] 在一些實(shí)施例中，所述肽具有式（II):
[0019] 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-X-MYC序列，
[0020] 其中-X-是將轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列與MYC序列相連接的分子。在一些實(shí)施例中，所述肽具 有式（Π ):
[0021] 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-X-MYC序列，
[0022] 其中X是至少一個(gè)氨基酸。在一些實(shí)施例中，所述肽具有以下氨基酸序列（SEQ ID NO ：2)：
[0023] MRKKRRQRRRMDFFRVVENQQPPATMPLNVSFTNRNYDLDYDSVQPYFYCDEEENFYQQQQQSELQPPA PSEDIWKKFELLPTPPLSPSRRSGLCSPSYVAVTPFSLRGDNDGGGGSFSTADQLEMVTELLGGDMVNQSFICDPDD ETFIKNIIIQDCMWSGFSAAAKLVSEKLASYQAARKDSGSPNPARGHSVCSTSSLYLQDLSAAASECIDPSVVFPYP LNDSSSPKSCASQDSSAFSPSSDSLLSSTESSPQGSPEPLVLHEETPPTTSSDSEEEQEDEEEIDVVSVEKRQAPG KRSESGSPSAGGHSKPPHSPLVLKRCHVSTHQHNYAAPPSTRKDYPAAKRVKLDSVRVLRQISNNRKCTSPRSSDT EENVKRRTHNVLERQRRNELKRSFFALRDQIPELENNEKAPKVVILKKATAYILSVQAEEQKLISEEDLLRKRREQL KHKLEQLRKGELNSKLEGKPIPNPLLGLDSTRTGHHHHHH。在一些實(shí)施例中，所述組合物進(jìn)一步包含 抗原、抗原部分或其組合。在一些實(shí)施例中，所述抗原是死亡微生物、減毒微生物、類毒素、 病原體亞單位、核酸、核酸聚合物或其組合。在一些實(shí)施例中，抗原來(lái)源于：甲型肝炎；乙型 肝炎；脊髓灰質(zhì)炎；麻疹；腮腺炎；風(fēng)疹；白喉；百日咳；破傷風(fēng)；流感；水痘帶狀皰疹病毒； 輪狀病毒；腦膜炎球菌；肺炎；天花；霍亂；黑死??；黃熱病；結(jié)核?。蝗巳轭^瘤病毒；或其組 合。在一些實(shí)施例中，所述組合物進(jìn)一步包含來(lái)源于病原體的抗原部分，所述病原體選自： 甲型肝炎；乙型肝炎；脊髓灰質(zhì)炎；麻疹；腮腺炎；風(fēng)疹；白喉；百日咳；破傷風(fēng)；流感；水痘 帶狀皰疹病毒；輪狀病毒；腦膜炎球菌；肺炎；天花；霍亂；黑死?。稽S熱??；結(jié)核??；人乳頭 瘤病毒；或其組合。在一些實(shí)施例中，所述組合物進(jìn)一步包含來(lái)源于贅生性細(xì)胞的抗原部 分。在一些實(shí)施例中，所述組合物經(jīng)調(diào)配用于局部投藥。
[0024] 在某些實(shí)施例中，本文揭示一種誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的方法，其包含對(duì)有需要的個(gè)體投 予：(a)針對(duì)至少一種抗原的疫苗，和（b)融合肽，其包含：(a)轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列；(b)MYC序列；和 任選存在的（c) 一個(gè)或一個(gè)以上將所述轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列與所述MYC序列相連接的分子。在一些 實(shí)施例中，所述肽具有式（I):
[0025] 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-MYC序列。
[0026] 在一些實(shí)施例中，所述肽具有式（II):
[0027] 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-X-MYC序列，
[0028] 其中-X-是將轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列與MYC序列相連接的分子。在一些實(shí)施例中，所述肽具 有式（Π ):
[0029] 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-X-MYC序列，
[0030] 其中X是至少一個(gè)氨基酸。在一些實(shí)施例中，所述肽具有以下氨基酸序列（SEQ ID NO ：2)：
[0031] MRKKRRQRRRMDFFRVVENQQPPATMPLNVSFTNRNYDLDYDSVQPYFYCDEEENFYQQQQQSELQPPA PSEDIWKKFELLPTPPLSPSRRSGLCSPSYVAVTPFSLRGDNDGGGGSFSTADQLEMVTELLGGDMVNQSFICDPDD ETFIKNIIIQDCMWSGFSAAAKLVSEKLASYQAARKDSGSPNPARGHSVCSTSSLYLQDLSAAASECIDPSVVFPYP LNDSSSPKSCASQDSSAFSPSSDSLLSSTESSPQGSPEPLVLHEETPPTTSSDSEEEQEDEEEIDVVSVEKRQAPGK RSESGSPSAGGHSKPPHSPLVLKRCHVSTHQHNYAAPPSTRKDYPAAKRVKLDSVRVLRQISNNRKCTSPRSSDTEE NVKRRTHNVLERQRRNELKRSFFALRDQIPELENNEKAPKVVILKKATAYILSVQAEEQKLISEEDLLRKRREQLKH KLEQLRKGELNSKLEGKPIPNPLLGLDSTRTGHHHHHH。在一些實(shí)施例中，疫苗選自由以下組成的群 組：甲型肝炎疫苗；乙型肝炎疫苗；脊髓灰質(zhì)炎疫苗；麻疹疫苗；腮腺炎疫苗；風(fēng)疹疫苗；白 喉疫苗；百日咳疫苗；破傷風(fēng)疫苗；流感疫苗；水痘帶狀皰疹病毒疫苗；輪狀病毒疫苗；腦 膜炎球菌疫苗；肺炎疫苗；天花疫苗；霍亂疫苗；黑死病疫苗；黃熱病疫苗；結(jié)核病疫苗；人 乳頭瘤病毒疫苗；癌癥疫苗；或其組合。在一些實(shí)施例中，疫苗是在投予增加 Myc多肽的細(xì) 胞核濃度的試劑之前、之后或同時(shí)投予。
[0032] 在某些實(shí)施例中，本文揭示一種增加細(xì)胞活力的方法，其包含對(duì)有需要的個(gè)體投 予上調(diào)MYC的表達(dá)、增加 Myc肽的活性或其組合的試劑。在一些實(shí)施例中，所述試劑是融合 肽，其包含：(a)轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列；(b)MYC序列；和任選存在的（c) 一個(gè)或一個(gè)以上將所述轉(zhuǎn)運(yùn) 肽序列與所述MYC序列相連接的分子。在一些實(shí)施例中，所述肽具有式（I):
[0033] 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-MYC序列。
[0034] 在一些實(shí)施例中，所述肽具有式（II):
[0035] 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-X-MYC序列，
[0036] 其中-X-是將轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列與MYC序列相連接的分子。在一些實(shí)施例中，所述肽具 有式（Π ):
[0037] 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-X-MYC序列，
[0038] 其中X是至少一個(gè)氨基酸。在一些實(shí)施例中，所述肽具有以下氨基酸序列（SEQ ID NO ：2)：
[0039] MRKKRRQRRRMDFFRVVENQQPPATMPLNVSFTNRNYDLDYDSVQPYFYCDEEENFYQQQQQSELQPPA PSEDIWKKFELLPTPPLSPSRRSGLCSPSYVAVTPFSLRGDNDGGGGSFSTADQLEMVTELLGGDMVNQSFICDPDD ETFIKNIIIQDCMWSGFSAAAKLVSEKLASYQAARKDSGSPNPARGHSVCSTSSLYLQDLSAAASECIDPSVVFPYP LNDSSSPKSCASQDSSAFSPSSDSLLSSTESSPQGSPEPLVLHEETPPTTSSDSEEEQEDEEEIDVVSVEKRQAPGK RSESGSPSAGGHSKPPHSPLVLKRCHVSTHQHNYAAPPSTRKDYPAAKRVKLDSVRVLRQISNNRKCTSPRSSDTEE NVKRRTHNVLERQRRNELKRSFFALRDQIPELENNEKAPKVVILKKATAYILSVQAEEQKLISEEDLLRKRREQLKH KLEQLRKGELNSKLEGKPIPNPLLGLDSTRTGHHHHHH。在一些實(shí)施例中，細(xì)胞為白細(xì)胞。在一些實(shí)施 例中，細(xì)胞為T細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，細(xì)胞為B細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，細(xì)胞為記憶性T 細(xì)胞。
[0040] 在某些實(shí)施例中，本文揭示一種降低細(xì)胞活力的方法，其包含對(duì)有需要的個(gè)體投 予下調(diào)MYC的表達(dá)、降低Myc肽的活性或其組合的試劑。
[0041] 在某些實(shí)施例中，本文揭示一種治療以MYC基因表達(dá)不足或Myc多肽活性缺乏為 特征的病癥的方法，其包含對(duì)有需要的個(gè)體投予上調(diào)MYC表達(dá)、增加 Myc肽的活性或其組合 的試劑。在一些實(shí)施例中，所述試劑是融合肽，其包含：(a)轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列；(b)MYC序列；和任 選存在的（c) 一個(gè)或一個(gè)以上將所述轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列與所述MYC序列相連接的分子。在一些實(shí) 施例中，所述肽具有式（I):
[0042] 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-MYC序列。
[0043] 在一些實(shí)施例中，所述肽具有式（II):
[0044] 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-X-MYC序列，
[0045] 其中-X-是將轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列與MYC序列相連接的分子。在一些實(shí)施例中，所述肽具 有式（Π ):
[0046] 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-X-MYC序列，
[0047] 其中X是至少一個(gè)氨基酸。在一些實(shí)施例中，所述肽具有以下氨基酸序列（SEQ ID NO ：2)：
[0048] MRKKRRQRRRMDFFRVVENQQPPATMPLNVSFTNRNYDLDYDSVQPYFYCDEEENFYQQQQQSELQPPA PSEDIWKKFELLPTPPLSPSRRSGLCSPSYVAVTPFSLRGDNDGGGGSFSTADQLEMVTELLGGDMVNQSFICDPDD ETFIKNIIIQDCMWSGFSAAAKLVSEKLASYQAARKDSGSPNPARGHSVCSTSSLYLQDLSAAASECIDPSVVFPYP LNDSSSPKSCASQDSSAFSPSSDSLLSSTESSPQGSPEPLVLHEETPPTTSSDSEEEQEDEEEIDVVSVEKRQAPGK RSESGSPSAGGHSKPPHSPLVLKRCHVSTHQHNYAAPPSTRKDYPAAKRVKLDSVRVLRQISNNRKCTSPRSSDTEE NVKRRTHNVLERQRRNELKRSFFALRDQIPELENNEKAPKVVILKKATAYILSVQAEEQKLISEEDLLRKRREQLKH KLEQLRKGELNSKLEGKPIPNPLLGLDSTRTGHHHHHH。
[0049] 在某些實(shí)施例中，本文揭示一種治療以MYC基因過(guò)度表達(dá)或Myc多肽活性過(guò)高為 特征的病癥的方法，其包含對(duì)有需要的個(gè)體投予下調(diào)MYC表達(dá)、降低Myc肽的活性或其組合 的試劑。
[0050] 在某些實(shí)施例中，本文揭示一種鑒別上調(diào)MYC基因表達(dá)和/或Myc多肽活性的試 劑的方法，所述方法包含：(a)使多個(gè)無(wú)能B細(xì)胞與一種試劑接觸；和（b)在與所述試劑接 觸后，檢測(cè)和/或測(cè)量細(xì)胞培養(yǎng)物中一個(gè)或一個(gè)以上細(xì)胞表面標(biāo)記的表達(dá)量，其中所述細(xì) 胞表面標(biāo)記的存在是非無(wú)能B細(xì)胞的指示。在一些實(shí)施例中，所述無(wú)能B細(xì)胞是從具有 表型BCR heVsHEL的小鼠獲得。在一些實(shí)施例中，細(xì)胞表面標(biāo)記為：IgM、IgMa、IgMb、B220、 CD21/35、CD23、CD24(HSA)、CD40、CD69、CD80 和 / 或 CD86(B7-2)。在一些實(shí)施例中，通過(guò)使 所述多個(gè)細(xì)胞與結(jié)合于某一細(xì)胞表面標(biāo)記的可檢測(cè)抗體或可檢測(cè)抗原接觸，來(lái)測(cè)量所述細(xì) 胞表面標(biāo)記的表達(dá)量。
[0051] 在某些實(shí)施例中，本文揭示一種鑒別上調(diào)MYC基因表達(dá)和/或Myc多肽活性的試 劑的方法，所述方法包含：(a)使多個(gè)因子相關(guān)性細(xì)胞與一種試劑接觸；(b)在與所述試劑 接觸后，檢測(cè)和測(cè)量所述多個(gè)細(xì)胞的擴(kuò)增量。在一些實(shí)施例中，所述因子相關(guān)性細(xì)胞是淋巴 樣細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，所述因子相關(guān)性細(xì)胞為：IL-2+、IL-3+、IL-4+、IL-S v' IL-6+、 IL-7+、IL-8+、IL-9+、IL-10+、IL-11+、IL-12+，或其任何組合。在一些實(shí)施例中，所述 因子相關(guān)性細(xì)胞來(lái)源于：CTLL-2細(xì)胞或BAF/3細(xì)胞。
[0052] 在某些實(shí)施例中，本文揭示一種鑒別上調(diào)MYC基因表達(dá)和/或Myc多肽活性的試 劑的方法，其包含：(a)用報(bào)告基因構(gòu)建體轉(zhuǎn)化多個(gè)細(xì)胞，所述報(bào)告基因構(gòu)建體包含：報(bào)告 基因，可操作地連接到以myc反應(yīng)性啟動(dòng)子編碼的E盒序列；(b)使所述多個(gè)細(xì)胞與一種試 劑接觸；和（c)在與所述試劑接觸后，檢測(cè)和測(cè)量所述報(bào)告基因的表達(dá)量。在一些實(shí)施例 中，所述細(xì)胞是淋巴樣細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，所述myc反應(yīng)性啟動(dòng)子是鳥氨酸脫羧酶啟動(dòng) 子。在一些實(shí)施例中，報(bào)告基因是β-半乳糖苷酶基因、β-內(nèi)酰胺酶基因、辣根過(guò)氧化酶 基因、堿性磷酸酶基因、胸苷激酶基因、黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶基因、酪氨酸酶基因、胞嘧啶 脫氨酶基因、抗生素抗性基因或具有熒光表達(dá)產(chǎn)物的基因。

【具體實(shí)施方式】
[0053] 在某些實(shí)施例中，本文揭示鑒別能夠調(diào)節(jié)（例如活化、增加、誘導(dǎo)、補(bǔ)充、降低或抑 制）免疫系統(tǒng)的試劑的方法。在一些實(shí)施例中，利用這些試劑來(lái)增加免疫應(yīng)答。在一些實(shí) 施例中，使用這些試劑來(lái)減少免疫應(yīng)答。此外，本文還揭示使用借助任一種本文所揭示的方 式所鑒別的試劑來(lái)調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的方法。
[0054] 某@定義
[0055] 除非另作指示，否則以下術(shù)語(yǔ)在用于本文中和所附權(quán)利要求書中時(shí)具有以下含 義。
[0056] 術(shù)語(yǔ)"疫苗"是指投予哺乳動(dòng)物以引發(fā)免疫應(yīng)答的包含抗原和/或抗原部分的組 合物。所述抗原或抗原部分是活微生物或減毒微生物；從微生物純化得到的天然產(chǎn)物（例 如蛋白質(zhì)亞基、肽、多糖和核酸）；設(shè)計(jì)成模擬微生物的某一組分的合成產(chǎn)物；遺傳工程化 蛋白質(zhì)、肽或多糖；患者自身的腫瘤細(xì)胞；從腫瘤細(xì)胞純化得到的天然產(chǎn)物（例如前列腺特 異性抗原、gp96、GM2、⑶2、⑶3、癌胚抗原、MART-I和酪氨酸酶）；設(shè)計(jì)成模擬腫瘤細(xì)胞的某 一組分的合成分子（例如唾液酸化Tn)，或其組合。此外，術(shù)語(yǔ)疫苗還包括當(dāng)前的疫苗，和所 開發(fā)的任何新穎和/或經(jīng)過(guò)改造的疫苗。
[0057] 術(shù)語(yǔ)"淋巴樣組織"是指與淋巴系統(tǒng)相關(guān)聯(lián)的組織。淋巴樣組織的非限制性實(shí)例 包括從淋巴結(jié)、扁桃腺、脾、骨髓和胸腺獲得的組織。
[0058] 術(shù)語(yǔ)"淋巴細(xì)胞"是指所有未成熟、成熟、未分化和分化的白色淋巴細(xì)胞群，包括組 織特異性和?；兎N。其非限制性實(shí)例涵蓋B細(xì)胞、T細(xì)胞、NKT細(xì)胞和NK細(xì)胞。在一些實(shí) 施例中，淋巴細(xì)胞包括所有B細(xì)胞譜系，包括前B細(xì)胞、祖代B細(xì)胞、早期原B細(xì)胞、晚期原B 細(xì)胞、大前B細(xì)胞、小前B細(xì)胞、未成熟B細(xì)胞、成熟B細(xì)胞、血漿B細(xì)胞、記憶性B細(xì)胞、B-I 細(xì)胞、B-2細(xì)胞和無(wú)能AN1/T3細(xì)胞群。
[0059] 作為非限制性實(shí)例，術(shù)語(yǔ)B細(xì)胞是指前B細(xì)胞、祖代B細(xì)胞、早期原B細(xì)胞、晚期原 B細(xì)胞、大前B細(xì)胞、小前B細(xì)胞、未成熟B細(xì)胞、成熟B細(xì)胞、血漿B細(xì)胞、記憶性B細(xì)胞、 B-I細(xì)胞、B-2細(xì)胞和無(wú)能AN1/T3細(xì)胞群。在一些實(shí)施例中，術(shù)語(yǔ)B細(xì)胞包括在細(xì)胞表面 上表達(dá)免疫球蛋白重鏈和/或輕鏈的B細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，術(shù)語(yǔ)B細(xì)胞包括表達(dá)和分 泌免疫球蛋白重鏈和/或輕鏈的B細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，術(shù)語(yǔ)B細(xì)胞包括在細(xì)胞表面上 結(jié)合抗原的細(xì)胞。在本文揭示的一些實(shí)施例中，將B細(xì)胞或AN1/T3細(xì)胞用于所描述的方法 中。在某些實(shí)施例中，這些細(xì)胞任選地經(jīng)適于表達(dá)抗體、能夠表達(dá)（例如誘導(dǎo)性表達(dá)）抗體 或能夠分化成適于表達(dá)抗體的細(xì)胞的任何動(dòng)物細(xì)胞取代，所述動(dòng)物細(xì)胞例如包括造血干細(xì) 胞、B細(xì)胞、前B細(xì)胞、祖代B細(xì)胞、早期原B細(xì)胞、晚期原B細(xì)胞、大前B細(xì)胞、小前B細(xì)胞、 未成熟B細(xì)胞、成熟B細(xì)胞、血漿B細(xì)胞、記憶性B細(xì)胞、B-I細(xì)胞、B-2細(xì)胞、無(wú)能B細(xì)胞或 無(wú)能AN1/T3細(xì)胞。
[0060] 術(shù)語(yǔ)"免疫應(yīng)答"包括病原體和/或腫瘤細(xì)胞的鑒別和抵消。在一些實(shí)施例中，免 疫應(yīng)答是適應(yīng)性免疫應(yīng)答。適應(yīng)性免疫應(yīng)答的非限制性實(shí)例包括產(chǎn)生免疫記憶。
[0061] 術(shù)語(yǔ)"抗體"是指天然存在（但經(jīng)過(guò)分離和/或純化）、工程化或合成抗體中的任 一種形式，包括單克隆抗體、多克隆抗體、雙特異性抗體、多特異性抗體、移植抗體、人抗體、 人源化抗體、合成抗體、嵌合抗體、胳騎化抗體（camelized antibody)、單鏈Fv(scFv)、單鏈 抗體、Fab片段、F(at/ )片段、二硫鍵連接的Fv(sdFv)、內(nèi)抗體（intrabody)和抗獨(dú)特型 (抗Id)抗體，以及上述任一抗體的抗原結(jié)合片段。具體點(diǎn)說(shuō)，抗體包括免疫球蛋白分子， 以及免疫球蛋白分子的免疫活性片段，即含有抗原結(jié)合位點(diǎn)的分子。免疫球蛋白分子屬于 任何類型（例如 IgG、IgE、IgM、IgD、IgA 和 IgY)、種類（例如 IgG^ IgG2、IgG3、IgG4、IgA1 和 IgA2)或亞類。術(shù)語(yǔ)"抗體"與免疫球蛋白在廣義上可互換使用。在一些實(shí)施例中，抗體是 抗體與一種或一種以上其它蛋白質(zhì)或肽共價(jià)或非共價(jià)締合所形成的較大分子的一部分。
[0062] 本文中的抗體包括單克隆抗體、多克隆抗體、重組抗體、嵌合抗體、人源化抗體、雙 特異性抗體、移植抗體、人抗體和其片段，包括借助于任何方式改變以致在人體中具有較 低免疫原性的抗體。因此，例如，本文中的單克隆抗體和片段等包括"嵌合"抗體和"人源 化"抗體。一般說(shuō)來(lái)，嵌合抗體包括的一部分重鏈和/或輕鏈與來(lái)源于特定物種或?qū)儆谔?定抗體種類或亞類的抗體中的相應(yīng)序列一致或同源，而剩余鏈與來(lái)源于另一物種或?qū)儆诹?一抗體種類或亞類的抗體中的相應(yīng)序列一致或同源，只要其展現(xiàn)出所需的生物活性即可 (美國(guó)專利第4, 816, 567號(hào)）；莫里森（Morrison)等人，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊（Proc. Natl Acad. Sci.)，81 :6851-6855 (1984)。例如，在一些實(shí)施例中，嵌合抗體含有來(lái)源于小鼠的 可變區(qū)和來(lái)源于人的恒定區(qū)，其中所述恒定區(qū)含有與人IgG2和人IgG4同源的序列。非人 (例如鼠類）抗體或片段的"人源化形式"是含有來(lái)源于非人免疫球蛋白的最小序列的嵌 合免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段（例如Fv、Fab、Fab'、F(ab' )2或抗體的其它抗 原結(jié)合子序列）。人源化抗體包括移植抗體或CDR移植抗體，其中來(lái)源于非人動(dòng)物抗體的 一個(gè)或一個(gè)以上互補(bǔ)決定區(qū)（⑶R)中的部分或全部氨基酸序列被移植到人抗體的適宜位 置，同時(shí)仍保持原始非人抗體的所需結(jié)合特異性和/或親和力。在一些實(shí)施例中，相應(yīng)的 非人殘基置換人免疫球蛋白的Fv框架殘基。在一些實(shí)施例中，人源化抗體包含在接受者 抗體和輸入的CDR或框架序列中都沒(méi)有發(fā)現(xiàn)的殘基。這些修飾將進(jìn)一步改進(jìn)和優(yōu)化抗體 性能。在一些實(shí)施例中，人源化抗體包含至少一個(gè)且通常兩個(gè)可變結(jié)構(gòu)域的實(shí)質(zhì)上全部序 列，其中所有或?qū)嵸|(zhì)上所有CDR區(qū)都對(duì)應(yīng)于非人免疫球蛋白的CDR區(qū)，而且所有或?qū)嵸|(zhì)上所 有FR區(qū)是人免疫球蛋白共同序列的FR區(qū)。更多細(xì)節(jié)，參見(jiàn)例如：瓊斯（Jones)等人，自然 (Nature) 321 :522-525(1986);瑞奇曼（Riechmann)等人，自然，332 :323-329(1988);和普 雷斯塔（Presta)，結(jié)構(gòu)生物學(xué)新觀點(diǎn)（Curr. Op. Struct. Biol.) 2 :593-596 (1992)。
[0063] 術(shù)語(yǔ)"抗原"是指引起抗體的產(chǎn)生的物質(zhì)。
[0064] 術(shù)語(yǔ)"抗原部分"是指分子、生物體（例如細(xì)菌、病毒）或細(xì)胞中結(jié)合于抗體的部 分（或補(bǔ)體）。
[0065] 術(shù)語(yǔ)"自身抗原（self antigen) "是指源自于動(dòng)物、組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原。在一些 實(shí)施例中，自身抗原包含內(nèi)源性抗原。在一些實(shí)施例中，自身抗原包含由內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒 產(chǎn)生的內(nèi)源性抗原。在一些實(shí)施例中，自身抗原包含新自身抗原（neo-self antigen)、微生 物或寄生物編碼的新自身抗原，或在全身照射和HSC移植（此舉將重新起動(dòng)免疫系統(tǒng)并使 新抗原被認(rèn)為是"自身的"）后因動(dòng)物或細(xì)胞的遺傳改變而表達(dá)的其它新自身抗原。在一些 實(shí)施例中，嵌合體小鼠將表達(dá)新自身抗原。
[0066] 術(shù)語(yǔ)"自體抗原（auto-antigen) "是指包含自身抗原的表位或者包含可模擬自身 抗原的表位的免疫反應(yīng)性表位的抗原。在一些實(shí)施例中，術(shù)語(yǔ)自體抗原包含針對(duì)其產(chǎn)生自 體抗體的抗原。在一些實(shí)施例中，自體抗原包含內(nèi)源性抗原，其中產(chǎn)生所述內(nèi)源性抗原的動(dòng) 物對(duì)所述抗原有免疫耐受性或曾有免疫耐受性。
[0067] 術(shù)語(yǔ)"無(wú)能"是指淋巴細(xì)胞無(wú)活性（例如，這些細(xì)胞對(duì)抗原的結(jié)合無(wú)應(yīng)答）的狀態(tài)。 在一些實(shí)施例中，淋巴細(xì)胞為B細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，B細(xì)胞在暴露于可溶性循環(huán)自身抗 原后變得無(wú)能。在一些實(shí)施例中，B細(xì)胞在暴露于可溶性循環(huán)抗原后變得無(wú)能。在一些實(shí) 施例中，所述抗原為可溶性雞卵溶菌酶（soluble hen egg lysozyme, sHEL)。
[0068] 術(shù)語(yǔ)"氨基酸"是指天然存在和非天然存在的氨基酸，以及以與天然存在的氨基酸 類似的方式起作用的氨基酸類似物和氨基酸模擬物。天然編碼的氨基酸為20種常見(jiàn)氨基 酸（丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、異 亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色氨酸、酪氨酸和纈 氨酸）和吡咯賴氨酸和硒代半胱氨酸。氨基酸類似物是指與天然存在的氨基酸具有相同的 基礎(chǔ)化學(xué)結(jié)構(gòu)的試劑，即，α碳與氫、羧基、氨基和R基團(tuán)結(jié)合，例如高絲氨酸、正亮氨酸、甲 硫氨酸亞砜、甲硫氨酸甲基硫鹽。所述類似物具有經(jīng)修飾的R基團(tuán)（例如，正亮氨酸）或經(jīng) 修飾的肽主鏈，但仍保留與天然存在的氨基酸相同的基礎(chǔ)化學(xué)結(jié)構(gòu)。
[0069] 氨基酸在本文中是以其通常已知的三字母符號(hào)或IUPAC-IUB生物化學(xué)命名委員 會(huì)（Biochemical Nomenclature Commission)所推薦的單字母符號(hào)提到。同樣，可以通常 所接受的單字母代碼提到核苷酸。
[0070] 術(shù)語(yǔ)"多肽"、"肽"和"蛋白質(zhì)"在本文中可互換使用，用于指氨基酸殘基的聚合物。 所述術(shù)語(yǔ)適用于天然存在的氨基酸聚合物，以及一個(gè)或一個(gè)以上氨基酸殘基為非天然存在 的氨基酸（例如氨基酸類似物）的氨基酸聚合物。所述術(shù)語(yǔ)涵蓋任何長(zhǎng)度的氨基酸鏈，包 括全長(zhǎng)蛋白質(zhì)，其中氨基酸殘基通過(guò)共價(jià)肽鍵相連接。
[0071] 術(shù)語(yǔ)"Myc蛋白質(zhì)"和"Myc多肽"是作為同義詞使用，意思指NCBI入藏登記號(hào) NP002458. 2中所揭示的氨基酸殘基的聚合物，以及其功能性同系物、類似物或片段。在一些 實(shí)施例中，Myc多肽包含與NCBI入藏登記號(hào)NP002458. 2的序列至少40%到100%-致，例 如至少 40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、90%、 91%、92%、94%、95%、96%、97%、98%或者約40%到約100%中任一其它百分比一致的 氨基酸序列。在一些實(shí)施例中，Myc多肽包含40個(gè)氨基酸或更長(zhǎng)的多肽序列，這一多肽序列 與NCBI入藏登記號(hào)NP002458. 2的序列至少50 %到100 % -致，例如至少50 %、55 %、60 %、 65 %,70 %,75 %,80 %,85 %,86 %,87 %,88 %,90 %,91 %,92 %,94 %,95 %,96 %,97 %, 98%或者約50%到約100%中任一其它百分比一致。在一些實(shí)施例中，Myc多肽包含40個(gè) 氨基酸或更長(zhǎng)的多肽序列，這一多肽序列與NCBI入藏登記號(hào)NP002458. 2的序列至少50% 到100%-致，例如至少50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、 90%、91%、92%、94%、95%、96%、97%、98%或者約50%到約100%中任一其它百分比一 致。在一些實(shí)施例中，Myc多肽是指439個(gè)氨基酸的聚合物、未經(jīng)歷任何翻譯后修飾的Myc多 肽，和/或已經(jīng)歷翻譯后修飾的Myc多肽。在某些情況下，Myc多肽為48, 804 kDa。在某些 情況下，Myc多肽含有堿性螺旋-環(huán)-螺旋亮氨酸拉鏈（basic Helix-Loop-Helix Leucine Zipper，bHLH/LZ)結(jié)構(gòu)域。在某些情況下，Myc多肽是轉(zhuǎn)錄因子（例如轉(zhuǎn)錄因子64)。在某 些情況下，Myc多肽結(jié)合于包含CACGTG的序列（即，E盒序列）。
[0072] 術(shù)語(yǔ)"核酸"是指單鏈或雙鏈形式的脫氧核糖核苷酸、脫氧核糖核苷、核糖核苷 或核糖核苷酸，以及其聚合物。除非明確限制，否則所述術(shù)語(yǔ)涵蓋含有天然核苷酸的已 知類似物的核酸，其具有與參考核酸類似的結(jié)合特性，而且以與天然存在的核苷酸類似的 方式代謝。除非另作明確限制，否則所述術(shù)語(yǔ)還指寡聚核苷酸類似物，包括PNA(肽核酸 (peptidonucleic acid))、反義技術(shù)中使用的DNA類似物（硫代磷酸酯、氨基磷酸酯等）。 除非另作說(shuō)明，否則特定核酸序列還隱含地涵蓋其保守修飾變體（包括（但不限于）簡(jiǎn)并 密碼子取代）和互補(bǔ)序列，以及明確指出的序列。具體來(lái)說(shuō)，可通過(guò)產(chǎn)生一個(gè)或一個(gè)以上所 選（或所有）密碼子的第三位經(jīng)混合堿基和/或脫氧肌苷殘基取代的序列來(lái)實(shí)現(xiàn)簡(jiǎn)并密 碼子取代（貝澤爾（Batzer)等人，核酸研究（Nucleic Acid Res. ) 19:5081(1991);大冢 (Ohtsuka)等人，生物化學(xué)雜志 CLBiohChem. )260 :2605-2608(1985);和卡索爾（Cassol) 等人（1992);羅斯里尼（Rossolini)等人，分子和細(xì)胞探針（Mol. Cell. Probes) 8 : 91-98(1994))。
[0073] 術(shù)語(yǔ)"MYC"與"MYC基因"同義。二者是指編碼Myc多肽的核酸序列。MYC基因 包含具有至少120個(gè)核苷酸的核苷酸序列，這一核苷酸序列與NCBI入藏登記號(hào)NM_002467 的序列至少60%到100%-致或同源，例如至少60%、65%、70%、75%、80%、85%、86%、 87%、88%、90%、91%、92%、94%、95%、96%、97%、98%或者約70%到約100%中任一其 它百分比一致。在一些實(shí)施例中，MYC基因?yàn)樵┗?。在某些情況下，在8號(hào)染色體上 8q24. 21處發(fā)現(xiàn)MYC基因。在某些情況下，MYC基因在距pter 128,816,862 bp處開始，并 且在距Pter 128,822,856 bp處結(jié)束。在某些情況下，MYC基因?yàn)榧s6kb。在某些情況下， MYC基因編碼至少8個(gè)獨(dú)立的mRNA序列，即，5個(gè)選擇性剪接的變體和3個(gè)未剪接的變體。
[0074] 為了測(cè)定兩個(gè)氨基酸序列或兩個(gè)核酸的同源性百分比，可出于最佳比較的目的來(lái) 比對(duì)這些序列（例如，在第一個(gè)氨基酸或核酸序列中引入空位，以便與第二個(gè)氨基酸或核 酸序列達(dá)到最佳比對(duì)）。隨后可比較相應(yīng)氨基酸位置或核苷酸位置的氨基酸殘基或核苷酸。 當(dāng)占據(jù)第一個(gè)序列中某一位置的氨基酸殘基或核苷酸與第二個(gè)序列中的相應(yīng)位置相同時(shí)， 則所述分子在該位置一致。兩個(gè)序列之間的同源性百分比隨這兩個(gè)序列所共有的一致位置 的數(shù)量而變化（即，一致性％= -致位置的數(shù)量/位置的總數(shù)（例如重疊位置）Χ1〇〇)。在 一些實(shí)施例中，兩個(gè)序列的長(zhǎng)度相同。
[0075] 為了測(cè)定兩個(gè)序列之間的同源性百分比，使用卡琳（Karlin)和奧切爾（Altschu) (1993)在美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊（Proc. Natl. Acad. Sci. USA) 90 :5873-5877中修改過(guò)的卡琳 和奧切爾（1990)美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊，87 :2264-2268中的算法。所述算法已被并入奧切 爾等人（1990)分子生物學(xué)雜志（J. Mol. Biol.) 215 :403-410中的NBLAST和XBLAST程序 中。NBLAST程序搜索BLAST核苷酸（得分=100,字長(zhǎng)=12)，獲得與本文描述或揭示的核 酸序列同源的核苷酸序列。XBLAST程序搜索BLAST蛋白質(zhì)（得分=50,字長(zhǎng)=3)。為獲 得帶空位的比對(duì)以供比較，利用奧切爾等人（1997)，核酸研究（Nucleic Acids Res.)25: 3389-3402中所述的Gapped BLAST。當(dāng)利用BLAST和Gapped BLAST程序時(shí)，使用相應(yīng)程 序（例如XBLAST和NBLAST)的默認(rèn)參數(shù)。更多細(xì)節(jié)，參看美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心 (National Center for Biotechnology Information)網(wǎng)站（www. ncbi. nlm. nih. gov) 〇 適 合用于本文所述方法中的蛋白質(zhì)還包括與本文所述的任一蛋白質(zhì)的氨基酸序列相比較，具 有1到15個(gè)氨基酸變化，例如具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個(gè)氨基酸取 代、缺失或添加的蛋白質(zhì)。在其它實(shí)施例中，變化的氨基酸序列與本文所述的任一蛋白質(zhì) 抑制劑的氨基酸序列至少75%-致，例如77%、80%、82%、85%、88%、90%、92%、95%、 97%、98%、99%或100%-致。只要改變的氨基酸序列保留足夠的生物活性，以便在本文 所述的組合物和方法中起作用，那么這些序列變體蛋白質(zhì)就適用于本文所述的方法。在進(jìn) 行氨基酸取代時(shí)，這些取代應(yīng)為保守氨基酸取代。例如，在常用氨基酸中，"保守氨基酸取 代"是在以下各組內(nèi)的氨基酸間的取代：（1)甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸； (2)苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；（3)絲氨酸和蘇氨酸；(4)天冬氨酸和谷氨酸；(5)谷氨酰 胺和天冬酰胺；和（6)賴氨酸、精氨酸和組氨酸。BL0SUM62表是由約2, 000個(gè)蛋白質(zhì)序列 區(qū)段的局部多重比對(duì)得到的氨基酸取代矩陣，提供了超過(guò)500組相關(guān)蛋白質(zhì)的高度保守區(qū) 域（赫尼科夫（Henikoff)等人（1992)，美國(guó)國(guó)家科學(xué)院院刊，89 :10915-10919)。因此，使 用BL0SUM62取代頻率來(lái)定義在一些實(shí)施例中引入本文描述或揭示的氨基酸序列中的保守 氨基酸取代。盡管有可能只根據(jù)化學(xué)特性（如上文所論述）來(lái)設(shè)計(jì)氨基酸取代，但"保守氨 基酸取代"的表述優(yōu)選是指以大于-1的BL0SUM62值表示的取代。例如，如果某一氨基酸取 代的特征在于BL0SUM62值為0、1、2或3,那么此取代為保守取代。根據(jù)此系統(tǒng)，優(yōu)選的保守 氨基酸取代的特征在于BL0SUM62值至少為1 (例如1、2或3)，而更優(yōu)選的保守氨基酸取代 的特征在于BL0SUM62值至少為2 (例如2或3)。
[0076] 術(shù)語(yǔ)"Myc活性"是指Myc多肽與核酸序列的結(jié)合。在一些實(shí)施例中，MYC活性進(jìn) 一步包括Myc反應(yīng)性基因的轉(zhuǎn)錄活性的MYC調(diào)控。在一些實(shí)施例中，Myc活性誘導(dǎo)細(xì)胞增 殖和/或抗體產(chǎn)生。
[0077] 術(shù)語(yǔ)"Myc的活化"和"Myc活化"是指Myc活性的誘導(dǎo)。在一些實(shí)施例中，Myc的 活化是由Myc多肽的過(guò)度表達(dá)所誘導(dǎo)。在一些實(shí)施例中，通過(guò)將Myc多肽轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞核中 來(lái)誘導(dǎo)Myc的活化。在一些實(shí)施例中，通過(guò)將Myc多肽轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞中來(lái)誘導(dǎo)Myc的活化。
[0078] 術(shù)語(yǔ)"表達(dá)"是指以下的一個(gè)或一個(gè)以上事件：⑴由細(xì)胞內(nèi)的DNA序列產(chǎn)生RNA 模板（例如通過(guò)轉(zhuǎn)錄）；（2)細(xì)胞內(nèi)RNA轉(zhuǎn)錄物的加工（例如通過(guò)剪接、編輯、5'帽形成和 /或：V端形成）；(3) RNA序列在細(xì)胞內(nèi)翻譯成多肽或蛋白質(zhì)；(4)細(xì)胞內(nèi)多肽或蛋白質(zhì)的 翻譯后修飾；（5)細(xì)胞表面上多肽或蛋白質(zhì)的呈遞；（6)多肽或蛋白質(zhì)從細(xì)胞中的分泌或釋 放。
[0079] 當(dāng)提到細(xì)胞蛋白質(zhì)時(shí)的術(shù)語(yǔ)"內(nèi)源性"是指在無(wú)重組操作情況下細(xì)胞中天然存在 和/或表達(dá)的蛋白質(zhì)；相應(yīng)地，術(shù)語(yǔ)"內(nèi)源性表達(dá)的蛋白質(zhì)"或"內(nèi)源性蛋白質(zhì)"不包括借助 重組技術(shù)表達(dá)的細(xì)胞蛋白質(zhì)。
[0080] 術(shù)語(yǔ)"因子相關(guān)性細(xì)胞"是指如果不與外源性生長(zhǎng)因子（例如細(xì)胞因子）接觸就不 能存活和/或增殖的細(xì)胞。當(dāng)與所需的生長(zhǎng)因子接觸時(shí)，因子相關(guān)性細(xì)胞就能存活和/或 增殖。在不存在所需生長(zhǎng)因子時(shí)，因子相關(guān)性細(xì)胞就不能存活（例如會(huì)經(jīng)歷細(xì)胞凋亡）和 /或增殖。
[0081] 本文使用的術(shù)語(yǔ)"擴(kuò)增"是指在細(xì)胞培養(yǎng)中因細(xì)胞增殖（即分裂）而引起的培養(yǎng) 物規(guī)模擴(kuò)大。在一些實(shí)施例中，細(xì)胞培養(yǎng)物呈現(xiàn)擴(kuò)增狀態(tài)（即，細(xì)胞培養(yǎng)物達(dá)到較大的規(guī)模 和/或培養(yǎng)物中細(xì)胞的濃度增加）。在一些實(shí)施例中，細(xì)胞培養(yǎng)物呈現(xiàn)負(fù)擴(kuò)增狀態(tài)（即，細(xì) 胞培養(yǎng)物達(dá)到較小的規(guī)模和/或培養(yǎng)物中細(xì)胞的濃度降低）。在某些情況下，細(xì)胞培養(yǎng)物的 擴(kuò)增可用任何適合的方式（例如染色法、流式細(xì)胞術(shù)、熒光顯微鏡技術(shù)、HPLC、共聚焦顯微 鏡技術(shù)、紅外光譜法、放射自顯影技術(shù)）檢測(cè)和測(cè)量。
[0082] 短語(yǔ)"E盒序列"和"增強(qiáng)子盒序列"在本文中可互換使用，意思指核苷酸序列 CANNTG，其中N為任意核苷酸。在某些情況下，E盒序列包含CACGTG。在某些情況下，MYC 所編碼的轉(zhuǎn)錄因子的堿性螺旋-環(huán)-螺旋結(jié)構(gòu)域結(jié)合于E盒序列。在某些情況下，E盒序 列位于基因（例如p21、Bcl-2或鳥氨酸脫羧酶）的上游。在某些情況下，MYC所編碼的轉(zhuǎn) 錄因子與E盒序列的結(jié)合允許RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄位于E盒序列下游的基因。
[0083] 調(diào)節(jié)細(xì)朐活力的方法
[0084] 在一些實(shí)施例中，本文揭示調(diào)節(jié)細(xì)胞活力的方法。本文使用的"活力"是指細(xì)胞存 活的時(shí)間長(zhǎng)度、細(xì)胞增殖速率（或量）或其組合。在一些實(shí)施例中，細(xì)胞活力有所增加。在 一些實(shí)施例中，細(xì)胞活力有所降低。
[0085] 在一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)是在體內(nèi)發(fā)生。在一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)是在體外發(fā)生。在一 些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)細(xì)胞活力的方法包含調(diào)節(jié)白細(xì)胞的活力。在一些實(shí)施例中，白細(xì)胞為T細(xì) 胞。在一些實(shí)施例中，白細(xì)胞為⑶4+T細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，白細(xì)胞為記憶性T細(xì)胞。
[0086] 在一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)細(xì)胞活力包含調(diào)節(jié)MYC基因的表達(dá)，和/或Myc多肽的活 性。在一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)MYC基因的表達(dá)和/或Myc多肽的活性將直接或間接調(diào)節(jié)受MYC 調(diào)控的基因或多肽。在一些實(shí)施例中，直接或間接受MYC轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控的基因或多肽為：神 經(jīng)顆粒素（neurogranin)、MEF-2c、gfi-Ι、細(xì)胞周期素 D2、CDK4、Egr-2、Nab-2、TGIF、NF-kB pl05、Carma_l、Al 或Bcl_2〇
[0087] 增加細(xì)胞活力
[0088] 在一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)細(xì)胞活力意思是增加細(xì)胞活力。在一些實(shí)施例中，增加細(xì)胞 活力意思是：增加細(xì)胞存活的時(shí)間長(zhǎng)度（例如與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)細(xì)胞相比 較）、增加細(xì)胞增殖速率或量（例如與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)細(xì)胞相比較），或其 組合。
[0089] 在一些實(shí)施例中，增加細(xì)胞活力包含使細(xì)胞與增加 Myc多肽的細(xì)胞核濃度的試劑 接觸。在一些實(shí)施例中，增加細(xì)胞活力包含使細(xì)胞與以下各物接觸：外源性Myc多肽、增加 MYC基因表達(dá)的試劑和增加 Myc多肽活性的試劑，或其組合（"MYC增加劑（MYC Increasing Agent) "）。在一些實(shí)施例中，MYC增加劑是小分子、肽、抗體或其組合。
[0090] 在一些實(shí)施例中，增加細(xì)胞活力的方法包含使細(xì)胞與MYC增加劑接觸。在一些實(shí) 施例中，MYC增加劑是外源性Myc多肽。在一些實(shí)施例中，MYC增加劑是一種融合肽，其包含 (a)轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列；(b)MYC序列；和任選存在的（c) 一個(gè)或一個(gè)以上將所述轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列與所 述MYC序列相連接的分子。在一些實(shí)施例中，MYC增加劑是一種融合肽，其包含（a)TAT序 列和（b) MYC序列。
[0091] 在一些實(shí)施例中，增加細(xì)胞活力的方法包含使細(xì)胞與MYC增加劑接觸。在一些實(shí) 施例中，MYC增加劑是MD-I基因的拮抗劑。在某些情況下，下調(diào)MD-I基因和/或多肽將 上調(diào)MYC基因和/或由MYC基因編碼的多肽的表達(dá)。
[0092] 在一些實(shí)施例中，增加細(xì)胞活力的方法包含使細(xì)胞與MYC增加劑接觸。在一些實(shí) 施例中，MYC增加劑是Mxi-I基因的拮抗劑。在某些情況下，下調(diào)Mxi-I基因和/或多肽將 上調(diào)MYC基因和/或由MYC基因編碼的多肽的表達(dá)。
[0093] 在一些實(shí)施例中，增加細(xì)胞活力的方法進(jìn)一步包含鑒別MYC增加劑。在一些實(shí)施 例中，鑒別MYC增加劑的方法包含鑒別可逆轉(zhuǎn)B細(xì)胞的無(wú)能的試劑。在一些實(shí)施例中，鑒別 MYC調(diào)節(jié)劑的方法包含鑒別可增加因子相關(guān)性細(xì)胞在無(wú)所需生長(zhǎng)因子存在下的活力的試 齊U。在一些實(shí)施例中，鑒別MYC增加劑的方法包含鑒別可誘導(dǎo)受MYC反應(yīng)性啟動(dòng)子（例如 E盒序列）控制的報(bào)告基因的表達(dá)的試劑。
[0094] 在一些實(shí)施例中，在與MYC增加劑接觸后，細(xì)胞活力增加約1倍到約20倍（例 如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)細(xì)胞相比較）。在一些實(shí)施例中，在與MYC增加劑接 觸后，細(xì)胞活力增加約1倍到約15倍（例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)細(xì)胞相比 較）。在一些實(shí)施例中，在與MYC增加劑接觸后，細(xì)胞活力增加約1倍到約10倍（例如，與 同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)細(xì)胞相比較）。在一些實(shí)施例中，在與MYC增加劑接觸后， 細(xì)胞活力增加約1倍到約5倍（例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)細(xì)胞相比較）。在 一些實(shí)施例中，在與MYC增加劑接觸后，細(xì)胞活力增加約1倍到約4倍（例如，與同一類型 的相同或類似的未調(diào)節(jié)細(xì)胞相比較）。在一些實(shí)施例中，在與MYC增加劑接觸后，細(xì)胞活力 增加1倍到約2倍（例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)細(xì)胞相比較）。
[0095] 在一些實(shí)施例中，細(xì)胞為T細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，所述T細(xì)胞為記憶性T細(xì)胞。 在一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)T細(xì)胞活力是指延長(zhǎng)T細(xì)胞的壽命。在一些實(shí)施例中，延長(zhǎng)記憶性T 細(xì)胞的壽命將使體內(nèi)記憶性T細(xì)胞的濃度變高。在某些情況下，較高的記憶性T細(xì)胞濃度將 使針對(duì)抗原的初次免疫應(yīng)答加速。在某些情況下，上調(diào)MYC基因?qū)⑹篃o(wú)能T細(xì)胞減少。在 某些情況下，無(wú)能T細(xì)胞減少將使針對(duì)抗原的初次免疫應(yīng)答加速。在某些情況下，MYC基因 上調(diào)將使T細(xì)胞應(yīng)答抗原而活化所耗費(fèi)的時(shí)間縮短。在某些情況下，T細(xì)胞應(yīng)答抗原而活 化所耗費(fèi)的時(shí)間縮短將使針對(duì)抗原的初次免疫應(yīng)答加速。
[0096] 降低細(xì)胞活力
[0097] 在一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)細(xì)胞活力意思是降低細(xì)胞活力。在一些實(shí)施例中，降低細(xì)胞 活力意思是：縮短細(xì)胞存活的時(shí)間長(zhǎng)度和減少細(xì)胞增殖速率或量（例如，與同一類型的相 同或類似的未調(diào)節(jié)細(xì)胞相比較）。在一些實(shí)施例中，降低細(xì)胞活力是指縮短細(xì)胞存活的時(shí)間 長(zhǎng)度和減少細(xì)胞增殖速率或量（例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)細(xì)胞相比較）。
[0098] 在一些實(shí)施例中，降低細(xì)胞活力包含使細(xì)胞與降低MYC的細(xì)胞核濃度的試劑接 觸。在一些實(shí)施例中，降低細(xì)胞活力包含使細(xì)胞與以下各物接觸：降低MYC基因表達(dá)的試劑 和降低Myc多肽的活性的試劑，或其組合（"MYC降低劑（MYC Decreasing Agent)"）。在 一些實(shí)施例中，MYC降低劑是小分子、生物試劑（biologic)、肽、抗體或其組合。
[0099] 在一些實(shí)施例中，降低細(xì)胞活力的方法包含使細(xì)胞與MYC降低劑接觸。在一些實(shí) 施例中，MYC降低劑是MAD-I基因和MAD-I多肽的激動(dòng)劑或其組合。在某些情況下，上調(diào) MD-I基因和/或多肽將下調(diào)MYC基因和/或由MYC基因編碼的多肽的表達(dá)。在一些實(shí)施 例中，調(diào)節(jié)細(xì)胞活力的方法包含使細(xì)胞與MYC降低劑接觸。
[0100] 在一些實(shí)施例中，降低細(xì)胞活力的方法包含使細(xì)胞與MYC降低劑接觸。在一些實(shí) 施例中，MYC降低劑為：Mxi-I基因和Mxi-I多肽的激動(dòng)劑，或其組合。在某些情況下，上調(diào) Mxi-I基因和/或多肽將下調(diào)MYC基因和/或由MYC基因編碼的多肽的表達(dá)。
[0101] 在一些實(shí)施例中，鑒別MYC降低劑的方法包含鑒別當(dāng)因子相關(guān)性細(xì)胞與必要的生 長(zhǎng)因子接觸時(shí)會(huì)降低所述因子相關(guān)性細(xì)胞的活力的試劑。在一些實(shí)施例中，鑒別MYC降低 劑的方法包含鑒別可抑制受MYC反應(yīng)性啟動(dòng)子（例如E盒序列）控制的報(bào)告基因的表達(dá)的 試劑。
[0102] 在一些實(shí)施例中，細(xì)胞活力降低至約1/2到約1/26(例如，與同一類型的相同或類 似的未調(diào)節(jié)細(xì)胞相比較）。在一些實(shí)施例中，細(xì)胞活力降低至約1/2到約1/21(例如，與同 一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)細(xì)胞相比較）。在一些實(shí)施例中，細(xì)胞活力降低至約1/2到約 1/16(例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)細(xì)胞相比較）。在一些實(shí)施例中，細(xì)胞活力 降低至約1/2到約1/11 (例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)細(xì)胞相比較）。在一些實(shí) 施例中，細(xì)胞活力降低至約1/2到約1/6(例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)細(xì)胞相 比較）。在一些實(shí)施例中，細(xì)胞活力降低至約1/2到約1/5(例如，與同一類型的相同或類似 的未調(diào)節(jié)細(xì)胞相比較）。在一些實(shí)施例中，細(xì)胞活力降低至約1/2到約1/3 (例如，與同一類 型的相同或類似的未調(diào)節(jié)細(xì)胞相比較）。
[0103] 在一些實(shí)施例中，細(xì)胞為T細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，所述T細(xì)胞為記憶性T細(xì)胞。 在某些情況下，下調(diào)MYC基因?qū)⒖s短T細(xì)胞的壽命。在某些情況下，記憶性T細(xì)胞的壽命縮 短將使體內(nèi)記憶性T細(xì)胞的濃度降低。在某些情況下，記憶性T細(xì)胞的濃度降低將使針對(duì) 抗原的初次免疫應(yīng)答減速、導(dǎo)致治療自體免疫性病癥和/或引起免疫抑制。在某些情況下， 下調(diào)MYC基因?qū)⑹篃o(wú)能T細(xì)胞增加。在某些情況下，無(wú)能T細(xì)胞增加將使針對(duì)抗原的初次 免疫應(yīng)答減速、導(dǎo)致治療自體免疫性病癥和/或引起免疫抑制。在某些情況下，下調(diào)MYC基 因?qū)⑹筎細(xì)胞應(yīng)答抗原而活化所耗費(fèi)的時(shí)間增加。在某些情況下，T細(xì)胞應(yīng)答抗原而活化 所耗費(fèi)的時(shí)間增加將使針對(duì)抗原的初次免疫應(yīng)答減速、導(dǎo)致治療自體免疫性病癥和/或引 起免疫抑制。
[0104] 調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的方法
[0105] 在某些實(shí)施例中，本文揭示一種調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的方法。在一些實(shí)施例中，免疫應(yīng)答 是適應(yīng)性免疫應(yīng)答（例如記憶性B細(xì)胞和記憶性T細(xì)胞）。在一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)免疫應(yīng) 答是指增加（例如誘導(dǎo)、補(bǔ)充、擴(kuò)大）免疫應(yīng)答。在一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答是指減少 (例如抑制或壓制）免疫應(yīng)答。在一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)是在體外發(fā)生。在一些實(shí)施例中，調(diào) 節(jié)是在體內(nèi)發(fā)生。
[0106] 在一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的方法包含調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞的活力。在一些實(shí)施例 中，淋巴細(xì)胞為T細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，所述T細(xì)胞為CD4+T細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，所 述T細(xì)胞為記憶性T細(xì)胞。
[0107] 在一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答包含調(diào)節(jié)MYC基因的表達(dá)和/或Myc多肽的活性。 在一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)MYC基因的表達(dá)和/或Myc多肽的活性將直接或間接調(diào)節(jié)受MYC調(diào) 控的基因或多肽。在一些實(shí)施例中，直接或間接受MYC轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控的基因或多肽是神經(jīng) 顆粒素、MEF-2c、gfi-1、細(xì)胞周期素 D2、CDK4、Egr-2、Nab-2、TGIF、NF-kB pl05、Carma-1、Al 或Bcl-2。
[0108] 在一些實(shí)施例中，所述個(gè)體為人。
[0109] 誘導(dǎo)免疫應(yīng)答
[0110] 在一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答是指增加（例如誘導(dǎo)、補(bǔ)充、擴(kuò)大）免疫應(yīng)答。在 一些實(shí)施例中，增加免疫應(yīng)答包括增加 T細(xì)胞壽命、增加 T細(xì)胞增殖速率、增加記憶性T細(xì) 胞應(yīng)答抗原的速率、降低無(wú)能細(xì)胞的數(shù)量，和/或增加細(xì)胞結(jié)束無(wú)能的速率（例如，與同一 類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)細(xì)胞相比較）。
[0111] 在一些實(shí)施例中，增加免疫應(yīng)答包含對(duì)有需要的個(gè)體投予增加 MYC的細(xì)胞核濃度 的試劑。在一些實(shí)施例中，增加免疫應(yīng)答包含對(duì)有需要的個(gè)體投予：外源性MYC、增加 MYC基 因表達(dá)的試劑和增加 MYC活性的試劑（"MYC增加劑"）。在一些實(shí)施例中，MYC增加劑是小 分子、生物試劑、肽、抗體或其組合。
[0112] 在一些實(shí)施例中，增加免疫應(yīng)答的方法包含使細(xì)胞與MYC增加劑接觸。在一些實(shí) 施例中，MYC增加劑是外源性Myc多肽。在一些實(shí)施例中，MYC增加劑是一種融合肽，其包含 (a)轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列；(b)MYC序列；和任選存在的（c) 一個(gè)或一個(gè)以上將所述轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列與所 述MYC序列相連接的分子。在一些實(shí)施例中，MYC增加劑是一種融合肽，其包含（a)TAT序 列和（b) MYC序列。
[0113] 在一些實(shí)施例中，增加免疫應(yīng)答的方法包含使細(xì)胞與MYC增加劑接觸。在一些實(shí) 施例中，MYC增加劑是MD-I基因的拮抗劑。在某些情況下，下調(diào)MD-I基因和/或多肽將 上調(diào)MYC基因和/或由MYC基因編碼的多肽的表達(dá)。
[0114] 在一些實(shí)施例中，增加免疫應(yīng)答的方法包含使細(xì)胞與MYC增加劑接觸。在一些實(shí) 施例中，MYC增加劑是Mxi-I基因的拮抗劑。在某些情況下，下調(diào)Mxi-I基因和/或多肽將 上調(diào)MYC基因和/或由MYC基因編碼的多肽的表達(dá)。
[0115] 在一些實(shí)施例中，在與MYC增加劑接觸后，免疫應(yīng)答增加超過(guò)1倍到約20倍（例 如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相比較）。在一些實(shí)施例中，在與MYC增加 劑接觸后，免疫應(yīng)答增加超過(guò)1倍到約15倍（例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)免 疫應(yīng)答相比較）。在一些實(shí)施例中，在與MYC增加劑接觸后，免疫應(yīng)答增加超過(guò)1倍到約10 倍（例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相比較）。在一些實(shí)施例中，在與MYC 增加劑接觸后，免疫應(yīng)答增加超過(guò)1倍到約5倍（例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié) 免疫應(yīng)答相比較）。在一些實(shí)施例中，在與MYC增加劑接觸后，免疫應(yīng)答增加超過(guò)1倍到約 4倍（例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相比較）。在一些實(shí)施例中，在與 MYC增加劑接觸后，免疫應(yīng)答增加超過(guò)1倍到約2倍（例如，與同一類型的相同或類似的未 調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相比較）。
[0116] 在一些實(shí)施例中，增加免疫應(yīng)答的方法包含對(duì)有需要的個(gè)體投予MYC增加劑。在 一些實(shí)施例中，在對(duì)有需要的個(gè)體投予MYC增加劑后，免疫應(yīng)答增加超過(guò)1倍到約10倍（例 如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相比較）。在一些實(shí)施例中，在對(duì)有需要的 個(gè)體投予MYC增加劑后，免疫應(yīng)答增加超過(guò)1倍到約20倍（例如，與同一類型的相同或類似 的未調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相比較）。在一些實(shí)施例中，在對(duì)有需要的個(gè)體投予MYC增加劑后，免疫 應(yīng)答增加超過(guò)1倍到約15倍（例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相比較）。 在一些實(shí)施例中，在對(duì)有需要的個(gè)體投予MYC增加劑后，免疫應(yīng)答增加超過(guò)1倍到約10倍 (例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相比較）。在一些實(shí)施例中，在對(duì)有需 要的個(gè)體投予MYC增加劑后，免疫應(yīng)答增加超過(guò)1倍到約5倍（例如，與同一類型的相同或 類似的未調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相比較）。在一些實(shí)施例中，在對(duì)有需要的個(gè)體投予MYC增加劑后， 免疫應(yīng)答增加超過(guò)1倍到約4倍（例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相比 較）。在一些實(shí)施例中，在對(duì)有需要的個(gè)體投予MYC增加劑后，免疫應(yīng)答增加超過(guò)1倍到約 2倍（例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相比較）。
[0117] 在一些實(shí)施例中，增加免疫應(yīng)答的方法進(jìn)一步包含共投予疫苗。在一些實(shí)施例中， 疫苗是在MYC增加劑之前、之后或與MYC增加劑同時(shí)投予。在一些實(shí)施例中，MYC增加劑刺 激免疫系統(tǒng)，并增加免疫系統(tǒng)對(duì)疫苗的應(yīng)答。在一些實(shí)施例中，MYC增加劑增強(qiáng)免疫應(yīng)答。 在一些實(shí)施例中，MYC增加劑與疫苗協(xié)同作用。在一些實(shí)施例中，所述試劑為疫苗佐劑。
[0118] 在一些實(shí)施例中，疫苗包含死亡微生物、減毒微生物、類毒素、病原體亞單位、核酸 或其組合。在一些實(shí)施例中，疫苗是針對(duì)以下的疫苗：甲型肝炎；乙型肝炎；脊髓灰質(zhì)炎； 麻疹；腮腺炎；風(fēng)疹；白喉；百日咳；破傷風(fēng)；流感；水痘帶狀皰疹病毒；輪狀病毒；流感；腦 膜炎球菌病癥；肺炎；天花；霍亂；黑死?。稽S熱?。唤Y(jié)核?。蝗巳轭^瘤病毒（HPV);瘧疾；利 什曼原蟲（Ieishmania);白色念珠菌（Candida albican);過(guò)敏原；或其組合。在一些實(shí) 施例中，疫苗是針對(duì)癌癥（例如濾泡性B細(xì)胞性非霍奇金氏淋巴瘤（Follicular B-cell Non-Hodgkin' s Lymphoma)、前列腺癌、多發(fā)性骨髓瘤、腎癌、皮膚黑色素瘤和眼黑色素 瘤）的疫苗。在一些實(shí)施例中，癌癥疫苗是患者特異性疫苗（例如，此疫苗包含患者自身 的腫瘤細(xì)胞）。在一些實(shí)施例中，癌癥疫苗包含前列腺特異性抗原（Prostate Specific Antigen，PSA)。在一些實(shí)施例中，癌癥疫苗包含唾液酸化Tn (STn)。在一些實(shí)施例中，癌 癥疫苗包含熱激蛋白（Heat Shock Protein，HSP)(例如gp96)。在一些實(shí)施例中，癌癥疫 苗包含神經(jīng)節(jié)苷脂分子（例如GM2、⑶2和⑶3)。在一些實(shí)施例中，癌癥疫苗包含癌胚抗 原（carcinoembryonic antigen, CEA)。在一些實(shí)施例中，癌癥疫苗包含MART-1 (也稱為 Melan-Α)。在一些實(shí)施例中，癌癥抗原包含酪氨酸酶。在一些實(shí)施例中，疫苗為DNA疫苗。
[0119] 在一些實(shí)施例中，疫苗包含抗原部分。在一些實(shí)施例中，抗原部分為類毒素、肽、核 酸序列、多糖或其組合。在一些實(shí)施例中，抗原部分來(lái)源于病原體，所述病原體選自：甲型 肝炎；乙型肝炎；脊髓灰質(zhì)炎；麻疹；腮腺炎；風(fēng)疹；白喉；百日咳；破傷風(fēng)；流感；水痘帶狀 皰疹病毒；輪狀病毒；腦膜炎球菌；肺炎；天花；霍亂；黑死病；黃熱病；結(jié)核??；人乳頭瘤病 毒；或其組合。在一些實(shí)施例中，抗原部分來(lái)源于贅生性細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，抗原部分 是核酸或核酸的聚合物。
[0120] 在一些實(shí)施例中，使接收針對(duì)某一抗原的疫苗接種的個(gè)體的免疫應(yīng)答增加將增加 針對(duì)所述抗原的記憶性T細(xì)胞、B細(xì)胞或其組合的活力（并由此增加其濃度）。在某些情況 下，使接收針對(duì)某一抗原的疫苗接種的個(gè)體的免疫應(yīng)答增加將加速所述抗原對(duì)T細(xì)胞的活 化。在某些情況下，使接收針對(duì)某一抗原的疫苗接種的個(gè)體的免疫應(yīng)答增加將減少無(wú)能T 細(xì)胞。
[0121] 在一些實(shí)施例中，增加免疫應(yīng)答的方法進(jìn)一步包含鑒別MYC增加劑。在一些實(shí)施 例中，鑒別MYC增加劑的方法包含鑒別可逆轉(zhuǎn)B細(xì)胞的無(wú)能的試劑。在一些實(shí)施例中，鑒別 MYC增加劑的方法包含鑒別可增加因子相關(guān)性細(xì)胞在無(wú)所需生長(zhǎng)因子存在下的活力的試 齊[J。在一些實(shí)施例中，鑒別MYC增加劑的方法包含鑒別可誘導(dǎo)受MYC反應(yīng)性啟動(dòng)子（例如 E盒序列）控制的報(bào)告基因的表達(dá)的試劑。
[0122] 減少免疫應(yīng)答
[0123] 在一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答是指減少（例如抑制或壓制）免疫應(yīng)答。在一些 實(shí)施例中，減少免疫應(yīng)答包括縮短T細(xì)胞壽命、減少T細(xì)胞的增殖、降低記憶性T細(xì)胞應(yīng)答 抗原的速率、增加無(wú)能細(xì)胞的數(shù)量，和/或降低細(xì)胞結(jié)束無(wú)能的速率（例如，與同一類型的 相同或類似的未調(diào)節(jié)細(xì)胞相比較）。
[0124] 在一些實(shí)施例中，減少免疫應(yīng)答包含對(duì)有需要的個(gè)體投予降低MYC的細(xì)胞核濃度 的試劑。在一些實(shí)施例中，減少免疫應(yīng)答包含對(duì)有需要的個(gè)體投予：降低MYC基因表達(dá)的試 劑和降低Myc多肽活性的試劑（"MYC降低劑"）。在一些實(shí)施例中，MYC降低劑是小分子、 生物試劑、肽、抗體或其組合。
[0125] 在一些實(shí)施例中，減少免疫應(yīng)答的方法包含使細(xì)胞與MYC降低劑接觸。在一些實(shí) 施例中，MYC降低劑為：MAD-I基因和MAD-I多肽的激動(dòng)劑或其組合。在某些情況下，上調(diào) MD-I基因和/或多肽將下調(diào)MYC基因和/或由MYC基因編碼的多肽的表達(dá)。
[0126] 在一些實(shí)施例中，減少免疫應(yīng)答的方法包含使細(xì)胞與MYC降低劑接觸。在一些實(shí) 施例中，MYC降低劑為：Mxi-I基因和Mxi-I多肽的激動(dòng)劑，或其組合。在某些情況下，上調(diào) Mxi-I基因和/或多肽將下調(diào)MYC基因和/或由MYC基因編碼的多肽的表達(dá)。
[0127] 在一些實(shí)施例中，在與MYC降低劑接觸后，免疫應(yīng)答降低至小于1/2到約1/26(例 如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相比較）。在一些實(shí)施例中，在與MYC降低 劑接觸后，免疫應(yīng)答降低至小于1/2到約1/21 (例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)免 疫應(yīng)答相比較）。在一些實(shí)施例中，在與MYC降低劑接觸后，免疫應(yīng)答降低至小于1/2到約 1/16(例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相比較）。在一些實(shí)施例中，在與 MYC降低劑接觸后，免疫應(yīng)答降低至小于1/2到約1/11 (例如，與同一類型的相同或類似的 未調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相比較）。在一些實(shí)施例中，在與MYC降低劑接觸后，免疫應(yīng)答降低至小于 1/2到約1/6 (例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相比較）。在一些實(shí)施例 中，在與MYC降低劑接觸后，免疫應(yīng)答降低至小于1/2到約1/5 (例如，與同一類型的相同或 類似的未調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相比較）。在一些實(shí)施例中，在與MYC降低劑接觸后，免疫應(yīng)答降低 至小于1/2到約1/3 (例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相比較）。
[0128] 在一些實(shí)施例中，減少免疫應(yīng)答的方法包含對(duì)有需要的個(gè)體投予MYC降低劑。 在一些實(shí)施例中，在對(duì)有需要的個(gè)體投予MYC降低劑后，免疫應(yīng)答降低至小于1/2到約 1/26(例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相比較）。在一些實(shí)施例中，在對(duì) 有需要的個(gè)體投予MYC降低劑后，免疫應(yīng)答降低至小于1/2到約1/21 (例如，與同一類型的 相同或類似的未調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相比較）。在一些實(shí)施例中，在對(duì)有需要的個(gè)體投予MYC降低 劑后，免疫應(yīng)答降低至小于1/2到約1/16 (例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)免疫應(yīng) 答相比較）。在一些實(shí)施例中，在對(duì)有需要的個(gè)體投予MYC降低劑后，免疫應(yīng)答降低至小于 1/2到約1/11 (例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相比較）。在一些實(shí)施例 中，在對(duì)有需要的個(gè)體投予MYC降低劑后，免疫應(yīng)答降低至小于1/2到約1/6 (例如，與同一 類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相比較）。在一些實(shí)施例中，在對(duì)有需要的個(gè)體投予 MYC降低劑后，免疫應(yīng)答降低至小于1/2到約1/5 (例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié) 免疫應(yīng)答相比較）。在一些實(shí)施例中，在對(duì)有需要的個(gè)體投予MYC降低劑后，免疫應(yīng)答降低 至小于1/2到約1/3 (例如，與同一類型的相同或類似的未調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答相比較）。
[0129] 在一些實(shí)施例中，減少免疫應(yīng)答的方法包含對(duì)患有自體免疫性病癥的個(gè)體投予 MYC降低劑。在一些實(shí)施例中，MYC降低劑減少免疫應(yīng)答。在某些情況下，減少患有自體 免疫性病癥的個(gè)體的免疫應(yīng)答將改善和/或防止個(gè)體的免疫系統(tǒng)針對(duì)自身抗原產(chǎn)生免疫 應(yīng)答。在一些實(shí)施例中，自體免疫性病癥為卡斯曼氏癥（Castleman' s Disorder)、狼瘡、 多發(fā)性硬化、硬皮病色素沉著（scleroderma pigmentosa)、自體免疫性淋巴細(xì)胞增生綜合 癥（Autoimmune Lymphoproliferative Syndrome, ALPS)、重癥肌無(wú)力、糖尿病、哮喘、類 風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、白癜風(fēng)、狄喬治氏綜合癥（diGeorge' s syndrome)、格雷氏癥（Grave' s disorder)、克隆氏癥（Crohn' s disorder)、發(fā)炎性腸病、結(jié)腸炎、睪丸炎、硬皮病色素 沉著、葡萄膜炎、移植后淋巴細(xì)胞增生性病癥（Po st-Transp I ant Lymphopro I i f erat i ve Disorder，PTLD)或自體免疫性病癥相關(guān)性淋巴結(jié)病變（Autoimmune Disorder-Associated Lymphadenopathy, ADAL)〇
[0130] 在一些實(shí)施例中，減少免疫應(yīng)答的方法包含對(duì)正接收、將接收或已經(jīng)接收器官或 骨髓移植（"移植物"）的個(gè)體投予MYC降低劑。在一些實(shí)施例中，MYC降低劑減少免疫應(yīng) 答。在某些情況下，減少正接收、將接收或已經(jīng)接收器官移植或骨髓移植的個(gè)體的免疫應(yīng)答 將改善和/或防止針對(duì)移植物的免疫應(yīng)答。
[0131] 在一些實(shí)施例中，鑒別MYC降低劑的方法包含鑒別當(dāng)因子相關(guān)性細(xì)胞與必要的生 長(zhǎng)因子接觸時(shí)會(huì)降低所述因子相關(guān)性細(xì)胞的活力的試劑。在一些實(shí)施例中，鑒別MYC降低 劑的方法包含鑒別可抑制受MYC反應(yīng)性啟動(dòng)子（例如E盒序列）控制的報(bào)告基因的表達(dá)的 試劑。
[0132] 調(diào)節(jié)以異常MYC某閔表汰或異常MYC多狀活件為特征的病癥的方法
[0133] 在某些實(shí)施例中，本文揭示治療以MYC過(guò)度表達(dá)或Myc多肽活性過(guò)高為特征的病 癥的方法。在某些實(shí)施例中，本文還揭示治療以MYC表達(dá)不足或Myc多肽活性缺乏為特征 的病癥的方法。在一些實(shí)施例中，所述方法包含對(duì)有需要的個(gè)體投予有效量的調(diào)節(jié)MYC基 因表達(dá)和/或Myc多肽活性的試劑。
[0134] 在某些實(shí)施例中，本文揭示治療以MYC表達(dá)不足或Myc多肽活性缺乏為特征的病 癥的方法。在一些實(shí)施例中，所述方法包含對(duì)有需要的個(gè)體投予有效量的MYC增加劑。在 一些實(shí)施例中，MYC增加劑是小分子、生物試劑、肽、抗體或其組合。
[0135] 在一些實(shí)施例中，所述方法包含對(duì)有需要的個(gè)體投予有效量的MYC增加劑。在一 些實(shí)施例中，MYC增加劑是外源性Myc多肽。在一些實(shí)施例中，MYC增加劑是一種融合肽， 其包含（a)轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列；(b)MYC序列；和任選存在的（c) 一個(gè)或一個(gè)以上將所述轉(zhuǎn)運(yùn)肽序 列與所述MYC序列相連接的分子。在一些實(shí)施例中，MYC增加劑是一種融合肽，其包含（a) TAT序列和（b)MYC序列。
[0136] 在一些實(shí)施例中，所述方法包含對(duì)有需要的個(gè)體投予有效量的MYC增加劑。在一 些實(shí)施例中，MYC增加劑是MD-I基因的拮抗劑。在某些情況下，下調(diào)MD-I基因和/或多 肽將上調(diào)MYC基因和/或由MYC基因編碼的多肽的表達(dá)。
[0137] 在一些實(shí)施例中，所述方法包含對(duì)有需要的個(gè)體投予有效量的MYC增加劑。在一 些實(shí)施例中，MYC增加劑是Mxi-I基因的拮抗劑。在某些情況下，下調(diào)Mxi-I基因和/或多 肽將上調(diào)MYC基因和/或由MYC基因編碼的多肽的表達(dá)。
[0138] 在某些實(shí)施例中，本文揭示治療以MYC過(guò)度表達(dá)或Myc多肽活性過(guò)高為特征的病 癥的方法。在一些實(shí)施例中，所述方法包含對(duì)有需要的個(gè)體投予有效量的MYC降低劑。在 一些實(shí)施例中，MYC降低劑是小分子、生物試劑、肽、抗體或其組合。
[0139] 在一些實(shí)施例中，所述方法包含對(duì)有需要的個(gè)體投予有效量的MYC降低劑。在一 些實(shí)施例中，MYC降低劑為：MAD-I基因和MAD-I多肽的激動(dòng)劑或其組合。在某些情況下，上 調(diào)MD-I基因和/或多肽將下調(diào)MYC基因和/或由MYC基因編碼的多肽的表達(dá)。
[0140] 在一些實(shí)施例中，所述方法包含對(duì)有需要的個(gè)體投予有效量的MYC降低劑。在一 些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)細(xì)胞活力的方法包含使細(xì)胞與MYC降低劑接觸。在一些實(shí)施例中，MYC降 低劑為=Mxi-I基因和Mxi-I多肽的激動(dòng)劑，或其組合。在某些情況下，上調(diào)Mxi-I基因和/ 或多肽將下調(diào)MYC基因和/或由MYC基因編碼的多肽的表達(dá)。
[0141] 在一些實(shí)施例中，個(gè)體過(guò)度表達(dá)MYC或Myc多肽活性過(guò)高的指征是發(fā)展自體免疫 性病癥。在一些實(shí)施例中，自體免疫性病癥為卡斯曼氏癥、狼瘡、多發(fā)性硬化、硬皮病色素沉 著、自體免疫性淋巴細(xì)胞增生綜合癥（ALPS)、重癥肌無(wú)力、糖尿病、哮喘、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、 白癜風(fēng)、狄喬治氏綜合癥、格雷氏病、克隆氏病、發(fā)炎性腸病、結(jié)腸炎、睪丸炎、硬皮病色素沉 著、葡萄膜炎、移植后淋巴細(xì)胞增生性病癥（PTLD)或自體免疫性疾病相關(guān)性淋巴結(jié)病變 (ADAL)、器官移植物排斥、組織移植物排斥或其組合。
[0142] 在一些實(shí)施例中，個(gè)體表達(dá)MYC不足或Myc多肽活性極低或無(wú)活性的指征是無(wú)能B 細(xì)胞和/或T細(xì)胞數(shù)量增加。在某些情況下，無(wú)能B細(xì)胞中IgM、IgMa、IgMb、B220XD21/35、 CD23、CD24(HSA)、CD40、CD69、CD80和/或CD86(B7-2)的表達(dá)相比非無(wú)能B細(xì)胞有所下調(diào)。 在某些情況下，逆轉(zhuǎn)（例如部分或完全）無(wú)能將使IgM、IgMa、IgMb、B220、⑶21/35、⑶23、 CD24 (HSA)、CD40、CD69、CD80 和 / 或 CD86 (B7-2)的表達(dá)增加。
[0143] 在一些實(shí)施例中，治療以MYC基因表達(dá)異?；騇yc多肽活性異常為特征的病癥的 方法包含鑒別可逆轉(zhuǎn)B細(xì)胞的無(wú)能的試劑。在一些實(shí)施例中，治療以MYC基因表達(dá)異?；?Myc多肽活性異常為特征的病癥的方法包含鑒別可增加因子相關(guān)性細(xì)胞在無(wú)所需生長(zhǎng)因子 存在下的活力的試劑。在一些實(shí)施例中，治療以MYC基因表達(dá)異常或Myc多肽活性異常為 特征的病癥的方法包含鑒別當(dāng)因子相關(guān)性細(xì)胞與必要的生長(zhǎng)因子接觸時(shí)會(huì)降低所述因子 相關(guān)性細(xì)胞的活力的試劑。在一些實(shí)施例中，治療以MYC基因表達(dá)異常或Myc多肽活性異 常為特征的病癥的方法包含鑒別可誘導(dǎo)受MYC反應(yīng)性啟動(dòng)子（例如E盒序列）控制的報(bào)告 基因的表達(dá)的試劑。在一些實(shí)施例中，治療以MYC基因表達(dá)異?；騇yc多肽活性異常為特 征的病癥的方法包含鑒別可抑制受MYC反應(yīng)性啟動(dòng)子（例如E盒序列）控制的報(bào)告基因的 表達(dá)的試劑。
[0144] 外源件MYC
[0145] 在一些實(shí)施例中，本文揭示一種融合肽，其包含（a)轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列和（b)MYC序列。在 一些實(shí)施例中，所述融合肽是式（I)的肽：
[0146] 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-MYC序列。
[0147] 在一些實(shí)施例中，本文揭示的融合肽包含（a)轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列；(b)MYC序列；和（c) 一 個(gè)或一個(gè)以上將所述轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列與所述MYC序列相連接的分子。在一些實(shí)施例中，所述融 合肽是式（II)的肽：
[0148] 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-X-MYC序列，
[0149] 其中-X-是將轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列與MYC序列相連接的分子。在一些實(shí)施例中，-X-為氨 基酸。在一些實(shí)施例中，-X-為至少一個(gè)氨基酸。
[0150] 本文使用的"轉(zhuǎn)運(yùn)肽"是指促進(jìn)肽透入細(xì)胞和組織中的肽序列。在一些實(shí)施例中， 轉(zhuǎn)運(yùn)肽是TAT。在一些實(shí)施例中，轉(zhuǎn)運(yùn)肽是TAT [48_57]。在一些實(shí)施例中，轉(zhuǎn)運(yùn)肽是TAT[57_48]。]
[0151] 本文使用的"MYC序列"是MYC氨基酸肽序列。在一些實(shí)施例中，Myc多肽是完整 的Myc多肽序列。在一些實(shí)施例中，Myc多肽是部分的Myc多肽序列。在一些實(shí)施例中，MYC 為c-MYC。在一些實(shí)施例中，Myc多肽序列包含SEQ ID NO. 1 :
[0152] MDFFRVVENQQPPATMPLNVSFTNRNYDLDYDSVQPYFYCDEEENF
[0153] YQQQQQSELQPPAPSEDIWKKFELLPTPPLSPSRRSGLCSPSYVAVTP
[0154] FSLRGDNDGGGGSFSTADQLEMVTELLGGDMVNQSFICDPDDETFIK
[0155] NIIIQDCMWSGFSAAAKLVSEKLASYQAARKDSGSPNPARGHSVCST
[0156] SSLYLQDLSAAASECIDPSVVFPYPLNDSSSPKSCASQDSSAFSPSSDS
[0157] LLSSTESSPQGSPEPLVLHEETPPTTSSDSEEEQEDEEEIDVVSVEKRQ
[0158] APGKRSESGSPSAGGHSKPPHSPLVLKRCHVSTHQHNYAAPPSTRKD
[0159] YPAAKRVKLDSVRVLRQISNNRKCTSPRSSDTEENVKRRTHNVLERQ
[0160] RRNELKRSFFALRDQIPELENNEKAPKVVILKKATAYILSVQAEEQKL
[0161] ISEEDLLRKRREQLKHKLEQLRKGELNSKLE。
[0162] 在一些實(shí)施例中，本文揭示的融合肽包含（a) TAT和（b)c-MYC。在一些實(shí)施例中， 本文揭示的融合肽包含（3)1八1'[48_57]和（b)c-MYC。在一些實(shí)施例中，本文揭示的融合肽包 含（a)TAT[ 57_48]和（b)c-MYC。
[0163] 在一些實(shí)施例中，本文揭示的融合肽包含（a) TAT、（b)連接子氨基酸和（c) c-MYC。 在一些實(shí)施例中，本文揭示的融合肽包含（a)TAT[48_57]、（b)連接子氨基酸和（c)c-MYC。在 一些實(shí)施例中，本文揭示的融合肽包含（a)TAT [57_48]、（b)連接子氨基酸和（c)c-MYC。
[0164] 在一些實(shí)施例中，本文揭示的融合肽進(jìn)一步包含至少一個(gè)便利于融合蛋白的純化 的氨基酸序列。在一些實(shí)施例中，本文揭示的融合肽包含蛋白質(zhì)標(biāo)簽。在一些實(shí)施例中，本 文揭示的融合肽包含多聚組氨酸標(biāo)簽。在一些實(shí)施例中，本文揭示的融合肽包含表位標(biāo)簽。 在一些實(shí)施例中，本文揭不的融合肽包含多聚組氨酸標(biāo)簽和表位標(biāo)簽。在一些實(shí)施例中，本 文揭示的融合肽包含6個(gè)組氨酸的標(biāo)簽（SEQ ID NO :3)和V5表位標(biāo)簽。
[0165] 在一些實(shí)施例中，組氨酸標(biāo)簽是6個(gè)組氨酸的標(biāo)簽（SEQ ID NO :3)。在一些實(shí)施例 中，組氨酸標(biāo)簽包含序列HHHHHH (SEQ ID NO :3)。在一些實(shí)施例中，組氨酸標(biāo)簽是借助任何 適合的方法添加到本文揭示的融合蛋白中。在一些實(shí)施例中，將TAT-Myc多肽序列克隆到 編碼多聚組氨酸標(biāo)簽的表達(dá)載體中。在一些實(shí)施例中，借助PCR添加多聚組氨酸標(biāo)簽（即， PCR引物包含多聚組氨酸序列）。
[0166] 在一些實(shí)施例中，本文揭示的融合肽進(jìn)一步包含至少一個(gè)蛋白質(zhì)標(biāo)簽。在一些實(shí) 施例中，本文揭示的融合肽包含表位標(biāo)簽。在一些實(shí)施例中，本文揭示的融合肽進(jìn)一步包含 V5表位標(biāo)簽。在一些實(shí)施例中，V5標(biāo)簽包含氨基酸：GKPIPNPLLGLDST(SEQ ID N0:4)。在 一些實(shí)施例中，V5標(biāo)簽包含氨基酸：IPNPLLGLD(SEQ ID NO :5)。在一些實(shí)施例中，V5標(biāo)簽 是借助任何適合的方法添加到本文揭示的融合蛋白中。在一些實(shí)施例中，將TAT-Myc多肽 序列克隆到編碼V5標(biāo)簽的表達(dá)載體中。在一些實(shí)施例中，借助PCR添加 V5標(biāo)簽（S卩，PCR 引物包含V5序列）。
[0167] 在一些實(shí)施例中，氨基酸為D型。在一些實(shí)施例中，氨基酸為L(zhǎng)型。在一些實(shí)施例 中，第一組多個(gè)氨基酸為D型，而第二組多個(gè)為L(zhǎng)型。
[0168] 在一些實(shí)施例中，MYC增加劑包含SEQ ID NO. 2 :
[0169] MRKKRRQRRRMDFFRVVENQQPPATMPLNVSFTNRNYDLDYDSVQ
[0170] PYFYCDEEENFYQQQQQSELQPPAPSEDIWKKFELLPTPPLSPSRRSG
[0171] LCSPSYVAVTPFSLRGDNDGGGGSFSTADQLEMVTELLGGDMVNQS
[0172] FICDPDDETFIKNIIIQDCMWSGFSAAAKLVSEKLASYQAARKDSGSP
[0173] NPARGHSVCSTSSLYLQDLSAAASECIDPSVVFPYPLNDSSSPKSCAS
[0174] QDSSAFSPSSDSLLSSTESSPQGSPEPLVLHEETPPTTSSDSEEEQEDEE
[0175] EIDVVSVEKRQAPGKRSESGSPSAGGHSKPPHSPLVLKRCHVSTHQH
[0176] NYAAPPSTRKDYPAAKRVKLDSVRVLRQISNNRKCTSPRSSDTEENV
[0177] KRRTHNVLERQRRNELKRSFFALRDQIPELENNEKAPKVVILKKATA
[0178] YILSVQAEEQKLISEEDLLRKRREQLKHKLEQLRKGELNSKLEGKPIP
[0179] NPLLGLDSTRTGHHHHHH。
[0180] 構(gòu)建 MYC-TAT 肽
[0181] 在一些實(shí)施例中，本文揭示的MYC-TAT融合肽是借助任何適合的方法構(gòu)建。在 一些實(shí)施例中，編碼MYC-TAT融合肽的核苷酸序列是借助PCR產(chǎn)生。在一些實(shí)施例中，人 MYC序列的正向引物包含TAT蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的同框N末端9個(gè)氨基酸的序列（即， RKKRRQRRR(SEQ ID NO :6))。在一些實(shí)施例中，設(shè)計(jì)的人MYC序列的反向引物去除了終止密 碼子。在一些實(shí)施例中，將PCR產(chǎn)物克隆到任何適合的表達(dá)載體（下文中p-TAT-MYC)中。 在一些實(shí)施例中，表達(dá)載體包含多聚組氨酸標(biāo)簽和V5標(biāo)簽。
[0182] 鑒別試劑的分析法
[0183] 無(wú)能的逆轉(zhuǎn)
[0184] 在某些實(shí)施例中，本文揭示一種鑒別可逆轉(zhuǎn)B細(xì)胞的無(wú)能的試劑的方法。在某些 情況下，逆轉(zhuǎn)B細(xì)胞的無(wú)能的試劑可增加免疫應(yīng)答和/或增加細(xì)胞活力。在某些情況下，逆 轉(zhuǎn)B細(xì)胞的無(wú)能的試劑可上調(diào)MYC (例如MYC基因和/或Myc多肽）。
[0185] 在一些實(shí)施例中，鑒別可逆轉(zhuǎn)B細(xì)胞的無(wú)能的試劑的方法包含（a)使多個(gè)無(wú)能B 細(xì)胞與一種試劑接觸；(b)在使所述多個(gè)細(xì)胞與所述試劑接觸后，檢測(cè)和/或測(cè)量細(xì)胞培養(yǎng) 物中一個(gè)或一個(gè)以上細(xì)胞表面標(biāo)記（例如指示非無(wú)能細(xì)胞的存在的細(xì)胞表面標(biāo)記）的表達(dá) 量。在一些實(shí)施例中，細(xì)胞表面標(biāo)記為 IgM、IgMa、IgMb、B220、CD21/35、CD23、CD24(HSA)、 CD40、CD69、CD80 和 / 或 CD86 (B7-2)。
[0186] 在某些情況下，無(wú)能 B 細(xì)胞中 IgM、IgMa、IgMb、B220、CD21/35、CD23、CD24(HSA)、 ⑶40、⑶69、⑶80和/或⑶86 (B7-2)的表達(dá)相比非無(wú)能B細(xì)胞有所下調(diào)。在某些情況下，逆 轉(zhuǎn)（例如部分或完全）無(wú)能將使 IgM、IgMa、IgMb、B220、CD21/35、CD23、CD24 (HSA)、CD40、 CD69、CD80和/或CD86 (B7-2)的表達(dá)增加。
[0187] 在一些實(shí)施例中，鑒別可逆轉(zhuǎn)B細(xì)胞的無(wú)能的試劑的方法包含在細(xì)胞表面標(biāo)記的 表達(dá)上調(diào)（例如與未接觸試劑的無(wú)能B細(xì)胞相比較）時(shí)將試劑鑒別為免疫應(yīng)答激動(dòng)劑。在 一些實(shí)施例中，在活化的B細(xì)胞上，細(xì)胞表面標(biāo)記的表達(dá)上調(diào)（當(dāng)與無(wú)能B細(xì)胞上的表達(dá)模 式相比較時(shí)）約 10% 到約 100% (例如至少 10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、 50 %,55 %,60 %,65 %,70 %,75 %,80 %,85 %,86 %,87 %,88 %,90 %,91 %,92 %,94 %, 95%、96%、97%、98%，或者約10%到約100%內(nèi)的任何其它百分比）。在一些實(shí)施例中， 在活化的B細(xì)胞上，細(xì)胞表面標(biāo)記的表達(dá)上調(diào)（當(dāng)與無(wú)能B細(xì)胞上的表達(dá)模式相比較時(shí)） 約30%到約100%(例如至少30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、 80%、85%、86%、87%、88%、90%、91%、92%、94%、95%、96%、97%、98%，或者約 30% 到 約100%內(nèi)的任何其它百分比）。在一些實(shí)施例中，在活化的B細(xì)胞上，細(xì)胞表面標(biāo)記的表 達(dá)上調(diào)（當(dāng)與無(wú)能B細(xì)胞上的表達(dá)模式相比較時(shí)）約50%到約100% (例如至少50%、 55 %,60 %,65 %,70 %,75 %,80 %,85 %,86 %,87 %,88 %,90 %,91 %,92 %,94 %,95 %, 96%、97%、98%，或者約50%到約100%內(nèi)的任何其它百分比）。在一些實(shí)施例中，在活化 的B細(xì)胞上，細(xì)胞表面標(biāo)記的表達(dá)上調(diào)（當(dāng)與無(wú)能B細(xì)胞上的表達(dá)模式相比較時(shí)）約70 %到 約 100% (例如至少 70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、90%、91%、92%、94%、95%、 96%、97%、98%，或者約70%到約100%內(nèi)的任何其它百分比）。在一些實(shí)施例中，在活化 的B細(xì)胞上，細(xì)胞表面標(biāo)記的表達(dá)上調(diào)（當(dāng)與無(wú)能B細(xì)胞上的表達(dá)模式相比較時(shí)）約80 %到 約 100% (例如至少 80%、85%、86%、87%、88%、90%、91%、92%、94%、95%、96%、97%、 98 %，或者約80 %到約100 %內(nèi)的任何其它百分比）。
[0188] 在一些實(shí)施例中，鑒別可逆轉(zhuǎn)B細(xì)胞的無(wú)能的試劑的方法包含在細(xì)胞表面標(biāo)記的 表達(dá)下調(diào)（例如與未接觸試劑的非無(wú)能B細(xì)胞相比較）時(shí)將試劑鑒別為免疫應(yīng)答拮抗劑。 在一些實(shí)施例中，細(xì)胞表面標(biāo)記的表達(dá)下調(diào)（例如，如與未接觸試劑的非無(wú)能B細(xì)胞相比 較）約10%到約100%(例如至少10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、 55 %,60 %,65 %,70 %,75 %,80 %,85 %,86 %,87 %,88 %,90 %,91 %,92 %,94 %,95 %, 96%、97%、98%，或者約10%到約100%內(nèi)的任何其它百分比）。在一些實(shí)施例中，細(xì)胞表 面標(biāo)記的表達(dá)下調(diào)（例如，如與未接觸試劑的非無(wú)能B細(xì)胞相比較）約30%到約100% (例 如至少 30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、86%、87%、 88%、90%、91%、92%、94%、95%、96%、97%、98%，或者約30%到約100%內(nèi)的任何其它 百分比）。在一些實(shí)施例中，細(xì)胞表面標(biāo)記的表達(dá)下調(diào)（例如，如與未接觸試劑的非無(wú)能B 細(xì)胞相比較）約 50% 到約 100% (例如至少 50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、 86%、87%、88%、90%、91%、92%、94%、95%、96%、97%、98%，或者約50%到約100%內(nèi) 的任何其它百分比）。在一些實(shí)施例中，細(xì)胞表面標(biāo)記的表達(dá)下調(diào)（例如，如與未接觸試劑 的非無(wú)能B細(xì)胞相比較）約70%到約100% (例如至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、 88%、90%、91%、92%、94%、95%、96%、97%、98%，或者約70%到約100%內(nèi)的任何其它 百分比）。在一些實(shí)施例中，細(xì)胞表面標(biāo)記的表達(dá)下調(diào)（例如，如與未接觸試劑的非無(wú)能B 細(xì)胞相比較）約80%到約100%(例如至少80%、85%、86%、87%、88%、90%、91%、92%、 94%、95 %、96 %、97 %、98 %，或者約80 %到約100 %內(nèi)的任何其它百分比）。
[0189] 在一些實(shí)施例中，鑒別可逆轉(zhuǎn)B細(xì)胞的無(wú)能的試劑的方法進(jìn)一步包含比較以下兩 者：（1)在多個(gè)無(wú)能B細(xì)胞與試劑接觸后于所述多個(gè)細(xì)胞中觀察到的細(xì)胞表面標(biāo)記的表達(dá) 量；與（2)在對(duì)照組中觀察到的細(xì)胞表面標(biāo)記的表達(dá)量。在一些實(shí)施例中，所述對(duì)照組是多 個(gè)未與試劑接觸的無(wú)能B細(xì)胞。
[0190] 在一些實(shí)施例中，鑒別可逆轉(zhuǎn)B細(xì)胞的無(wú)能的試劑的方法包含從任何適合的來(lái)源 (例如人、小鼠、大鼠或任何哺乳動(dòng)物）獲得無(wú)能B細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，鑒別可逆轉(zhuǎn)B 細(xì)胞的無(wú)能的試劑的方法包含從具有表型BCRheVsHEL的轉(zhuǎn)基因小鼠獲得無(wú)能B細(xì)胞。在 某些情況下，BCRi小鼠表達(dá)抗原雞卵溶菌酶（HEL)的成熟B細(xì)胞受體（BCR)。在某些情況 下，HEL BCR是轉(zhuǎn)基因小鼠的B細(xì)胞上的顯性BCR。在某些情況下，sHEL小鼠普遍表達(dá)關(guān)于 可溶形式的HEL的轉(zhuǎn)基因。在某些情況下，HEL轉(zhuǎn)基因的表達(dá)與金屬硫蛋白啟動(dòng)子可操作 地相關(guān)。在某些情況下，暴露于可溶性HEL將誘導(dǎo)B細(xì)胞的無(wú)能。美國(guó)專利申請(qǐng)公開案第 2008/0070256號(hào)中有關(guān)構(gòu)建上文所論述的鼠類模型的方法按引用并入本文中。在一些實(shí)施 例中，無(wú)能B細(xì)胞是從轉(zhuǎn)基因小鼠的脾、胸腺、骨髓、淋巴結(jié)或其組合得到。
[0191] 在一些實(shí)施例中，鑒別可逆轉(zhuǎn)B細(xì)胞的無(wú)能的試劑的方法包含檢測(cè)和/或測(cè)量一 個(gè)或一個(gè)以上細(xì)胞表面標(biāo)記（例如CD86)的表達(dá)量。在一些實(shí)施例中，檢測(cè)和/或測(cè)量一 個(gè)或一個(gè)以上細(xì)胞表面標(biāo)記的表達(dá)量包含（a)使多個(gè)無(wú)能B細(xì)胞（例如對(duì)照組,或與試劑 接觸后的多個(gè)無(wú)能B細(xì)胞）與針對(duì)細(xì)胞表面標(biāo)記的抗體（例如針對(duì)CD86的抗體）接觸； (b)在細(xì)胞培養(yǎng)物與抗體接觸后，用緩沖液（例如FACS緩沖液）洗滌細(xì)胞培養(yǎng)物（例如沖 洗）；和（c)檢測(cè)和/或測(cè)量抗體/細(xì)胞表面標(biāo)記復(fù)合物的量。在一些實(shí)施例中，抗體購(gòu)自 商業(yè)供應(yīng)商。在一些實(shí)施例中，抗體是在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部產(chǎn)生的。有關(guān)產(chǎn)生抗體的方法，參看 科勒（Kohler)等人，自然（Nature)，256 :495(1975);美國(guó)專利第4, 816, 567號(hào)；或古德林 (Goding)，單克隆抗體：原理和實(shí)踐（Monoclonal Antibodies !Principles and Practice) (學(xué)術(shù)出版社（Academic Press) ,1986);伍德（Ward)等人，自然，341 :544-546(1989);胡 斯（Huse)等人，科學(xué)（Science)246 :1275-1281(1989);邁克卡夫提（McCafferty)等人， 自然，348 :552-554(1990);卡拉克森（Clackson)等人，自然，352 :624-628(1991);馬克斯 (Marks)等人，分子生物學(xué)雜志（J. Mol. Biol.)，222 :581-597 (1991)，所有這些文獻(xiàn)都按引 用并入本文中。在一些實(shí)施例中，在細(xì)胞培養(yǎng)物與抗體接觸期間，在冰上培育細(xì)胞培養(yǎng)物。 在一些實(shí)施例中，抗體經(jīng)同位素標(biāo)記、放射性標(biāo)記、突光團(tuán)標(biāo)記或生物素化。在一些實(shí)施例 中，突光團(tuán)為突光素（fluorescein)。在某些情況下，可用任何適合的方式（例如HPLC、突 光顯微鏡技術(shù)、共聚焦顯微鏡技術(shù)、微陣列掃描儀、表面等離子體共振、紅外光譜法或放射 自顯影技術(shù)）檢測(cè)和/或測(cè)量細(xì)胞表面標(biāo)記/抗體復(fù)合物。
[0192] 在一些實(shí)施例中，鑒別可逆轉(zhuǎn)B細(xì)胞的無(wú)能的試劑的方法包含檢測(cè)和/或測(cè)量IgM 的表達(dá)量。在一些實(shí)施例中，檢測(cè)和/或測(cè)量IgM的表達(dá)量包含（a)使細(xì)胞培養(yǎng)物（例如 對(duì)照組，或與試劑接觸后的多個(gè)無(wú)能B細(xì)胞）與抗原（例如HEL)接觸一段足以使抗原結(jié)合 于IgM的時(shí)間；(b)在培養(yǎng)物與抗原接觸后，用緩沖液（例如FACS緩沖液）洗滌細(xì)胞培養(yǎng) 物（例如沖洗）；和（c)檢測(cè)和/或測(cè)量抗原和/或抗原/IgM復(fù)合物的量。在一些實(shí)施例 中，抗原經(jīng)生物素化。在一些實(shí)施例中，將細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)一步與對(duì)生物素具有親和力的標(biāo)記 ("生物素標(biāo)記"）一起培育。在一些實(shí)施例中，生物素標(biāo)記是抗生物素蛋白或抗生物素蛋白 鏈菌素。在一些實(shí)施例中，生物素標(biāo)記經(jīng)同位素標(biāo)記、放射性標(biāo)記、熒光團(tuán)標(biāo)記。在一些實(shí)施 例中，熒光團(tuán)為藻紅蛋白。在某些情況下，可用任何適合的方式（例如HPLC、熒光顯微鏡技 術(shù)、共聚焦顯微鏡技術(shù)、微陣列掃描儀、表面等離子體共振、紅外光譜法或放射自顯影技術(shù)） 檢測(cè)和/或測(cè)量IgM/抗原/生物素標(biāo)記復(fù)合物。
[0193] 在一些實(shí)施例中，鑒別可逆轉(zhuǎn)B細(xì)胞的無(wú)能的試劑的方法包含檢測(cè)和/或測(cè)量IgM 的表達(dá)量。在一些實(shí)施例中，檢測(cè)和/或測(cè)量IgM的表達(dá)量包含（a)使細(xì)胞培養(yǎng)物（例如 對(duì)照組，或與試劑接觸后的多個(gè)無(wú)能B細(xì)胞）與抗原（例如HEL)接觸一段足以使抗原結(jié)合 于IgM的時(shí)間；(b)在培養(yǎng)物與抗原接觸后，用緩沖液（例如FACS緩沖液）洗滌細(xì)胞培養(yǎng)物 (例如沖洗）；和（c)檢測(cè)和/或測(cè)量抗原和/或抗原/IgM復(fù)合物的量。在一些實(shí)施例中， 使培養(yǎng)物與針對(duì)所述抗原的抗體的稀釋液接觸（例如，持續(xù)一段足以使抗體結(jié)合于所述抗 原的時(shí)間）。在一些實(shí)施例中，在細(xì)胞培養(yǎng)物與抗體接觸期間，在冰上培育細(xì)胞培養(yǎng)物。在 一些實(shí)施例中，在細(xì)胞培養(yǎng)物與抗體接觸后，用緩沖液（例如FACS緩沖液）洗滌（例如沖 洗）細(xì)胞培養(yǎng)物。在一些實(shí)施例中，抗體經(jīng)同位素標(biāo)記、放射性標(biāo)記、熒光團(tuán)標(biāo)記或生物素 化。在一些實(shí)施例中，突光團(tuán)為突光素。在某些情況下，可用任何適合的方式（例如HPLC、 熒光顯微鏡技術(shù)、共聚焦顯微鏡技術(shù)、微陣列掃描儀、表面等離子體共振、紅外光譜法或放 射自顯影技術(shù)）檢測(cè)和/或測(cè)量抗原/抗體和/或IgM/抗原/抗體復(fù)合物。
[0194] 在一些實(shí)施例中，所述方法進(jìn)一步包含檢測(cè)經(jīng)標(biāo)記抗體或抗體與HEL抗原之間所 形成的復(fù)合物的存在，和/或測(cè)量其量。在某些情況下，可用任何適合的方式（例如HPLC、 熒光顯微鏡技術(shù)、共聚焦顯微鏡技術(shù)、微陣列掃描儀、表面等離子體共振、紅外光譜法或放 射自顯影技術(shù)）檢測(cè)和/或測(cè)量HEL抗原/抗體復(fù)合物。
[0195] 調(diào)節(jié)細(xì)胞因子功能
[0196] 在某些實(shí)施例中，本文揭示一種鑒別可誘導(dǎo)（例如活化、增加或補(bǔ)充）免疫應(yīng)答的 試劑的方法。在一些實(shí)施例中，所述方法包含鑒別可代替和/或增強(qiáng)細(xì)胞因子功能的試劑 ("細(xì)胞因子補(bǔ)充劑（Cytokine Supplementing Agent)"）。在某些情況下，在因子相關(guān)性 細(xì)胞中代替和/或增強(qiáng)細(xì)胞因子功能的試劑可增加免疫應(yīng)答和/或增加細(xì)胞活力。在某些 情況下，在因子相關(guān)性細(xì)胞中代替和/或增強(qiáng)細(xì)胞因子功能的試劑可上調(diào)MYC (例如MYC基 因和/或Myc多肽）。
[0197] 在一些實(shí)施例中，所述方法包含（a)使多個(gè)因子相關(guān)性細(xì)胞與一種試劑接觸；和 (b)在細(xì)胞與試劑接觸后，檢測(cè)和/或測(cè)量細(xì)胞培養(yǎng)物的擴(kuò)增量。
[0198] 在一些實(shí)施例中，所述方法進(jìn)一步包含在與試劑接觸后細(xì)胞培養(yǎng)物擴(kuò)增（例如， 如與未接觸試劑的細(xì)胞培養(yǎng)物相比較）時(shí)，將試劑鑒別為細(xì)胞因子補(bǔ)充劑。在一些實(shí)施例 中，在與試劑接觸后，細(xì)胞培養(yǎng)物擴(kuò)增（當(dāng)與未接觸試劑的細(xì)胞培養(yǎng)物相比較時(shí)）約10%到 約 100% (例如至少 10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、 70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、90%、91%、92%、94%、95%、96%、97%、98%，或 者約10%到約100%內(nèi)的任何其它百分比）。在一些實(shí)施例中，在與試劑接觸后，細(xì)胞培 養(yǎng)物擴(kuò)增（當(dāng)與未接觸試劑的細(xì)胞培養(yǎng)物相比較時(shí)）約30%到約100% (例如至少30%、 35 %,40 %,45 %,50 %,55 %,60 %,65 %,70 %,75 %,80 %,85 %,86 %,87 %,88 %,90 %, 91%、92%、94%、95%、96%、97%、98%，或者約30%到約100%內(nèi)的任何其它百分比）。 在一些實(shí)施例中，在與試劑接觸后，細(xì)胞培養(yǎng)物擴(kuò)增（當(dāng)與未接觸試劑的細(xì)胞培養(yǎng)物相比 較時(shí)）約 50% 到約 100% (例如至少 50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、86%、 87%、88%、90%、91%、92%、94%、95%、96%、97%、98%，或者約50%到約100%內(nèi)的任 何其它百分比）。在一些實(shí)施例中，在與試劑接觸后，細(xì)胞培養(yǎng)物擴(kuò)增（當(dāng)與未接觸試劑的 細(xì)胞培養(yǎng)物相比較時(shí)）約70%到約100%(例如至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、 88%、90%、91%、92%、94%、95%、96%、97%、98%，或者約70%到約100%內(nèi)的任何其它 百分比）。在一些實(shí)施例中，在與試劑接觸后，細(xì)胞培養(yǎng)物擴(kuò)增（當(dāng)與未接觸試劑的細(xì)胞培 養(yǎng)物相比較時(shí)）約80%到約100%(例如至少80%、85%、86%、87%、88%、90%、91%、 92%、94%、95%、96%、97%、98%，或者約80%到約100%內(nèi)的任何其它百分比）。
[0199] 在一些實(shí)施例中，鑒別可代替和/或增強(qiáng)細(xì)胞因子功能的試劑的方法進(jìn)一步包含 比較以下兩者：（1)在多個(gè)因子相關(guān)性細(xì)胞與一種試劑接觸后于所述多個(gè)細(xì)胞中觀察到的 擴(kuò)增量；與（2)對(duì)照組的擴(kuò)增量。在一些實(shí)施例中，所述對(duì)照組是多個(gè)未與試劑接觸的因子 相關(guān)性細(xì)胞。
[0200] 在一些實(shí)施例中，使因子相關(guān)性細(xì)胞與可代替和/或增強(qiáng)細(xì)胞因子功能的試劑接 觸將使MYC的表達(dá)上調(diào)。在某些情況下，上調(diào)MYC將產(chǎn)生不需要細(xì)胞因子而成活的因子相關(guān) 性細(xì)胞。在某些情況下，上調(diào)MYC將產(chǎn)生在無(wú)細(xì)胞因子存在下增殖的因子相關(guān)性細(xì)胞。在 某些情況下，上調(diào)MYC將產(chǎn)生在無(wú)細(xì)胞因子存在下不經(jīng)歷細(xì)胞凋亡的因子相關(guān)性細(xì)胞。
[0201] 在一些實(shí)施例中，因子相關(guān)性細(xì)胞為淋巴樣細(xì)胞（即，來(lái)源于淋巴系統(tǒng)的細(xì)胞）。 在一些實(shí)施例中，因子相關(guān)性細(xì)胞的非限制性實(shí)例為IL-2-/-、IL-3-/-、IL-4-/-、IL-5-/-、 IL-6-/-、IL-7-/-、IL-8-/-、IL-9-/-、IL-10-/-、IL-11-/-、IL-12-/-，或其任何組合。在 一些實(shí)施例中，因子相關(guān)性細(xì)胞來(lái)源于選自以下非限制性實(shí)例的細(xì)胞系：2D6 ;2E8 ;10B10 ; ATH8 ；B13 ；BAF/3 ；BALM-4 ；BCL1 ；CT. 4S ；CT6 ；CTL44 ；CTLL-2 ；D1 ；D10 ；D36 ；Da ；DS-1 ； Ea3. 17 ；EL4 ；FL5. 12 ；HT-2 ；IC-2 ；Kitt225 ；KT-3 ；L4 ；L138. 8A ；LBRM-33 ；LyD9 ；MC/9 ； MLA-144 ；Mono Mac 6 ；Nb2 ；NKC3 ；PB-1 ；Pno ；PT-18 ；Ramos ；Sez627 ；T10 ；T88 ；T1165 ； TALL-103 ;TF-1 ;TMD2 ;TS1 ;UT-7 ;XG-1 ;Y16 ;或其組合。在一些實(shí)施例中，所述細(xì)胞來(lái)源于 CTLL-2,或 BAF/3 細(xì)胞系。
[0202] 在某些實(shí)施例中，本文揭示鑒別可抑制和/或干擾細(xì)胞因子功能的試劑（"細(xì)胞因 子干擾劑（Cytokine InterferingAgent) "）的方法。在某些情況下，細(xì)胞因子干擾劑減少 免疫應(yīng)答和/或降低細(xì)胞活力。在一些實(shí)施例中，所述方法包含（a)使多個(gè)因子相關(guān)性細(xì) 胞與所需的生長(zhǎng)因子接觸，以致細(xì)胞培養(yǎng)物擴(kuò)增；(b)使所述多個(gè)因子相關(guān)性細(xì)胞與一種 試劑接觸；和（c)在所述多個(gè)因子相關(guān)性細(xì)胞與所述試劑接觸后，檢測(cè)和/或測(cè)量細(xì)胞培養(yǎng) 物的擴(kuò)增量。
[0203] 在一些實(shí)施例中，所述方法進(jìn)一步包含在與試劑接觸后細(xì)胞培養(yǎng)物縮減（例如， 如與未接觸試劑的細(xì)胞培養(yǎng)物相比較）時(shí)，將試劑鑒別為細(xì)胞因子干擾劑。在一些實(shí)施例 中，在與試劑接觸后，細(xì)胞培養(yǎng)物縮減（當(dāng)與未接觸試劑的細(xì)胞培養(yǎng)物相比較時(shí)）約10%到 約 100% (例如至少 10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、 70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、90%、91%、92%、94%、95%、96%、97%、98%，或 者約10%到約100%內(nèi)的任何其它百分比）。在一些實(shí)施例中，在與試劑接觸后，細(xì)胞培 養(yǎng)物縮減（當(dāng)與未接觸試劑的細(xì)胞培養(yǎng)物相比較時(shí)）約30%到約100% (例如至少30%、 35 %,40 %,45 %,50 %,55 %,60 %,65 %,70 %,75 %,80 %,85 %,86 %,87 %,88 %,90 %, 91%、92%、94%、95%、96%、97%、98%，或者約30%到約100%內(nèi)的任何其它百分比）。 在一些實(shí)施例中，在與試劑接觸后，細(xì)胞培養(yǎng)物縮減（當(dāng)與未接觸試劑的細(xì)胞培養(yǎng)物相比 較時(shí)）約 50% 到約 100% (例如至少 50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、86%、 87%、88%、90%、91%、92%、94%、95%、96%、97%、98%，或者約50%到約100%內(nèi)的任 何其它百分比）。在一些實(shí)施例中，在與試劑接觸后，細(xì)胞培養(yǎng)物縮減（當(dāng)與未接觸試劑的 細(xì)胞培養(yǎng)物相比較時(shí)）約70%到約100%(例如至少70%、75%、80%、85%、86%、87%、 88%、90%、91%、92%、94%、95%、96%、97%、98%，或者約70%到約100%內(nèi)的任何其它 百分比）。在一些實(shí)施例中，在與試劑接觸后，細(xì)胞培養(yǎng)物縮減（當(dāng)與未接觸試劑的細(xì)胞培 養(yǎng)物相比較時(shí)）約80%到約100%(例如至少80%、85%、86%、87%、88%、90%、91%、 92%、94%、95%、96%、97%、98%，或者約80%到約100%內(nèi)的任何其它百分比）。
[0204] 在一些實(shí)施例中，鑒別可代替和/或增強(qiáng)細(xì)胞因子功能的試劑的方法進(jìn)一步包含 比較以下兩者：（1)在多個(gè)因子相關(guān)性細(xì)胞與一種試劑接觸后于所述多個(gè)細(xì)胞中觀察到的 擴(kuò)增量；與（2)對(duì)照組的擴(kuò)增量。在一些實(shí)施例中，所述對(duì)照組是多個(gè)未與試劑接觸的因子 相關(guān)性細(xì)胞。
[0205] 在一些實(shí)施例中，使因子相關(guān)性細(xì)胞與可抑制和/或干擾細(xì)胞因子功能的試劑接 觸將使MYC的表達(dá)下調(diào)。在某些情況下，下調(diào)MYC將產(chǎn)生需要細(xì)胞因子而成活的因子相關(guān) 性細(xì)胞。在某些情況下，下調(diào)MYC將產(chǎn)生在無(wú)細(xì)胞因子存在下不會(huì)增殖的因子相關(guān)性細(xì)胞。 在某些情況下，下調(diào)MYC將產(chǎn)生在無(wú)細(xì)胞因子存在下會(huì)經(jīng)歷細(xì)胞凋亡的因子相關(guān)性細(xì)胞。
[0206] 在一些實(shí)施例中，因子相關(guān)性細(xì)胞為淋巴樣細(xì)胞（S卩，來(lái)源于淋巴系統(tǒng)的細(xì)胞）。 在一些實(shí)施例中，因子相關(guān)性細(xì)胞的非限制性實(shí)例為IL-2-/-、IL-3-/-、IL-4-/-、IL-5-/-、 IL-6-/-、IL-7-/-、IL-8-/-、IL-9-/-、IL-10-/-、IL-11-/-、IL-12-/-，或其任何組合。在 一些實(shí)施例中，因子相關(guān)性細(xì)胞來(lái)源于選自以下非限制性實(shí)例的細(xì)胞系：2D6 ;2E8 ;10B10 ; ATH8 ；B13 ；BAF/3 ；BALM-4 ；BCL1 ；CT. 4S ；CT6 ；CTL44 ；CTLL-2 ；D1 ；D10 ；D36 ；Da ；DS-1 ； Ea3. 17 ；EL4 ；FL5. 12 ；HT-2 ；IC-2 ；Kitt225 ；KT-3 ；L4 ；L138. 8A ；LBRM-33 ；LyD9 ；MC/9 ； MLA-144 ；Mono Mac 6 ；Nb2 ；NKC3 ；PB-1 ；Pno ；PT-18 ；Ramos ；Sez627 ；T10 ；T88 ；T1165 ； TALL-103 ;TF-1 ;TMD2 ;TS1 ;UT-7 ;XG-1 ;Y16 ;或其組合。在一些實(shí)施例中，所述細(xì)胞來(lái)源于 CTLL-2,或 BAF/3 細(xì)胞系。
[0207] 報(bào)告基因分析法
[0208] 在某些實(shí)施例中，本文揭示一種鑒別可誘導(dǎo)（例如活化、增加或補(bǔ)充）免疫應(yīng)答 的試劑的方法。在一些實(shí)施例中，所述方法包含鑒別可調(diào)節(jié)MYC編碼的轉(zhuǎn)錄因子的功能 的試劑。在一些實(shí)施例中，所述方法包含（a)用報(bào)告基因構(gòu)建體轉(zhuǎn)化細(xì)胞培養(yǎng)物中的多個(gè) 細(xì)胞，其中所述報(bào)告基因構(gòu)建體為包含報(bào)告基因的質(zhì)粒，并且其中所述報(bào)告基因的表達(dá)與 一個(gè)或一個(gè)以上E盒序列可操作地相關(guān)；(b)使所述多個(gè)經(jīng)報(bào)告基因構(gòu)建體轉(zhuǎn)化的細(xì)胞與 一種試劑接觸；和（c)在培養(yǎng)物與試劑接觸后，檢測(cè)和/或測(cè)量報(bào)告基因的表達(dá)量。在一 些實(shí)施例中，報(bào)告基因構(gòu)建體是以任何適合的方式獲得（例如購(gòu)自供應(yīng)商，或?qū)嶒?yàn)室內(nèi)部 制造而成）。有關(guān)適合于制造報(bào)告基因構(gòu)建體和用報(bào)告基因構(gòu)建體轉(zhuǎn)化細(xì)胞的方法，參看 分子克隆：實(shí)驗(yàn)室指南（Molecular Cloning :A Laboratory Manual),第二版（薩布魯克 (Sambrook)等人，1989)和分子克隆：實(shí)驗(yàn)室指南，第三版（薩布魯克和魯塞爾（Russel), 2001)，在本文中統(tǒng)稱為"薩布魯克"）；現(xiàn)代分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)（Current Protocols in Molecular Biology) (F. Μ.奧索貝爾（F. M. Ausubel)等人編，1987,包括到 2001 年間的增 刊）；現(xiàn)代核酸化學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)（Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry)，約翰威 立父子出版公司（John Wiley&Sons，Inc.)，紐約（New York) ,2000)，這些文獻(xiàn)的相關(guān)揭示 內(nèi)容都按引用并入本文中。
[0209] 在一些實(shí)施例中，鑒別可調(diào)節(jié)MYC編碼的轉(zhuǎn)錄因子的功能的試劑的方法進(jìn)一步包 含比較以下兩者：（1)在多個(gè)經(jīng)報(bào)告基因構(gòu)建體轉(zhuǎn)化的細(xì)胞與一種試劑接觸后所述多個(gè)細(xì) 胞中報(bào)告基因的表達(dá)量；與（2)對(duì)照組中報(bào)告基因的表達(dá)量。
[0210] 在一些實(shí)施例中，所述細(xì)胞是真核細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，所述真核細(xì)胞是人細(xì) 胞。在一些實(shí)施例中，所述細(xì)胞是人淋巴樣細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，所述淋巴樣細(xì)胞是B細(xì) 胞。
[0211] 在一些實(shí)施例中，報(bào)告基因構(gòu)建體在報(bào)告基因的上游包含一個(gè)或一個(gè)以上E盒序 列。在一些實(shí)施例中，所述一個(gè)或一個(gè)以上E盒序列是編碼于myc反應(yīng)性啟動(dòng)子序列中和 /或在myc反應(yīng)性啟動(dòng)子的上游。本文使用的"啟動(dòng)子序列"是指在基因上游允許RNA聚合 酶轉(zhuǎn)錄所述基因的核苷酸序列。本文使用的"myc反應(yīng)性啟動(dòng)子"是指MYC編碼的轉(zhuǎn)錄因子 可結(jié)合的啟動(dòng)子序列。在一些實(shí)施例中，所述myc反應(yīng)性啟動(dòng)子是鳥氨酸脫羧酶啟動(dòng)子。
[0212] 在一些實(shí)施例中，報(bào)告基因是半乳糖苷酶基因、內(nèi)酰胺酶基因、辣根過(guò)氧 化酶基因、堿性磷酸酶基因、胸苷激酶基因、黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶基因、酪氨酸酶基因、胞 嘧啶脫氨酶基因、抗生素抗性基因或具有熒光表達(dá)產(chǎn)物的基因。在一些實(shí)施例中，具有熒光 表達(dá)產(chǎn)物的基因是熒光素酶基因或綠色熒光多肽（GFP)基因。
[0213] 在一些實(shí)施例中，鑒別可調(diào)節(jié)MYC編碼的轉(zhuǎn)錄因子的功能的試劑的方法進(jìn)一步包 含檢測(cè)報(bào)告基因的表達(dá)和/或測(cè)量報(bào)告基因的表達(dá)量。在某些情況下，可用任何適合的方 式（例如熒光顯微鏡技術(shù)）檢測(cè)和測(cè)量報(bào)告基因的表達(dá)。
[0214] 在一些實(shí)施例中，細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)一步包含血清。在一些實(shí)施例中，血清是胎牛 血清（FBS);牛血清；馬血清；人血清；雞血清；山羊血清；豬血清；兔血清；綿羊血清； 血清代用品（例如血清代用品I (Serum Replacement 1);西格瑪-阿爾德里奇公司 (Sigma-Aldrich));或其組合。在一些實(shí)施例中，細(xì)胞培養(yǎng)物進(jìn)一步包含培養(yǎng)基。在一 些實(shí)施例中，培養(yǎng)基的非限制性實(shí)例為磷酸鹽緩沖生理鹽水；厄爾氏平衡鹽（Earle' s Balanced Salts);漢克斯氏平衡鹽（Hanks' Balanced Salts);臺(tái)氏鹽（Tyrode ' s Salts);其衍生物；或其組合。在一些實(shí)施例中，生長(zhǎng)因子的非限制性實(shí)例為細(xì)胞因子、表 皮生長(zhǎng)因子或血小板源性生長(zhǎng)因子。在一些實(shí)施例中，細(xì)胞因子的非限制性實(shí)例為IL-2、 IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12 或 IL-13。在某些情況下， 生長(zhǎng)因子的選擇根據(jù)所述方法中使用的細(xì)胞類型來(lái)確定。
[0215] 在一些實(shí)施例中，所述方法進(jìn)一步包含使所述多個(gè)細(xì)胞與促有絲分裂刺激物接 觸。在一些實(shí)施例中，促有絲分裂刺激物的非限制性實(shí)例為抗原或促有絲分裂抗體。在一 些實(shí)施例中，所述抗原的非限制性實(shí)例為植物血凝素（phytohaemagglutinin，PHA)、刀豆凝 集素 A(concanavalin A, conA)、脂多糖（lipopolysaccharide，LPS)、美洲商陸有絲分裂原 (pokeweed mitogen，PWM)，或其組合。在一些實(shí)施例中，促有絲分裂抗體的非限制性實(shí)例為 抗IgM、抗⑶40或其組合。在一些實(shí)施例中，抗IgM為抗IgM-F(ab' )2。在一些實(shí)施例中， 抗 CD40 為抗 CD40 IgM。
[0216] 試劑的體外驗(yàn)證
[0217] 在一些實(shí)施例中，本文所述的任何方法都進(jìn)一步包含在體外驗(yàn)證作為免疫應(yīng)答調(diào) 控劑的試劑（例如，根據(jù)本文所述的任何方法鑒別的試劑）。在一些實(shí)施例中，在體外驗(yàn) 證作為免疫應(yīng)答調(diào)控劑的試劑的方法包含（a)使所述試劑與原代T細(xì)胞活化培養(yǎng)物接觸； (b)針對(duì)活化標(biāo)記對(duì)培養(yǎng)物染色；和（c)在與試劑接觸后24小時(shí)，對(duì)培養(yǎng)物染色。在某些 情況下，可用任何適合的方式（例如熒光顯微鏡技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)、FACS)檢測(cè)和測(cè)量細(xì)胞 活力。在某些情況下，上調(diào)免疫應(yīng)答的試劑將使活化標(biāo)記相比對(duì)照組（或接觸試劑之前的 培養(yǎng)物）有所增加。在某些情況下，下調(diào)免疫應(yīng)答的試劑將使活化標(biāo)記相比對(duì)照組（或接 觸試劑之前的培養(yǎng)物）有所減少。
[0218] 在一些實(shí)施例中，本文所述的任何方法進(jìn)一步包含在體外驗(yàn)證作為免疫應(yīng)答調(diào)控 劑的試劑。在一些實(shí)施例中，在體外驗(yàn)證作為免疫應(yīng)答調(diào)控劑的試劑的方法包含（a)使所 述試劑與原代T細(xì)胞活化培養(yǎng)物接觸；(b)用CFSE (羧基熒光素琥珀酰亞胺酯）對(duì)培養(yǎng)物 染色；和（c)在與試劑接觸后72小時(shí)，對(duì)培養(yǎng)物染色。在某些情況下，CFSE指示細(xì)胞增殖。 在某些情況下，細(xì)胞中并入CFSE。在某些情況下，細(xì)胞中的一部分（即，一半）CFSE在分裂 后轉(zhuǎn)移到子代細(xì)胞。在某些情況下，細(xì)胞中CFSE的量隨每次分裂而降低。在某些情況下， 可用任何適合的方式（例如熒光顯微鏡技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)、FACS)檢測(cè)和測(cè)量細(xì)胞活力。在 某些情況下，上調(diào)免疫應(yīng)答的試劑將使細(xì)胞增殖相比對(duì)照組（或接觸試劑之前的培養(yǎng)物） 有所增加。在某些情況下，下調(diào)免疫應(yīng)答的試劑將使細(xì)胞增殖相比對(duì)照組（或接觸試劑之 前的培養(yǎng)物）有所減少。
[0219] 在一些實(shí)施例中，本文所述的任何方法進(jìn)一步包含在體外驗(yàn)證作為免疫應(yīng) 答調(diào)控劑的試劑。在一些實(shí)施例中，在體外驗(yàn)證作為免疫應(yīng)答調(diào)控劑的試劑的方法 包含（a)使所述試劑與原代T細(xì)胞活化培養(yǎng)物接觸；(b)用7AAD(7-氨基-放線菌素 D(7-amin〇-actinomycin D))對(duì)培養(yǎng)物染色；和（c)在與試劑接觸后72小時(shí)，對(duì)培養(yǎng)物染 色。在某些情況下，7-AAD指示細(xì)胞活力。在某些情況下，7-AAD將對(duì)膜受損的細(xì)胞（S卩，無(wú) 活力細(xì)胞）染色。在某些情況下，7-AAD將對(duì)膜未受損的細(xì)胞（即，有活力的細(xì)胞）染色。 在某些情況下，可用任何適合的方式（例如熒光顯微鏡技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)、FACS)檢測(cè)和測(cè) 量細(xì)胞活力。在某些情況下，上調(diào)免疫應(yīng)答的試劑將使細(xì)胞活力相比對(duì)照組（或接觸試劑 之前的培養(yǎng)物）有所增加。在某些情況下，下調(diào)免疫應(yīng)答的試劑將使細(xì)胞活力相比對(duì)照組 (或接觸試劑之前的培養(yǎng)物）有所降低。
[0220] 試劑的體內(nèi)驗(yàn)證
[0221] 在一些實(shí)施例中，本文所述的任何方法都進(jìn)一步包含在體內(nèi)驗(yàn)證作為免疫應(yīng)答調(diào) 控劑的試劑（例如，根據(jù)本文所述的任何方法鑒別的試劑）。在一些實(shí)施例中，在體內(nèi)驗(yàn)證 作為免疫應(yīng)答調(diào)控劑的試劑的方法包含（a)通過(guò)投予小鼠抗原（例如OVA肽、NP-KHL)，針 對(duì)所述抗原對(duì)哺乳動(dòng)物（例如小鼠、大鼠、兔）進(jìn)行免疫；(b)在投予抗原之前、期間或之 后，對(duì)小鼠投予所述試劑；（c)在投予抗原和試劑后，從小鼠獲得生物樣品（例如血液、淋巴 或血清）；和（d)檢測(cè)或測(cè)量免疫應(yīng)答（例如記憶性B細(xì)胞和/或T細(xì)胞的增殖速率）。在 一些實(shí)施例中，在免疫后，通過(guò)檢測(cè)和測(cè)量抗體的產(chǎn)生來(lái)檢測(cè)或測(cè)量免疫應(yīng)答。在一些實(shí)施 例中，在免疫后，每天1次分析抗體的產(chǎn)生，持續(xù)一周，隨后每周1次進(jìn)行分析。在一些實(shí)施 例中，在用抗原再刺激后，通過(guò)檢測(cè)和測(cè)量T細(xì)胞增殖，來(lái)檢測(cè)或測(cè)量免疫應(yīng)答。在一些實(shí) 施例中，免疫后一周，分析T細(xì)胞增殖。在某些情況下，上調(diào)初次免疫應(yīng)答的試劑將使抗體 的產(chǎn)生和T細(xì)胞增殖相比對(duì)照組（即，未投予試劑的小鼠）有所增加。在某些情況下，下調(diào) 初次免疫應(yīng)答的試劑將使抗體的產(chǎn)生和T細(xì)胞增殖相比對(duì)照組（即，未投予試劑的小鼠） 有所降低。
[0222] 在一些實(shí)施例中，本文所述的任何方法都進(jìn)一步包含在體內(nèi)驗(yàn)證作為免疫應(yīng)答調(diào) 控劑的試劑（例如，根據(jù)本文所述的任何方法鑒別的試劑）。在一些實(shí)施例中，在體內(nèi)驗(yàn) 證作為免疫應(yīng)答調(diào)控劑的試劑的方法包含（a)通過(guò)投予小鼠抗原（例如OVA肽、NP-KHL)， 來(lái)針對(duì)所述抗原對(duì)小鼠進(jìn)行免疫；(b)在投予抗原之前、期間或之后對(duì)小鼠投予所述試劑； (c)接種后3到6個(gè)月，用抗原激發(fā)小鼠；（d)激發(fā)后，從小鼠獲得生物樣品（例如血液、淋 巴或血清）；和（d)檢測(cè)或測(cè)量免疫應(yīng)答。在一些實(shí)施例中，在免疫后，通過(guò)檢測(cè)和測(cè)量抗 體的產(chǎn)生來(lái)檢測(cè)或測(cè)量免疫應(yīng)答。在一些實(shí)施例中，在激發(fā)后，每天1次分析抗體的產(chǎn)生， 持續(xù)一周，隨后每周1次進(jìn)行分析。在一些實(shí)施例中，在用抗原再刺激后，通過(guò)檢測(cè)和測(cè)量T 細(xì)胞增殖，來(lái)檢測(cè)或測(cè)量免疫應(yīng)答。在一些實(shí)施例中，激發(fā)后一周，分析T細(xì)胞增殖。在某 些情況下，上調(diào)二次免疫應(yīng)答的試劑將使抗原激發(fā)后的免疫應(yīng)答相比對(duì)照組（即，未投予 試劑的小鼠）加速（即，抗體產(chǎn)生和T細(xì)胞增殖的速率增加）。在某些情況下，下調(diào)二次免 疫應(yīng)答的試劑將使抗原激發(fā)后的免疫應(yīng)答相比對(duì)照組（即，未投予試劑的小鼠）減速（即， 抗體產(chǎn)生和T細(xì)胞增殖的速率降低）。
[0223] 試逝
[0224] 在某些實(shí)施例中，本文揭示可調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的試劑（例如，逆轉(zhuǎn)無(wú)能的試劑、調(diào)節(jié) 細(xì)胞因子功能的試劑和/或調(diào)節(jié)MYC編碼的轉(zhuǎn)錄因子的功能的試劑）。在某些實(shí)施例中，所 述試劑適用于投予有需要的個(gè)體。在特定實(shí)施例中，所述試劑是借助本文揭示的任何方法 鑒別的任何試劑。在一些實(shí)施例中，所述試劑是可調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的任何試劑。在一些實(shí)施 例中，所述試劑為小分子。在一些實(shí)施例中，所述試劑為RNAi。在一些實(shí)施例中，所述試劑 為MYC(例如MYC基因和/或Myc多肽）的激動(dòng)劑。在一些實(shí)施例中，所述試劑為MYC(例 如MYC基因和/或Myc多肽）的拮抗劑。
[0225] 在一些實(shí)施例中，根據(jù)試劑逆轉(zhuǎn)B細(xì)胞的無(wú)能的能力，將所述試劑鑒別為可調(diào)節(jié) 細(xì)胞活力的試劑。在一些實(shí)施例中，根據(jù)試劑調(diào)節(jié)因子相關(guān)性細(xì)胞的活力的能力，將所述試 劑鑒別為可調(diào)節(jié)細(xì)胞活力的試劑。在一些實(shí)施例中，根據(jù)試劑誘導(dǎo)報(bào)告基因表達(dá)的能力，將 所述試劑鑒別為可調(diào)節(jié)細(xì)胞活力的試劑。
[0226] 在一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答包含調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞的活力。在一些實(shí)施例中，淋巴 細(xì)胞為T細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，所述T細(xì)胞為⑶4+T細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，所述T細(xì)胞 為記憶性T細(xì)胞。
[0227] 在一些實(shí)施例中，淋巴細(xì)胞在與試劑接觸后的活力高于未接觸所述試劑的淋巴細(xì) 胞活力1倍以上到約10倍。在一些實(shí)施例中，所述試劑使淋巴細(xì)胞中的MYC基因上調(diào)。在 一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)是在體內(nèi)發(fā)生。在一些實(shí)施例中，淋巴細(xì)胞為T細(xì)胞。在一些實(shí)施例中， 所述T細(xì)胞為記憶性T細(xì)胞。在某些情況下，上調(diào)MYC基因?qū)⒀娱L(zhǎng)T細(xì)胞的壽命。在某些 情況下，記憶性T細(xì)胞的壽命延長(zhǎng)將使體內(nèi)記憶性T細(xì)胞的濃度變高。在某些情況下，較高 的記憶性T細(xì)胞濃度使針對(duì)抗原的初次免疫應(yīng)答加速。在某些情況下，上調(diào)MYC基因?qū)⑹?無(wú)能T細(xì)胞減少。在某些情況下，無(wú)能T細(xì)胞減少將使針對(duì)抗原的初次免疫應(yīng)答加速。在 某些情況下，上調(diào)MYC基因?qū)⑹筎細(xì)胞應(yīng)答抗原而活化所耗費(fèi)的時(shí)間縮短。在某些情況下， T細(xì)胞應(yīng)答抗原而活化所耗費(fèi)的時(shí)間縮短將使針對(duì)抗原的初次免疫應(yīng)答加速。
[0228] 在一些實(shí)施例中，所述試劑是在對(duì)個(gè)體投予疫苗之前、期間或之后投予。在一些實(shí) 施例中，所述試劑刺激免疫系統(tǒng)，并增加免疫系統(tǒng)對(duì)疫苗的應(yīng)答。在一些實(shí)施例中，試劑增 強(qiáng)免疫應(yīng)答。在一些實(shí)施例中，所述試劑與疫苗協(xié)同作用。在一些實(shí)施例中，所述試劑為疫 苗佐劑。
[0229] 在一些實(shí)施例中，疫苗包含死亡微生物、減毒微生物、類毒素、病原體亞單位、核酸 或其組合。在一些實(shí)施例中，疫苗是針對(duì)以下的疫苗：甲型肝炎；乙型肝炎；脊髓灰質(zhì)炎；麻 疹；腮腺炎；風(fēng)疹；白喉；百日咳；破傷風(fēng)；流感；水痘帶狀皰疹病毒；輪狀病毒；流感；腦膜 炎球菌病癥；肺炎；天花；霍亂；黑死??；黃熱病；結(jié)核病；人乳頭瘤病毒；或其組合。在一 些實(shí)施例中，疫苗是針對(duì)癌癥（例如濾泡性B細(xì)胞性非霍奇金氏淋巴瘤、前列腺癌、多發(fā)性 骨髓瘤、腎癌、皮膚黑色素瘤、眼黑色素瘤，和其它實(shí)體腫瘤、癌瘤和肉瘤）的疫苗。在一些 實(shí)施例中，癌癥疫苗是患者特異性疫苗（例如，疫苗包含患者自身的腫瘤細(xì)胞）。在一些實(shí) 施例中，癌癥疫苗包含前列腺特異性抗原（PSA)。在一些實(shí)施例中，癌癥疫苗包含唾液酸化 Tn (STn)。在一些實(shí)施例中，癌癥疫苗包含熱激蛋白（HSP)(例如gp96)。在一些實(shí)施例中， 癌癥疫苗包含神經(jīng)節(jié)苷脂分子（例如GM2、⑶2和⑶3)。在一些實(shí)施例中，癌癥疫苗包含癌 胚抗原（CEA)。在一些實(shí)施例中，癌癥疫苗包含MART-I (也稱為Melan-Α)。在一些實(shí)施例 中，癌癥抗原包含酪氨酸酶。在一些實(shí)施例中，疫苗為DNA疫苗。
[0230] 在一些實(shí)施例中，包含抗原部分。在一些實(shí)施例中，抗原部分為類毒素、肽、核酸序 列、多糖或其組合。在一些實(shí)施例中，抗原部分來(lái)源于病原體，所述病原體選自：甲型肝炎； 乙型肝炎；脊髓灰質(zhì)炎；麻疹；腮腺炎；風(fēng)疹；白喉；百日咳；破傷風(fēng)；流感；水痘帶狀皰疹病 毒；輪狀病毒；腦膜炎球菌；肺炎；天花；霍亂；黑死??；黃熱??；結(jié)核??；人乳頭瘤病毒；或 其組合。在一些實(shí)施例中，抗原部分來(lái)源于贅生性細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，抗原部分是核酸 或核酸的聚合物。
[0231] 在某些實(shí)施例中，使接收針對(duì)某一抗原的疫苗接種的個(gè)體的免疫應(yīng)答上調(diào)將增加 針對(duì)所述抗原的記憶性T細(xì)胞的活力，并由此增加其濃度。在某些情況下，使接收針對(duì)某一 抗原的疫苗接種的個(gè)體的免疫應(yīng)答上調(diào)將加速所述抗原對(duì)T細(xì)胞的活化。在某些情況下， 使接收針對(duì)某一抗原的疫苗接種的個(gè)體的免疫應(yīng)答上調(diào)將降低T細(xì)胞對(duì)所述抗原的耐受 性。
[0232] 在一些實(shí)施例中，投予了所述試劑的淋巴細(xì)胞的活力是未投予所述試劑的淋巴細(xì) 胞活力的1/2以下到約1/26。在一些實(shí)施例中，所述試劑使淋巴細(xì)胞中的MYC基因下調(diào)。 在一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)是在體內(nèi)發(fā)生。在一些實(shí)施例中，淋巴細(xì)胞為T細(xì)胞。在一些實(shí)施例 中，所述T細(xì)胞為記憶性T細(xì)胞。在某些情況下，下調(diào)MYC基因?qū)⒖s短T細(xì)胞的壽命。在某 些情況下，記憶性T細(xì)胞的壽命縮短將使體內(nèi)記憶性T細(xì)胞的濃度變低。在某些情況下，記 憶性T細(xì)胞的濃度降低將使針對(duì)抗原的初次免疫應(yīng)答減速、導(dǎo)致治療自體免疫性病癥和/ 或引起免疫抑制。在某些情況下，下調(diào)MYC基因?qū)⑹篃o(wú)能T細(xì)胞增加。在某些情況下，無(wú)能 T細(xì)胞增加將使針對(duì)抗原的初次免疫應(yīng)答減速、導(dǎo)致治療自體免疫性病癥和/或引起免疫 抑制。在某些情況下，下調(diào)MYC基因?qū)⑹筎細(xì)胞應(yīng)答抗原而活化所耗費(fèi)的時(shí)間增加。在某 些情況下，T細(xì)胞應(yīng)答抗原而活化所耗費(fèi)的時(shí)間增加將使針對(duì)抗原的初次免疫應(yīng)答減速、導(dǎo) 致治療自體免疫性病癥和/或引起免疫抑制。
[0233] 在一些實(shí)施例中，對(duì)患有自體免疫性病癥的個(gè)體投予所述試劑。在一些實(shí)施例中， 自體免疫性病癥為卡斯曼氏癥、狼瘡、多發(fā)性硬化、硬皮病色素沉著、自體免疫性淋巴細(xì)胞 增生綜合癥（ALPS)、重癥肌無(wú)力、糖尿病、哮喘、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、白癜風(fēng)、狄喬治氏綜合癥、 格雷氏病、克隆氏病、發(fā)炎性腸病、結(jié)腸炎、睪丸炎、硬皮病色素沉著、葡萄膜炎、移植后淋巴 細(xì)胞增生性病癥（PTLD)或自體免疫性疾病相關(guān)性淋巴結(jié)病變（ADAL)。在某些情況下，下調(diào) 患有自體免疫性病癥的個(gè)體的免疫應(yīng)答將改善和/或防止個(gè)體的免疫系統(tǒng)針對(duì)自身抗原 產(chǎn)生免疫應(yīng)答。
[0234] 在一些實(shí)施例中，對(duì)接收了器官移植或骨髓移植的個(gè)體投予所述試劑。在某些情 況下，使接收了器官或骨髓移植的個(gè)體的免疫應(yīng)答下調(diào)將改善和/或防止個(gè)體的免疫系統(tǒng) 對(duì)所移植的器官或骨髓產(chǎn)生免疫應(yīng)答。
[0235] 醫(yī)藥纟目合物
[0236] 在某些實(shí)施例中，本文揭示可調(diào)節(jié)有需要的個(gè)體的免疫系統(tǒng)的組合物，其中所述 組合物包含治療有效量的借助本文所揭示的任何方法鑒別的試劑。在一些實(shí)施例中，所述 試劑為小分子。在一些實(shí)施例中，所述試劑為RNAi。在一些實(shí)施例中，所述試劑為生物分子 (例如肽、融合肽）。在一些實(shí)施例中，所述試劑是本文所揭示的融合肽。在一些實(shí)施例中， 所述試劑是一種融合肽，其包含（a)轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列和（b)MYC序列。在一些實(shí)施例中，所述試 劑是式（I)的融合肽：
[0237] 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-MYC序列。
[0238] 在一些實(shí)施例中，根據(jù)試劑逆轉(zhuǎn)B細(xì)胞的無(wú)能的能力，將所述試劑鑒別為可調(diào)節(jié) 細(xì)胞活力的試劑。在一些實(shí)施例中，根據(jù)試劑調(diào)節(jié)因子相關(guān)性細(xì)胞的活力的能力，將所述試 劑鑒別為可調(diào)節(jié)細(xì)胞活力的試劑。在一些實(shí)施例中，根據(jù)試劑誘導(dǎo)報(bào)告基因表達(dá)的能力，將 所述試劑鑒別為可調(diào)節(jié)細(xì)胞活力的試劑。
[0239] 在一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答包含調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞的活力。在一些實(shí)施例中，淋巴 細(xì)胞為T細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，所述T細(xì)胞為⑶4+T細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，所述T細(xì)胞 為記憶性T細(xì)胞。
[0240] 在一些實(shí)施例中，淋巴細(xì)胞在與試劑接觸后的活力高于未接觸所述試劑的淋巴細(xì) 胞活力1倍以上到約10倍。在一些實(shí)施例中，所述試劑使淋巴細(xì)胞中的MYC基因上調(diào)。在 一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)是在體內(nèi)發(fā)生。在一些實(shí)施例中，淋巴細(xì)胞為T細(xì)胞。在一些實(shí)施例中， 所述T細(xì)胞為記憶性T細(xì)胞。在某些情況下，上調(diào)MYC基因?qū)⒀娱L(zhǎng)T細(xì)胞的壽命。在某些 情況下，記憶性T細(xì)胞的壽命延長(zhǎng)將使體內(nèi)記憶性T細(xì)胞的濃度變高。在某些情況下，較高 的記憶性T細(xì)胞濃度使針對(duì)抗原的初次免疫應(yīng)答加速。在某些情況下，上調(diào)MYC基因?qū)⑹?無(wú)能T細(xì)胞減少。在某些情況下，無(wú)能T細(xì)胞減少將使針對(duì)抗原的初次免疫應(yīng)答加速。在 某些情況下，上調(diào)MYC基因?qū)⑹筎細(xì)胞應(yīng)答抗原而活化所耗費(fèi)的時(shí)間縮短。在某些情況下， T細(xì)胞應(yīng)答抗原而活化所耗費(fèi)的時(shí)間縮短將使針對(duì)抗原的初次免疫應(yīng)答加速。
[0241] 在一些實(shí)施例中，所述試劑是在對(duì)個(gè)體投予疫苗之前、期間或之后投予。在一些實(shí) 施例中，所述試劑刺激免疫系統(tǒng)，并增加免疫系統(tǒng)對(duì)疫苗的應(yīng)答。在一些實(shí)施例中，所述試 劑增強(qiáng)免疫應(yīng)答。在一些實(shí)施例中，所述試劑與疫苗協(xié)同作用。在一些實(shí)施例中，所述試劑 為疫苗佐劑。
[0242] 在一些實(shí)施例中，疫苗包含死亡微生物、減毒微生物、類毒素、病原體亞單位、核酸 或其組合。在一些實(shí)施例中，疫苗是針對(duì)以下的疫苗：甲型肝炎；乙型肝炎；脊髓灰質(zhì)炎；麻 疹；腮腺炎；風(fēng)疹；白喉；百日咳；破傷風(fēng)；流感；水痘帶狀皰疹病毒；輪狀病毒；流感；腦膜 炎球菌?。环窝?；天花；霍亂；黑死??；黃熱??；結(jié)核病；人乳頭瘤病毒；或其組合。在一些實(shí) 施例中，疫苗是針對(duì)癌癥（例如濾泡性B細(xì)胞性非霍奇金氏淋巴瘤、前列腺癌、多發(fā)性骨髓 瘤、腎癌、皮膚黑色素瘤和眼黑色素瘤）的疫苗。在一些實(shí)施例中，癌癥疫苗是患者特異性 疫苗（例如，疫苗包含患者自身的腫瘤細(xì)胞）。在一些實(shí)施例中，癌癥疫苗包含前列腺特異 性抗原（PSA)。在一些實(shí)施例中，癌癥疫苗包含唾液酸化Tn (STn)。在一些實(shí)施例中，癌癥疫 苗包含熱激蛋白（HSP)(例如gp96)。在一些實(shí)施例中，癌癥疫苗包含神經(jīng)節(jié)苷脂分子（例 如GM2、⑶2和⑶3)。在一些實(shí)施例中，癌癥疫苗包含癌胚抗原（CEA)。在一些實(shí)施例中，癌 癥疫苗包含MART-U也稱為Melan-Α)。在一些實(shí)施例中，癌癥抗原包含酪氨酸酶。在一些 實(shí)施例中，疫苗為DNA疫苗。
[0243] 在一些實(shí)施例中，包含抗原部分。在一些實(shí)施例中，抗原部分為類毒素、肽、核酸序 列、多糖或其組合。在一些實(shí)施例中，抗原部分來(lái)源于病原體，所述病原體選自：甲型肝炎； 乙型肝炎；脊髓灰質(zhì)炎；麻疹；腮腺炎；風(fēng)疹；白喉；百日咳；破傷風(fēng)；流感；水痘帶狀皰疹病 毒；輪狀病毒；腦膜炎球菌；肺炎；天花；霍亂；黑死?。稽S熱??；結(jié)核病；人乳頭瘤病毒；或 其組合。在一些實(shí)施例中，抗原部分來(lái)源于贅生性細(xì)胞。在一些實(shí)施例中，抗原部分是核酸 或核酸的聚合物。
[0244] 在某些情況下，使接收針對(duì)某一抗原的疫苗接種的個(gè)體的免疫應(yīng)答上調(diào)將增加針 對(duì)所述抗原的記憶性T細(xì)胞的活力，并由此增加其濃度。在某些情況下，使接收針對(duì)某一抗 原的疫苗接種的個(gè)體的免疫應(yīng)答上調(diào)將加速所述抗原對(duì)T細(xì)胞的活化。在某些情況下，使 接收針對(duì)某一抗原的疫苗接種的個(gè)體的免疫應(yīng)答上調(diào)將降低T細(xì)胞對(duì)所述抗原的耐受性。
[0245] 在一些實(shí)施例中，投予了所述試劑的淋巴細(xì)胞的活力是未投予所述試劑的淋巴細(xì) 胞活力的1/2以下到約1/26。在一些實(shí)施例中，所述試劑使淋巴細(xì)胞中的MYC基因下調(diào)。 在一些實(shí)施例中，調(diào)節(jié)是在體內(nèi)發(fā)生。在一些實(shí)施例中，淋巴細(xì)胞為T細(xì)胞。在一些實(shí)施例 中，所述T細(xì)胞為記憶性T細(xì)胞。在某些情況下，下調(diào)MYC基因?qū)⒖s短T細(xì)胞的壽命。在某 些情況下，記憶性T細(xì)胞的壽命縮短將使體內(nèi)記憶性T細(xì)胞的濃度變低。在某些情況下，記 憶性T細(xì)胞的濃度降低將使針對(duì)抗原的初次免疫應(yīng)答減速、導(dǎo)致治療自體免疫性病癥和/ 或引起免疫抑制。在某些情況下，下調(diào)MYC基因?qū)⑹篃o(wú)能T細(xì)胞增加。在某些情況下，無(wú)能 T細(xì)胞增加將使針對(duì)抗原的初次免疫應(yīng)答減速、導(dǎo)致治療自體免疫性病癥和/或引起免疫 抑制。在某些情況下，下調(diào)MYC基因?qū)⑹筎細(xì)胞應(yīng)答抗原而活化所耗費(fèi)的時(shí)間增加。在某 些情況下，T細(xì)胞應(yīng)答抗原而活化所耗費(fèi)的時(shí)間增加將使針對(duì)抗原的初次免疫應(yīng)答減速、導(dǎo) 致治療自體免疫性病癥和/或引起免疫抑制。
[0246] 在一些實(shí)施例中，對(duì)患有自體免疫性病癥的個(gè)體投予所述試劑。在一些實(shí)施例中， 自體免疫性病癥為卡斯曼氏癥、狼瘡、多發(fā)性硬化、硬皮病色素沉著、自體免疫性淋巴細(xì)胞 增生綜合癥（ALPS)、重癥肌無(wú)力、糖尿病、哮喘、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、白癜風(fēng)、狄喬治氏綜合癥、 格雷氏病、克隆氏病、發(fā)炎性腸病、結(jié)腸炎、睪丸炎、硬皮病色素沉著、葡萄膜炎、移植后淋巴 細(xì)胞增生性病癥（PTLD)或自體免疫性疾病相關(guān)性淋巴結(jié)病變（ADAL)。在某些情況下，下調(diào) 患有自體免疫性病癥的個(gè)體的免疫應(yīng)答將改善和/或防止個(gè)體的免疫系統(tǒng)針對(duì)自身抗原 產(chǎn)生免疫應(yīng)答。
[0247] 在一些實(shí)施例中，對(duì)接收了器官移植或骨髓移植的個(gè)體投予所述試劑。在某些情 況下，使接收了器官或骨髓移植的個(gè)體的免疫應(yīng)答下調(diào)將改善和/或防止個(gè)體的免疫系統(tǒng) 對(duì)所移植的器官或骨髓產(chǎn)生免疫應(yīng)答。
[0248] 醫(yī)藥纟目合物的調(diào)配物
[0249] 在一些實(shí)施例中，使用一種或一種以上生理學(xué)上可接受的載劑，以常規(guī)方式調(diào)配 醫(yī)藥組合物，所述生理學(xué)上可接受的載劑包括例如便利將活性化合物加工成適于醫(yī)藥使 用的制劑的賦形劑和助劑。在某些實(shí)施例中，適宜的調(diào)配物取決于所選投藥途徑。本文 所述的醫(yī)藥組合物的概述見(jiàn)于例如雷明頓：藥學(xué)技術(shù)與實(shí)踐（Remington :The Science and Practice of Pharmacy),第19版（賓夕法尼亞州伊斯頓：默克出版公司（Easton, Pa. :Mack Publishing Company)，1995);約翰 Ε·霍溫（Hoover，John E·)，雷明頓：藥學(xué) 技術(shù)與實(shí)踐，默克出版公司，賓夕法尼亞州伊斯頓，1975 ;H. A.利伯曼（Liberman，H. A.) 和 L.拉奇曼（Lachman，L.)編，藥物劑型（Pharmaceutical Dosage Forms),馬塞爾戴 克（Marcel Decker)，紐約州紐約（New York，N.Y.)，1980;和藥物劑型與藥物遞送系統(tǒng) (Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems)，第 7 版（利平科特?威廉 姆斯 & 威爾金斯（Lippincott Williams & Wilkins)，1999)。
[0250] 本文使用的醫(yī)藥組合物是指本文所述的化合物與例如載劑、穩(wěn)定劑、稀釋劑、分散 齊?、懸浮劑、增稠劑和/或賦形劑等其它化學(xué)組分的混合物。在某些情況下，醫(yī)藥組合物便 利于對(duì)個(gè)體或細(xì)胞投予所述化合物。在實(shí)踐本文所提供的治療方法或用途的某些實(shí)施例 中，以醫(yī)藥組合物形式將治療有效量的本文所述化合物投予患有待治療病癥、疾病或病狀 的個(gè)體。在特定實(shí)施例中，個(gè)體為人類。如本文所論述的，本文所述的治療性化合物是單獨(dú) 利用，或與一種或一種以上其它治療劑組合利用。
[0251] 在一些實(shí)施例中，本文所述的醫(yī)藥調(diào)配物以任何方式投予個(gè)體，包括多種投藥途 徑中的一種或一種以上途徑，例如作為非限制性實(shí)例，經(jīng)口、不經(jīng)腸（例如靜脈內(nèi)、皮下、肌 肉內(nèi)）、鼻內(nèi)、頰、局部、直腸或透皮投藥途徑。本文所述的醫(yī)藥調(diào)配物包括（但不限于）水 性分散液、半乳化分散液、固溶體、脂質(zhì)體分散液、氣霧劑、固體劑型、散劑、速釋調(diào)配物、控 制釋放調(diào)配物、快速熔融調(diào)配物、片劑、膠囊、丸劑、延遲釋放調(diào)配物、緩釋調(diào)配物、脈沖釋放 調(diào)配物、多顆粒調(diào)配物以及速釋與控制釋放混合型調(diào)配物。
[0252] 任選以常規(guī)方式，例如（僅為舉例）借助常規(guī)的混合、溶解、制粒、糖衣丸制造、粉 碎、乳化、囊封、擠壓或壓縮方法，制造出包括本文所述化合物的醫(yī)藥組合物。
[0253] 在一些實(shí)施例中，本文所述的醫(yī)藥組合物包括一種或一種以上呈游離酸或游離堿 形式或呈醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽形式的本文所述的試劑作為活性成分。在一些實(shí)施例中，利 用的本文所述的化合物呈N-氧化物或呈結(jié)晶或非晶形形式（即，多晶型物）。在某些實(shí)施 例中，利用本文所述化合物的活性代謝物或前藥。在一些情況下，本文所述的化合物以互變 異構(gòu)體形式存在。在本文所提供的化合物的范圍內(nèi)包括所有互變異構(gòu)體。在某些實(shí)施例中， 本文所述的化合物以未溶劑化或溶劑化形式存在，其中溶劑化形式包含任何醫(yī)藥學(xué)上可接 受的溶劑，例如水、乙醇等。本文也揭示本文所提供化合物的溶劑化形式。
[0254] 在一些實(shí)施例中，"載劑"包括醫(yī)藥學(xué)上可接受的賦形劑，而且是根據(jù)與本文所揭 示化合物（例如式I-V中任一式的化合物）的相容性和所需劑型的釋放概況特性選擇。 例示性載劑材料包括例如粘合劑、懸浮劑、崩解劑、填充劑、表面活性劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、 潤(rùn)滑劑、潤(rùn)濕劑、稀釋劑等。參看例如雷明頓：藥學(xué)技術(shù)與實(shí)踐（Remington :The Science and Practice of Pharmacy),第19版（賓夕法尼亞州伊斯頓：默克出版公司（Easton, Pa. :Mack Publishing Company)，1995);約翰 Ε·霍溫（Hoover，John E·)，雷明頓：藥學(xué) 技術(shù)與實(shí)踐，默克出版公司，賓夕法尼亞州伊斯頓，1975 ;H. A.利伯曼（Liberman，H. A.) 和 L.拉奇曼（Lachman，L.)編，藥物劑型（Pharmaceutical Dosage Forms)，馬塞爾戴 克（Marcel Decker)，紐約州紐約（New York，N.Y.)，1980;和藥物劑型與藥物遞送系統(tǒng) (Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems)，第 7 版（利平科特?威廉 姆斯 & 威爾金斯（Lippincott Williams & Wilkins)，1999)。
[0255] 此外，在一些實(shí)施例中，本文所述的醫(yī)藥組合物經(jīng)調(diào)配為某種劑型。因此，在一些 實(shí)施例中，本文提供一種包含本文所述的化合物（例如式I-V中任一式的化合物）的適于 投予個(gè)體的劑型。在某些實(shí)施例中，適合的劑型包括（作為非限制性實(shí)例）水性口服分散 液、液體、凝膠、糖漿、酏劑、漿液、懸浮液、固體口服劑型、氣霧劑、控制釋放調(diào)配物、快速熔 融調(diào)配物、泡騰調(diào)配物、凍干調(diào)配物、片劑、散劑、丸劑、糖衣藥丸、膠囊、延遲釋放調(diào)配物、緩 釋調(diào)配物、脈沖釋放調(diào)配物、多顆粒調(diào)配物以及速釋與控制釋放混合型調(diào)配物。
[0256] 本文所述的醫(yī)藥固體劑型任選包括本文所述的其它治療性化合物，和一種或一種 以上醫(yī)藥學(xué)上可接受的添加劑，例如相容性載劑、粘合劑、填充劑、懸浮劑、調(diào)味劑、甜味劑、 崩解劑、分散劑、表面活性劑、潤(rùn)滑劑、著色劑、稀釋劑、增溶劑、濕潤(rùn)劑、增塑劑、穩(wěn)定劑、滲 透增強(qiáng)劑、潤(rùn)濕劑、消泡劑、抗氧化劑、防腐劑，或其一種或一種以上的組合。在一些方面中， 使用標(biāo)準(zhǔn)涂布程序，例如雷明頓氏藥學(xué)大全（Remington' s Pharmaceutical Science)第 20版（2000)中所述的程序，在式I-V中任一式的化合物的調(diào)配物周圍提供薄膜涂層。在一 個(gè)實(shí)施例中，本文所述的化合物呈顆粒形式，而且所述化合物顆粒的一部分或全部經(jīng)涂布。 在某些實(shí)施例中，所述化合物顆粒的一部分或全部經(jīng)微囊封。在一些實(shí)施例中，本文所述化 合物的顆粒未經(jīng)微囊封，而且未經(jīng)涂布。
[0257] 在一些實(shí)施例中，本文所述的醫(yī)藥組合物是適于單次投予精確劑量的單位劑型。 在單位劑型中，調(diào)配物被分成含有適量的一種或一種以上化合物的單位劑量。在一些實(shí)施 例中，單位劑量呈含有不連續(xù)量調(diào)配物的包裝的形式。非限制性實(shí)例是包裝片劑或膠囊，或 裝在小瓶或安瓿中的散劑。水性懸浮液組合物任選包裝在不可再密封的單劑量容器中。在 一些實(shí)施例中，使用可再密封的多劑量容器。在某些情況下，多劑量容器在組合物中包含防 腐劑。僅舉例來(lái)說(shuō)，非經(jīng)腸注射用調(diào)配物是以單位劑型提供，其包括（但不限于）安瓿；或 以加有防腐劑的多劑量容器提供。
[0258] 在一些實(shí)施例中，本文所述的試劑和組合物在投予疫苗之前、期間或之后投予。在 一些實(shí)施例中，將本文所述的試劑和組合物并入疫苗中。在一些實(shí)施例中，所述試劑和組合 物刺激免疫系統(tǒng)，并增加免疫系統(tǒng)對(duì)疫苗的應(yīng)答。在一些實(shí)施例中，所述試劑和組合物增強(qiáng) 免疫應(yīng)答。在一些實(shí)施例中，所述試劑和組合物與疫苗協(xié)同作用。在一些實(shí)施例中，所述 試劑和組合物是疫苗佐劑。在一些實(shí)施例中，疫苗調(diào)配物包含抗原或抗原部分（例如來(lái)自 百日咳博德特氏菌（B. pertussis)、破傷風(fēng)梭菌（C. tetani)、大腸桿菌（E. coli)、白喉?xiàng)U菌 (C. diphtheriae)、銅綠假單胞菌（P. Aeruginosa)、霍亂弧菌（V. cholerae)、流感嗜血桿菌 (H. influenzae)、腦膜炎奈瑟菌（N. meningitidis)、肺炎鏈球菌（S. pneumoniae)、淋病奈 瑟菌（N. gonorrhea)的蛋白質(zhì)或多糖）和所述試劑。在一些實(shí)施例中，疫苗進(jìn)一步包含載 齊U (例如水、生理鹽水、PBS)、防腐劑（例如硫柳萊（thimerosal)、2-苯氧基乙醇、苯酚、節(jié) 索氯銨（benzethonium chloride))、穩(wěn)定劑（例如乳糖、谷氨酸單納）、抗生素、抗氧化劑、 PH控制劑或其組合。
[0259] 局部調(diào)配物
[0260] 在一些實(shí)施例中，局部投予本文所述的MYC融合多肽（例如TAT-MYC) ( S卩，將所述 多肽投予皮膚表面）。在一些實(shí)施例中，將本文所揭示的MYC融合多肽（例如TAT-MYC)局 部投予疫苗注射部位。在某些情況下，在利用當(dāng)前方法進(jìn)行疫苗接種期間，產(chǎn)生局部化的抗 原儲(chǔ)集器（即，由疫苗佐劑（例如油包水乳液或鋁鹽）形成的組織儲(chǔ)集器，可緩慢且平穩(wěn)地 釋放抗原）。在一些實(shí)施例中，鄰近抗原儲(chǔ)集器部位的皮膚中的駐留淋巴樣細(xì)胞中的MYC瞬 時(shí)上調(diào)將驅(qū)動(dòng)較為穩(wěn)固的免疫應(yīng)答，并在針對(duì)自身抗原的耐受性松弛時(shí)產(chǎn)生范圍較大的應(yīng) 答。
[0261] 可利用任何適合的調(diào)配物。在一些實(shí)施例中，將MYC融合多肽調(diào)配成溶液、乳膏、 洗液、凝膠、油膏、泡沫劑、微乳液或其組合。在一些實(shí)施例中，MYC融合多肽經(jīng)調(diào)配用于經(jīng) 由透皮貼片遞送。
[0262] 可利用任何適合的局部投藥方法（例如電穿孔法、超聲導(dǎo)入法、化學(xué)遞送法、皮膚 磨擦法（skin abrasion))。在一些實(shí)施例中，MYC融合多肽經(jīng)調(diào)配用于化學(xué)遞送（即，使用 化學(xué)物質(zhì)（例如PEG、乙醇、單月桂酸甘油酯、十二烷基硫酸鈉、磷脂酰膽堿或尿素）來(lái)促使 活性劑透過(guò)皮膚）。在一些實(shí)施例中，MYC融合多肽經(jīng)調(diào)配用于經(jīng)由電穿孔法遞送（即，經(jīng) 由施加電流來(lái)滲透屏障（例如皮膚））。在一些實(shí)施例中，MYC融合多肽經(jīng)調(diào)配用于經(jīng)由超 聲導(dǎo)入法遞送（即，經(jīng)由施加超聲波來(lái)滲透屏障（例如皮膚））。
[0263] 乳膏和洗液
[0264] 在一些實(shí)施例中，將本文所揭示的MYC融合多肽（例如TAT-MYC)調(diào)配為乳膏。在 某些情況下，乳膏為半固體（例如軟固體或濃稠的液體）調(diào)配物，其包括分散于水包油乳液 或油包水乳液中的本文所揭示的MYC融合多肽（例如TAT-MYC)。
[0265] 在一些實(shí)施例中，將本文所揭示的MYC融合多肽（例如TAT-MYC)調(diào)配為洗液。在 某些情況下，洗液為流體乳液（例如水包油乳液或油包水乳液）。
[0266] 在一些實(shí)施例中，洗液和/或乳膏的疏水性組分來(lái)源于動(dòng)物（例如羊毛脂、魚肝油 和龍涎香）、植物（例如紅花油、蓖麻油、椰子油、棉籽油、鯡油、棕櫚仁油、棕櫚油、花生油、 大豆油、菜籽油、亞麻子油、米糠油、松油、芝麻油或葵花籽油）、石油（例如礦物油或礦脂） 或其組合。
[0267] 油膏
[0268] 在一些實(shí)施例中，將本文所揭示的MYC融合多肽（例如TAT-MYC)調(diào)配為油膏。在 某些情況下，油膏是在體溫下軟化或熔融的半固體制劑。
[0269] 糊劑
[0270] 在一些實(shí)施例中，將本文所揭示的MYC融合多肽（例如TAT-MYC)調(diào)配為糊劑。在 某些情況下，糊劑含有至少20%固體。在某些情況下，糊劑為在體溫下不能流動(dòng)的油膏。
[0271] 凝膠
[0272] 在一些實(shí)施例中，將本文所揭示的MYC融合多肽（例如TAT-MYC)調(diào)配為凝膠。在 某些情況下，凝膠為半固體（或半剛性）系統(tǒng)，由大有機(jī)分子分散于液體中形成的分散液組 成。在某些情況下，凝膠為水溶性的，而且可以使用溫水或生理鹽水去除。
[0273] 藥卷（stick)
[0274] 在一些實(shí)施例中，將本文所揭示的MYC融合多肽（例如TAT-MYC)調(diào)配為藥卷。在 某些情況下，藥卷是在體溫下熔融的固體劑型。在一些實(shí)施例中，藥卷包含蠟、聚合物、樹 月旨、熔化成硬塊的干燥固體和/或熔化的晶體。在一些實(shí)施例中，本文揭示的MYC融合多肽 (例如TAT-MYC)的局部調(diào)配物呈止血筆（styptic pencil)的形式（即，通過(guò)（1)加熱晶體， 直到其失去結(jié)晶水，而且變得熔融，且（2)將熔融的晶體倒入模具中并使其硬化，制備而成 的藥卷）。在一些實(shí)施例中，本文揭示的MYC融合多肽（例如TAT-MYC)的局部調(diào)配物呈藥 卷的形式，其中所述藥卷包含蠟（例如，將蠟熔融，并倒入適合的模具中，在模具中使其固 化成棒狀）。
[0275] 在一些實(shí)施例中，本文揭示的MYC融合多肽（例如TAT-MYC)的局部調(diào)配物呈藥 卷的形式，其中所述藥卷包含熔融基質(zhì)（例如在體溫下軟化的基質(zhì)）。熔融基質(zhì)的實(shí)例包 括（但不限于）蠟、油、聚合物和凝膠。在一些實(shí)施例中，本文揭示的MYC融合多肽（例如 TAT-MYC)的局部調(diào)配物呈藥卷的形式，其中所述藥卷包含濕潤(rùn)基質(zhì)（例如通過(guò)添加水而活 化的基質(zhì)）。
[0276] 貼片
[0277] 在一些實(shí)施例中，本文所揭示的MYC融合多肽（例如TAT-MYC)經(jīng)調(diào)配用于經(jīng)由貼 片投予。在一些實(shí)施例中，將本文揭示的局部調(diào)配物溶解和/或分散于聚合物或膠粘劑中。 在一些實(shí)施例中，本文所揭示的貼片經(jīng)構(gòu)造用于本文所揭示MYC融合多肽（例如TAT-MYC) 的連續(xù)、脈沖式或視需要的遞送。
[0278] 傷口敷料
[0279] 在一些實(shí)施例中，本文所揭示的MYC融合多肽（例如TAT-MYC)經(jīng)調(diào)配用于經(jīng)由傷 口敷料投予。傷口敷料包括（但不限于）紗布、透明薄膜敷料、水凝膠、聚氨酯泡沫敷料、水 膠體和褐藻酸鹽。
[0280] 皮膚用賦形劑
[0281] 在一些實(shí)施例中，將本文所揭示的MYC融合多肽（例如TAT-MYC)與滲透增強(qiáng) 劑一起調(diào)配。滲透增強(qiáng)劑包括（但不限于）月桂基硫酸鈉、月桂酸鈉、聚氧乙烯-20-鯨 蠟基醚、月桂醇聚醚-9 (laureth-9)、十二烷基硫酸鈉、丁二酸二辛酯磺酸鈉、聚氧乙 烯-9_ 月桂基醚（polyoxyethylene-9-lauryl ether，PLE)、Tween 80、壬基苯氧基聚乙 烯（nonylphenoxypolyethylene，ΝΡ-Ρ0Ε)、聚山梨醇酯類、甘膽酸鈉、脫氧膽酸鈉、?；悄?酸鈉、?；请p氫褐霉素鈉 （sodium taurodihydrofusidate)、甘油雙氫褐霉素鈉 （sodium glycodihydrofusidate)、油酸、辛酸、單酸甘油酯和二酸甘油酯類、月桂酸類、?；憠A類、 辛酸類、?；舛緣A類、癸酸鈉類、EDTA、檸檬酸、水楊酸、DMS0、癸基甲基亞砜、乙醇、異丙 醇、丙二醇、聚乙二醇、甘油、丙二醇和二乙二醇單乙醚。
[0282] 在一些實(shí)施例中，將本文所揭示的MYC融合多肽（例如TAT-MYC)與膠凝劑（或增 稠劑）一起調(diào)配。在一些實(shí)施例中，本文揭示的局部調(diào)配物進(jìn)一步包含約0.1%到約5%、 更優(yōu)選約0. 1 %到約3 %且最優(yōu)選約0. 25 %到約2 %膠凝劑。在某些實(shí)施例中，本文所揭 示的局部調(diào)配物的粘度范圍為約100到約500, 000cP、約IOOcP到約1，000cP、約500cP到 約 1500cP、約 IOOOcP 到約 3000cP、約 2000cP 到約 8, 000cP、約 4, OOOcP 到約 10, 000cP、約 10, OOOcP 到約 50, 000cP。
[0283] 適用于制備凝膠局部調(diào)配物的膠凝劑包括（但不限于）纖維素類、纖維素衍生物 類、纖維素醚類（例如，羧甲基纖維素、乙基纖維素、羥乙基纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基 甲基纖維素、羥丙基纖維素、甲基纖維素）、瓜爾膠（guar gum)、黃原膠、刺槐豆膠、褐藻酸鹽 類（例如褐藻酸）、硅酸鹽類、淀粉、黃芪膠、羧基乙烯基聚合物類、角叉菜膠、石蠟、礦脂、阿 拉伯膠（acacia/gum arabic)、瓊脂、娃酸鎂錯(cuò)、褐藻酸鈉、硬脂酸鈉、墨角藻、膨潤(rùn)土、卡波 姆（carbomer)、角叉菜膠、卡巴浦爾（carbopol)、黃原膠、纖維素、微晶纖維素（MCC)、角豆 膠、角叉菜、右旋糖、紅藻膠、明膠、爺替膠（ghartti gum)、瓜爾膠、鋰蒙脫石（hectorite)、 乳糖、蔗糖、麥芽糊精、甘露糖醇、山梨糖醇、蜂蜜、玉米淀粉、小麥淀粉、米淀粉、馬鈴薯淀 粉、明膠、梧桐膠、聚乙二醇（例如PEG200-4500)、黃芪膠、乙基纖維素、乙基羥乙基纖維素、 乙基甲基纖維素、甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥乙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、聚（甲基 丙烯酸羥乙酯）、氧化聚明膠、果膠、聚明膠肽、聚烯吡酮、碳酸亞丙酯、甲基乙烯基醚/馬來(lái) 酸酐共聚物（PVM/MA)、聚（甲基丙烯酸甲氧基乙酯）、聚（甲基丙烯酸甲氧基乙氧基乙酯）、 羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素（HPMC)、羧甲基纖維素鈉（CMC)、二氧化硅、聚乙烯吡咯 烷酮（PVP :聚烯吡酮），或其組合。
[0284] 在一些實(shí)施例中，將本文所揭示的MYC融合多肽（例如TAT-MYC)與軟化劑一起調(diào) 配。軟化劑包括（但不限于）蓖麻油酯類、可可油酯類、紅花油酯類、棉籽油酯類、玉米油 酯類、橄欖油酯類、魚肝油酯類、杏仁油酯類、鱷梨油酯類、棕櫚油酯類、芝麻油酯類、角鯊烯 酯類、石栗子油酯類、大豆油酯類、乙酰單酸甘油酯類、乙氧基化單硬脂酸甘油酯、月桂酸己 酯、月桂酸異己酯、棕櫚酸異己酯、棕櫚酸異丙酯、棕櫚酸甲酯、油酸癸酯、油酸異癸酯、硬脂 酸十六烷酯硬脂酸癸酯、異硬脂酸異丙酯、異硬脂酸甲酯、己二酸二異丙酯、己二酸二異己 酯、己二酸二-十六烷酯、癸二酸二異丙酯、乳酸月桂基酯、乳酸肉豆蘧酯和乳酸鯨蠟酯、肉 豆蘧酸油基酯、硬脂酸油基酯和油酸油基酯、壬酸、月桂酸、肉豆蘧酸、棕櫚酸、硬脂酸、異硬 脂酸、羥基硬脂酸、油酸、亞油酸、蓖麻油酸、花生酸、山俞酸、芥子酸、月桂醇、肉豆蘧醇、鯨 蠟醇、十六醇、硬脂醇、異硬脂醇、羥基硬脂醇、油醇、蓖麻油醇、山俞醇、芥子醇、2-辛基十二 烷醇、羊毛脂和羊毛脂衍生物、蜂蠟、鯨蠟、肉豆蘧酸肉豆蘧酯、硬脂酸硬脂基酯、巴西棕櫚 蠟、小燭樹臘、卵磷脂和膽固醇。
[0285] 鉬合
[0286] 在一些實(shí)施例中，宜將至少一種本文所述的治療劑與另一治療劑組合投予。或者， 僅舉例來(lái)說(shuō)，通過(guò)投予一種本文所述的化合物與也具有治療益處的另一治療劑（也包括治 療方案），來(lái)增加患者所得到的益處。在任何情況下，不管所治療的病癥、疾病或病狀如何， 在一些實(shí)施例中，患者所得到的總體益處都是兩種治療劑的簡(jiǎn)單加和，或者在其它實(shí)施例 中，患者將得到協(xié)同益處。
[0287] 在一些實(shí)施例中，化合物的特定選擇取決于主治醫(yī)師的診斷和其對(duì)患者病狀的判 斷以及適宜的治療方案。視疾病、病癥或病狀的性質(zhì)、患者的狀況和實(shí)際選擇使用的化合物 而定，任選地將化合物并行（例如同時(shí)、基本上同時(shí)或在同一治療方案內(nèi)）或依次投予。在 某些情況下，投藥次序以及在治療方案期間每一治療劑的重復(fù)投予次數(shù)的確定是基于對(duì)所 治療的病癥和患者狀況的評(píng)價(jià)。
[0288] 在一些實(shí)施例中，當(dāng)使用藥物的治療組合時(shí)，治療有效劑量有所變化。文獻(xiàn)中描述 了憑經(jīng)驗(yàn)確定組合治療方案中使用的藥物和其它藥劑的治療有效劑量的方法。例如，文獻(xiàn) 中曾深入描述過(guò)使用節(jié)拍性給藥（metronomic dosing),即，較為頻繁地給予較低劑量，以 使毒副作用減到最小。組合治療進(jìn)一步包括定期性治療，即在各種時(shí)間開始和停止，以幫助 進(jìn)行患者的臨床管理。
[0289] 在本文所述的組合療法的一些實(shí)施例中，共投予的化合物的劑量取決于使用的共 用藥物的類型、使用的特定藥物、所治療的病癥或病狀等而變化。此外，當(dāng)與一種或一種以 上生物試劑共投予時(shí)，任選地將本文提供的化合物與這些生物試劑同時(shí)或依次投予。在某 些情況下，如果是依次投予，那么主治醫(yī)師將決定本文所述治療性化合物與所述其它治療 劑組合的適宜次序。
[0290] 任選以任何次序或同時(shí)投予所述多種治療劑（至少一種治療劑是本文所述的治 療劑）。如果同時(shí)投予，那么任選以單一的整體形式或以多種形式（僅舉例來(lái)說(shuō)，以單粒藥 丸或兩粒分開的藥丸）提供多種治療劑。在某些情況下，任選給予多劑的某一治療劑。在其 它情況下，任選給予多劑的兩種治療劑。如果不同時(shí)投予，那么多次劑量之間的時(shí)程為任何 適合的時(shí)程，例如，大于零到小于4周。在一些實(shí)施例中，利用所述其它治療劑來(lái)緩解（部 分或完全）癌癥，借此隨后投予本文所述的治療劑（例如式I-V中任一式的化合物）。此 夕卜，組合方法、組合物和調(diào)配物不限于只使用兩種試劑；預(yù)期也可以使用多重治療組合（包 括兩種或兩種以上本文所述的治療性化合物）。
[0291] 在一些實(shí)施例中，根據(jù)多種因素來(lái)改變劑量方案，以治療、預(yù)防或改善欲減輕的病 狀。這些因素包括個(gè)體所患病癥，以及個(gè)體的年齡、體重、性別、飲食和醫(yī)療狀況。因此，在 各種實(shí)施例中，實(shí)際使用的劑量方案可變化，并偏離本文所述的劑量方案。
[0292] 在一些實(shí)施例中，構(gòu)成本文所揭示的組合療法的藥劑以組合劑型或以實(shí)質(zhì)上同時(shí) 投予的單獨(dú)劑型提供。在某些實(shí)施例中，依次投予構(gòu)成組合療法的藥劑，其中任一治療性化 合物都是通過(guò)要求兩步式投藥的方案投予。在一些實(shí)施例中，兩步式投藥方案要求依次投 予各藥劑或間隔開來(lái)投予個(gè)別藥劑。在某些實(shí)施例中，視各藥劑的特性（例如藥劑的效力、 溶解性、生物利用率、血漿半衰期和動(dòng)力學(xué)曲線）而定，多個(gè)給藥步驟之間的時(shí)間段（借助 非限制性實(shí)例說(shuō)明）在數(shù)分鐘到數(shù)小時(shí)間變化。
[0293] 此外，本文所述的化合物任選與向患者提供額外或協(xié)同益處的程序組合使用。僅 舉例來(lái)說(shuō)，預(yù)期患者將發(fā)現(xiàn)本文所述方法的治療和/或預(yù)防益處，其中本文所揭示的化合 物的醫(yī)藥組合物和/或與其它治療的組合將與遺傳測(cè)試結(jié)合，以確定個(gè)體是否是已知與某 些病癥或病狀相關(guān)的基因或基因突變的攜帶者。在某些實(shí)施例中，通過(guò)對(duì)所患增生性病癥 (例如癌癥）處于緩解（例如部分或完全）中的個(gè)體投予本文所述的治療性化合物來(lái)實(shí)現(xiàn) 預(yù)防益處。
[0294] 在一些實(shí)施例中，在病癥或病狀發(fā)生之前、期間或之后投予本文所述的化合物以 及組合療法。含有化合物的組合物的投藥時(shí)程可任選變化，以適應(yīng)所治療個(gè)體的需求。因 此，在某些實(shí)施例中，將這些化合物作預(yù)防用，并連續(xù)投予傾向于發(fā)展病狀或病癥的個(gè)體， 以便預(yù)防所述病癥或病狀的發(fā)生。在一些實(shí)施例中，在癥狀發(fā)作期間，或在癥狀發(fā)作之后立 即投予個(gè)體這些化合物和組合物。這些化合物的投藥任選在癥狀發(fā)作的前48小時(shí)內(nèi)、癥狀 發(fā)作的前6小時(shí)或癥狀發(fā)作的前3小時(shí)內(nèi)起始。初始投藥借助任何實(shí)用的途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)，例 如靜脈內(nèi)注射、推注、經(jīng)5分鐘到約5小時(shí)輸注、藥丸、膠囊、透皮貼片、頰遞送等，或其組合。 在一些實(shí)施例中，所述化合物的投藥應(yīng)在檢測(cè)到或懷疑某一病癥或病狀發(fā)作之后盡可能快 地實(shí)行，并持續(xù)治療所述病癥必需的時(shí)間長(zhǎng)度，例如超過(guò)1個(gè)月到約3個(gè)月。任選根據(jù)已知 的標(biāo)準(zhǔn)改變每一個(gè)體的治療時(shí)間。在例示性實(shí)施例中，投予化合物或含有所述化合物的調(diào) 配物至少2周、超過(guò)1個(gè)月到約5年，或超過(guò)1個(gè)月到約3年。
[0295] 在一些實(shí)施例中，以任何組合將治療劑與以下一種或一種以上治療劑組合或 組合利用：Akt選擇性抑制劑；PI3K抑制劑；多肽激酶C(PKC)抑制劑；法呢基轉(zhuǎn)移酶 (farnesyltransferase)抑制劑；肌楽/內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+ATP酶抑制劑；Ca++/調(diào)I丐蛋白（CaM) 相關(guān)性多肽激酶抑制劑；細(xì)胞周期素相關(guān)性激酶抑制劑；PH)(對(duì)苯二胺）；D609(黃原酸三 環(huán)癸-9-基酯）；PP1(4-氨基-5-(4-甲基苯基）-7-(叔丁基）吡唑并[3,4-d]_嘧啶）； AG-879 ( α -氰基-(3, 5-二叔丁基-4-羥基）硫代肉桂酰胺）；BAY 11-7082 ((E) -3- (4-甲 基苯基磺?；?2-丙烯腈）；毒胡蘿卜素（thapsigargin)，或RK-682(3-十六燒?；鵢5_輕 甲基-季酮酸）。
[0296] 免疫抑制劑的非限制性實(shí)例包括西羅莫司（Sirolimus)(雷帕霉素 (rapamycin))、環(huán)抱素（cyclosporin)、FK506、賽滅寧（cypermethrin)、第滅寧 (deltamethrin)、芬化利（fenvalerate)、酪氨酸憐酸化抑制劑 8 (tyrphostin 8)、甲 氨碟呤（methotrexate)、白皮杉醇（piceatannol)、金雀異黃素（genistein)、他克莫 司（tacrolimus)、雷帕霉素（rapamicin)、環(huán)磷酰胺（cyclophosphamide)、硫唑噪呤 (azathioprine)、疏基噪呤（mercaptopurine)、霉酌·酸酯（mycophenolate)和 FTY720。
[0297] Akt選擇性抑制劑的非限制性實(shí)例包括SH4 (1L-6-羥甲基-手性肌醇2-R-2-0-甲 基-3-0-十八烷基碳酸酯）；SH-5 (D-3-脫氧-2-0-甲基-肌醇I-(R)-2-甲氧基-3-(十八 燒氧基）丙基氫憐酸酯）；和SH_6 (D-2, 3-雙脫氧-肌醇I-(R)-2-甲氧基_3_ (十八燒氧 基）丙基氫磷酸酯）。
[0298] PI3K抑制劑的非限制性實(shí)例包括渥曼青霉素（wortmannin) ;LY294002(2-(4-嗎 啉基）-8-苯基-4H-1-苯并吡喃-4-酮）；D000(奧普斯特公司（Upstate)，英國(guó)米爾頓凱 恩斯（Milton Keynes，United Kingdom));和 D121(3-苯基-2-(9H-嘌呤-6-基硫基甲 基）-3H-喹唑啉-4-酮）。
[0299] 蛋白激酶C(PKC)抑制劑的非限制性實(shí)例包括R〇-318220(3-[l-[3_(脒基硫基） 丙基]-IH-吲哚基-3-基]-3-(1-甲基-IH-吲哚基-3-基）馬來(lái)酰亞胺甲烷磺酸酯）； 056976 (12-(2-氰基乙基）-6,7，12，13-四氫-13-甲基-5-氧代-5!1-吲哚并（2,3-&) 批咯并（3,4-c)_咔唑）；星形孢菌素（staurosporin);粗糠柴霉素（rottlerin) 丐磷 酸蛋白 C(calphastin C);GF 109203Χ(3-[1-(二甲基氨基丙基）吲哚-3-基]-4-(吲 哚-3-基）馬來(lái)酰亞胺鹽酸鹽）；金絲桃素（hypericin);鞘氨醇（sphingosine);米替福新 (miltefosine);氯化棕櫚?；?DL-肉毒堿（palmitoyl-DL-carnitine Cl);粗糠柴霉素； 和2,2'，3,3'，4,4'-六羥基_1，1，-聯(lián)苯_6,6，-二薄荷醇二甲基醚。
[0300] 法呢基轉(zhuǎn)移酶抑制劑的非限制性實(shí)例包括L-744,832 (C26H45N3O6SJHCl);或 Sarasar (SCH66336 或洛那法尼（Ionafarnib))。
[0301] Ca++/調(diào)鈣蛋白（CaM)相關(guān)性多肽激酶抑制劑的非限制性實(shí)例包括：2_羥 基-5-(2,5-二羥基苯甲基氨基）苯甲酸；KN-62(1-[N，0-雙（5-異喹啉磺?；?N-甲 基-L-酪氨?；鵠-4-苯基哌嗪）；KN-93(2-[N-(2-羥乙基）]-N-(4甲氧基苯磺?；氨 基-N-(4-氯肉桂基）-N-甲基苯甲胺）；或星形孢菌素（staurosporine) (AM-2282)。
[0302] 細(xì)胞周期素相關(guān)性激酶抑制劑的非限制性實(shí)例包括：羅斯維汀（roscovitine) (塞萊西布（Seliciclib)或CYC202);普瓦納醇A(purvalanol A);或靛玉紅（indirubin)。
[0303] 給藥方法和治療方案
[0304] 在一些實(shí)施例中，使用本文所述的試劑和/或組合物來(lái)制備針對(duì)病原體（例如，甲 型肝炎；乙型肝炎；脊髓灰質(zhì)炎；麻疹；腮腺炎；風(fēng)疹；白喉；百日咳；破傷風(fēng)；流感；水痘帶 狀皰疹病毒；輪狀病毒；流感；腦膜炎球菌??；肺炎；天花；霍亂；黑死??；黃熱病；結(jié)核病； 人乳頭瘤病毒）免疫的疫苗，其中上調(diào)免疫應(yīng)答將有益于所述治療。在一些實(shí)施例中，將 本文所述的試劑并入疫苗的調(diào)配物中。在一些實(shí)施例中，本文所述的試劑為疫苗佐劑。在 一些實(shí)施例中，注射用疫苗調(diào)配物的體積為約50 μ 1到約5ml。在一些實(shí)施例中，注射用疫 苗調(diào)配物的體積為約100 μ 1到約3. 5ml。在一些實(shí)施例中，注射用疫苗調(diào)配物的體積為約 200 μ 1到約2ml。在一些實(shí)施例中，注射用疫苗調(diào)配物的體積為約350 μ 1到約lml。在一些 實(shí)施例中，注射用疫苗調(diào)配物的體積為約500 μ 1。疫苗的體積是由投藥方法決定的。在某 些情況下，疫苗經(jīng)皮下或皮內(nèi)注射投予。在某些情況下，疫苗經(jīng)肌肉內(nèi)注射投予。在一些實(shí) 施例中，投予1劑的疫苗。在一些實(shí)施例中，投予多劑的疫苗（例如用于加強(qiáng)接種（booster shot))〇
[0305] 在一些實(shí)施例中，使用本文所述的試劑和/或組合物制備供預(yù)防性和/或治療性 治療至少部分從下調(diào)免疫應(yīng)答獲益的病癥（例如自體免疫性病癥、移植物排斥）的藥物。
[0306] 在一些實(shí)施例中，將本文所述的試劑和/或組合物用于治療病癥（例如甲型肝炎； 乙型肝炎；脊髓灰質(zhì)炎；麻疹；腮腺炎；風(fēng)疹；白喉；百日咳；破傷風(fēng)；流感；水痘帶狀皰疹病 毒；輪狀病毒；流感；腦膜炎球菌病；肺炎；天花；霍亂；黑死?。稽S熱??；結(jié)核??；人乳頭瘤 病毒；和癌癥）的方法中，其中上調(diào)免疫應(yīng)答將有益于所述治療。在一些實(shí)施例中，將本文 所述的試劑和/或組合物用于預(yù)防性和/或治療性治療至少部分從下調(diào)免疫應(yīng)答獲益的病 癥（例如自體免疫性病癥、移植物排斥）的方法中。
[0307] 在經(jīng)過(guò)醫(yī)生處置后患者的病狀未能改良的某些情況下，任選長(zhǎng)期投予本文所述的 試劑或組合物，也就是說(shuō)，持續(xù)一段較長(zhǎng)時(shí)間，包括持續(xù)患者終生，以便改善或者另外控制 或限制患者病癥的癥狀。
[0308] 在醫(yī)生處置后患者的狀態(tài)有所改良的情況下，任選繼續(xù)投予本文所述的試劑 或組合物；或者，暫時(shí)減少或暫時(shí)中止所投予的藥物劑量一段時(shí)間（即"休藥期（drug holiday)"）。休藥期的長(zhǎng)度任選在2天與1年之間變化，包括（僅舉例來(lái)說(shuō)）2天、3天、4 天、5天、6天、7天、10天、12天、15天、20天、28天、35天、50天、70天、100天、120天、150 天、180天、200天、250天、280天、300天、320天、350天或365天。休藥期期間，劑量減少包 括 10%到 100%，包括（僅舉例來(lái)說(shuō)）10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、 55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95% 或 100%。
[0309] 在患者的病狀出現(xiàn)改良后，必要時(shí)，投予維持劑量。隨后根據(jù)癥狀，將投藥的劑量 或頻率或二者降低到能夠維持得到改良的疾病、病癥或病狀的水平。在一些實(shí)施例中，患者 需要針對(duì)癥狀的任何復(fù)發(fā)進(jìn)行長(zhǎng)期間歇式治療。
[0310] 在一些實(shí)施例中，本文所述的試劑或組合物是適于單次投予精確劑量的單位劑 型。在單位劑型中，調(diào)配物被分成含有適量的本文所述的試劑或組合物的單位劑量。在一 些實(shí)施例中，單位劑量呈含有不連續(xù)量調(diào)配物的包裝的形式。非限制性實(shí)例是包裝片劑或 膠囊，或裝在小瓶或安瓿中的散劑。在一些實(shí)施例中，將水性懸浮液組合物包裝于不可再密 封的單劑量容器中。或者，使用可再密封的多劑量容器，在此情況下，所述組合物中通常包 括防腐劑。僅舉例來(lái)說(shuō)，不經(jīng)腸注射用調(diào)配物以單位劑型提供，其包括（但不限于）安瓿； 或以加有防腐劑的多劑量容器提供。
[0311] 本文所述的試劑或組合物的適宜每日劑量為每公斤體重約0. 01到10. Omg。在一 些實(shí)施例中，本文所述的試劑或組合物的適宜每日劑量為每公斤體重約〇. 05到7. 5mg。在 一些實(shí)施例中，本文所述的試劑或組合物的適宜每日劑量為每公斤體重約0. 1到5. Omg。在 一些實(shí)施例中，本文所述的試劑或組合物的適宜每日劑量為每公斤體重約0. 25到2. 5mg。 在一些實(shí)施例中，本文所述的試劑或組合物的適宜每日劑量為每公斤體重約0. 5到I. Omg。 對(duì)于較大的哺乳動(dòng)物，包括（但不限于）人類，指定的每日劑量范圍為約〇. 5mg到約lOOmg， 通常以分劑量投予，包括（但不限于）每日達(dá)4次，或以緩釋形式投予。適于口服的單位劑 型包括Img以上到50mg活性成分。由于關(guān)于個(gè)體治療方案的變量的數(shù)目較大，而且與這些 推薦值偏差相當(dāng)大的情形也很常見(jiàn)，故前述范圍僅供參考。任選根據(jù)許多變量來(lái)改變所述 劑量，所述變量不限于所用本文所述的試劑或組合物的活性、待治療的病癥或病狀、投藥模 式、個(gè)別個(gè)體的需求、所治療的病癥或病狀的嚴(yán)重程度和從業(yè)人員的判斷。
[0312] 所述治療方案的毒性和治療功效任選在細(xì)胞培養(yǎng)物或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物中確定，包括（但 不限于）測(cè)定LD50 (50%群體致死的劑量）和ED50 (對(duì)于50%群體治療有效的劑量）。毒 性與治療功效之間的劑量比率為治療指數(shù)，其表示為L(zhǎng)D50與ED50之間的比率。優(yōu)選展現(xiàn) 高治療指數(shù)的本文所述的試劑或組合物。任選使用從細(xì)胞培養(yǎng)分析和動(dòng)物研究獲得的數(shù) 據(jù)，制訂出用于人類的劑量范圍。本文所述的試劑或組合物的劑量?jī)?yōu)選在循環(huán)濃度（包括 ED50及最低限度毒性）的范圍內(nèi)。任選根據(jù)所用劑型和/或所用投藥途徑，在此范圍內(nèi)改 變劑量。
[0313] 實(shí)魁
[0314] 以下實(shí)例只是出于說(shuō)明的目的，而且作為非限制性實(shí)施例。根據(jù)上述教示，本發(fā)明 的許多修改、等效物和變更都是可能的，因此應(yīng)了解，在所附權(quán)利要求書的范圍內(nèi)，可以不 同于具體描述的方式實(shí)踐本發(fā)明。
[0315] 實(shí)例1-#用報(bào)告某閔構(gòu)律體的分析法
[0316] 用報(bào)告基因構(gòu)建體轉(zhuǎn)化多個(gè)細(xì)胞。所述報(bào)告基因構(gòu)建體具有受ODC啟動(dòng)子控制的 FLuc。使用標(biāo)準(zhǔn)96孔板將細(xì)胞分成96份等分試樣。對(duì)每一孔投予不同的小分子。將所述 小分子與細(xì)胞一起培育6小時(shí)。使用突光顯微鏡技術(shù)測(cè)定突光素酶的表達(dá)量。在體外驗(yàn)證 誘導(dǎo)熒光素酶基因表達(dá)的試劑。
[0317] 實(shí)例2-構(gòu)律TAT-MYC融合狀
[0318] 構(gòu)建 p-TAT-MYC
[0319] 使用含有HIV-1的TAT蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的同框N末端9個(gè)氨基酸的序列 (RKKRRQRRR(SEQ ID N0:6))的正向引物，以及去除了終止密碼子的反向引物，借助PCR法 擴(kuò)增人MYC的編碼區(qū)，來(lái)制備質(zhì)粒pTAT-Myc-V5-6XHis("6XHis"如SEQIDN0 :3所揭 示）。隨后將PCR產(chǎn)物克隆到pET101/D-Topo (英杰公司（Invitrogen))載體中，所述載體 包括C末端V5表位和6個(gè)組氨酸（SEQ ID NO :3)的純化標(biāo)簽。
[0320] 用于蛋白質(zhì)表達(dá)的細(xì)菌菌株
[0321] 通過(guò)用從表達(dá)AGG、AGA、AUA、CUA、CCC、GGA密碼子的tRNA的BL21羅塞塔細(xì)胞 (Rosetta cell ;諾瓦格公司（Novagen))分離的 pRARE(CamR)轉(zhuǎn)化 BL-21 Star? 大腸桿菌 菌株（英杰公司），產(chǎn)生BL-21 RARE細(xì)胞。
[0322] 蛋白質(zhì)的誘導(dǎo)和純化
[0323] 將pTAT-Myc-V5-6XHis("6XHis"如SEQIDN0:3所揭示）轉(zhuǎn)化到BL21RARE 細(xì)胞中，并在TB/Amp/Cam板上于37?下生長(zhǎng)過(guò)夜。使用分離的菌落接種5ml TB/Amp/Cam 起子培養(yǎng)物（starter culture)，并在37?下生長(zhǎng)過(guò)夜。用5ml起子培養(yǎng)物接種1升的TB/ Amp/Cam肉湯培養(yǎng)基，并生長(zhǎng)到0D600 = 0. 5,且在37°C下用0. 5mM IPTG誘導(dǎo)3小時(shí)。
[0324] 通過(guò)離心使細(xì)菌細(xì)胞聚結(jié)成團(tuán)，并將細(xì)胞小球再懸浮于溶解緩沖液（8M尿素、 IOOmM NaH2PO4UOmM Tris，pH值達(dá)8.0)，且在室溫下于振蕩器上溶解過(guò)夜。以29, OOOxg離 心30分鐘使溶解產(chǎn)物變澄清，并使用重力流將上清液施加到次氮基三乙酸鎳親和色譜柱 (凱杰公司（Qiagen))上。用25體積含有IOmM咪唑的溶解緩沖液洗滌色譜柱，隨后用含有 IOOmM咪唑的溶解緩沖液洗脫。
[0325] 使用Amicon Ultra離心超濾裝置（10, 000MWC0)濃縮蛋白質(zhì)，并逐步透析到透析 緩沖液（50mM NaH2P04、5mM Tris(pH7.0)、450mM NaCl、5%甘油、ImM DTT)中。如下進(jìn)行透 析：在含有4M尿素的透析緩沖液中透析2小時(shí)、在具有2M尿素的緩沖液中透析2小時(shí)，隨后 在單獨(dú)透析緩沖液中透析2小時(shí)。使用SDS-PAGE電泳以及考馬斯藍(lán)染色（coomassie blue staining)或者用抗V5抗體（1 : 5000;英杰公司）或抗c-Myc抗體（N-262，l : 2000; 圣塔克魯茲生物技術(shù)公司（Santa Cruz Biotechnology))的蛋白質(zhì)免疫印跡法（western blot)來(lái)驗(yàn)證蛋白質(zhì)的純度和尺寸。
[0326] 借助布拉德福德蛋白質(zhì)分析（Bradford protein assay ;西格瑪公司（Sigma))，并 與牛血清白蛋白的標(biāo)準(zhǔn)曲線相比較，來(lái)測(cè)量蛋白質(zhì)濃度。
[0327] 實(shí)例3-TAT-Mvc融合狀對(duì)免疫應(yīng)答的影響
[0328] 在體外評(píng)價(jià)作為免疫應(yīng)答調(diào)控劑的TAT-MYC融合肽。將原代T細(xì)胞活化培養(yǎng)物與 TAT-MYC融合肽一起培育72小時(shí)。隨后用CFSE對(duì)培養(yǎng)物染色。用CFSE染色后，借助FACS 法分析培養(yǎng)物。
[0329] 實(shí)例4-TAT-Mvc融合狀對(duì)免疫應(yīng)答的影響
[0330] 在體內(nèi)評(píng)價(jià)作為免疫應(yīng)答調(diào)控劑的TAT-MYC融合肽。通過(guò)對(duì)小鼠投予NP-KHL來(lái) 針對(duì)NP-KHL使小鼠免疫。針對(duì)所述抗原免疫后，立即將TAT-MYC融合肽投予小鼠。免疫后 24小時(shí)，取得小鼠的血清。分析血清中的抗體。或者，將TAT-MYC融合肽與免疫并行投予， 或在免疫之前投予。
[0331] 實(shí)例5-頂TAT-MYC作為疫苗佐劑的作用
[0332] 本實(shí)驗(yàn)是一項(xiàng)雙盲、隨機(jī)化、安慰劑對(duì)照的研究。設(shè)計(jì)它是為了評(píng)估在投予流感疫 苗和TAT-MYC融合肽后的免疫記憶。
[0333] 將參與者分為兩組。第I組將投予流感疫苗和生理鹽水。第II組將投予流感疫 苗和TAT-MYC融合肽。
[0334] 主要目的
[0335] 評(píng)估通過(guò)對(duì)接收流感疫苗的個(gè)體肌肉內(nèi)（頂）注射而投予的TAT-MYC融合肽的免 疫作用。
[0336] 次要目的
[0337] ?評(píng)估通過(guò)對(duì)接收流感疫苗的個(gè)體肌肉內(nèi)注射而投予的TAT-MYC融合肽的安全性 和耐受性。
[0338] 方法學(xué)
[0339] 第0天，對(duì)第I組和第II組均投予單劑同種流感疫苗。監(jiān)測(cè)個(gè)體的不良副作用2 小時(shí)。
[0340] 通過(guò)頂注射對(duì)第I組中未展現(xiàn)不良副作用的所有個(gè)體投予20uL生理鹽水。
[0341] 通過(guò)頂注射對(duì)第II組中未展現(xiàn)不良副作用的所有個(gè)體投予20uL TAT-MYC融合 肽。
[0342] 第1天，抽取所有個(gè)體的血液。測(cè)定T細(xì)胞計(jì)數(shù)并記錄下來(lái)。
[0343] 第20天，用來(lái)自相關(guān)流感病毒株的抗原激發(fā)所有個(gè)體。激發(fā)后1小時(shí)、激發(fā)后6 小時(shí)、激發(fā)后12小時(shí)和激發(fā)后24小時(shí)抽取所有個(gè)體的血液。測(cè)定T細(xì)胞含量。
[0344] 實(shí)例6-局部TAT-MYC作為疫苗佐劑的作用
[0345] 本實(shí)驗(yàn)是一項(xiàng)雙盲、隨機(jī)化、安慰劑對(duì)照的研究。設(shè)計(jì)它是為了評(píng)估在投予流感疫 苗和TAT-MYC融合肽后的免疫記憶。
[0346] 將參與者分為兩組。第I組將投予流感疫苗和生理鹽水。第II組將投予流感疫 苗和TAT-MYC融合肽。
[0347] 主要目的
[0348] 評(píng)估對(duì)接收流感疫苗的個(gè)體局部投予的TAT-MYC融合肽的免疫作用。
[0349] 次要目的
[0350] ?評(píng)估對(duì)接收流感疫苗的個(gè)體局部投予的TAT-MYC融合肽的安全性和耐受性。
[0351] 方法學(xué)
[0352] 第0天，對(duì)第I組和第II組均投予單劑同種流感疫苗。監(jiān)測(cè)個(gè)體的不良副作用2 小時(shí)。
[0353] 對(duì)第I組未展現(xiàn)不良副作用的所有個(gè)體施用一次安慰劑洗液。指導(dǎo)個(gè)體將洗液施 用到皮膚上疫苗接種的部位。
[0354] 對(duì)第II組未展現(xiàn)不良副作用的所有個(gè)體施用一次TAT-MYC洗液。指導(dǎo)個(gè)體將洗 液施用到皮膚上疫苗接種的部位。
[0355] 第1天，抽取所有個(gè)體的血液。測(cè)定T細(xì)胞計(jì)數(shù)并記錄下來(lái)。
[0356] 第20天，用來(lái)自相關(guān)流感病毒株的抗原激發(fā)所有個(gè)體。激發(fā)后1小時(shí)、激發(fā)后6 小時(shí)、激發(fā)后12小時(shí)和激發(fā)后24小時(shí)抽取所有個(gè)體的血液。測(cè)定T細(xì)胞含量。
[0357] 實(shí)例7-下調(diào)MYC表汰的試劑對(duì)RA的影響
[0358] 主要目的
[0359] 評(píng)估在對(duì)患有活動(dòng)期類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA)的個(gè)體每周皮下給予借助本文揭示的 方法所鑒別的可降低MYC表達(dá)的試劑（下文中稱為"X試劑"）后該試劑的穩(wěn)態(tài)谷血清濃度。
[0360] 次要目的
[0361] ?評(píng)估經(jīng)皮下投予患RA個(gè)體的X試劑的安全性和耐受性；評(píng)估經(jīng)皮下投予患RA 個(gè)體的X試劑的免疫原性；和檢測(cè)皮下投予X試劑對(duì)患RA個(gè)體的類風(fēng)濕因子（rheumatoid factor, RF)血清含量的影響。
[0362] 方法學(xué)
[0363] 本實(shí)驗(yàn)是一項(xiàng)雙盲、隨機(jī)化、安慰劑對(duì)照的平行組多劑量研究。設(shè)計(jì)它是為了評(píng)估 在對(duì)患RA個(gè)體皮下投予X試劑后所述試劑的穩(wěn)態(tài)谷血清濃度。
[0364] 根據(jù)計(jì)算機(jī)生成的隨機(jī)化方案，對(duì)個(gè)體隨機(jī)分組，以3 : 1比率，基于在篩選訪查 時(shí)獲得的體重使5個(gè)平行組中的1個(gè)接收X試劑或安慰劑。
[0365] 第1天，個(gè)體將基于其體重范圍接收單次IV輸注（負(fù)荷劑量）的X試劑或安慰 齊IJ。在開始皮下治療前，使用經(jīng)過(guò)校準(zhǔn)的恒定速率輸注泵經(jīng)靜脈內(nèi)投予X試劑或安慰劑，歷 時(shí)約30分鐘。IV輸注完成后約1小時(shí)，個(gè)體將接收從小瓶或使用預(yù)填充注射器抽取的其指 定皮下劑量的X試劑或安慰劑。X試劑或安慰劑將由臨床研究的現(xiàn)場(chǎng)工作人員每周經(jīng)皮下 途徑投予，劑量與第1天時(shí)的皮下劑量相同，總共12次皮下注射。
[0366] 在整個(gè)研究期間，監(jiān)測(cè)個(gè)體的不良事件（AE)。整個(gè)研究期間，將在選定的時(shí)間點(diǎn)進(jìn) 行體檢、生命征象測(cè)量和臨床實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)。在第1天IV注射之前和結(jié)束時(shí)收集用于PK分析 的血樣。此外，在第8、15、22、29、36、43、50、57、64、71和78天給予每周SC劑量的X試劑之 前收集血樣，用于評(píng)估穩(wěn)態(tài)Cmin濃度。也在第72、74、75和76天時(shí)收集單個(gè)血樣，用于評(píng) 價(jià)穩(wěn)態(tài)Cmax、Tmax和AUC(TAU)(其中TAU = 7天），并在研究撤出時(shí)抽取血樣（第85天）。 在第1、15、29、43、57、71和85天投予X試劑之前獲得血樣用于評(píng)估免疫原性。在第1、8、 15、29、57和85天給藥之前獲得血樣用于測(cè)定RF。
[0367] 完成12周的X試劑或安慰劑皮下給藥的個(gè)體符合條件進(jìn)入長(zhǎng)期延續(xù)期（long term extension, LTE)。對(duì)于進(jìn)入LTE的個(gè)體，第85天時(shí)將投予第一劑X試劑。
[0368] 個(gè)體的數(shù)量
[0369] 介于48與72名之間數(shù)量的個(gè)體將隨機(jī)進(jìn)行研究治療。
[0370] 診斷和納入標(biāo)準(zhǔn)
[0371] 超過(guò)18歲的患有活動(dòng)期RA的男性或女性將能夠參與本研究。個(gè)體必須滿足 美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)（American College ofRheumatology，ACR;前身為美國(guó)風(fēng)濕病醫(yī)學(xué)會(huì) (American Rheumatism Association，ARA))有關(guān)RA的分類標(biāo)準(zhǔn)，并患有活動(dòng)期病癥。個(gè) 體須從初始診斷時(shí)起患有RA至少1年。
[0372] 盡管本文中已經(jīng)顯示和描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例，但所屬領(lǐng)域技術(shù)人員將易于 了解，這些實(shí)施例只是作為實(shí)例提供。在不偏離本發(fā)明的情況下，所屬領(lǐng)域技術(shù)人員現(xiàn)將進(jìn) 行多種變更、改變和取代。應(yīng)了解，本文所述的本發(fā)明各實(shí)施例的各種替代方案都可用于實(shí) 踐本發(fā)明。以下權(quán)利要求書將界定本發(fā)明的范圍，并且其中將涵蓋在這些權(quán)利要求和其等 效內(nèi)容范圍內(nèi)的方法和結(jié)構(gòu)。
【權(quán)利要求】
1. 一種用于調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的醫(yī)藥組合物，其包含： (a) 來(lái)源于病原體的抗原部分； (b) 融合肽，其包含 (i)轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列； (i)MYC序列；和任選地 ⑴一個(gè)或一個(gè)以上將所述轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列與所述MYC序列相連接的分子；和 (c) 醫(yī)藥學(xué)上可接受的賦形劑。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中所述融合肽具有式（I): 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-MYC序列。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中所述融合肽具有式（II): 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-X-MYC序列， 其中-X-是將所述轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列與所述MYC序列相連接的分子。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中所述融合肽具有式（II): 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-X-MYC序列， 其中X是至少一個(gè)氨基酸。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的醫(yī)藥組合物，其中所述融合肽具有以下序列： MRKKRRQRRRMDFFRVVENQQPPATMPLNVSFTNRNYDLDYDSVQPYFYCDEEENFYQQQQQSELQPPAPSE DIWKKFELLPTPPLSPSRRSGLCSPSYVAVTPFSLRGDNDGGGGSFSTADQLEMVTELLGGDMVNQSFICDPDDETF IKNIIIQDCMWSGFSAAAKLVSEKLASYQAARKDSGSPNPARGHSVCSTSSLYLQDLSAAASECIDPSVVFPYPLND SSSPKSCASQDSSAFSPSSDSLLSSTESSPQGSPEPLVLHEETPPTTSSDSEEEQEDEEEIDVVSVEKRQAPGKRSE SGSPSAGGHSKPPHSPLVLKRCHVSTHQHNYAAPPSTRKDYPAAKRVKLDSVRVLRQISNNRKCTSPRSSDTEENVK RRTHNVLERQRRNELKRSFFALRDQIPELENNEKAPKVVILKKATAYILSVQAEEQKLISEEDLLRKRREQLKHKLE QLRKGELNSKLEGKPIPNPLLGLDSTRTGHHHHHH。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一權(quán)利要求所述的醫(yī)藥組合物，其中所述抗原部分是病原 體、類毒素、肽、核酸序列、多糖或其組合。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一權(quán)利要求所述的醫(yī)藥組合物，其中所述抗原部分來(lái)源 于病原體，所述病原體選自：甲型肝炎；乙型肝炎；脊髓灰質(zhì)炎；麻疹；腮腺炎；風(fēng)疹；白喉； 百日咳；破傷風(fēng)；流感；水痘帶狀皰疹病毒；輪狀病毒；腦膜炎球菌；肺炎；天花；霍亂；黑死 ?。稽S熱??；結(jié)核?。蝗巳轭^瘤病毒；或其組合。
8. 根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一權(quán)利要求所述的醫(yī)藥組合物，其經(jīng)調(diào)配用于局部投藥。
9. 一種融合肽的用途，其用于制造供調(diào)節(jié)個(gè)體的免疫應(yīng)答的藥物，所述融合肽包含： (a)轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列；(b)MYC序列；和任選使用的（c) 一個(gè)或一個(gè)以上將所述轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列與所 述MYC序列相連接的分子；其中所述藥物是在投予疫苗之前、之后或期間投予。
10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其中所述融合肽具有式（I): 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-MYC序列。
11. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其中所述融合肽具有式（II): 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-X-MYC序列， 其中-X-是將所述轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列與所述MYC序列相連接的分子。
12. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其中所述融合肽具有式（II): 轉(zhuǎn)運(yùn)肽序列-X-MYC序列， 其中X是至少一個(gè)氨基酸。
13. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其中所述融合肽具有以下序列： MRKKRRQRRRMDFFRVVENQQPPATMPLNVSFTNRNYDLDYDSVQPYFYCDEEENFYQQQQQSELQPPAPSE DIWKKFELLPTPPLSPSRRSGLCSPSYVAVTPFSLRGDNDGGGGSFSTADQLEMVTELLGGDMVNQSFICDPDDETF IKNIIIQDCMWSGFSAAAKLVSEKLASYQAARKDSGSPNPARGHSVCSTSSLYLQDLSAAASECIDPSVVFPYPLND SSSPKSCASQDSSAFSPSSDSLLSSTESSPQGSPEPLVLHEETPPTTSSDSEEEQEDEEEIDVVSVEKRQAPGKRSE SGSPSAGGHSKPPHSPLVLKRCHVSTHQHNYAAPPSTRKDYPAAKRVKLDSVRVLRQISNNRKCTSPRSSDTEENVK RRTHNVLERQRRNELKRSFFALRDQIPELENNEKAPKVVILKKATAYILSVQAEEQKLISEEDLLRKRREQLKHKLE QLRKGELNSKLEGKPIPNPLLGLDSTRTGHHHHHH。
14. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其中所述疫苗選自由以下組成的群組：甲型肝炎疫 苗；乙型肝炎疫苗；脊髓灰質(zhì)炎疫苗；麻疹疫苗；腮腺炎疫苗；風(fēng)疹疫苗；白喉疫苗；百日咳 疫苗；破傷風(fēng)疫苗；流感疫苗；水痘帶狀皰疹病毒疫苗；輪狀病毒疫苗；腦膜炎球菌疫苗； 肺炎疫苗；天花疫苗；霍亂疫苗；黑死病疫苗；黃熱病疫苗；結(jié)核病疫苗；人乳頭瘤病毒疫 苗；癌癥疫苗；或其組合。
15. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的用途，其中所述疫苗包含來(lái)源于贅生性細(xì)胞的抗原部分。
【文檔編號(hào)】A61K38/16GK104353066SQ201410479685
【公開日】2015年2月18日 申請(qǐng)日期:2009年8月28日 優(yōu)先權(quán)日:2008年8月28日
【發(fā)明者】?jī)?yōu)素褔·里菲利, 布賴恩·柯蒂斯·特納 申請(qǐng)人:泰加生物工藝學(xué)公司