天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法，包括如下步驟：a.取凍存新鮮豬腦，解凍，清洗，勻漿，分離，收集沉淀腦蛋白；b.將沉淀蛋白干燥粉碎，得干燥蛋白粉；c.將干燥蛋白粉水解，稀釋?zhuān){(diào)pH值為7-9，過(guò)濾，得酸水解液；d.將酸水解液加活性炭，分離，收集上清液，調(diào)pH值為2.5-4.5，沉淀再分離，合并上清液得粗提液；e.將粗提液上陽(yáng)離子交換柱，用水沖洗至pH值為6.5-7.5，氨水洗脫，收集洗脫液，加氫氧化鈉，調(diào)pH值至6.6-7.5，﹣20℃保存，得冷凍液；f.將冷凍液自然解凍，分離，收集上清液，再超濾，收集過(guò)濾液，干燥即得天然復(fù)合氨基酸原料。
【專(zhuān)利說(shuō)明】天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本單位，賦予蛋白質(zhì)特定的分子結(jié)構(gòu)形態(tài)，使他的分子 具有生化活性。蛋白質(zhì)是生物體內(nèi)重要的活性分子，包括催化新陳代謝的酵素和酶。氨基 酸是構(gòu)成生物體蛋白質(zhì)并同生命活動(dòng)有關(guān)的最基本的物質(zhì)，是在生物體內(nèi)構(gòu)成蛋白質(zhì)分子 的基本單位，與生物的生命活動(dòng)有著密切的關(guān)系。它在抗體內(nèi)具有特殊的生理功能，是生物 體內(nèi)不可缺少的營(yíng)養(yǎng)成分之一。氨基酸在人體內(nèi)通過(guò)代謝可以發(fā)揮下列一些作用：①合成 組織蛋白質(zhì)；②變成酸、激素、抗體、肌酸等含氨物質(zhì)；③轉(zhuǎn)變?yōu)樘妓衔锖椭?；④氧?成二氧化碳和水及尿素，產(chǎn)生能量。因此，氨基酸在人體中的存在，不僅提供了合成蛋白質(zhì) 的重要原料，而且對(duì)于促進(jìn)生長(zhǎng)，進(jìn)行正常代謝、維持生命提供了物質(zhì)基礎(chǔ)。
[0003] 氨基酸大致可以分為三類(lèi)：1、必需氨基酸：指人體或其它脊椎動(dòng)物不能合成或合 成速度遠(yuǎn)不適應(yīng)機(jī)體的需要，必需由食物蛋白供給，這些氨基酸稱(chēng)為必需氨基酸。成人必 需氨基酸的需要量約為蛋白質(zhì)需要量的20-37%。共有8種，分別是：賴(lài)氨酸，促進(jìn)大腦發(fā) 育，是肝及膽的組成成分，能促進(jìn)脂肪代謝，調(diào)節(jié)松果腺、乳腺、黃體及卵巢，防止細(xì)胞退化； 色氨酸：促進(jìn)胃液及胰液的產(chǎn)生；苯丙氨酸：參與消除腎及膀胱功能的損耗；蛋氨酸（甲硫 氨酸）：參與組成血紅蛋白、組織與血清，有促進(jìn)脾臟、胰臟及淋巴的功能；蘇氨酸：有轉(zhuǎn)變某 些氨基酸達(dá)到平衡的功能；異亮氨酸：參與胸腺、脾臟及腦下腺的調(diào)節(jié)以及代謝；腦下腺屬 總司令部作用于甲狀腺、性腺；亮氨酸：作用平衡異亮氨酸；纈氨酸：作用于黃體、乳腺及卵 巢。2、半必需氨基酸和條件必需氨基酸：精氨酸：精氨酸與脫氧膽酸制成的復(fù)合制劑（明諾 芬)是主治梅毒、病毒性黃疸等病的有效藥物；組氨酸：可作為生化試劑和藥劑，還可用于治 療心臟病，貧血，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等的藥物。人體雖能夠合成精氨酸和組氨酸，但通常不能滿(mǎn) 足正常的需要，因此，又被稱(chēng)為半必需氨基酸或條件必需氨基酸，在幼兒生長(zhǎng)期這兩種是必 需氨基酸。人體對(duì)必需氨基酸的需要量隨著年齡的增加而下降，成人比嬰兒顯著下降。3、 非必需氨基酸：指人或其它脊椎動(dòng)物自己能由簡(jiǎn)單的前體合成，不需要從食物中獲得的氨 基酸，例如甘氨酸、丙氨酸等氨基酸。如果人體缺乏任何一種必需氨基酸，就可導(dǎo)致生理功 能異常，影響機(jī)體代謝的正常進(jìn)行，最后導(dǎo)致疾病。同樣，如果人體內(nèi)缺乏某些非必需氨基 酸，會(huì)產(chǎn)生機(jī)體代謝障礙。精氨酸和瓜氨酸對(duì)形成尿素十分重要；胱氨酸攝入不足就會(huì)引起 胰島素減少，血糖升高。又如創(chuàng)傷后胱氨酸和精氨酸的需要量大增，如缺乏，即使熱能充足 仍不能順利合成蛋白質(zhì)。如果人體缺乏或減少其中某一種，人體的正常生命代謝就會(huì)受到 障礙，甚至導(dǎo)致各種疾病的發(fā)生或生命活動(dòng)終止。所以，人體需要不斷補(bǔ)充氨基酸，一些疾 病需要依靠氨基酸治療。
[0004] 現(xiàn)在人們常使用的氨基酸產(chǎn)品是人工合成的非天然的復(fù)方氨基酸輸液。這種復(fù)方 氨基酸輸液具有促進(jìn)人體蛋白質(zhì)代謝正常，糾正負(fù)氮平衡，補(bǔ)充蛋白質(zhì)，加快傷口愈合的作 用。氨基酸輸液在能量供給充足的情況下，可進(jìn)入組織細(xì)胞，參與蛋白質(zhì)的合成代謝，獲得 正氮平衡，并生成酶類(lèi)、激素、抗體、結(jié)構(gòu)蛋白，促進(jìn)組織愈合，恢復(fù)正常生理功能。但是現(xiàn)有 復(fù)合氨基酸產(chǎn)品都有很大的副作用，如復(fù)方氨基酸注射液可致疹樣過(guò)敏反應(yīng)，常有惡心、嘔 吐、胸悶、心悸、發(fā)冷、發(fā)熱或頭痛等情況，使用不安全。
[0005] 天然復(fù)合氨基酸可以克服人工合成的非天然復(fù)方氨基酸的上述缺陷，使用更加安 全。但是，現(xiàn)有的制備方法總氨基酸收率低，成本高。本領(lǐng)域技術(shù)人員渴望獲得一種氨基酸 收率高、成本低的天然復(fù)合氨基酸產(chǎn)品的制備方法，但一直沒(méi)有解決這個(gè)技術(shù)問(wèn)題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題就是提供一種氨基酸收率高、成本低的天然復(fù)合氨基酸 廣品的制備方法。
[0007] 為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法包括如下步 驟： a. 取凍存新鮮豬腦，解凍，清洗，勻漿，將漿液加入濃鹽酸攪勻、然后離心分離，去除上 層乳濁液，收集沉淀物，即得沉淀腦蛋白； b. 將經(jīng)上述步驟得到的沉淀蛋白干燥，粉碎，得干燥蛋白粉； c. 將經(jīng)上述步驟得到的干燥蛋白粉加入硫酸水解，然后稀釋?zhuān){(diào)pH值為7-9,再過(guò)濾， 得酸水解液； d. 將經(jīng)上述步驟所得酸水解液加活性炭，離心分離，收集上清液，調(diào)pH值為2. 5-4. 5， 抽上清液，余沉淀再離心分離，去除草酸鈣沉淀，合并上清液得粗提液； e. 將經(jīng)上述步驟所得粗提液上陽(yáng)離子交換柱，用水沖洗至pH值為6. 5-7. 5,去除剩 余草酸及鈣離子，用氨水洗脫，收集洗脫液，加入氫氧化鈉減壓濃縮去氨水，再調(diào)pH值至 6. 6-7. 5,以-20°C保存，得冷凍液； f. 將經(jīng)上述步驟所得冷凍液自然解凍，離心分離，去除酪氨酸及相關(guān)雜質(zhì)，收集上清 液，再用超濾膜超濾，收集過(guò)濾液，干燥即得天然復(fù)合氨基酸原料。
[0008] 所述a步驟，取凍存新鮮豬腦，加水浸泡自然解凍，再用水清洗，然后加入豬腦重 2-4倍重量的純化水用膠體磨勻漿15min，將勻漿所得漿液倒入提取罐中加熱至70-100°C 后保溫10-30min，再按豬腦重每lkg加入2-5 ml的比例加入濃度為12mol/L的濃鹽酸攪 勻、冷卻至10-50?，再以3000-4000r/min的速度離心分離5min，然后去除上層乳濁液，收 集沉淀物，即得沉淀腦蛋白。
[0009] 所述b步驟，將經(jīng)a步驟所得沉淀蛋白平鋪于光滑干凈的平板不銹鋼容器上，平整 表面，使之厚度為1厘米，置于鼓風(fēng)千燥箱內(nèi)，以78-85°C條件下密閉加熱千燥15-20小時(shí)， 然后粉碎，得千燥蛋白粉。
[0010] 所述C步驟，將經(jīng)b步驟所得干燥蛋白粉按干燥蛋白粉1kg加入2000ml硫酸的比 例加入濃度6mol/L的硫酸，在110-121°C條件下水解8_l2h,再以干燥蛋白粉重量2-5倍水 稀釋?zhuān)缓笥脷溲趸}溶液調(diào)PH值為 7· 5-8. 5，再用200_3〇0目濾布過(guò)濾，去除硫酸鈣沉淀， 得酸水解液，所述氫氧化興溶液為按1kg豬腦加入40_ 6〇g氧氧化I丐及100ml純化水的比例 溶解所得。
[0011] 所述d步驟，將經(jīng)C步驟所得酸水解液加熱至75-80°C，再加0· 5-1%活性炭，繼續(xù) 加熱至80-9CTC，然后保溫Ιδη?η，以3〇00-4000r/min速度離心分離δη?η，收集上清液，用草 酸溶液調(diào)pH值為2. 5-4· 5,靜置l-3h，抽上清液，余沉淀以3〇〇〇-4000r/min速度離心分離 5min，去除草酸鈣沉淀，合并上清液得粗提液，所述草酸溶液以每lkg豬腦加1(M5g草酸及 100ml純化水的比例加熱溶解制得。
[0012]所述e步驟，將d步驟所得粗提液上陽(yáng)離子交換柱，用水沖洗至pH值為6· 5-7. 5， 去除剩余草酸及鈣離子，再用1. 8_2mol/L氨水洗脫，收集洗脫液，使pH值為8_ 〇-12· 〇,再按 lkg豬腦加入l_3g氫氧化鈉的比例加入氫氧化鈉減壓濃縮去氨水，濃縮至豬腦重^5^/3， 然后用6mol鹽酸調(diào)pH值至6. 6-7. 5,再以-2(TC條件保存24h，得冷凍液。 '
[0013] 所述f步驟，將e步驟所得冷凍液自然解凍，在0°C條件下以3000-4000r/min速度 離心分離，去除酪氨酸及相關(guān)雜質(zhì)，收集上清液，再用10000分子量超濾膜超濾，收集過(guò)濾 液，然后以-60°c真空干燥箱或噴霧干燥，得天然復(fù)合氨基酸原料。 U
[0014] 本發(fā)明的方法將沉淀腦蛋白先千燥、粉碎制得干燥蛋白粉，再加入硫酸水解，能極 大地提局總Μ基酸的收率。
[0015] 本發(fā)明的方法是 申請(qǐng)人:經(jīng)過(guò)反復(fù)研究試驗(yàn)所得。
[0016]在試驗(yàn)中，按照統(tǒng)一要求操作，滿(mǎn)足酸水解條件，其他條件相同，僅僅對(duì)沉淀腦蛋 白千燥的狀態(tài)不同，最后所得總氮及氨基酸含量結(jié)果如下：

【權(quán)利要求】
1. 一種天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法，其特征在于包括如下步驟： a. 取凍存新鮮豬腦，解凍，清洗，勻漿，將漿液加入濃鹽酸攪勻、然后離心分離，去除上 層乳濁液，收集沉淀物，即得沉淀腦蛋白； b. 將經(jīng)上述步驟得到的沉淀蛋白千燥，粉碎，得干燥蛋白粉； c. 將經(jīng)上述步驟得到的干燥蛋白粉加入硫酸水解，然后稀釋?zhuān){(diào)pH值為7-9,再過(guò)濾， 得酸水解液； d. 將經(jīng)上述步驟所得酸水解液加活性炭，離心分離，收集上清液，調(diào)pH值為2. 5-4. 5， 抽上清液，余沉淀再離心分離，去除草酸鈣沉淀，合并上清液得粗提液； e. 將經(jīng)上述步驟所得粗提液上陽(yáng)離子交換柱，用水沖洗至pH值為6. 5-7_ 5,去除剩 余草酸及鈣離子，用氨水洗脫，收集洗脫液，加入氫氧化鈉減壓濃縮去氨水，再調(diào)pH值至 6. 6-7. 5,以-20°C保存，得冷凍液； f. 將經(jīng)上述步驟所得冷凍液自然解凍，離心分離，去除酪氨酸及相關(guān)雜質(zhì)，收集上清 液，再用超濾膜超濾，收集過(guò)濾液，干燥即得天然復(fù)合氨基酸原料。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法，其特征在于：所述a步驟，取 凍存新鮮豬腦，加水浸泡自然解凍，再用水清洗，然后加入豬腦重2-4倍重量的純化水用膠 體磨勻漿l 5min，將勻漿所得漿液倒入提取罐中加熱至70-100°C后保溫10-30min，再按豬 腦重每lkg加入2-5 ml的比例加入濃度為12mol/L的濃鹽酸攪勻、冷卻至l〇-5(TC,再以 3000-4000r/min的速度離心分離 5min，然后去除上層乳濁液，收集沉淀物，即得沉淀腦蛋 白。
3·根據(jù)權(quán)利要求1所述天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法，其特征在于：所述b步驟，將 經(jīng)a步驟所得沉淀蛋白平鋪于光滑干凈的平板不銹鋼容器上，平整表面，使之厚度為1厘 米，置于鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)，以78_ 85°C條件下密閉加熱干燥15-2〇小時(shí)，然后粉碎，得干燥蛋白 粉。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法，其特征在于：所述c步驟，將 經(jīng)b步驟所得千燥蛋白粉按干燥蛋白粉lkg加入2000ml硫酸的比例加入濃度6mol/L的硫 酸，在110-121°C條件下水解8-l 2h，再以干燥蛋白粉重量2-5倍水稀釋?zhuān)缓笥脷溲趸}溶 液調(diào)pH值為7· 5_8· 5,再用2〇0_3〇0目濾布過(guò)濾，去除硫酸鈣沉淀，得酸水解液，所述氫氧化 鈣溶液為按lkg豬腦加入40-60g氫氧化鈣及l(fā)〇〇 mi純化水的比例溶解所得。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法，其特征在于：所述d步驟， 將經(jīng)c步驟所得酸水解液加熱至75-80°C，再加〇· 5-1%活性炭，繼續(xù)加熱至80-9(TC，然后 保溫15min,以3000-4000r/min速度離心分離5min，收集上清液，用草酸溶液調(diào)pH值為 2· 5_4· 5,靜置l_3h,抽上清液，余沉淀以3〇0〇-40〇〇r/ min速度離心分離5min，去除草酸鈣 沉淀，合并上清液得粗提液，所述草酸溶液以每lkg豬腦加 i〇-15g草酸及10〇ml純化水的 比例加熱溶解制得。
6·根據(jù)權(quán)利要求1所述天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法，其特征在于：所述e步驟，將 d步驟所得粗提液上陽(yáng)離子交換柱，用水沖洗至pH值為6· 5-7. 5,去除剩余草酸及鈣離子， 再用1. 8_2mol/L氨水洗脫，收集洗脫液，使pH值為& 0-12. 〇,再按lkg豬腦加入l-3g氫氧 化鈉的比例加入氫氧化鈉減壓濃縮去氨水，濃縮至豬腦重丨/5- 1/3,然后用6mol鹽酸調(diào)pH 值至6· 6-7. 5,再以-20°C條件保存24h，得冷凍液。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述天然復(fù)合氨基酸原料的制備方法，其特征在于：所述f步驟，將 e步驟所得冷凍液自然解凍，在〇°C條件下以3000-4000r/min速度離心分離，去除酪氨酸及 相關(guān)雜質(zhì)，收集上清液，再用10000分子量超濾膜超濾，收集過(guò)濾液，然后以-60°C真空干 燥箱或噴霧干燥，得天然復(fù)合氨基酸原料。
【文檔編號(hào)】A61K35/30GK104189007SQ201410454718
【公開(kāi)日】2014年12月10日 申請(qǐng)日期:2014年9月9日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月9日
【發(fā)明者】釧助勝, 李慶忠, 耿華靖, 彭亞聰, 彭亞琦, 徐芳兵, 彭長(zhǎng)福 申請(qǐng)人:湖南利諾生物藥業(yè)有限公司