一種疏水性介孔納米材料的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種疏水性介孔納米材料的應(yīng)用，所述的疏水性介孔納米材料是由表面含有羥基的有序介孔材料與偶聯(lián)化試劑反應(yīng)而得，所述的應(yīng)用是以所述的疏水性介孔納米材料制備用于增強低強度超聲波空化效應(yīng)強度的試劑；所述的低強度超聲波的頻率為0.1～50MHz，強度為0.2～1000W/cm2。經(jīng)體內(nèi)外實驗表明：本發(fā)明提供的疏水性納米介孔材料與低強度超聲波具有明顯的協(xié)同作用，具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性；尤其在增溶后，與低強度超聲波聯(lián)用，可明顯抑制腫瘤生長，具有廣闊的應(yīng)用前景。
【專利說明】一種疏水性介孔納米材料的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明是涉及一種疏水性介孔納米材料的應(yīng)用，是本 申請人:于2012年6月20日 提交的申請?zhí)枮镃N201210204334. 1的分案申請。

【背景技術(shù)】
[0002] 目前腫瘤的發(fā)病率越來越高，腫瘤已嚴(yán)重地威脅著人們的生存質(zhì)量和生命，惡性 腫瘤已成為本世紀(jì)危害人類健康的頭號殺手。針對腫瘤的治療主要包括手術(shù)切除、化學(xué)療 法和放射療法；但三種治療方法均存在明顯的毒副作用，均不能單獨成為一種根治腫瘤的 有效手段。因此，尋求一種安全、有效、快捷、毒副作用小的治療手段成為腫瘤治療研究中的 新課題。
[0003] 超聲治療作為一種非侵入式的腫瘤治療方案，越來越受到醫(yī)學(xué)界的關(guān)注。超聲治 療在治療腫瘤的應(yīng)用已有近百年歷史。近年對超聲生物學(xué)效應(yīng)的研究表明，低頻超聲科作 為一種治療腫瘤的潛在手段，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡是超聲治療惡性腫瘤的重要生物學(xué)機制之一。 低頻超聲在組織中衰減低，與同等聲壓級下的高頻超聲相比，低頻超聲在組織中進(jìn)入組織 的深度更大，且低頻低強度超聲對組織引起的熱效應(yīng)較弱。有研究表明，正常細(xì)胞對低頻 超聲的生物學(xué)效應(yīng)有很好的抵抗力，而惡性腫瘤則更敏感一些。因此，若能實現(xiàn)采用低頻 超聲實現(xiàn)有效的腫瘤治療，則可避免傳統(tǒng)上基于高強度超聲加熱治療所帶來的一些不利因 素。同時，對納米材料生物效應(yīng)及其毒理學(xué)的研究發(fā)明，部分納米材料可引起細(xì)胞結(jié)構(gòu)的改 變，產(chǎn)生對細(xì)胞的毒性，從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。也有文獻(xiàn)公開了低強度超聲可增強ADR、AZQ對 CHO、MCF-7WT細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，文獻(xiàn)分析這可能是超聲使細(xì)胞內(nèi)聚集量增加所致。超聲 也可用于使微粒中的藥物進(jìn)入細(xì)胞組織。
[0004] 目前納米材料和器件在腫瘤治療中的應(yīng)用也進(jìn)行了廣泛深入的研究。無機納米介 孔結(jié)構(gòu)材料（如介孔二氧化硅等）由于其具有均一的孔道結(jié)構(gòu)、大的孔容和比表面積、表面 易于化學(xué)改性以及良好的生物相容性等優(yōu)異的性能，在生物領(lǐng)域被廣泛應(yīng)用于生物活性酶 的吸附固定、生物催化、生物傳感器、DNA的傳遞釋放以及藥物控釋等。有文獻(xiàn)（科技導(dǎo)報 2008, 26(22)，P66-70)公開了采用碳納米管能夠強化低頻低強度超聲誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡效 果，有可能成為腫瘤治療的一種有效手段。但其具體作用機制尚未得到完整認(rèn)識，確定納米 顆粒類型、顆粒濃度、超聲作用時間、強度、頻率等適用于治療的參數(shù)還存在一定困難。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種疏水性介孔納米材料的 應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0007] -種疏水性介孔納米材料的應(yīng)用，所述的疏水性介孔納米材料是由表面含有 羥基的有序介孔材料與偶聯(lián)化試劑反應(yīng)而得，所述的有序介孔材料為MCM-41、MCM-48、 SBA-15或MSU，所述的偶聯(lián)化試劑為六甲基二硅氮烷、四甲基二硅氮烷、1，3_二乙烯 基-1，1，3, 3-四甲基二娃氣燒、二甲基氣娃燒、二乙基氣娃燒、十二氣半基二甲氧基娃燒、 三氟丙基三乙氧基硅烷或十七氟癸基三甲氧基硅烷；其特征在于：以所述的疏水性介孔納 米材料制備用于增強低強度超聲波空化效應(yīng)強度的試劑；所述的低強度超聲波的頻率為 0· 1 ?50MHz，強度為 0· 2 ?1000W/cm2。
[0008] 作為一種優(yōu)選方案，所述的應(yīng)用是以所述的疏水性介孔納米材料制備用于低強度 超聲波治療腫瘤的試劑。
[0009] 作為進(jìn)一步優(yōu)選方案，上述應(yīng)用是首先采用增溶劑增溶所述的疏水性介孔納米材 料。
[0010] 作為進(jìn)一步優(yōu)選方案，采用增溶劑增溶所述的疏水性介孔納米材料的操作如下： 將疏水性介孔納米材料和增溶劑加入水中，在〇?100°c攪拌2?48小時，然后用水洗滌， 干燥；疏水性介孔納米材料與增溶劑的質(zhì)量比為1 : (0. 2?5)。
[0011] 作為進(jìn)一步優(yōu)選方案，所述的增溶劑選自吐溫-80、洛泊沙姆188、卵磷脂、羥丙 基環(huán)糊精、羥乙基環(huán)糊精、α-環(huán)糊精、 Y-環(huán)糊精、磺丁基醚-β-環(huán)糊精、麥芽 糖-β -環(huán)糊精、2, 3, 6- 丁磺基鈉-β -環(huán)糊精、羥丙基-α -環(huán)糊精、羥丙基-γ -環(huán)糊精中 的任意一種。
[0012] 作為一種優(yōu)選方案，所述的有序介孔材料的孔道直徑為2?50nm、粒徑為20? 800nm、比表面積為100?2000m 2/g。
[0013] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果：
[0014] 實驗證明：本發(fā)明提供的疏水性介孔納米材料，可顯著增強低強度超聲波空化效 應(yīng)強度，且具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性，且經(jīng)增溶后與低強度超聲波聯(lián)用治 療腫瘤，在體內(nèi)和體外實驗中均有明顯的抑制腫瘤生長的效果，具有顯著的優(yōu)越性，為腫瘤 治療提供了一種新的有效手段，具有極大的社會價值和意義。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0015] 圖1為實施例1提供的疏水性介孔納米材料的紅外譜圖；
[0016] 圖2為實施例1提供的增溶后疏水性介孔納米材料的TG-DSC圖；
[0017] 圖3為實施例1提供的增溶后疏水性介孔納米材料對超聲波空化效應(yīng)影響的熒光 檢測譜圖；
[0018] 圖4為實施例1提供的增溶后疏水性介孔納米材料在低強度超聲下對體外癌細(xì)胞 的殺傷效應(yīng)驗證結(jié)果圖；
[0019] 圖5為實施例1提供的增溶后疏水性介孔納米材料在低強度超聲下的動物體內(nèi)的 抗癌效應(yīng)驗證圖；
[0020] 圖6為實施例2提供的疏水性介孔納米材料的孔徑分布圖；
[0021] 圖7為實施例2提供的疏水性介孔納米材料的BET測試圖；
[0022] 圖8為實施例2提供的疏水性介孔納米材料的TEM圖；
[0023] 圖9為實施例4提供的增溶后疏水性介孔納米材料對超聲波空化效應(yīng)影響的熒光 檢測譜圖；
[0024] 圖10為實施例14提供的增溶后疏水性介孔納米材料的TG-DSC圖；
[0025] 圖11為實施例14提供的增溶后疏水性介孔納米材料在低強度超聲下對體外癌細(xì) 胞的殺傷效應(yīng)驗證結(jié)果圖；
[0026] 圖12為實施例25提供的增溶后疏水性介孔納米材料的TG-DSC圖；
[0027] 圖13為實施例25提供的增溶后疏水性介孔納米材料對超聲波空化效應(yīng)影響的熒 光檢測譜圖；
[0028] 圖14為對比例1提供的MCM-41介孔材料對超聲波空化效應(yīng)影響的熒光檢測譜 圖；
[0029] 圖15為對比例1提供的MCM-41介孔材料在低強度超聲下對體外癌細(xì)胞的殺傷效 應(yīng)驗證結(jié)果圖；
[0030] 圖16為對比例5(無納米材料時）對超聲波空化效應(yīng)影響的熒光檢測譜圖。

【具體實施方式】
[0031] 下面結(jié)合實施例及對比例和附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)、完整地說明。下述實施 例：
[0032] 利用X-射線衍射儀（XRD)，透射電鏡（TEM)，紅外（IR)，接觸角測量和熱重分析 (TG-DSC)對所得到的納米材料進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征；
[0033] 利用熒光光譜對在低強度超聲作用下空化效應(yīng)的產(chǎn)生和強度進(jìn)行驗證，激發(fā)光為 310nm，溶液為5mmol/L的對苯二甲酸溶液，試樣濃度為lmg/mL,超聲2min ;
[0034] 利用激光共聚焦顯微鏡對腫瘤細(xì)胞對納米材料的吞噬性能進(jìn)行驗證，對增溶后疏 水性介孔納米材料進(jìn)行FITC熒光標(biāo)記，細(xì)胞核進(jìn)行DAPI熒光標(biāo)記；
[0035] 利用MTT檢測法對低強度超聲和增溶后疏水性介孔納米材料協(xié)同作用下對 ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的治療效果進(jìn)行體外驗證；
[0036] 利用MTT檢測法對增溶后疏水性介孔納米材料對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性 進(jìn)行驗證；
[0037] 利用在裸鼠體上建立腫瘤模型，對其進(jìn)行超聲治療，并進(jìn)行病理切片研究來驗證 體內(nèi)的治療效果。
[0038] 進(jìn)行體外細(xì)胞實驗的操作如下：
[0039] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基 中（RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有0?20〇μ/ιΛ的增溶 后疏水性介孔納米材料的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為ΙΚΗζ?50MHz，強度為0. 2? lOOOW/cm2的超聲波照射0?20min，繼續(xù)培養(yǎng)24h后使用MTT法檢測細(xì)胞存活率。
[0040] 進(jìn)行體內(nèi)動物實驗的操作如下：
[0041] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有0?200 μ g/mL的增溶后疏水性介孔納米材料的生理鹽水溶液， 并在注入30min后用頻率為ΙΚΗζ?50MHz，強度為0. 2?1000W/cm2的超聲波隔著一個水 袋子間隔性照射〇?20min，此治療過程隔天進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0042] 實施例中所用的有序介孔材料1〇-41、1〇-48、584-15、1^、球狀介孔羥基磷灰石 及層狀介孔羥基磷灰石均是采用水熱法制備而得，具體制備過程如下：
[0043] 1)有序介孔材料MCM-41的制備
[0044] 向0. 1?10mol/L的NaOH水溶液中加入十六烷基三甲基溴化銨（CTAB)，于0? 100°C攪拌至澄清；加入TEOS，攪拌均勻；于25?200°C進(jìn)行水熱反應(yīng)1?48小時；加入的 原料摩爾比為：Si02:Na0H:CTAB:H20 = 1: (0· 1 ?0· 8) : (0· 1 ?0· 6) : (20 ?80);取出、過 濾、洗滌、干燥，得粗產(chǎn)物PMCM ;將粗產(chǎn)物PMCM置于乙醇中，再加入lmol/L的鹽酸，乙醇與 鹽酸的體積比為100:1?10:1 ;加熱回流1?24小時后，過濾、洗滌、烘干，即得孔道直徑 為2?50nm、粒徑為20?800nm、比表面積為100?2000m 2/g的MCM-41有序介孔材料。
[0045] 2)有序介孔材料MCM-48的制備
[0046] 向0. 1?10mol/L的NaOH水溶液中加入十六烷基三甲基溴化銨（CTAB)，于0? 100°C攪拌至完全溶解；滴加硅溶膠（Si0 2)，激烈攪拌5?60分鐘；于25?200°C進(jìn)行水熱 反應(yīng)1?48小時；加入的原料摩爾比為：Si0 2:CTAB:H20:Na0H = 1: (0· 1?0· 8) : (0· 1? 0. 6) : (20?80);過濾、洗滌、干燥，得MCM-48原粉；將MCM-48原粉于150?50(TC下煅燒 2?24小時，即得孔道直徑為2?50nm、粒徑為20?800nm、比表面積為100?2000m 2/g 的MCM-48有序介孔材料。
[0047] 3)有序介孔材料SBA-15的制備
[0048] 將嵌段共聚物P123溶于0. 1?2mol/L的鹽酸水溶液中，于0?100°C攪拌溶解 后，加入正硅酸乙酯（TE0S)，繼續(xù)攪拌1?48小時后，于25?200°C進(jìn)行水熱反應(yīng)1?48 小時；加入的原料摩爾比為：TE0S:P123:HC1:H 20 = 1: (0· 1 ?0· 6) : (0· 2 ?2) : (10 ?30); 取出、過濾、洗滌，于150?500°C下煅燒2?24小時，即得孔道直徑為2?50nm、粒徑為 20?800nm、比表面積為100?2000m 2/g的SBA-15有序介孔材料。
[0049] 4)有序介孔材料MSU的制備
[0050] 稱取C18E01(l，加熱攪拌使其完全溶解于去離子水中，配制濃度為0. 01?lmol/L的 澄清溶液；調(diào)節(jié)溶液的pH值至1?4,于0?100°C攪拌1?24小時后，加入硅源（正硅酸乙 酯或硅酸鈉），于25?200°C進(jìn)行水熱反應(yīng)1?48小時；加入的原料摩爾比為：TE0S: C18E01Q =1: (2?20);過濾、洗滌，在N2保護(hù)下于150?500°C焙燒2?24小時，即得孔道直徑為 2?50nm、粒徑為20?800nm、比表面積為100?2000m 2/g的MSU有序介孔材料。
[0051] 上述有序介孔材料MCM-41、MCM-48、SBA-15、MSU的制備均不限于水熱法，均可采 用現(xiàn)有技術(shù)中報道的其它方法制備而得。
[0052] 實施例1
[0053] 將孔道直徑為2nm、粒徑為20nm、比表面積為1000m2/g的有序介孔材料MCM-41加 入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入六甲基二硅氮烷，于25°C攪拌24h ;有 序介孔材料MCM-41與六甲基二硅氮烷的摩爾比為1:0. 05 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌， 再在30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0054] 由圖1可以看出在2962CHT1處的C-H鍵振動峰的存在，說明甲基通過硅烷偶聯(lián)化 接枝到有序介孔材料MCM-41中。
[0055] 將制得的疏水性介孔納米材料和β -⑶按質(zhì)量比1:0. 3加入水中，于25°C攪拌 24h，然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0056] 由圖2可以得出，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中所占 的質(zhì)量百分比為9. 68%，增溶劑β -CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量百分比 為 42%。
[0057] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0058] MTT檢測法驗證FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性中，細(xì)胞的存活率在 95%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性。
[0059] 由圖3的熒光光譜可以看出，在頻率為1MHz，強度為0. 2W/cm2的超聲波照射2min 下，上述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 14 倍。
[0060] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有50μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為1MHz，強度為0. 2W/cm2的超聲波照射8min，繼續(xù)培養(yǎng) 24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為4. 7% (見圖4所示）。
[0061] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有50 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為1MHz，強度為0. 2W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照5min，此治療過程隔天進(jìn) 行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0062] 由圖5中的b曲線可得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤 增長率為41. 75%。
[0063] 實施例2
[0064] 將孔道直徑為10nm、粒徑為200nm、比表面積為100m2/g的有序介孔材料MCM-41加 入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入1，3-二乙烯基-1，1，3, 3-四甲基二硅 氮燒，于60°C攪拌12h ;有序介孔材料MCM-41與1，3-二乙烯基-1，1，3, 3-四甲基二硅氮烷 的摩爾比為1:0. 09 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再在30?200°C下干燥，即得疏水性介 孔納米材料，記為HMSN。
[0065] 由圖6可得知所制備的疏水性介孔納米材料的孔道直徑為2. 3nm ;由圖7可得知 所制備的疏水性介孔納米材料的比表面積為1142m2/g ;由圖8可以看出所制備的疏水性介 孔納米材料具有清晰均勻的介孔結(jié)構(gòu)；經(jīng)測量得知所制備的疏水性介孔納米材料經(jīng)壓片后 的接觸角為140度。
[0066] 將制得的上述疏水性介孔納米材料和β -⑶按質(zhì)量比1:4加入水中，于60°C攪拌 48h，然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0067] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為14. 35 %，增溶劑β-CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量 百分比為56. 63%。
[0068] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0069] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知：細(xì) 胞的存活率在92. 1 %以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性。
[0070] 由熒光光譜可以看出，在頻率為30MHz，強度為50W/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 20倍。
[0071] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10 %胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有200 μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為30MHz，強度為50W/cm2的超聲波照射12min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為0. 23 %。
[0072] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有200 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后 用頻率為30MHz，強度為50W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照12min，此治療過程隔 天進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0073] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 2. 4%。
[0074] 實施例3
[0075] 將孔道直徑為40nm、粒徑為600nm、比表面積為300m2/g的有序介孔材料MCM-41加 入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入四甲基二硅氮烷，于60°C攪拌15h ;有 序介孔材料MCM-41與四甲基二硅氮烷的摩爾比為1:0.07 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌， 再在30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0076] 將制得的疏水性介孔納米材料和β -⑶按質(zhì)量比1:1加入水中，于60°C攪拌48h， 然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0077] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為12. 3%，增溶劑β-CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量百 分比為38. 6%。
[0078] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0079] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知：細(xì) 胞的存活率在94. 2%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性。
[0080] 由熒光光譜可以看出，在頻率為15MHz，強度為20W/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 50倍。
[0081] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有150μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為15MHz，強度為20W/cm2的超聲波照射14min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為0. 36%。
[0082] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有150 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后 用頻率為15MHz，強度為20W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照10min，此治療過程隔 天進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0083] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 12. 3%。
[0084] 實施例4
[0085] 將孔道直徑為50nm、粒徑為800nm、比表面積為150m2/g的有序介孔材料MCM-41加 入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入三乙基氯硅烷，于25°C攪拌10h ;有序 介孔材料MCM-41與三乙基氯硅烷的摩爾比為1:0.06 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再在 30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0086] 將制得的疏水性介孔納米材料和β -⑶按質(zhì)量比1:2加入水中，于25°C攪拌10h， 然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0087] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為8. 6%，增溶劑β -CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量百 分比為30. 26%。
[0088] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0089] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知： 細(xì)胞的存活率在90. 25%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒 性。
[0090] 由熒光光譜可以看出，在頻率為0. 5MHz，強度為lOW/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 5倍，如 圖9所示。
[0091] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有20μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為0. 5MHz，強度為lOW/cm2的超聲波照射8min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為0. 86%。
[0092] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有20 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為0. 5MHz，強度為lOW/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照8min，此治療過程隔天 進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0093] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 0· 56%。
[0094] 實施例5
[0095] 將孔道直徑為3nm、粒徑為25nm、比表面積為2000m2/g的有序介孔材料MCM-41加 入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入三甲基氯硅烷，于80°C攪拌48h ;有序 介孔材料MCM-41與三甲基氯硅烷的摩爾比為1:0. 08 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再在 30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0096] 將制得的疏水性介孔納米材料和β -⑶按質(zhì)量比1:0. 2加入水中，于80°C攪拌 48h，然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0097] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為12. 34%，增溶劑β-CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量 百分比為45. 68%。
[0098] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0099] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知： 細(xì)胞的存活率在92. 47%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒 性。
[0100] 由熒光光譜可以看出，在頻率為10MHZ，強度為lOW/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 95倍。 [0101] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1X106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有60μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為10MHz，強度為lOW/cm2的超聲波照射lOmin，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為1. 24%。
[0102] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有60 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為10MHz，強度為lOW/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照10min，此治療過程隔天 進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0103] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 10. 21%。
[0104] 實施例6
[0105] 將孔道直徑為5nm、粒徑為50nm、比表面積為1500m2/g的有序介孔材料MCM-41加 入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入六甲基二硅氮烷，于25°C攪拌24h ;有 序介孔材料MCM-41與六甲基二硅氮烷的摩爾比為1:0.05 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌， 再在30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0106] 將制得的疏水性介孔納米材料和吐溫-80按質(zhì)量比1:0. 3加入水中，于25°C攪拌 24h，然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0107] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為9. 68%，增溶劑吐溫-80在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量 百分比為42%。
[0108] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0109] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知：細(xì) 胞的存活率在95%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性。
[0110] 由熒光光譜可以看出，在頻率為1MHz，強度為0. 2W/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 145倍。
[0111] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有50μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為1MHz，強度為0. 2W/cm2的超聲波照射8min，繼續(xù)培養(yǎng) 24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為4. 7 %。
[0112] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有50 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為1MHz，強度為0. 2W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照5min，此治療過程隔天進(jìn) 行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0113] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 41. 75%。
[0114] 實施例7
[0115] 將孔道直徑為15nm、粒徑為600nm、比表面積為500m2/g的有序介孔材料MCM-41加 入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入1，3-二乙烯基-1，1，3, 3-四甲基二硅 氮燒，于60°C攪拌12h ;有序介孔材料MCM-41與1，3-二乙烯基-1，1，3, 3-四甲基二硅氮烷 的摩爾比為1:0. 09 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再在30?200°C下干燥，即得疏水性介 孔納米材料，記為HMSN。
[0116] 將制得的疏水性介孔納米材料和羥丙基β-環(huán)糊精按質(zhì)量比1:4加入水中，于 60°C攪拌48h，然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0117] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為14. 35%，增溶劑羥丙基β-環(huán)糊精在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為56. 63%。
[0118] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0119] 由ΜΤΤ檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知：細(xì) 胞的存活率在92. 1 %以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性。
[0120] 由熒光光譜可以看出，在頻率為30MHz，強度為50W/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 205倍。
[0121] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1X106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10 %胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有200 μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為30MHz，強度為50W/cm2的超聲波照射12min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為0. 23 %。
[0122] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有200 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后 用頻率為30MHz，強度為50W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照12min，此治療過程隔 天進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0123] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 2. 4%。
[0124] 實施例8
[0125] 將孔道直徑為25nm、粒徑為650nm、比表面積為350m2/g的有序介孔材料MCM-41加 入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入四甲基二硅氮烷，于60°C攪拌15h ;有 序介孔材料MCM-41與四甲基二硅氮烷的摩爾比為1:0. 07 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌， 再在30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0126] 將制得的疏水性介孔納米材料和Y -環(huán)糊精按質(zhì)量比1:1加入水中，于60°C攪拌 28h，然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0127] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為12. 3%，增溶劑環(huán)糊精在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì) 量百分比為38. 6%。
[0128] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0129] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知：細(xì) 胞的存活率在94. 2%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性。
[0130] 由熒光光譜可以看出，在頻率為15MHz，強度為20W/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 255倍。
[0131] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1X106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有150μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為15MHz，強度為20W/cm2的超聲波照射14min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為0. 36%。
[0132] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有150 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后 用頻率為15MHz，強度為20W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照lOmin，此治療過程隔 天進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0133] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 12. 3%。
[0134] 實施例9
[0135] 將孔道直徑為35nm、粒徑為750nm、比表面積為1650m2/g的有序介孔材料MCM-41 加入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入三乙基氯硅烷，于25°C攪拌10h ;有 序介孔材料MCM-41與三乙基氯硅烷的摩爾比為1:0. 06 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再 在30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0136] 將制得的疏水性介孔納米材料和2, 3, 6- 丁磺基鈉 -β -環(huán)糊精按質(zhì)量比1:2加 入水中，于25°C攪拌10h，然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為F@ HMSN。
[0137] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為8. 6 %，增溶劑2, 3, 6- 丁磺基鈉 -β -環(huán)糊精在增溶后疏水性介孔納米 材料中所占的質(zhì)量百分比為30. 26%。
[0138] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0139] 由ΜΤΤ檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知： 細(xì)胞的存活率在90. 25%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒 性。
[0140] 由熒光光譜可以看出，在頻率為0. 5MHz，強度為lOW/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 215倍。
[0141] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1X106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有20μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為0. 5MHz，強度為lOW/cm2的超聲波照射8min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為0. 86%。
[0142] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有20 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為0. 5MHz，強度為lOW/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照8min，此治療過程隔天 進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0143] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 0· 56%。
[0144] 實施例10
[0145] 將孔道直徑為45nm、粒徑為350nm、比表面積為1450m2/g的有序介孔材料MCM-41 加入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入十七氟癸基三甲氧基硅烷，于25°C攪 拌10h ;有序介孔材料MCM-41與十七氟癸基三甲氧基硅烷的摩爾比為1:0. 06 ;然后用正己 烷、乙醇依次洗滌，再在30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0146] 將制得的疏水性介孔納米材料和2, 3, 6- 丁磺基鈉 -β -環(huán)糊精按質(zhì)量比1:2加 入水中，于25°C攪拌10h，然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為F@ HMSN。
[0147] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為8. 6 %，增溶劑2, 3, 6- 丁磺基鈉 -β -環(huán)糊精在增溶后疏水性介孔納米 材料中所占的質(zhì)量百分比為78%。
[0148] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0149] 由ΜΤΤ檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知： 細(xì)胞的存活率在90. 25%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒 性。
[0150] 由熒光光譜可以看出，在頻率為0. 5MHz，強度為lOOW/cm2的超聲波照射2min下， 上述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 255 倍。
[0151] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1X106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有20μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為0. 5MHz，強度為lOOW/cm2的超聲波照射8min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為0. 86%。
[0152] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有20 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為0. 5MHz，強度為lOOW/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照8min，此治療過程隔天 進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0153] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 0· 56%。
[0154] 實施例11
[0155] 將孔道直徑為15nm、粒徑為250nm、比表面積為1850m2/g的有序介孔材料MCM-41 加入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入六甲基二硅氮烷，于25°C攪拌24h; 有序介孔材料MCM-41與六甲基二硅氮烷的摩爾比為1:0.05 ;然后用正己烷、乙醇依次洗 滌，再在30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0156] 將制得的疏水性介孔納米材料和β -⑶按質(zhì)量比1:0. 3加入水中，于25°C攪拌 24h，然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0157] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為9. 68%，增溶劑β -CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量百 分比為42%。
[0158] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0159] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知：細(xì) 胞的存活率在95%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性。
[0160] 由熒光光譜可以看出，在頻率為1MHz，強度為300W/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 140倍。
[0161] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1X106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有50μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為1MHz，強度為300W/cm2的超聲波照射8min，繼續(xù)培養(yǎng) 24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為0. 7 %。
[0162] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有50 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為1MHz，強度為300W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照5min，此治療過程隔天進(jìn) 行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0163] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 1. 75%。
[0164] 實施例12
[0165] 將孔道直徑為6nm、粒徑為100nm、比表面積為1050m2/g的有序介孔材料MCM-41加 入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入1，3-二乙烯基-1，1，3, 3-四甲基二硅 氮燒，于60°C攪拌12h ;有序介孔材料MCM-41與1，3-二乙烯基-1，1，3, 3-四甲基二硅氮烷 的摩爾比為1:0. 09 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再在30?200°C下干燥，即得疏水性介 孔納米材料，記為HMSN。
[0166] 將制得的疏水性介孔納米材料和β -⑶按質(zhì)量比1:4加入水中，于60°C攪拌48h， 然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0167] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為14. 35 %，增溶劑β-CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量 百分比為56. 63%。
[0168] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0169] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知：細(xì) 胞的存活率在92. 1 %以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性。
[0170] 由熒光光譜可以看出，在頻率為30MHz，強度為600W/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 200倍。
[0171] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1X106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10 %胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有200 μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為30MHz，強度為600W/cm2的超聲波照射12min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為0. 23 %。
[0172] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm3,向腫瘤內(nèi)注入含有200 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后 用頻率為30MHz，強度為600W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照12min，此治療過程隔 天進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0173] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 2. 4%。
[0174] 實施例13
[0175] 將孔道直徑為15nm、粒徑為250nm、比表面積為900m2/g的有序介孔材料MCM-41加 入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入四甲基二硅氮烷，于60°C攪拌15h ;有 序介孔材料MCM-41與四甲基二硅氮烷的摩爾比為1:0. 07 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌， 再在30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0176] 將制得的疏水性介孔納米材料和β -⑶按質(zhì)量比1:1加入水中，于60°C攪拌48h， 然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0177] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為12. 3%，增溶劑β-CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量百 分比為38. 6%。
[0178] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0179] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知：細(xì) 胞的存活率在94. 2%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性。
[0180] 由熒光光譜可以看出，在頻率為15MHz，強度為900W/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 50倍。
[0181] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1X106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有150μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為15MHz，強度為900W/cm2的超聲波照射14min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為0. 36%。
[0182] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有150 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后 用頻率為15MHz，強度為900W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照10min，此治療過程隔 天進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0183] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 1. 3%。
[0184] 實施例14
[0185] 將孔道直徑為5nm、粒徑為50nm、比表面積為1500m2/g的有序介孔材料SBA-15加 入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入四甲基二硅氮烷，于15°C攪拌2h;有序 介孔材料SBA-15與四甲基二硅氮烷的摩爾比為1:0. 005 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再 在30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0186] 將制得的上述疏水性介孔納米材料和β -⑶按質(zhì)量比1:0. 2加入水中，于35°C攪 拌48h，然后用水洗漆，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0187] 由圖10可以得出，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中所 占的質(zhì)量百分比為4. 35%，增溶劑β -CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量百分 比為5L 68%。
[0188] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0189] 由MTT檢測法驗證所述的增溶后疏水性介孔納米材料對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì) 胞毒性實驗得知：細(xì)胞的存活率在94. 34%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容 性和較低的細(xì)胞毒性。
[0190] 由熒光光譜可以看出，在頻率為0. 1MHz，強度為0. 4W/cm2的超聲波照射2min下， 上述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 10倍。
[0191] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1X106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10 %胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有25 μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為0. 1MHz，強度為0. 4W/cm2的超聲波照射20min，繼續(xù) 培養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為0. 14% (見圖11所示）。
[0192] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有25 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為0. 1MHz，強度為0. 4W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照20min，此治療過程隔 天進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0193] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 0· 19%。
[0194] 實施例15
[0195] 將孔道直徑為35nm、粒徑為750nm、比表面積為1650m2/g的有序介孔材料SBA-15 加入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入三乙基氯硅烷，于25°C攪拌8h ;有序 介孔材料SBA-15與三乙基氯硅烷的摩爾比為1:0.06 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再在 30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0196] 將制得的疏水性介孔納米材料和β -⑶按質(zhì)量比1:3加入水中，于60°C攪拌8h， 然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0197] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為7. 84%，增溶劑β -CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量百 分比為37. 3%。
[0198] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0199] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知：細(xì) 胞的存活率在94. 5%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性。
[0200] 由熒光光譜可以看出，在頻率為10MHz，強度為20W/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 25倍。
[0201] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有80μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為10MHz，強度為20W/cm2的超聲波照射16min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為1. 6%。
[0202] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有80 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為10MHz，強度為20W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照15min，此治療過程隔天 進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0203] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 10. 6%。
[0204] 實施例16
[0205] 將孔道直徑為6nm、粒徑為100nm、比表面積為1050m2/g的有序介孔材料SBA-15 加入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入三甲基氯硅烷，于40°C攪拌6h ;有序 介孔材料SBA-15與三甲基氯硅烷的摩爾比為1:0. 06 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再在 30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0206] 將制得的疏水性介孔納米材料和β -⑶按質(zhì)量比1:4加入水中，于40°C攪拌6h， 然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0207] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為4. 23%，增溶劑β -CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量百 分比為21. 35%。
[0208] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0209] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知： 細(xì)胞的存活率在98. 56%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒 性。
[0210] 由熒光光譜可以看出，在頻率為45MHz，強度為1. 2W/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 75倍。
[0211] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有80μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為45MHz，強度為1. 2W/cm2的超聲波照射6min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為40. 23%。
[0212] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有80 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為45MHz，強度為1. 2W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照6min，此治療過程隔天 進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0213] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 52. 36%。
[0214] 實施例17
[0215] 將孔道直徑為10nm、粒徑為200nm、比表面積為100m2/g的有序介孔材料SBA-15加 入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入六甲基二硅氮烷，于25°C攪拌12h ;有 序介孔材料SBA-15與六甲基二硅氮烷的摩爾比為1:0.01 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌， 再在30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0216] 經(jīng)測量得知所制備的疏水性介孔納米材料經(jīng)壓片后的接觸角為120度。
[0217] 將制得的疏水性介孔納米材料和β -⑶按質(zhì)量比1:0. 6加入水中，于25°C攪拌 4h，然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0218] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為6. 3%，增溶劑β -CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量百 分比為29. 56%。
[0219] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0220] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知： 細(xì)胞的存活率在98. 35%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒 性。
[0221] 由熒光光譜可以看出，在頻率為2MHz，強度為20W/cm2的超聲波照射2min下，上述 的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 85倍。
[0222] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有10μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為2MHz，強度為20W/cm2的超聲波照射12min，繼續(xù)培養(yǎng) 24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為2. 35 %。
[0223] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有10 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為2MHz，強度為20W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照10min，此治療過程隔天進(jìn) 行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0224] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 21. 35%。
[0225] 實施例18
[0226] 將孔道直徑為15nm、粒徑為600nm、比表面積為500m2/g的有序介孔材料SBA-15加 入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入1，3-二乙烯基-1，1，3, 3-四甲基二硅 氮烷，于60°C攪拌12h ;有序介孔材料SBA-15與1，3-二乙烯基-1，1，3, 3-四甲基二硅氮烷 的摩爾比為1:0. 06 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再在30?200°C下干燥，即得疏水性介 孔納米材料，記為HMSN。
[0227] 將制得的疏水性介孔納米材料和β -⑶按質(zhì)量比1:0. 6加入水中，于60°C攪拌 12h，然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0228] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為6. 5%，增溶劑β-CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量百 分比為26. 48%。
[0229] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0230] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知： 細(xì)胞的存活率在96. 48%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒 性。
[0231] 由熒光光譜可以看出，在頻率為6MHz，強度為16W/cm2的超聲波照射2min下，上述 的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 105倍。
[0232] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有60μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為6MHz，強度為16W/cm2的超聲波照射6min，繼續(xù)培養(yǎng) 24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為6. 58%。
[0233] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm3,向腫瘤內(nèi)注入含有60 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為6MHz，強度為16W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照16min，此治療過程隔天進(jìn) 行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0234] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 1. 24%。
[0235] 實施例19
[0236] 將孔道直徑為15nm、粒徑為250nm、比表面積為1850m2/g的有序介孔材料SBA-15 加入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入四甲基二硅氮烷，于15°C攪拌2h ;有 序介孔材料SBA-15與四甲基二硅氮烷的摩爾比為1:0. 005 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌， 再在30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0237] 將制得的疏水性介孔納米材料和洛泊沙姆188按質(zhì)量比1:0. 2加入水中，于35°C 攪拌48h，然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0238] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為4. 35%，增溶劑洛泊沙姆188在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的 質(zhì)量百分比為21.68%。
[0239] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0240] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知： 細(xì)胞的存活率在94. 34%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒 性。
[0241] 由熒光光譜可以看出，在頻率為0. 1MHz，強度為0. 4W/cm2的超聲波照射2min下， 上述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 55倍。
[0242] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有25 μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為0. 1MHz，強度為0. 4W/cm2的超聲波照射20min，繼續(xù) 培養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為0. 14%。
[0243] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm3,向腫瘤內(nèi)注入含有25 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為0. 1MHz，強度為0. 4W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照20min，此治療過程隔 天進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0244] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 0· 19%。
[0245] 實施例20
[0246] 將孔道直徑為50nm、粒徑為800nm、比表面積為150m2/g的有序介孔材料SBA-15 加入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入三乙基氯硅烷，于40°C攪拌8h;有序 介孔材料SBA-15與三乙基氯硅烷的摩爾比為1:0.06 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再在 30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0247] 將制得的疏水性介孔納米材料和羥乙基-環(huán)糊精按質(zhì)量比1:3加入水中，于 60°C攪拌8h，然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0248] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為7. 84%，增溶劑羥乙基-β -環(huán)糊精在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為37. 3%。
[0249] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0250] 由ΜΤΤ檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知：細(xì) 胞的存活率在94. 5%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性。
[0251] 由熒光光譜可以看出，在頻率為10MHz，強度為20W/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 235倍。
[0252] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有80μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為10MHz，強度為20W/cm2的超聲波照射16min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為1. 6%。
[0253] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有80 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為10MHz，強度為20W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照15min，此治療過程隔天 進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0254] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 10. 6%。
[0255] 實施例21
[0256] 將孔道直徑為2nm、粒徑為20nm、比表面積為1000m2/g的有序介孔材料SBA-15加 入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入三甲基氯硅烷，于40°C攪拌6h ;有序 介孔材料SBA-15與三甲基氯硅烷的摩爾比為1:0.01 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再在 30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0257] 將制得的疏水性介孔納米材料和磺丁基醚-β -環(huán)糊精按質(zhì)量比1:4加入水中，于 40°C攪拌6h，然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0258] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為4. 23 %，增溶劑磺丁基醚-β -環(huán)糊精在增溶后疏水性介孔納米材料 中所占的質(zhì)量百分比為21. 35%。
[0259] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0260] 由ΜΤΤ檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知： 細(xì)胞的存活率在98. 56%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒 性。
[0261] 由熒光光譜可以看出，在頻率為45MHz，強度為1. 2W/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 275倍。
[0262] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有80μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為45MHz，強度為1. 2W/cm2的超聲波照射6min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為40. 23%。
[0263] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有80 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為45MHz，強度為1. 2W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照6min，此治療過程隔天 進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0264] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 52. 36%。
[0265] 實施例22
[0266] 將孔道直徑為3nm、粒徑為25nm、比表面積為2000m2/g的有序介孔材料SBA-15加 入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入四甲基二硅氮烷，于15°C攪拌2h;有序 介孔材料SBA-15與四甲基二硅氮烷的摩爾比為1:0. 005 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再 在30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0267] 將制得的疏水性介孔納米材料和β -⑶按質(zhì)量比1:0. 2加入水中，于35°C攪拌 48h，然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0268] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為4. 35%，增溶劑β -CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量百 分比為51. 68%。
[0269] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0270] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知： 細(xì)胞的存活率在94. 34%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒 性。
[0271] 由熒光光譜可以看出，在頻率為0. 1MHz，強度為400W/cm2的超聲波照射2min下， 上述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 100 倍。
[0272] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10 %胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有25 μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為0. 1MHz，強度為400W/cm2的超聲波照射20min，繼續(xù) 培養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為0. 14%。
[0273] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有25 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為0. 1MHz，強度為400W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照20min，此治療過程隔 天進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0274] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 0· 19%。
[0275] 實施例23
[0276] 將孔道直徑為45nm、粒徑為350nm、比表面積為1450m2/g的有序介孔材料SBA-15 加入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入三乙基氯硅烷，于25°C攪拌8h;有序 介孔材料SBA-15與三乙基氯硅烷的摩爾比為1:0.06 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再在 30?20(TC下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0277] 將制得的疏水性介孔納米材料和β -⑶按質(zhì)量比1:3加入水中，于60°C攪拌8h， 然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0278] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為7. 84%，增溶劑β -CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量百 分比為37. 3%。
[0279] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0280] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知：細(xì) 胞的存活率在94. 5%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性。
[0281] 由熒光光譜可以看出，在頻率為10MHz，強度為700W/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 25倍。
[0282] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有80μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為10MHz，強度為700W/cm2的超聲波照射16min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為1. 6%。
[0283] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有80 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為10MHz，強度為700W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照15min，此治療過程隔天 進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0284] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 0· 6%。
[0285] 實施例24
[0286] 將孔道直徑為40nm、粒徑為600nm、比表面積為300m2/g的有序介孔材料SBA-15 加入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入三甲基氯硅烷，于40°C攪拌6h ;有序 介孔材料SBA-15與三甲基氯硅烷的摩爾比為1:0.06 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再在 30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0287] 將制得的疏水性介孔納米材料和β -⑶按質(zhì)量比1:4加入水中，于40°C攪拌6h， 然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0288] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為4. 23%，增溶劑β -CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量百 分比為21. 35%。
[0289] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0290] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知： 細(xì)胞的存活率在98. 56%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒 性。
[0291] 由熒光光譜可以看出，在頻率為45MHz，強度為lkW/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 75倍。
[0292] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有80μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為45MHz，強度為lkW/cm2的超聲波照射6min，繼續(xù)培養(yǎng) 24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為40. 23%。
[0293] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有80 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為45MHz，強度為lkW/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照6min，此治療過程隔天進(jìn) 行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0294] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 0· 36%。
[0295] 實施例25
[0296] 將孔道直徑為50nm、粒徑為800nm、比表面積為150m2/g的有序介孔材料MCM-48 加入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入三甲基氯硅烷，于〇°C攪拌36h ;有序 介孔材料MCM-48與三甲基氯硅烷的摩爾比為1:0. 1 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再在 30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0297] 將制得的疏水性介孔納米材料和β -⑶按質(zhì)量比1:3加入水中，于50°C攪拌36h， 然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0298] 由圖12可以得出，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中所 占的質(zhì)量百分比為7. 56%，增溶劑β -CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量百分 比為45. 7%。
[0299] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0300] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知： 細(xì)胞的存活率在93. 23%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒 性。
[0301] 由圖13所示的熒光光譜可以看出，在頻率為5MHz，強度為0. 6W/cm2的超聲波照射 2min下，上述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加 了 15 倍。
[0302] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基 中（RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有Syg/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為5MHz，強度為0. 6W/cm2的超聲波照射15min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為0. 26%。
[0303] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm3,向腫瘤內(nèi)注入含有80 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為5MHz，強度為0. 6W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照18min，此治療過程隔天 進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0304] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 12. 56%。
[0305] 實施例26
[0306] 將孔道直徑為35nm、粒徑為750nm、比表面積為1650m2/g的有序介孔材料MCM-48 加入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入六甲基二硅氮烷，于60°C攪拌16h; 有序介孔材料MCM-48與六甲基二硅氮烷的摩爾比為1:0.06 ;然后用正己烷、乙醇依次洗 滌，再在30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0307] 將制得的疏水性介孔納米材料和β -⑶按質(zhì)量比1:2加入水中，于60°C攪拌16h， 然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0308] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為6. 3%，增溶劑β -CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量百 分比為50. 2%。
[0309] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0310] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知：細(xì) 胞的存活率在94. 2%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性。
[0311] 由熒光光譜可以看出，在頻率為25MHz，強度為lOW/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 30倍。
[0312] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有80μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為25MHz，強度為lOW/cm2的超聲波照射12min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為2. 1 %。
[0313] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有80 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為25MHz，強度為lOW/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照12min，此治療過程隔天 進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0314] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 24. 36%。
[0315] 實施例27
[0316] 將孔道直徑為15nm、粒徑為250nm、比表面積為900m2/g的有序介孔材料MCM-48加 入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入1，3-二乙烯基-1，1，3, 3-四甲基二硅 氮烷，于60°C攪拌12h ;有序介孔材料MCM-48與1，3_二乙烯基-1，1，3, 3-四甲基二硅氮烷 的摩爾比為1:0. 06 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再在30?200°C下干燥，即得疏水性介 孔納米材料，記為HMSN。
[0317] 將制得的疏水性介孔納米材料和β_⑶按質(zhì)量比1:3加入水中，于60°C攪拌12h， 然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0318] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為12. 36 %，增溶劑β-CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量 百分比為49. 63%。
[0319] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0320] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知：細(xì) 胞的存活率在95. 6%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性。
[0321] 由熒光光譜可以看出，在頻率為6MHz，強度為8W/cm2的超聲波照射2min下，上述 的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 55倍。
[0322] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有100μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為6MHz，強度為8W/cm2的超聲波照射10min，繼續(xù)培養(yǎng) 24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為2. 35 %。
[0323] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有100 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后 用頻率為6MHz，強度為8W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照10min，此治療過程隔天 進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0324] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 10. 25%。
[0325] 實施例28
[0326] 將孔道直徑為2nm、粒徑為20nm、比表面積為1000m2/g的有序介孔材料MCM-48加 入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入四甲基二硅氮烷，于20°C攪拌8h ;有序 介孔材料MCM-48與四甲基二硅氮烷的摩爾比為1:0. 1 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再在 30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0327] 將制得的疏水性介孔納米材料和β -⑶按質(zhì)量比1:4加入水中，于20°C攪拌8h， 然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0328] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為18. 6%，增溶劑β-CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量百 分比為56. 3%。
[0329] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0330] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知： 細(xì)胞的存活率在90. 65%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒 性。
[0331] 由熒光光譜可以看出，在頻率為0. 5MHz，強度為45W/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 65倍。
[0332] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有20μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為0. 5MHz，強度為45W/cm2的超聲波照射8min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為0. 16%。
[0333] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有20 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為0. 5MHz，強度為45W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照6min，此治療過程隔天 進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0334] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 0· 19%。
[0335] 實施例29
[0336] 將孔道直徑為15nm、粒徑為250nm、比表面積為1850m2/g的有序介孔材料MCM-48 加入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入三乙基氯硅烷，于100°c攪拌48h ;有 序介孔材料MCM-48與三乙基氯硅烷的摩爾比為1:0. 1 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再在 30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0337] 將制得的疏水性介孔納米材料和β_⑶按質(zhì)量比1:5加入水中，于100°C攪拌 48h，然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0338] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為18. 6%，增溶劑β-CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量百 分比為58. 47%。
[0339] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0340] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知： 細(xì)胞的存活率在90. 24%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒 性。
[0341] 由熒光光譜可以看出，在頻率為40MHz，強度為40W/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 125倍。
[0342] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10 %胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有200 μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為40MHz，強度為40W/cm2的超聲波照射14min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為10. 25 %。
[0343] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有200 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后 用頻率為40MHz，強度為40W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照14min，此治療過程隔 天進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0344] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 0· 98%。
[0345] 實施例30
[0346] 將孔道直徑為15nm、粒徑為250nm、比表面積為1850m2/g的有序介孔材料MCM-48 加入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入三甲基氯硅烷，于〇°C攪拌36h;有序 介孔材料MCM-48與三甲基氯硅烷的摩爾比為1:0. 1 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再在 30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0347] 將制得的疏水性介孔納米材料和卵磷脂按質(zhì)量比1:3加入水中，于50°C攪拌36h， 然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0348] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為7. 56%，增溶劑卵磷脂在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量百 分比為45. 7%。
[0349] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0350] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知： 細(xì)胞的存活率在93. 23%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒 性。
[0351] 由熒光光譜可以看出，在頻率為5MHz，強度為0. 6W/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 175倍。
[0352] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基 中（RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有Syg/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為5MHz，強度為0. 6W/cm2的超聲波照射15min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為0. 26%。
[0353] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有5 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為5MHz，強度為0. 6W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照18min，此治療過程隔天 進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0354] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 12. 56%。
[0355] 實施例31
[0356] 將孔道直徑為5nm、粒徑為50nm、比表面積為1500m2/g的有序介孔材料MCM-48加 入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入六甲基二硅氮烷，于60°C攪拌16h ;有 序介孔材料MCM-48與六甲基二硅氮烷的摩爾比為1:0. 06 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌， 再在30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0357] 將制得的疏水性介孔納米材料和α -環(huán)糊精按質(zhì)量比1: 2加入水中，于60°C攪拌 16h，然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0358] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為6. 3%，增溶劑α-環(huán)糊精在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì) 量百分比為50. 2%。
[0359] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0360] 由ΜΤΤ檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知：細(xì) 胞的存活率在94. 2%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性。
[0361] 由熒光光譜可以看出，在頻率為25MHz，強度為lOW/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 265倍。
[0362] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有80μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為25MHz，強度為lOW/cm2的超聲波照射12min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為2. 1 %。
[0363] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有80 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為25MHz，強度為lOW/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照12min，此治療過程隔天 進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0364] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 24. 36%。
[0365] 實施例32
[0366] 將孔道直徑為10nm、粒徑為200nm、比表面積為100m2/g的有序介孔材料MCM-48加 入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入1，3-二乙烯基-1，1，3, 3-四甲基二硅 氮烷，于60°C攪拌12h ;有序介孔材料MCM-48與1，3_二乙烯基-1，1，3,3_四甲基二硅氮烷 的摩爾比為1:0. 06 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再在30?200°C下干燥，即得疏水性介 孔納米材料，記為HMSN。
[0367] 將制得的疏水性介孔納米材料和麥芽糖-環(huán)糊精按質(zhì)量比1:3加入水中，于 60°C攪拌12h，然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0368] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為12. 36%，增溶劑麥芽糖-β -環(huán)糊精在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為49. 63%。
[0369] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0370] 由ΜΤΤ檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知：細(xì) 胞的存活率在95. 6%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性。
[0371] 由熒光光譜可以看出，在頻率為6MHz，強度為8W/cm2的超聲波照射2min下，上述 的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 235倍。
[0372] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有100μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為6MHz，強度為8W/cm2的超聲波照射10min，繼續(xù)培養(yǎng) 24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為2. 35 %。
[0373] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有100 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后 用頻率為6MHz，強度為8W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照10min，此治療過程隔天 進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0374] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 10. 25%。
[0375] 實施例33
[0376] 將孔道直徑為3nm、粒徑為25nm、比表面積為2000m2/g的有序介孔材料MCM-48加 入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入十三氟辛基三甲氧基硅烷，于60°C攪拌 16h ;有序介孔材料MCM-48與十三氟辛基三甲氧基硅烷的摩爾比為1:0. 06 ;然后用正己烷、 乙醇依次洗滌，再在30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0377] 將制得的疏水性介孔納米材料和磺丁基醚-β -環(huán)糊精按質(zhì)量比1:2加入水中，于 60°C攪拌16h，然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0378] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為6. 3%，增溶劑磺丁基醚-β -環(huán)糊精在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為50. 2%。
[0379] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0380] 由ΜΤΤ檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知：細(xì) 胞的存活率在94. 2%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性。
[0381] 由熒光光譜可以看出，在頻率為25MHz，強度為lOW/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 100倍。
[0382] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有80μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為25MHz，強度為lOW/cm2的超聲波照射12min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為2. 1 %。
[0383] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有80 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為25MHz，強度為lOW/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照12min，此治療過程隔天 進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0384] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 24. 36%。
[0385] 實施例34
[0386] 將孔道直徑為25nm、粒徑為650nm、比表面積為350m2/g的有序介孔材料MCM-48 加入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入三甲基氯硅烷，于〇°C攪拌36h ;有序 介孔材料MCM-48與三甲基氯硅烷的摩爾比為1:0. 1 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再在 30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0387] 將制得的疏水性介孔納米材料和β -⑶按質(zhì)量比1:3加入水中，于50°C攪拌36h， 然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0388] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為7. 56%，增溶劑β-CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量百 分比為45. 7%。
[0389] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0390] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知： 細(xì)胞的存活率在93. 23%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒 性。
[0391] 由熒光光譜可以看出，在頻率為5MHz，強度為500W/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 150倍。
[0392] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基 中（RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有Syg/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為5MHz，強度為500W/cm2的超聲波照射15min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為0. 26%。
[0393] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有80 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為5MHz，強度為500W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照18min，此治療過程隔天 進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0394] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 1. 56%。
[0395] 實施例35
[0396] 將孔道直徑為45nm、粒徑為350nm、比表面積為1450m2/g的有序介孔材料MCM-48 加入反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入六甲基二硅氮烷，于60°C攪拌16h; 有序介孔材料MCM-48與六甲基二硅氮烷的摩爾比為1:0.06 ;然后用正己烷、乙醇依次洗 滌，再在30?200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0397] 將制得的疏水性介孔納米材料和β_⑶按質(zhì)量比1:2加入水中，于60°C攪拌16h， 然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0398] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為6. 3%，增溶劑β -CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量百 分比為50. 2%。
[0399] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0400] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知：細(xì) 胞的存活率在94. 2%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性。
[0401] 由熒光光譜可以看出，在頻率為25MHz，強度為800W/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 30倍。
[0402] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有80μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為25MHz，強度為800W/cm2的超聲波照射12min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為2. 1 %。
[0403] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有80 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為25MHz，強度為800W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照12min，此治療過程隔天 進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0404] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 2. 36%。
[0405] 實施例36
[0406] 將孔道直徑為6nm、粒徑為100nm、比表面積為1050m2/g的有序介孔材料MSU加入 反應(yīng)瓶中，再加入正己烷使其充分分散，然后加入三甲基氯硅烷，于80°C攪拌48h ;有序介 孔材料MSU與三甲基氯硅烷的摩爾比為1:0. 08 ;然后用正己烷、乙醇依次洗滌，再在30? 200°C下干燥，即得疏水性介孔納米材料，記為HMSN。
[0407] 將制得的疏水性介孔納米材料和β -⑶按質(zhì)量比1:0. 2加入水中，于80°C攪拌 48h，然后用水洗滌，干燥，即得增溶后疏水性介孔納米材料，記為FOHMSN。
[0408] 由TG-DSC分析得知，具有硅烷端基接枝的基團在增溶后疏水性介孔納米材料中 所占的質(zhì)量百分比為12. 34%，增溶劑β-CD在增溶后疏水性介孔納米材料中所占的質(zhì)量 百分比為45. 68%。
[0409] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證，所述的增溶后疏水性介孔納米材料可以被腫瘤細(xì)胞 正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0410] 由MTT檢測法驗證所述的FOHMSN對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知： 細(xì)胞的存活率在92. 47%以上，說明上述的FOHMSN具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒 性。
[0411] 由熒光光譜可以看出，在頻率為10MHz，強度為lOW/cm2的超聲波照射2min下，上 述的FOHMSN可以顯著的提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度，空化強度增加了 225倍。
[0412] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有60μ g/mL上述的FOHMSN 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為10MHz，強度為lOW/cm2的超聲波照射10min，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為1. 24%。
[0413] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有60 μ g/mL上述的FOHMSN的生理鹽水溶液，并在注入30min后用 頻率為10MHz，強度為lOW/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照10min，此治療過程隔天 進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0414] 由實驗結(jié)果得知，經(jīng)過治療后，腫瘤的生長速度有了顯著下降，相對腫瘤增長率為 10. 21%。
[0415] 對比例1
[0416] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證得知：上述的有序介孔材料MCM-41均可以被腫瘤細(xì) 胞正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0417] 由MTT檢測法驗證MCM-41對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知：細(xì)胞的存 活率在99. 58%以上，說明MCM-41具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性。
[0418] 由圖14所示的熒光光譜可以看出，在頻率為1MHz，強度為0.8W/cm2的超聲波照射 2min下，MCM-41不能提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度。
[0419] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有50μ g/mL的MCM-41的培 養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為1MHz，強度為0. 8W/cm2的超聲波照射8min，繼續(xù)培養(yǎng)24h 后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為98. 56% (見圖15所示）。
[0420] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有50 μ g/mL的MCM-41的生理鹽水溶液，并在注入30min后用頻率 為1MHz，強度為0. 8W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照8min，此治療過程隔天進(jìn)行一 次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0421] 由實驗結(jié)果得知，未經(jīng)疏水性修飾的有序介孔材料MCM-41與低強度超聲波聯(lián)用， 沒有出現(xiàn)對腫瘤生長的明顯抑制作用，相對腫瘤增長率為96. 47%。
[0422] 對比例2
[0423] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證得知：上述的有序介孔納米材料SBA-15均可以被腫 瘤細(xì)胞正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0424] 由MTT檢測法驗證SBA-15對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知：細(xì)胞的存 活率在98. 6%以上，說明SBA-15具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性。
[0425] 從熒光光譜可以看出，在頻率為0. 1MHz，強度為0. 2W/cm2的超聲波照射2min下， SBA-15不能提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度。
[0426] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10 %胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有100 μ g/mL的SBA-15的培 養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為0. 1MHz，強度為0. 2W/cm2的超聲波照射20min，繼續(xù)培養(yǎng) 24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為96. 47%。
[0427] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有100 μ g/mL的SBA-15的生理鹽水溶液，并在注入30min后用頻 率為0. 1MHz，強度為0. 2W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照20min，此治療過程隔天 進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0428] 由實驗結(jié)果得知，未經(jīng)疏水性修飾的有序介孔材料SBA-15與低強度超聲波聯(lián)用， 沒有出現(xiàn)對腫瘤生長的明顯抑制作用，相對腫瘤增長率為92. 34%。
[0429] 對比例3
[0430] 通過激光共聚焦顯微鏡驗證得知：上述的有序介孔納米材料MCM-48均可以被腫 瘤細(xì)胞正常吞噬，并未引起細(xì)胞的死亡。
[0431] 由MTT檢測法驗證MCM-48對ZR75-30乳腺癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性實驗得知：細(xì)胞的存 活率在99. 34%以上，說明MCM-48具有良好的細(xì)胞相容性和較低的細(xì)胞毒性。
[0432] 從熒光光譜可以看出，在頻率為50MHz，強度為50W/cm2的超聲波照射2min下， MCM-48不能提高低強度超聲作用下空化效應(yīng)的強度。
[0433] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基 中（RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用含有200yg/mL的MCM-48 的培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為50MHz，強度為50W/cm 2的超聲波照射lOmin，繼續(xù)培 養(yǎng)24h后使用MTT法測得細(xì)胞存活率為96. 57%。
[0434] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3,向腫瘤內(nèi)注入含有200 μ g/mL的MCM-48的生理鹽水溶液，并在注入30min后用頻 率為50MHz，強度為50W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照lOmin，此治療過程隔天進(jìn) 行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0435] 由實驗結(jié)果得知，未經(jīng)疏水性修飾的有序介孔材料MCM-48與低強度超聲波聯(lián)用， 沒有出現(xiàn)對腫瘤生長的明顯抑制作用，相對腫瘤增長率為96. 54%。
[0436] 對比例4
[0437] 將ZR75-30人體乳腺癌細(xì)胞（1 X 106個/mL，lmL)轉(zhuǎn)移到96孔培養(yǎng)板，在培養(yǎng)基中 (RPMI1640+10%胎牛血清）培養(yǎng)24h，然后吸棄培養(yǎng)液，換用新鮮的不含納米材料的培養(yǎng)液 繼續(xù)培養(yǎng)12h，而后用頻率為1MHz，強度為0. 2W/cm2的超聲波照射8min，繼續(xù)培養(yǎng)24h后使 用MTT法測得細(xì)胞存活率為95. 62%。
[0438] 將ZR75-30人體乳腺癌腫瘤剪成1mm3的組織植入到裸鼠體內(nèi)，待腫瘤體積長到 100mm 3后，用頻率為1MHz，強度為0. 2W/cm2的超聲波隔著一個水袋子間隔性照5min，此治 療過程隔天進(jìn)行一次并進(jìn)行體積測量，共進(jìn)行6次。
[0439] 由圖5中的a曲線可得知，該實驗組對腫瘤的生長未出現(xiàn)抑制作用，相對腫瘤增長 率為 97. 68%。
[0440] 對比例5
[0441] 單獨在PBS溶液中，在不加納米材料的情況下在頻率為50MHz，強度為50W/cm2的 超聲波照射2min，從熒光光譜可以看出，在該強度照射下，空化強度非常弱，見圖16所示。
[0442] 綜上研究結(jié)果表明：本發(fā)明提供的疏水性納米介孔材料與低強度超聲波具有明顯 的協(xié)同作用，可顯著增強低強度超聲波空化效應(yīng)強度；而且具有良好的細(xì)胞相容性和較低 的細(xì)胞毒性；尤其在增溶后，與低強度超聲波聯(lián)用，在體內(nèi)和體外實驗中均有明顯的抑制腫 瘤生長的效果，具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0443] 最后有必要在此說明的是：以上實施例只用于對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì) 地說明，不能理解為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限制，本領(lǐng)域的技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容 作出的一些非本質(zhì)的改進(jìn)和調(diào)整均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【權(quán)利要求】
1. 一種疏水性介孔納米材料的應(yīng)用，所述的疏水性介孔納米材料是由表面含有羥基的 有序介孔材料與偶聯(lián)化試劑反應(yīng)而得，所述的有序介孔材料為MCM-41、MCM-48、SBA-15或 MSU，所述的偶聯(lián)化試劑為六甲基二硅氮烷、四甲基二硅氮烷、1，3-二乙烯基-1，1，3, 3-四 甲基二硅氮烷、三甲基氯硅烷、三乙基氯硅烷、十三氟辛基三甲氧基硅烷、三氟丙基三乙氧 基硅烷或十七氟癸基三甲氧基硅烷；其特征在于：以所述的疏水性介孔納米材料制備用于 增強低強度超聲波空化效應(yīng)強度的試劑；所述的低強度超聲波的頻率為〇. 1?50MHz，強度 為 0· 2 ?1000W/cm2。
2. 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：以所述的疏水性介孔納米材料制備用于低 強度超聲波治療腫瘤的試劑。
3. 如權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于：所述的應(yīng)用是首先采用增溶劑增溶所 述的疏水性介孔納米材料。
4. 如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，采用增溶劑增溶所述的疏水性介孔納米材 料的操作如下：將疏水性介孔納米材料和增溶劑加入水中，在〇?l〇〇°C攪拌2?48小時， 然后用水洗滌，干燥；疏水性介孔納米材料與增溶劑的質(zhì)量比為1 : (〇. 2?5)。
5. 如權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于：所述的增溶劑選自吐溫-80、洛泊沙姆 188、卵磷脂、羥丙基-β-環(huán)糊精、羥乙基-β-環(huán)糊精、α-環(huán)糊精、 γ-環(huán)糊精、磺丁基 醚-β -環(huán)糊精、麥芽糖-β -環(huán)糊精、2, 3, 6-丁磺基鈉 -β -環(huán)糊精、羥丙基-α -環(huán)糊精、羥 丙基-γ -環(huán)糊精中的任意一種。
6. 如權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于：所述的有序介孔材料的孔道直徑為2? 50nm、粒徑為20?800nm、比表面積為100?2000m 2/g。
【文檔編號】A61K31/695GK104189903SQ201410432394
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2012年6月20日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月20日
【發(fā)明者】祝迎春, 趙陽 申請人:中國科學(xué)院上海硅酸鹽研究所