一種具有抗炎作用的組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種具有抗炎作用的組合物，該組合物主要包括如下成分：Paeonimetabolin?I、肉桂酸、甘草素、芍藥內(nèi)酯苷、異甘草素、甘草酸、異甘草苷、甘草素葡萄糖醛酸、甘草苷、甘草次酸、6-姜酚、異甘草素葡萄糖醛酸、芍藥苷。本發(fā)明還提供一種含藥血清的制備方法，該方法包括：按10-80g生藥/kg的劑量灌胃給藥，給藥后0.5-4小時(shí)取血，離心處理，得含藥血清。研究表明，本發(fā)明組合物對(duì)IL-1β刺激bEnd.3細(xì)胞中具有與門靜脈含藥血清相似的保護(hù)作用。
【專利說明】一種具有抗炎作用的組合物

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種組合物，具體涉及一種具有抗炎作用的組合物，屬于中醫(yī)藥領(lǐng)域。

【背景技術(shù)】
[0002] 中藥是在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，以辨證論治為依據(jù)，針對(duì)證候確定的治則治法，用于對(duì)· "證"治療的藥物。由于證候的整體性特征，所以復(fù)方中藥針對(duì)調(diào)節(jié)的目標(biāo)是個(gè)體的整體性 平衡。然而，迄今我們對(duì)中藥方劑中的很多化學(xué)成分的藥理作用尚不清楚，各種化學(xué)物質(zhì)分 子間復(fù)雜的相互關(guān)系更是知知甚少，僅僅依靠利用現(xiàn)代分離技術(shù)來提升中藥制劑的模式;， 容易使方劑原有的配伍發(fā)生變化，影響整體療效。
[0003] 如何在遵循中醫(yī)藥基本理論和傳統(tǒng)用藥原則的前提下，合理采用恰當(dāng)?shù)默F(xiàn)代科技 手段，尋找中藥的有效成分，盡可能多的保持其中能被吸收的化學(xué)成分，是擺在我們面前的 一項(xiàng)最迫切而繁重的任務(wù)。
[0004] 現(xiàn)有技術(shù)一般采用中藥提取物直接作為中藥注射劑的原料。這種方法忽略了腸道 首過效應(yīng)對(duì)口服中藥藥效的影響，使得通過注射進(jìn)入體內(nèi)的成分與傳統(tǒng)口服中藥進(jìn)入體內(nèi) 的成分不一致，背離了傳統(tǒng)中醫(yī)理論，這可能也是中藥注射劑出現(xiàn)諸多不良反應(yīng)的原因之 〇


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的第一個(gè)目的在于提供一種中藥組合物含藥血清。
[0006] 本發(fā)明的第二個(gè)目的在于提供該中藥組合物含藥血清的制備方法。
[0007] 本發(fā)明的第三個(gè)目的在于提供一種具有抗炎作用的組合物。
[0008] 本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0009] -種中藥組合物含藥血清，該含藥血清主要包括如下成分：paeonimetab〇lin工、 肉桂酸、甘草素、芍藥內(nèi)酯苷、異甘草素、甘草酸、異甘草苷、甘草素葡萄糖醛酸、甘草苷、甘 草次酸、6_姜酸、異甘草素葡萄糖醛酸、茍藥苷。
[0010]進(jìn)一步，所述含藥血清每體積份包括如下成分：Paeonimetabolin I 5-50重量份、 肉桂酸20-100重量份、甘草素1〇-8〇重量份、芍藥內(nèi)酯苷5-50重量份、異甘草素2-20重 量份、甘草酸2_2〇重量份、異甘草苷2-20重量份、甘草素葡萄糖醛酸卜 15重量傷^、甘草苷 0. 5-8重量份、甘草次酸〇· 5-5重量份、6-姜酸〇· 5-5重量份、異甘草素葡萄糖醛酸〇· 5-5 重量份、芍藥苷0. 1-2重量份；所述重量/體積為ng/mi ;
[0011] 或，所述含藥血清包括如下成分：Paeonimetabolin I 10-30重量份、肉桂酸 40-80重量份、甘草素30-60重量份、芍藥內(nèi)酯苷1〇-30重量份、異甘草素 3_18重量份、甘 草酸3-18重量份、異甘草苷3-18重量份、甘草素葡萄糖醛酸1. 5-10重量份、甘草苷〇. 5-5 重量份、甘草次酸1-3重量份、6-姜酚1-3重量份、異甘草素葡萄糖醛酸卜3重量份、芍藥苷 0. 1-1重量份。
[0012] 或，所述含藥血清包括如下成分：Paeonimetabolin I 15-20重量份、肉桂酸 50-70重量份、甘草素4G-5G麗份、々藥_旨苷15-20題份、異甘草素;^重量份' 酸5-15重量份、異甘草苷2-s重量份、甘草素葡萄糖醛酸2_8重量份、甘草苷卜3 f 甘草次酸〇·8-1·5重量份、6-姜酚〇·8_1·5重量份、異甘草素葡萄糖醛酸〇 ^；、 芍藥苷〇· 2-0. 8重量份。 .·里里切、
[0013]更進(jìn)一步，所述含藥血清包括如下成分：Paeonimetabolin I 20重量份、肉桂齡 60重量份、甘草素40重量份、芍藥內(nèi)酯苷15重量份、異甘草素10重量份、甘草酸1〇島 份、異甘草苷5重量份、甘草素葡萄糖醛酸5重量份、甘草苷2重量份、甘草次酸丨重|， 6-姜酚1重量份、異甘草素葡萄糖醛酸1重量份、芍藥苷〇. 5重量份； 里、
[0014]或，Paeonimetabolin I I5重量份、肉桂酸7〇重量份、甘草素4〇重量份芍 酯苷20重量份、異甘草素5重量份、甘草酸15重量份、異甘草苷2重量份甘奉葡 醛酸8重量份、甘草苷丨重量份、甘草次酸 L 5重量份、6_姜酚〇· 8重量份、 麵1· 5重量份、·苷〇· 2重量份；
[0015]或，Paeonimetabolin I I8重量份、肉桂酸5〇重量份、甘草素45重量份 酯苷18重量份、異甘草素 κ重量份、甘草酸5重量份、異甘草苷8重量份、甘草素葡萄^ 酸2重量份、甘草苷3重量份、甘草次酸〇· 8重量份、6-姜酚l 5重量份、異甘草^ ^ 酸0· 8重量份、茍藥苷〇· 8重量份。
[0016]進(jìn)一步，所述血清取自門靜脈、外周血管、腹主動(dòng)脈、眼眶靜脈、心臟中的任一- 部位。
[0017]本發(fā)明進(jìn)一步提供了該中藥組合物含藥血清的制備方法，所述方法包括如下步 驟：
[0018]步驟a，中藥組合物的制備：按桂枝5-20重量份、白芍5-20重量份、甘草丨-1〇重| 份、生姜5-20重量份、大棗I-5枚取原料藥，常規(guī)方法提取，提取液濃縮至濃度為〇 5-2 ^ 量份生藥/體積份；所述重量/體積為g/ml ; _9]步驟b，含藥血清的制備：取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，按10-8〇g生藥~的劑量灌胃給藥，給 后0· 5-4小時(shí)取血，離心處理,得含藥血清。 <
[0020] 進(jìn)一步，所述步驟a提取液濃度為1重量份生藥/體積份；
[0021]進(jìn)一步，所述步驟b灌胃劑量為20-60g生藥/kg;更進(jìn)一步，灌胃劑量為30- 5〇8生 藥/kg ;更進(jìn)一步，灌胃劑量為42g生藥/kg ;
[0022]進(jìn)少，所述少b取血時(shí)間為給藥后1-3小時(shí)；更進(jìn)_步，取血時(shí)間為給藥后 1.5-2. 5小時(shí)；更進(jìn)一步，取血時(shí)間為給藥后2小時(shí)； 一-
[0023]進(jìn)一步，所述步驟b取血為取自門靜脈、外周血管、腹主動(dòng)脈、眼眶靜脈、心臟中的 任--個(gè)部位；更進(jìn)一步，為取自門靜脈血；
[0024]進(jìn)一步，所述步驟b以每分鐘3000-4000轉(zhuǎn)離心處理l〇-3〇min得到含藥血清。 [0025]本發(fā)明還提供一種具有抗炎作用的組合物，該組合物主要包括如下成分： Paeonimetabolin I、肉桂酸、甘草素、芍藥內(nèi)酯苷、異甘草素、甘草酸、異甘草苷、甘草素葡 萄糖醛酸、甘草苷、甘草次酸、6_姜酚、異甘草素葡萄糖醛酸、芍藥苷。
[0026]進(jìn)一步，所述組合物包括如下成分：Paeonimetabolin I 5-50重量份、肉桂酸 2〇-100重量份、甘草素10-8〇重量份、芍藥內(nèi)酯苷5-5〇重量份、異甘草素 2_2〇重量份、甘草 酸2-2〇重量份、異甘草苷2-20重量份、甘草素葡萄糖醛酸卜 15重量份、甘草苷〇· 5-8重量 g、0 1 份、6-麵〇· 5一5重量份、異甘草素匍萄雛酸〇· 5-5重量份、茍藥 1 40-80 里里切、甘草素 30-60重星份、芍藥內(nèi)酯苷10-30重量份、異甘草素 =8重量份、異甘草苷3_18重量份、甘草素葡萄糖醛酸^旱重累量^ 酸卜3重量份、6-姜酸1_3重量份、異甘草素葡萄糖麵卜3麗份、巧藥苷 ^八^苗戶么述組合物包括如下成分：Pae〇nimetabolin 1 15-20重量份、肉桂酸50-70 重里份、甘草素40-50重量份、芍藥內(nèi)酯苷15-20重量份、異甘草 5-15重亂異甘草苷2-8重量份、甘草素_糖_ 重^ f , ：· ^ °·8"·5 ri；；5 3 s：；s 甘Z-U· 8直星份。
[0029]更進(jìn)一步，所述組合物傭如下成分：pae〇nimetab〇iin I 2 重量份、甘草素4〇重量份、內(nèi)酯苷1δ重量份、異甘草素10重量份、 異甘草苷5題份、甘草素葡纖醛酸5重量份、甘草苷2重量份、甘草次酸 6-姜 酚1重量份、異甘草素葡萄糖醛酸1重量份、芍藥苷〇· 5重量份；
[0030]或，Paeonimetabolin I 1S重量份、肉桂酸70重量份、甘草素4〇 藥內(nèi) 酯苷20重量份、異甘草素5重量份、甘草酸15重量份、異甘草苷2重量份、 醛 酸8重量份、甘草苷丨重量份、甘草次酸丨_ 5重量份、6_姜酚〇. 8重量份 ^ 醛酸1. 5重量份、茍藥苷〇· 2重量份； 將早素匍甸糖
[0031]或，Paeonimetabolin I 18重量份、肉桂酸50重量份、甘草素45重量份、芍藥內(nèi) ^苷18重量份、異甘草素15重量份、甘草酸5重量份、異甘草苷8重量份、甘草素葡萄糖醛 酸2重量份、甘草苷3重量份、甘草次酸〇· 8重量份、6-姜酚1. 5重量份、異甘草奉葡萄糖醛 酸0. 8重量份、芍藥苷〇. 8重量份。 z'
[0032]本發(fā)明所述組合物可按常規(guī)工藝制備成液體注射劑、粉針劑、片劑、膠囊劑、顆粒 劑等臨床可接受的劑型。
[0033]實(shí)驗(yàn)例1中藥組合物湯劑、門靜脈血清、外周血血清藥效的比較
[0034] 1 材料
[0035] 1. 1 動(dòng)物
[0036]雄性SD大鼠，體重（250±10)g，由中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心 提供，合格證號(hào)：SCXK-(軍）2012-0004。
[0037] 1. 2試劑及儀器
[0038] DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、一次性濾器購自美國Gibco公司。其它試劑為國產(chǎn)分析 純。小鼠腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞株（bEnd. 3)由購自上海斯信生物科技有限公司。PGE2檢測試 劑盒購至英國Abeam公司。離心機(jī)為德國sigma公司產(chǎn)品，超凈工作臺(tái)為北京半導(dǎo)體設(shè)備 一廠公司產(chǎn)品。
[0039] 1. 3中藥組合物湯劑的制備
[0040]按照桂枝9g、炒白茍9g、炙甘草6g、生姜9g、大;￠: 3枚的比例稱取藥材，加入8倍 量的水，浸潰30min，煎煮3〇min，過濾，濾液濃縮至1. 〇g生藥/ml。
[0041] 1.4含藥血清的制備
[0042]取大鼠5只，按42g生藥/kg劑量給藥，灌胃2小時(shí)后，分別取門靜脈血、外周血， 合并相同血液，分別作為門靜脈含藥血和外周含藥血。
[0043] 各組血3500rpm，15min，取血清，合并血清后I500rpm, 15min離心，取上清56?水 浴，15min滅活，冷凍保存，備用。
[0044] 1. 5細(xì)胞實(shí)驗(yàn)用組合物湯劑的處理
[0045] 取5111118生藥/1111組合物湯劑，加蒸餾水稀釋至1〇〇1^，加入2%活性炭煮沸后 30min，過濾，放冷后，取lml凍干后，加入無菌空白血清lml，漩渦混懸溶解后，〇· 22 μ m濾膜 過濾，備用。
[0046] 2 方法
[0047] 2. 1細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法 t〇〇48] 取對(duì)數(shù)生長期bEnd. 3細(xì)胞，以培養(yǎng)液稀釋細(xì)胞成IX 1〇5 ^!/1，接種于96孔板中， lOOuL/孔。5% C02培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24h后，加入配制好的樣品10μ!7孔，于給藥后4h 加入終質(zhì)量濃度為30ng · mL-1的IL-1 β刺激，12h后1500rpm離心15min，收集細(xì)胞上清 液，備測前列腺素 E2(PGE2)。同時(shí)以未加藥物和IL-1B刺激的細(xì)胞作為正常對(duì)照組，以加 IL-1B刺激未加藥物的細(xì)胞作為模型對(duì)照組（各設(shè)6個(gè)復(fù)孔）。參照試劑盒說明書以ELISA 法測定細(xì)胞外液中的PGE2含量。
[0049] 2. 2細(xì)胞分組
[0050] 模型組：100ul 細(xì)胞 +40ul 正常大鼠血清 +60ul (0. lug/mlIL-1 β );
[0051] 正常對(duì)照組：l〇〇ul細(xì)胞+60ul培養(yǎng)液+40ul正常大鼠血清；
[0052] 湯劑1 %組：100ul細(xì)胞+10ul湯劑+60ul培養(yǎng)液+40ul正常大鼠血清 +20ul (0. 3ug/mlIL-lβ )；
[0053] 湯劑0· 25 %組：100ul細(xì)胞+2. 5ul湯劑+60ul培養(yǎng)液+40ul正常大鼠血清 +20ul (0· 3ug/mlIL-1β );
[0054] 湯劑0. 0625%組：100ul細(xì)胞+0· 625ul湯劑+60ul培養(yǎng)液+40ul正常大鼠血清 +20ul(0. 3ug/mlIL-lβ )；
[0055] 20%含藥血清組：l〇〇ul 細(xì)胞 +40ul 含藥血清 ++60ul (0. lug/mlIL-1 β );
[0056] 1〇%含藥血清組：10〇111細(xì)胞+2〇111含藥血清+2〇111正常大鼠血清+6〇111(0.1叫/ mlIL-Ιβ)；
[0057] 5%含藥血清組：1〇〇111細(xì)胞+1〇111含藥血清+3〇111正常大鼠血清+6〇111(0.1叫/ mlIL-1β)。
[0058] 3實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0059] 3. 1不同取血時(shí)間血清藥效的比較
[0060]由于血液循環(huán)，門靜脈血液與外周血液成分交叉。故比較兩者藥效強(qiáng)弱，只能1 次灌胃給藥。比較0. 5h、lh、2h、4h門靜脈血液之間藥效的強(qiáng)弱，以此確定正式實(shí)驗(yàn)的采血 時(shí)間。
[0061] 取大鼠8只，分為4組，均按42g生藥/kg，4組分別灌胃0. 5、1、2、4h后，取門靜脈 血液。各組血液凝固后3500rpm離心15min，取血清，合并血清后1500rpm，15min離心，取 上清56°C水浴，15mi n滅活，冷凍保存。按照"2. 2"項(xiàng)下加藥方法加入細(xì)胞培養(yǎng)體系中，12 小時(shí)后測定細(xì)胞外液中PGE2的濃度。比較不同取血時(shí)間含藥血清藥效的強(qiáng)弱。結(jié)果見表 1-2〇
[0062] 表1不同取血時(shí)間含藥血清對(duì)bEnd. 3細(xì)胞分泌PGE2的保護(hù)作用（η = 5)
[0063]

【權(quán)利要求】
1. 一種中藥組合物含藥血清，其特征在于，所述含藥血清主要包括如下成分： Paeonimetabolin I、肉桂酸、甘草素、芍藥內(nèi)酯苷、異甘草素、甘草酸、異甘草苷、甘草素葡 萄糖醛酸、甘草苷、甘草次酸、6-姜酚、異甘草素葡萄糖醛酸、芍藥苷。
2. 如權(quán)利要求1所述的含藥血清，其特征在于，所述含藥血清每體積份包括如下成分： Paeonimetabolin I 10-30重量份、肉桂酸40-80重量份、甘草素3〇-60重量份、芍藥內(nèi)酯苷 10-30重量份、異甘草素3-18重量份、甘草酸3-1 8重量份、異甘草苷3-18重量份、甘草素葡 萄糖醛酸1. 5-10重量份、甘草苷〇· 5-5重量份、甘草次酸丨-3重量份、6-姜酚卜3重量份、 異甘草素葡萄糖醛酸1-3重量份、芍藥苷〇. κ重量份； 所述重量/體積為ng/ml。
3·如權(quán)利要求1或2所述的含藥血清，其特征在于，所述血清取自門靜脈血。
4. 一種中藥組合物含藥血清的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟： 步驟a，中藥組合物的制備：按桂枝5-20重量份、白芍5-20重量份、甘草卜⑴重量份、 生姜5-20重量份、大棗Ι-S枚取原料藥，常規(guī)方法提取，提取液濃縮至濃度為〇. 5-2重量份 生藥/體積份；所述重量/體積為g/ml ; 步驟b，含藥血清的制備：取實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，按10_80g生藥/kg的劑量灌胃給藥，給藥后 〇. 5-4小時(shí)取血，離心處理，得含藥血清。
5. 如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述步驟b灌胃劑量為30-50g生藥/ kg。
6·如權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述步驟b取血時(shí)間為給藥后1-3小 時(shí)。
7. 如權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述步驟b取血為取自門靜脈血。
8. -種具有抗炎作用的組合物，該組合物主要包括如下成分：Paeonimetab〇Un〗、肉 桂酸、甘草素、芍藥內(nèi)酯苷、異甘草素、甘草酸、異甘草苷、甘草素葡萄糖醛酸、甘草苷、甘草 次酸、6-姜酚、異甘草素葡萄糖醛酸、芍藥苷。
9·如權(quán)利要求8所述的組合物，其特征在于，所述組合物包括如下成分： Paeonimetabolin I 5-50重量份、肉桂酸20-1〇〇重量份、甘草素 10-80重量份、芍藥內(nèi)酯苷 5-50重量份、異甘草素2-20重量份、甘草酸2-20重量份、異甘草苷2-20重量份、甘草素葡 萄糖醛酸1-15重量份、甘草苷〇. 5-s重量份、甘草次酸〇· 5_5重量份、6-姜酚〇· 5_5 ^量 份、異甘草素葡萄糖醛酸〇· 5-5重量份、芍藥苷〇· 1-2重量份； 或，所述組合物包括如下成分：Paeonimetabolin I 10-30重量份、肉桂酸40-80重量 =、甘草素1〇-60重量份、芍藥內(nèi)酯苷10-30重量份、異甘草素3-18重量份、甘草酸 3-18重 量份、異甘草苷3-18重量份、甘草素葡萄糖醛酸L 5-10重量份、甘草苷〇· 5-5重量份、甘草 次酸I-3重量份、6_姜酚1-3重量份、異甘草素葡萄糖醛酸丨_3重量份、芍藥苷〇丨重 份。 -· 或，所述組合物包括如下成分：Paeonimetabolin I I5-20重量份、肉桂酸50-70重量 份、胃甘草素40-50重量份、芍藥內(nèi)酯苷15-20重量份、異甘草素5-15重量份、甘草酸 5一15 ^量份、異甘草苷2-8重量份、甘草素葡萄糖醛酸2-8重量份、甘草苷卜3重量份、甘草次 酸〇· 8-1. 5重量份、6_姜酚〇. s-1. 5重量份、異甘草素葡萄糖醛酸〇· 8-h 5重量份茍藥巷 0.2-0. 8重量份。 w勹』甘
10.如權(quán)利要求9所述的組合物，其特征在于，所述組合物包括如下成分： Paeonimetabolin I 20重量份、肉桂酸60重量份、甘草素 40重量份、巧藥內(nèi)酯苷15重量 份、異甘草素10重量份、甘草酸10重量份、異甘草苷5重量份、甘草素葡萄糖醛酸5重量 份、甘草苷2重量份、甘草次酸1重量份、6-姜酚1重量份、異甘草素葡萄糖醛酸1重量份、 巧藥苷0. 5重量份； 或，Paeonimetabolin I 15重量份、肉桂酸70重量份、甘草素 40重量份、巧藥內(nèi)酯苷 20重量份、異甘草素5重量份、甘草酸15重量份、異甘草苷2重量份、甘草素葡萄糖醛酸8 重量份、甘草苷1重量份、甘草次酸1. 5重量份、6-姜酚0. 8重量份、異甘草素葡萄糖醛酸 1. 5重量份、巧藥苷0. 2重量份； 或，Paeonimetabolin I 18重量份、肉桂酸50重量份、甘草素 45重量份、巧藥內(nèi)酯苷 18重量份、異甘草素 15重量份、甘草酸5重量份、異甘草苷8重量份、甘草素葡萄糖醛酸2 重量份、甘草苷3重量份、甘草次酸0. 8重量份、6-姜酚1. 5重量份、異甘草素葡萄糖醛酸 0. 8重量份、巧藥苷0. 8重量份。
【文檔編號(hào)】A61K31/192GK104189006SQ201410431424
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年8月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月28日
【發(fā)明者】柏冬, 張立石, 宋劍南, 劉麗梅, 王瑞海 申請人:中國中醫(yī)科學(xué)院中醫(yī)基礎(chǔ)理論研究所