一種治療心腦血管疾病的藥物組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種治療心腦血管疾病的藥物組合物，由人參皂苷Rb1與人參皂苷Rd組成。本發(fā)明所述組合物經(jīng)過科學配比，藥效明確，不良反應少，質量可控，臨床用藥安全，對心腦血管方面的兩大重要疾病腦梗、心梗有顯著療效，且優(yōu)于現(xiàn)有技術。
【專利說明】一種治療心腦血管疾病的藥物組合物

【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥【技術領域】，具體涉及一種由人參皂苷單體Rb1與人參皂苷單體Rd組成的治療心腦血管疾病的藥物組合物。

【背景技術】
[0002]心腦血管疾病已成為人類死亡病因最高的頭號殺手，也是人們健康的“無聲兇煞”，常見的腦血管疾病有短暫性缺血性發(fā)作、腦血栓、腦梗塞、腦卒中等。常見的心血管疾病有動脈粥樣硬化、冠心病與高血壓、心肌梗塞、心絞痛、心律衰竭等。
[0003]三七總皂苷具有活血祛瘀，通脈活絡作用，目前三七總皂苷及其制劑血塞通系列產(chǎn)品臨床上廣泛用于中風偏癱、瘀血阻絡及腦血管疾病后遺癥、胸痹心痛，視網(wǎng)膜中央靜脈阻塞屬瘀血阻滯證者。三七總阜苷中成分復雜，包括人參阜苷Rg1、人參阜苷Rb1、人參阜苷Re、人參皂苷Rd、三七皂苷R1和其他稀有皂苷。其中:
[0004]人參皂苷Rb1是三七總皂苷的基本成份之一，近來研究證明人參皂苷Rb1對心血管疾病如缺血性心臟病、心律失常、心力衰竭等方面有治療改善作用。其藥理作用有:1.抗心肌缺血再灌注損傷，人參皂苷Rb1具有鈣離子阻滯作用，并對犬急性心肌缺血有明顯的保護作用。通過大鼠的在體實驗發(fā)現(xiàn)，在缺血再灌注前舌下靜脈注射劑量為20mg/kg人參皂苷Rb1時，可使心肌細胞的凋亡顯著減少。說明人參皂苷Rb1可以抑制缺血再灌注時心肌細胞凋亡，減輕心肌缺血再灌注損傷。2、抗腦缺血損傷，人參皂苷Rb1對大鼠離體海馬腦片缺血損傷具有保護作用，能夠減少缺氧引起的突觸小泡興奮性神經(jīng)遞質谷氨酸等的釋放，有助于降低細胞外的谷氨酸水平，從而減輕其興奮性神經(jīng)毒性，保護神經(jīng)細胞。表明人參皂苷Rb1抗腦缺血損傷作用機制與其抗谷氨酸興奮性毒性的作用有關。
[0005]人參皂苷Rd是三七總皂苷的基本成份之一，其藥理作用有:1.保護心腦血管的作用，對血管及血液循環(huán)的作用:微循環(huán)、血漿復鈣試驗證明人參皂苷Rd是三七等中藥具有活血化瘀作用的有效成分之一 ；2.對神經(jīng)系統(tǒng)的作用，中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病或創(chuàng)傷都會引起神經(jīng)元和神經(jīng)膠質細胞消失。具有分化為神經(jīng)元、星行膠質細胞和少突膠質細胞潛能的神經(jīng)干細胞成為最有前景的治療制劑。
[0006]針對心血管疾病的多發(fā)，現(xiàn)急需一種安全性高、治療腦梗、心梗有特別療效的藥物。


【發(fā)明內容】

[0007]本發(fā)明的一個目的是提供一種安全性更高的治療心腦血管疾病的藥物組合物，具有藥效確切，不良反應少的優(yōu)點。
[0008]本發(fā)明的另一目的是提供所述人參皂苷組合物的應用。
[0009]本發(fā)明的再一目的是提供所述人參皂苷組合物及其制劑的制備方法。
[0010]本發(fā)明所述的治療心腦血管疾病的藥物組合物，由人參皂苷Rb1與人參皂苷Rd組成，其中人參皂苷Rb1與人參皂苷Rd重量比為2-12: I。
[0011]優(yōu)選地，所述藥物組合物中人參皂苷Rb1與人參皂苷Rd的重量比為4-10: I。
[0012]進一步優(yōu)選，所述藥物組合物中人參皂苷Rb1與人參皂苷Rd的重量比為6-8: I。
[0013]本發(fā)明制備的人參皂苷Rb1與人參皂苷Rd純度為85% -99.99%。
[0014]本發(fā)明所述人參皂苷組合物制劑，由人參皂苷Rb1和人參皂苷Rd組成的藥物組合物單獨組成或由藥物組合物與藥學上可接受的輔料組成。
[0015]所述藥物組合物的劑型為注射液、注射用凍干粉針劑、腸溶片劑、丸劑、散劑、顆粒齊U、合劑、糖漿劑、膠囊劑或滴丸劑等。
[0016]所述藥學上可接受的輔料選自甘露醇、乳糖、右旋糖酐、山梨醇、果糖、氯化鈉中的一種或多種；優(yōu)選為甘露醇。
[0017]本發(fā)明還提供了所述人參皂苷組合物及制劑在制備治療心腦血管疾病的藥物中的應用，所述心腦血管疾病優(yōu)選為急性腦梗塞或心梗塞疾病。
[0018]所述人參皂苷組合物的制備方法，步驟如下:
[0019](I)取三七總皂苷適量，加入20-25倍量注射用水稀釋，藥液經(jīng)0.45 μ m微孔濾膜過濾澄清后，濾液以l_2BV/h速度過DlOl大孔吸附樹脂(上柱液:樹脂=8:1)吸附，吸附后用5-6BV的25% -45%乙醇洗脫，洗脫流速為3_4BV/h，棄去洗脫液，再使用5-6BV的60% -80%乙醇洗脫，洗脫流速為2-3BV/h，收集洗脫液，減壓干燥，得到人參皂苷Rb1與Rd混合粗品。
[0020](2)取步驟(I)混合粗品適量，經(jīng)過硅膠柱(樣品與硅膠重量比為1:20-1:100)色譜純化，采用干法或濕法上樣，用二氯甲烷:甲醇=5:1混合溶劑洗脫，收集洗脫液并進行TLC鑒別，合并含人參皂苷Rd單一斑點部分，減壓干燥，即得人參皂苷Rd。繼續(xù)以二氯甲烷:甲醇=3:1混合溶劑洗脫，收集洗脫液并進行TLC鑒別，合并含人參皂苷Rb1單一斑點部分，減壓干燥，即得人參皂苷Rb115
[0021]優(yōu)選地，所述凍干粉針制備方法，步驟如下:
[0022](I)按配方稱取各成分溶解于適量注射用水中，攪拌得溶液；
[0023](2)向步驟(I)所得溶液中加入藥學上可接受的輔料或不加輔料，使其溶解，調節(jié)PH值至6.5-8.0,補加適量注射用水，將所得液體深層過濾，灌裝，冷凍干燥，壓塞，密封，即得。
[0024]所述凍干粉針劑的用法:臨用前加注射用水或相應的氯化鈉注射液或葡萄糖注射液使其溶解。
[0025]靜脈滴注:一日I次，一次50-100毫克，以5或10%葡萄糖注射液250-500毫升稀釋后緩慢滴注；靜脈注射:一日I次，一次50毫克，以25或50%葡萄糖注射液40-60毫升，稀釋后緩慢注射；糖尿病患者可用氯化鈉注射液代替葡萄糖注射液稀釋后使用；十五天為一療程，停藥1-3天后可進行第二療程。
[0026]本發(fā)明所述人參皂苷組合物具有如下有益效果:
[0027]本發(fā)明所述組合物經(jīng)過科學配比，藥效明確，不良反應少，質量可控，臨床用藥安全，對心腦血管方面的兩大重要疾病腦梗、心梗有顯著療效，且優(yōu)于現(xiàn)有技術。

【具體實施方式】
[0028]以下實施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。
[0029]若未特別指明，本發(fā)明實施例中所用的實驗材料、試劑和儀器等均可市售獲得，若未具體指明，實施例中所用的技術手段均為本領域技術人員所熟知的常規(guī)手段。
[0030]所用注射用水為:注射用水煮沸、充氮,使注射用水含氧量小于2.0ppm0
[0031]實施例1:人參皂苷單體Rb1' Rd
[0032](I)取三七總皂苷100g，加入2000ml注射用水稀釋，藥液經(jīng)0.45 μ m微孔濾膜過濾澄清后，濾液以lBV/h速度過DlOl大孔吸附樹脂(上柱液:樹脂=8:1)吸附，吸附后用5BV的35%乙醇洗脫，洗脫流速為3BV/h，棄去洗脫液，再使用5BV的70%乙醇洗脫，洗脫流速為2BV/h，收集洗脫液，減壓干燥，得到人參皂苷Rb1與Rd混合粗品55g。
[0033](2)取步驟(I)混合粗品，經(jīng)過硅膠柱(樣品與硅膠重量比為1:50)色譜純化，采用干法或濕法上樣，用二氯甲烷:甲醇= 5:1混合溶劑洗脫，收集洗脫液并進行TLC鑒別，合并含人參皂苷Rd單一斑點部分，減壓干燥，即得人參皂苷Rd6.1g;繼續(xù)以二氯甲烷:甲醇=3:1混合溶劑洗脫，收集洗脫液并進行TLC鑒別，合并含人參皂苷Rb1單一斑點部分，減壓干燥，即得人參皂苷Rbi35.3g。
[0034]實施例2:人參皂苷組合物凍干粉針劑
[0035](I)取用實施例1方法制得的人參皂苷RbfOg與人參皂苷RdlOg混合，加360ml注射用水攪拌溶解得溶液；
[0036](2)向步驟(I)所得溶液中加入乳糖10g，使其溶解，用2% NaOH調節(jié)pH值至5.0，補加90ml注射用水，用2 % NaOH測調pH至6.5，將所得液體深層過濾，灌裝，冷凍干燥，壓塞，密封，即得。
[0037]實施例3:人參皂苷組合物凍干粉針劑
[0038](I)取用實施例1方法制得的人參皂苷RbAOg與人參皂苷RdlOg混合，加600ml注射用水攪拌溶解得溶液；
[0039](2)向步驟⑴所得溶液中加入甘露醇15g，使其溶解，用2% NaOH調節(jié)pH值至
5.5，補加150ml注射用水，用2% NaOH測調pH至6.6，將所得液體深層過濾，灌裝，冷凍干燥，壓塞，密封，即得。
[0040]實施例4:人參皂苷組合物凍干粉針劑
[0041](I)取用實施例1方法制得的人參皂苷Rb^Og與人參皂苷RdlOg混合，加840ml注射用水攪拌溶解得溶液；
[0042](2)向步驟(I)所得溶液中加入甘露醇20g，使其溶解，用2% NaOH調節(jié)pH值至
5.8，補加200ml注射用水，用2% NaOH測調pH至6.7，將所得液體深層過濾，灌裝，冷凍干燥，壓塞，密封，即得。
[0043]實施例5:人參皂苷組合物凍干粉針劑
[0044](I)取用實施例1方法制得的人參皂苷Rb1SOg與人參皂苷RdlOg混合，加IlOOml注射用水攪拌溶解得溶液，使其溶解；
[0045](2)用2% NaOH調節(jié)pH值至6.0，補加250ml注射用水，用2% NaOH測調pH至
6.8，將所得液體深層過濾，灌裝，冷凍干燥，壓塞，密封，即得。
[0046]實施例6:人參皂苷組合物凍干粉針劑
[0047](I)取用實施例1方法制得的人參皂苷Rb110g與人參皂苷Rd 1g混合，力口1320ml注射用水攪拌溶解得溶液；
[0048](2)向步驟⑴所得溶液中加入氯化鈉33g，使其溶解，用2% NaOH調節(jié)pH值至
6.3，補加330ml注射用水，用2% NaOH測調pH至6.9，將所得液體深層過濾，灌裝，冷凍干燥，壓塞，密封，即得。
[0049]實施例7:人參皂苷組合物凍干粉針劑
[0050](I)取用實施例1方法制得的人參皂苷Rb1UOg與人參皂苷Rd 1g混合，力口1320ml注射用水攪拌溶解得溶液；
[0051](2)向步驟⑴所得溶液中加入山梨醇33g，使其溶解，用2% NaOH調節(jié)pH值至
6.5，補加330ml注射用水，用2% NaOH測調pH至7.0,將所得液體深層過濾，灌裝，冷凍干燥，壓塞，密封，即得。
[0052]對比例1:注射用血塞通(凍干)200mg/支
[0053]黑龍江珍寶島藥業(yè)股份有限公司提供，批號:A20130319 ；
[0054]所述凍干粉針中含有以下重量百分比的成分=R1:10.9% ；Rgl:38.0% ；Re:4.4% ；Rb1:33.2% ；Rd:5.4%0 合計:91.9%。
[0055]實驗例1:人參皂苷組合物對腦梗死的實驗研究
[0056]1、材料與儀器
[0057]1.1藥品與試劑
[0058]I)水合氯醛，國藥集團化學試劑有限公司，批號20081027。
[0059]2)樣品:實施例2-7
[0060]3)注射用血塞通(凍干)，200mg/支，黑龍江珍寶島藥業(yè)股份有限公司提供，批號:A20130319，有效期至2016年02月。
[0061]4)氯化-2, 3, 5-三苯基四氮唑(2, 3, 5-TriphenyltetrazoIium Chloride, TTC)，國藥集團化學試劑有限公司，用0.2mol/L PBS(pH 7.2)配成1.2%濃度，低溫保存。
[0062]5)人參皂苷Rb1,黑龍江珍寶島藥業(yè)股份有限公司提供。
[0063]6)人參皂苷Rd，黑龍江珍寶島藥業(yè)股份有限公司提供。
[0064]1.2實驗器材
[0065]I)尼龍栓線，2432-100，北京沙東生物技術有限公司。
[0066]2)美國產(chǎn)奧豪斯AR2130型電子天平，感量lmg。
[0067]3)多媒體彩色病理圖文分析系統(tǒng)(MPIAS-500)。
[0068]1.3實驗動物SD種大鼠，110只，雄性，200_240g，由斯貝福(北京)實驗動物科技有限公司提供，合格證號:SCXK(京)2011-0004。
[0069]2、實驗方法
[0070]根據(jù)前期文獻調研及預實驗研究，試驗分組及給藥方案如下:⑴假手術組；(2)模型組；⑶血塞通組(20mg/kg) ； (4)實施例2組；(5)實施例3組；(6)實施例4組；(7)實施例5組；⑶實施例6組；(9)實施例7組；(10)人參皂苷Rb1 ； (11)人參皂苷Rd。
[0071]動物4.0 %水合氯醛腹腔注射麻醉(400mg/kg體重)，保溫毯上仰臥位固定，分離右側頸總動脈(CCA)、頸內動脈(ICA)及頸外動脈(ECA)，結扎ECA并剪斷，CCA用絲線打活結暫時阻斷，用動脈夾夾閉ICA后，于ECA剪開切口，插入直徑為0.24mm的尼龍線至有明顯阻力，插入深度20 ± 2mm (從頸總動脈分叉處計)，致使大腦中動脈阻塞缺血；假手術組只分離CCA結扎ECA，不插尼龍線。1.5h后抽出尼龍線，放開CCA絲線，實現(xiàn)再灌注。缺血的同時假手術組和模型組按2mL/kg體積尾靜脈緩慢推注生理鹽水，其余各給藥組按2mL/kg體積靜脈緩慢推注受試藥物。再灌后6h再次給予同等劑量藥物，共給藥2次。實驗過程中保溫毯設定溫度37°C至37.5°C，保持大鼠體溫。
[0072]缺血后6h、24h采用單盲法觀察神經(jīng)行為學。
[0073]1nga 5分制評分標準為:無神經(jīng)損傷癥狀，O分；不能完全伸展左側前爪，I分；向非缺血側轉圈，2分；行走時向非缺血側傾倒，3分；不能自發(fā)行走，意識昏迷，4分。
[0074]末次評分后，動物斷頭取血，取出大腦，稱重，平均切成5個腦片，置TTC染液中37°C避光溫孵約15min，缺血區(qū)呈白色，非缺血區(qū)呈玫瑰紅色，10%福爾馬林避光保存。攝像頭采樣(固定取象的放大倍數(shù))，用多媒體彩色病理圖文分析系統(tǒng)計算大鼠全腦面積及腦梗死面積(以梗死面積/全腦面積表示腦梗死范圍)。
[0075]3、統(tǒng)計方法:數(shù)據(jù)以mean ± SD表示。數(shù)據(jù)以t檢驗分析組間差異，P〈0.05為統(tǒng)計學具有顯著性差異；p〈0.01為統(tǒng)計學具有極顯著性差異。與模型組比較判斷藥物的作用，給藥組間比較判斷藥物是否有量效關系。
[0076]4、結果:
[0077]4.1對大鼠神經(jīng)行為學的影響:見表1
[0078]表1:對大鼠神經(jīng)行為學的影響(x±s)
[0079]

【權利要求】
1.一種治療心腦血管疾病的藥物組合物，由人參皂苷Rb1與人參皂苷Rd組成。
2.根據(jù)權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述人參皂苷Rb1與人參皂苷Rd的重量為2-12: I。
3.根據(jù)權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述人參皂苷Rb1與人參皂苷Rd的重量為4-10: I。
4.根據(jù)權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，所述人參皂苷Rb1與人參皂苷Rd的重量為6-8: I。
5.根據(jù)權利要求1-4任一項所述的藥物組合物，其特征在于，所述人參皂苷Rb1與人參皂苷Rd純度為85 % -99.99 %。
6.根據(jù)權利要求1-4任一項所述的藥物組合物，其特征在于，所述人參皂苷Rb1與人參皂苷Rd由以下方法制備: (1)取三七總皂苷適量，加入20-25倍量注射用水稀釋，藥液經(jīng)0.45 μ m微孔濾膜過濾澄清后，濾液以l_2BV/h速度過DlOl大孔吸附樹脂吸附，吸附后用5-6BV的25% -45%乙醇洗脫，洗脫流速為3-4BV/h，棄去洗脫液，再使用5-6BV的60% -80%乙醇洗脫，洗脫流速為2-3BV/h，收集洗脫液，減壓干燥，得到人參皂苷Rb1與Rd混合粗品； (2)取步驟(I)混合粗品適量，經(jīng)過硅膠柱色譜純化，樣品與硅膠重量比為1:20-1:100，采用干法或濕法上樣，用二氯甲烷:甲醇=5:1混合溶劑洗脫，收集洗脫液并進行TLC鑒別，合并含人參皂苷Rd單一斑點部分，減壓干燥，即得人參皂苷Rd ;繼續(xù)以二氯甲烷:甲醇=3:1混合溶劑洗脫，收集洗脫液并進行TLC鑒別，合并含人參皂苷Rb1單一斑點部分，減壓干燥，即得人參皂苷Rb115
7.含權利要求1-6任一項所述的藥物組合物的制劑，其特征在于，所述制劑由藥物組合物單獨制成或由藥物組合物和藥學上可接受的輔料組成。
8.根據(jù)權利要求7所述的制劑，其特征在于，所述劑型為注射液、注射用凍干粉針劑、腸溶片劑、丸劑、散劑、顆粒劑、合劑、糖漿劑、膠囊劑或滴丸劑。
9.根據(jù)權利要求7所述的制劑，其特征在于，所述藥學上可接受的輔料選自甘露醇、乳糖、右旋糖酐、山梨醇、果糖或氯化鈉中的一種或多種。
10.權利要求1-6任一項所述的藥物組合物或權利要求7-9任一項所述的制劑在制備治療心腦血管疾病的藥物中的應用，所述心腦血管疾病優(yōu)選為急性腦梗塞、心肌梗塞。
【文檔編號】A61P9/00GK104173358SQ201410427513
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年8月27日 優(yōu)先權日:2014年8月27日
【發(fā)明者】方同華, 王博, 韓冰, 周廣紅, 王維龍, 葛一蒙, 賈文娟 申請人:哈爾濱珍寶制藥有限公司