針對(duì)β-NGF的適體及其在治療β-NGF介導(dǎo)的疾病和失調(diào)中的用途
【專利摘要】本公開大體上涉及核酸的領(lǐng)域，更具體而言涉及能夠結(jié)合β-NGF的適體；包含這種β-NGF適體的藥物組合物；和制造并使用所述適體的方法。
【專利說明】針對(duì)β -NGF的適體及其在治療β -NGF介導(dǎo)的疾病和失調(diào)中的用途
[0001]本申請(qǐng)為申請(qǐng)日為2011年04月12日、申請(qǐng)?zhí)枮?01180018781.1、發(fā)明名稱為“針對(duì)β -NGF的適體及其在治療β -NGF介導(dǎo)的疾病和失調(diào)中的用途”的發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
[0002]相關(guān)申請(qǐng)
[0003]本申請(qǐng)要求美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)61/323145(2010年4月12日提交)的權(quán)益，其通過引用全部并入本文。
[0004]于2011年4月I日創(chuàng)建的題為“Sequence_listing_ST25.txt”126千字節(jié)大小的序列表通過引用全部并入本文。
發(fā)明領(lǐng)域
[0005]本公開大體涉及核酸和更具體地涉及適體的領(lǐng)域，所述適體能夠結(jié)合神經(jīng)生長(zhǎng)因子，更具體而言神經(jīng)生長(zhǎng)因子的β亞基(“β-NGF”)，并用作針對(duì)預(yù)防、治療或改善搔癢癥、搔癢性病癥和/或其他β-NGF已牽連其中的疾病或病癥的治療。本公開還涉及用于施用能夠結(jié)合β -NGF的適體的材料和方法。

【背景技術(shù)】
[0006]以下描述提供與本公開有關(guān)的信息概述，并且不是承認(rèn)本文引用的任何所提供的信息或出版物對(duì)本公開是現(xiàn)有技術(shù)。
[0007]嚴(yán)重的瘙癢每天負(fù)面地影響數(shù)以百萬計(jì)人的生活質(zhì)量。嚴(yán)重的瘙癢可能與多種健康狀態(tài)有聯(lián)系，包括瘙癢性皮膚病，例如疥瘡、濕疹、干皮癥、牛皮癬、蕁麻疹，以及系統(tǒng)性病癥，包括慢性肝臟或腎臟疾病和淋巴瘤。類似地，疼痛是常見的現(xiàn)象，其為看醫(yī)生的主要原因之一。疼痛可能與多種類型的損害或病癥有聯(lián)系，并且治療急性疼痛失敗可能導(dǎo)致慢性疼痛的問題以及免疫和代謝失調(diào)。除降低患有瘙癢癥和/或疼痛的個(gè)體的生活質(zhì)量，在特別是與搔癢性皮膚病以及慢性疼痛失調(diào)有關(guān)的醫(yī)療預(yù)算上也有顯著的影響。目前處理或治療搔癢和/或疼痛的努力被廣泛地認(rèn)為是不能勝任的。
[0008]神經(jīng)生理學(xué)研究已確認(rèn)癢途徑與疼痛途徑相比的區(qū)別。癢的感覺是由專門的C神經(jīng)元感知和傳遞，其區(qū)別于加工疼痛感覺的傷害性感受器(Schmelz, Neurosc1.B1behav.Rev.do1: 10.1016/j.neub1rev.2008.12.004，2009)。專門的 C 神經(jīng)元然后傳遞所述癢刺激至一類特化的背角神經(jīng)元并投身至丘腦(Stander and Schmelz, Eur.J.PainlO: 473，2006)。相信在周圍神經(jīng)末梢上沒有特異的癢受體而癢感C神經(jīng)元的特異性是基于其與癢途徑在脊髓的連接。在腦活動(dòng)模式中觀察到癢與疼痛的差異，例如缺少可檢測(cè)的來自癢感覺的丘腦和頂葉體感皮層的活動(dòng)(Yosipovitch等人，Lancet361:690.2003)。
[0009]一般將疼痛分類為急性的或慢性的。急性疼痛通常是組織損傷的反應(yīng)，其特征是短暫并隨著最初損傷痊愈而解決。慢性疼痛是持續(xù)的并可能與創(chuàng)傷性事件沒有明顯的聯(lián)系。在疼痛的機(jī)械起源的基礎(chǔ)上可以進(jìn)一步將疼痛分類并包括傷害性的和非傷害性的。傷害性疼痛是由通過特異性刺激(損傷、炎癥、化學(xué)制品等)所激活的特異性的受體(傷害性受體)所介導(dǎo)的。傷害性疼痛可以進(jìn)一步劃分類為軀體的或內(nèi)臟的。軀體疼痛發(fā)生在組織中，例如皮膚、肌肉、關(guān)節(jié)、骨骼或韌帶。軀體疼痛是一般尖銳的和局部的。目前的治療包括使用的阿片類和非留體類抗炎癥藥物(NSAIDS)。內(nèi)臟疼痛發(fā)生在內(nèi)部器官中。它經(jīng)常地是定位不明的疼痛并且通常使用阿片類治療。
[0010]非傷害性疼痛可以進(jìn)一步分解成神經(jīng)性的或交感神經(jīng)性的。神經(jīng)性疼痛可能在周圍或中樞神經(jīng)系統(tǒng)中出現(xiàn)。神經(jīng)性疼痛可能與退行性病癥、炎癥或感染性疾病有聯(lián)系。這類型的疼痛導(dǎo)致過敏感(痛覺過敏)并經(jīng)常被描述為刺痛或灼痛。治療可選方案包括N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)拮抗劑、抗心律不齊藥、抗驚厥藥或抗抑郁藥。神經(jīng)性疼痛經(jīng)常對(duì)常規(guī)的止痛藥是耐受的。交感神經(jīng)疼痛出現(xiàn)在交感神經(jīng)系統(tǒng)以及周圍和中樞神經(jīng)系統(tǒng)并且通常與某種類型的損傷有聯(lián)系。損傷的位置可能表現(xiàn)出增長(zhǎng)的過敏感和異常的溫度。治療通常涉及包括交感神經(jīng)阻斷、血管舒張、抗驚厥藥、抗心律不齊藥和抗抑郁藥的多藥物方案。
[0011]不推薦用阿片類止痛藥的常規(guī)和長(zhǎng)期的治療，因?yàn)榭紤]到潛在的成癮性、副作用、耐受性和對(duì)阿片類的依賴性。阿片類的副作用包括惡心、嘔吐、便秘、呼吸抑制等。對(duì)許多目前以幫助進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶弁纯刂频闹委?，存在缺乏效力、?yán)重的副作用和給藥方法不力。這些問題支持需要更好的疼痛控制療法。
[0012]雖然癢和疼痛是明顯地有區(qū)別的感覺，但在癢和疼痛之間有重要的相互作用。眾所周知可以通過刮擦引起的疼痛的感覺減少癢。然而，通過作用以降低疼痛的感覺的止痛藥(如阿片類)實(shí)際上可以增強(qiáng)癢的感覺。因此，一些針對(duì)疼痛的治療可以加劇癢的癥狀，這進(jìn)一步支持對(duì)更好的有治療癢和疼痛的潛力的治療的需要。
[0013]神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)是神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)性細(xì)胞因子或神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子家族中的一員。神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子通過控制細(xì)胞的存活、分化和凋亡在周圍和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和維持中發(fā)揮關(guān)鍵作用。除了這些神經(jīng)系統(tǒng)的功能，NGF也已顯示出增加組胺的釋放、肥大細(xì)胞的產(chǎn)生和B淋巴細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化。NGF也已顯示出調(diào)節(jié)某些脂質(zhì)介質(zhì)的嗜堿性生產(chǎn)。嗜中性粒細(xì)胞的凋亡也可以被NGF所抑制。所有這些因素暗示NGF在免疫系統(tǒng)中以及神經(jīng)系統(tǒng)中的作用。
[0014]NGFβ鏈(β-NGF)單獨(dú)地負(fù)責(zé)NGF的神經(jīng)生長(zhǎng)刺激活性。在細(xì)胞中，β-NGF以二聚體存在并與神經(jīng)元和非神經(jīng)元細(xì)胞中的兩類細(xì)胞表面受體結(jié)合。該蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)基于三個(gè)胱氨酸二硫化物和兩個(gè)反向平行的β_鏈。人、小鼠和大鼠該蛋白的氨基酸的同源性是大約90%。像所有的神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，β -NGF以ηΜ的親和力來結(jié)合ρ75細(xì)胞受體。β -NGF也以ηΜ的親和力來結(jié)合一種酪氨酸激酶受體(Trk)，具體來說結(jié)合TrkA。與p75受體的反應(yīng)可以誘導(dǎo)細(xì)胞死亡而與TrkA結(jié)合促進(jìn)細(xì)胞存活。β β -NGF結(jié)合TrkA導(dǎo)致該受體和細(xì)胞內(nèi)部的蛋白質(zhì)的磷酸化。β-NGF通過受體介導(dǎo)的內(nèi)吞被內(nèi)化。在廣泛的非神經(jīng)組織中發(fā)現(xiàn)Trk受體。
[0015]從皮膚中的角質(zhì)形成細(xì)胞所釋放的神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)是主要遞質(zhì)之一，所述遞質(zhì)通過(也包括其他)促進(jìn)神經(jīng)纖維發(fā)芽來增加皮膚的神經(jīng)密度并影響形態(tài)(Schmelz, Neurosc1.B1behav.Rev.do1:10.1016/j.neub1rev.2008.12.004, 2009)。已發(fā)現(xiàn)有慢性瘙癢的患者表現(xiàn)出增加的皮內(nèi)神經(jīng)纖維密度。另外，已發(fā)現(xiàn)NGF通過(在其他事項(xiàng)中)觸發(fā)NGF受體酪氨酸激酶TrkA來增加周圍神經(jīng)元的靈敏度(Stander andSchmelz, Eur.J.PainlO:473, 2006)。
[0016]可能由瘙癢和疼痛引起癥狀的異位性病癥中所測(cè)量的高濃度的NGF中表現(xiàn)出NGF在在介導(dǎo)瘙癢以及疼痛中的重要性。有異位性皮炎的患者具有極大地提高的NGF的血清水平，其與所述病癥的嚴(yán)重性正相關(guān)。有接觸性皮炎的患者具有更高的局部NGF濃度而有結(jié)節(jié)性癢疫的患者也表現(xiàn)出更高的NGF水平和TrkA活動(dòng)水平(Schmelz, Neurosc1.B1behav.Rev.do1: 10.1016/ j.neub1rev.2008.12.004, 2009)。
[0017]通過腹腔內(nèi)注射系統(tǒng)性施用抗NGF抗體在針對(duì)異位性皮炎的小鼠模型的癥狀上的效果已有研究，并且結(jié)果“暗示抗NGF抗體阻斷NGF對(duì)周圍神經(jīng)系統(tǒng)上的作用并抑制表皮神經(jīng)支配、皮炎和抓撓行為”(Takano等人，J.Pharmacol Sci99:211:284，2005)。然而，該研究發(fā)現(xiàn)抗-NGF抗體沒有改變血清NGF水平，沒有減少所測(cè)試的皮膚區(qū)域中的NGF濃度，并且沒有完全地抑制抓撓行為。因此，仍然存在更完全地減少或消除與異位性皮炎有關(guān)聯(lián)的瘙癢的需要。
[0018]不斷增長(zhǎng)的證據(jù)表明NGF作為某些疼痛狀態(tài)的遞質(zhì)起作用。已顯示抗NGF抗體可以產(chǎn)生持續(xù)的熱和化學(xué)止痛效果，以及阻斷由角叉菜膠(carrageenan)誘導(dǎo)的炎癥所發(fā)展的痛覺過敏(McMahon等人，Nat.Med.1:774, 1995)。針對(duì)阻斷NGF生物活性的小分子NGF受體拮抗劑的研究已表明在神經(jīng)性和炎癥性疼痛上的止痛效果(Owolabi等人，J.Pharmacol.Exp.Ther.289:1271, 1999)。在Owolabi等人的研究中，小分子NGF活性抑制劑的止痛效果可能小于嗎啡的效果，其取決于施用的途徑。由于阿片類(例如嗎啡)具有很多不需要的副作用，仍然有需要提供在由NGF介導(dǎo)的多種疼痛狀態(tài)中的止痛，其允許在有效施用中的靈活性。
[0019]概述
[0020]本公開提供與神經(jīng)生長(zhǎng)因子的β亞基結(jié)合的多種適體(在本文中單獨(dú)地稱為“ β -NGF適體”)和使用這種β -NGF適體來治療β -NGF介導(dǎo)的疾病和失調(diào)(包括疼痛和瘙癢和搔癢性病癥的治療)的方法。包括藥物組合物或制劑，其包含β-NGF適體或其藥學(xué)上可接受的鹽和至少一種藥學(xué)上可接受的載體。
[0021]可以任何適合的藥學(xué)上可接受的劑量形式制備本公開的組合物。本文所描述的制劑和劑量，旨在在治療各種病癥(例如疼痛和瘙癢和搔癢病癥)中最大化臨床的效力，而同時(shí)減少或最小化不良副作用。
[0022]本公開還提供用于預(yù)防、治療或改善由β-NGF所介導(dǎo)的疾病或病癥的方法，所述方法包括給脊椎動(dòng)物，具體地哺乳動(dòng)物，更具體地人類施用β -NGF適體或所述β -NGF適體的藥物組合物。具體而言，本公開提供用于治療、預(yù)防或改善疼痛和瘙癢和搔癢性病癥的方法。在某些方面，所述β-NGF介導(dǎo)的疾病或病癥是這樣的疾病或病癥，其中在疾病某個(gè)階段，β-NGF活性可能直接或間接地導(dǎo)致瘙癢。在一些實(shí)施方案中，所要治療、防止或改善的疾病或病癥是皮炎或濕疹。在其它實(shí)施方案中，所要治療、防止或改善的疾病或病癥是異位性皮炎。
[0023]在一個(gè)實(shí)施方案中，通過施用β -NGF適體使所述適體暴露至β -NGF并能夠結(jié)合β-NGF(不論用于被治療的患者的遞送所述適體的方式)可以實(shí)現(xiàn)治療效果(例如治療、預(yù)防或改善疼痛和瘙癢和搔癢性病癥)。在一個(gè)相關(guān)的實(shí)施方案中，通過施用所述β-NGF適體使其暴露于β-NGF并結(jié)合β-NGF，從而阻止或減少β-NGF與一或多種其不同細(xì)胞受體的結(jié)合可以實(shí)現(xiàn)治療效果。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述細(xì)胞受體是P75。在另一實(shí)施方案中，所述細(xì)胞受體是Trk受體。在又一實(shí)施方案中,所述細(xì)胞受體是TrkA。在又一實(shí)施方案中，所述β-NGF適體阻止或減少所述β-NGF受體和其它內(nèi)部的細(xì)胞蛋白質(zhì)的磷酸化水平。
[0024]所提供的方法包括與一或多種次級(jí)活性劑聯(lián)合施用β-NGF適體。這種施用可以是連續(xù)的或以組合組合物。
[0025]在另一方面，本公開提供體外診斷方法，其包括將β -NGF適體與疑似包含β -NGF的樣品接觸。在另一方面，本公開提供體內(nèi)診斷方法，其包括提供適當(dāng)?shù)貥?biāo)記的β-NGF適體，注射所述適體至疑似具有β -NGF介導(dǎo)的疾病或病癥的個(gè)體中，并出于診斷或評(píng)估所述個(gè)體的健康狀況的目的而檢測(cè)所述標(biāo)記的適體。將會(huì)按照所要使用的成像方式選擇所使用的標(biāo)記。
[0026]附圖簡(jiǎn)述
[0027]圖1展示針對(duì)適體2426-66( ) (SEQ ID NO:1)與隨機(jī)文庫(〇)相比的結(jié)合曲線。
[0028]圖2A和2B表示對(duì)適體2426-66 (SEQ ID NO:1)使用454測(cè)序鑒定的適體共有序列。
[0029]圖3展示針對(duì)β -NGF適體的二聚化策略#1。
[0030]圖4展示針對(duì)β -NGF適體的二聚化策略#2。
[0031]圖5圖形化地展示多種適體抑制人β -NGF誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞分化的能力，在實(shí)施例4中所描述的神經(jīng)突生長(zhǎng)測(cè)定中測(cè)試。
[0032]圖6圖形化地展示β -NGF介導(dǎo)的神經(jīng)突生長(zhǎng)的抑制，其作為適體2426_66 ( )(SEQ ID NO:1)與其截短變體2426-66-50(〇)(SEQ ID NO:2)的適體濃度的函數(shù)，如實(shí)施例4所描述測(cè)量。
[0033]圖7圖形化地展示通過適體2426-66 (SEQ ID NO:1)和截短變體2426_66_50 (SEQID NO: 2)和 2426-66-53 (SEQ ID NO:43)的對(duì)人 β-NGF、小鼠 β-NGF 和大鼠 β-NGF 介導(dǎo)的神經(jīng)突生長(zhǎng)的抑制。所有三種適體與對(duì)人β -NGF幾乎一樣有效地抑制了小鼠β -NGF，并以更小的程度抑制了大鼠β-NGF。
[0034]圖8圖形化地展示使用適體2426-66 (SEQ ID NO:1)和截短變體2426_66_50 (SEQID NO: 2)和 2426-66-3 (SEQ ID NO: 5)的 TrkA 磷酸化測(cè)定的結(jié)果。
[0035]圖9圖形化地展示使用小鼠和大鼠(rate) β -NGF針對(duì)適體2426-66-50 (SEQ IDNO: 2)的TrkA磷酸化測(cè)定。
[0036]圖10表示用于制備本文所描述的適體的C-5嘧啶修飾。
[0037]圖11圖形化地展示在用適體2426-66-50 (SEQ ID NO: 2) (.)治療的患病小鼠中四個(gè)星期內(nèi)抓撓頻率的減少，但在未處理小鼠()或用親水性軟膏(HO)處理的小鼠(▲)中沒有減少，如實(shí)施例5中所描述的。在適體治療與未治療(*)之間或適體治療與HO治療(#)之間觀察到統(tǒng)計(jì)上顯著的差異(?〈0.05)，其由〖檢驗(yàn)確定。
[0038]圖12圖形化地展示在用適體2426-66-50 (SEQ ID NO: 2) (.)治療的患病小鼠中四個(gè)星期內(nèi)臨床皮膚病癥的減少，但在未處理小鼠()或用親水性軟膏(HO)處理的小鼠(A)中沒有減少，如實(shí)施例5中所描述的。在適體治療與未治療(*)之間或適體治療與HO治療(#)之間觀察到統(tǒng)計(jì)上顯著的差異(ρ〈0.05)，其由t檢驗(yàn)確定。
[0039]發(fā)明詳述
[0040]現(xiàn)在將會(huì)詳細(xì)描述本發(fā)明的代表性實(shí)施方案。雖然會(huì)結(jié)合所列舉的實(shí)施方案來描述本發(fā)明，但會(huì)理解本發(fā)明并非旨在限于這些實(shí)施方案。相反地，本發(fā)明旨在涵蓋如權(quán)利要求所限定的可以包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)的所有替代物、修改和等同物。
[0041]本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)承認(rèn)許多類似或等同于本文所描述的方法和材料，其可以在本發(fā)明的實(shí)施中使用并且在本發(fā)明的領(lǐng)域內(nèi)。本發(fā)明不以任何方式限于所描述的方法和材料。
[0042]除非另有定義，本文中所用的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有由本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常所理解的相同的含義。雖然在本發(fā)明的實(shí)施或測(cè)試中可以使用類似或等同于本文中所描述的任何方法、設(shè)備和材料，現(xiàn)在描述優(yōu)選的方法、設(shè)備和材料。
[0043]本公開中引用的所有出版物、出版的專利文獻(xiàn)和專利申請(qǐng)是本公開所屬的領(lǐng)域的技術(shù)水平的指示。本文所引用的所有出版物、出版的專利文獻(xiàn)和專利申請(qǐng)以相同程度來通過引用并入本文，正如每個(gè)單個(gè)出版物、公開的專利文件或?qū)＠暾?qǐng)被具體地和單個(gè)地以通過引用并入。
[0044]如在本公開(包括附加權(quán)利要求)中所使用的，單數(shù)形式“一(a)”、“一(an)”和“所述(the) ”包括復(fù)數(shù)引用，除非所述內(nèi)容明確另有指定，并與“至少一”和“一或多”可交換地使用。因此，對(duì)“一個(gè)適體”的引用包括適體的混合物等。
[0045]如本文中所用的，術(shù)語“大約”代表數(shù)字?jǐn)?shù)值的不顯著的修改或改變，以致所述數(shù)字?jǐn)?shù)值相關(guān)的項(xiàng)的基本功能是不變的。
[0046]當(dāng)在本文中使用術(shù)語“每個(gè)”來指復(fù)數(shù)的項(xiàng)時(shí)，旨在指所述項(xiàng)的至少兩個(gè)。不需要要求組成復(fù)數(shù)的所有項(xiàng)滿足關(guān)聯(lián)的額外限制。
[0047]如本文中所用的，術(shù)語“包含(comprises) ”、“包含(comprising) ”、“包括(includes) ”、“包括(including) ”、“含有(contains) ”，“含有(containing) ” 及其任何變體旨在涵蓋非獨(dú)占性的包含物，例如包含、包括或含有一種元素或一列表的元素的過程、方法、加工產(chǎn)品或物質(zhì)的組合物不僅包括那些元素還可能包括沒有明確地列出的或該過程、方法、加工產(chǎn)品或物質(zhì)的組合物的固有的其它元素。
[0048]如本文中所用的，術(shù)語“核苷酸”是指核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸，或其修飾的形式及其類似物。核苷酸包括種類，其包括嘌呤(例如，腺嘌呤、次黃嘌呤、鳥嘌呤和它們的衍生物和類似物)以及嘧啶(例如，胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶和它們的衍生物和類似物)。
[0049]如本文中所用的，互換地使用“核酸”、“寡核苷酸”和“多核苷酸”來指核苷酸的聚合物，并包括DNA、RNA、DNA/RNA雜交體和這些種類的核酸、寡核苷酸和多核苷酸的修飾，其中包括在所述核苷酸單位的任何位置上附加各種實(shí)體或部分。術(shù)語“多核苷酸”、“寡核苷酸”和“核酸”包括雙或單鏈分子以及三螺旋分子。核酸、寡核苷酸和多核苷酸是比術(shù)語適體更寬的術(shù)語，因此術(shù)語核酸、寡核苷酸和多核苷酸包括是適體的核苷酸的聚合物但術(shù)語核酸、寡核苷酸和多核苷酸不限于適體。
[0050]如本文中所用的，當(dāng)指寡核苷酸時(shí)使用術(shù)語“修飾”、“修飾的”、“修飾”意為所述寡核苷酸的四種組成核苷酸堿基(即A、G、T/U和C)的至少一種是天然存在的核苷酸的類似物或酯。在一些實(shí)施方案中，所述修飾的核苷酸賦予寡核苷酸核酸酶抗性。具有在C-5位的取代的嘧啶是修飾的核苷酸的實(shí)例。修飾可以包括主鏈修飾、甲基化、罕有的堿基配對(duì)的組合，例如異堿基異胞苷和異胍等。修飾也可以包括3’和5’的修飾，如加帽。其他修飾可以包括用類似物取代一或多種天然存在的核苷酸，核苷酸間的修飾，例如具有不帶電荷的鍵(例如甲基膦酸鹽、磷酸三酯、磷酸胺鹽(phosphoamidates)、氨基甲酸鹽等)的核苷酸間修飾和具有帶電荷的鍵(例如硫代磷酸鹽、二硫代磷酸鹽等)的核苷酸間修飾，有嵌入劑(例如吖啶、補(bǔ)骨脂素(psoralen)等)的核苷酸間修飾，含有螯合劑(例如金屬、放射性金屬、硼、氧化性金屬等)的核苷酸間修飾，含有烷化劑的核苷酸間修飾和有修飾的鍵(例如阿爾法異頭核酸等)的核苷酸間修飾。另外，通常存在于核苷酸的糖上的任何羥基可以由膦酸基或磷酸基來取代；由標(biāo)準(zhǔn)的保護(hù)基團(tuán)來保護(hù)；或被活化來制備額外的與其它核苷酸或固體支持物的連接?？梢杂冒?、大約I至大約20個(gè)碳原子的有機(jī)加帽基團(tuán)部分、在一個(gè)實(shí)施方案中的大約10至大約80kDa的聚乙二醇(PEG)聚合物、在另一實(shí)施方案中的大約20至大約60kDa的PEG聚合物、或者其它的親水性或疏水性的生物的或合成的聚合物來磷酸化或取代所述5’和3’末端的OH基。在一個(gè)實(shí)施方案中，修飾是嘧啶的C-5位的修飾。通過直接在C-5位的酰胺鍵或其他類型的鍵可以產(chǎn)生這些修飾。
[0051]多核苷酸還可以含有本領(lǐng)域通常所知的核糖或脫氧核糖的類似形式，包括2’ -O-甲基_、2’ -O-烯丙基、2’ -氟-或2’ -疊氮基-核糖，碳環(huán)糖類似物，α -異頭糖,差向異構(gòu)糖如阿拉伯糖、木糖或來蘇糖，批喃糖，呋喃糖，景天庚醒糖，無環(huán)類似物和脫堿基核苷類似物如甲基核糖苷。如上所述，通過可選的連接基團(tuán)可以替代一或多個(gè)磷酸二酯鍵。這些可選的連接基團(tuán)包括其中磷酸被P(O)S( “硫代”)、P(S) S( “二硫代”)、(O)NR2 ( “酰胺”)、P (O) R, P (O) (O) 0R’、CO或CH2 ( “formacetal ”)替換的實(shí)施方案，其中每個(gè)R或R’獨(dú)立地是H或任選地含有醚(-0 -)鍵、芳基、鏈烯基、環(huán)烷基、環(huán)烯基或芳烷基的取代的或未取代的烷基(1-20C)。并非所有的多核苷酸中的鍵都需要是相同的。糖、嘌呤和嘧啶的類似物形式的取代在設(shè)計(jì)終產(chǎn)物中可以是有利的，例如像多酰胺主鏈的可選主鏈結(jié)構(gòu)也可以是有利的。
[0052]如本文中所用的，術(shù)語“C-5修飾的嘧啶”是指有C-5位上的修飾的嘧啶，所述修飾包括但不限于圖10中所示的那些部分。c-5修飾的嘧啶的實(shí)例包括美國(guó)專利號(hào)5719273和5945527以及美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)序列號(hào)61/264545 (2009年11月25日提交，題為“核酸酶抗性寡核苷酸”)中所描述的那些。C-5修飾的實(shí)例包括C-5位上的脫氧尿嘧啶由取代基所取代，所述取代基獨(dú)立地選自:苯甲基甲酰胺(或者苯甲基氨基羰基)(Bn)、萘基甲基甲酰胺(或者萘基甲基氨基羰基)(NAP)、色氨基甲酰胺(或者色氨基羰基)(Trp)和異丁基甲酰胺(或者異丁基氨基羰基)(IBU)，如緊接著下面所示。
[0053]

【權(quán)利要求】
1.藥物組合物，其包含結(jié)合β-NGF的適體或其藥學(xué)上可接受的鹽或其片段以及藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑，所述適體包含選自SEQ.1D.NO: 1,2,9-44和149的序列。
2.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述適體抑制β-NGF的功能。
3.權(quán)利要求1的藥物組合物，其中所述適體能夠調(diào)節(jié)β-NGF與其一或多種細(xì)胞受體的
4.權(quán)利要求3的藥物組合物，其中所述細(xì)胞受體選自p75或TrkA。
5.權(quán)利要求4的藥物組合物，其中所述適體包含與SEQID N0:l、2、9-44和149中的任一具有至少大約90%相同性、至少大約91%相同性、至少大約92%相同性、至少大約93%相同性、至少大約94%相同性或至少大約95%相同性的序列。
6.權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的藥物組合物，所述組合物還包含稀釋劑、抗微生物劑、結(jié)合劑、填充劑、潤(rùn)濕劑、懸浮劑、軟化劑和乳化劑。
7.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述藥物組合物是選自霜?jiǎng)⑾磩?、軟膏、凝膠、浸潰敷料、氣霧劑、含藥粉末、含藥粘合劑和泡沫的局部制劑。
8.權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)的適體在生產(chǎn)藥物中的用途。
9.權(quán)利要求8的用途，其中所述藥物是包含適體的用于治療、預(yù)防或改善由β-NGF介導(dǎo)的疾病的 藥劑。
10.權(quán)利要求9的用途，其中所述β-NGF介導(dǎo)的疾病或病癥是這樣的疾病或病癥，其中在疾病進(jìn)程中的某個(gè)階段，β -NGF活性可能直接或間接地導(dǎo)致瘙癢。
11.權(quán)利要求9或10的用途，其中所述疾病或病癥是皮炎或濕疹。
12.權(quán)利要求11的用途，其中所述皮炎是異位性皮炎。
【文檔編號(hào)】A61P17/04GK104069512SQ201410340470
【公開日】2014年10月1日 申請(qǐng)日期:2011年4月12日 優(yōu)先權(quán)日:2010年4月12日
【發(fā)明者】D·J·施奈德, 久美奈明彥, S·沃, D·雷尼考, 長(zhǎng)嚢晃, 小野俊秀 申請(qǐng)人:私募蛋白質(zhì)體公司, 大冢制藥株式會(huì)社