生物催化法提高板藍(lán)根浸膏中有效成分表告依春含量的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種生物催化法提高板藍(lán)根浸膏中有效成分表告依春含量的方法，其采用了三酶法，即纖維素酶、蛋白酶和淀粉酶，使板藍(lán)根浸膏中有效成分表告依春的含量較傳統(tǒng)的水提醇沉法提高了一倍以上，出膏率也有大幅提高。
【專利說(shuō)明】生物催化法提高板藍(lán)根浸膏中有效成分表告依春含量的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥提取領(lǐng)域，具體涉及一種生物催化法提高板藍(lán)根浸膏中有效成分表告依春含量的方法。
技術(shù)背景
[0002]眾所周知，板藍(lán)根是我國(guó)傳統(tǒng)治療病毒性感冒及腮腺炎的理想藥物，板藍(lán)根性寒，味苦，具有清熱、解毒、涼血、利咽之功效，為中藥的廣譜抗菌藥。過(guò)去認(rèn)為靛藍(lán)、靛玉紅等成分為其抗病毒的有效成分，但現(xiàn)在的研究表明，靛藍(lán)、靛玉紅沒有抗病毒活性，抗病毒作用的有效部位為總生物堿，其中表告依春是板藍(lán)根體內(nèi)產(chǎn)生的含硫生物堿，其為板藍(lán)根抗流感的主要成分之一 。[見文獻(xiàn):1.板藍(lán)根抗病毒有效成分研究進(jìn)展一中醫(yī)藥信息2005年第22卷第5期pageS37-40; 2.板藍(lán)根抗病毒物質(zhì)基礎(chǔ)研究思路一中草藥第39卷第4期pages616-618 ；3.板藍(lán)根不同提取物中抗病毒成分表告依春在大鼠體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)一中國(guó)科技大學(xué)學(xué)報(bào)第37卷第6期pages519-522 ；4.板藍(lán)根總生物堿中表告依春在發(fā)熱大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)-藥效學(xué)結(jié)合模型研究一中草藥第38卷第10期pages 1514-1519等]。故表告依春的含量，是反映板藍(lán)根質(zhì)量的一個(gè)重要指標(biāo)。
[0003]目前板藍(lán)根制劑多采用板藍(lán)根浸膏制成，而板藍(lán)根浸膏一般是將板藍(lán)根飲片用水提醇沉的方法進(jìn)行提取制得，用該方法得到的板藍(lán)根浸膏，抗病毒成分表告依春的含量不夠理想，從而影響板藍(lán)根制劑的治療作用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種生物催化法提高板藍(lán)根浸膏中有效成分表告依春含量的方法。
[0005]本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題采取的技術(shù)方案:
一種生物催化法提高板藍(lán)根浸膏中有效成分表告依春含量的方法，包括如下步驟:
(1)取板藍(lán)根飲片，加水浸潤(rùn)；
(2)加入纖維素酶和蛋白酶進(jìn)行酶解；
(3)加熱煎煮滅活，過(guò)濾；
(4)濾渣加水煎煮，過(guò)濾；
(5)合并步驟(3)和(4)的濾液，加入淀粉酶進(jìn)行液化，再加熱滅活，過(guò)濾，將濾液濃縮成浸膏即得。
[0006]其中，
步驟(1)中加入所述板藍(lán)根飲片8倍質(zhì)量的水浸潤(rùn)I小時(shí)；
步驟(2)的具體步驟為:加熱至30-50°C，調(diào)pH值2.5-6.0,以板藍(lán)根飲片的質(zhì)量計(jì)，分別按10-50U/g和5-10U/g加入纖維素酶和蛋白酶，恒溫?cái)嚢瑁附?0-90分鐘；優(yōu)選加熱至 40-50 0C，調(diào) pH 值 3.5-5.0 ；步驟(3)中是在100°C下煎煮滅活I(lǐng)小時(shí)；
步驟(4)中加入所述板藍(lán)根飲片6倍質(zhì)量的水在100°C下煎煮I小時(shí)；
步驟(5)的具體步驟為:合并步驟(3)和(4)的濾液，加熱至50-75°C，調(diào)pH值5.5-7.5，以板藍(lán)根飲片的質(zhì)量計(jì)，按6-8 U/g加入淀粉酶，液化I小時(shí)，再加熱至100°C滅活10-20分鐘，過(guò)濾，將濾液濃縮至相對(duì)密度為1.06-1.10，過(guò)濾，將濾液在10°C冷置15-24小時(shí)，取上清液，再次過(guò)濾后濃縮至相對(duì)密度為1.25-1.35的浸膏。
[0007]優(yōu)選地，步驟(5)中加熱至60_70°C，調(diào)pH值6.0-7.0，所述淀粉酶為中溫α-淀粉酶、高溫α-淀粉酶或β_淀粉酶，優(yōu)選中溫α-淀粉酶。
[0008]本發(fā)明創(chuàng)造性地將纖維素酶、蛋白酶和淀粉酶應(yīng)用到板藍(lán)根浸膏的提取工藝中，方法工藝簡(jiǎn)單，易于操作，用料價(jià)廉易得，得到的板藍(lán)根浸膏中有效成分表告依春的含量較傳統(tǒng)的水提醇沉法提高了一倍以上，出膏率也有大幅提高。藥代動(dòng)力學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，表告依春?jiǎn)误w的口服生物利用度明顯高于板藍(lán)根總提取物，因此用本發(fā)明得到的板藍(lán)根浸膏制成的板藍(lán)根制劑，其抗病毒作用要明顯優(yōu)于傳統(tǒng)板藍(lán)根浸膏制劑。

【具體實(shí)施方式】
[0009]下面用具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步說(shuō)明。
[0010]實(shí)施例1
取板藍(lán)根飲片100kg，投料至提取罐內(nèi)，加水800L浸潤(rùn)I小時(shí)，加熱至45°C，用碳酸鈉和醋酸調(diào)PH值為4.5，加入纖維素酶(購(gòu)于山東泰安信得利生物工程有限公司，食品級(jí)，100000u/ml )3X106U，加入蛋白酶(購(gòu)于山東泰安信得利生物工程有限公司，食品級(jí)，50000u/ml)8X105 U，恒溫，攪拌，酶解I小時(shí)，繼續(xù)加熱至100°C煎煮(滅活)I小時(shí)，濾過(guò)，出藥汁；加水600L，100°C煎煮I小時(shí)，濾過(guò)，出藥汁。合并兩次藥汁至雙效濃縮罐，調(diào)溫至70°C，用碳酸鈉和醋酸調(diào)pH值為6.5，加入中溫α-淀粉酶(購(gòu)于山東省安丘市酶制劑廠，食品級(jí)，2000u/ml) 8Χ105 U，液化I小時(shí)，加熱至100°C，滅活10分鐘，濃縮至相對(duì)密度為1.08，濾過(guò)，得藥液160kg，冷置16小時(shí)，提取上清液，濃縮至相對(duì)密度1.27 (20°C測(cè))，收得浸骨56.6kg,出骨率為56.6%,溶化性合格,測(cè)得表告依春含量0.171%。
[0011]實(shí)施例2
取板藍(lán)根飲片100kg，投料至提取罐內(nèi)，加水800L浸潤(rùn)I小時(shí)，加熱至40°C，用碳酸鈉和醋酸調(diào)PH值為6，加入纖維素酶(購(gòu)于山東泰安信得利生物工程有限公司，食品級(jí)，100000u/ml) I X 16 U，加入蛋白酶(購(gòu)于山東泰安信得利生物工程有限公司，食品級(jí)，5000011/1111)10\1051恒溫，攪拌，酶解I小時(shí)，繼續(xù)加熱至100°C煎煮(滅活)I小時(shí)，濾過(guò)，出藥汁；加水600L，100°C煎煮I小時(shí)，濾過(guò)，出藥汁。合并兩次藥汁至雙效濃縮罐，調(diào)溫至60°C，用碳酸鈉和醋酸調(diào)pH值為6，加入中溫α-淀粉酶(購(gòu)于山東省安丘市酶制劑廠，食品級(jí)，2000u/ml) 7 X 15 U，液化I小時(shí)，加熱至100°C，滅活20分鐘，濾過(guò)，將濾液濃縮至相對(duì)密度1.34 (20°C測(cè))，收得浸膏54.7kg，出膏率為54.7%，溶化性合格，測(cè)得表告依春含量
0.169%O
[0012]實(shí)施例3
取板藍(lán)根飲片100kg，投料至提取罐內(nèi)，加水800L浸潤(rùn)I小時(shí)，加熱至30°C，用碳酸鈉和醋酸調(diào)PH值為3.5，加入纖維素酶(購(gòu)于山東泰安信得利生物工程有限公司，食品級(jí)，100000u/ml )5X106U，加入蛋白酶(購(gòu)于山東泰安信得利生物工程有限公司，食品級(jí)，50000u/ml) 5 X 15 U，恒溫，攪拌，酶解I小時(shí)，繼續(xù)加熱至100°C煎煮(滅活)I小時(shí)，濾過(guò)，出藥汁；加水600L，100°C煎煮I小時(shí)，濾過(guò)，出藥汁。合并兩次藥汁至雙效濃縮罐，調(diào)溫至650C，用碳酸鈉和醋酸調(diào)pH值為7，加入中溫α -淀粉酶(購(gòu)于山東省安丘市酶制劑廠，食品級(jí)，2000u/ml)6X105U，液化I小時(shí)，加熱至100。。，滅活15分鐘，濃縮至相對(duì)密度為1.10，濾過(guò)，得藥液160kg，冷置20小時(shí)，提取上清液，濃縮至相對(duì)密度1.32 (20°C測(cè))，收得浸膏55kg，出膏率為55%，溶化性合格，測(cè)得表告依春含量0.17%。
[0013]實(shí)施例4
取板藍(lán)根飲片100kg，投料至提取罐內(nèi)，加水800L浸潤(rùn)I小時(shí)，加熱至45°C，用碳酸鈉和醋酸調(diào)PH值為5，加入纖維素酶(購(gòu)于山東泰安信得利生物工程有限公司，食品級(jí)，100000u/ml) 4 X 16 U，加入蛋白酶(購(gòu)于山東泰安信得利生物工程有限公司，食品級(jí)，50000u/ml)7X105 U，恒溫，攪拌，酶解I小時(shí)，繼續(xù)加熱至100°C煎煮(滅活)I小時(shí)，濾過(guò)，出藥汁；加水600L，100°C煎煮I小時(shí)，濾過(guò)，出藥汁。合并兩次藥汁至雙效濃縮罐，調(diào)溫至50°C，用碳酸鈉和醋酸調(diào)pH值為7.5，加入中溫α-淀粉酶(購(gòu)于山東省安丘市酶制劑廠，食品級(jí)，2000u/ml) 6Χ105 U，液化I小時(shí)，加熱至100°C，滅活15分鐘，濃縮至相對(duì)密度為1.06，濾過(guò)，得藥液172kg，冷置24小時(shí)，提取上清液，濃縮至相對(duì)密度1.314 (20°C測(cè))，收得浸膏55.4kg，出膏率為55.4%，溶化性合格，測(cè)得表告依春含量0.169%。
[0014]實(shí)施例5
取板藍(lán)根飲片100kg， 投料至提取罐內(nèi)，加水800L浸潤(rùn)I小時(shí)，加熱至50°C，用碳酸鈉和醋酸調(diào)PH值為2.5，加入纖維素酶(購(gòu)于山東泰安信得利生物工程有限公司，食品級(jí)，100000u/ml )3X106U，加入蛋白酶(購(gòu)于山東泰安信得利生物工程有限公司，食品級(jí)，50000u/ml)8X105 U，恒溫，攪拌，酶解I小時(shí)，繼續(xù)加熱至100°C煎煮(滅活)I小時(shí)，濾過(guò)，出藥汁；加水600L，100°C煎煮I小時(shí)，濾過(guò)，出藥汁。合并兩次藥汁至雙效濃縮罐，調(diào)溫至70°C，用碳酸鈉和醋酸調(diào)pH值為5.5，加入中溫α-淀粉酶(購(gòu)于山東省安丘市酶制劑廠，食品級(jí)，2000u/ml) 8Χ105 U，液化I小時(shí)，加熱至100°C，滅活10分鐘，濃縮至相對(duì)密度為1.08，濾過(guò)，得藥液160kg，冷置16小時(shí)，提取上清液，濃縮至相對(duì)密度1.27 (20°C測(cè))，收得浸膏56kg,出膏率為56%,溶化性合格,測(cè)得表告依春含量0.168%。
[0015]實(shí)施例6
本實(shí)施例選用高溫α -淀粉酶(購(gòu)于山東省安丘市酶制劑廠，食品級(jí)，20000u/ml)，其他條件同實(shí)施例1，制得相對(duì)密度為1.27的浸膏54.5kg，出膏率54.5%，溶化性合格，表告依春含量0.169%。
[0016]實(shí)施例7
本實(shí)施例選用β -淀粉酶，其他條件同實(shí)施例1，制得相對(duì)密度為1.27的浸膏39.6kg，出膏率39.6%，溶化性合格，表告依春含量0.142%。
[0017]對(duì)比例I
取板藍(lán)根飲片100kg，投料至提取罐內(nèi)，加水800L浸潤(rùn)I小時(shí)，加熱至100°C煎煮2小時(shí)，濾過(guò)，出藥汁；加水600L，100°C煎煮I小時(shí)，濾過(guò)，出藥汁。合并兩次藥汁，濃縮至相對(duì)密度為1.20(50°C下測(cè)得)，重160kg，放至室溫，加乙醇使含醇量60%，10°C冷置24小時(shí)，提取上清液，濃縮至相對(duì)密度1.25 (20°C測(cè))，收得流浸膏23.2kg，出膏率為23.2%，溶化性合格，測(cè)得表告依春含量0.061%。
【權(quán)利要求】
1.一種生物催化法提高板藍(lán)根浸膏中有效成分表告依春含量的方法，其特征在于:包括如下步驟: (1)取板藍(lán)根飲片，加水浸潤(rùn)； (2)加入纖維素酶和蛋白酶進(jìn)行酶解； (3)加熱煎煮滅活，過(guò)濾； (4)濾渣加水煎煮，過(guò)濾； (5)合并步驟(3)和(4)的濾液，加入淀粉酶進(jìn)行液化，再加熱滅活，過(guò)濾，將濾液濃縮成浸膏即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物催化法提高板藍(lán)根浸膏中有效成分表告依春含量的方法，其特征在于:步驟(1)中加入所述板藍(lán)根飲片8倍質(zhì)量的水浸潤(rùn)I小時(shí)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物催化法提高板藍(lán)根浸膏中有效成分表告依春含量的方法，其特征在于:步驟(2)的具體步驟為:加熱至30-50°C，調(diào)pH值2.5-6.0,以板藍(lán)根飲片的質(zhì)量計(jì)，分別按10-50U/g和5-10U/g加入纖維素酶和蛋白酶，恒溫?cái)嚢?，酶?0-90分鐘。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種生物催化法提高板藍(lán)根浸膏中有效成分表告依春含量的方法，其特征在于:步驟(2)中加熱至40-50°C，調(diào)pH值3.5-5.0。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物催化法提高板藍(lán)根浸膏中有效成分表告依春含量的方法，其特征在于:步驟(3)中是在100°C下煎煮滅活I(lǐng)小時(shí)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物催化法提高板藍(lán)根浸膏中有效成分表告依春含量的方法，其特征在于:步驟(4)中加入所述板藍(lán)根飲片6倍質(zhì)量的水在100°C下煎煮I小時(shí)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物催化法提高板藍(lán)根浸膏中有效成分表告依春含量的方法，其特征在于:步驟(5)的具體步驟為:合并步驟(3)和(4)的濾液，加熱至50-75°C，調(diào)pH值5.5-7.5，以板藍(lán)根飲片的質(zhì)量計(jì)，按6-8 U/g加入淀粉酶，液化I小時(shí)，再加熱至100°C滅活10-20分鐘，過(guò)濾，將濾液濃縮至相對(duì)密度為1.06-1.10，過(guò)濾，將濾液在10°C冷置15-24小時(shí)，取上清液，再次過(guò)濾后濃縮至相對(duì)密度為1.25-1.35的浸膏。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的一種生物催化法提高板藍(lán)根浸膏中有效成分表告依春含量的方法，其特征在于:步驟(5)中加熱至60-70°C，調(diào)pH值6.0-7.0,所述淀粉酶為中溫α -淀粉酶、聞溫α -淀粉酶或β -淀粉酶。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種生物催化法提高板藍(lán)根浸膏中有效成分表告依春含量的方法，其特征在于:所述淀粉酶為中溫α -淀粉酶。
【文檔編號(hào)】A61P31/16GK104069142SQ201410314334
【公開日】2014年10月1日 申請(qǐng)日期:2014年7月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月4日
【發(fā)明者】郝秋實(shí), 郝炳水 申請(qǐng)人:河北萬(wàn)通金牛藥業(yè)有限公司