促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的組合物及制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的組合物，所述組合物中組分包括白蛋白、表皮生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α、角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、血小板衍生生長(zhǎng)因子、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、白細(xì)胞介素-8、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子。通過(guò)將8個(gè)蛋白因子組合性使用綜合發(fā)揮生理性組織修復(fù)功能，在功能上能相互促進(jìn)，利用機(jī)體本身組織生理恢復(fù)機(jī)制，加速創(chuàng)面愈合同時(shí)，提高創(chuàng)面愈合質(zhì)量，包括恢復(fù)正常皮膚組織機(jī)構(gòu)和功能。各個(gè)內(nèi)含細(xì)胞因子成分有清晰的作用機(jī)理，無(wú)任何潛在毒副反應(yīng)和不良?xì)馕?。這種組合性恢復(fù)劑能在人體生理?xiàng)l件下更快地恢復(fù)組織正常結(jié)構(gòu)和生理功能。
【專(zhuān)利說(shuō)明】促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的組合物及制備方法與應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體地指一種促進(jìn)受損組 織生理調(diào)節(jié)性再生的組合物及制備方法與應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 皮膚潰瘍是由多種原因引起的常見(jiàn)難治性疾病，是由真皮或皮膚深層組織缺血、 壞死引起的皮膚或黏膜缺損。皮膚潰瘍的原因包括血管性潰瘍（動(dòng)脈閉塞硬化性潰瘍、靜 脈曲張性潰瘍）、外傷性潰瘍、感染性潰瘍、化學(xué)性潰瘍、放射性潰瘍、壓迫性潰瘍、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng) 不良性潰瘍、糖尿病性潰瘍、毒蛇咬傷性潰瘍、燒傷后瘢痕上潰瘍等。由于局部組織營(yíng)養(yǎng)狀 態(tài)差，血液循環(huán)障礙及抵抗力低下，容易出現(xiàn)反復(fù)感染形成惡性循環(huán)。
[0003] 皮膚潰瘍患者的一個(gè)潰瘍傷口要長(zhǎng)好，通常需要數(shù)月之久。在哺乳動(dòng)物組織創(chuàng)傷 (即，裂傷或開(kāi)口）情況中，會(huì)導(dǎo)致傷口表面組織微血管破裂和凝血，隨后進(jìn)一步引起組織 細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能降低，及組織壞死。在正常狀態(tài)下，組織能夠通過(guò)機(jī)體本身生物修復(fù)系統(tǒng)來(lái) 修復(fù)受損的組織，其特征為在氧供應(yīng)的條件下，血管生成發(fā)生和局部組織血液供應(yīng)增加，細(xì) 胞增殖等過(guò)程逐步而順序性地形成自然組織形態(tài)和結(jié)構(gòu)。皮膚組織的再生依賴(lài)于周?chē)Y(jié)締 組織恢復(fù)血液供應(yīng)，使殘余組織特異性細(xì)胞如角質(zhì)或真皮層細(xì)胞或肌肉細(xì)胞開(kāi)始重建器官 或組織完整性。此外，間充質(zhì)細(xì)胞，像成纖維細(xì)胞，血管內(nèi)皮細(xì)胞的相關(guān)功能，也是促進(jìn)愈合 過(guò)程的重要因素，包括分泌生長(zhǎng)因子，促進(jìn)形成大量的毛細(xì)血管（血管發(fā)生）和加快成纖維 細(xì)胞本身的成熟，增殖和遷移角質(zhì)形成細(xì)胞上皮，活性膠原蛋白合成等作用。而新血管生長(zhǎng) 是愈合傷口組織必要條件?，F(xiàn)有血管生成劑一般都無(wú)法滿(mǎn)足長(zhǎng)期提供組織修復(fù)生物合成所 需要的額外作用。
[0004] 傷口治療的主要目標(biāo)是實(shí)現(xiàn)傷口閉合。開(kāi)放皮膚傷口創(chuàng)面包括急性手術(shù)和創(chuàng)傷， 慢性潰瘍，燒傷傷口，神經(jīng)性潰瘍，壓瘡，動(dòng)脈和靜脈（瘀）或混合動(dòng)靜脈潰瘍和糖尿病性潰 瘍。開(kāi)放皮膚傷口的愈合過(guò)程通常經(jīng)過(guò)六個(gè)主要階段：炎癥階段，成纖維細(xì)胞增殖階段，血 管增生階段，結(jié)締組織合成階段，上皮細(xì)胞形成階段，及傷口收縮階段。在這一過(guò)程中許多 因素可影響傷口愈合，包括營(yíng)養(yǎng)不良、感染、藥理學(xué)試劑（例如，細(xì)胞毒性藥物和皮質(zhì)類(lèi)固 醇）、糖尿病、高齡等。慢性皮膚傷口會(huì)消耗相當(dāng)大的體力，產(chǎn)生情緒和社會(huì)壓力以及財(cái)政支 出。事實(shí)上，如傷口無(wú)法正常愈合?？蓪?dǎo)致手術(shù)治療，如外科清創(chuàng)、自體植皮術(shù)。目前隨著 傷口愈合機(jī)制的理解，一些綜合手術(shù)治療模式已取得一些進(jìn)展。
[0005] 但是迄今為止，加速傷口愈合的藥物制劑進(jìn)展緩慢。現(xiàn)在最常使用的常規(guī)方式，是 從20世紀(jì)60年代開(kāi)始使用的傷口敷料。以幫助皮膚傷口愈合。人們發(fā)現(xiàn)傷口愈合與濕潤(rùn) 包扎敷料密切有關(guān)，比使用干燥的非閉塞性敷料更有效。今天，許多常規(guī)使用類(lèi)型的敷料包 括薄膜（例如，聚氨酯薄膜），水狀膠體（親水膠體粒子結(jié)合到聚氨酯泡沫材料），水凝膠 (交聯(lián)的聚合物含有至少約60%的水），泡沫劑（親水性或疏水性），鈣藻酸鹽（由酸鈣纖 維的復(fù)合物），等。但是，某些類(lèi)型的傷口（例如，糖尿病性潰瘍，褥瘡）的傷口即使使用這 種敷料也不能及時(shí)全部或局部性愈合。
[0006] -些藥物也曾用于試圖改善傷口愈合。例如，硫酸鋅治療方案已被用于一些疾病， 然而，這個(gè)主要?dú)w因僅于逆轉(zhuǎn)正常血清鋅水平的影響（例如，調(diào)節(jié)組織功能和增加細(xì)胞內(nèi) 殺菌活性）。而其他維生素和礦物質(zhì)缺乏也與降低傷口愈合（如維生素 A，C，D以及鈣，鎂， 銅，鐵）有關(guān)，但是沒(méi)有強(qiáng)有力的證據(jù)表明，增加高于正常血清水平的這些物質(zhì)實(shí)際上能夠 提高傷口愈合。因此，除了在非常缺乏的情況下，這些藥物促進(jìn)傷口愈合已經(jīng)證明是收效甚 微。
[0007] 中醫(yī)藥是治療皮膚潰瘍的另一條途徑，它可以和單獨(dú)或和其他療法合并使用。中 醫(yī)認(rèn)為慢性皮膚潰瘍的全程存在致病因素"虛、瘀、腐"的相互作用。中醫(yī)辨證一般分為， 濕熱毒蘊(yùn)證，濕熱瘀阻證，正虛血瘀證。根據(jù)疾病不同階段或不同癥狀內(nèi)外合治，通過(guò)去除 "虛"、"瘀"、"邪（毒）"關(guān)鍵因素，促進(jìn)創(chuàng)面修復(fù)愈合。祛腐，包括清熱解毒利濕化瘀通絡(luò)的中 藥內(nèi)服外敷，外用升丹制劑拔毒提膿化腐，或祛瘀化腐中藥外用，清除阻礙創(chuàng)面修復(fù)的腐， 并為生肌創(chuàng)造條件；生肌，包括益氣健脾活血通絡(luò)生肌的中藥內(nèi)服，加上外用外敷活血生肌 等摻藥生肌長(zhǎng)皮，化生新肌，修復(fù)組織缺損，促使創(chuàng)面愈合。但是中醫(yī)治療有它的不足之處， 像治療機(jī)理不明；潛在毒副反應(yīng)不清楚；各家使用藥物標(biāo)準(zhǔn)不同，不便于大范圍應(yīng)用；并易 有肉芽生長(zhǎng)過(guò)剩，不能形成正常組織結(jié)構(gòu)的結(jié)構(gòu)和功等。
[0008] 隨著科技的發(fā)展，現(xiàn)有技術(shù)已有使用一些能夠促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂和細(xì)胞分泌的蛋 白分子來(lái)進(jìn)行皮膚修復(fù)的報(bào)道，例如表皮生長(zhǎng)因子（EGF)，角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子（KGF)， 血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF)等，這些都是從蛋白基因工程修飾而產(chǎn)生的高活性蛋白分子， 雖然這些高活性蛋白分子都有單獨(dú)改善傷口愈合功能，但效力有限并易引起副反應(yīng)，像傷 口疤痕，正常皮膚功能的缺失（汗腺分泌，冷熱痛等感覺(jué)），甚至組織異常增生?，F(xiàn)有技術(shù)也 有少量文獻(xiàn)提供了幾種高活性蛋白分子組合使用的報(bào)道，但因其生理功能互助有限且無(wú)相 應(yīng)輔助促進(jìn)物質(zhì)，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證明其效果也不夠理想。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有組織再生制劑效果不佳、容易引起副反應(yīng)，導(dǎo)致傷口 疤痕、正常皮膚功能的缺失、組織異常增生的缺陷，提供一種簡(jiǎn)單易得且效果好的促進(jìn)受損 組織生理調(diào)節(jié)性再生的組合物及制備方法與應(yīng)用。
[0010] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所設(shè)計(jì)的促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的組合物，其中 組分及含量為：5?30g/L白蛋白，10?100mg/L表皮生長(zhǎng)因子，5?50mg/L轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因 子α，20?100mg/L角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子，15?80mg/L堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，10? 80mg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子，10?30mg/L血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，20?90mg/L白細(xì)胞介素-8, 15?75mg/L粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，余量為水。
[0011] 優(yōu)選地，促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的組合物中組分及含量為：5?12g/L白蛋 白，30?70mg/L表皮生長(zhǎng)因子，10?30mg/L轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α，30?70mg/L角質(zhì)形成細(xì)胞 生長(zhǎng)因子，30?70mg/L堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，30?70mg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子，10? 30mg/L血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，30?70mg/L白細(xì)胞介素-8,30?70mg/L粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落 刺激因子，余量為水。
[0012] 更優(yōu)選地，促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的組合物中組分及含量為：5?12g/L白 蛋白，42?55mg/L表皮生長(zhǎng)因子，17?26mg/L轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α，35?45mg/L角質(zhì)形成細(xì) 胞生長(zhǎng)因子，56?62mg/L堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，55?65mg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子， 15?25mg/L血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，40?65mg/L白細(xì)胞介素_8,49?67mg/L粒細(xì)胞巨噬細(xì) 胞集落刺激因子，余量為水。
[0013] 上述組合物的制備方法僅需將各個(gè)組分按量混合即得。
[0014] 本發(fā)明還提供了一種采用上述組合物的促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的制劑，所 述制劑中組分及含量為：5?30g/L白蛋白，10?100mg/L表皮生長(zhǎng)因子，5?50mg/L轉(zhuǎn)化 生長(zhǎng)因子α，20?100mg/L角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子，15?80mg/L堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因 子，10?80mg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子，10?30mg/L血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，30?70mg/L白細(xì) 胞介素-8, 30?70mg/L粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，20?50g/L分子量為300?6000 的聚乙二醇，80?180g/L的乙醇、輔料，余量為水或磷酸鹽緩沖液或兩者的混合物；所述輔 料選自羥乙基纖維素、膠原蛋白、單檸檬酸水合物、檸檬酸三鈉、甘油、1，3-丁二醇甘油中一 種或幾種的混合物。
[0015] 優(yōu)選地，所述羥乙基纖維素的用量為7?12g/L。
[0016] 優(yōu)選地，所述膠原蛋白的用量為2?5g/L。
[0017] 優(yōu)選地，所述單檸檬酸水合物的用量為3?7g/L。
[0018] 優(yōu)選地，所述朽1檬酸三鈉的用量為1?3g/L。
[0019] 優(yōu)選地，所述甘油的用量為70?120g/L。
[0020] 優(yōu)選地，所述1，3- 丁二醇甘油的用量為3?7g/L。
[0021] 此外，本發(fā)明還提供了一種上述促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的制劑的制備方 法，其步驟如下：先將輔料、聚乙二醇、乙醇與水和/或磷酸鹽緩沖液，攪拌混合或加熱攪拌 混合成均勻液體或膏狀體，再加入余下功能蛋白分子的水溶液，并繼續(xù)在同樣條件下緩慢 攪拌1?3小時(shí)，所述加熱攪拌的溫度為30度以下。
[0022] 在利用機(jī)體本身組織生理恢復(fù)機(jī)制，加速創(chuàng)面愈合同時(shí)，并提高創(chuàng)面愈合質(zhì)量，包 括恢復(fù)正常皮膚組織機(jī)構(gòu)和功能。各個(gè)所用的細(xì)胞因子成分有清晰的作用機(jī)理，無(wú)任何潛 在毒副反應(yīng)和不良?xì)馕丁?br> [0023] 本發(fā)明的有益效果：通過(guò)將8個(gè)蛋白因子組合性使用，綜合發(fā)揮它們的生理性組 織修復(fù)功能，在功能上能相互促進(jìn)，利用機(jī)體本身組織生理恢復(fù)機(jī)制，加速創(chuàng)面愈合同時(shí)， 提高創(chuàng)面愈合質(zhì)量，包括恢復(fù)正常皮膚組織機(jī)構(gòu)和功能。這種組合性恢復(fù)劑能在人體生理 條件下更快地恢復(fù)組織正常結(jié)構(gòu)和生理功能。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0024] 圖1為本發(fā)明制劑、對(duì)照制劑及安慰劑在小鼠表皮創(chuàng)口上應(yīng)用后的愈合程度比較 圖。

【具體實(shí)施方式】
[0025] 以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
[0026] 下述各實(shí)施例中促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的制劑的制備方法，步驟均如下： 先將輔料、聚乙二醇、乙醇與水和/或磷酸鹽緩沖液，攪拌混合或加熱攪拌混合成均勻液體 或膏狀體，再加入余下功能蛋白分子（白蛋白，表皮生長(zhǎng)因子，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α，角質(zhì)形成 細(xì)胞生長(zhǎng)因子，堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，血小板衍生生長(zhǎng)因子，血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，白細(xì) 胞介素-8,粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子）的水溶液，并繼續(xù)在同樣條件下緩慢攪拌1?3 小時(shí)，加熱攪拌的溫度為30度以下。
[0027] 實(shí)施例1
[0028] 促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的涂抹劑1，其中包含的組分及含量為：5g/L白蛋 白，l〇mg/L表皮生長(zhǎng)因子，5mg/L轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子a，20mg/L角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子，15mg/L 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，l〇mg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子，10mg/L血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，20mg/ L白細(xì)胞介素_8，15mg/L粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，3g/L膠原蛋白，3g/L單檸檬酸水合 物，120g/L甘油，80g/L的乙醇，余量為水。
[0029] 實(shí)施例2
[0030] 促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的涂抹劑2,其中包含的組分及含量為：12g/L白蛋 白，20mg/L表皮生長(zhǎng)因子，40mg/L轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子a，75mg/L角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子，70mg/L 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，25mg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子，22mg/L血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，28mg/ L白細(xì)胞介素_8, 30mg/L粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，12g/L羥乙基纖維素，lg/L檸檬酸 三鈉，余量為磷酸鹽緩沖液（PBS)。
[0031] 實(shí)施例3
[0032] 促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的噴劑3,其中包含的組分及含量為：20g/L白蛋 白，100mg/L表皮生長(zhǎng)因子，50mg/L轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子a，1 〇〇mg/L角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子， 80mg/L堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，80mg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子，30mg/L血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因 子，90mg/L白細(xì)胞介素-8, 75mg/L粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，7g/L羥乙基纖維素，2g/L 膠原蛋白，3g/L朽1檬酸三鈉，余量為水。
[0033] 實(shí)施例4
[0034] 促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的噴劑4,其中包含的組分及含量為：30g/L白蛋 白，65mg/L表皮生長(zhǎng)因子，15mg/L轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子a，72mg/L角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子，27mg/L 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，31mg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子，12mg/L血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，90mg/ L白細(xì)胞介素_8, 75mg/L粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，7g/L單檸檬酸水合物，7g/Ll，3-丁 二醇甘油，余量為水。
[0035] 實(shí)施例5
[0036] 促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的涂抹劑5,其中包含的組分及含量為：10g/L白蛋 白，42mg/L表皮生長(zhǎng)因子，17mg/L轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子a，35mg/L角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子，56mg/L 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，55mg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子，15mg/L血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子,40mg/ L白細(xì)胞介素_8,49mg/L粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，70g/L甘油，3g/Ll，3-丁二醇甘油， 余量為水和磷酸鹽緩沖液（PBS)體積比為1:1的混合物。
[0037] 實(shí)施例6
[0038] 促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的涂抹劑6,其中包含的組分及含量為：12g/L白蛋 白，55mg/L表皮生長(zhǎng)因子，26mg/L轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子a，45mg/L角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子，62mg/L 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，65mg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子，25mg/L血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，65mg/ L白細(xì)胞介素_8,67mg/L粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，余量為水。
[0039] 實(shí)施例7
[0040] 促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的噴劑7,其中包含的組分及含量為：7g/L白蛋白， 42mg/L表皮生長(zhǎng)因子，17mg/L轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子a，35mg/L角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子，56mg/L堿 性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，55mg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子，15mg/L血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，40mg/L 白細(xì)胞介素-8,49mg/L粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，4g/L膠原蛋白，余量為磷酸鹽緩沖 液（PBS)。
[0041] 實(shí)施例8
[0042] 促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的噴劑8,其中包含的組分及含量為：7g/L白蛋白， 43mg/L表皮生長(zhǎng)因子，25mg/L轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子a，40mg/L角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子，56mg/L堿 性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，62mg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子，23mg/L血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，55mg/L 白細(xì)胞介素_8,60mg/L粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，25g/L分子量為4000的聚乙二醇， 3g/L單檸檬酸水合物，2g/L檸檬酸三鈉的用量，100g/L甘油，4g/Ll，3- 丁二醇甘油，余量為 水。
[0043] 實(shí)施例9
[0044] 促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的涂抹劑9,其中包含的組分及含量為：7g/L白蛋 白，43mg/L表皮生長(zhǎng)因子，25mg/L轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子a，40mg/L角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子，56mg/L 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，62mg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子，23mg/L血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，55mg/ L白細(xì)胞介素_8,60mg/L粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，10g/L羥乙基纖維素，5g/L膠原蛋 白，3g/L單檸檬酸水合物，2g/L檸檬酸三鈉的用量，100g/L甘油，4g/Ll，3- 丁二醇甘油，余 量為水和磷酸鹽緩沖液（PBS)體積比為1:50的混合物。
[0045] 實(shí)施例10
[0046] 促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的涂抹劑10,其中包含的組分及含量為：7g/L白蛋 白，43mg/L表皮生長(zhǎng)因子，25mg/L轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子a，40mg/L角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子，56mg/L 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，62mg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子，23mg/L血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，55mg/ L白細(xì)胞介素_8,60mg/L粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，25g/L分子量為4000的聚乙二醇， 180g/L的乙醇，5g/L膠原蛋白，3g/L單檸檬酸水合物，2g/L檸檬酸三鈉的用量，100g/L甘 油，余量為水。
[0047] 實(shí)施例11
[0048] 促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的噴劑11，其中包含的組分及含量為：7g/L白蛋 白，43mg/L表皮生長(zhǎng)因子，25mg/L轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子a，40mg/L角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子，56mg/L 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，62mg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子，23mg/L血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，55mg/ L白細(xì)胞介素_8,60mg/L粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，25g/L分子量為4000的聚乙二醇， 170g/L的乙醇，10g/L羥乙基纖維素，4g/Ll，3- 丁二醇甘油，余量為磷酸鹽緩沖液（PBS)。
[0049] 實(shí)施例12
[0050] 促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的噴劑12,其中包含的組分及含量為：7g/L白蛋 白，43mg/L表皮生長(zhǎng)因子，25mg/L轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子a，40mg/L角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子，56mg/L 堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，62mg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子，23mg/L血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，55mg/ L白細(xì)胞介素_8,60mg/L粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，25g/L分子量為4000的聚乙二醇， 170g/L的乙醇，10g/L輕乙基纖維素，5g/L膠原蛋白，3g/L單朽 1檬酸水合物，2g/L朽1檬酸三 鈉的用量，l〇〇g/L甘油，4g/Ll，3- 丁二醇甘油，余量為磷酸鹽緩沖液（PBS)。
[0051] 對(duì)照例1
[0052] 噴劑1，其中包含的組分及含量為：5g/L白蛋白，43mg/L表皮生長(zhǎng)因子，25mg/L轉(zhuǎn) 化生長(zhǎng)因子a，40mg/L角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子，56mg/L堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，62mg/L 血小板衍生生長(zhǎng)因子，23mg/L血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，25g/L分子量為4000的聚乙二醇，170g/L 的乙醇，10g/L羥乙基纖維素，5g/L膠原蛋白，3g/L單檸檬酸水合物，2g/L檸檬酸三鈉的用 量，100g/L甘油，4g/Ll，3- 丁二醇甘油，余量為水。
[0053] 對(duì)照例2
[0054] 噴劑2,其中包含的組分及含量為：25mg/L轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子a，40mg/L角質(zhì)形成細(xì) 胞生長(zhǎng)因子，56mg/L堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子,62mg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子,23mg/L血管 內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，55mg/L白細(xì)胞介素-8,60mg/L粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，25g/L分子 量為4000的聚乙二醇，170g/L的乙醇，10g/L羥乙基纖維素，5g/l膠原蛋白，3 8/1單檸檬酸 水合物，2g/L檸檬酸三鈉的用量，100g/L甘油，4g/Ll，3- 丁二醇甘油，余量為磷酸鹽緩沖液 (PBS)。
[0055] 對(duì)照例3
[0056] 噴劑3,其中包含的組分及含量為：7g/L白蛋白，43mg/L表皮生長(zhǎng)因子，25mg/L轉(zhuǎn) 化生長(zhǎng)因子a，62mg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子，23mg/L血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，55mg/L白細(xì)胞介 素-8,60mg/L粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，25g/L分子量為4000的聚乙二醇，170g/L的 乙醇，l〇g/L羥乙基纖維素，5g/L膠原蛋白，3g/L單檸檬酸水合物，2g/L檸檬酸三鈉的用量， 100g/L甘油，4g/Ll, 3- 丁二醇甘油，余量為水。
[0057] 對(duì)照例4
[0058] 噴劑4,其中包含的組分及含量為：7g/L白蛋白，43mg/L表皮生長(zhǎng)因子，25mg/L轉(zhuǎn) 化生長(zhǎng)因子a，40mg/L角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子，56mg/L堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，25g/L分 子量為4000的聚乙二醇，170g/L的乙醇，10g/L羥乙基纖維素，5g/L膠原蛋白，3g/L單檸檬 酸水合物，2g/L檸檬酸三鈉的用量，100g/L甘油，4g/Ll，3- 丁二醇甘油，余量為磷酸鹽緩沖 液（PBS)。
[0059] 對(duì)照例5
[0060] 噴劑5,其中包含的組分及含量為：62mg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子，23mg/L血管內(nèi)皮 生長(zhǎng)因子，55mg/L白細(xì)胞介素-8,60mg/L粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，25g/L分子量為 4000的聚乙二醇，170g/L的乙醇，10g/L羥乙基纖維素，5g/L膠原蛋白，3g/L單檸檬酸水合 物，2g/L檸檬酸三鈉的用量，100g/L甘油，4g/Ll，3-丁二醇甘油，余量為水。
[0061] 實(shí)驗(yàn)例
[0062] 一、將上述實(shí)施例1?12及對(duì)照例1?5制備的涂抹劑和噴劑，分別進(jìn)行細(xì)胞培 養(yǎng)實(shí)驗(yàn)：
[0063] 實(shí)驗(yàn)過(guò)程如下：
[0064] 促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的涂抹劑和噴劑被用于作為模似性體外皮膚傷口 愈合實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)各種不同濃度和配方組合，包括實(shí)施例例1?12對(duì)應(yīng)的涂抹劑或噴劑，和 對(duì)照例1?5的噴劑，對(duì)皮膚傷口愈合的影響。
[0065] 1、刺激表皮細(xì)胞體外生長(zhǎng)（皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞）的影響：
[0066] 各個(gè)含有5X103cellS人體表皮單細(xì)胞（皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞）懸浮液制備 液接分別種于17個(gè)6〇-mm培養(yǎng)皿。每個(gè)培養(yǎng)基皿含有Earle's Minimum Essential Medium(EMEM)，2mM L-谷氨酰胺，10%胎牛血清和青霉素/鏈霉素?？紤]到更類(lèi)似于皮膚 角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)條件，培養(yǎng)基的酸堿度用1M鹽酸調(diào)節(jié)到6. 5。24小時(shí)后加入包括實(shí)施例 例1?12和對(duì)照例例1?5的制劑。培養(yǎng)基每3天更換一次。經(jīng)過(guò)15天在二氧化碳培養(yǎng) 箱（36°C，5% C02)內(nèi)的培養(yǎng)期，細(xì)胞被緩沖液調(diào)節(jié)的甲醛所固定和被用Hema-toxylin和 eosin染色。在顯微鏡下計(jì)數(shù)細(xì)胞群和每個(gè)細(xì)胞群的細(xì)胞數(shù)。
[0067] 2、測(cè)量體外培養(yǎng)成纖維細(xì)胞的收縮功能：
[0068] 人成纖維細(xì)胞被培育在EMEM中進(jìn)行組織生長(zhǎng)培養(yǎng)（相同于上面的培養(yǎng)條件）。二 天后，用I型牛膠原膠原制成的2毫米厚蛋白海綿（購(gòu)自美國(guó)生物材料中心），被切成4. 0 厘米大小直徑并分別置于相應(yīng)3個(gè)6孔培養(yǎng)皿內(nèi)（購(gòu)自Costar公司）。IX 106個(gè)細(xì)胞被 接種含有各個(gè)含有MEM的培養(yǎng)孔里。六小時(shí)后更換培養(yǎng)基，同時(shí)分別加入各個(gè)實(shí)施例和對(duì) 照例的制劑成分到含有EMEM和成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)皿孔內(nèi)。每天測(cè)量膠原蛋白海綿收縮性， 該實(shí)驗(yàn)進(jìn)行7天后結(jié)束。
[0069] 膠原收縮的抑制性檢測(cè)是從各個(gè)樣本百分比收縮的比率來(lái)計(jì)算，其中包含不同細(xì) 胞因子的實(shí)施組和對(duì)照組以及完全缺乏細(xì)胞因子的陰性比較組樣品。最終評(píng)價(jià)值的標(biāo)準(zhǔn)是 拿陰性比較組樣品的100%收縮來(lái)代表了無(wú)抑制性收縮。
[0070] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
[0071] 1)細(xì)胞數(shù)量增長(zhǎng)：
[0072] 通過(guò)分析體外表皮細(xì)胞培養(yǎng)的生長(zhǎng)速度和形態(tài)變化來(lái)測(cè)定不同試驗(yàn)組組份的有 效性。含有每平方厘米4 X 103個(gè)細(xì)胞接種于含有EMEM而未添加實(shí)施例或?qū)φ绽苿┑呐?養(yǎng)皿內(nèi)，24小時(shí)后加入各實(shí)施例和對(duì)照例的制劑，在15天內(nèi)表皮細(xì)胞逐步相互連接并產(chǎn)生 了大小不等細(xì)胞集落，大多平均有40?100個(gè)細(xì)胞。幾個(gè)較大的細(xì)胞集落含有1000個(gè)以 上細(xì)胞。這些細(xì)胞集落含有大約50%的未分化細(xì)胞，其余為已分化的細(xì)胞。每個(gè)細(xì)胞集落 里的細(xì)胞數(shù)量和形態(tài)產(chǎn)生了顯著差異。各個(gè)細(xì)胞集落里的細(xì)胞的個(gè)體的數(shù)目菌落分別增至 3至30倍不等，并且都構(gòu)成了完全基底角質(zhì)細(xì)胞層面。含有超過(guò)3000個(gè)細(xì)胞集落相對(duì)小一 些，在一個(gè)35毫米的培養(yǎng)皿有15或16的細(xì)胞集落，多發(fā)生在實(shí)施例9?12。然而，細(xì)胞在 這些細(xì)胞集落繼續(xù)不斷分裂，使每細(xì)胞集落的細(xì)胞數(shù)在15天時(shí)達(dá)到了 4. 5 X 104?1. 52xl05 個(gè)細(xì)胞。不同試驗(yàn)和對(duì)照例的內(nèi)含成分直接影響了表皮細(xì)胞生長(zhǎng)速度和形態(tài)變化。更具體 地分析，實(shí)施例1?4范圍內(nèi)的細(xì)胞生長(zhǎng)情況良好，實(shí)施例5?8效果比實(shí)施例1?4好，實(shí) 施例9?12較實(shí)施例5?8效果更好，實(shí)施例12最佳。所有實(shí)施例效果均比對(duì)照例1? 5效果好，且對(duì)照例1-3的效果要比4?5好（具體見(jiàn)表1)。
[0073] 2)成纖維細(xì)胞的收縮抑制檢測(cè)：
[0074] 成纖維細(xì)胞接種在膠原可引起初始性收縮的，在第3?4天，膠原蛋白的減少多達(dá) 50%。這個(gè)初始段后，接下來(lái)的4天膠原收縮的大小保持不變。在不存在成纖維細(xì)胞時(shí)，3 天后浸在培養(yǎng)基中膠原海綿大小的減少只有之初的2%至10% )。因此，時(shí)間對(duì)于膠原蛋白 收縮評(píng)估設(shè)定在成纖維細(xì)胞接種后72小時(shí)再加入測(cè)試材料，繼續(xù)培養(yǎng)三天，測(cè)定成纖維細(xì) 胞的收縮抑制百分率。結(jié)果顯示成纖維細(xì)胞的收縮抑制百分率類(lèi)似于在各實(shí)施例和對(duì)照例 的制劑中細(xì)胞增長(zhǎng)速度（具體見(jiàn)表1)。
[0075] 表1 :模似性體外皮膚傷口愈合人體皮膚細(xì)胞體外培養(yǎng)檢測(cè)結(jié)果（加入實(shí)施例和 對(duì)照例的制劑后15天細(xì)胞數(shù)量和形態(tài)變化）
[0076] 組另IJ_表皮細(xì)胞生長(zhǎng)數(shù)量成纖維細(xì)胞的收縮抑制百分率 實(shí)施例 1__8X 104_30-75% 實(shí)施例2 9X 104_ 實(shí)施例3 1X1Q5_ 實(shí)施例4 9.1 X 104__ 實(shí)施例 5 1.1X105_| 56?80%_
[0077] 實(shí)施例 6__1.2X 105_ 實(shí)施例 7__1.25 X 105_ 實(shí)施例 8 1.15X 105__ 實(shí)施例 9__1.35 X 105_ 85-94% 實(shí)施例 10 1.47 X 1Q5_ 實(shí)施例 11 1.4 X105_ 實(shí)施例 12 1.52 X 105__ 對(duì)照例1 7X104_ 10?30% 對(duì)照例2 7.5 X 104_ 對(duì)照例3 6.6X 104__ 對(duì)照例4 5X 104_0?5% 對(duì)照例5 4.2 X 104__ 陰性比較組 4X104__0%_
[0078] 二、動(dòng)物試驗(yàn)：
[0079] 飼養(yǎng)6只10周齡雄性小鼠，其中4只為藥物試驗(yàn)組，分為兩組，即治療組和對(duì)照 組，其中實(shí)施例12和對(duì)照例3分別被選擇為治療組和對(duì)照組制劑。另外2只小鼠使用含有 生理鹽水（0.9% NaCl2)的安慰劑組。全部小鼠的背部都用脫毛霜將毛除去。1天后，在背 中線(xiàn)皮膚用眼科剪刀，造成一個(gè)大概直徑為約1. 5厘米的圓形傷口。此后，全層傷口區(qū)域覆 蓋有聚氨基甲酸乙酯薄膜劑。在傷口形成起的連續(xù)18天期間，將100 μ 1實(shí)施例12的制劑、 對(duì)照例3的制劑或安慰組（生理鹽水）用注射器并通過(guò)聚氨酯膜每日施用一次。聚氨酯薄 膜劑每天更換并用3%過(guò)氧化氫消毒。傷口面積以初始傷口面積取為100%來(lái)計(jì)算傷口面 積，以后隨每天的藥物的應(yīng)用，在淺麻醉追蹤法下每?jī)商靵?lái)測(cè)量一次，結(jié)果如圖1所示。圖 1中，橫坐標(biāo)為實(shí)驗(yàn)天數(shù)，縱坐標(biāo)為傷口愈合百分比。
[0080] 動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果：
[0081] 經(jīng)比較，試用實(shí)施和對(duì)照組復(fù)合治療液的組中，沒(méi)有發(fā)現(xiàn)傷口面積的早期膨脹，在 每?jī)商靷诿娣e測(cè)量中，傷口面積逐日減少。在傷口形成和開(kāi)始治療后的第4和第7日，使 用治療劑（實(shí)施例12)的傷口愈明顯好于僅使用安慰劑（生理鹽水）的傷口（ρ〈0· 05)。在 最后觀(guān)察日（傷后第18日）傷口面積比較，結(jié)果顯示，使用生理鹽水的傷口面積愈合面積 為為57%，而使用治療劑（實(shí)施例12)和對(duì)照劑（對(duì)照例3)制劑組分別愈合95%和75%。 結(jié)果表明，該復(fù)合生物因子治療劑有明顯的促進(jìn)傷口愈合或組織再生作用。
[0082] 結(jié)論和分析：
[0083] 大量科學(xué)實(shí)驗(yàn)已表明，健康皮膚表皮細(xì)胞的自我修復(fù)需要（i)有關(guān)刺激表皮細(xì)胞 生長(zhǎng)效果的因素，（ii)對(duì)成纖維細(xì)胞在體外的收縮抑制作用并促進(jìn)遷移和/或成纖維細(xì) 胞增殖性的愈合，以及（iii)細(xì)胞生長(zhǎng)的局部環(huán)境，包括組織間質(zhì)的影響。各種局部因素 從正和負(fù)反饋機(jī)制方面，動(dòng)態(tài)平衡和維護(hù)著表皮和真皮的完整性。在我們的細(xì)胞體外模似 實(shí)驗(yàn)里，通過(guò)不同實(shí)施例間以及與對(duì)照例之間的比較，表皮生長(zhǎng)因子（EGF)，角質(zhì)形成因子 (KGF)，轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子A(TGF-A)和堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因（aFGF)等都顯示了不同程度的促 進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞集落產(chǎn)生，以及成纖維細(xì)胞收縮抑制的能力，并已顯示了各種因子數(shù)量 改變和因子之間比例不同而產(chǎn)生的很大差異，其中，成纖維細(xì)胞的收縮抑制能減少或減慢 皮膚瘢痕形成。
[0084] 應(yīng)用含有全部細(xì)胞生長(zhǎng)因子的實(shí)施例12和部分生長(zhǎng)因子的對(duì)照例3以及純生理 鹽水的安慰劑到人為造成的老鼠皮膚傷口，實(shí)驗(yàn)性的傷口恢復(fù)都顯示出不同程度的再上皮 化也促進(jìn)細(xì)胞間質(zhì)合成，但在實(shí)施例明顯可以看到細(xì)胞增長(zhǎng)和細(xì)胞間質(zhì)合成加速，細(xì)胞增 長(zhǎng)和細(xì)胞間質(zhì)合成分別在實(shí)施例95%，對(duì)照例75%，以及安慰劑組的57%，這還沒(méi)有考慮 到各種臨床組織病理因素在內(nèi)。實(shí)施例含有的細(xì)胞因子能促進(jìn)表皮和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)，但 又抑制了成纖維細(xì)胞收縮，并且提供了皮膚自然生理性恢復(fù)的必要條件，包括促進(jìn)血管新 生，增加血液供應(yīng)，抗炎癥反應(yīng)，以及清除組織碎片和感染顆粒等方面，其中，包括在實(shí)施例 和對(duì)照例內(nèi)基質(zhì)增效材料也起了一定作用。與此同時(shí)，在用對(duì)照例試劑的傷口上，我們也 觀(guān)測(cè)到少量新形成的肉芽組織。這與對(duì)照例中缺乏某些抑制成纖維細(xì)胞收縮的細(xì)胞因子有 關(guān)，負(fù)責(zé)攣縮的細(xì)胞是成纖維細(xì)胞，特別是成肌纖維細(xì)胞，其特征在于肌原纖維的運(yùn)動(dòng)。我 們?cè)诩?xì)胞培養(yǎng)中已經(jīng)證明，成纖維細(xì)胞接種到預(yù)制的膠原蛋白海綿可以也引起攣縮。這攣 縮可以完全由已加的生長(zhǎng)因子的進(jìn)行控制性抑制。我們已知形成增生性瘢痕的肉芽組織中 主要含有ΠΙ型和V型型膠原蛋白，其特征在于薄細(xì)絲組織結(jié)構(gòu)。而我們所使用的實(shí)施例 12能促進(jìn)基本成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)并可能合成了組織I型膠原蛋白，導(dǎo)致較小的肌纖維收縮和 無(wú)瘢痕形成。從我們目前模似性體外皮膚傷口愈合細(xì)胞培養(yǎng)模型和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)來(lái)看，我們所 開(kāi)發(fā)的這個(gè)皮膚慢性創(chuàng)口/潰瘍修復(fù)治療劑有廣泛的臨床應(yīng)用前景。
【權(quán)利要求】
1. 一種促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的組合物，其特征在于：所述組合物中組分及含 量為：5?30g/L白蛋白，10?100mg/L表皮生長(zhǎng)因子，5?50mg/L轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α，20? 100mg/L角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子，15?80mg/L堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，10?80mg/L血小 板衍生生長(zhǎng)因子，10?30mg/L血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，20?90mg/L白細(xì)胞介素-8,15?75mg/ L粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，余量為水。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的組合物，其特征在于：所述 組合物中組分及含量為：5?12g/L白蛋白，30?70mg/L表皮生長(zhǎng)因子，10?30mg/L轉(zhuǎn)化 生長(zhǎng)因子α，30?70mg/L角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子，30?70mg/L堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子， 30?70mg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子，10?30mg/L血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，30?70mg/L白細(xì)胞介 素-8, 30?70mg/L粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，余量為水。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的組合物，其特征在于：所述 組合物中組分及含量為：5?12g/L白蛋白，42?55mg/L表皮生長(zhǎng)因子，17?26mg/L轉(zhuǎn)化 生長(zhǎng)因子 α，35?45mg/L角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子，56?62mg/L堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子， 55?65mg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子，15?25mg/L血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，40?65mg/L白細(xì)胞介 素-8,49?67mg/L粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，余量為水。
4. 一種采用權(quán)利要求1所述組合物的促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的制劑，其特征在 于：所述制劑中組分及含量為：5?30g/L白蛋白，10?100mg/L表皮生長(zhǎng)因子，5?50mg/ L轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子α，20?100mg/L角質(zhì)形成細(xì)胞生長(zhǎng)因子，15?80mg/L堿性成纖維細(xì)胞生 長(zhǎng)因子，10?80mg/L血小板衍生生長(zhǎng)因子，10?30mg/L血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子，30?70mg/L 白細(xì)胞介素-8, 30?70mg/L粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子，20?50g/L分子量為300? 6000的聚乙二醇，80?180g/L的乙醇、輔料，余量為水或磷酸鹽緩沖液或兩者的混合物；所 述輔料選自羥乙基纖維素、膠原蛋白、單檸檬酸水合物、檸檬酸三鈉、甘油、1，3-丁二醇甘油 中一種或幾種的混合物。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的制劑，其特征在于：所述羥 乙基纖維素的用量為7?12g/L。
6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的制劑，其特征在于：所述膠 原蛋白的用量為2?5g/L。
7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的制劑，其特征在于：所述單 檸檬酸水合物的用量為3?7g/L。
8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的制劑，其特征在于：所述檸 檬酸三鈉的用量為1?3g/L。
9. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的制劑，其特征在于：所述甘 油的用量為70?120g/L。
10. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的制劑，其特征在于：所述 1，3- 丁二醇甘油的用量為3?7g/L。
11. 一種權(quán)利要求4所述促進(jìn)受損組織生理調(diào)節(jié)性再生的制劑的制備方法，其步驟如 下：先將輔料、聚乙二醇、乙醇與水和/或磷酸鹽緩沖液，攪拌混合或加熱攪拌混合成均勻 液體或膏狀體，再加入余下功能蛋白分子的水溶液，并繼續(xù)在同樣條件下緩慢攪拌1?3小 時(shí)，所述加熱攪拌的溫度為30度以下。
【文檔編號(hào)】A61P17/02GK104056258SQ201410246463
【公開(kāi)日】2014年9月24日 申請(qǐng)日期:2014年6月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月5日
【發(fā)明者】高忠翔, 馮翔, 石建芳 申請(qǐng)人:武漢科隆生物醫(yī)學(xué)有限公司