雨蛙肽在制備干預(yù)胰腺癌動物模型藥物的增敏制劑中的用途
【專利摘要】本發(fā)明屬實驗?zāi)Ｐ汀炯夹g(shù)領(lǐng)域】，涉及干預(yù)炎癥相關(guān)性的化學(xué)誘導(dǎo)胰腺癌動物模型的藥物，特別涉及雨蛙肽在制備協(xié)同二甲基苯并蒽(DMBA)誘導(dǎo)胰腺癌動物模型的增敏制劑中的用途。本發(fā)明為誘導(dǎo)C57野生型小鼠胰腺癌模型的藥物DMBA提供了有效的增敏制劑、制得的動物模型是深入研究胰腺癌前病變和胰腺癌的理想工具，通過雨蛙肽的協(xié)同作用，能縮短實驗周期，提高實驗效率，節(jié)約實驗成本；干預(yù)胰腺癌動物模型過程的多個步驟其發(fā)生發(fā)展以及組織學(xué)的變化與人胰腺癌的發(fā)展過程極為相似，可再現(xiàn)胰腺癌發(fā)生過程中的正常胰腺導(dǎo)管上皮，胰腺導(dǎo)管上皮不典型增生，胰腺導(dǎo)管上皮原位癌以及胰腺浸潤癌。
【專利說明】雨蛙肽在制備干預(yù)胰腺癌動物模型藥物的增敏制劑中的用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬實驗?zāi)Ｐ汀炯夹g(shù)領(lǐng)域】，涉及干預(yù)炎癥相關(guān)性的化學(xué)誘導(dǎo)胰腺癌動物模型的藥物，具體涉及有效輔助胰腺癌動物模型的胰腺炎刺激制劑，特別涉及雨蛙肽在制備協(xié)同二甲基苯并蒽(DMBA)誘導(dǎo)胰腺癌動物模型的增敏制劑中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]據(jù)報道，胰腺癌已成為全球范圍內(nèi)常見惡性腫瘤，由于其早期診斷困難，預(yù)后差，病死率高，被業(yè)內(nèi)公認(rèn)為“癌中之王”。當(dāng)前，我國胰腺癌的發(fā)病率正以驚人的速度持續(xù)上升；據(jù)上海市疾病控制中心數(shù)據(jù)顯示，上海市胰腺癌發(fā)病率較20年前增加了 4倍，且每年仍以2%的速度增長。胰腺癌起病隱匿，早期直接向胰周侵犯，或經(jīng)淋巴管和/或血管向遠(yuǎn)近器官組織轉(zhuǎn)移，超過80%的胰腺癌患者確診時已為晚期，并且失去了根治性手術(shù)切除和放射治療的機(jī)會。目前，臨床治療中雖然有以吉西他濱為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療治療方案，但腫瘤耐藥性最終導(dǎo)致胰腺癌預(yù)后很差，中位生存期僅為3-6個月，5年生存率小于5% ;因此，探討胰腺癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制，找尋新的靶向治療分子，有助于研究開發(fā)出更新更有效的胰腺癌治療方案和早期診斷工具；而尋找一個輔助探究提高胰腺癌早期診斷和治療水平的有效研究平臺，已經(jīng)成為當(dāng)務(wù)之急。
[0003]動物模型是研究人類罹患的腫瘤的有效平臺；一個良好的動物模型不僅在分子水平，組織水平，腫瘤的生物學(xué)特性等方面接近和模擬人類腫瘤，而且還可動態(tài)觀察腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。研究顯示 ，利用小鼠胰腺癌動物模型觀察從正常胰腺上皮組織發(fā)生成為胰腺組織上皮內(nèi)瘤變(PanIN)，最終發(fā)展成胰腺導(dǎo)管上皮癌的動態(tài)過程，不僅能夠很好地彌補臨床標(biāo)本大部分為晚期胰腺癌的研究限制，而且可以進(jìn)一步研究和認(rèn)識與人類胰腺癌發(fā)生早期相關(guān)的分子事件，為胰腺癌的早期診斷和建立晚期胰腺癌治療方案提供基礎(chǔ)理論數(shù)據(jù)，有助于將前臨床的研究成果充分轉(zhuǎn)化到臨床的實際工作中。
[0004]目前，用于研究胰腺腫瘤的動物模型主要有三種，分別是種植瘤模型，化學(xué)誘導(dǎo)模型和基因工程小鼠模型；上述各種動物模型均有其優(yōu)缺點:
[0005](I)種植瘤模型:是一類廣泛應(yīng)用于前臨床研究的動物模型；該模型可在較短的時間內(nèi)，在局部形成腫瘤，成瘤率幾乎可達(dá)100%，并且模型易于操作與觀察；然而，由于種植瘤往往被結(jié)締組織所包被，使其僅能局部生長，限制其浸潤與轉(zhuǎn)移；且體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞株經(jīng)過多次傳代后,其形成腫瘤過程中，炎細(xì)胞的浸潤,血管的形成和間質(zhì)成分的構(gòu)成等腫瘤微環(huán)境均與人類腫瘤微環(huán)境有很大不同，因此，不能很好地模擬人類腫瘤的自然發(fā)展過程和腫瘤的多種生物學(xué)行為，從而不適宜用于腫瘤發(fā)生的研究；
[0006](2)基因工程小鼠模型:是將腫瘤相關(guān)基因在小鼠體細(xì)胞中敲入或敲除，給予小鼠致癌劑處理后建立的腫瘤模型；該類模型主要是通過癌基因K-ras突變，激活并引起相關(guān)癌基因或抑癌基因的改變，能有效地模擬人類胰腺腫瘤的組織病變發(fā)展過程，然而，較高的實驗成本、較長的實驗周期和較低成瘤效率是其主要缺點；[0007](3)化學(xué)誘導(dǎo)胰腺癌模型:借助胰腺原位給予化學(xué)致癌劑后，激活癌基因或抑制抑癌基因，從而誘發(fā)胰腺原位腫瘤；該種胰腺原位誘發(fā)腫瘤的發(fā)生過程可模擬人類胰腺腫瘤的發(fā)生過程，從而能很好地代表胰腺癌的早期發(fā)生事件；隨著研究的不斷進(jìn)展，愈來愈多的化學(xué)致癌劑被發(fā)現(xiàn)，如烷化劑、亞硝胺等；有研究采用二甲基苯并蒽(DMBA)誘發(fā)小鼠胰腺腫瘤的發(fā)生，被應(yīng)用于胰腺腫瘤原位誘導(dǎo)的大鼠或小鼠模型中；但是，該類模型存在腫瘤發(fā)生率低和腫瘤形成時間較長的缺點，DMBA胰腺原位種植后，往往9個月后才能誘發(fā)出肉眼可見的胰腺腫瘤，實驗周期過長，用于腫瘤研究受到了明顯限制。
[0008]有研究表明，慢性胰腺炎和胰腺腫瘤的關(guān)系十分密切，并且慢性胰腺炎和胰腺癌的發(fā)病機(jī)制在基因突變和微環(huán)境變化上存在著一定的重疊；研究顯示，胰腺組織的反復(fù)損傷會形成一種炎癥微環(huán)境，反復(fù)持續(xù)性炎癥反應(yīng)導(dǎo)致慢性胰腺炎形成；二發(fā)生慢性炎癥的胰腺組織早期在基因水平發(fā)生改變，促進(jìn)細(xì)胞因子和前炎癥因子的產(chǎn)生，參與胰腺腫瘤的發(fā)生，發(fā)展和轉(zhuǎn)移；有研究經(jīng)轉(zhuǎn)基因小鼠胰腺炎動物模型實驗顯示，炎癥相關(guān)基因參與慢性胰腺炎發(fā)展和化生病變的免疫反應(yīng)，當(dāng)細(xì)胞發(fā)生持續(xù)性的DNA損傷或者基因突變時，細(xì)胞通過持續(xù)的炎癥反應(yīng)改變其所在的微環(huán)境，包括間質(zhì)纖維化，免疫抑制，喪失損傷修復(fù)能力等，最終將受損的細(xì)胞固定在一種持續(xù)性的去分化的狀態(tài)，從而快速誘發(fā)胰腺導(dǎo)管上皮內(nèi)瘤變(PanIN)的產(chǎn)生。還有研究顯示，飲酒和吸煙與胰腺癌有著密切的關(guān)系，酒精可提高DMBA誘導(dǎo)的動物模型成瘤率；流行病學(xué)證據(jù)顯示，過度飲酒可提高胰腺炎的發(fā)生危險性，導(dǎo)致的慢性炎癥可促進(jìn)胰腺癌的發(fā)生發(fā)展。
[0009]另有研究顯示，雨蛙肽(caerulein)是一種縮膽囊素的類似物，現(xiàn)普遍用于胰腺炎小鼠模型的建立，雨蛙肽可刺激胰酶的分泌，引起小鼠發(fā)生急慢性胰腺炎，進(jìn)一步加快高等級的胰腺導(dǎo)管上皮內(nèi)瘤變(PanIN)和胰腺導(dǎo)管上皮癌的發(fā)展速度；然而，迄今為止，國內(nèi)外尚未見有關(guān)雨蛙肽對DMBA誘導(dǎo)的野生型小鼠胰腺癌模型的影響作用的研究報道。
[0010]當(dāng)前，迫切需 要一種建立炎癥相關(guān)性的化學(xué)誘導(dǎo)胰腺癌動物模型的方法，采用該建模方法建立的炎癥相關(guān)性胰腺癌的化學(xué)誘導(dǎo)動物模型，為研究慢性胰腺炎在胰腺癌發(fā)生發(fā)展過程中所起到的作用提供了科學(xué)高效的輔助工具。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011]本發(fā)明目的在于提供一種干預(yù)炎癥相關(guān)性的化學(xué)誘導(dǎo)胰腺癌動物模型的藥物，具體涉及有效輔助胰腺癌動物模型的胰腺炎刺激制劑，特別涉及雨蛙肽在制備協(xié)同二甲基苯并蒽(DMBA)誘導(dǎo)胰腺癌動物模型的增敏制劑中的用途
[0012]本發(fā)明公開了雨蛙肽在制備協(xié)同二甲基苯并蒽(DMBA)誘導(dǎo)胰腺癌動物模型的增敏制劑中的用途，具體通過利用雨蛙肽輔助DMBA聯(lián)合作用于C57野生型小鼠胰腺，建立小鼠的炎癥相關(guān)性胰腺癌的化學(xué)誘導(dǎo)模型，結(jié)果表明，聯(lián)合應(yīng)用DMBA和雨蛙肽對于建立胰腺癌動物模型十分有效；本發(fā)明制得的動物模型能為研究慢性胰腺炎在胰腺癌發(fā)生發(fā)展過程中所起到的作用提供科學(xué)高效的輔助工具。
[0013]本發(fā)明所述的DMBA:7，12- 二甲基苯并[a]蒽(C2tlH16分子量256.34)
[0014]7，12-Dimethylbenz [a] anthracene ;產(chǎn)品編號 D3254 | CAS 號 57-97-6 | Sigma
[0015]
【權(quán)利要求】
1.雨蛙肽在制備干預(yù)胰腺癌動物模型藥物的增敏制劑中的用途； 所述的 DMBA:7，12-二甲基苯并[a]蒽(C20H16 分子量 256.34)，7，12-Dimethylbenz [a]anthracene ；

2.按權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的干預(yù)胰腺癌動物模型通過下述方法: (1)建立二甲基苯并蒽誘導(dǎo)小鼠胰腺癌模型； (2)應(yīng)用雨蛙肽促進(jìn)胰腺導(dǎo)管上形成皮癌； (3)大體指標(biāo)評價； (4)影像學(xué)檢查； (5)病理學(xué)評價。
3.按權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述步驟(1)中，實驗小鼠通過腹腔注射2%的戊巴比妥鈉進(jìn)行麻醉后，在小鼠的左上腹做橫向切口，依次通過皮膚，肌層，腹膜，進(jìn)入腹腔，使胰尾暴露；將2.5%的DMBA溶液按50mg/Kg的劑量注射入NC、CIT、CMT各組小鼠的胰腺尾部，切口縫合；在BC組中注射等量的甲苯代替DMBA溶液作為空白對照。
4.按權(quán)利要求2所述的用途，其特征在于，所述步驟(2)中，實驗小鼠分為以下四組: ①BC組:胰腺原位手術(shù)注射甲苯后，整個實驗期間正常飼養(yǎng)，不做任何處理，作為空白對照組； ②NC組:胰腺原位手術(shù)注射DMBA后，整個建模期間正常飼養(yǎng)，不做任何處理，作為陰性對照組； ③CIT組:胰腺原位手術(shù)注射DMBA后，恢復(fù)一周；從第2周開始連續(xù)13周腹腔注射雨蛙肽溶液；后續(xù)停藥觀察6周； 給藥的模式:一周2天給藥，一天間隔I小時分別給藥2次；每次給藥劑量為200 μ g/kg ； ④CMT組:胰腺原位手術(shù)注射DMBA后，恢復(fù)一周；從第2周開始連續(xù)10周腹腔注射雨蛙肽溶液；后續(xù)停藥觀察9周； 給藥的模式是:一周3天給藥，一天間隔I小時分別給藥2次；每次給藥量為100 μ g/kg ο
5.按權(quán)利要2所述的用途，其特征在于，所述步驟(3)中，所述大體指標(biāo)評價包括: ①成瘤率； ②腫瘤大小:同時測量腫瘤的大小,通過相關(guān)公式腫瘤體積(mm3)=最長直徑(mm)X最短直徑(mm)/2計算腫瘤的體積； ③小鼠體重:對所述小鼠的體重進(jìn)行跟蹤，并繪制體重變化的趨勢線； ④胰腺重量:通過計算胰腺重量占小鼠的體重比； ⑤小鼠一般生活狀態(tài):除了重量的變化，還觀察活動性、毛色、糞便的性狀等其它大體指 標(biāo)。
【文檔編號】A61K31/015GK104001151SQ201410242320
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2014年6月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月3日
【發(fā)明者】李影奕, 梁晨, 王瑧, 王辰 申請人:復(fù)旦大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院