一種促進(jìn)腦梗死患者神經(jīng)再生的治療組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種促進(jìn)腦梗死患者神經(jīng)再生的治療組合物，該組合物由活性成分和輔料制備而成，所述的活性成分包括3-羥基-5-苯基-6-(2,4-二羥基苯基)吡唑并[3,4-b]吡啶。本發(fā)明的藥物組合物可通過增加神經(jīng)生長正性調(diào)控因子的表達(dá)，抑制神經(jīng)生長負(fù)性調(diào)控因子的表達(dá)，促進(jìn)腦梗死后的神經(jīng)再生過程，進(jìn)而促進(jìn)運動功能康復(fù)。
【專利說明】一種促進(jìn)腦梗死患者神經(jīng)再生的治療組合物
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體而言，尤其涉及一種促進(jìn)腦梗死患者神經(jīng)再生的治療組合物。
【背景技術(shù)】
[0002]據(jù)WHO近期調(diào)查結(jié)果顯示:第一、我國腦血管疾病如腦梗塞、腦出血等年新發(fā)患者在200萬~250萬之間，年死亡人數(shù)高達(dá)150萬人，仍以8.7 %的速度在遞增，其發(fā)病率和死亡率均排名世界第一；第二、我國每年因交通事故死亡超過10萬人，傷殘人數(shù)> 50萬，遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過抗美援朝死傷人數(shù)，也是排名世界第一。我國衛(wèi)生部經(jīng)濟(jì)研究所調(diào)查結(jié)果表明，每年用于治療腦損傷的經(jīng)費達(dá)1000多億，給社會和家庭均帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。急性腦血管病除了高致死率外，還具有高致殘率和高復(fù)發(fā)率的特點，嚴(yán)重威脅國民生命健康和生活質(zhì)量。據(jù)調(diào)查，全國腦損傷恢復(fù)期的幸存者約3/4，超過500萬患者伴有不同程度智力障礙、感覺障礙、運動障礙和生活不能自理等嚴(yán)重殘疾，隨著恢復(fù)期幸存者數(shù)量逐年增加，已逐漸衍變成為嚴(yán)重的社會問題。因此，充分認(rèn)識腦損害的嚴(yán)重性和危害性，加大力度研究如何促進(jìn)缺血后神經(jīng)功能的恢復(fù)，降低病殘率，提高恢復(fù)期患者的生活質(zhì)量，目前仍是一個亟待解決的世界性難題。
[0003]人體的大多數(shù)組織在損傷后具有再生和修復(fù)能力，但成年哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system, CNS)損傷后卻存在再生與修復(fù)困難,在腦缺血性損傷相關(guān)疾病、脊髓損傷、以及許多神經(jīng)病變的情況下，CNS功能恢復(fù)非常有限，并且容易發(fā)生肢體運動和感覺障礙等嚴(yán)重影響個人生活質(zhì)量的病癥。因此，CNS再生問題一直是醫(yī)學(xué)界和神經(jīng)科學(xué)界在理論研究和臨床 實踐中亟待解決的重大難題。近二十年來的研究已有突破性進(jìn)展，目前認(rèn)為CNS再生困難的原因除促進(jìn)再生的營養(yǎng)因子不足外，另一重要的原因是中樞的抑制性再生環(huán)境。近幾年來，多項研究表明:nogo-A、trk-B、髓磷脂相關(guān)糖蛋白(MAG)、少突膠質(zhì)細(xì)胞髓磷脂糖蛋白(OMgp)等髓磷脂軸突生長抑制因子，在腦缺氧缺血損傷、脊髓損傷、癲癇疾病、阿爾海默氏病、自身免疫性脫髓鞘疾病、以及CNS神經(jīng)發(fā)生過程中扮演著重要的角色。
[0004]CN102260256A公開了一類二芳基吡唑并[3，4_b]吡啶雜環(huán)化合物及其制備方法，以及公開了該類化合物在制備抗菌藥物方面的應(yīng)用，然而其沒有披露該類化合物促進(jìn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷患者神經(jīng)再生的生物活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于提供一種促進(jìn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷患者神經(jīng)再生的藥物組合物。
[0006]本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的:
[0007]—種促進(jìn)腦梗死患者神經(jīng)再生的治療組合物，由活性成分和輔料制備而成，所述的活性成分包括3-羥基-5-苯基-6-(2，4- 二羥基苯基)吡唑并[3，4-b]吡啶。
[0008]優(yōu)選地，如上所述促進(jìn)腦梗死患者神經(jīng)再生的治療組合物，其中所述的活性成分由3-羥基-5-苯基-6-(2，4- 二羥基苯基)吡唑并[3，4-b]吡啶組成。
[0009]進(jìn)一步優(yōu)選地，如上所述促進(jìn)腦梗死患者神經(jīng)再生的治療組合物，其中所述的治療組合物為口服制劑，所述的口服制劑包括片劑、膠囊劑、顆粒劑。
[0010]中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷后的神經(jīng)再生與后期康復(fù)效果密切相關(guān)，但受內(nèi)在因素和外部環(huán)境的限制。內(nèi)在因素包括生長相關(guān)基因、蛋白，外部環(huán)境包括神經(jīng)營養(yǎng)因子、神經(jīng)生長抑制因子、膠質(zhì)瘢痕等。trk-B是腦源性神經(jīng)生長因子的高親和力受體，主要集中于中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)表達(dá)，是腦內(nèi)分布最為廣泛、也是不可缺少的神經(jīng)營養(yǎng)因子受體。nogo-A是目前發(fā)現(xiàn)的最為強(qiáng)烈的神經(jīng)纖維再生抑制物質(zhì)，抑制損傷神經(jīng)再生，尤其是再生神經(jīng)纖維的長距離生長，它在體內(nèi)和體外都顯示出了抑制神經(jīng)軸突生長的作用。而拮抗nogo-A后所獲得的神經(jīng)纖維再生是有功能性的，并能形成具有功能的突觸聯(lián)系。Trk-B和nogo-A分別代表了神經(jīng)再生微環(huán)境的神經(jīng)生長營養(yǎng)因子和抑制因子兩個方面。因此，尋找影響此二者表達(dá)的藥物，比較其活性的強(qiáng)弱，可了解中藥對中樞神經(jīng)再生微環(huán)境的作用，對臨床治療中樞神經(jīng)損傷非常重要。
[0011]本發(fā)明通過用電凝法制備大腦中動脈閉塞大鼠模型試驗研究了 3-羥基-5-苯基-6-(2，4-二羥基苯基)吡唑并[3，4-b]吡啶對腦梗死模型大鼠運動功能以及腦組織酪氨酸受體激酶B(trk-B)和勿動蛋白A(Nogo-A)表達(dá)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該化合物可顯著增強(qiáng)trk-B并抑制Nogo-A的表達(dá)，從而改善神經(jīng)再生微環(huán)境，促進(jìn)腦梗死大鼠運動功能康復(fù)。
[0012]因此，本發(fā)明還提供一種制藥用途，即:3_羥基-5-苯基-6-(2，4-二羥基苯基)吡唑并[3，4-b]吡啶在制備促進(jìn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷患者神經(jīng)再生的藥物中的應(yīng)用。優(yōu)選地，所述的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷患者為腦梗死患者。
[0013]本發(fā)明通過肢體放置檢測觀察了 3-羥基-5-苯基-6-(2，4-二羥基苯基)吡唑并[3，4-b]吡啶對腦梗死大鼠運動功能的影響，結(jié)果治療組運動功能評分提高較模型組顯著，提示本發(fā)明的藥物能促進(jìn)腦梗死后運動功能康復(fù)。另外，本發(fā)明通過觀察trk-B和nogo-A的表達(dá)發(fā)現(xiàn)，模型組和治療組trk-B染色平均灰度均較假手術(shù)組降低，說明腦梗死后trk-B表達(dá)出現(xiàn)反應(yīng)性增強(qiáng)，但經(jīng)本發(fā)明藥物治療后則trk-B表達(dá)增強(qiáng)更為明顯，表明該藥物可增強(qiáng)MCAO大鼠腦組織中trk-B的活性，增加神經(jīng)功能重塑的正向因素?？傊景l(fā)明的藥物組合物可通過增加神經(jīng)生長正性調(diào)控因子的表達(dá)，抑制神經(jīng)生長負(fù)性調(diào)控因子的表達(dá)，充分調(diào)動卒中后對神經(jīng)系統(tǒng)損傷的各種修復(fù)機(jī)制，促進(jìn)腦梗死后的神經(jīng)再生過程，進(jìn)而促進(jìn)運動功能康復(fù)。
【具體實施方式】
[0014]本發(fā)明通過用電凝法制備大腦中動脈閉塞大鼠模型試驗研究了 3-羥基-5-苯基-6-(2，4-二羥基苯基)吡唑并[3，4-b]吡啶對腦梗死模型大鼠運動功能以及腦組織酪氨酸受體激酶B (trk-B)和勿動蛋白A(Nogo-A)表達(dá)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)該化合物可顯著增強(qiáng)trk-B并抑制Nogo-A的表達(dá)，從而改善神經(jīng)再生微環(huán)境，促進(jìn)腦梗死大鼠運動功能康復(fù)。試驗過程如下:
[0015]成年健康清潔級雄性SD大鼠85只，體重280~320g，隨機(jī)分為假手術(shù)組(25只)、模型對照組(3 0只)、治療組(30只)。
[0016]模型對照組和治療組大鼠按下述方法制作大腦中動脈閉塞模型:動物用0.4%戊巴比妥鈉10mL/kg腹腔注射麻醉，側(cè)臥位固定于手術(shù)臺上，沿右外耳道與右眼外眥連線中點，垂直于連線切開皮膚約2cm，然后在手術(shù)顯微鏡下沿顳肌中線，依次切斷顳肌和咬肌，并向兩側(cè)分開，暴露出顴弓。用咬骨鉗除去顴弓并沿顱骨剪開筋膜，暴露出顳前窩，用小牽張器將顴弓和下頜骨的距離撐大，暴露鱗狀骨的大部分，然后在顴骨和鱗狀骨前聯(lián)合的前下方約2_處鉆孔，開一直徑約2_小顱窗，刺破硬腦膜，分離血管周圍的軟腦膜和蛛網(wǎng)膜組織，使之游離。然后在嗅束與大腦中動脈交界處輕挑起大腦中動脈，將電刀置雙極電凝位置，選擇3-4檔電凝開關(guān)，電凝燒灼嗅束內(nèi)2_至大腦下靜脈之間的一段大腦中動脈，血管阻斷后于遠(yuǎn)側(cè)切斷以防止再灌流，逐層縫合傷口，術(shù)后蘇醒送回原籠飼養(yǎng)。以上過程均在室溫恒定(24-25°C )情況下進(jìn)行，以利于評價腦缺血程度。麻醉醒后24h內(nèi)出現(xiàn)左側(cè)肢體痛刺激收縮現(xiàn)象消失，向左側(cè)傾倒或轉(zhuǎn)圈，提尾時左上肢不能向前伸直為模型復(fù)制成功。假手術(shù)組大鼠行同樣開顱術(shù)，但不凝閉大腦中動脈，其余操作同模型對照組。
[0017]以大鼠重量為基準(zhǔn)，治療組灌胃給予3-羥基-5-苯基-6-(2，4- 二羥基苯基)吡唑并[3，4-b]吡啶50mg/kg，其余兩組分別灌胃給予同等量生理鹽水，每天I次，共2周。于造模成功后6h給藥，固體飼料和水自由攝取。實驗過程中模型對照組大鼠有2只死亡，治療組大鼠有I只死亡，進(jìn)入結(jié)果分析的大鼠共82只。
[0018]米用前肢放置檢測法(HuaY, Schallert T, Keep R F, el al.Behavioral testsafter intracerebral hemorrhage in the rat [J].Stroke, 2002, 33:2478.)測定大鼠運動功能。檢查者手持大鼠背部皮膚使四肢懸空，將一側(cè)胡須刷觸桌面角邊緣，測試同側(cè)前肢的活動隋況，未受損者可將前肢迅速放到桌面，腦損傷時此動作有不同程度的損害。大鼠每側(cè)受測10次，前肢觸及桌面角邊緣次數(shù)的百分率即為該側(cè)得分。注意:抓握大鼠要輕柔，前肢自由懸垂，試驗前輕輕活動大鼠，盡量讓其放松，如大鼠掙扎，肌肉緊張或肢體放在試驗者手上不計在內(nèi)。分別于造模成功后24h、3d、l、2周進(jìn)行評分。另外，采用免疫組織化學(xué)法、原位雜交法檢測trk-B、nogo-A的表達(dá)情況。試驗統(tǒng)計結(jié)果參見表1、表2。
[0019]表1各組大鼠運動功能評分比較
【權(quán)利要求】
1.一種促進(jìn)腦梗死患者神經(jīng)再生的治療組合物，其特征在于:由活性成分和輔料制備而成，所述的活性成分包括3-羥基-5-苯基-6-(2，4-二羥基苯基)吡唑并[3，4-b]吡啶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述促進(jìn)腦梗死患者神經(jīng)再生的治療組合物，其特征在于:所述的活性成分由3-羥基-5-苯基-6-(2，4- 二羥基苯基)吡唑并[3，4-b]吡啶組成。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述促進(jìn)腦梗死患者神經(jīng)再生的治療組合物，其特征在于:所述的治療組合物為口服制劑，所述的口服制劑包括片劑、膠囊劑、顆粒劑。
4.3-羥基-5-苯基-6-(2，4- 二羥基苯基)吡唑并[3，4-b]吡啶在制備促進(jìn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷患者神經(jīng)再生的藥 物中的應(yīng)用。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于:所述的中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷患者為腦梗死患者。
【文檔編號】A61K31/437GK104000819SQ201410226144
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2014年5月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月27日
【發(fā)明者】賀亞杰, 董利平, 代旭東 申請人:青島市市立醫(yī)院