一種疫苗組合物及其制備方法和應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種疫苗組合物，其中，該疫苗組合物包括免疫量的雞新城疫病毒抗原、傳染性支氣管炎病毒抗原、H9亞型禽流感病毒抗原以及傳染性法氏囊病毒抗原。同時還提供了該疫苗組合物的制備方法和應用。本發(fā)明的疫苗組合物可以有效預防雞新城疫、傳染性支氣管炎、H9亞型禽流感和傳染性法氏囊病的發(fā)生，同時也可以大大減少人們的勞動強度，降低養(yǎng)禽業(yè)養(yǎng)殖戶的風險，保證公眾食品安全。CCTCC NO：V2012402012.09.16
【專利說明】一種疫苗組合物及其制備方法和應用

【技術領域】
[0001] 本發(fā)明屬于獸用生物制品【技術領域】，具體涉及一種疫苗組合物，以及其制備方法 和應用。

【背景技術】
[0002] 雞新城疫（newcastle disease，ND)具有很高的發(fā)病率和病死率，世界各地多有發(fā) 生，且一旦爆發(fā)將給養(yǎng)禽業(yè)帶來毀滅性打擊，是危害養(yǎng)禽業(yè)的一種主要傳染病。OIE將其列 為A類疫病。
[0003] 雞傳染性支氣管炎（Infectious Bronchitis，IB)感染可導致雛雞、肉雞發(fā)育緩 慢，產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋減少和蛋品質(zhì)下降等。OIE將其列為B類疫病。
[0004] 禽流感（H9 亞型）（Avian Infectious H9subtype)是由禽流感病毒（Avian Infectious Virus)引起的、主要流行于動物和人類中一種傳染性、死亡率高的急性、高度 傳染性疾病，廣泛發(fā)生于世界各地，對人類和養(yǎng)禽業(yè)危害很大。
[0005] 雞傳染性法氏囊病毒（Infectious bursal disease virus, IBD)是由雙RNA病毒 科中的傳染性法氏囊病病毒引起的一種特殊疾病，損害幼雞法氏囊。特征是腹瀉、衰竭，法 氏囊先發(fā)生顯著炎癥和增大，繼之以萎縮，最后患雞死亡。該病除造成一些雛雞死亡外，還 常引起病愈雞免疫抑制，導致免疫接種失敗，增加雛雞對雞新城疫等許多疾病的易感性。
[0006] 國內(nèi)外現(xiàn)在上市的商品化產(chǎn)品品種很多，但都是很單一的傳統(tǒng)疫苗，多次使用疫 苗尤其是滅活疫苗，不僅增加雞場人力和物力負擔，同時多次抓雞的應激反應，還會影響生 產(chǎn)性能，致使雞群對疾病的易感性增大。加之近年來H9亞型禽流感毒株的不斷變異，使得 雖然推出的多種選擇的疫苗，但仍然出現(xiàn)控制不住疫情發(fā)展的局面。
[0007] 同時，近幾年的H9亞型禽流感毒株已發(fā)生變異，以前分離的毒株對新流行毒株的 保護力有限。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 為解決現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明提供了一種新的雞新城疫、禽流感、傳染性支氣管 炎、法氏囊疫苗組合物，對現(xiàn)在流行的4種疫病達到較好的保護效果。
[0009] 本發(fā)明的主要目的在于提供一種疫苗組合物，其中，所述疫苗組合物包括免疫量 的雞新城疫病毒抗原、傳染性支氣管炎病毒抗原、H9亞型禽流感病毒抗原以及傳染性法氏 囊病毒抗原。
[0010] 優(yōu)選地，所述的雞新城疫病毒抗原為活的全病毒抗原、減毒的全病毒抗原、滅活的 全病毒抗原或亞單位抗原；所述的傳染性支氣管炎病毒抗原為活的全病毒抗原、減毒的全 病毒抗原、滅活的全病毒抗原或亞單位抗原；所述的H9亞型禽流感病毒抗原為活的全病毒 抗原、減毒的全病毒抗原、滅活的全病毒抗原或亞單位抗原；以及所述的傳染性法氏囊病毒 抗原為活的全病毒抗原、減毒的全病毒抗原、滅活的全病毒抗原或亞單位抗原。
[0011] 優(yōu)選地，所述的雞新城疫病毒抗原為滅活的La Sota株全病毒抗原，所述的傳染性 支氣管炎病毒抗原為滅活的M41株全病毒抗原，所述的H9亞型禽流感病毒抗原為滅活的SZ 株全病毒抗原，以及所述的傳染性法氏囊病毒抗原為傳染性法氏囊病毒成都株VP2蛋白。
[0012] 禽流感病毒（H9 亞型）SZ 株（Avian inf luenza virus (H9subtype) strain SZ)生 物保藏號是：CCTCC NO :V201240,保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC);保藏地址：中 國武漢?武漢大學，保藏日期：2012年9月16日。
[0013] La Sota株、M41株購于北京市海淀區(qū)中關村南大街8號中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。
[0014] 優(yōu)選地，所述的雞新城疫病毒抗原含量為彡108_°EID5(l/0. 1ml，所述的雞傳染性 支氣管炎病毒抗原含量為彡106_°EID5(l/0. lml，所述的H9亞型禽流感病毒抗原含量為 > 108_°EID5(l/0. lml，所述的傳染性法氏囊病毒抗原含量為瓊脂擴散效價> 1:16。
[0015] 優(yōu)選地，所述疫苗組合物進一步包括佐劑。
[0016] 本發(fā)明的另一目的在于提供一種疫苗組合物，其中，所述疫苗組合物包括免疫量 的H9亞型禽流感病毒SZ株抗原，所述的H9亞型禽流感病毒SZ株抗原為活的全病毒抗原、 減毒的全病毒抗原、滅活的全病毒抗原或亞單位抗原；所述H9亞型禽流感病毒SZ株生物保 藏號是：CCTCC NO :V201240。
[0017] 優(yōu)選地，所述H9亞型禽流感病毒SZ株抗原為滅活的全病毒抗原；所述H9亞型禽 流感病毒SZ株滅活的全病毒抗原含量為10 6_ 5EID5tlA). Iml?108_ 5EID5tlA). lml。
[0018] 優(yōu)選地,所述H9亞型禽流感病毒SZ株疫苗組合物進一步包括佐劑,所述佐劑包括 油佐劑。
[0019] 本發(fā)明的再一目的在于提供一種疫苗組合物的制備方法，其中，所述方法包括： (1)分別培養(yǎng)增殖所述雞新城疫病毒、所述的傳染性支氣管炎病毒、所述的H9亞型禽流感 病毒，表達所述的傳染性法氏囊病毒VP2蛋白；（2)分別滅活所述培養(yǎng)增殖的雞新城疫病 毒、傳染性支氣管炎病毒和H9亞型禽流感病毒，收集所述表達的傳染性法氏囊病毒VP2蛋 白；以及（3)將滅活的所述雞新城疫病毒全病毒抗原、傳染性支氣管炎病毒全病毒抗原、H9 亞型禽流感病毒全病毒抗原和所述表達的傳染性法氏囊病毒VP2蛋白混合，加入佐劑。
[0020] 優(yōu)選地,所述步驟（3)中各抗原量之間比例為1:1:1:1?1:1:1. 2:1. 2 ;所述佐劑 包括硬脂酸鋁油佐劑。
[0021] 本發(fā)明的還一目的在于提供一種疫苗組合物在制備預防和治療雞新城疫病毒、傳 染性支氣管炎病毒、H9亞型禽流感病毒以及傳染性法氏囊病毒感染的疾病的藥物中的應 用。
[0022] 本發(fā)明通過制備雞新城疫、傳染性支氣管炎、H9亞型禽流感、傳染性法氏囊病的四 種抗原，并進行合理復配制成雞新城疫、傳染性支氣管炎、H9亞型禽流感、傳染性法氏囊病 四種疫病油乳劑疫苗，可以有效預防雞新城疫、傳染性支氣管炎、H9亞型禽流感、傳染性法 氏囊病的發(fā)生，同時也可以大大減少人們的勞動強度，降低養(yǎng)禽業(yè)養(yǎng)殖戶的風險，保證公眾 食品安全。
[0023] 本發(fā)明的四聯(lián)苗技術的具有以下特點和優(yōu)點：
[0024] (1)選育的新毒株經(jīng)過血清學、分子生物學等試驗進行大量的臨床病料分析鑒定 工作，最后選出了一株較理想的制苗用毒株，該毒株HA效價高、免疫原性好并能抵御H9亞 型各地方流行毒株攻擊。
[0025] (2)在傳統(tǒng)全病毒滅活疫苗的基礎上結(jié)合基因工程亞單位疫苗的復配，用于表達 傳染性法氏囊病病毒的VP2蛋白的重組菌株是用分子生物學的方法克隆的一株在我國流 行的IBDV超強毒株成都株的VP2基因，可表達傳染性法氏囊病病毒的VP2蛋白，提取VP2 蛋白制備成疫苗，免疫效果好、生產(chǎn)工藝操作簡單、生產(chǎn)成本低、純度高、使用安全，跟以往 的制苗過程不一樣，并且將傳統(tǒng)全病毒滅活疫苗的基礎上結(jié)合了基因工程亞單位疫苗的復 配，同時保證各單一病毒在聯(lián)苗中均有和單苗一樣效果。
[0026] (3)本發(fā)明對H9亞型禽流感病毒的繁殖工藝進行了摸索，確定了病毒的最適繁殖 工藝，縮短了病毒繁殖時間，同時提高了病毒滴度。在疫苗制備過程中，大大縮短了病毒液 生產(chǎn)時間，同時，較高的病毒滴度降低了生產(chǎn)成本，利用美國進口的Mi 11 ipore濃縮機將抗 原經(jīng)過超強濃縮，抗體產(chǎn)生快，效價高，保護期長，降低疫病的發(fā)生及蔓延。
[0027] 序列表中：
[0028] 序列1為禽流感病毒H9亞型SZ株HAl基因序列；
[0029] 序列2為IBD成都株VP2基因序列。

【具體實施方式】
[0030] 下面結(jié)合具體實施例來進一步描述本發(fā)明，本發(fā)明的優(yōu)點和特點將會隨著描述更 為清楚。但這些實施例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的范圍構(gòu)成任何限制。本領域技術人 員應該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明技術方案的細節(jié)和形式進 行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明的保護范圍內(nèi)。
[0031] 實施例I H9亞型禽流感病毒SZ株對現(xiàn)有流行株的交叉保護試驗
[0032] 1.方法
[0033] 從2012?2013年分離株中選取4株病毒，對SZ株滅活疫苗的免疫效力進行比較。 毒株具體信息見下表1。
[0034] 表1 4株禽流感分離株的詳細信息
[0035]

【權利要求】
1. 一種疫苗組合物，其中，所述疫苗組合物包括免疫量的雞新城疫病毒抗原、傳染性支 氣管炎病毒抗原、H9亞型禽流感病毒抗原以及傳染性法氏囊病毒抗原。
2. 根據(jù)權利要求1所述的疫苗組合物，其中，所述的雞新城疫病毒抗原為活的全病毒 抗原、減毒的全病毒抗原、滅活的全病毒抗原或亞單位抗原； 所述的傳染性支氣管炎病毒抗原為活的全病毒抗原、減毒的全病毒抗原、滅活的全病 毒抗原或亞單位抗原； 所述的H9亞型禽流感病毒抗原為活的全病毒抗原、減毒的全病毒抗原、滅活的全病毒 抗原或亞單位抗原；以及 所述的傳染性法氏囊病毒抗原為活的全病毒抗原、減毒的全病毒抗原、滅活的全病毒 抗原或亞單位抗原。
3. 根據(jù)權利要求1所述的疫苗組合物，其中，所述的雞新城疫病毒抗原為滅活的La Sota株全病毒抗原，所述的傳染性支氣管炎病毒抗原為滅活的M41株全病毒抗原，所述的 H9亞型禽流感病毒抗原為滅活的SZ株全病毒抗原，以及所述的傳染性法氏囊病毒抗原為 傳染性法氏囊病毒成都株VP2蛋白。
4. 根據(jù)權利要求1所述的疫苗組合物，其中，所述的雞新城疫病毒抗原含量為 彡108_°EID5Q/0. lml，所述的雞傳染性支氣管炎病毒抗原含量為彡106_°EID5Q/0. lml，所述的 H9亞型禽流感病毒抗原含量為> 108_°EID5(l/0. lml，所述的傳染性法氏囊病毒抗原含量為瓊 脂擴散效價> 1:16。
5. 根據(jù)權利要求1所述的疫苗組合物，其中，所述疫苗組合物進一步包括佐劑。
6. -種疫苗組合物，其中，所述疫苗組合物包括免疫量的H9亞型禽流感病毒SZ株抗 原，所述的H9亞型禽流感病毒SZ株抗原為活的全病毒抗原、減毒的全病毒抗原、滅活的全 病毒抗原或亞單位抗原；所述H9亞型禽流感病毒SZ株生物保藏號是：CCTCC NO :V201240。
7. 根據(jù)權利要求6所述的疫苗組合物，其中，所述H9亞型禽流感病毒SZ株抗原為滅活 的全病毒抗原；所述H9亞型禽流感病毒SZ株滅活的全病毒抗原含量為10 6 5EID5(l/0. lml? 108-5EID50/0. 1ml ο
8. -種權利要求1?5任一項的疫苗組合物的制備方法，其中，所述方法包括： (1) 分別培養(yǎng)增殖所述雞新城疫病毒、所述的傳染性支氣管炎病毒、所述的Η9亞型禽 流感病毒，表達所述的傳染性法氏囊病毒VP2蛋白； (2) 分別滅活所述培養(yǎng)增殖的雞新城疫病毒、傳染性支氣管炎病毒和Η9亞型禽流感病 毒；收集所述表達的傳染性法氏囊病毒VP2蛋白；以及 (3) 將滅活的所述雞新城疫病毒全病毒抗原、傳染性支氣管炎病毒全病毒抗原、Η9亞 型禽流感病毒全病毒抗原和所述表達的傳染性法氏囊病毒VP2蛋白混合，加入佐劑。
9. 根據(jù)權利要求8所述的制備方法，其中，所述步驟（3)中各抗原量之間比例為 1:1:1:1?1:1:1.2:1.2 ;所述佐劑包括硬脂酸鋁油佐劑。
10. 權利要求1?5任一項所述的疫苗組合物在制備預防和治療雞新城疫病毒、傳染性 支氣管炎病毒、H9亞型禽流感病毒以及傳染性法氏囊病毒感染的疾病的藥物中的應用。
【文檔編號】A61K39/12GK104274829SQ201410174531
【公開日】2015年1月14日 申請日期:2014年4月28日 優(yōu)先權日:2014年4月28日
【發(fā)明者】張許科, 孫進忠, 郭麗霞 申請人:洛陽惠中生物技術有限公司