一種雙羊喉痹通片的制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種雙羊喉痹通片的制備方法及其在制備抑制肛門肉瘤細胞S-180細胞增殖藥物中的應(yīng)用。所述雙羊喉痹通片由野煙葉468.7g、羊耳菊468.7g、矮地茶312.5g、羊奶奶葉312.5g、僵蠶312.5g、荊芥312.5g、薄荷312.5g作為原料藥制成，采用超臨界萃取制備而成，使得巖白菜素含量有很大提高。
【專利說明】一種雙羊喉痹通片的制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種雙羊喉痹通片的制備方法及應(yīng)用，具體涉及一種雙羊喉痹通片的制備方法及其在制備抑制肛門肉瘤細胞S-180細胞增殖藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]雙羊喉痹通顆粒標準號WS-10287 (ZD-0287)-2002，記載于國家中成藥標準匯編眼科耳鼻喉科皮膚科分冊。由野煙葉468.7g、羊耳菊468.7g、矮地茶312.5g、羊奶奶葉312.5g、僵蠶312.5g、荊芥312.5g、薄荷312.5g作為原料藥制成，具有清熱化痰、止咳平喘的功效。用于急喉痹(急性咽炎)、急乳蛾(急性扁桃體炎)所致的咽喉腫痛。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有雙羊喉痹通顆粒提取制備方面采用超臨界報道，也未見有雙羊喉痹通顆粒在在制備抑制肛門肉瘤細胞S-180細胞增殖藥物中的應(yīng)用的報道，而揮發(fā)油提取，水煎煮的方法，工藝粗糙、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過大，不方便服用，嚴重影響了本品在臨床上應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]發(fā)明目的:本發(fā)明的目的在于一種雙羊喉痹通片的制備方法提供。
[0005]本發(fā)明的另一個目的在于提供一種雙羊喉痹通片在制備抑制肛門肉瘤細胞S-180細胞增殖藥物中的應(yīng)用。
[0006]本發(fā)明的目的是通過如下的方案實現(xiàn)的:
[0007]一種雙羊喉痹通片的制備方法，由野煙葉468.7g、羊耳菊468.7g、矮地茶312.5g、羊奶奶葉312.5g、僵蠶312.5g、荊芥312.5g、薄荷312.5g作為原料藥制成，所述制備方法步驟如下:取野煙葉、羊耳菊、矮地茶、羊奶奶葉、僵蠶、荊芥、薄荷粉碎成細粉，加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力20-30MPa，溫度30_50°C，C02流量l_3ml/g生藥.π?η，萃取時間300_400min，得超臨界萃取物，將超臨界萃取物加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成200片，每片重0.5g。
[0008]優(yōu)選的，上述的雙羊喉痹通片的制備方法中，所述CO2超臨界萃取中夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
[0009]優(yōu)選的，上述的雙羊喉痹通片的制備方法中，所述CO2超臨界萃取中萃取壓力為25MPa。
[0010]優(yōu)選的，上述的雙羊喉痹通片的制備方法中，所述CO2超臨界萃取中萃取溫度為40。。。
[0011]優(yōu)選的，上述的雙羊喉痹通片的制備方法中，所述CO2超臨界萃取中CO2流量2ml/g生藥.min。優(yōu)選的，上述的雙羊喉痹通片的制備方法中，所述CO2超臨界萃取中萃取時間為360min。上述的雙羊喉 痹通片在制備抑制小鼠肛門肉瘤細胞S-180細胞增殖藥物中的應(yīng)用。[0012]現(xiàn)有技術(shù)中，雙羊喉痹通顆粒每次10g，一日3次。雙羊喉痹通顆粒服藥量大，且顆粒劑制備需要加大量的糖，糖尿病患者不適宜，不加糖的話味道不佳，患者不容易服下，依從性差。采用本發(fā)明方法制備成的雙羊喉痹通片每片重0.5g，每次僅需2片，一日服用3次。在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量。此結(jié)論可以通過下述試驗證明。且制備成片劑，患者隨水吞下即可，服藥量小且無苦味，患者易于接受。
[0013]試驗一、不同方法制備的雙羊喉痹通片中巖白菜素含量的比較
[0014]1、儀器及試藥本發(fā)明雙羊喉痹通片:按實施例1方法制備，使用2500g原料藥，經(jīng)提取制成200片，每片重0.5g。原雙羊喉痹通顆粒，按照WS-10287 (ZD-0287)-2002標準方法制備。Agilentl200高效液相色譜儀；METTLER AE240電子分析天平；巖白菜素對照品(中國藥品生物制品檢定所)。
[0015]2、方法
[0016]照高效液相色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI D)測定。
[0017]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水(8: 92)為流動相；檢測波長為275nm。理論板數(shù)按巖白菜素峰計算應(yīng)不低于4000。
[0018]對照品溶液的制備精密稱取經(jīng)五氧化二磷干燥至恒重的巖白菜素對照品適量，加甲醇制成每Iml含0.1mg的溶液，即得。
[0019]本發(fā)明產(chǎn)品供試品溶液的制備取本發(fā)明的雙羊喉痹通片，研細取0.15g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇10ml，密塞，超聲處理(功率250W，頻率33kHz )20分鐘，濾過， 即得。
[0020]對照產(chǎn)品供試品溶液的制備取本對照的雙羊喉痹通顆粒，研細，取1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇10ml，密塞，超聲處理(功率250W，頻率33kHz )20分鐘，濾過，即得。
[0021]測定法分別精密吸取對照品溶液、本發(fā)明產(chǎn)品供試品溶液與對照產(chǎn)品供試品溶液各5 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
[0022]3、結(jié)果
[0023]結(jié)果表明，本發(fā)明雙羊喉痹通片中巖白菜素的含量為10.8-17.5mg/片；而原雙羊喉痹通顆粒中巖白菜素的含量為4.2mg/袋，每次服用量2片的巖白菜素含量為原顆粒劑含量的5-9倍，在服用量減少的情況下，巖白菜素含量有很大提高。
[0024]上述研究表明，采用本發(fā)明制備方法制備的雙羊喉痹通片，有效成分含量遠遠高于WS-10287 (ZD-0287) -2002標準記載的方法制備的雙羊喉痹通顆粒。
【具體實施方式】
[0025]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作更進一步的說明，以便本領(lǐng)域的技術(shù)人員更了解本發(fā)明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
[0026]實施例1
[0027]取野煙葉468.7g、羊耳菊468.7g、矮地茶312.5g、羊奶奶葉312.5g、僵蠶312.5g、荊芥312.5g、薄荷312.5g，將野煙葉、羊耳菊、矮地茶、羊奶奶葉、僵蠶、荊芥、薄荷粉碎成細粉，加入到0)2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%，萃取壓力25MPa，溫度40°C，CO2流量2ml/g生藥.π?η，萃取時間360min，得超臨界萃取物，將超臨界萃取物加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成200片，每片重0.5g。
[0028]經(jīng)檢測，成品中巖白菜素的含量為17.5mg/片。
[0029]實施例2
[0030]取野煙葉468.7g、羊耳菊468.7g、矮地茶312.5g、羊奶奶葉312.5g、僵蠶312.5g、荊芥312.5g、薄荷312.5g，將野煙葉、羊耳菊、矮地茶、羊奶奶葉、僵蠶、荊芥、薄荷粉碎成細粉，加入到0)2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4%，萃取壓力30MPa，溫度30°C，CO2流量lml/g生藥.π?η，萃取時間400min，得超臨界萃取物，將超臨界萃取物加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成200片，每片重0.5g。
[0031]經(jīng)檢測，成品中巖白菜素的含量為15.2mg/片。
[0032]實施例3
[0033]取野煙葉468.7g、羊耳菊468.7g、矮地茶312.5g、羊奶奶葉312.5g、僵蠶312.5g、荊芥312.5g、薄荷312.5g，將野煙葉、羊耳菊、矮地茶、羊奶奶葉、僵蠶、荊芥、薄荷粉碎成細粉，加入到0)2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為6%，萃取壓力20MPa，溫度50°C，CO2流量3ml/g生藥.π?η，萃取時間300min，得超臨界萃取物，將超臨界萃取物加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成200片，每片重0.5g。
[0034]經(jīng)檢測，成品中巖白菜素的含量為10.8mg/片。
[0035]實施 例4:雙羊喉痹通片抑制小鼠肛門肉瘤細胞S-180細胞增殖的實驗研究資料
[0036]1.實驗材料
[0037]1.1實驗用細胞株
[0038]小鼠肛門肉瘤細胞S-180細胞，山東大學(xué)實驗室細胞庫，DMEM+10%FBS常規(guī)培養(yǎng)。
[0039]1.2實驗藥物
[0040]研究藥物:本發(fā)明雙羊喉痹通片:按實施例1方法制備。
[0041]藥液儲液:稱取IOOmg雙羊喉痹通片，溶于5ml無水乙醇中，0.2 μ m濾器過濾，500 μ Idoff管分裝，-20°c存儲，同時0.2 μ m濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。
[0042]1.3實驗試劑
[0043]DMEM(GIBC0 公司 Cat.N0.12100_061Lot.N0.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.N0.100419) ;NaHC03(上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat.N0.11810_033Lot.N0.1088387) ；Trypsin (AMRESC0 公司);EDTA (AMRESC0 公司);Penicillin G Sodium Salt(AMRESCO公司I) !Streptomycin Sulfate(AMRESCO);無水乙醇(溜博亞杜蘭經(jīng)貿(mào)有限公司)；MTT (Biosharp 批號:0793) =PBS (實驗室自配)；
[0044]1.4實驗器材
[0045]萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號:DMIL);可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號:SPECTRAMAX190) ；C02培養(yǎng)箱(FORMA型號:3111);超凈臺(蘇凈集團安泰公司制造型號:SW-CJ-ZFD);純水儀(美國Spring公司型號:S/N020579);精密移液器(法國吉爾森公司型號:P2);電子天平(德國賽多利斯有限公司型號:BT323S);全自動高壓滅菌鍋(日本SANK)公司型號:MLS-3020);臺式電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精密實驗設(shè)備公司型號:DHG9123A);冰箱(西門子公司型號:KG18V21TI);液氮罐(CBS型號:2001);低速離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠型號:ΚΑ-1000);0.2μπι濾器(MILLIP0RE型號:SLGP033RB) ; Icm培養(yǎng)皿(NEST公司)、96孔培養(yǎng)板(NEST公司)；細胞計數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。
[0046]2.實驗方法
[0047]1) S-180 細胞用 DMEM+10%FBS 于 37 °C、5%C02 進行常規(guī)培養(yǎng)(IOcm 培養(yǎng)皿)，當細胞生長至對數(shù)期時，收集細胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中，1000rpm離心5min，調(diào)整細胞懸液濃度3X IO4個/ml。
[0048]2)將細胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細胞懸液180 μ I,培養(yǎng)板放入細胞培養(yǎng)箱中(37°C，5%C02)常規(guī)培養(yǎng)。
[0049]3)根據(jù)細胞生長情況，一般長至50%_70%，加入雙羊喉痹通片溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。
[0050]4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 0.5%MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。
[0051]5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔如入200 μ I 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。
[0052]6)同時設(shè)置本底(不加細胞，只加培養(yǎng)液)，對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)，每組設(shè)定6個復(fù)孔。
[0053]7)結(jié)果以藥物對細胞的抑制率表示:細胞增值抑制率(%)=(對照孔OD值-給藥孔OD值)、對照孔OD值X 100%。實驗重復(fù)3次。
[0054]3.統(tǒng)計處理
[0055]采用Microsoft Excel2007軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗，數(shù)據(jù)以mean+ S.D.表不。
[0056]4.實驗結(jié)果
[0057]MTT法實驗后統(tǒng)計結(jié)果顯示，與對照組比較，當劑量達到5mg/ml時，對S-180細胞增殖抑制有差異(p〈0.05)，劑量在10mg/ml時該差異具有顯著性(P〈0.01)，當劑量達到15-20mg/ml時有極顯著性差異(P〈0.001)。
[0058]表1雙羊喉痹通片對S-180細胞增殖抑制影響研究(X土 SD)
[0059]
【權(quán)利要求】
1.一種雙羊喉痹通片的制備方法，由野煙葉468.7g、羊耳菊468.7g、矮地茶312.5g、羊奶奶葉312.5g、僵蠶312.5g、荊芥312.5g、薄荷312.5g作為原料藥制成，其特征在于，所述制備方法步驟如下:取野煙葉、羊耳菊、矮地茶、羊奶奶葉、僵蠶、荊芥、薄荷粉碎成細粉，加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力20-30MPa，溫度30_50°C，CO2流量l_3ml/g生藥.min，萃取時間300_400min，得超臨界萃取物，將超臨界萃取物加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成200片，每片重0.5g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙羊喉痹通片的制備方法，其特征在于，所述CO2超臨界萃取中夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙羊喉痹通片的制備方法，其特征在于，所述CO2超臨界萃取中萃取壓力為25MPa。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙羊喉痹通片的制備方法，其特征在于，所述CO2超臨界萃取中萃取溫度為40 °C。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙羊喉痹通片的制備方法，其特征在于，所述CO2超臨界萃取中CO2流量2ml/g生藥.min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的雙羊喉痹通片的制備方法，其特征在于，所述CO2超臨界萃取中萃取時間為360min。
7.權(quán)利要求1所述的雙羊喉痹通片在制備抑制小鼠肛門肉瘤細胞S-180細胞增殖藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P35/00GK103800545SQ201410095493
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2014年3月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月14日
【發(fā)明者】滕邵玲, 唐俊玲, 周建娣 申請人:滕邵玲