一種接骨七厘片的制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種接骨七厘片的制備方法，由炒乳香100g、炒沒藥100g、當(dāng)歸150g、土鱉蟲250g、燙骨碎補(bǔ)150g、硼砂100g、血竭150g、煅自然銅100g、酒炒大黃100g作為原料藥制成，采用微波提取方法制備而成，使得含量有很大提高，用量減少，本發(fā)明還提供了接骨七厘片在制備抑制人結(jié)腸癌HT29細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
【專利說明】一種接骨七厘片的制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥制劑【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種接骨七厘片的制備方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]接骨七厘片記載于部頒標(biāo)準(zhǔn)(WS3-B-0620-91)，處方為炒乳香100g、炒沒藥100g、當(dāng)歸150g、土鱉蟲250g、燙骨碎補(bǔ)150g、硼砂100g、血竭150g、煅自然銅100g、酒炒大黃100g,以上九味,粉碎成細(xì)粉,過篩,混勻，加輔料適量,混勻，制粒,壓片,包糖衣，即得。能活血化瘀，接骨止痛。用于跌打損傷，續(xù)筋接骨，血瘀疼痛。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有接骨七厘片在提取制備方面采用微波技術(shù)的報(bào)道，而采用打粉和水煎煮的方法，工藝粗糙、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過大，不方便服用，嚴(yán)重影響了本品在臨床上應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]發(fā)明目的:為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種接骨七厘片的制備方法。
[0005]本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種接骨七厘片在制備抑制人結(jié)腸癌HT29細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
[0006]技術(shù)方案:本發(fā)明的目的是通過如下的方案實(shí)現(xiàn)的:
一種接骨七厘片的制備方法，接骨七厘片由炒乳香100g、炒沒藥100g、當(dāng)歸150g、土鱉蟲250g、燙骨碎補(bǔ)150g、硼砂100g、血竭150g、煅自然銅100g、酒炒大黃100g作為原料藥組成，制備方法由下列步驟組成:取上述藥材，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成1000片，包衣，每片重0.3g。
[0007]上述一種接骨七厘片的制備方法，所述制備方法中微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
[0008]一種接骨七厘片在制備抑制人結(jié)腸癌HT29細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，接骨七厘片由炒乳香100g、炒沒藥100g、當(dāng)歸150g、土鱉蟲250g、燙骨碎補(bǔ)150g、硼砂100g、血竭150g、煅自然銅100g、酒炒大黃100g作為原料藥組成，制備方法由下列步驟組成:取上述藥材，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮,加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成1000片，包衣，每片重0.3g。 [0009]上述一種接骨七厘片在制備抑制人結(jié)腸癌HT29細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，接骨七厘片的制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
[0010]現(xiàn)有技術(shù)中，接骨七厘片每片0.3g，每次5片，一日2次，采用本發(fā)明制備成的接骨七厘片每片0.3g，但含有的藥材量是原來的2倍，因此每次僅需3片，一日服用2次，在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量。
【具體實(shí)施方式】
[0011]以下通過實(shí)施例形式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
[0012]實(shí)施例1
取炒乳香100g、炒沒藥100g、當(dāng)歸150g、土鱉蟲250g、燙骨碎補(bǔ)150g、硼砂100g、血竭150g、煅自然銅100g、酒炒大黃100g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率400W，萃取2次，每次4分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成1000片，包衣，每片重0.3g實(shí)施例2
取炒乳香100g、炒沒藥100g、當(dāng)歸150g、土鱉蟲250g、燙骨碎補(bǔ)150g、硼砂100g、血竭150g、煅自然銅100g、酒炒大黃100g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率500W，萃取2次，每次5分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成1000片，包衣，每片重0.3g實(shí)施例3
取炒乳香100g、炒沒藥100g、當(dāng)歸150g、土鱉蟲250g、燙骨碎補(bǔ)150g、硼砂100g、血竭150g、煅自然銅100g、酒炒大黃100g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率600W，萃取`2次，每次8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成1000片，包衣，每片重0.3g實(shí)施例4:接骨七厘片抑制人結(jié)腸癌HT29細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究資料I實(shí)驗(yàn)材料
1.1實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株:人結(jié)腸癌HT29細(xì)胞，南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫(kù)，DMEM + 10% FBS常規(guī)培養(yǎng)。
[0013]1.2實(shí)驗(yàn)藥物
研究藥物:本發(fā)明接骨七厘片:按實(shí)施例2方法制備。
[0014]藥液儲(chǔ)液:稱取IOOmg接骨七厘片，溶于5 ml無水乙醇中，0.2 μ m濾器過濾，500 μ I doff管分裝，-20 °C存儲(chǔ)，同時(shí)0.2μπι濾器過濾無水乙醇以備對(duì)照組之用。
[0015]1.3實(shí)驗(yàn)試劑
DMEM (GIBCO 公司 Cat.N0.12100-061 Lot.N0.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.N0.100419)；NaHC03 (上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat.N0.11810-033Lot.N0.1088387) ；Trypsin (AMRESC0 公司批號(hào):2010/04) ；EDTA (AMRESC0 公司批號(hào):2009/10) !Penicillin G Sodium Salt (AMRESC0 公司批號(hào):2010242) ；StreptomycinSulfate (AMRESC0公司批號(hào):2010382);無水乙醇(南京化學(xué)試劑有限公司批號(hào):080310182) ；MTT(Biosharp 批號(hào):0793) ;PBS (實(shí)驗(yàn)室自配)；
1.4實(shí)驗(yàn)器材
萊卡倒置顯微鏡(德國(guó)Leica型號(hào):DM1L);可見-紫外光微孔板檢測(cè)儀(美國(guó)MD公司型號(hào):SPECTRA MAX 190) ；C02培養(yǎng)箱(FORMA型號(hào):3111);超凈臺(tái)(蘇凈集團(tuán)安泰公司制造型號(hào):SW-CJ-ZFD);純水儀(美國(guó)Spring公司型號(hào):S/N 020579);精密移液器(法國(guó)吉爾森公司型號(hào):P2);電子天平(德國(guó)賽多利斯有限公司型號(hào):BT323S);全自動(dòng)高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號(hào):MLS-3020);臺(tái)式電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型號(hào):DHG9123A);冰箱(西門子公司型號(hào):KG18V21TI);液氮罐(CBS型號(hào):2001);低速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠型號(hào):KA-1000) ；0.2μπι濾器(MILLIPORE型號(hào):SLGP033RB) ；10cm培養(yǎng)皿(NEST公司)、96孔培養(yǎng)板(NEST公司)；細(xì)胞計(jì)數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。
[0016]2實(shí)驗(yàn)方法
I)人結(jié)腸癌HT29細(xì)胞用DMEM + 10% FBS于37°C、5% C02進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)(10 cm培養(yǎng)皿)，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期時(shí)，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3 ml 0.25%胰蛋白酶-0.04% EDTA ,37 °C消化2 min后，向其中加入5 ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中，1000 rpm離心5 min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3 X 104個(gè)/ml。
[0017]2)將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180 μ 1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中(37 °C, 5% C02 )常規(guī)培養(yǎng)。
[0018]3)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，一般長(zhǎng)至50%_70%，加入接骨七厘片溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。4) 24h后加入20 μ I MTT溶液(5 mg/ml,即0.5%MTT)，繼續(xù)培養(yǎng)4h。5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀490nm處測(cè)量各孔的吸光值。6)同時(shí)設(shè)置本底(不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液)，對(duì)照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)，每組設(shè)定6個(gè)復(fù)孔。7)結(jié)果以藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率表`示:
細(xì)胞增值抑制率(％)=(對(duì)照孔OD值-給藥孔OD值)/對(duì)照孔OD值X 100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
[0019]3統(tǒng)計(jì)處理
采用Microsoft Excel 2003軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以mean 土S.D.表示。
[0020]4實(shí)驗(yàn)結(jié)果
MTT法實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時(shí)，對(duì)人結(jié)腸癌HT29細(xì)胞增殖抑制有差異(P〈0.05)，劑量在10mg/ml時(shí)該差異具有顯著性(P〈0.01 )，當(dāng)劑量達(dá)到15-20 mg/ml時(shí)有極顯著性差異(Ρ〈0.001 )。
[0021]表1接骨七厘片對(duì)人結(jié)腸癌ΗΤ29細(xì)胞增殖抑制影響研究(X土SD)
【權(quán)利要求】
1.一種接骨七厘片的制備方法，其特征在于接骨七厘片由炒乳香100g、炒沒藥100g、當(dāng)歸150g、土鱉蟲250g、燙骨碎補(bǔ)150g、硼砂100g、血竭150g、煅自然銅100g、酒炒大黃100g作為原料藥組成，制備方法由下列步驟組成:取上述藥材，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W,萃取2次,每次4-8分鐘,合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成1000片，包衣，每片重0.3g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種接骨七厘片的制備方法，其特征在于所述制備方法中微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
3.一種接骨七厘片在制備抑制人結(jié)腸癌HT29細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于接骨七厘片由炒乳香100g、炒沒藥100g、當(dāng)歸150g、土鱉蟲250g、燙骨碎補(bǔ)150g、硼砂100g、血竭150g、煅自然銅100g、酒炒大黃100g作為原料藥組成，制備方法由下列步驟組成:取上述藥材，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率為400-600W,萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮并干燥，得微波提取物，加入淀粉，70%乙醇制顆粒，干燥，壓片，制成1000片，包衣，每片重0.3g。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述一種接骨七厘片在制備抑制人結(jié)腸癌HT29細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于 接骨七厘片的制備方法中所述微波萃取功率為500W，每次萃取6分鐘。
【文檔編號(hào)】A61K36/896GK103860802SQ201410092172
【公開日】2014年6月18日 申請(qǐng)日期:2014年3月14日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月14日
【發(fā)明者】嚴(yán)白雙 申請(qǐng)人:嚴(yán)白雙