Romidepsin在治療帕金森病中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了Romidepsin在帕金森病治療中的應(yīng)用。本發(fā)明經(jīng)體外和體內(nèi)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，Romidepsin誘導(dǎo)多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞株和黑質(zhì)腦組織氧化應(yīng)激抵抗因子金屬硫蛋白2基因表達(dá)，降低帕金森病模型多巴胺神經(jīng)元氧化應(yīng)激，減少多巴胺神經(jīng)元凋亡，減少帕金森病動(dòng)物模型黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元損毀，起到治療帕金森病的作用。
【專利說(shuō)明】Rom i deps i η在治療帕金森病中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及Romidepsin的應(yīng)用，具體涉及Romidepsin在帕金森病治療中的應(yīng)用?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]帕金森病(Parkinson’ s disease, PD)是第二大常見(jiàn)的神經(jīng)退行性疾病,人群患病率0.3%, 65歲以上人群患病率1_3%。其病理特征是以Lewy小體形成，黑質(zhì)致密區(qū)多巴胺神經(jīng)元變性損毀為主要特征。
[0003]目前，PD的治療主要是緩解運(yùn)動(dòng)癥狀，尚沒(méi)有治愈的方法，臨床用于治療帕金森病的藥物有復(fù)方左旋多巴制劑、抗膽堿能藥物、金剛烷胺、多巴胺受體激動(dòng)劑、單胺氧化酶B抑制劑、兒茶酚-氧位-甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑，以及神經(jīng)保護(hù)劑等。左旋多巴(Levodopa，L-dopa)作為多巴胺前體，是H)治療的最主要藥物，通過(guò)提高多巴胺水平，緩解運(yùn)動(dòng)障礙，然而左旋多巴治療的“蜜月期”一般為3-5年，此后，患者?？沙霈F(xiàn)運(yùn)動(dòng)波動(dòng)或異動(dòng)癥等新的運(yùn)動(dòng)障礙。對(duì)于運(yùn)動(dòng)異常等并發(fā)癥，目前認(rèn)為主要由兩方面原因引起，其一為左旋多巴半衰期短，在血液和腦組織內(nèi)的濃度波動(dòng)明顯；其二為隨病情進(jìn)展，多巴胺能神經(jīng)元不斷變性、死亡導(dǎo)致其緩沖能力下降，造成對(duì)多巴胺受體的脈沖式刺激。然而，在持續(xù)多巴胺能刺激的治療策略中，2007年，多巴胺受體激動(dòng)劑培高利特在上市19年后由于被發(fā)現(xiàn)具有損害心臟瓣膜的作用而退出市場(chǎng)。
[0004]PD病情進(jìn)行性進(jìn)展的關(guān)鍵是多巴胺神經(jīng)元進(jìn)行性損毀。目前ro的臨床治療不能阻止或減緩ro多巴胺神經(jīng)元損毀的進(jìn)行性發(fā)展，患者隨著患病時(shí)間的延長(zhǎng)病情逐漸加重。目前亟待尋找新的有效治療ro的方法。
[0005]Romidepsin是由美國(guó)Gloucester Pharmaceuticals公司開發(fā)的抗腫瘤藥物，于2009年11月9日獲得美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市，該藥用于治療皮膚和外周T細(xì)胞淋巴瘤。本發(fā)明人在研究中發(fā)現(xiàn)，Romidepsin·誘導(dǎo)氧化應(yīng)激抵抗因子金屬硫蛋白2表達(dá),減少F1D模型多巴胺神經(jīng)元活性氧(reactive oxygen species, R0S)產(chǎn)生,減少F1D模型多巴胺神經(jīng)元凋亡和損毀，起到治療帕金森病的作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供Romid印sin在治療帕金森病中的用途。
[0007]具體的說(shuō)，本發(fā)明公開了 Romid印sin降低H)模型多巴胺神經(jīng)元ROS產(chǎn)生，減少H)模型多巴胺神經(jīng)元凋亡和損毀的應(yīng)用。
[0008]本發(fā)明所述的藥物Romidepsin通過(guò)市售得到。
[0009]本發(fā)明所述的ro模型為ro細(xì)胞模型和ro動(dòng)物模型。
[0010]本發(fā)明所述的體外細(xì)胞ro模型為魚藤酮ro細(xì)胞模型和mpp+(1-甲基-4-苯基吡啶離子)ro細(xì)胞模型。細(xì)胞為多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞株。
[0011]本發(fā)明所述的動(dòng)物ro模型為單側(cè)黑質(zhì)立體定位注射魚藤酮制備。
[0012]ro細(xì)胞模型中，Romid印sin的有效濃度范圍為0.25-60 μ M,最佳濃度范圍為2.5-15 μ M。H)動(dòng)物模型中Romid印sin的有效劑量范圍為0.2-4 mg/10 g，最佳劑量范圍為 0.5-2 mg/10 g。
[0013]本發(fā)明通過(guò)real-time RT-PCR測(cè)定多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞株和黑質(zhì)氧化應(yīng)激抵抗因子金屬硫蛋白2表達(dá)。
[0014]本發(fā)明通過(guò)測(cè)定ro細(xì)胞模型多巴胺神經(jīng)元活性氧ROS產(chǎn)生和細(xì)胞凋亡研究Romidepsin對(duì)體外F1D細(xì)胞模型的作用。
[0015]本發(fā)明通過(guò)酪氨酸輕化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)免疫染色研究Romidepsin對(duì)ro動(dòng)物模型黑質(zhì)多巴胺神經(jīng)元的救援作用。
[0016]本發(fā)明中，Romidepsin治療F1D的優(yōu)勢(shì)在于:①Romidepsin誘導(dǎo)多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞株和黑質(zhì)腦組織氧化應(yīng)激抵抗因子金屬硫蛋白2基因表達(dá)，②Romid印sin降低H)模型多巴胺神經(jīng)元ROS產(chǎn)生，③減少H)模型多巴胺神經(jīng)元凋亡，④增加H)動(dòng)物模型TH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)，減少ro模型多巴胺神經(jīng)元損毀。
[0017]本發(fā)明提供了 Romidepsin的用途，即Romidepsin對(duì)F1D的治療用途。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0018]圖1是Romid印sin減少魚藤酮H)細(xì)胞模型多巴胺神經(jīng)元凋亡。明亮的藍(lán)色熒光染色表示凋亡細(xì)胞。
[0019]圖2是Romid印sin減少M(fèi)PP+ H)細(xì)胞模型多巴胺神經(jīng)元凋亡。明亮的藍(lán)色熒光染色表示凋亡細(xì)胞。
[0020]圖3是Romid印sin減少魚藤酮H)動(dòng)物模型多巴胺神經(jīng)元損毀。
【具體實(shí)施方式】
[0021]以下通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明，應(yīng)該理解的是，這些實(shí)施例僅用于例證的目的，不限制本發(fā)明的范圍。
[0022]本發(fā)明實(shí)施例中所使用的Romid印sin購(gòu)自TOKYO CHEMICAL INDUSTRY CO。
[0023]實(shí)施例中，體外實(shí)驗(yàn)研究對(duì)象為多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞株SH-SY5Y，整體實(shí)驗(yàn)，研究對(duì)象為昆明種小鼠。
[0024]計(jì)量資料以均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差表示，應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行方差分析，p〈0.05為有
顯著性差異。
[0025]氧化應(yīng)激抵抗因子金屬硫蛋白2可以減輕氧化應(yīng)激性損傷。實(shí)施例1和2考察Romidepsin對(duì)多巴胺神經(jīng)元和黑質(zhì)腦組織金屬硫蛋白2基因表達(dá)。
[0026]實(shí)施例1:Romidepsin誘導(dǎo)多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞株金屬硫蛋白2基因表達(dá)。
Dayl:將培養(yǎng)于25cm2培養(yǎng)瓶的SH-SY5Y細(xì)胞制成細(xì)胞懸液，鋪于6孔板中，每孔細(xì)胞大約IXlO60
Day2:細(xì)胞融合約30_40%，給予Romid印sin，終濃度為2.5,5,15 μ M0培養(yǎng)48小時(shí)。棄培養(yǎng)基，提取細(xì)胞RNA，real-time RT-PCR測(cè)定人金屬硫蛋白2表達(dá)，人金屬硫蛋白2 mRNA引物購(gòu)自Qiagen (cat.n0.QT00220199)。結(jié)果顯示Romidepsin誘導(dǎo)多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞株金屬硫蛋白2基因表達(dá)，并呈現(xiàn)劑量依賴性見(jiàn)表1。
表1 Romidepsin對(duì)多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞株金屬硫蛋白2基因表達(dá)的影響(n=6)
【權(quán)利要求】
1.Romidepsin在治療帕金森病中的應(yīng)用。
2.權(quán)利要求1所述的Romidepsin在治療帕金森病中的應(yīng)用，其特征在于Romidepsin誘導(dǎo)多巴胺神經(jīng)元細(xì)胞株和黑質(zhì)腦組織氧化應(yīng)激抵抗因子金屬硫蛋白2基因表達(dá)，Romidepsin降低帕金森病模型多巴胺神經(jīng)元活性氧產(chǎn)生。
3.權(quán)利要求1所述的Romidepsin在治療帕金森病中的應(yīng)用，其特征在于Romidepsin減少帕金森病模型多巴胺神經(jīng)元凋亡，增加帕金森病動(dòng)物模型黑質(zhì)TH免疫染色，減少多巴胺神經(jīng)元損毀 。
【文檔編號(hào)】A61P25/16GK103861084SQ201410048808
【公開日】2014年6月18日 申請(qǐng)日期:2014年2月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月12日
【發(fā)明者】翟德勝, 桂立輝, 武俊芳, 劉巍, 袁會(huì)峰, 杜云紅, 楊玉新, 崔泰震, 李曉鵬, 陳志國(guó) 申請(qǐng)人:新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院