人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種狂犬病疫苗及其制備方法，具體涉及一種人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗及其制備方法。所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗在物理形態(tài)上具有質量分數(shù)為92.0%以上的疏松體，并且所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病毒疫苗的溶解時間為95s-99s。本發(fā)明所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗的熱穩(wěn)定性和效價穩(wěn)定性相對于用現(xiàn)有的凍干工藝制備出的人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗而言具有明顯的提高。
【專利說明】人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種狂犬病疫苗及其制備方法，具體涉及一種人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗及其制備方法。
【背景技術】
[0002]狂犬病疫苗是由狂犬病病毒在宿主細胞上擴增培養(yǎng)，然后經(jīng)滅活、純化、凍干等步驟后得到的用于預防或治療對狂犬病毒有高危接觸者或已感染狂犬病毒者的疫苗。目前作為制備狂犬病疫苗的宿主細胞可以是最早開始使用的動物細胞如Veix)細胞，還可以是人二倍體細胞，前述兩種宿主細胞中，人二倍體細胞來源于人體組織，是目前已經(jīng)公知的可用于制備狂犬病疫苗的宿主細胞；人二倍體細胞目前經(jīng)過數(shù)十年的研究，其生長特性，遺傳穩(wěn)定性、外源因子污染檢查、致腫瘤陰性等特征已被充分驗證，另外，人二倍體細胞來源于人體組織，其用于制備疫苗時其內(nèi)的殘余成分不會成為超敏反應原，因此，其所制得的疫苗的安全性較高。
[0003]利用人二倍體細胞作為宿主細胞擴增培養(yǎng)而獲得的狂犬病毒原液需要經(jīng)過滅活、純化、凍干等工藝步驟后才可作為用于人體的狂犬病疫苗成品。前述步驟中，無論是滅活、純化，或者是凍干工藝均會對最后所獲得的狂犬病疫苗的性質有一定的影響。
[0004]擴增培養(yǎng)后的狂犬病毒原液經(jīng)滅活和純化后得到的狂犬病毒半成品在凍干過程中，由于凍干方法、凍干工藝參數(shù)的區(qū)別常常導致所獲得狂犬病疫苗在物理形態(tài)、殘余水分含量、溶解性等性能上具有差異，從而導致了狂犬病疫苗的效價穩(wěn)定性有差異。
[0005]另外，狂犬病毒半成品在凍干過程中，為了避免效價穩(wěn)定性的降低，一般均為采用在狂犬病毒半成品中加入一定比例的穩(wěn)定劑，如人血白蛋白；目前在狂犬病毒半成品每HiL中所加入的人血白蛋白的量一般為Ig或3g，或者是采用更多的加入量，如IOg ；由于人血白蛋白成本價格較高，加入過多則產(chǎn)品成本偏高，若加入過少則產(chǎn)品的效價穩(wěn)定性則較差。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0006]有鑒于此，本發(fā)明提供一種人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，其熱穩(wěn)定性和效價穩(wěn)定性相對于用現(xiàn)有的凍干工藝制備出的人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗而言具有明顯的提聞。
[0007]為解決以上技術問題，本發(fā)明的技術方案是采用一種人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗在物理形態(tài)上具有質量分數(shù)為92.0%以上的疏松體，并且所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病毒疫苗的溶解時間為95s-99s。
[0008]優(yōu)選的，所述疏松體為乳白色。
[0009]優(yōu)選的，所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗包括有將人二倍體細胞作為宿主細胞接種狂犬病毒后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品經(jīng)凍干獲得所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0010]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥所設置的溫度梯度為從-40.(TC到-35.(TC，溫度間隔為1°C和/或0.50C ;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為 200_260min。
[0011]優(yōu)選的，所述凍干步驟如下:
[0012]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.00C >-38.50C >-38.00C >-37.5°C >-37.0°C >-36.5°C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為240min。[0013]本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比，其詳細說明如下:
[0014]本發(fā)明所采用的技術方案為所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗在物理形態(tài)上具有質量分數(shù)為92.0%以上的疏松體，并且所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗的溶解時間為 95s-99s。
[0015]本發(fā)明所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗為了解決現(xiàn)有的利用同樣的宿主細胞培養(yǎng)出的狂犬病疫苗在效價穩(wěn)定性上的不足之處，主要采用了將狂犬病疫苗產(chǎn)品的物理形態(tài)進行調(diào)整，將狂犬病疫苗產(chǎn)品在物理形態(tài)上所具有疏松體的含量進行提高，當其含量達到92.0%以上，同時所得疫苗產(chǎn)品的溶解時間為95s-99s時，其所得到的狂犬病疫苗的效價穩(wěn)定性可以得到明顯的提高；下文中分別通過熱穩(wěn)定性試驗和效價穩(wěn)定性試驗來說明，具體可詳見實施例部分。
[0016]本發(fā)明所述人二倍體細胞可以是現(xiàn)有常用的任一種人二倍體細胞株系，包括有W1-38、KMB17、MR-90、MRC_5、2BS 等。
[0017]進一步的，本發(fā)明所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗可優(yōu)選為以下制備方法所得:包括有將人二倍體細胞作為宿主細胞接種狂犬病毒后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品經(jīng)凍干獲得所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0018]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥所設置的溫度梯度為從-40.(TC到-35.(TC，溫度間隔為1°C和/或0.50C ;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為 200_260min。
[0019]本發(fā)明所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗可采用其他的方式制備成物理形態(tài)中質量分數(shù)90%以上為疏松體，并且溶解時間為95s-99s的疫苗產(chǎn)品，但本發(fā)明主要采用對其制備方法中所獲得的病毒半成品在凍干步驟中各種參數(shù)的改進來達到本發(fā)明的目的。如前所述，本發(fā)明可進一步的優(yōu)選在凍干步驟中對逐步升溫干燥中的溫度梯度設置以及每一溫度下的干燥時間進行調(diào)整，具體改進為所述逐步升溫干燥所設置的溫度梯度為從-40.(TC到-35.(TC，溫度間隔為1°C和/或0.5°C;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為200-260min的方式，從而得到效價穩(wěn)定性更好的狂犬病疫苗產(chǎn)品。
[0020]本發(fā)明所述溫度間隔為I °C和/或0.5 °C，可以是從-40.0 0C到-35.0 °C之間均為 l°c的間隔，即-40.(TC、-39.(TC、-38.(TC、-37.(TC、-36.(TC、-35.(TC的溫度梯度;還可以是從-40.(TC到-35.(TC之間均為 0.5°C 的間隔，即-40.0°C >-39.5。。、-39.0°C >-38.50C >-38.00C >-37.5 0C >-37.0°C >-36.5 °C >-36.0°C >-35.5 °C >-35.(TC 的溫度梯度；更可以是從-40.(TC到-35.(TC之間均可以有 1°C和 0.5°C的間隔，例如-40.0°C>-39.5°C>-39.0°C、_38.00C >-37.00C >-36.0°C >-35.5°C、_35.(TC 的溫度梯度。
[0021]本發(fā)明為了得到效價穩(wěn)定性進一步提高的狂犬并疫苗，可對前述逐步升溫干燥步驟中的溫度梯度設置進行進一步的篩選，同時，每一種溫度下的干燥時間同樣可進一步的篩選；通過本發(fā)明人的大量實驗研究證實，本發(fā)明中若進一步優(yōu)選采用所述溫度梯度設置為-40.00C>-39.00C>-38.5。。、-38.0°C>-37.5。。、-37.0°C>-36.5。。、-36.0°C>-35.(TC，并且每一種溫度下的干燥時間均為240min時，其所獲得的人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗廣品在效價穩(wěn)定性上可以進一步的得到提聞。
[0022]本發(fā)明的第二個目的在于提供一種前述的人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗的制備方法，所述制備方法包括有將人二倍體細胞作為宿主細胞接種狂犬病毒后擴增培養(yǎng)，收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品；所述病毒半成品經(jīng)凍干獲得所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干包含有以下步驟:
[0023]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥所設置的溫度梯度為從-40.(TC到-35.(TC，溫度間隔為1°C和/或0.50C ;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為 200_260min。
[0024]采用本發(fā)明所述制備方法中的凍干步驟所得到的狂犬病疫苗能夠達到本發(fā)明的目的，即其效價穩(wěn)定性相對于現(xiàn)有的狂犬病疫苗更高。
[0025]優(yōu)選的，所述凍干步驟如下:[0026]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.00C >-38.5 0C >-38.00C >-37.5 °C >-37.0°C >-36.5 °C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為240min。
[0027]進一步的，本發(fā)明可優(yōu)選對所述的凍干步驟進行改進，具體如前述，其改進后所得的狂犬病疫苗產(chǎn)品的效價穩(wěn)定性進一步提高。
[0028]進一步的，本發(fā)明制備方法中優(yōu)選采用所述病毒半成品在凍干之前在病毒半成品中每mL加入4.5g-5.5g的人血白蛋白。
[0029]人學白蛋白是一種價格較為昂貴的試劑，其病毒疫苗的制備中常常作為凍干之間加入病毒半成品中的穩(wěn)定劑來使用，但由于其成本偏高，因此大多狂犬病毒半成品多采用在其每mL內(nèi)加入Ig或3g的人血白蛋白，但其所獲得的疫苗產(chǎn)品在效價穩(wěn)定性上常常不夠
理相
[0030]但若采用在狂犬病毒半成品每mL中加入IOg的人血白蛋白，則成本過于偏高，沒有實際的生產(chǎn)價值。鑒于上述原因，本發(fā)明中進一步研究了人血白蛋白的加入量在成本和效價上的平衡問題，即可采用加入每mL病毒半成品的4.5g-5.5g的人學白蛋白的方式，從而即可達到成本控制，同時其經(jīng)凍干后得到的效價穩(wěn)定性可達到較好的效果。
[0031]進一步的，本發(fā)明制備方法中優(yōu)選采用所述病毒半成品在凍干之前在病毒半成品中每mL加入5g的人血白蛋白。作為本發(fā)明的進一步優(yōu)選的實施方式，人血白蛋白的加入量可調(diào)整為每mL病毒半成品中加入5g。
[0032]進一步的，本發(fā)明制備方法中優(yōu)選采用所述人二倍體細胞為W1-38、KMB17、IMR-90、MRC-5、2BS中的任意一種。本發(fā)明中所述的人二倍體細胞可選用現(xiàn)有常用的人二倍體細胞株系，也可選用本發(fā)明的優(yōu)選實施方式。
[0033]進一步的，本發(fā)明制備方法中優(yōu)選采用所述狂犬病毒為PM毒株或CDKHBP-1毒株。
[0034]進一步的，本發(fā)明制備方法中優(yōu)選采用所述人二倍體細胞為W1-38，所述狂犬病毒為CDKHBP-1毒株。作為本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，本發(fā)明中優(yōu)選采用當人二倍體細胞為W1-38時，狂犬病毒為⑶KHBP-1毒株。
【具體實施方式】
[0035]為了使本領域的技術人員更好地理解本發(fā)明的技術方案，下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步的詳細說明。
[0036]對照例I [0037]將人二倍體細胞MR-90作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例I人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0038]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.(TC、一38.(TC、-37.(TC、-36.(TC、-35.(TC ;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為 200min。
[0039]對照例2
[0040]將人二倍體細胞MR-90作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例2人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0041]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.50C>-39.00C>-38.50C>-38.0°C>-37.5°C>-37.0°C>-36.5°C>-36.0°C>-35.5°C>-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為200-260min。
[0042]對照例3
[0043]將人二倍體細胞MR-90作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例3人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0044]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.5 0C >-39.00C >-38.00C >-37.0°C >-36.0°C >-35.5 °C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為200min。
[0045]對照例4
[0046]將人二倍體細胞MR-90作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例4人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0047]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.00C >-38.50C >-38.00C >-37.5°C >-37.0°C >-36.5°C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為200min。
[0048]對照例5
[0049]將人二倍體細胞MR-90作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例5人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0050]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.0°C,-38.0°C,-37.0°C,-36.0°C,-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為260mino
[0051]對照例6
[0052]將人二倍體細胞 MR-90作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例6人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0053]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.50C>-39.00C>-38.50C>-38.0°C>-37.5°C>-37.0°C>-36.5°C>-36.0°C>-35.5°C>-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為260min。
[0054]對照例7
[0055]將人二倍體細胞MR-90作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例7人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0056]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.5 0C >-39.00C >-38.00C >-37.0°C >-36.0°C >-35.5 °C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為260min。
[0057]對照例8
[0058]將人二倍體細胞MR-90作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例8人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:[0059]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.00C >-38.50C >-38.00C >-37.5°C >-37.0°C >-36.5°C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為260min。
[0060]對照例9
[0061]將人二倍體細胞MR-90作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例9人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0062]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.00C >-38.5 0C >-38.00C >-37.5 °C >-37.0°C >-36.5 °C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為240min。
[0063]對照例10
[0064]將人二倍體細胞MR-90作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入3g含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例10人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0065]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.00C >-38.50C >-38.00C >-37.5°C >-37.0°C >-36.5°C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為240min。
[0066]對照例11
[0067]將人二倍體細胞MR-90作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入4.5g含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例11人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0068]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.00C >-38.50C >-38.00C >-37.5°C >-37.0°C >-36.5°C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為240min。
[0069]對照例12
[0070]將人二倍體細胞MR-90作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入5.5g含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例12人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0071]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.00C >-38.50C >-38.00C >-37.5°C >-37.0°C >-36.5°C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為240min。
[0072]對照例13
[0073]將人二倍體細胞MR-90作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入5g含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例13人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0074]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0°C -39.0°C 、-38.5°C 、-38.00C 、-37.5°C 、-37.0°C 、-36.5°C、-36.0°C 、-35.0°C 所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為240min。
[0075]對照例14
[0076]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入1g含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例14人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0077]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.0°C 、一38.0°C 、-37.0°C 、-36.0°C 、-35.0°C ;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為 200min。
[0078]對照例15
[0079]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每HiL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例15人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0080]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0°C -39.5°C 、-39.0°C 、-38.5°C 、-38.0°C、-37.5°C、-37.0°C、-36.5°C、-36.0°C、-35.5°C、-35°C ;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為200min。
[0081]對照例16
[0082]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每HiL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例16人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0083]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0°C、 -39.5 °C 、-39.0°C 、-38.0°C 、-37.0°C 、-36.0°C、-35.5 °C、-35.0°C ;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為200min。
[0084]對照例17
[0085]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例17人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0086]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.00C >-38.50C >-38.00C >-37.5°C >-37.0°C >-36.5°C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為200min。
[0087]對照例18
[0088]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每HiL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例18人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0089]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.0°C,-38.0°C,-37.0°C,-36.0°C,-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為260mino
[0090]對照例19
[0091 ] 將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每HiL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例19人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0092]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.50C>-39.00C>-38.50C>-38.0°C>-37.5°C>-37.0°C>-36.5°C>-36.0°C>-35.5°C>-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為260min。
[0093]對照例20
[0094]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每HiL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例20人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0095]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.5 0C >-39.00C >-38.00C >-37.0°C >-36.0°C >-35.5 °C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為260min。 [0096]對照例21
[0097]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每HiL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例21人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:[0098]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.00C >-38.50C >-38.00C >-37.5°C >-37.0°C >-36.5°C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為260min。
[0099]對照例22
[0100]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例22人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0101]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.00C >-38.5 0C >-38.00C >-37.5 °C >-37.0°C >-36.5°C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為240min。
[0102]對照例23
[0103]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入3g含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例23人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下: [0104]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.00C >-38.50C >-38.00C >-37.5°C >-37.0°C >-36.5°C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為240min。
[0105]對照例24
[0106]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入4.5g含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例24人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0107]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.00C >-38.50C >-38.00C >-37.5°C >-37.0°C >-36.5°C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為240min。
[0108]對照例25
[0109]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入5.5g含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例25人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下: [0110]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.00C >-38.50C >-38.00C >-37.5°C >-37.0°C >-36.5°C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為240min。
[0111]對照例26
[0112]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒PM毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入5g含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例26人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0113]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.00C >-38.50C >-38.00C >-37.5°C >-37.0°C >-36.5°C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為240min。
[0114]對照例27
[0115]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒⑶KHBP-1毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例27人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0116]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.(TC、一38.(TC、-37.(TC、-36.(TC、-35.(TC ;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為 200min。[0117]對照例28
[0118]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒⑶KHBP-1毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例28人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0119]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.50C>-39.00C>-38.50C>-38.0°C>-37.5°C>-37.0°C>-36.5°C>-36.0°C>-35.5°C>-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為200min。
[0120]對照例29
[0121 ] 將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒⑶KHBP-1毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例29人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0122]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.5 0C >-39.00C >-38.00C >-37.0°C >-36.0°C >-35.5 °C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為200min。
[0123]對照例30
[0124]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒⑶KHBP-1毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例30人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:[0125]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.00C >-38.50C >-38.00C >-37.5°C >-37.0°C >-36.5°C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為200min。
[0126]對照例31
[0127]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒⑶KHBP-1毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例31人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0128]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.0°C,-38.0°C,-37.0°C,-36.0°C,-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為260mino
[0129]對照例32
[0130]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒⑶KHBP-1毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例32人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0131]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.50C>-39.00C>-38.50C>-38.0°C>-37.5°C>-37.0°C>-36.5°C>-36.0°C>-35.5°C>-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為260min。
[0132]對照例33
[0133]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒⑶KHBP-1毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例33人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0134]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.50C >-39.00C >-38.00C >-37.0°C >-36.0°C >-35.5 °C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為260min。
[0135]對照例34
[0136]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒⑶KHBP-1毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例34人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:[0137]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.00C >-38.50C >-38.00C >-37.5°C >-37.0°C >-36.5°C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為260min。
[0138]對照例35
[0139]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒⑶KHBP-1毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入Ig含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例35人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0140]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.00C >-38.5 0C >-38.00C >-37.5 °C >-37.0°C >-36.5 °C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為240min。
[0141]對照例36
[0142]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒⑶KHBP-1毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入3g含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品 經(jīng)凍干獲得對照例36人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0143]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.00C >-38.50C >-38.00C >-37.5°C >-37.0°C >-36.5°C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為240min。
[0144]對照例37
[0145]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒⑶KHBP-1毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每HiL加入4.5g含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例37人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0146]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.00C >-38.50C >-38.00C >-37.5°C >-37.0°C >-36.5°C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為240min。
[0147]對照例38
[0148]將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒⑶KHBP-1毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每HiL加入5.5g含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例38人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0149]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.00C >-38.50C >-38.00C >-37.5°C >-37.0°C >-36.5°C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為240min。
[0150] 對照例39
[0151 ] 將人二倍體細胞W1-38作為宿主細胞接種狂犬病毒⑶KHBP-1毒株后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品中每mL加入5g含量的人血白蛋白，然后所得病毒半成品經(jīng)凍干獲得對照例39人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述凍干步驟如下:
[0152]凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.00C >-38.50C >-38.00C >-37.5°C >-37.0°C >-36.5°C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為240min。
[0153]前述對照例1-39在制備過程中其他步驟如病毒擴增培養(yǎng)、病毒原液滅活、純化等可采用現(xiàn)有制備人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗的方法；另外對照例1-39中所述凍干中的其他步驟均可采用現(xiàn)有常用的制備方法，本發(fā)明對照例1-39中優(yōu)選為采用以下凍干工藝參數(shù):
[0154]預凍階段為溫度-50.0 °C、時間為120min;真空度為0.2mbar(Ibar=0.1Mpa, Ibar=1000mbar);解析干燥分為兩次,第一次溫度為15°C,時間為180min,第二次溫度為30.(TC，時間為180min。
[0155]上述對照例1-39中所述的各材料的來源如下:
[0156]人二倍體細胞MR-90:購自ATCC
[0157]人二倍體細胞W1-38:購自ATCC
[0158]狂犬病毒PM毒株:購自ATCC
[0159]狂犬病毒⑶KHBP-1毒株:購自康華生物有限公司
[0160]人血白蛋白:購自成都蓉生藥業(yè)有限責任公司
[0161]其余步驟中未明確寫明的試劑或材料等均可采用從市售獲取的方式獲得。
[0162]實施例1——對照例1-39的產(chǎn)品指標測定實驗
[0163]每個對照例1-39分別隨機抽取100支疫苗產(chǎn)品，然后均按照現(xiàn)行版《中國生物制品規(guī)程》(《中國藥典》2010版三部pill~113)分別檢測其各成品中的物理形態(tài)、顏色、殘余水分含量、溶解時間等產(chǎn)品指標，所得各產(chǎn)品指標的結果列于下表一中:
[0164]表一
【權利要求】
1.一種人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，其特征在于:所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗在物理形態(tài)上具有質量分數(shù)為92.0%以上的疏松體，并且所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病毒疫苗的溶解時間為95s-99s。
2.根據(jù)權利要求1所述的人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗包括有將人二倍體細胞作為宿主細胞接種狂犬病毒后擴增培養(yǎng)、收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品，所述病毒半成品經(jīng)凍干獲得所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，其特征在于所述凍干步驟如下: 凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥所設置的溫度梯度為從-40.(TC到-35.(TC，溫度間隔為1°C和/或0.5°C ;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為 200_260min。
3.根據(jù)權利要求2所述的人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，其特征在于所述凍干步驟如下: 凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.(TC、-38.5 0C >-38.00C >-37.5 °C >-37.0°C >-36.5°C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為240min。
4.一種權利要求1所述的人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗的制備方法，所述制備方法包括有將人二倍體細胞作為宿主細胞接種狂犬病毒后擴增培養(yǎng)，收獲病毒原液并滅活、純化得病毒半成品；所述病毒半成品經(jīng)凍干獲得所述人二倍體細胞培養(yǎng)的狂犬病疫苗，其特征在于所述凍干包含有以下步驟: 凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥所設置的溫度梯度為從-40.(TC到-35.(TC，溫度間隔為1°C和/或0.5°C ;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為 200_260min。
5.根據(jù)權利要求4所述的制備方法，其特征在于所述凍干步驟如下: 凍干步驟中包括有升溫階段、預凍階段、抽真空階段和干燥階段；所述干燥階段包括有逐步升溫干燥和解析干燥；所述逐步升溫干燥中的溫度梯度分別設置為-40.0-39.(TC、-38.5 0C >-38.00C >-37.5 °C >-37.0°C >-36.5 °C >-36.0°C >-35.(TC;所述逐步升溫干燥中每一種溫度下的干燥時間為240min。
6.根據(jù)權利要求4所述的制備方法，其特征在于:所述病毒半成品在凍干之前在病毒半成品中每mL加入4.5g-5.5g的人血白蛋白。
7.根據(jù)權利要求 4所述的制備方法，其特征在于:所述病毒半成品在凍干之前在病毒半成品中每HiL加入5g的人血白蛋白。
8.根據(jù)權利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述人二倍體細胞為W1-38、KMB17、MR-90、MRC-5、2BS 中的任意一種。
9.根據(jù)權利要求4所述的制備方法，其特征在于:所述狂犬病毒為PM毒株或CDKHBP-1毒株。
10.根據(jù)權利要求4所述的制備方法，其特征在于:所述人二倍體細胞為W1-38，所述狂犬病毒為CDKHBP-1毒株。
【文檔編號】A61P31/14GK103736089SQ201410022611
【公開日】2014年4月23日 申請日期:2014年1月17日 優(yōu)先權日:2014年1月17日
【發(fā)明者】侯文禮, 蔡勇, 張濤 申請人:成都康華生物制品有限公司