具有改進(jìn)的體內(nèi)穩(wěn)定性、藥物代謝動(dòng)力學(xué)和功效的多聚體復(fù)合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及基于抗體融合蛋白的多聚體復(fù)合物，其包含附著至每條抗體輕鏈的C-末端的AD部分。所述復(fù)合物進(jìn)一步包含附著至DDD部分的效應(yīng)子部分。所述DDD部分的兩個(gè)拷貝形成結(jié)合所述AD部分的二聚體。所述復(fù)合物可為三聚體、五聚體、六聚體或其它多聚體。所述效應(yīng)子部分可選自第二抗體或其抗原結(jié)合片段、細(xì)胞因子、干擾素、毒素、抗原、異種抗原、半抗原、魚精蛋白、激素、酶、配體結(jié)合蛋白、促凋亡劑以及抗血管生成劑。出人意料地，與其中所述AD部分附著至所述抗體重鏈的同源復(fù)合物相比，所述AD部分附著至所述抗體輕鏈的C-末端引起改進(jìn)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)和體內(nèi)穩(wěn)定性以及功效。
【專利說明】具有改進(jìn)的體內(nèi)穩(wěn)定性、藥物代謝動(dòng)力學(xué)和功效的多聚體 復(fù)合物
[0001] 相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
[0002] 本申請(qǐng)根據(jù)35U.S.C. 119(e)要求2012年6月1日提交的臨時(shí)美國(guó)專利申請(qǐng) 61/654,310、2012年6月20日提交的臨時(shí)美國(guó)專利申請(qǐng)61/662,086、2012年7月19日提交 的臨時(shí)美國(guó)專利申請(qǐng)61/673, 553、2012年8月13日提交的臨時(shí)美國(guó)專利申請(qǐng)61/682, 531、 2012年8月24日提交的臨時(shí)美國(guó)專利申請(qǐng)61/693, 042以及2012年8月28日提交的臨時(shí) 美國(guó)專利申請(qǐng)61/694, 072的權(quán)益，每個(gè)有優(yōu)先權(quán)的申請(qǐng)均以引用的方式整體并入本文。
[0003] 序列表
[0004] 本申請(qǐng)含有序列表，所述序列表以ASCII格式通過EFS-Web提交并且由此以引用 的方式整體并入。于2013年5月3日創(chuàng)建的所述ASCII副本命名為IBC137W01_SL. txt并 且大小為59,652字節(jié)。
[0005] 領(lǐng)域
[0006] 本發(fā)明涉及使用包含多個(gè)效應(yīng)子部分的多聚體復(fù)合物的組合物和方法。優(yōu)選地， 效應(yīng)子部分為融合蛋白，每個(gè)融合蛋白均包含來自A-激酶錨定蛋白（AKAP)的錨定域（AD) 部分或來自蛋白激酶A(PKA)調(diào)節(jié)亞基RIa、RI0、RIIa或RII β的二聚化和?？坑颍―DD) 部分。DDD部分的兩個(gè)拷貝二聚化并且結(jié)合AD部分以形成多聚體復(fù)合物，所述多聚體復(fù)合 物可為三聚體的、四聚體的、五聚體的、六聚體的或多聚體的。普通技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到在替 代實(shí)施方案中，AD和/或DDD部分可通過化學(xué)交聯(lián)或其它已知方式附著至效應(yīng)子。效應(yīng) 子可選自抗體、抗原結(jié)合抗體片段、抗原、細(xì)胞因子、趨化因子、白細(xì)胞介素、干擾素、生長(zhǎng)因 子、促凋亡劑、抗血管生成劑、毒素、配體結(jié)合蛋白、酶、治療劑或聚合物如聚乙二醇（PEG)。 優(yōu)選地，至少一種效應(yīng)子為抗體或抗原結(jié)合抗體片段，其中AD部分附著至抗體或抗體片段 的每條輕鏈的C-末端。更優(yōu)選地，至少一種效應(yīng)子為IgG抗體。在某些實(shí)施方案中，所有 效應(yīng)子可為提供雙特異性或多特異性抗原結(jié)合復(fù)合物的抗體或抗體片段。本發(fā)明多聚體復(fù) 合物具有用于治療各種各樣疾病和醫(yī)學(xué)病狀如癌癥、自身免疫疾病、免疫系統(tǒng)功能障礙、移 植物抗宿主疾病、器官移植排斥、神經(jīng)疾病、代謝性疾病、感染性疾病或心血管疾病的用途。 [0007] 背景
[0008] 最近生物醫(yī)學(xué)研究的一個(gè)重要方面為開發(fā)日益完善的基于抗體的生物制品，如雙 特異性抗體、免疫細(xì)胞因子、抗體-毒素綴合物以及抗體-藥物綴合物。開發(fā)更復(fù)雜和較不 天然的融合蛋白面臨產(chǎn)率、穩(wěn)定性、免疫原性和藥物代謝動(dòng)力學(xué)（Pk)的問題。具體來說，基 于包括單鏈 Fv(scFv)、Fab 或其它缺乏 Fc 的形式（Kontermann, 2010, Curr Opin Mol Ther 12:176-83)的抗體片段的免疫綴合物常常難以生產(chǎn)具有均勻性和足夠的產(chǎn)率，常常缺乏 Fc-效應(yīng)子功能并且固有地遭受短循環(huán)血清半衰期（T1/2)。通過比較，可以高產(chǎn)率、同時(shí)具有 較長(zhǎng)Τ 1/2和體內(nèi)穩(wěn)定性生產(chǎn)IgG的免疫綴合物。此外，完整的單克隆抗體（mAb)提供具有 Fc-效應(yīng)子功能的高親合力二價(jià)結(jié)合，所述Fc-效應(yīng)子功能包括抗體依賴型細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞 毒性（ADCC)和補(bǔ)體依賴型細(xì)胞毒性（CDC)。IgG的增強(qiáng)的Pk歸因于兩大因素。其較大的分 子大小（大約150kDa)阻止了腎清除，所述腎清除負(fù)責(zé)快速消除較小的構(gòu)建體（<60kDa)，如 scFv;和其動(dòng)態(tài)結(jié)合新生兒 Fe 受體（FcRn) (Kue&Aveson，2011，MAbs 3:422-30)超過 T1/2。
[0009] 多特異性或雙特異性抗體有用于許多生物醫(yī)學(xué)應(yīng)用中。例如，具有用于腫瘤細(xì)胞 表面抗原和用于T細(xì)胞表面受體的結(jié)合位點(diǎn)的雙特異性抗體可指導(dǎo)通過T細(xì)胞的特異性腫 瘤細(xì)胞的溶解。識(shí)別神經(jīng)膠質(zhì)瘤和T細(xì)胞上的CD3表位的雙特異性抗體已成功用于治療人 患者中的腦腫瘤（Nitta等人，Lancet. 1990 ;355:368-371)。生產(chǎn)雙特異性抗體的許多方 法為已知的（參見，例如美國(guó)專利號(hào)7, 405, 320)。雙特異性抗體可通過四重雜交瘤方法生 產(chǎn)，所述四重雜交瘤方法涉及使各自產(chǎn)生識(shí)別不同抗原位點(diǎn)的單克隆抗體的兩種不同雜交 瘤融合（Milstein和Cuello. Nature. 1983 ;305:537-540)。融合的雜交瘤能夠合成兩條不 同的重鏈和兩條不同的輕鏈，其可隨機(jī)締合以得到10種不同抗體結(jié)構(gòu)的異質(zhì)群體，占總抗 體分子的1/8的僅所述抗體結(jié)構(gòu)中的一種將為雙特異性的并且因此必須進(jìn)一步從其它形 式純化。融合的雜交瘤常常在細(xì)胞遺傳學(xué)上比親本雜交瘤穩(wěn)定性更差，使得生產(chǎn)細(xì)胞系的 產(chǎn)生更成問題。
[0010] 用于生產(chǎn)雙特異性抗體的另一種方法使用異雙官能性交聯(lián)劑以化學(xué)系栓兩種 不同的單克隆抗體，以使得所得到的雜交綴合物將結(jié)合兩個(gè)不同靶標(biāo)（Staerz等人， Nature. 1985 ;314:628-631 ;Perez 等Nature. 1985 ;316:354-356)。由此方法產(chǎn)生的雙特異 性抗體基本上為兩個(gè)IgG分子的異綴合物，其緩慢擴(kuò)散到組織中并且從循環(huán)中快速去除。 雙特異性抗體還可通過將兩個(gè)親本單克隆抗體的每個(gè)還原成對(duì)應(yīng)的半個(gè)分子，然后使所述 半個(gè)分子混合并且允許再氧化以獲得雜交結(jié)構(gòu)來生產(chǎn)（Staerz和Bevan. Proc Natl Acad Sci USA. 1986 ;83:1453-1457)。另一替代方法涉及使用適當(dāng)接頭化學(xué)交聯(lián)兩種或三種經(jīng)過 單獨(dú)純化的Fab'片段。所有這些化學(xué)方法由于高制造成本、費(fèi)力的生產(chǎn)過程、大量的純化 步驟、低產(chǎn)率（〈20% )以及異質(zhì)產(chǎn)物而為商業(yè)開發(fā)所不希望的。
[0011] 其它方法包括通過經(jīng)由逆轉(zhuǎn)錄病毒衍生的穿梭載體將相異可選擇標(biāo)記物 基因轉(zhuǎn)移到隨后融合的各自親本雜交瘤中（DeMonte等人，Proc Natl Acad Sci USA. 1990,87:2941-2945);或用含有不同抗體的重鏈基因和輕鏈基因的表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染雜交 瘤細(xì)胞系來改進(jìn)產(chǎn)生雜交的雜交瘤的效率。這些方法也面臨以上討論的不可避免的純化問 題。
[0012] 通過重組DNA技術(shù)生產(chǎn)的抗體的不連續(xù)Vh和 '結(jié)構(gòu)域可彼此成對(duì)以形成具有結(jié) 合能力（美國(guó)專利號(hào)4, 642, 334)的二聚體（重組Fv片段）。然而，此類非共價(jià)締合的分子 在生理?xiàng)l件下不是足夠穩(wěn)定以具有任何實(shí)際使用?？蓪⑼碫 h和 '結(jié)構(gòu)域與具有適當(dāng)組 成和長(zhǎng)度（通常由多于12個(gè)氨基酸殘基組成）的肽接頭接合以形成具有結(jié)合活性的單鏈 Fv(scFv)。通過改變接頭長(zhǎng)度制造具有多價(jià)和多特異性的基于scFv的藥劑的方法公開于 美國(guó)專利號(hào)5, 844, 094、美國(guó)專利號(hào)5, 837, 242和WO 98/44001中。與產(chǎn)生具有多價(jià)和多特 異性的基于scFv的藥劑頻繁相關(guān)的常見問題為低表達(dá)水平、異質(zhì)產(chǎn)物、導(dǎo)致聚集的溶液不 穩(wěn)定性、血清不穩(wěn)定性以及親和性受損。
[0013] 對(duì)接和鎖定（Dock-and-Lock)?(DNL?)技術(shù)已用來以各種形式生產(chǎn)各種免疫綴合 物（Rossi 等人，2012, Bioconjug Chem 23:309-23)?；诰S妥珠單抗（veltuzumab)(抗 ⑶20)和依帕珠單抗（epratuzumab)(抗⑶22)的雙特異性六價(jià)抗體（bsHexAb)通過使融 合至二聚化和?？坑颍―DD)的穩(wěn)定（Fab) 2與含有在每條重鏈（CH3-AD2-IgG)的C-末端 上附加的錨定域（AD)的IgG組合來構(gòu)建（Rossi等人，2009, Blood 113, 6161-71)。與其 親本mAb的混合物相比，這些基于Fe的bsHexAb (此后稱為"Fc-bsHexAb"）誘導(dǎo)獨(dú)特的 信號(hào)傳導(dǎo)事件（Gupta等人，2010, Blood 116:3258-67)并且在體外展現(xiàn)出潛在的細(xì)胞毒 性。然而，F(xiàn)c-bsHexAb從小鼠循環(huán)中清除比親本mAb快大約兩倍（Rossi等人，2009, Blood 113, 6161-71)。雖然Fc-bsHexAb在離體情況下高度穩(wěn)定，但也可能例如通過細(xì)胞內(nèi)加工在 體內(nèi)發(fā)生一些解離。此外，F(xiàn)c-bsHexAb缺乏⑶C活性。
[0014] 基于Fc的免疫細(xì)胞因子還已組裝成DNLtm復(fù)合物，其包含融合至〇13^02-1 86 Fc的C-末端的干擾素-a2b(IFNa2b)的兩個(gè)或四個(gè)分子（Rossi等人，2009，Blood 114:3864-71 ;Rossi 等人，2010，Cancer Res 70:7600-09 ;Rossi 等人，2011，Blood 118:1877-84)。Fc-IgG-IFNa維持高特異性活性、接近重組IFNa并且在體外和在體內(nèi)對(duì) 抗非霍奇金氏淋巴瘤（NHL)異種移植物顯著有效。Fc-IgG-IFNa在小鼠中的T 1/2比PEG化 的IFNa長(zhǎng)，但為親本mAb的一半。類似于Fc-bsHexAb，F(xiàn)c-IgG-IFNa隨時(shí)間在體內(nèi)解離 并且展現(xiàn)出減小的⑶C，但ADCC增強(qiáng)。
[0015] 存在對(duì)產(chǎn)生具有較長(zhǎng)T1/2、更好藥物代謝動(dòng)力學(xué)性質(zhì)、增加的體內(nèi)穩(wěn)定性和改進(jìn)的 體內(nèi)功效的改進(jìn)型多聚體復(fù)合物的方法和組合物的需要。
[0016] 概述
[0017] 本發(fā)明涉及用于生產(chǎn)具有較長(zhǎng)Τ1/2、更好藥物代謝動(dòng)力學(xué)性質(zhì)和增加的體內(nèi)穩(wěn)定 性的改進(jìn)型DNL?復(fù)合物的組合物和方法。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，改進(jìn)型DNLtm復(fù)合物包含 其中AD部分融合至抗體輕鏈的C-末端的IgG組分。出人意料地，與早已有效的基于Fc的 對(duì)應(yīng)物相比，從重鏈至輕鏈的AD附著位點(diǎn)的重新定位大致上引起改進(jìn)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)、 體內(nèi)穩(wěn)定性和Fc效應(yīng)子功能，連同增加的體內(nèi)功效。
[0018] 在各種實(shí)施方案中，本發(fā)明復(fù)合物可出于治療目的和/或診斷目的向患有病狀的 受試者施用。熟練的技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到可用多官能性、二價(jià)、三價(jià)、多特異性或雙特異性復(fù) 合物診斷和/或治療的任何病狀可用本發(fā)明組合物治療。示例性病狀包括但不限于癌癥、 增生、神經(jīng)變性疾病、阿爾茨海默氏疾病、心血管疾病、代謝性疾病、血管炎、病毒感染、真菌 感染、細(xì)菌感染、糖尿病性視網(wǎng)膜病、黃斑變性、自身免疫疾病、水腫、肺動(dòng)脈高壓、膿毒癥、 心肌梗塞血管生成、斑塊新血管形成、再狹窄、血管創(chuàng)傷后新內(nèi)膜形成、毛細(xì)血管擴(kuò)張、血友 病關(guān)節(jié)、血管纖維瘤、與慢性炎癥相關(guān)的纖維變性、肺纖維化、深靜脈血栓形成或傷口肉芽 形成（wound granulation) 〇
[0019] 在具體實(shí)施方案中，公開的方法和組合物可用來治療自身免疫疾病，如急性 特發(fā)性血小板減少性紫癜、慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜、皮肌炎、西登哈姆氏舞蹈病 (Sydenham's chorea)、重癥肌無力、全身性紅斑狼瘡、狼瘡腎炎、風(fēng)濕熱、多腺體綜合癥、大 皰性類天皰瘡、1型糖尿病、2型糖尿病、亨諾赫-舍恩萊茵紫癜、鏈球菌感染后腎炎、結(jié)節(jié)性 紅斑、高安氏動(dòng)脈炎、艾迪生氏病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、肉樣瘤病、潰瘍性結(jié)腸 炎、多形性紅斑、IgA腎病、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、強(qiáng)直性脊柱炎、古德帕斯丘綜合癥、血管閉塞性 脈管炎、斯耶格倫氏綜合癥、原發(fā)性膽汁性肝硬化、橋本氏甲狀腺炎、甲狀腺毒癥、硬皮病、 慢性活動(dòng)性肝炎、多肌炎/皮肌炎、多軟骨炎、尋常天皰瘡、韋格納氏肉芽腫病、膜性腎病、 肌萎縮性側(cè)索硬化、脊髓癆、巨細(xì)胞性動(dòng)脈炎/多肌痛、惡性貧血、急進(jìn)性腎小球腎炎、牛皮 癬或纖維化肺泡炎。
[0020] 在某些實(shí)施方案中，復(fù)合物可具有用于治療性治療癌癥的用途?？梢灶A(yù)期，可靶向 任何類型的腫瘤和任何類型的腫瘤抗原?？砂邢虻氖纠灶愋偷陌┌Y包括急性成淋巴細(xì)胞 性白血病、急性髓性白血病、膽癌、乳癌、子宮頸癌、慢性淋巴細(xì)胞性白血病、慢性髓性白血 病、結(jié)直腸癌、子宮內(nèi)膜癌、食道癌、胃癌、頭頸部癌、霍奇金氏淋巴瘤、肺癌、甲狀腺髓樣癌、 非霍奇金氏淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤、腎癌、卵巢癌、胰腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、黑素瘤、肝癌、前列 腺癌以及膀胱癌。
[0021] 可靶向的腫瘤相關(guān)的抗原包括但不限于碳酸酐酶IX、CCCL19、CCCL21、CSAp、⑶1、 CDla、CD2、CD3、CD4、CD5、CD8、CD11A、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、IGF-1R、CD20、CD21、 CD22、CD23、CD25、CD29、CD30、CD32b、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD45、CD46、CD52、 CD54、CD55、CD59、CD64、CD66a-e、CD67、CD70、CD74、CD79a、CD80、CD83、CD95、CD126、 CD133、CD138、CD147、CD154、AFP、PSMA、CEACAM5、CEACAM-6、CSAp、B7、纖連蛋白的 ED-B、因 子H、FHL-1、Flt-3、葉酸受體、GROB、HMGB-1、缺氧誘導(dǎo)因子（HIF)、HML 24、胰島素樣生長(zhǎng) 因子-I(ILGF-I)、IFN-Y、IFN-a、IFN-β、IL-2、IL-4R、IL-6R、IL-13R、IL-15R、IL-17R、 IL-18R、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-25、IP-10、MAGE、mCRP、MCP-l、MIP-lA、 MIP-lB、MIF、MUCl、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5ac、巨噬細(xì)胞抑制因子（MIF)、由 PAM4 抗體結(jié)合的 抗原、NCA-95、NCA-90、la、HML 24、EGP-1、EGP-2、HLA-DR、腱生蛋白、Le (y)、RANTES、T101、 TAC、Tn抗原、湯姆森-弗里德里?？乖?、腫瘤壞死抗原、TNF-a、TRAIL受體（Rl和R2)、 VEGFR、EGFR、P1GF、PSA、PSMA、補(bǔ)體因子 C3、C3a、C3b、C5a、C5 以及致癌基因產(chǎn)物。
[0022] 可利用的示例性抗體包括但不限于hRl (抗IGF-1R，2010年3月12日提交的美 國(guó)專利申請(qǐng)序號(hào)12/722,645)、hPAM4(抗粘蛋白，美國(guó)專利號(hào)7,282,567)、hA20(抗CD20， 美國(guó)專利號(hào) 7,251，164)、hA19(抗 CD19,美國(guó)專利號(hào) 7, 109,304)、hIMMU31(抗 AFP，美國(guó) 專利號(hào)7, 300, 655)、hLLl (抗CD74,美國(guó)專利號(hào)7, 312, 318)、hLL2 (抗CD22,美國(guó)專利 號(hào) 7, 074, 403)、hMu-9 (抗 CSAp，美國(guó)專利號(hào) 7, 387, 773)、hL243 (抗 HLA-DR，美國(guó)專利號(hào) 7,612, 180)、hMN-14(抗 CEACAM5,美國(guó)專利號(hào) 6,676,924)、hMN-15(抗 CEACAM6,美國(guó)專利 號(hào) 7, 541，440)、hRS7 (抗 EGP-1，美國(guó)專利號(hào) 7, 238, 785)以及 hMN-3 (抗 CEACAM6,美國(guó)專利 申請(qǐng)序號(hào)7, 541，440)，各引用專利或申請(qǐng)的實(shí)施例部分以引用的方式并入本文。熟練的技 術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到此列表并非限制性的并且如下更詳細(xì)地討論可使用任何已知的抗體。
[0023] 在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明復(fù)合物可用來治療感染病原生物體如細(xì)菌、病毒 或真菌的受試者?？芍委煹氖纠哉婢ㄐ℃咦泳鷮伲∕icrosporum)、毛癬菌屬 (Trichophyton)、表皮癬菌屬（Epidermophyton)、申氏抱子絲菌（Sporothrix schenckii)、 新型隱球菌（Cryptococcus neoformans)、粗球抱子菌（Coccidioides immitis)、莢膜組織 胞楽菌（Histoplasma capsulatum)、皮炎芽生菌（Blastomyces dermatitidis)或白色念珠 菌（Candida albican)。示例性病毒包括人免疫缺陷病毒（HIV)、皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、狂 犬病病毒、流感病毒、人乳頭瘤病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、仙臺(tái)病毒、貓白血病病 毒、呼腸孤病毒（Reo virus)、脊髓灰質(zhì)炎病毒（polio virus)、人血清微小樣病毒、猿猴病 毒40、呼吸道合胞病毒、小鼠乳腺瘤病毒、水痘-帶狀皰疹病毒、登革病毒（Dengue virus)、 風(fēng)疫病毒、麻疫病毒、腺病毒、人T細(xì)胞白血病病毒、埃-巴二氏病毒、鼠白血病病毒、腿腺炎 病毒、水皰性口炎病毒、辛德畢斯病毒（Sindbis virus)、淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒或 藍(lán)舌病毒。示例性細(xì)菌包括炭疽桿菌（Bacillus anthracis)、無乳鏈球菌（Streptococcus agalactiae)、嗜肺軍團(tuán)菌（Legionella pneumophilia)、釀胺鏈球菌（Streptococcus pyogenes)、大腸桿菌（Escherichia coli)、淋病奈瑟氏菌（Neisseria gonorrhoeae)、 腦膜炎奈瑟氏菌（Neisseria meningitidis)、肺炎球菌屬（Pneumococcus spp·)、流感 嗜血桿菌 B (Hemophilis influenzae B)、梅毒密螺旋體（Treponema pallidum)、萊姆病 螺旋體（Lyme disease spirochetes)、綠胺假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa)、麻風(fēng) 分枝桿菌（Mycobacterium leprae)、流產(chǎn)布魯氏菌（Brucella abortus)、結(jié)核分枝桿菌 (Mycobacterium tuberculosis)或支原體屬（Mycoplasma)。
[0024] 用于感染的復(fù)合物可包含例如用于病原體上的一個(gè)或多個(gè)抗原決定簇的結(jié) 合位點(diǎn)，并且可綴合或附著至用于病原體的治療劑，例如抗病毒劑、抗生素劑或抗真菌 齊U?；蛘?，穩(wěn)定系栓的綴合物可包含用于病原體抗原的第一結(jié)合位點(diǎn)和用于附著至 一種或多種治療劑的半抗原或載體的第二結(jié)合位點(diǎn)?？删Y合至、并入到或靶向結(jié)合 本發(fā)明復(fù)合物的用于對(duì)抗感染性生物體的治療劑包括但不限于無環(huán)鳥苷、阿苯達(dá)唑 (albendazole)、金剛焼胺（amantadine)、阿米卡星（amikacin)、阿莫西林（amoxicillin)、 兩性霉素 B、氨必西林（ampicillin)、氨曲南（aztreonam)、阿奇霉素（azithromycin)、 桿菌膚（bacitracin)、復(fù)方新諾明（bactrim)、巴特芬?(BATRAFEN?)、聯(lián)苯節(jié) 唑（bifonazole)、羧節(jié)青霉素（carbenicillin)、卡泊芬凈（caspofungin)、頭孢克洛 (cefaclor)、頭抱唑林（cefazolin)、頭抱菌素（cephalosporin)、頭抱卩比月虧（cefepime)、 頭抱曲松（ceftriaxone)、頭抱噻月虧（cefotaxime)、氯霉素（chloramphenicol)、西多 福韋（cidofovir)、盆酸環(huán)丙沙星?(CIPRO?）、 克拉霉素（clarithromycin)、 克拉維酸（clavulanic acid)、克霉唑（clotrimazole)、鄰氯青霉素（cloxacillin)、 多西環(huán)素（doxycycline)、益康唑（econazole)、、紅霉素（erythromycin)、滅滴靈 (flagyl)、氟康唑（fluconazole)、氟胞啼陡（flucytosine)、可耐（foscamet)、咲喃 唑酮（furazolidone)、更昔洛韋（ganciclovir)、慶大霉素（gentamycin)、亞胺培 南（imipenem)、異煙肼、伊曲康唑（itraconazole)、卡那霉素（kanamycin)、酮康唑 (ketoconazole)、林可霉素（Iincomycin)、利奈唑胺（Iinezolid)、美羅培南（meropenem)、 咪康唑（miconazole)、米諾環(huán)素（minocycline)、萘替芬（naftifine)、萘陡酸（nalidixic acid)、新霉素（neomycin)、奈替米星（netilmicin)、咲喃妥因（nitrofurantoin)、 制霉菌素（nystatin)、奧塞米韋（oseltamivir)、苯唑西林（oxacillin)、巴龍霉素 (paromomycin)、盤尼西林（penicillin)、噴他脒（pentamidine)、氧哌嗪青霉素-三唑巴 坦（piperaci 11 in-tazobactam)、利福布?。╮ifabutin)、利福平（rifampin)、金剛乙焼 (rimantadine)、鏈霉素（streptomycin)、橫胺甲卩惡唑（sulfamethoxazole)、柳氮橫胺批 P定（sulfasalazine)、四環(huán)素、噻康唑（tioconazole)、妥布霉素（tobramycin)、托西拉酯 (tolciclate)、托萘酯（tolnaftate)、甲氧節(jié)陡磺胺甲卩惡唑、伐昔洛韋（valacyclovir)、萬 古霉素（vancomycin)、扎那米韋（zanamir)以及阿奇霉素。
[0025] 在各種實(shí)施方案中，復(fù)合物可包含一種或多種毒素，如細(xì)菌毒素、植物毒素、蓖 麻毒素、相思豆毒素、核糖核酸酶（RNA酶）、DNA酶I、葡萄球菌腸毒素-A、美洲商陸抗 病毒蛋白、白樹毒素、白喉毒素、假單胞菌外毒素、假單胞菌內(nèi)毒素、抗腫瘤核糖核酸酶 (onconase)、豹蛙酶（Rap)、Rap(N69Q)或PE38。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，復(fù)合物可包含附著 至毒素的兩個(gè)AD部分和四個(gè)拷貝的IgG抗體，如附著至DDD部分的豹蛙酶。此類復(fù)合物已 證實(shí)為高度有效的，具有改進(jìn)的毒性和藥物代謝動(dòng)力學(xué)性質(zhì)（參見，例如美國(guó)專利申請(qǐng)序 號(hào)12/871，345,所述專利的實(shí)施例部分以引用的方式并入本文）。
[0026] 本發(fā)明復(fù)合物還可包含選自由以下組成的組的免疫調(diào)節(jié)劑：細(xì)胞因子、趨化因子、 干細(xì)胞生長(zhǎng)因子、淋巴毒素、造血因子、集落刺激因子（CSF)、干擾素、紅細(xì)胞生成素、血小板 生成素、腫瘤壞死因子-a (TNF)、TNF-β、粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF)、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞 集落刺激因子（GM-CSF)、干擾素-α、干擾素-β、干擾素-Y、干擾素-λ、命名為"S1因子" 的干細(xì)胞生長(zhǎng)因子、人生長(zhǎng)激素、N-甲硫氨?；松L(zhǎng)激素、牛生長(zhǎng)激素、甲狀旁腺激素、 甲狀腺素、胰島素、胰島素原、松弛素、松弛素原、促卵泡激素（FSH)、促甲狀腺激素（TSH)、 促黃體激素（LH)、肝生長(zhǎng)因子、前列腺素、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、催乳素、胎盤催乳素、OB蛋 白、苗勒抑制物質(zhì)、小鼠促性腺素相關(guān)的肽、抑制素、激活素、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、整聯(lián)蛋白、 NGF-β、血小板生長(zhǎng)因子、TGF-α、TGF-β、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1、胰島素樣生長(zhǎng)因子-II、 巨噬細(xì)胞-CSF (M-CSF)、IL-1、IL-Ia、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、 IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-21、IL-25、LIF、FLT-3、 血管抑素、血小板反應(yīng)蛋白、內(nèi)皮抑素以及淋巴毒素。在某些優(yōu)選的實(shí)施方案中，復(fù)合物可 包含附著至免疫調(diào)節(jié)劑如細(xì)胞因子的兩個(gè)AD部分和四個(gè)拷貝的抗體或抗體片段，其各自 附著至DDD部分。細(xì)胞因子復(fù)合物例如公開于美國(guó)專利號(hào)7, 906, 118和8, 034, 3522中，所 述專利各自的實(shí)施例部分均以引用的方式并入本文。
[0027] 可并入本發(fā)明復(fù)合物中使用的趨化因子包括但不限于RANTES、MCAF、MIPl-a、 MIPl-β 和 IT-10。
[0028] 可并入本發(fā)明復(fù)合物中使用的抗血管生成劑包括但不限于血管抑素、桿狀斯達(dá) ?。╞aculostatin)、血管能抑素、乳腺絲氨酸蛋白酶抑制劑（maspin)、抗VEGF抗體或肽、 抗胎盤生長(zhǎng)因子抗體或肽、抗Flk-I抗體、抗Flt-I抗體或肽、層粘連蛋白肽、纖連蛋白 肽、纖溶酶原激活劑抑制劑、組織金屬蛋白酶抑制劑、干擾素、干擾素12、IP-10、Gro-β、 血小板反應(yīng)蛋白、2-甲氧基雌二醇、增殖蛋白相關(guān)的蛋白質(zhì)、羧胺三唑、CM101、馬立馬司 他（Marimastat)、戊聚糖多硫酸鹽、血管生成素2、干擾素-α、除莠霉素 A、PNU145156E、 16Κ催乳素片段、利諾胺（Linomide)、沙利度胺（thalidomide)、己酮可可堿、染料木黃酮、 TNP-470、內(nèi)皮抑素、紫杉醇、蛇毒解離素（accutin)、血管抑素、西多福韋、長(zhǎng)春新堿、博來霉 素、AGM-1470、血小板因子4或米諾環(huán)素。
[0029] 在又其它實(shí)施方案中，一種或多種治療劑如阿普利啶（aplidin)、阿扎利平 (azaribine)、阿那曲唑（anastrozole)、氮胞苷、博來霉素、硼替佐米（bortezomib)、苔 癬抑素 _1 (bryostatin-Ι)、白消安（busulfan)、刺孢霉素（calicheamycin)、喜樹堿、 IO-輕基喜樹堿、卡莫司?。╟armustine)、西樂德（celebrex)、苯丁酸氮芥、順鉬、伊立 替康（CPT-Il)、SN-38、卡鉬、克拉屈濱（cladribine)、環(huán)磷酰胺、阿糖胞苷、達(dá)卡巴嗪 (dacarbazine)、多西他賽（docetaxel)、更生霉素（dactinomycin)、葡糖苷酸更生霉素、 柔紅霉素（daunorubicin)、地塞米松（dexamethasone)、己烯雌酚、阿霉素、2-批咯啉基 阿霉素（2P-D0X)、氰基嗎啉代阿霉素、葡糖苷酸阿霉素、葡糖苷酸表柔比星、乙炔雌二醇、 雌莫司汀（estramustine)、依托泊苷（etoposide)、葡糖苷酸依托泊苷、磷酸依托泊苷、 氟尿苷（FUdR)、3'，5' -0-二油?；?FudR (FUdR-d0)、氟達(dá)拉濱（f Iudarabine)、氟他胺 (flutamide)、氟尿啼陡、氟甲睪酮、吉西他濱（gemcitabine)、己酸孕酮、輕基脲、伊達(dá)比 星（idarubicin)、異環(huán)磷酰胺、L-天冬酰胺酶、甲酰四氫葉酸、洛莫司?。↖omustine)、氮 芥、乙酸地加瑞克（medroprogesterone acetate)、乙酸甲地孕酮、美法侖（melphalan)、 巰基噪呤、6-巰基噪呤、甲氨蝶呤、米托蒽醌（mitoxantrone)、光輝霉素（mithramycin)、 絲裂霉素（mitomycin)、米托坦（mitotane)、丁酸苯酯、潑尼松（prednisone)、丙卡巴肼 (procarbazine)、紫杉醇（paclitaxel)、噴司他?。╬entostatin)、PSI-341、司莫司汀鏈脲 霉素 （semustine streptozocin)、他莫昔芬（tamoxifen)、紫杉燒、紫杉酚、丙酸睪丸酮、沙 利度胺、硫鳥噪呤、塞替派（thiotepa)、替尼泊苷（teniposide)、拓?fù)涮婵担╰opotecan)、尿 啼陡氮芥、萬河（velcade)、長(zhǎng)春花堿（vinblastine)、長(zhǎng)春瑞濱（vinorelbine)、長(zhǎng)春新堿、 反義寡核苷酸、干擾RNA或其組合可綴合至或并入到復(fù)合物中。
[0030] 在涉及預(yù)靶向的實(shí)施方案中，復(fù)合物可包含結(jié)合與患病的細(xì)胞、組織或病原體相 關(guān)的抗原的第一抗體或其片段，同時(shí)包含可結(jié)合可靶向構(gòu)建體上的半抗原的第二抗體或其 片段。在施用復(fù)合物和向疾病相關(guān)的細(xì)胞、組織或病原體定位之后，可添加可靶向構(gòu)建體以 結(jié)合定位的復(fù)合物。任選地，可在施用可靶向構(gòu)建體之前施用清除劑以從循環(huán)中清除未定 位的復(fù)合物。這些方法為本領(lǐng)域中已知的并且描述于美國(guó)專利號(hào)4, 624, 846、W0 92/19273 和Sharkey等，Int. J. Cancer 51:266(1992)中。不例性可革巴向構(gòu)建體可具有X-Phe-Lys ( HSG) -D-Tyr-Lys (HSG) -Lys (Y) -NH2的結(jié)構(gòu)，其中化合物包括X或Y上的硬酸陽離子螯合劑 和剩余X或Y上的軟酸陽離子螯合劑；并且其中化合物進(jìn)一步包含至少一種診斷性或治療 性陽離子和/或一種或多種螯合的或化學(xué)結(jié)合的治療劑、診斷劑或酶。
[0031] 各種實(shí)施方案可涉及用來誘導(dǎo)患病細(xì)胞凋亡的復(fù)合物。進(jìn)一步的細(xì)節(jié)可見于美 國(guó)專利申請(qǐng)公布號(hào)20050079184中，所述專利的全文以引用的方式并入本文。此類結(jié)構(gòu)可 包含對(duì)選自由以下組成的組的抗原具有結(jié)合親和性的第一和/或第二前體：⑶2、⑶3、⑶8、 CD10、CD21、CD23、CD24、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD40、CD48、CD52、CD55、CD59、CD70、 CD74、CD80、CD86、CD138、CD147、HLA-DR、CEA、CSAp、CA-125、TAG-72、EFGR、HER2、HER3、HER4、 IGF-1R、c-Met、PDGFR、MUCl、MUC2、MUC3、MUC4、TNFRl、TNFR2、NGFR、Fas (CD95)、DR3、DR4、 DR5、DR6、VEGF、PIGF、ED-B纖連蛋白、腱生蛋白、PSMA、PSA、碳酸酐酶IX以及IL-6。在更 具體的實(shí)施方案中，用來誘導(dǎo)凋亡的復(fù)合物可包含單克隆抗體、Fab片段、嵌合抗體或片段、 人源化抗體或片段或人抗體或片段。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，復(fù)合物可包含以下的組合：抗 CD74X 抗-CD20、抗 CD74X 抗 CD22、抗 CD22X 抗 CD20、抗 CD20X 抗 HLA-DR、抗 CD 19X 抗 CD20、抗 ⑶20X抗⑶80、抗⑶2X抗⑶25、抗⑶8X抗⑶25以及抗⑶2X抗⑶147。在更優(yōu)選的實(shí)施方 案中，嵌合抗體或抗體片段、人源化抗體或抗體片段或人抗體或抗體片段可來源于LL2 (抗 CD22)、LLl (抗CD74)或A20 (抗CD20)的可變結(jié)構(gòu)域。
[0032] 各種實(shí)施方案可涉及用來治療炎癥性和免疫調(diào)節(jié)異常性疾病、感染性疾病、病理 性血管發(fā)生或癌癥的復(fù)合物和方法。在本申請(qǐng)中，復(fù)合物結(jié)合選自由以下組成的組的兩個(gè) 不同靶標(biāo) ：(A)先天免疫系統(tǒng)的促炎效應(yīng)子、（B)凝血因子、（C)補(bǔ)體因子和補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白 以及（D)與炎癥性或免疫調(diào)節(jié)異常性病癥或與病理性血管發(fā)生或癌癥特異性相關(guān)的靶標(biāo)， 其中后一種靶標(biāo)不為（A)、⑶或（C)。至少一個(gè)靶標(biāo)為（A)、⑶或（C)。靶標(biāo)的適合組合 描述于 2004 年 12 月 8 日提交的題目為〃Methods and Compositions for Immunotherapy and Detection of Inflammatory and Immune-Dysregulatory Disease,Infectious Disease，Pathologic Angiogenesis and Cancer"的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?60/634, 076 中，所述 專利的內(nèi)容整體并入本文。
[0033] 結(jié)合分子可結(jié)合的先天免疫系統(tǒng)的促炎效應(yīng)子可為促炎效應(yīng)子細(xì)胞因子、促炎效 應(yīng)子趨化因子或促炎效應(yīng)子受體。適合的促炎效應(yīng)子細(xì)胞因子包括MIF、HMGB-1 (高流動(dòng)組 盒子蛋白質(zhì) l)、TNF-a、IL-l、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15 以及 IL-18。促炎效應(yīng)子 趨化因子的實(shí)例包括 CCL19、CCL21、IL-8、MCP-I、RANTES、MIP-1A、MIP-1B、ENA-78、MCP-I、 IP-10、GR0B以及嗜酸性細(xì)胞活化趨化因子（Eotaxin)。促炎效應(yīng)子受體包括IL-4R(白細(xì)胞 介素-4受體）、IL-6R(白細(xì)胞介素-6受體）、IL-13R(白細(xì)胞介素-13受體）、IL-15R(白 細(xì)胞介素-15受體）以及IL-18R(白細(xì)胞介素-18受體）。
[0034] 復(fù)合物還可與至少一種凝血因子，具體為組織因子（TF)或凝血酶反應(yīng)。在其它實(shí) 施方案中，復(fù)合物與至少一種補(bǔ)體因子或補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白反應(yīng)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，補(bǔ)體因 子選自由以下組成的組：C3、C5、C3a、C3b和C5a。當(dāng)結(jié)合分子與補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白特異性反應(yīng) 時(shí)，補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白優(yōu)選地選自由⑶46、⑶55、⑶59和mCRP組成的組。
[0035] 在某些實(shí)施方案中，本領(lǐng)域中已知的任何治療蛋白或肽可附著至AD或DDD序列 并且用作要求保護(hù)的方法和組合物中的效應(yīng)子。許多此類治療蛋白或肽為已知的并且例 如描述于2005年11月2日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)公布號(hào)20060084794, "Albumin fusion proteins"中，所述專利以引用的方式整體并入本文。列出各種已知的有用的示例性治療 蛋白或肽（包括示例性標(biāo)識(shí)符、專利參考號(hào)和優(yōu)選指示）的20060084794的表1具體以引 用的方式整體并入本文。有用的另外治療蛋白或肽例如描述于美國(guó)專利號(hào)6, 309, 633中， 所述專利以引用的方式整體并入本文，并且可包括但不限于促腎上腺皮質(zhì)激素、依比拉肽 (ebiratide)、血管緊張素、血管緊張素 II、天冬酰胺酶、心房鈉尿肽、心房利尿鈉肽、桿菌 肽、β -內(nèi)啡肽、凝血因子VII、凝血因子VIII和凝血因子IX、血液胸腺因子、骨形成因子、 骨形成蛋白、緩激肽、蛙皮素（caerulein)、降鈣素基因相關(guān)的多肽、降鈣素、CCK-8、細(xì)胞生 長(zhǎng)因子、EGF、TGF-α、TGF-β、酸性FGF、堿性FGF、趨化因子、膽囊收縮素、膽囊收縮素-8、 膽囊收縮素-促胰酶素、粘菌素、集落刺激因子、GMCSF、MCSF、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子、 細(xì)胞因子、去氨加壓素、二肽、歧化酶、強(qiáng)啡肽、章魚素、內(nèi)啡肽、內(nèi)皮素、內(nèi)皮素拮抗肽、內(nèi)皮 素（endotherin)、腦啡肽、上皮生長(zhǎng)因子、紅細(xì)胞生成素、促卵泡激素、促生長(zhǎng)激素神經(jīng)肽 (gallanin)、胃抑制肽、胃泌素釋放多肽、胃泌素、G-CSF、胰高血糖素、谷胱甘肽過氧化物 酶、谷胱甘肽過氧化物酶、促性腺激素、短桿菌肽、短桿菌肽、生長(zhǎng)因子、生長(zhǎng)激素釋放因子、 生長(zhǎng)激素、h-ANP、激素釋放激素、人絨毛膜促性腺激素、人絨毛膜促性腺激素 β-鏈、人胎 盤催乳素、胰島素、胰島素樣生長(zhǎng)因子、IGF-I、IGF-II、干擾素、白細(xì)胞介素、腸多肽、激肽釋 放酶、京都啡肽、促黃體素釋放素、促黃體激素、促黃體激素釋放激素、溶菌酶氯化物、促黑 素細(xì)胞激素、黑素細(xì)胞刺激激素、蜂毒素、促胃動(dòng)素、胞壁酰肽、胞壁酰二肽、神經(jīng)生長(zhǎng)因子、 神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子、NT-3、NT-4、CNTF、⑶NF、BDNF、神經(jīng)肽Υ、神經(jīng)降壓素、催產(chǎn)素、胰抑制素、胰 多肽、促胰酶素、甲狀旁腺激素、五肽胃泌素、多肽ΥΥ、腦垂體腺苷酸環(huán)化酶激活多肽、血小 板衍生的生長(zhǎng)因子、多粘菌素 Β、催乳激素、蛋白質(zhì)合成刺激多肽、PTH-相關(guān)的蛋白質(zhì)、松弛 素、腎素、分泌素、血清胸腺因子、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)素、生長(zhǎng)激素抑制素、物質(zhì)Ρ、超氧化物、超氧化物 歧化酶、特夫素（taftsin)、四肽胃泌素、血小板生成素、胸腺體液因子、胸腺生成素、胸腺 素、胸腺刺激素、甲狀腺激素釋放激素、甲狀腺刺激激素、促甲狀腺素釋放激素 TRH、胰蛋白 酶、促吞噬肽、腫瘤生長(zhǎng)因子、腫瘤壞死因子、短桿菌酪肽、尿抑胃素、尿激酶、血管活性腸多 肽、抗利尿激素（vasopressin)以及功能等效物。
[0036] 在其它優(yōu)選的實(shí)施方案中，復(fù)合物可包含結(jié)合抗原呈遞細(xì)胞（APC)上的抗原如樹 突細(xì)胞（DC)抗原的抗體或其片段，其附著至異種抗原或誘變處理或化學(xué)修飾的抗原（參 見，例如美國(guó)專利號(hào)7, 901，680、USSN 12/754,740 ;所述專利各自的實(shí)施例部分均以引用 的方式并入本文）。此類復(fù)合物用來誘導(dǎo)對(duì)抗選擇的靶抗原例如腫瘤相關(guān)的抗原的免疫應(yīng) 答?？砂邢虻氖纠訢C抗原包括但不限于CD209(DC-SIGN)、CD34、CD74、CD205、TLR 2(toll 樣受體 2)、TLR 4、TLR 7、TLR 9、BDCA-2、BDCA-3、BDCA-4 以及 HLA-DR。在其它實(shí)施方案 中，DC靶向抗體或其片段可附著至病原體相關(guān)的抗原以誘導(dǎo)對(duì)抗造成感染性疾病的病原體 的免疫應(yīng)答。在美國(guó)專利申請(qǐng)序號(hào)12/915, 515中公開了痘病毒相關(guān)的抗原的一個(gè)示例性 實(shí)施方案，所述專利的實(shí)施例部分以引用的方式并入本文。
[0037] 在替代實(shí)施方案中，DNLtm復(fù)合物可包含用來遞送干擾RNA種類如SiRNA的附著 至寡核苷酸載體部分如魚精蛋白、樹枝狀聚合物或其它聚合物的抗體或抗原結(jié)合抗體片 段。用于此類目的的示例性復(fù)合物公開于2010年12月9日提交的美國(guó)專利申請(qǐng)序號(hào) 12/964,021中，所述專利的實(shí)施例部分以引用的方式并入本文。
[0038] 附圖簡(jiǎn)述
[0039] 以下附圖形成本說明書的部分并且被包括以進(jìn)一步證明本發(fā)明的某些實(shí)施方案。 可通過參考一個(gè)或多個(gè)這些附圖并結(jié)合本文提出的具體實(shí)施方案的詳述更好地理解這些 實(shí)施方案。
[0040] 圖1.DNL?模塊和綴合物。（a)Ck-AD2-IgG(Ck-AD2-IgG-依帕珠單抗或 Ck-AD2-IgG-維妥珠單抗），具有融合至每條κ輕鏈羧基末端的AD2的IgG-AD2模 塊（module)。（b)二聚C H1-DDD2-Fab-維妥珠單抗，具有融合至Fd鏈的羧基末端的 DDD2的Fab-DDD模塊。（c) 22*- (20) - (20)，包含Ck-AD2-IgG-依帕珠單抗和兩個(gè)二聚 CH1-DDD2-Fab-維妥珠單抗模塊的 bsHexAb。（d) 22- (20) - (20)，包含 CH3-AD2-IgG-依帕珠 單抗和兩個(gè)二聚CHl-DDD2-Fab-維妥珠單抗模塊的bsHexAb。（e)具有經(jīng)過柔性肽接頭融 合至IFNa 2b的羧基末端的DDD2的二聚IFNa 2b-DDD2模塊。（f)20*-2b，用與兩個(gè)二聚 IFNa 2b-DDD2模塊融合的Ck-AD2-IgG-維妥珠單抗構(gòu)建的具有四聚IFNa 2b的免疫細(xì)胞 因子。（g)20-2b，用與兩個(gè)二聚IFNa 2b-DDD2模塊融合的CH3-AD2-IgG構(gòu)建的具有四聚 IFNa 2b的IgG-IFNa。IgG重⑶鏈和輕（L)鏈的可變（V)結(jié)構(gòu)域和恒定（C)結(jié)構(gòu)域表 示為橢圓形。DDD2肽和AD2肽分別示為深螺旋和淺螺旋，其中位置指示反應(yīng)性硫氫基（SH) 并且"鎖定"二硫橋鍵指示為接合螺旋的線。
[0041] 圖2. 22*-(20)-(20)和22-(20)-(20)在小鼠和兔體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)。在這 個(gè)和其它圖中，使用星號(hào)（*)指示包含輕鏈綴合的AD部分的DNL tm復(fù)合物，而沒有星號(hào)指 示包含重鏈綴合的AD部分的DNLtm復(fù)合物。在指示的時(shí)間間隔中，使用雙特異性ELISA測(cè) 量血清樣品中的完整分子的濃度。向動(dòng)物皮下施用22*-(20)-(20)(圓形）、22-(20)-(20) (正方形）或依帕珠單抗（三角形）。最后對(duì)小鼠取血，而連續(xù)對(duì)兔取血。（a)對(duì)3只小鼠 (平均值土SD)的組給藥I. Omg的bsHexAb或等摩爾量的依帕珠單抗（0· 41mg)。（b)對(duì)4 只小鼠的組給藥〇. 5mg的bsAb。通過使用具有Prism軟件的一階指數(shù)衰減模型的非線性回 歸分析繪制單獨(dú)的數(shù)據(jù)點(diǎn)。（c，d)向兔施用18mg(6mg/kg)的bsAb。示出各個(gè)動(dòng)物的Pk曲 線（c)和每個(gè)組的平均值SD± (d)。
[0042] 圖3. 20*_2b和20_2b在小鼠體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)和體內(nèi)穩(wěn)定性。通過皮下（a) 或靜脈內(nèi)（b，c，d)注射向3只小鼠的組施用I. Omg的20*-2b (圓形）或20-2b (正方形）。 (c)針對(duì)從各個(gè)動(dòng)物獲得的每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)，使用雙特異性（實(shí)線）或維妥珠單抗特異性（虛 線）的ELISA形式測(cè)量完整IgG-IFNa和總IgG (維妥珠單抗）的血清濃度。（d)對(duì)于每個(gè) 數(shù)據(jù)點(diǎn)，％完整IgG-IFNa通過將用雙特異性ELISA測(cè)量的血清濃度除以用維妥珠單抗特 異性測(cè)定確定的血清濃度并且使商乘以100來計(jì)算。繪制％完整IgG-IFNa與注射后的小 時(shí)數(shù)的圖，并且通過線性回歸分析（土SD)確定解離速率。
[0043] 圖4.效應(yīng)子功能。比較了（a)20*-2b、20_2b以及維妥珠單抗和 (b) 22*- (20) - (20)、22- (20) - (20)、維妥珠單抗以及依帕珠單抗之中的體外CDC。（c)比 較了 22*-(20)-(20)、22-(20)-(20)、維妥珠單抗以及依帕珠單抗之中的體外ADCC。mAb hMN-14用作每個(gè)實(shí)驗(yàn)的非結(jié)合同種型對(duì)照。
[0044] 圖5.播散性Daudi伯基特淋巴瘤異種移植物的體內(nèi)功效。（a)通過IV注射對(duì)8 只SCID小鼠的組接種Daudi。在第7天，通過SC注射向小鼠施用單次劑量的LOyg或 0. 25 μ g的20*-2b或20-2b。向?qū)φ战M施用0. 6 μ g的維妥珠單抗或鹽水。（b)在第0天 通過IV注射對(duì)10只SCID小鼠的組接種。在第1天和第5天，通過SC注射向小鼠施用高 (Img)或低（IOyg)劑量的22*-(20)-(20)或22-(20)-(20)。向?qū)φ战M施用高劑量的依帕 珠單抗、高劑量依帕珠單抗加 CH1-DDD2-維妥珠單抗或鹽水。通過對(duì)數(shù)秩分析Kaplan-Myer 存活曲線圖來確定統(tǒng)計(jì)顯著性。
[0045] 圖6. CD20結(jié)合。用遞增濃度的PE-標(biāo)記的20*-2b或維妥珠單抗孵育Daudi細(xì)胞 并且通過流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)評(píng)價(jià)結(jié)合。MFI，平均熒光強(qiáng)度。
[0046] 圖7.體外細(xì)胞毒性。在定量相對(duì)活細(xì)胞密度之前，用遞增濃度的20*_2b (圓形） 或20-2b (正方形）孵育Daudi細(xì)胞三天。
[0047] 圖8. 22*-(20)-(20)和22-(20)-(20)在小鼠體內(nèi)的體內(nèi)解離。針對(duì)從各個(gè)動(dòng)物 獲得的每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)，使用雙特異性或依帕珠單抗特異性的ELISA測(cè)量完整bsHexAb和總 IgG(依帕珠單抗）的血清濃度。通過將用雙特異性ELISA測(cè)量的血清濃度除以用依帕珠 單抗特異性測(cè)定確定的血清濃度并且使商乘以100來計(jì)算％完整bsHexAb。繪制％完整 IgG-IFNa與注射后的小時(shí)數(shù)的圖，并且通過線性回歸分析確定解離速率。誤差棒，標(biāo)準(zhǔn)偏 差。
[0048] 圖9. 22*-(20)-(20)和22-(20)-(20)在兔體內(nèi)的體內(nèi)解離。針對(duì)每個(gè)數(shù)據(jù)點(diǎn)，使 用雙特異性或依帕珠單抗特異性的ELISA測(cè)量完整bsHexAb和總IgG的血清濃度。通過將 用雙特異性ELISA測(cè)量的血清濃度除以用依帕珠單抗特異性測(cè)定確定的血清濃度并且使 商乘以100來計(jì)算％完整bsHexAb。在兔體內(nèi)沒有觀察到解離。誤差棒，標(biāo)準(zhǔn)偏差。
[0049] 圖10.來自全血的Raji細(xì)胞和正常B細(xì)胞的離體衰竭。在FACS分析之前，在37°C 下用5nM的指示mAb孵育肝素化的全血兩天。
[0050] 圖11. Ck-AD2-IgG-pdHL2表達(dá)載體的示意性圖示。
[0051] 圖12. Ck-AD2-IgG-pGSHL表達(dá)載體的示意性圖示。
[0052] 詳述
[0053] 定義
[0054] 除非另外指出，否則"一個(gè)"或"一種"意指"一個(gè)（種）或多個(gè)（種）"。
[0055] 如本文所使用，術(shù)語"和"與"或"可用來意指連詞或轉(zhuǎn)折連詞。即，這兩個(gè)術(shù)語均 應(yīng)該理解為等效于"和/或"，除非另外說明。
[0056] "治療劑"為對(duì)疾病的治療有用的原子、分子或化合物。治療劑的實(shí)例包括抗體、抗 體片段、肽、藥物、毒素、酶、核酸酶、激素、免疫調(diào)節(jié)劑、反義寡核苷酸、小干擾RNA(SiRNA)、 螯合劑、硼化合物、光活化劑、染料以及放射性同位素。
[0057] "診斷劑"為對(duì)診斷疾病有用的原子、分子或化合物。有用的診斷劑包括但不限于 放射性同位素、染料（如具有生物素-抗生物素蛋白鏈菌素復(fù)合物）、造影劑、熒光化合物或 分子以及用于磁共振成像（MRI)的增強(qiáng)劑（例如，順磁離子）。
[0058] 如本文所使用的"抗體"是指全長(zhǎng)（即，天然存在的或通過正常免疫球蛋白基因片 段重組方法形成的）免疫球蛋白分子（例如，IgG抗體）或免疫球蛋白分子的免疫活性（即， 特異性結(jié)合）部分，像抗體片段。"抗體"包括單克隆抗體、多克隆抗體、雙特異性抗體、多特 異性抗體、鼠抗體、嵌合抗體、人源化抗體以及人抗體。
[0059] "裸抗體"為沒有附著至治療劑或診斷劑的抗體或其抗原結(jié)合片段。完整裸抗體 的Fc部分可提供效應(yīng)子功能，如補(bǔ)體固定和ADCC(參見，例如Markrides, Pharmacol Rev 50:59-87, 1998)。裸抗體誘導(dǎo)細(xì)胞死亡的其它機(jī)制可包括凋亡。（Vaswani和Hamilton, Ann Allergy Asthma Tmmunol 81:105-119, 1998。)
[0060] "抗體片段"為完整抗體的一部分，如 F(ab'）2、F(ab)2、Fab'、Fab、Fv、sFv、scFv、 dAb等。與結(jié)構(gòu)無關(guān)，抗體片段與由全長(zhǎng)抗體識(shí)別的相同抗原結(jié)合。例如，抗體片段包括由 可變區(qū)組成的分離片段，如由重鏈和輕鏈的可變區(qū)組成的"Fv"片段或其中輕可變區(qū)和重可 變區(qū)由肽接頭（"scFv蛋白"）連接的重組單鏈多肽分子。常?？s寫為"scFv"的"單鏈抗 體"由包含V h和 '結(jié)構(gòu)域的多肽鏈組成，所述Vh和 '結(jié)構(gòu)域相互作用以形成抗原結(jié)合位 點(diǎn)。Vh結(jié)構(gòu)域和 '結(jié)構(gòu)域通常由1至25個(gè)氨基酸殘基的肽連接?？贵w片段還包括雙抗體、 三抗體和單結(jié)構(gòu)域抗體（dAb)。
[0061] "嵌合抗體"為重組蛋白，其含有包括來源于一個(gè)物種的抗體（優(yōu)選嚙齒動(dòng)物抗 體）的互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)的可變結(jié)構(gòu)域，而抗體分子的恒定結(jié)構(gòu)域來源于人抗體的那些恒 定結(jié)構(gòu)域。對(duì)于獸醫(yī)學(xué)應(yīng)用，嵌合抗體的恒定結(jié)構(gòu)域可來源于其它物種如貓或狗的恒定結(jié) 構(gòu)域。
[0062] "人源化抗體"為重組蛋白，其中來自一個(gè)物種的抗體（例如，嚙齒動(dòng)物抗體）的 CDR從嚙齒動(dòng)物抗體的可變重鏈和可變輕鏈轉(zhuǎn)移到人重鏈可變結(jié)構(gòu)域和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域 (包括人構(gòu)架區(qū)（FR)序列）中。抗體分子的恒定結(jié)構(gòu)域是來源于人抗體的那些恒定結(jié)構(gòu) 域。
[0063] "人抗體"為從轉(zhuǎn)基因小鼠中獲得的抗體，所述轉(zhuǎn)基因小鼠已被基因工程化以響 應(yīng)于抗原挑戰(zhàn)而產(chǎn)生特異性人抗體。在此技術(shù)中，將人重鏈基因座和輕鏈基因座的元件引 入到來源于胚胎干細(xì)胞系的小鼠品系中，所述胚胎干細(xì)胞系含有內(nèi)源性重鏈基因座和輕鏈 基因座的靶向破壞。轉(zhuǎn)基因小鼠可合成對(duì)人抗原有特異性的人抗體，并且小鼠可用來產(chǎn) 生分泌人抗體的雜交瘤。用于從轉(zhuǎn)基因小鼠中獲得人抗體的方法由Green等人，Nature Genet. 7:13 (1994)、Lonberg 等人，Nature 368:856(1994)以及 Taylor 等人，Int. Immun. 6:579(1994)描述。完全地人抗體還可通過基因轉(zhuǎn)染或染色體轉(zhuǎn)染方法以及噬菌 體展示技術(shù)來構(gòu)建，所有所述方法和技術(shù)均為本領(lǐng)域中已知的。（參見，例如McCafferty 等人，Nature 348:552-553(1990)用于從來自未免疫供體的免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域基因 庫(kù)（gene repertoire)中體外產(chǎn)生人抗體及其片段）。在此技術(shù)中，將抗體可變結(jié)構(gòu)域基 因同框克隆到絲狀噬菌體的主要或次要外殼蛋白基因中，并在噬菌體顆粒的表面上展示 為功能性抗體片段。因?yàn)榻z狀顆粒含有噬菌體基因組的單鏈DNA拷貝，所以基于抗體功 能性質(zhì)的選擇也導(dǎo)致選擇編碼展現(xiàn)那些性質(zhì)的抗體的基因。以此方式，噬菌體模擬B細(xì) 胞的一些性質(zhì)?？梢愿鞣N形式進(jìn)行噬菌體展示，對(duì)于它們的綜述，參見例如Johnson和 Chiswell, Current Opinion in Structural Biology 3:5564-571(1993)。還可由體外激 活的B細(xì)胞來產(chǎn)生人抗體。（參見，美國(guó)專利號(hào)5, 567, 610和5, 229, 275)。
[0064] 如本文中所使用，術(shù)語"抗體融合蛋白"為重組產(chǎn)生的抗原結(jié)合分子，其中抗體或 抗體片段連接至另一種蛋白質(zhì)或肽，如相同的或不同的抗體或抗體片段或DDD肽或AD肽。 融合蛋白可包含單一抗體組分、不同抗體組分的多價(jià)或多特異性的組合或相同抗體組分的 多個(gè)拷貝。融合蛋白可額外包含抗體或抗體片段和治療劑。適用于此類融合蛋白的治療劑 的實(shí)例包括免疫調(diào)節(jié)劑和毒素。一種優(yōu)選的毒素包含核糖核酸酶（RNA酶），優(yōu)選地重組RNA 酶。
[0065] "多特異性抗體"為可同時(shí)結(jié)合至少兩個(gè)具有不同結(jié)構(gòu)的靶標(biāo)（例如，兩個(gè)不同抗 原、在相同抗原上的兩個(gè)不同表位或半抗原和/或抗原或表位）的抗體。"多價(jià)抗體"為可 同時(shí)結(jié)合至少兩個(gè)具有相同或不同結(jié)構(gòu)的靶標(biāo)的抗體。價(jià)態(tài)指示抗體對(duì)單一抗原或表位具 有多少個(gè)結(jié)合臂或位點(diǎn)；即，一價(jià)的、二價(jià)的、三價(jià)的或多價(jià)的?？贵w的多價(jià)性意味著抗體可 使用多種相互作用結(jié)合抗原，從而增加結(jié)合抗原的親合力。特異性指示抗體能夠結(jié)合多少 個(gè)抗原或表位；即，單特異性的、雙特異性的、三特異性的、多特異性的。使用這些定義，天然 抗體（例如，IgG)為二價(jià)的，因?yàn)樗哂袃蓚€(gè)結(jié)合臂，但所述抗體為單特異性的，因?yàn)樗Y(jié) 合一個(gè)表位。多特異性的、多價(jià)的抗體為具有多于一個(gè)具有不同特異性的結(jié)合位點(diǎn)的構(gòu)建 體。
[0066] "雙特異性抗體"為可同時(shí)結(jié)合兩個(gè)具有不同結(jié)構(gòu)的靶標(biāo)的抗體。雙特異性抗體 (bsAb)和雙特異性抗體片段（bsFab)可具有：至少一個(gè)臂，其特異性結(jié)合例如B細(xì)胞抗原 或表位、T細(xì)胞抗原或表位、骨髓樣細(xì)胞抗原或表位、漿細(xì)胞抗原或表位以及肥大細(xì)胞抗原 或表位；和至少一個(gè)其它臂，其特異性結(jié)合帶有治療劑或診斷劑的可靶向的綴合物?？墒褂?分子工程來產(chǎn)生各種雙特異性抗體。
[0067] "異種抗原"為在多于一個(gè)物種中發(fā)現(xiàn)的抗原。當(dāng)在本文中在疫苗中使用以在受試 者體內(nèi)誘導(dǎo)免疫應(yīng)答時(shí)，異種抗原來自不同于受試者的物種。例如，用于人疫苗中的異種抗 原可來自小鼠、大鼠、兔或另一種非人物種。
[0068] 如果施用的量為生理上顯著的，認(rèn)為以"治療有效量"施用了本文描述的抗體或免 疫毒素制劑或組合物。如果其的存在導(dǎo)致受體受試者生理學(xué)的可檢測(cè)變化，藥劑為生理上 顯著的。在具體實(shí)施方案中，如果其的存在引起抗腫瘤應(yīng)答或減輕自身免疫疾病病況的體 征和癥狀，抗體制劑為生理上顯著的。生理上顯著的作用還可為導(dǎo)致靶細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制或 死亡的在受體受試者體內(nèi)喚起體液免疫應(yīng)答和/或細(xì)胞免疫應(yīng)答。
[0069] 抗體
[0070] 用于制備對(duì)抗幾乎任何靶抗原的單克隆抗體的技術(shù)為本領(lǐng)域中熟知的。參見， 例如 Kohler 和 Milstein, Nature 256:495(1975)和 Coligan 等人（編著），CURRENT PROTOCOLS IN IMMUNOLOGY,第 1 卷，第 2· 5· 1-2. 6· 7 頁（John Wiley&Sons 1991)。簡(jiǎn)而 言之，可通過用包含抗原的組合物注射小鼠、去除脾臟以獲得B-淋巴細(xì)胞、使B-淋巴細(xì)胞 與骨髓瘤細(xì)胞融合以產(chǎn)生雜交瘤、克隆雜交瘤、選擇產(chǎn)生針對(duì)抗原的抗體的陽性克隆、培養(yǎng) 產(chǎn)生針對(duì)抗原的抗體的克隆以及從雜交瘤培養(yǎng)物中分離抗體來獲得單克隆抗體。
[0071] Mb可通過各種已確立的技術(shù)從雜交瘤培養(yǎng)物分離和純化。此類分離技術(shù)包括 使用蛋白A瓊脂糖凝膠的親和色譜法、體積排阻色譜法和離子交換色譜法。參見，例如 Coligan 的第 2. 7. 1-2. 7. 12 頁和第 2. 9. 1-2. 9. 3 頁。還參見 Baines 等人，在 METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY，第 10 卷，第 79-104 頁中的 "Purification of Immunoglobulin G(IgG) "，（The Humana Press, Inc. 1992)。
[0072] 在初始生成針對(duì)免疫原的抗體之后，可對(duì)抗體測(cè)序并且隨后通過重組技術(shù)來制 備。鼠抗體和抗體片段的人源化和嵌合為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的。使用來源于人源化抗 體、嵌合抗體或人抗體的抗體組分排除了與鼠恒定區(qū)的免疫原性相關(guān)的潛在問題。
[0073] 嵌合抗體
[0074] 嵌合抗體為重組抗體，其中人抗體的可變區(qū)已置換為例如小鼠抗體的可變區(qū)，包 括小鼠抗體的互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)。嵌合抗體在向受試者施用時(shí)展現(xiàn)出降低的免疫原性和 增加的穩(wěn)定性。用于克隆鼠免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域的一般技術(shù)公開于例如Orlandi等 人，Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:3833(1989)中。用于構(gòu)建嵌合抗體的技術(shù)為本領(lǐng)域技術(shù) 人員所熟知的。作為一個(gè)實(shí)例，Leung等人，Hybridoma 13:469 (1994)通過使編碼鼠 LL2 (抗 CD22單克隆抗體）的Vk結(jié)構(gòu)域和Vh結(jié)構(gòu)域的DNA序列與各自的人κ和IgG1恒定區(qū)結(jié)構(gòu) 域組合來產(chǎn)生LL2嵌合體。
[0075] 人源化抗體
[0076] 用于產(chǎn)生人源化MAb的技術(shù)為本領(lǐng)域中熟知的（參見，例如Jones等人，Nature 321:522(1986)、 Riechmann 等人，Nature 332:323(1988)、 Verhoeyen 等人，Science 239:1534 (1988)、Carter 等人，Proc. Nat' I Acad. Sci. USA 89:4285 (1992)、Sandhu, Crit. Rev. Biotech. 12:437(1992)以及 Singer 等人，J. Immun. 150:2844(1993))。可通過將來 自小鼠免疫球蛋白的可變重鏈和可變輕鏈的小鼠 CDR轉(zhuǎn)移到人抗體的相應(yīng)可變結(jié)構(gòu)域中 來人源化嵌合單克隆抗體或鼠單克隆抗體。嵌合單克隆抗體中的小鼠構(gòu)架區(qū)（FR)也置 換為人FR序列。因?yàn)閷⑿∈螈荝簡(jiǎn)單地轉(zhuǎn)移到人FR中常常導(dǎo)致抗體親和性減小或甚至 失去，所以可能需要另外的修飾以便恢復(fù)鼠抗體的原始親和性。此舉可通過將FR區(qū)中 的一個(gè)或多個(gè)人殘基置換為其鼠對(duì)應(yīng)物以獲得對(duì)其表位擁有良好結(jié)合親和性的抗體來實(shí) 現(xiàn)。參見，例如 Tempest 等人，Biotechnology 9:266(1991)和 Verhoeyen 等人，Science 239:1534 (1988)。通常，不同于其鼠對(duì)應(yīng)物并且位于一個(gè)或多個(gè)⑶R氨基酸殘基附近或接 近一個(gè)或多個(gè)CDR氨基酸殘基的那些人FR氨基酸殘基將為取代的候選物。
[0077] 人抗體
[0078] 用于使用組合方法或用人免疫球蛋白基因座轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物來產(chǎn)生完全地人 抗體的方法為本領(lǐng)域中已知的（例如，Mancini等人，2004, New Microbiol. 27:315-28; Conrad 和 Scheller，2005,Comb. Ch em. High Throughput Screen. 8:117-26 ;Brekke 和 Loset, 2003, Curr. Opin. Phamacol. 3:544-50)。完全地人抗體還可通過基因轉(zhuǎn)染或染色體 轉(zhuǎn)染方法以及噬菌體展示技術(shù)來構(gòu)建，所有所述方法和技術(shù)均為本領(lǐng)域中已知的。參見例 如McCafferty等人，Nature 348:552-553 (1990)。預(yù)期此類完全地人抗體展現(xiàn)出比嵌合抗 體或人源化抗體甚至更少的副作用并且在體內(nèi)起基本上內(nèi)源性人抗體的作用。在某些實(shí)施 方案中，要求保護(hù)的方法和工序可利用通過此類技術(shù)產(chǎn)生的人抗體。
[0079] 在一個(gè)替代方案中，可使用噬菌體展示技術(shù)來產(chǎn)生人抗體（例如,Dantas-Barbosa 等人，2005, Genet. Mol. Res. 4:126-40)。人抗體可從正常人或從表現(xiàn)出具體疾病病況（如 癌癥）的人中產(chǎn)生（Dantas-Barbosa等人，2005)。從患病個(gè)體構(gòu)建人抗體的優(yōu)點(diǎn)在于循環(huán) 抗體庫(kù)可偏向針對(duì)疾病相關(guān)抗原的抗體。
[0080] 在此方法的一個(gè)非限制性實(shí)例中，Dantas-Barbosa等人（2005)從骨肉瘤患者 中構(gòu)建了人Fab抗體片段的噬菌體展示文庫(kù)。一般來說，從循環(huán)血液淋巴細(xì)胞中獲得總 RNA(同上）。從μ、γ和κ鏈抗體庫(kù)克隆重組Fab并且插入到噬菌體展示文庫(kù)中（同 上）。將RNA轉(zhuǎn)變成cDNA并且用來使用針對(duì)重鏈和輕鏈免疫球蛋白序列的特異性引物制 得 Fab cDNA 文庫(kù)（Marks 等人，1991，J Mol.Biol.222:581-97)。根據(jù) Andris-Widhopf 等人（2000，在 Phage Display Laboratory Manual, Barbas 等人（編著），第一版，Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY 第 9. 1 至 9. 22 頁中所述）進(jìn) 行文庫(kù)構(gòu)建。最終Fab片段用限制性核酸內(nèi)切酶消化并且插入到噬菌體基因組中以制得 噬菌體展示文庫(kù)。此類文庫(kù)可通過本領(lǐng)域中所已知的標(biāo)準(zhǔn)噬菌體展示方法篩選（參見,例 如 Pasqualini 和 Ruoslahti, 1996，Nature 380:364-366 ;Pasqualini，1999, The Quart. J.Nucl. Med. 43:159-162)。
[0081] 可以各種形式進(jìn)行噬菌體展示，對(duì)于它們的綜述，參見例如Johnson和 Chiswell, Current Opinion in Structural Biology 3:5564-571(1993)。還可由體外激 活的B細(xì)胞來產(chǎn)生人抗體。參見美國(guó)專利號(hào)5, 567, 610和5, 229, 275,其以引用的方式整體 并入本文。熟練的技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，這些技術(shù)為示例性的并且可利用用于制備和篩選人 抗體或抗體片段的任何已知方法。
[0082] 在另一個(gè)替代方案中，可使用已被基因工程化以產(chǎn)生人抗體的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物來使用 標(biāo)準(zhǔn)免疫方案產(chǎn)生針對(duì)基本上任何免疫原性靶標(biāo)的抗體。用于從轉(zhuǎn)基因小鼠中獲得人抗體 的方法由 Green 等人，Nature Genet. 7:13 (1994)、Lonberg 等人，Nature 368:856 (1994) 以及Taylor等人，Int. Immun. 6:579(1994)公開。所述系統(tǒng)的一個(gè)非限制性實(shí)例為來自 Abgenix (Fremont, CA)的 XenoMouse? (例如 Green 等人，1999, J. Immunol. Methods 231:11-23)。在XenoMouse?和類似動(dòng)物中，已使小鼠抗體基因失活并且置換為功能性 人抗體基因，而小鼠免疫系統(tǒng)的其余部分保持完整。
[0083] 將XenoMouse?用含有人IgH和IgK基因座的部分，包括大部分可變區(qū)序 列連同輔助基因和調(diào)控序列的種系構(gòu)型YAC(酵母人工染色體）轉(zhuǎn)化。人可變區(qū)庫(kù)可用 來產(chǎn)生生產(chǎn)抗體的B細(xì)胞，所述B細(xì)胞可通過已知技術(shù)加工成雜交瘤。用靶抗原免疫的 XenoMouse?將通過正常免疫應(yīng)答產(chǎn)生人抗體,其可通過以上所討論的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)收獲 和/或生產(chǎn)?？色@得XenoMouseii的各種品系，其各自均能夠產(chǎn)生不同類別的抗體。已 示出轉(zhuǎn)基因產(chǎn)生的人抗體具有治療潛能，同時(shí)保留正常人抗體的藥物代謝動(dòng)力學(xué)性質(zhì) (Green等人，1999)。熟練的技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，要求保護(hù)的組合物和方法不限于使用 XenoMouse?系統(tǒng),但可利用已被基因工程化以產(chǎn)生人抗體的任何轉(zhuǎn)基因動(dòng)物。
[0084] 抗體克隆和產(chǎn)生
[0085] 各種技術(shù)，如嵌合抗體或人源化抗體的生產(chǎn)，可涉及抗體克隆和構(gòu)建的工 序。感興趣的抗體的抗原結(jié)合Vk (可變輕鏈）和％(可變重鏈）序列可通過各種分 子克隆工序獲得，如RT_PCR、5' -RACE和cDNA文庫(kù)篩選。來自表達(dá)鼠抗體的細(xì)胞的 抗體的V基因可通過PCR擴(kuò)增來克隆并且測(cè)序。為證實(shí)其可靠性，可使克隆的'基 因和V h基因在細(xì)胞培養(yǎng)物中表達(dá)為嵌合Ab，如Orlandi等人所述（Proc. Natl. Acad. Sci.，USA，86:3833 (1989))?；赩基因序列，然后可設(shè)計(jì)并且構(gòu)建人源化抗體，如由Leung 等人（Mol. Immunol. ,32:1413(1995))所描述。
[0086] cDNA可通過一般分子克隆技術(shù)從任何已知的產(chǎn)生鼠抗體的雜交瘤系或轉(zhuǎn) 染細(xì)胞系制備（Sambrook 等人，Molecular Cloning, A laboratory manual，第 2 版（1989))?？墒褂靡?VK1BACK 和 VK1F0R(Orlandi 等人，1989)或由 Leung 等人 (BioTechniques，15:286(1993))描述的延伸引物組來擴(kuò)增抗體的Vk序列?？墒褂靡飳?duì) VHlBACK/VHlF0R(0rlandi 等人，1989)或由 Leung等人（Hybridoma, 13:469(1994))描述的 使鼠 IgG的恒定區(qū)退火的引物來擴(kuò)增Vh序列?？赏ㄟ^長(zhǎng)的寡核苷酸模板合成和PCR擴(kuò)增 的組合來構(gòu)建人源化的V基因，如由Leung等人（Mol. Immunol.，32:1413(1995))所描述。
[0087] 可將V κ的PCR產(chǎn)物亞克隆到階段載體（staging vector)中，如基于pBR327的 階段載體（VKpBR)，所述階段載體含有Ig啟動(dòng)子、信號(hào)肽序列以及合宜的限制位點(diǎn)。 PCR產(chǎn)物可亞克隆到類似階段載體中，如基于pBluescript的VHpBS。含有Vk和Vh序列連 同啟動(dòng)子和信號(hào)肽序列的表達(dá)盒可從VKpBR和VHpBS切除并且分別連接到適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)載 體中，如pKh和pGlg (Leung等人，Hybridoma, 13:469 (1994))?？蓪⒈磉_(dá)載體共轉(zhuǎn)染到適 當(dāng)?shù)募?xì)胞并且監(jiān)測(cè)上清液中嵌合抗體、人源化抗體或人抗體的產(chǎn)生。或者，可切除Vk和V h 表達(dá)盒并且亞克隆到單一表達(dá)載體中，如pdHL2,如由Gillies等人（J. Immunol. Methods 125:191(1989)并且還在 Losman 等人，Cancer, 80:2660 (1997)中示出）所描述。
[0088] 在一個(gè)替代實(shí)施方案中，可將表達(dá)載體轉(zhuǎn)染到已預(yù)先適應(yīng)在無血清培養(yǎng)基中轉(zhuǎn) 染、生長(zhǎng)和表達(dá)的宿主細(xì)胞中?？墒褂玫氖纠约?xì)胞系包括Sp/EEE、Sp/ESF和Sp/ESF-X細(xì) 胞系（參見，例如美國(guó)專利號(hào)7, 531，327 ;7, 537, 930和7, 608, 425 ;所述專利各自的實(shí)施例 部分均以引用的方式并入本文）。這些示例性細(xì)胞系基于用突變型Bcl-EEE基因轉(zhuǎn)染、暴 露于甲氨蝶呤以擴(kuò)增轉(zhuǎn)染的基因序列并且預(yù)先適應(yīng)無血清細(xì)胞系用于蛋白質(zhì)表達(dá)的Sp2/0 骨髓瘤細(xì)胞系。
[0089] 抗體片段
[0090] 可通過已知技術(shù)產(chǎn)生識(shí)別特定表位的抗體片段?？贵w片段為抗體的抗原結(jié)合部 分，如F(ab'）2、Fab'、F(ab)2、Fab、Fv、sFv等。F(ab'） 2片段可通過胃蛋白酶消化抗體分子 而產(chǎn)生，并且Fab'片段可通過還原？(&13'）2片段的二硫鍵橋而產(chǎn)生。或者，可構(gòu)建Fab'表 達(dá)文庫(kù)（Huse等人，1989, Science, 246:1274-1281)以允許快速和容易鑒別具有希望的特 異性的單克隆Fab'片段。F(ab)2片段可通過木瓜蛋白酶消化抗體而產(chǎn)生。
[0091] 單鏈Fv分子（scFv)包含VL結(jié)構(gòu)域和VH結(jié)構(gòu)域。VL結(jié)構(gòu)域和VH結(jié)構(gòu)域締 合形成祀結(jié)合位點(diǎn)。這兩個(gè)結(jié)構(gòu)域由肽接頭（L)進(jìn)一步共價(jià)連接。用于制得scFv分 子和設(shè)計(jì)適合的肽接頭的方法描述于美國(guó)專利號(hào)4, 704, 692、美國(guó)專利號(hào)4, 946, 778、 R.Raag 和 M. Whitlow, "Single Chain Fvs. "FASEB 第 9 卷：73-80(1995)以及 R.E.Bird 和 B.W. Walker, "Single Chain Antibody Variable Regions,''TIBTECH，第9 卷：132-137(1991)中。
[0092] 用于產(chǎn)生單結(jié)構(gòu)域抗體（DAB)的技術(shù)也為本領(lǐng)域中已知的，如例如在Cossins等 人（2006, Prot Express Purif 51:253-259)中所公開，所述參考文獻(xiàn)以引用的方式并入本 文。
[0093] 用于產(chǎn)生單結(jié)構(gòu)域抗體的技術(shù)也為本領(lǐng)域中已知的，如例如在Cossins等人 (2006，Prot Express Purif 51:253-259)中所公開，所述參考文獻(xiàn)以引用的方式并入 本文。單結(jié)構(gòu)域抗體（VHH)可通過標(biāo)準(zhǔn)免疫技術(shù)從例如駱駝、羊駝或美洲駝獲得。（參 見，例如 Muyldermans 等人，TIBS 26:230-235,2001 ;Yau 等人，J Tmmunol Methods 281:161-75,2003 ;Maass 等人，J Immunol Methods 324:13-25,2007)。VHH 可具有有效 的抗原結(jié)合能力，并可與常規(guī)VH-VL對(duì)所不可及的新型表位相互作用。（Muyldermans等 人，2001)。羊駝血清IgG含有約50%僅有重鏈的駱駝IgG抗體（HCAb) (Maass等人，2007)。 羊駝可用已知抗原（如TNF-α)免疫并且可分離結(jié)合和中和靶抗原的VHH(Maass等 人，2007)。已鑒定出擴(kuò)增幾乎所有羊駝VHH編碼序列的PCR引物，并且可將其用來構(gòu)建羊 駝VHH噬菌體展示文庫(kù)，可使用所述文庫(kù)通過本領(lǐng)域中熟知的標(biāo)準(zhǔn)生物淘選技術(shù)分離抗體 片段（Maass等人，2007)。在某些實(shí)施方案中，可在要求保護(hù)的組合物和方法中利用抗胰腺 癌VHH抗體片段。
[0094] 可通過蛋白水解全長(zhǎng)抗體或通過在大腸桿菌（E. coli)或另一種具有編碼用 于片段的DNA的宿主中表達(dá)來制備抗體片段。可通過常規(guī)方法由胃蛋白酶或木瓜蛋白 酶消化全長(zhǎng)抗體來獲得抗體片段。這些方法例如由Goldenberg美國(guó)專利號(hào)4, 036, 945 和4, 331，647所描述并且參考文件包含在其中。還參見Nisonoff等人，4代118丨〇(*6111· Biophys. 89:230 (1960) ;Porter, Biochem. J. 73:119 (1959)，Edelman 等人，在 METHODS IN ENZYM0L0GY第 1 卷，第 422 頁（Academic Press 1967)以及 Coligan 第 2. 8. 1-2. 8. 10 頁和 第2. 10.-2. 10. 4頁中所述。
[0095] 抗體同種異型
[0096] 治療性抗體的免疫原性與輸注反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)增加和治療性應(yīng)答的持續(xù)時(shí)間減少相 關(guān)（Baert等人，2003, N Engl J Med 348:602-08)。治療性抗體在宿主中誘導(dǎo)免疫應(yīng)答 的程度可部分地通過抗體的同種異型來確定（Stickler等人，2011，Genes and Immunity 12:213-21)?？贵w同種異型與抗體的恒定區(qū)序列中特定位置上的氨基酸序列變化相關(guān)。 含有重鏈Y -型恒定區(qū)的IgG抗體的同種異型命名為Gm同種異型（1976, J Immunol 117:1056-59)。
[0097] 對(duì)于常見的IgGl人抗體而言，最普遍的同種異型為Glml (Stickler等 人，2011，Genes and Immunity 12:213-21)。然而，Glm3同種異型也頻繁出現(xiàn)于白種人中 (Stickler等人，2011)。已報(bào)道了當(dāng)向非Glml (nGlml)接受者（如Glm3患者）施用時(shí)， Glml抗體含有傾向于誘導(dǎo)免疫應(yīng)答的同種異型序列（Stickler等人，2011)。當(dāng)向Glml患 者施用時(shí)，非Glml同種異型抗體不作為免疫原性的（Stickler等人，2011)。
[0098] 人Glml同種異型包含重鏈IgGl的CH3序列中的Kabat位置356上的氨基酸天冬 氨酸和Kabat位置358上的亮氨酸。nGlml同種異型包含Kabat位置356上的氨基酸谷氨 酸和Kabat位置358上的甲硫氨酸。Glml和nGlml同種異型均包含Kabat位置357上的谷 氨酸殘基，并且同種異型有時(shí)稱為DEL同種異型和EEM同種異型。針對(duì)示例性抗體利妥昔 單抗（SEQ ID N0:85)和維妥珠單抗（SEQ ID N0:86)示出Glml和nGlml同種異型抗體的 重鏈恒定區(qū)序列的非限制性實(shí)例。
[0099] 利妥昔單抗重鏈可變區(qū)序列（SEQ ID NO:85)
[0100] ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVV TVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKAEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDffLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
[0101] 維妥珠單抗重鏈可變區(qū)（SEQ ID NO:86)
[0102] ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVV TVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVV VDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDffLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAK GQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRW QQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
[0103] Jefferis和Lefranc (2009, mAbs 1:1-7)綜述了 IgG同種異型的特征的序列變化 及其對(duì)免疫原性的影響。他們報(bào)道了與Glml7同種異型中的Kabat 214上的賴氨酸殘基 相比，Glm3同種異型的特征在于Kabat位置214上的精氨酸殘基。nGlml, 2同種異型的特 征在于Kabat位置356上的谷氨酸、Kabat位置358上的甲硫氨酸以及Kabat位置431上 的丙氨酸。Glml, 2同種異型的特征在于Kabat位置356上的天冬氨酸、Kabat位置358上 的亮氨酸以及Kabat位置431上的甘氨酸。除了重鏈恒定區(qū)序列變體之外，Jefferis和 LefranC(2009)報(bào)道了 κ輕鏈恒定區(qū)中的同種異型變體，其中Kml同種異型的特征在于 Kabat位置153上的纈氨酸和Kabat位置191上的亮氨酸，Kml, 2同種異型的特征在于Kabat 位置153上的丙氨酸和Kabat位置191上的亮氨酸，并且Km3同種異型的特征在于Kabat 位置153上的丙氨酸和Kabat位置191上的纈氨酸。
[0104] 關(guān)于治療性抗體，維妥珠單抗和利妥昔單抗分別為用于治療各種各樣血液惡性腫 瘤和/或自身免疫疾病的對(duì)抗CD20的人源化抗體和嵌合IgGl抗體。表1比較了利妥昔單 抗與維妥珠單抗的同種異型序列。如在表1中所示，利妥昔單抗（Glml7, 1)為DEL同種異型 IgGl，在利妥昔單抗中的賴氨酸與維妥珠單抗中的精氨酸的Kabat位置214 (重鏈CH1)上 具有額外序列變化。已報(bào)道了在受試者中維妥珠單抗比利妥昔單抗的免疫原性?。▍⒁姡?例如 Morchhauser 等人，2009, J Clin Oncol 27:3346-53 ;Goldenberg 等人，2009, Blood 113:1062-70 ;Robak&Robak, 2011，BioDrugs 25:13-25)，這種作用已歸因于人源化抗體與 嵌合抗體之間的差異。然而，EEM同種異型與DEL同種異型之間的同種異型差異也可能解 釋維妥珠單抗的更低免疫原性。
[0105] 表1.利妥昔單抗與維妥珠單抗的同種異型
[0106]
【權(quán)利要求】
1. 一種融合蛋白，其包含： a) 抗體；以及 b) 來自附著至所述抗體的每條輕鏈的C-末端的AKAP蛋白的AD(錨定域）部分。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其中所述抗體附著至所述AD部分的兩個(gè)拷貝。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其中所述抗體結(jié)合選自由以下組成的組的抗原： AFP、a 4 整聯(lián)蛋白、B7、碳酸酐酶 IX、補(bǔ)體因子 Clq、Clr、Cls、C2a、C2b、C3、C3a、C3b、C4、 C4a、C4b、C5a、C5aR、C5b、C5、C6、C7、C8、C9n、CCCL19、CCCL21、CD1、CDla、CD2、CD3、CD3R、 CD4、CD5、CD8、CD11A、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD29、 CD30、CD32b、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD45、CD46、CD52、CD54、CD55、CD59、 CD64、CD66a-e、CD67、CD70、CD74、CD79a、CD80、CD83、CD86、CD95、CD126、CD133、CD138、 CD147、CD154、CEACAM-5、CEACAM-6、CSAp、纖連蛋白的 ED-B、EGFR、EGP-1 (TROP-2)、EGP-2、 ErbB2、因子 H、FHL-1、纖維蛋白、Flt-3、葉酸受體、糖蛋白 Ilb/IIIa、gp41、gpl20、GRO-3、 HLA-DR、HM1. 24、HM1. 24、HMGB-1、缺氧誘導(dǎo)因子（HIF)、Ia、ICAM-l、IFN-a、IFN-P、IFN-y、 IFN-X 、IgE、IGF-1R、IL-1、IL-IRa、IL-2、IL-4R、IL-6、IL-6R、IL-8、IL-13R、IL-15R、IL-15、 IL-17、IL-17R、IL-18、IL-18R、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-25、胰島素樣生 長(zhǎng)因子-l(ILGF-l)、IP-10、Le(y)、脂多糖（LPS)、MAGE、MCP-l、mCRP、MIF、MIP-lA、MIP-lB、 MUC1、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5ac、NCA-90、NCA-95、NF- k B、P1GF、PSMA、RANTES、T101、TAC、 TAG-72、腱生蛋白、湯姆森-弗里德里?？乖?、凝血酶、組織因子、Tn抗原、TNF-a、TRAIL受 體（R1和R2)、腫瘤壞死抗原、VEGF、VEGFR以及致癌基因產(chǎn)物。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其中所述抗體選自由以下組成的組：hRl (抗 IGF-1R)、hPAM4 (抗粘蛋白）、KC4 (抗粘蛋白）、hA20 (抗 CD20)、hA19 (抗 CD19)、hIMMU31 (抗 AFP)、hLLl (抗 CD74)、hLL2 (抗 CD22)、RFB4 (抗 CD22)、hMu-9 (抗 CSAp)、hL243 (抗 HLA-DR)、 hMN-14(抗CEACAM5)、hMN-15(抗CEACAM6)、hRS7(抗TROP-2)、hMN-3(抗CEACAM6)、CC49(抗 TAG-72)、J591 (抗 PSMA)、D2/B (抗 PSMA)、G250 (抗碳酸酐酶 IX)、英利昔單抗（抗 TNF- a )、 賽妥珠單抗（抗TNF-a)、阿達(dá)木單抗（抗TNF-a)、阿侖單抗（抗⑶52)、貝伐單抗（抗 VEGF)、西妥昔單抗（抗EGFR)、吉妥單抗（抗CD33)、替伊莫單抗（抗CD20)、帕尼單抗（抗 EGFR)、利妥昔單抗（抗CD20)、托西莫單抗（抗CD20)、GA101 (抗CD20)、曲妥單抗（抗 ErbB2)、托珠單抗（抗IL-6受體）、巴利昔單抗（抗⑶25)、達(dá)利珠單抗（抗⑶25)、依法利 珠單抗（抗0011&)、莫羅單抗-003(抗003受體）、那他珠單抗（抗〇4整聯(lián)蛋白）以及奧 馬珠單抗（抗IgE)。
5. 如權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其中所述DDD部分的氨基酸序列選自由以下組成的 組：RII a的殘基1-44、RII3的殘基1-44、RI a的殘基12-61以及RI3的殘基13-66。
6. 如權(quán)利要求1所述的融合蛋白，其中所述DDD部分的所述氨基酸序列選自由以下 組成的組：SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、SEQ ID N0:10、SEQ ID N0:11、SEQ ID N0:12、SEQ ID N0:13、SEQ ID N0:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID N0:21、SEQ ID N0:22、SEQ ID N0:23、SEQ ID N0:24、SEQ ID N0:25、SEQ ID N0:26、SEQ ID N0:27、SEQ ID N0:28、SEQ ID N0:29、SEQ ID N0:30、SEQ ID N0:31、SEQ ID N0:87 以及SEQ ID N0:89。
7. -種多聚體復(fù)合物，其包含： a) 第一融合蛋白，其包含（i)第一抗體和（ii)來自附著至所述抗體的每條輕鏈的所述 C末端的AKAP蛋白的AD (錨定域）部分；以及 b) 第二融合蛋白，其包含（iii)效應(yīng)子部分和（iv)來自蛋白激酶A(PKA)調(diào)節(jié)亞基 RI a、RI @、RII a或RII 0的DDD (二聚化和?？坑颍┎糠?； 其中所述DDD部分的兩個(gè)拷貝形成結(jié)合所述AD部分的一個(gè)拷貝以便形成所述復(fù)合物 的二聚體。
8. 如權(quán)利要求7所述的復(fù)合物，其中所述效應(yīng)子部分選自由以下組成的組：第二抗體 或其抗原結(jié)合片段、細(xì)胞因子、干擾素、毒素、抗原、異種抗原、半抗原、魚精蛋白、激素、酶、 配體結(jié)合蛋白、促凋亡劑以及抗血管生成劑。
9. 如權(quán)利要求7所述的復(fù)合物，其中所述效應(yīng)子部分為第二抗體或其抗原結(jié)合片段、 細(xì)胞因子、干擾素或毒素。
10. 如權(quán)利要求7所述的復(fù)合物，其中所述第一抗體附著至兩個(gè)AD部分并且每個(gè)AD部 分均結(jié)合DDD部分的二聚體。
11. 如權(quán)利要求7所述的復(fù)合物，其中所述第一抗體結(jié)合選自由以下組成的組的抗原： AFP、a 4 整聯(lián)蛋白、B7、碳酸酐酶 IX、補(bǔ)體因子 Clq、Clr、Cls、C2a、C2b、C3、C3a、C3b、C4、 C4a、C4b、C5a、C5aR、C5b、C5、C6、C7、C8、C9n、CCCL19、CCCL21、CD1、CDla、CD2、CD3、CD3R、 CD4、CD5、CD8、CD11A、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD29、 CD30、CD32b、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD45、CD46、CD52、CD54、CD55、CD59、 CD64、CD66a-e、CD67、CD70、CD74、CD79a、CD80、CD83、CD86、CD95、CD126、CD133、CD138、 CD147、CD154、CEACAM-5、CEACAM-6、CSAp、纖連蛋白的 ED-B、EGFR、EGP-1 (TROP-2)、EGP-2、 ErbB2、因子 H、FHL-1、纖維蛋白、Flt-3、葉酸受體、糖蛋白 IIb/IIIa、gp41、gpl20、GR0-3、 HLA-DR、HM1. 24、HM1. 24、HMGB-1、缺氧誘導(dǎo)因子（HIF)、Ia、ICAM-l、IFN-a、IFN-P、IFN-y、 IFN-X 、IgE、IGF-1R、IL-1、IL-IRa、IL-2、IL-4R、IL-6、IL-6R、IL-8、IL-13R、IL-15R、IL-15、 IL-17、IL-17R、IL-18、IL-18R、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-25、胰島素樣生 長(zhǎng)因子-l(ILGF-l)、IP-10、Le(y)、脂多糖（LPS)、MAGE、MCP-l、mCRP、MIF、MIP-lA、MIP-lB、 MUC1、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5ac、NCA-90、NCA-95、NF- k B、P1GF、PSMA、RANTES、T101、TAC、 TAG-72、腱生蛋白、湯姆森-弗里德里?？乖?、凝血酶、組織因子、Tn抗原、TNF- a、TRAIL受 體（R1和R2)、腫瘤壞死抗原、VEGF、VEGFR以及致癌基因產(chǎn)物。
12. 如權(quán)利要求7所述的復(fù)合物，其中所述第一抗體選自由以下組成的組：hRl (抗 IGF-1R)、hPAM4 (抗粘蛋白）、KC4 (抗粘蛋白）、hA20 (抗 CD20)、hA19 (抗 CD19)、hIMMU31 (抗 AFP)、hLLl (抗 CD74)、hLL2 (抗 CD22)、RFB4 (抗 CD22)、hMu-9 (抗 CSAp)、hL243 (抗 HLA-DR)、 hMN-14 (抗 CEACAM5)、hMN-15 (抗 CEACAM6)、hRS7 (抗 TROP-2)、hMN-3 (抗 CEACAM6)、CC49 (抗 TAG-72)、J591 (抗 PSMA)、D2/B (抗 PSMA)、G250 (抗碳酸酐酶 IX)、英利昔單抗（抗 TNF- a )、 賽妥珠單抗（抗TNF-a)、阿達(dá)木單抗（抗TNF-a)、阿侖單抗（抗⑶52)、貝伐單抗（抗 VEGF)、西妥昔單抗（抗EGFR)、吉妥單抗（抗CD33)、替伊莫單抗（抗CD20)、帕尼單抗（抗 EGFR)、利妥昔單抗（抗CD20)、托西莫單抗（抗CD20)、GA101 (抗CD20)、曲妥單抗（抗 ErbB2)、托珠單抗（抗IL-6受體）、巴利昔單抗（抗⑶25)、達(dá)利珠單抗（抗⑶25)、依法利 珠單抗（抗0011&)、莫羅單抗-003(抗003受體）、那他珠單抗（抗〇4整聯(lián)蛋白）以及奧 馬珠單抗（抗IgE)。
13. 如權(quán)利要求8所述的復(fù)合物，其中所述第二抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合選自由以 下組成的組的抗原4--、〇4整聯(lián)蛋白、87、碳酸酐酶以、補(bǔ)體因子(：19、(：11'、(：18、02&、〇213、 C3、C3a、C3b、C4、C4a、C4b、C5a、C5aR、C5b、C5、C6、C7、C8、C9n、CCCL19、CCCL21、CD1、CDla、 CD2、CD3、CD3R、CD4、CD5、CD8、CD11A、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、 CD25、CD29、CD30、CD32b、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD45、CD46、CD52、CD54、 CD55、CD59、CD64、CD66a-e、CD67、CD70、CD74、CD79a、CD80、CD83、CD86、CD95、CD126、CD133、 CD138、CD147、CD154、CEACAM-5、CEACAM-6、CSAp、纖連蛋白的 ED-B、EGFR、EGP-1 (TROP-2)、 EGP-2、ErbB2、因子 H、FHL-1、纖維蛋白、Flt-3、葉酸受體、糖蛋白 Ilb/IIIa、gp41、gpl20、 GRO-P、HLA-DR、HM1. 24、HM1. 24、HMGB-1、HSG、缺氧誘導(dǎo)因子（HIF)、la、ICAM-1、IFN-a、 IFN-P、IFN-y、IFN-X、IgE、IGF-1R、IL-1、IL-IRa、IL-2、IL-4R、IL-6、IL-6R、IL-8、 IL-13R、IL-15R、IL-15、IL-17、IL-17R、IL-18、IL-18R、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、 IL-18、IL-25、胰島素樣生長(zhǎng)因子-l(ILGF-l)、IP-10、Le(y)、脂多糖（LPS)、MAGE、MCP-1、 mCRP、MIF、MIP-lA、MIP-lB、MUCl、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5ac、NCA-90、NCA-95、NF-K B、P1GF、 PSMA、RANTES、T101、TAC、TAG-72、腱生蛋白、湯姆森-弗里德里?？乖?、凝血酶、組織因子、 Tn抗原、TNF- a、TRAIL受體（R1和R2)、腫瘤壞死抗原、VEGF、VEGFR以及致癌基因產(chǎn)物。
14. 如權(quán)利要求8所述的復(fù)合物，其中所述第二抗體選自由以下組成的組：hRl (抗 IGF-1R)、hPAM4 (抗粘蛋白）、KC4 (抗粘蛋白）、hA20 (抗 CD20)、hA19 (抗 CD19)、hIMMU31 (抗 AFP)、hLLl (抗 CD74)、hLL2 (抗 CD22)、RFB4 (抗 CD22)、hMu-9 (抗 CSAp)、hL243 (抗 HLA-DR)、 hMN-14(抗CEACAM5)、hMN-15(抗CEACAM6)、hRS7(抗TROP-2)、hMN-3(抗CEACAM6)、CC49(抗 TAG-72)、J591 (抗 PSMA)、D2/B (抗 PSMA)、G250 (抗碳酸酐酶 IX)、英利昔單抗（抗 TNF- a )、 賽妥珠單抗（抗TNF-a)、阿達(dá)木單抗（抗TNF-a)、阿侖單抗（抗⑶52)、貝伐單抗（抗 VEGF)、西妥昔單抗（抗EGFR)、吉妥單抗（抗CD33)、替伊莫單抗（抗CD20)、帕尼單抗（抗 EGFR)、利妥昔單抗（抗CD20)、托西莫單抗（抗CD20)、GA101 (抗CD20)、曲妥單抗（抗 ErbB2)、托珠單抗（抗IL-6受體）、巴利昔單抗（抗⑶25)、達(dá)利珠單抗（抗⑶25)、依法利 珠單抗（抗0011&)、莫羅單抗-003(抗003受體）、那他珠單抗（抗〇4整聯(lián)蛋白）以及奧 馬珠單抗（抗IgE)。
15. 如權(quán)利要求8所述的復(fù)合物，其中所述抗體片段選自由以下組成的組：F(ab'）2、 F (ab) 2、Fab'、Fab、Fv、sFv、scFv 以及 dAb。
16. 如權(quán)利要求7所述的復(fù)合物，其中所述DDD部分的所述氨基酸序列選自由以下組成 的組：Rlla的殘基1-44、RII@的殘基l-44、RIa的殘基12-61以及RI3的殘基13-66。
17. 如權(quán)利要求7所述的復(fù)合物，其中所述DDD部分的所述氨基酸序列選自由以下組成 的組：SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、 SEQ ID N0:10、SEQ ID N0:11、SEQ ID N0:12、SEQ ID N0:13、SEQ ID N0:14、SEQ ID N0:15、 SEQ ID NO:16,SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:18,SEQ ID NO:19,SEQ ID NO:20,SEQ ID N0:2U SEQ ID N0:22、SEQ ID N0:23、SEQ ID N0:24、SEQ ID N0:25、SEQ ID N0:26、SEQ ID N0:27、 SEQ ID N0:28、SEQ ID N0:29、SEQ ID N0:30、SEQ ID N0:31、SEQ ID N0:87 以及 SEQ ID N0:89。
18. 如權(quán)利要求7所述的復(fù)合物，其中所述AD部分的所述氨基酸序列選自由以下組 成的組：SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:32、SEQ ID N0:33、SEQ ID N0:34、SEQ ID N0:35、SEQ ID N0:36、SEQ ID N0:37、SEQ ID N0:38、SEQ ID N0:39、SEQ ID N0:40、SEQ ID N0:41、SEQ ID N0:42、SEQ ID N0:43、SEQ ID N0:44、SEQ ID N0:45、SEQ ID N0:46,SEQ ID N0:47,SEQ ID N0:48,M SEQ ID N0:49,SEQ ID N0:50,SEQ ID N0:5USEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:58、M SEQ ID NO:59、SEQ ID N0:60、SEQ ID NO:61、SEQ ID NO:62、SEQ ID NO:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID N0:70、SEQ ID NO:71、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77、SEQ ID NO:78、M SEQ ID NO:79、SEQ ID N0:80、SEQ ID NO:81、 SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:44 以及 SEQ ID NO:88。
19. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的復(fù)合物，其中所述毒素選自由以下組成的組：細(xì)菌毒素、植 物毒素、蓖麻毒素、相思豆毒素、a毒素、皂草素、核糖核酸酶（RNA酶）、DNA酶I、葡萄球菌 腸毒素-A、美洲商陸抗病毒蛋白、白樹毒素、白喉毒素、假單胞菌外毒素、假單胞菌內(nèi)毒素、 豹蛙酶（Rap)以及Rap (N69Q)。
20. 根據(jù)權(quán)利要求19所述的復(fù)合物，其中所述毒素為豹蛙酶（Rap)。
21. 如權(quán)利要求8所述的復(fù)合物，其中所述細(xì)胞因子選自由以下組成的組：人生長(zhǎng)激 素、N-甲硫氨?；松L(zhǎng)激素、牛生長(zhǎng)激素、甲狀旁腺激素、甲狀腺素、胰島素、胰島素原、 松弛素、松弛素原、促卵泡激素（FSH)、促甲狀腺激素（TSH)、促黃體激素（LH)、肝生長(zhǎng)因子、 前列腺素、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、催乳素、胎盤催乳素、0B蛋白、腫瘤壞死因子-a、腫瘤壞 死因子、苗勒抑制物質(zhì)、小鼠促性腺素相關(guān)的肽、抑制素、活化素、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、整 聯(lián)蛋白、血小板生成素（TP0)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF)、NGF-0、血小板生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因 子（TGF)、TGF-a、TGF-0、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1、胰島素樣生長(zhǎng)因子-II、促紅細(xì)胞生成素 (EP0)、骨誘導(dǎo)因子、干擾素、干擾素-a、干擾素-0、干擾素-Y、干擾素_ A、集落刺激因子 (CSF)、巨噬細(xì)胞-CSF(M-CSF)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞-CSF(GM-CSF)、粒細(xì)胞-CSF(G-CSF)、白細(xì) 胞介素-1 (IL-1)、IL-1 a、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、 IL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18、IL-21、LIF、kit-配體、FLT-3、血管抑素、 血小板反應(yīng)蛋白、內(nèi)皮抑素、腫瘤壞死因子以及LT (淋巴毒素）。
22. 如權(quán)利要求8所述的復(fù)合物，其中所述異種抗原選自由以下組成的組：碳酸酐酶 IX、a -胎蛋白、a .-輔肌動(dòng)蛋白-4、A3、對(duì)A33抗體具有特異性的抗原、ART_4、B7、Ba 733、 BAGE、BrE3 抗原、CA125、CAMEL、CAP-1、CASP-8/m、CCCL19、CCCL21、CD1、CDla、CD2、CD3、 CD4、CD5、CD8、CD11A、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD29、 CD30、CD32b、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD45、CD46、CD52、CD54、CD55、CD59、CD64、 CD66a-e、CD67、CD70、CD74、CD79a、CD80、CD83、CD95、CD126、CD133、CD138、CD147、CD154、 CDC27、CDK-4/m、CDKN2A、結(jié)腸特異性抗原-p(CSAp)、CEA(CEACAM5)、CEACAM6、DAM、EGFR、 已6卩1^111、￡6?-1、￡6?-2、￡1^2-]\1、￡?-〇六1^1卜1、卩1卜3、葉酸受體、6250 抗原、6六6￡4?100、 GROB、HLA-DR、HM1. 24、人絨毛膜促性腺激素（HCG)和其亞基、HER2/neu、HMGB-1、缺氧誘 導(dǎo)因子（HIF-1)、HSP70-2M、HST-2、la、IGF-1R、IFN-. y、IFN-. a、IFN-. P、IL-2、IL-4R、 IL-6R、IL-13R、IL-15R、IL-17R、IL-18R、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-25、 胰島素樣生長(zhǎng)因子-1 (IGF-1)、KC4抗原、KS-1抗原、KS1-4、Le-Y、LDR/FUT、巨噬細(xì)胞遷移 抑制因子（MIF)、MAGE、MAGE-3、MART-I、MART-2、NY-ESO-1、TRAG-3、mCRP、MCP-1、MIP-1A、 MIP-1B、MIF、MUC1、MUC2、MUC3、MUC4、MUM-1/2、MUM-3、NCA66、NCA95、NCA90、對(duì) PAM-4 抗體 具有特異性的抗原、胎盤生長(zhǎng)因子、p53、前列腺酸性磷酸酶、PSA、PRAME、PSMA、P1GF、ILGF、 ILGF-1R、IL-6、IL-25、RS5、RANTES、T101、SAGE、5100、存活素、存活素-2B、TAC、TAG-72、腱 生蛋白、TRAIL受體、TNF-. a、Tn抗原、湯姆森-弗里德里希抗原、腫瘤壞死抗原、VEGFR、 ED-B纖連蛋白、WT-1、17-1A抗原、補(bǔ)體因子C3、C3a、C3b、C5a、C5、血管生成標(biāo)記物、bcl-2、 bcl-6、Kras、cMET、致癌基因標(biāo)記物以及致癌基因產(chǎn)物。
23. -種治療疾病的方法，其包括向受試者施用多聚體復(fù)合物，所述多聚體復(fù)合物包 含： a) 第一融合蛋白，其包含（i)第一抗體和（ii)來自附著至所述抗體的每條輕鏈的所述 C末端的AKAP蛋白的AD (錨定域）部分；以及 b) 第二融合蛋白，其包含（iii)效應(yīng)子部分和（iv)來自蛋白激酶A(PKA)調(diào)節(jié)亞基 RI a、RI @、RII a或RII 0的DDD (二聚化和?？坑颍┎糠?； 其中所述DDD部分的兩個(gè)拷貝形成結(jié)合所述AD部分的一個(gè)拷貝以便形成所述復(fù)合物 的二聚體。
24. 如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述疾病為癌癥、自身免疫疾病、免疫系統(tǒng)功能障 礙、感染性疾病、代謝性疾病、心血管疾病以及神經(jīng)疾病。
25. 如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述癌癥選自由以下組成的組：非霍奇金氏淋巴 瘤、B細(xì)胞淋巴瘤、B細(xì)胞白血病、T細(xì)胞淋巴瘤、T細(xì)胞白血病、急性淋巴樣白血病、慢性淋巴 樣白血病、伯基特淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、毛細(xì)胞白血病、急性髓細(xì)胞樣白血病、慢性髓細(xì) 胞樣白血病、多發(fā)性骨髓瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、瓦爾登斯特倫巨球蛋白血癥、癌瘤、黑素瘤、肉瘤、 神經(jīng)膠質(zhì)瘤、皮膚癌、口腔癌、胃腸道癌、結(jié)腸癌、胃癌、肺道癌、肺癌、乳癌、卵巢癌、前列腺 癌、子宮癌、子宮內(nèi)膜癌、子宮頸癌、膀胱癌、胰腺癌、骨癌、肝癌、膽囊癌、腎癌以及睪丸癌。
26. 如權(quán)利要求24所述的方法，其中所述自身免疫疾病選自由以下組成的組：急性特 發(fā)性血小板減少性紫癜、慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜、皮肌炎、西登哈姆氏舞蹈病、重癥 肌無力、全身性紅斑狼瘡、狼瘡腎炎、風(fēng)濕熱、多腺體綜合癥、大皰性類天皰瘡、糖尿病、亨諾 赫-舍恩萊茵紫癜、鏈球菌感染后腎炎、結(jié)節(jié)性紅斑、高安氏動(dòng)脈炎、艾迪生氏病、類風(fēng)濕性 關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化癥、肉樣瘤病、潰瘍性結(jié)腸炎、多形性紅斑、IgA腎病、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、 強(qiáng)直性脊柱炎、古德帕斯丘綜合癥、血管閉塞性脈管炎、斯耶格倫氏綜合癥、原發(fā)性膽汁性 肝硬化、橋本氏甲狀腺炎、甲狀腺毒癥、硬皮病、慢性活動(dòng)性肝炎、多肌炎/皮肌炎、多軟骨 炎、尋常天皰瘡、韋格納氏肉芽腫病、膜性腎病、肌萎縮性側(cè)索硬化、脊髓癆、巨細(xì)胞性動(dòng)脈 炎/多肌痛、惡性貧血、急進(jìn)性腎小球腎炎、牛皮癬以及纖維化肺泡炎。
27. 如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述效應(yīng)子部分選自由以下組成的組：第二抗體 或其抗原結(jié)合片段、細(xì)胞因子、干擾素、毒素、抗原、異種抗原、半抗原、魚精蛋白、激素、酶、 配體結(jié)合蛋白、促凋亡劑以及抗血管生成劑。
28. 如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述效應(yīng)子部分為第二抗體或其抗原結(jié)合片段、 細(xì)胞因子、干擾素或毒素。
29. 如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述第一抗體附著至兩個(gè)AD部分并且每個(gè)AD部 分均結(jié)合DDD部分的二聚體。
30. 如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述第一抗體結(jié)合選自由以下組成的組的抗原： AFP、a 4 整聯(lián)蛋白、B7、碳酸酐酶 IX、補(bǔ)體因子 Clq、Clr、Cls、C2a、C2b、C3、C3a、C3b、C4、 C4a、C4b、C5a、C5aR、C5b、C5、C6、C7、C8、C9n、CCCL19、CCCL21、CD1、CDla、CD2、CD3、CD3R、 CD4、CD5、CD8、CD11A、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD29、 CD30、CD32b、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD45、CD46、CD52、CD54、CD55、CD59、 CD64、CD66a-e、CD67、CD70、CD74、CD79a、CD80、CD83、CD86、CD95、CD126、CD133、CD138、 CD147、CD154、CEACAM-5、CEACAM-6、CSAp、纖連蛋白的 ED-B、EGFR、EGP-1 (TROP-2)、EGP-2、 ErbB2、因子 H、FHL-1、纖維蛋白、Flt-3、葉酸受體、糖蛋白 IIb/IIIa、gp41、gpl20、GR0-3、 HLA-DR、HM1. 24、HM1. 24、HMGB-1、缺氧誘導(dǎo)因子（HIF)、Ia、ICAM-l、IFN-a、IFN-P、IFN-y、 IFN-X 、IgE、IGF-1R、IL-1、IL-IRa、IL-2、IL-4R、IL-6、IL-6R、IL-8、IL-13R、IL-15R、IL-15、 IL-17、IL-17R、IL-18、IL-18R、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-25、胰島素樣生 長(zhǎng)因子-l(ILGF-l)、IP-10、Le(y)、脂多糖（LPS)、MAGE、MCP-l、mCRP、MIF、MIP-lA、MIP-lB、 MUC1、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5ac、NCA-90、NCA-95、NF- k B、P1GF、PSMA、RANTES、T101、TAC、 TAG-72、腱生蛋白、Thomson-Friedenreich抗原、凝血酶、組織因子、Tn抗原、TNF-a、TRAIL 受體（R1和R2)、腫瘤壞死抗原、VEGF、VEGFR以及致癌基因產(chǎn)物。
31. 如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述第一抗體選自由以下組成的組：hRl (抗 IGF-1R)、hPAM4 (抗粘蛋白）、KC4 (抗粘蛋白）、hA20 (抗 CD20)、hA19 (抗 CD19)、hIMMU31 (抗 AFP)、hLLl (抗 CD74)、hLL2 (抗 CD22)、RFB4 (抗 CD22)、hMu-9 (抗 CSAp)、hL243 (抗 HLA-DR)、 hMN-14(抗CEACAM5)、hMN-15(抗CEACAM6)、hRS7(抗TROP-2)、hMN-3(抗CEACAM6)、CC49(抗 TAG-72)、J591 (抗 PSMA)、D2/B (抗 PSMA)、G250 (抗碳酸酐酶 IX)、英利昔單抗（抗 TNF- a )、 賽妥珠單抗（抗TNF-a)、阿達(dá)木單抗（抗TNF-a)、阿侖單抗（抗⑶52)、貝伐單抗（抗 VEGF)、西妥昔單抗（抗EGFR)、吉妥單抗（抗CD33)、替伊莫單抗（抗CD20)、帕尼單抗（抗 EGFR)、利妥昔單抗（抗CD20)、托西莫單抗（抗CD20)、GA101 (抗CD20)、曲妥單抗（抗 ErbB2)、托珠單抗（抗IL-6受體）、巴利昔單抗（抗⑶25)、達(dá)利珠單抗（抗⑶25)、依法利 珠單抗（抗0011&)、莫羅單抗-003(抗003受體）、那他珠單抗（抗〇4整聯(lián)蛋白）以及奧 馬珠單抗（抗IgE)。
32. 如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述第二抗體或其抗原結(jié)合片段結(jié)合選自由以下 組成的組的抗原：AFP、a 4整聯(lián)蛋白、B7、碳酸酐酶IX、補(bǔ)體因子Clq、Clr、Cls、C2a、C2b、 C3、C3a、C3b、C4、C4a、C4b、C5a、C5aR、C5b、C5、C6、C7、C8、C9n、CCCL19、CCCL21、CD1、CDla、 CD2、CD3、CD3R、CD4、CD5、CD8、CD11A、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、 CD25、CD29、CD30、CD32b、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD45、CD46、CD52、CD54、 CD55、CD59、CD64、CD66a-e、CD67、CD70、CD74、CD79a、CD80、CD83、CD86、CD95、CD126、CD133、 CD138、CD147、CD154、CEACAM-5、CEACAM-6、CSAp、纖連蛋白的 ED-B、EGFR、EGP-1 (TROP-2)、 EGP-2、ErbB2、因子 H、FHL-1、纖維蛋白、Flt-3、葉酸受體、糖蛋白 Ilb/IIIa、gp41、gpl20、 GRO-P、HLA-DR、HM1. 24、HM1. 24、HMGB-1、HSG、缺氧誘導(dǎo)因子（HIF)、la、ICAM-1、IFN-a、 IFN-P、IFN-y、IFN-X、IgE、IGF-1R、IL-1、IL-IRa、IL-2、IL-4R、IL-6、IL-6R、IL-8、 IL-13R、IL-15R、IL-15、IL-17、IL-17R、IL-18、IL-18R、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、 IL-18、IL-25、胰島素樣生長(zhǎng)因子-l(ILGF-l)、IP-10、Le(y)、脂多糖（LPS)、MAGE、MCP-1、 mCRP、MIF、MIP-lA、MIP-lB、MUCl、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5ac、NCA-90、NCA-95、NF-K B、P1GF、 PSMA、RANTES、T101、TAC、TAG-72、腱生蛋白、Thomson-Friedenreich 抗原、凝血酶、組織因 子、Tn抗原、TNF-a、TRAIL受體（R1和R2)、腫瘤壞死抗原、VEGF、VEGFR以及致癌基因產(chǎn) 物。
33. 如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述第二抗體選自由以下組成的組：hRl (抗 IGF-1R)、hPAM4 (抗粘蛋白）、KC4 (抗粘蛋白）、hA20 (抗 CD20)、hA19 (抗 CD19)、hIMMU31 (抗 AFP)、hLLl (抗 CD74)、hLL2 (抗 CD22)、RFB4 (抗 CD22)、hMu-9 (抗 CSAp)、hL243 (抗 HLA-DR)、 hMN-14(抗CEACAM5)、hMN-15(抗CEACAM6)、hRS7(抗TROP-2)、hMN-3(抗CEACAM6)、CC49(抗 TAG-72)、J591 (抗 PSMA)、D2/B (抗 PSMA)、G250 (抗碳酸酐酶 IX)、英利昔單抗（抗 TNF- a )、 賽妥珠單抗（抗TNF-a)、阿達(dá)木單抗（抗TNF-a)、阿侖單抗（抗⑶52)、貝伐單抗（抗 VEGF)、西妥昔單抗（抗EGFR)、吉妥單抗（抗CD33)、替伊莫單抗（抗CD20)、帕尼單抗（抗 EGFR)、利妥昔單抗（抗CD20)、托西莫單抗（抗CD20)、GA101 (抗CD20)、曲妥單抗（抗 ErbB2)、托珠單抗（抗IL-6受體）、巴利昔單抗（抗⑶25)、達(dá)利珠單抗（抗⑶25)、依法利 珠單抗（抗0011&)、莫羅單抗-003(抗003受體）、那他珠單抗（抗〇4整聯(lián)蛋白）以及奧 馬珠單抗（抗IgE)。
34. 如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述抗體片段選自由以下組成的組：F(ab'）2、 F (ab) 2、Fab'、Fab、Fv、sFv、scFv 以及 dAb。
35. 如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述DDD部分的所述氨基酸序列選自由以下組成 的組：Rlla的殘基1-44、RII@的殘基l-44、RIa的殘基12-61以及RI3的殘基13-66。
36. 如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述DDD部分的所述氨基酸序列選自由以下組成 的組：SEQ ID N0:1、SEQ ID N0:2、SEQ ID N0:5、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:9、 SEQ ID N0:10、SEQ ID N0:11、SEQ ID N0:12、SEQ ID N0:13、SEQ ID N0:14、SEQ ID N0:15、 SEQ ID NO:16,SEQ ID NO:17,SEQ ID NO:18,SEQ ID NO:19,SEQ ID N0:20,SEQ ID N0:2U SEQ ID NO:22,SEQ ID NO:23,SEQ ID NO:24,SEQ ID NO:25,SEQ ID NO:26,SEQ ID NO:27, SEQ ID N0:28、SEQ ID N0:29、SEQ ID N0:30、SEQ ID N0:31、SEQ ID N0:87 以及 SEQ ID N0:89。
37. 如權(quán)利要求23所述的方法，其中所述AD部分的所述氨基酸序列選自由以下組 成的組：SEQ ID N0:3、SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:32、SEQ ID N0:33、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:39、SEQ ID N0:40、SEQ ID N0:41、SEQ ID N0:42、SEQ ID N0:43、SEQ ID N0:44、SEQ ID N0:45、SEQ ID N0:46,SEQ ID N0:47,SEQ ID N0:48,M SEQ ID N0:49,SEQ ID N0:50,SEQ ID N0:5USEQ ID NO:52、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57、SEQ ID N0:58、M SEQ ID N0:59、SEQ ID N0:60、SEQ ID N0:61、SEQ ID N0:62、SEQ ID N0:63、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:65、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:67、SEQ ID NO:68、SEQ ID NO:69、SEQ ID N0:70、SEQ ID N0:71、SEQ ID N0:72、SEQ ID N0:73、SEQ ID N0:74、SEQ ID N0:75、SEQ ID N0:76、SEQ ID N0:77、SEQ ID N0:78、M SEQ ID N0:79、SEQ ID N0:80、SEQ ID N0:81、 SEQ ID NO:82、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:44 以及 SEQ ID NO:88。
38. 根據(jù)權(quán)利要求27所述的方法，其中所述毒素選自由以下組成的組：細(xì)菌毒素、植物 毒素、蓖麻毒素、相思豆毒素、a毒素、皂草素、核糖核酸酶（RNA酶）、DNA酶I、葡萄球菌腸 毒素-A、美洲商陸抗病毒蛋白、白樹毒素、白喉毒素、假單胞菌外毒素、假單胞菌內(nèi)毒素、豹 蛙酶（Rap)以及 Rap (N69Q)。
39. 根據(jù)權(quán)利要求38所述的方法，其中所述毒素為豹蛙酶（Rap)。
40. 如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述細(xì)胞因子選自由以下組成的組：人生長(zhǎng)激素、 N-甲硫氨?；松L(zhǎng)激素、牛生長(zhǎng)激素、甲狀旁腺激素、甲狀腺素、胰島素、胰島素原、松弛 素、松弛素原、促卵泡激素（FSH)、促甲狀腺激素（TSH)、促黃體激素（LH)、肝生長(zhǎng)因子、前 列腺素、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、催乳素、胎盤催乳素、OB蛋白、腫瘤壞死因子-a、腫瘤壞死 因子-0、苗勒抑制物質(zhì)、小鼠促性腺素相關(guān)的肽、抑制素、活化素、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子、整 聯(lián)蛋白、血小板生成素（TPO)、神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF)、NGF-0、血小板生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因 子（TGF)、TGF-a、TGF-0、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1、胰島素樣生長(zhǎng)因子-II、促紅細(xì)胞生成素 (EPO)、骨誘導(dǎo)因子、干擾素、干擾素-a、干擾素-0、干擾素-Y、干擾素_ A、集落刺激因子 (CSF)、巨噬細(xì)胞-CSF(M-CSF)、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞-CSF(GM-CSF)、粒細(xì)胞-CSF(G-CSF)、白細(xì) 胞介素-1 (IL-1)、IL-1 a、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-11、 11-12、11-13、11-14、11-15、11-16、11-17、11-18、11-21、1正、1^卜配體、卩1^-3、血管抑素、 血小板反應(yīng)蛋白、內(nèi)皮抑素、腫瘤壞死因子以及LT (淋巴毒素）。
41. 如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述異種抗原選自由以下組成的組：碳酸酐酶IX、 a -胎蛋白、.a -輔肌動(dòng)蛋白-4、A3、對(duì)A33抗體具有特異性的抗原、ART-4、B7、Ba 733、 BAGE、BrE3 抗原、CA125、CAMEL、CAP-1、CASP-8/m、CCCL19、CCCL21、CD1、CDla、CD2、CD3、 CD4、CD5、CD8、CD11A、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD29、 CD30、CD32b、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD45、CD46、CD52、CD54、CD55、CD59、CD64、 CD66a-e、CD67、CD70、CD74、CD79a、CD80、CD83、CD95、CD126、CD133、CD138、CD147、CD154、 CDC27、CDK-4/m、CDKN2A、結(jié)腸特異性抗原-p(CSAp)、CEA(CEACAM5)、CEACAM6、DAM、EGFR、 EGFRvIII、EGP-1、EGP-2、ELF2-M、Ep-CAM、FIt-1、FIt-3、葉酸受體、G250 抗原、GAGE、gp 100、 GROB、HLA-DR、HM1. 24、人絨毛膜促性腺激素（HCG)和其亞基、HER2/neu、HMGB-1、缺氧誘 導(dǎo)因子（HIF-1)、HSP70-2M、HST-2、la、IGF-1R、IFN-. y、IFN-. a、IFN-. P、IL-2、IL-4R、 IL-6R、IL-13R、IL-15R、IL-17R、IL-18R、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-25、 胰島素樣生長(zhǎng)因子-1 (IGF-1)、KC4抗原、KS-1抗原、KS1-4、Le-Y、LDR/FUT、巨噬細(xì)胞遷移 抑制因子（MIF)、MAGE、MAGE-3、MART-I、MART-2、NY-ESO-1、TRAG-3、mCRP、MCP-1、MIP-1A、 MIP-1B、MIF、MUC1、MUC2、MUC3、MUC4、MUM-1/2、MUM-3、NCA66、NCA95、NCA90、對(duì) PAM-4 抗體 具有特異性的抗原、胎盤生長(zhǎng)因子、p53、前列腺酸性磷酸酶、PSA、PRAME、PSMA、P1GF、ILGF、 ILGF-1R、IL-6、IL-25、RS5、RANTES、T101、SAGE、5100、存活素、存活素-2B、TAC、TAG-72、腱 生蛋白、TRAIL受體、TNF-. a、Tn抗原、湯姆森-弗里德里?？乖?、腫瘤壞死抗原、VEGFR、 ED-B纖連蛋白、WT-1、17-1A抗原、補(bǔ)體因子C3、C3a、C3b、C5a、C5、血管生成標(biāo)記物、bcl-2、 bcl-6、Kras、cMET、致癌基因標(biāo)記物以及致癌基因產(chǎn)物。
42. 如權(quán)利要求23所述的方法，其進(jìn)一步包括向所述受試者施用選自由以下組成 的組的治療劑：抗體、抗體片段、藥物、毒素、酶、激素、免疫調(diào)節(jié)劑、反義寡核苷酸、小干擾 RNA (siRNA)、硼化合物以及放射性同位素。
【文檔編號(hào)】A61K39/00GK104363919SQ201380028790
【公開日】2015年2月18日 申請(qǐng)日期:2013年5月24日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月1日
【發(fā)明者】E·A·羅西, C·H·張, D·M·戈德堡 申請(qǐng)人:Ibc藥品公司