一種木耳舒筋丸的制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種木耳舒筋丸的制備方法，由木耳200g、當(dāng)歸100g、川芎50g、枸杞子100g、炒蒼術(shù)100g、鹽炒杜仲50g、牛膝50g、白巨勝子100g作為原料藥制成，采用超臨界萃取萃取制備而成，使得含量有很大提高，服用量減少，本發(fā)明還提供了木耳舒筋丸在制備抑制人白血病細(xì)胞K562細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
【專利說(shuō)明】一種木耳舒筋丸的制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥制劑【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種木耳舒筋丸的制備方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]木耳舒筋丸記載于衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-0202-90，木耳200g、當(dāng)歸100g、川芎50g、枸杞子100g、炒蒼術(shù)100g、鹽炒杜仲50g、牛膝50g、白巨勝子100g，以上八味，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻，每100g粉末加煉蜜120g制成大蜜丸，即得，能舒筋活血，祛風(fēng)濕，補(bǔ)肝腎。用于腰膝酸痛無(wú)力，肢體麻木，抽搐。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有木耳舒筋丸在提取制備方面采用超臨界技術(shù)的報(bào)道，而采用打粉的方法，工藝粗糙、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過(guò)大，不方便服用，嚴(yán)重影響了本品在臨床上應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]發(fā)明目的:為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種木耳舒筋丸的制備方法。
[0005]本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種木耳舒筋丸在制備抑制人白血病細(xì)胞K562細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
[0006]技術(shù)方案:本發(fā)明的目的是通過(guò)如下的方案實(shí)現(xiàn)的:
[0007]—種木耳舒筋丸的制備方法，由木耳200g、當(dāng)歸100g、川彎50g、枸杞子100g、炒蒼術(shù)100g、鹽炒杜仲50g、牛膝50g、白巨勝子100g作為原料藥制成，所述的方法由下列步驟組成:取木耳200g、當(dāng)歸100g、川`芎50g、枸杞子100g、炒蒼術(shù)100g、鹽炒杜仲50g、牛膝50g、白巨勝子100g，加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30_50°C，CO2流量l_3ml/g生藥.min，萃取時(shí)間150-180min,得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻，每100g粉末加煉蜜100g，制成大蜜丸，即得，每丸重4.5g。
[0008]上述一種木耳舒筋丸的制備方法，所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
[0009]上述一種木耳舒筋丸的制備方法，所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C, CO2 流量 2ml/g 生藥.min,萃取時(shí)間 160min。
[0010]上述一種木耳舒筋丸在制備抑制人白血病細(xì)胞K562細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，木耳舒筋丸由木耳200g、當(dāng)歸100g、川芎50g、枸杞子100g、炒蒼術(shù)100g、鹽炒杜仲50g、牛膝50g、白巨勝子100g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成:取木耳200g、當(dāng)歸100g、川芎50g、枸杞子100g、炒蒼術(shù)100g、鹽炒杜仲50g、牛膝50g、白巨勝子100g，加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30_50°C，C02流量l_3ml/g生藥.π?η，萃取時(shí)間150_180min，得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻，每100g粉末加煉蜜100g，制成大蜜丸，即得，每丸重4.5g。[0011 ] 上述木耳舒筋丸在制備抑制人白血病細(xì)胞K562細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，木耳舒筋丸制備方法中所述C02超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
[0012]上述木耳舒筋丸在制備抑制人白血病細(xì)胞K562細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，木耳舒筋丸制備方法中所述C02超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C，C02流量2ml/g生藥.min,萃取時(shí)間160min。
[0013]現(xiàn)有技術(shù)中，木耳舒筋丸每丸9g，每次1-2丸，一日1-2次，采用本發(fā)明制備成的木耳舒筋丸每丸4.5g,但每丸含有的藥材量和原來(lái)一樣，因此每次1-2丸,一日1-2次,在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量。
【具體實(shí)施方式】
[0014]以下通過(guò)實(shí)施例形式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
[0015]實(shí)施例1
[0016]取木耳200g、當(dāng)歸100g、川芎50g、枸杞子100g、炒蒼術(shù)100g、鹽炒杜仲50g、牛膝50g、白巨勝子100g加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4%，萃取壓力15MPa，溫度30°C，C02流量lml/g生藥.π?η，萃取時(shí)間150min，得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻，每100g粉末加煉蜜100g，制成大蜜丸，即得，每丸重4.5g。
[0017]白巨勝子為川續(xù)斷科植物拉毛果Dipsacus ful1numL.的干燥成熟果實(shí),下同。
[0018]實(shí)施例2
[0019]取木耳200g、當(dāng)歸100g、川芎50g、枸杞子100g、炒蒼術(shù)100g、鹽炒杜仲50g、牛膝50g、白巨勝子100g加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為6%,萃取壓力30MPa,溫度50°C,C02流量3ml/g生藥.η?η,萃取時(shí)間180min,得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻，每100g粉末加煉蜜100g，制成大蜜丸，即得，每丸重4.5g。
[0020]實(shí)施例3
[0021]取木耳200g、當(dāng)歸100g、川芎50g、枸杞子100g、炒蒼術(shù)100g、鹽炒杜仲50g、牛膝50g、白巨勝子100g加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%，萃取壓力20MPa，溫度40°C，C02流量2ml/g生藥.π?η，萃取時(shí)間160min，得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻，每100g粉末加煉蜜100g，制成大蜜丸，即得，每丸重4.5g。
[0022]實(shí)施例4:木耳舒筋丸抑制K562細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究資料
[0023]I實(shí)驗(yàn)材料
[0024]1.1實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株
[0025]人白血病細(xì)胞K562細(xì)胞，南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫(kù)，DMEM+10%FBS常規(guī)培養(yǎng)。
[0026]1.2實(shí)驗(yàn)藥物
[0027]研究藥物:本發(fā)明木耳舒筋丸:按實(shí)施例3方法制備。
[0028]藥液儲(chǔ)液:稱取IOOmg木耳舒筋丸，溶于5ml無(wú)水乙醇中，0.2 μ m濾器過(guò)濾，500 μ Idoff管分裝，-20°c存儲(chǔ)，同時(shí)0.2 μ m濾器過(guò)濾無(wú)水乙醇以備對(duì)照組之用。
[0029]1.3實(shí)驗(yàn)試劑
[0030]DMEM(GIBC0 公司 Cat.N0.12100-061 Lot.N0.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.N0.100419);NaHC03(上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat.N0.11810-033 Lot.N0.1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批號(hào):2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批號(hào):2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESC0公司批號(hào):2010242);Str印tomycin SulfateCAMRESCO公司批號(hào):2010382);無(wú)水乙醇(南京化學(xué)試劑有限公司批號(hào):080310182);MTT(Biosharp批號(hào):0793) ;PBS (實(shí)驗(yàn)室自配)；
[0031]1.4實(shí)驗(yàn)器材
[0032]萊卡倒置顯微鏡(德國(guó)Leica型號(hào):DM1L);可見(jiàn)-紫外光微孔板檢測(cè)儀(美國(guó)MD公司型號(hào):SPECTRA MAX 190) ;C02培養(yǎng)箱(FORMA型號(hào):3111);超凈臺(tái)(蘇凈集團(tuán)安泰公司制造型號(hào):SW-CJ-ZFD);純水儀(美國(guó)Spring公司型號(hào):S/N020579);精密移液器(法國(guó)吉爾森公司型號(hào):P2);電子天平(德國(guó)賽多利斯有限公司型號(hào):BT323S);全自動(dòng)高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號(hào):MLS-3020);臺(tái)式電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型號(hào):DHG9123A);冰箱(西門子公司型號(hào):KG18V21TI);液氮罐(CBS型號(hào):2001);低速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠型號(hào):ΚΑ-1000) ;0.2μπι濾器(MILLIP0RE型號(hào):SLGP033RB) ;10cm培養(yǎng)皿(NEST公司)、96孔培養(yǎng)板(NEST公司)；細(xì)胞計(jì)數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。
[0033]2實(shí)驗(yàn)方法
[0034]I) K562 細(xì)胞用 DMEM+10%FBS 于 37 °C、5%C02 進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)(IOcm 培養(yǎng)皿)，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期時(shí)，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中，1000rpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3X 104個(gè)/ml。
[0035]2)將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180 μ 1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中(37 °C，5%C02 )常規(guī)培養(yǎng)。
[0036]3)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，一般長(zhǎng)至50%_70%，加入木耳舒筋丸溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。
[0037]4) 24h 后加入 20 μ I MTT 溶液(5mg/ml，即 0.5%MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。
[0038]5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 μ I 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀490nm處測(cè)量各孔的吸光值。
[0039]6)同時(shí)設(shè)置本底(不加細(xì)胞，只加培養(yǎng)液)，對(duì)照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)，每組設(shè)定6個(gè)復(fù)孔。
[0040] 7)結(jié)果以藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率表示:
[0041 ] 細(xì)胞增值抑制率(％)=(對(duì)照孔OD值-給藥孔OD值)/對(duì)照孔OD值X 100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
[0042]3統(tǒng)計(jì)處理
[0043]采用Microsoft Excel 2003軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗(yàn)，數(shù)據(jù)以mean + S.D.表不。
[0044]4實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0045]MTT法實(shí)驗(yàn)后統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，當(dāng)劑量達(dá)到5mg/ml時(shí)，對(duì)K562細(xì)胞增殖抑制有差異(p〈0.05)，劑量在10mg/ml時(shí)該差異具有顯著性(P〈0.01)，當(dāng)劑量達(dá)到15-20mg/ml時(shí)有極顯著性差異(Ρ〈0.001)。
[0046]表1木耳舒筋丸對(duì)Κ562細(xì)胞增殖抑制影響研究—(X土SD)
[0047]
【權(quán)利要求】
1.一種木耳舒筋丸的制備方法，由木耳200g、當(dāng)歸100g、川彎50g、枸杞子100g、炒蒼術(shù)100g、鹽炒杜仲50g、牛膝50g、白巨勝子100g作為原料藥制成，其特征在于所述的方法由下列步驟組成:取木耳200g、當(dāng)歸100g、川芎50g、枸杞子100g、炒蒼術(shù)100g、鹽炒杜仲50g、牛膝50g、白巨勝子100g，加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%,萃取壓力15_30MPa,溫度30_50°C, CO2流量l_3ml/g生藥.min,萃取時(shí)間150-180min，得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻，每100g粉末加煉蜜100gU成大蜜丸，即得，每丸重4.5g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種木耳舒筋丸的制備方法，其特征在于所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種木耳舒筋丸的制備方法，其特征在于所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa,溫度40°C, CO2流量2ml/g生藥.min,萃取時(shí)間160min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種木耳舒筋丸在制備抑制人白血病細(xì)胞K562細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于木耳舒筋丸由木耳200g、當(dāng)歸100g、川芎50g、枸杞子100g、炒蒼術(shù)100g、鹽炒杜仲50g、牛膝50g、白巨勝子100g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成:取木耳200g、當(dāng)歸100g、川芎50g、枸杞子100g、炒蒼術(shù)100g、鹽炒杜仲50g、牛膝50g、白巨勝子100g，加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30_50°C，CO2流量l_3ml/g生藥.min，萃取時(shí)間150-180min,得超臨界萃取物，粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻，每100g粉末加煉蜜100g，制成大蜜丸，即得，每丸重4.5g。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述一種木耳舒筋丸在制備抑制人白血病細(xì)胞K562細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于木耳舒筋丸制備方法中所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。`
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述一種木耳舒筋丸在制備抑制人白血病細(xì)胞K562細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于木耳舒筋丸制備方法中所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C, CO2 流量 2ml/g 生藥.min,萃取時(shí)間 160min。
【文檔編號(hào)】A61P29/00GK103655923SQ201310716648
【公開(kāi)日】2014年3月26日 申請(qǐng)日期:2013年12月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年12月22日
【發(fā)明者】李強(qiáng) 申請(qǐng)人:青島琴誠(chéng)醫(yī)藥技術(shù)有限公司