一種玉露保肺丸的制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種玉露保肺丸的制備方法，由天冬120g、麥冬120g、石斛80g、地黃80g、熟地黃80g、知母40g、黃柏40g作為原料藥，采用超臨界萃取制備而成，使得含量有很大提高，服用量減少，本發(fā)明還提供了玉露保肺丸在制備抑制小鼠淋巴瘤細胞YAC-1細胞增殖藥物中的應(yīng)用。
【專利說明】一種玉露保肺丸的制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及中藥制劑【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種玉露保肺丸的制備方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]玉露保肺丸記載于衛(wèi)生部標(biāo)準(zhǔn)WS3-B-0238-90，處方為天冬120g、麥冬120g、石斛80g、地黃80g、熟地黃80g、知母40g、黃柏40g，以上七味，粉碎成細粉，過篩，混勻，每100g粉末加煉蜜70~90g制成大蜜丸，即得。能滋陰清熱，潤肺止嗽。用于陰虛咳嗽，失音聲啞，口渴咽干，痰中帶血。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)中，尚未有玉露保肺丸在提取制備方面采用超臨界技術(shù)的報道，而采用打粉的方法，工藝粗糙、落后，雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過大，不方便服用，嚴(yán)重影響了本品在臨床上應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]發(fā)明目的:為了解決上述問題，本發(fā)明的目的在于提供一種玉露保肺丸的制備方法。
[0005]本發(fā)明的另一個目的在于提供一種玉露保肺丸在制備抑制小鼠淋巴瘤細胞YAC-1細胞增殖藥物中的應(yīng)用。
[0006]技術(shù)方案:本發(fā)明的目的是通過如下的方案實現(xiàn)的:
[0007]一種玉露保肺丸的制備方法，由天冬120g、麥冬120g、石斛80g、地黃80g、熟地黃80g、知母40g、黃柏40g作為原料藥制成,所述的方法由下列步驟組成:取天冬120g、麥冬120g、石斛80g、地黃80g、熟地黃80g、知母40g、黃柏40g，加入到C02超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30-500C，CO2流量l-3ml/g生藥.π?η，萃取時間150_180min，得超臨界萃取物，粉碎成細粉，過篩，混勻，每100g粉末加煉蜜100g，制成大蜜丸，即得，每丸重4.5g。
[0008]上述一種玉露保肺丸的制備方法，所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
[0009]上述一種玉露保肺丸的制備方法，所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C, CO2 流量 2ml/g 生藥.min,萃取時間 160min。
[0010]上述一種玉露保肺丸在制備抑制小鼠淋巴瘤細胞YAC-1細胞增殖藥物中的應(yīng)用，玉露保肺丸由天冬120g、麥冬120g、石斛80g、地黃80g、熟地黃80g、知母40g、黃柏40g作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成:取天冬120g、麥冬120g、石斛80g、地黃80g、熟地黃80g、知母40g、黃柏40g，加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30_50°C，CO2流量l_3ml/g生藥.π?η，萃取時間150-180min，得超臨界萃取物，粉碎成細粉，過篩，混勻，每100g粉末加煉蜜100g，制成大蜜丸，即得，每丸重4.5g。
[0011]上述玉露保肺丸在制備`抑制小鼠淋巴瘤細胞YAC-1細胞增殖藥物中的應(yīng)用，玉露保肺丸制備方法中所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
[0012]上述玉露保肺丸在制備抑制小鼠淋巴瘤細胞YAC-1細胞增殖藥物中的應(yīng)用，玉露保肺丸制備方法中所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C，CO2流量2ml/g生藥.min,萃取時間160min。
[0013]現(xiàn)有技術(shù)中，玉露保肺丸每丸9g，每次1-2丸，一日1-2次，采用本發(fā)明制備成的玉露保肺丸每丸4.5g，但含有的藥材量和原來一樣多，因此每次1-2丸，一日1-2次，在具有更多活性成分的條件下大大減少了服用量。
【具體實施方式】
[0014]以下通過實施例形式，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進一步的詳細說明，但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
[0015]實施例1
[0016]取天冬120g、麥冬120g、石斛80g、地黃80g、熟地黃80g、知母40g、黃柏40g加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4%，萃取壓力15MPa，溫度30°C，CO2流量lml/g生藥.π?η，萃取時間150min，得超臨界萃取物，粉碎成細粉，過篩，混勻，每100g粉末加煉蜜100g，制成大蜜丸，即得，每丸重4.5g。
[0017]實施例2 [0018]取天冬120g、麥冬120g、石斛80g、地黃80g、熟地黃80g、知母40g、黃柏40g加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為6%，萃取壓力30MPa，溫度50°C，CO2流量3ml/g生藥.π?η，萃取時間180min，得超臨界萃取物，粉碎成細粉，過篩，混勻，每100g粉末加煉蜜100g，制成大蜜丸，即得，每丸重4.5g。
[0019]實施例3
[0020]取天冬120g、麥冬120g、石斛80g、地黃80g、熟地黃80g、知母40g、黃柏40g加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%，萃取壓力20MPa，溫度40°C，C02流量2ml/g生藥.π?η，萃取時間160min，得超臨界萃取物，粉碎成細粉，過篩，混勻，每100g粉末加煉蜜100g，制成大蜜丸，即得，每丸重4.5g。
[0021]實施例4:玉露保肺丸抑制小鼠淋巴瘤細胞YAC-1細胞增殖的實驗研究資料
[0022]I實驗材料
[0023]1.1實驗用細胞株
[0024]小鼠淋巴瘤細胞YAC-1，南京醫(yī)科大學(xué)實驗室細胞庫，DMEM+10%FBS常規(guī)培養(yǎng)。1.2實驗藥物
[0025]研究藥物:本發(fā)明玉露保肺丸:按實施例3方法制備。
[0026]藥液儲液:稱取IOOmg玉露保肺丸，溶于5ml無水乙醇中，0.2 μ m濾器過濾，500 μ Idoff管分裝，-20°c存儲，同時0.2 μ m濾器過濾無水乙醇以備對照組之用。
[0027]1.3實驗試劑
[0028]DMEM (GIBC0 公司 Cat.N0.12100_061Lot.N0.758137);胎牛血清(浙江天杭生物科技有限公司Lot.N0.100419)；NaHC03 (上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat.N0.11810_033Lot.N0.1088387)；Trypsin (AMRESC0 公司批號:2010/04)；EDTA (AMRESC0 公司批號:2009/10);Penicillin G Sodium Salt(AMRESCO 公司批號:2010242);Str 印 tomycin Su I fat e( AMRE SCO公司批號:2010382);無水乙醇(南京化學(xué)試劑有限公司批號:080310182);MTT(Biosharp批號:0793) ; PBS (實驗室自配)；1.4實驗器材
[0029]萊卡倒置顯微鏡(德國Leica型號:DM1L);可見-紫外光微孔板檢測儀(美國MD公司型號:SPECTRA MAX190) ；C02培養(yǎng)箱(FORMA型號:3111);超凈臺(蘇凈集團安泰公司制造型號:SW-CJ-ZFD);純水儀(美國Spring公司型號:S/N020579);精密移液器(法國吉爾森公司型號:P2);電子天平(德國賽多利斯有限公司型號:BT323S);全自動高壓滅菌鍋(日本SANYO公司型號:MLS-3020);臺式電熱鼓風(fēng)干燥箱(上海精密實驗設(shè)備公司型號:DHG9123A);冰箱(西門子公司型號:KG18V21TI);液氮罐(CBS型號:2001);低速離心機(上海安亭科學(xué)儀器廠型號:KA-1000) ;0.2iim濾器(MILLIP0RE型號:SLGP033RB) ;10cm培養(yǎng)皿(NEST公司)、96孔培養(yǎng)板(NEST公司)；細胞計數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。[0030]2實驗方法
[0031]I)小鼠淋巴瘤細胞YAC-1細胞用DMEM+10%FBS于37°C、5%C02進行常規(guī)培養(yǎng)(IOcm培養(yǎng)皿)，當(dāng)細胞生長至對數(shù)期時，收集細胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.049ffiDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細胞后將其轉(zhuǎn)入離心管中，1000rpm離心5min，調(diào)整細胞懸液濃度3X 104個/ml。
[0032]2)將細胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細胞懸液180 U 1，培養(yǎng)板放入細胞培養(yǎng)箱中(37 °C，5%C02 )常規(guī)培養(yǎng)。
[0033]3)根據(jù)細胞生長情況，一般長至50%_70%，加入玉露保肺丸溶液，繼續(xù)培養(yǎng)24h。
[0034]4) 24h 后加入 20 u I MTT 溶液(5mg/ml，即 0.5%MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h。
[0035]5) 4h后扣板法倒去上清，用吸水紙輕輕拍干，每孔加入200 ill 二甲基亞砜，置搖床上低速振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀490nm處測量各孔的吸光值。
[0036]6)同時設(shè)置本底(不加細胞，只加培養(yǎng)液)，對照孔(細胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜)，每組設(shè)定6個復(fù)孔。
[0037]7)結(jié)果以藥物對細胞的抑制率表示:
[0038]細胞增值抑制率(％)=(對照孔OD值-給藥孔OD值)/對照孔OD值X 100%。實驗重復(fù)3次。
[0039]3統(tǒng)計處理
[0040]采用Microsoft Excel2003軟件中的相關(guān)分析和Student t檢驗，數(shù)據(jù)以mean+ S.D.表不。
[0041]4實驗結(jié)果
[0042]MTT法實驗后統(tǒng)計結(jié)果顯示，與對照組比較，當(dāng)劑量達到5mg/ml時，對小鼠淋巴瘤細胞YAC-1細胞增殖抑制有差異(P〈0.05)，劑量在10mg/ml時該差異具有顯著性(P〈0.01)，當(dāng)劑量達到15-20mg/ml時有極顯著性差異(P〈0.001)。
[0043]表1玉露保肺丸對小鼠淋巴瘤細胞YAC-1細胞增殖抑制影響研究(X土SD)
[0044]
【權(quán)利要求】
1.一種玉露保肺丸的制備方法，由天冬120g、麥冬120g、石斛80g、地黃80g、熟地黃80g、知母40g、黃柏40g作為原料藥制成，其特征在于所述的方法由下列步驟組成:取天冬120g、麥冬120g、石斛80g、地黃80g、熟地黃80g、知母40g、黃柏40g,加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30-50°C，C02流量l-3ml/g生藥.π?η，萃取時間150_180min，得超臨界萃取物，粉碎成細粉，過篩，混勻，每100g粉末加煉蜜100g，制成大蜜丸，即得，每丸重4.5g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種玉露保肺丸的制備方法，其特征在于所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種玉露保肺丸的制備方法，其特征在于所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa,溫度40°C, CO2流量2ml/g生藥.min,萃取時間160min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述一種玉露保肺丸在制備抑制小鼠淋巴瘤細胞YAC-1細胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于玉露保肺丸由天冬120g、麥冬120g、石斛80g、地黃80g、熟地黃80g、知母40g、黃柏40g作為原料藥制成，其特征在于所述的方法由下列步驟組成:取天冬120g、麥冬120g、石斛80g、地黃80g、熟地黃80g、知母40g、黃柏40g,加入到CO2超臨界萃取器中，乙醇作為夾帶劑，夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為4-6%，萃取壓力15-30MPa，溫度30-50°C，C02流量l-3ml/g生藥.π?η，萃取時間150_180min，得超臨界萃取物，粉碎成細粉，過篩，混勻，每100g粉末加煉蜜100g，制成大蜜丸，即得，每丸重4.5g。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述一種玉露保肺丸在制備抑制小鼠淋巴瘤細胞YAC-1細胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于玉露保肺丸制備方法中所述CO2超臨界萃取夾帶劑占總萃取溶劑的體積百分比為5%。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述一種玉露保肺丸在制備抑制小鼠淋巴瘤細胞YAC-1細胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于玉露保肺丸制備方法中所述CO2超臨界萃取的萃取壓力20MPa，溫度40°C, CO2流量2ml/g生藥.min`，萃取時間160min。
【文檔編號】A61K36/8984GK103721071SQ201310610969
【公開日】2014年4月16日 申請日期:2013年11月26日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月26日
【發(fā)明者】高忠青 申請人:淄博齊鼎立專利信息咨詢有限公司