細(xì)胞色素c凍干粉針劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種細(xì)胞色素C凍干粉針劑。具體地說，本發(fā)明涉及一種藥物組合物，其中包含：細(xì)胞色素C、凍干賦形劑、抗氧劑以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明的細(xì)胞色素C藥物組合物可用于各種組織缺氧急救的輔助治療，如一氧化碳中毒、催眠藥中毒、氰化物中毒、新生兒窒息、嚴(yán)重休克期缺氧、腦血管意外、腦震蕩后遺癥、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困難和各種心臟疾患引起的心肌缺氧的治療。
【專利說明】細(xì)胞色素C凍干粉針劑
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種藥物制劑，特別是涉及一種細(xì)胞色素C的藥物組合物例如凍干粉針劑。本發(fā)明的細(xì)胞色素C藥物組合物可用于各種組織缺氧急救的輔助治療，如一氧化碳中毒、催眠藥中毒、氰化物中毒、新生兒窒息、嚴(yán)重休克期缺氧、腦血管意外、腦震蕩后遺癥、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困難和各種心臟疾患引起的心肌缺氧的治療。
【背景技術(shù)】
[0002]細(xì)胞色素C (Cytochrome C, Cyt C)或稱細(xì)胞色素復(fù)合體(Cytochrome Complex),是一種與粒線體內(nèi)膜有關(guān)，結(jié)構(gòu)松散而微小的血紅素蛋白。它和其他細(xì)胞色素不同，是一種高度可溶性蛋白，可溶性達(dá)每升100克。細(xì)胞色素C是電子傳遞鏈不可或缺的元件，負(fù)責(zé)攜帶一粒電子，在復(fù)合物III和復(fù)合物IV之間傳遞。此外，它能夠接受氧化和還原反應(yīng)，但不與氧結(jié)合。在人體中，細(xì)胞色素C已經(jīng)由CYCS基因完成編碼。細(xì)胞色素C和細(xì)胞程序性死亡有關(guān)。
[0003]臨床上使用的細(xì)胞色素C是一種細(xì)胞呼吸激動(dòng)劑，它存在于細(xì)胞線粒體中的一種以鐵卟啉為輔基的蛋白質(zhì)。細(xì)胞色素C擔(dān)負(fù)傳遞電子的作用，是細(xì)胞呼吸不可少的物質(zhì)。當(dāng)組織缺氧時(shí)，外源性細(xì)胞色素C即能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，從而發(fā)揮其糾正細(xì)胞呼吸和物質(zhì)代謝作用。本品是存在于細(xì)胞線粒體中的一種以鐵卟啉為輔基的蛋白質(zhì)，目前已能提純分離。藥用制劑是從動(dòng)物心臟或酵母中分離出來的，細(xì)胞色素是呼吸鏈的一環(huán)。各種細(xì)胞色素按一定順序排列組成細(xì)胞呼吸所不可少的。細(xì)胞色素C不能透過細(xì)胞膜，因此對(duì)正常人無作用，當(dāng)組織缺氧時(shí)、細(xì)胞膜通透性增高，外源性制劑即能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，從而發(fā)揮其糾正細(xì)胞呼吸和物質(zhì)代謝作用。
[0004]現(xiàn)有技術(shù)已有諸多關(guān)于細(xì)胞色素C及其藥品的制備方法。例如，中國專利申請?zhí)?4110756.6 (CN1106019A，陳慶功)公開了一種從動(dòng)物心臟中提取細(xì)胞色素C粗品的生產(chǎn)工藝，它由原料處理、一次提取、二次提取、吸附、沸石的清洗、洗脫、鹽析、沉淀、透析等工藝步驟完成，其特征是吸附工藝采用分層沉淀動(dòng)態(tài)吸附的方法，這樣可以縮短吸附時(shí)間，提高吸附效率，避免了因吸附時(shí)間過長而造成母液變質(zhì)。
[0005]中國專利申請?zhí)?00910229517.7 (CN101709086A，東誠)公開了一種細(xì)胞色素C的
提取方法。以哺乳動(dòng)物心肌為原料，采用硫酸鋁溶液提取法制備，提取過程中硫酸鋁的濃度控制在0.1_10%，硫酸鋁溶液的體積控制在1-5倍量心肌體積，提取pH值控制在3-6，反應(yīng)溫度控制在0-30°C，提取時(shí)間控制在l_4h。再經(jīng)吸附洗脫，最終得到細(xì)胞色素C。本發(fā)明具有方法成本低、步驟簡單、提取條件溫和、引入雜質(zhì)少、反應(yīng)物無污染、適合工業(yè)化大生產(chǎn)的特點(diǎn)。
[0006]中國專利申請?zhí)?01110094755.9 (CN102206265A，宏業(yè))公開了以哺乳動(dòng)物心提取細(xì)胞色素C溶液的生產(chǎn)方法。將哺乳動(dòng)物心臟經(jīng)酸水提取，吸附材料吸附，酸水洗脫，鹽析，沉淀及透析法制得細(xì)胞色素c溶液粗品，粗品經(jīng)離子交換純化，最終精制得細(xì)胞色素C溶液。
[0007]中國專利申請?zhí)?01110268301.9 (CN102295699A，西北大學(xué))公開了一種細(xì)胞色素C的純化新工藝，包括以下步驟:(I)從動(dòng)物臟器或者酵母中提取得到細(xì)胞色素C的粗提液；(2)向粗提液中加入無機(jī)鹽進(jìn)行鹽析，靜置離心棄去沉淀的雜蛋白，收集上清液；(3)加緩沖液調(diào)節(jié)上清液中無機(jī)鹽濃度至20%~35%，再用前沿疏水色譜法對(duì)其進(jìn)行純化，即將所得溶液連續(xù)上樣于預(yù)先用20%~35%的無機(jī)鹽溶液平衡過的疏水色譜柱中，收集穿透液；
(4)用20%~35%無機(jī)鹽溶液沖洗色譜柱至吸光度達(dá)到穩(wěn)定，收集色譜流出液，與穿透液合并，即為純化后的細(xì)胞色素C。本發(fā)明操作簡便，分離純化效果好，效率高，成本低。
[0008]中國專利申請?zhí)?00710086421.0(CN101019836A，蔡海德)公開了細(xì)胞色素C納米脂質(zhì)體藥物及其制備方法。其中細(xì)胞色素C納米脂質(zhì)體藥物，包括如下重量份數(shù)的原料:中性磷脂40-80 ;谷留醇10-20 ;膽固醇20-40 ;胞色素C10-30 ;聚乙二醇20-25 ;還原性谷胱甘肽5-10 ;維生素C40-50。據(jù)信該發(fā)明提供的脂質(zhì)體藥物可用于臨床各種缺氧的急救或輔助治療。 [0009]中國專利申請?zhí)?01210578970.0(CN103055305A，豐原)公開了一種注射用含細(xì)胞色素C藥物組合物的凍干制劑，包括如下重量份的組分:細(xì)胞色素C75~300份；L-精氨酸30~60份；依地酸二鈉2~5份；甘露醇150份。該凍干制劑選用依地酸二鈉和L-精氨酸作為輔料，有利于提高細(xì)胞色素C的穩(wěn)定性，藥液配制過程選用甘露醇作為凍干賦形劑，選用磷酸或磷酸鈉溶液作為PH值調(diào)節(jié)劑，可使產(chǎn)品質(zhì)量更穩(wěn)定；在甘露醇溶液中經(jīng)活性炭處理后再加入細(xì)胞色素C，避免了細(xì)胞色素C因活性炭吸附而引起的含量降低的問題；該發(fā)明采用的制備方法，將凍干時(shí)間由23小時(shí)縮短至14~16小時(shí)，降低能耗30%，同時(shí)在不增加硬件投入的情況下，可提高產(chǎn)能30%左右，顯著降低了生產(chǎn)成本。
[0010]由于細(xì)胞色素C是一種含鐵元素的有色蛋白質(zhì)，是生物體中酶氧化系統(tǒng)中一個(gè)非常重要的酶。細(xì)胞色素C是含鐵卟啉鹽基性結(jié)合蛋白質(zhì)，由N、S、Fe、C、H五種元素組成。從豬心肌提取的細(xì)胞色素C的Fe含量為0.43%，分子量為13000，等電點(diǎn)pHIO。
[0011]細(xì)胞色素C的大分子化學(xué)結(jié)構(gòu)決定了其制劑配制存在諸多需要克服的困難。例如制劑的澄明度就是經(jīng)常出現(xiàn)的問題。例如，郁福年(醫(yī)藥工業(yè)，細(xì)胞色素C注射液工藝改革，1980年08期)中探討了細(xì)胞色素C注射液澄明度不夠好，探討其主要原因是細(xì)胞色素C原料中雜蛋白未除盡所致。又例如，姜洪志等(醫(yī)藥工業(yè)，細(xì)胞色素C注射液澄明度的改進(jìn)，1986年10期)從提高原料純度，改進(jìn)過濾方法，控制配劑pH值等方面進(jìn)進(jìn)行研究以期獲得具有更好澄明度的細(xì)胞色素C注射液。
[0012]因此，提供一種具有良好藥學(xué)性能例如物理性質(zhì)和/或化學(xué)性質(zhì)和/或生物學(xué)性質(zhì)的細(xì)胞色素C產(chǎn)品，仍然是本領(lǐng)域技術(shù)人員極其期待的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0013]本發(fā)明的目的在于提供一種具有良好藥學(xué)性能例如物理性質(zhì)和/或化學(xué)性質(zhì)和/或生物學(xué)性質(zhì)的細(xì)胞色素C產(chǎn)品，特別是一種可注射用的細(xì)胞色素C產(chǎn)品。本發(fā)明人已經(jīng)出人意料地發(fā)現(xiàn)，具有本發(fā)明特征的細(xì)胞色素C藥物組合物具有優(yōu)良的藥學(xué)性能。本發(fā)明基于此發(fā)現(xiàn)而得以完成。
[0014]為此，本發(fā)明第一方面提供了一種藥物組合物，其中包含:細(xì)胞色素C、凍干賦形劑、抗氧劑以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑。
[0015]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中所述凍干賦形劑選自甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇、L-半胱氨酸、右旋糖苷、氯化鈉、及其組合。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中所述凍干賦形劑是甘露醇。
[0016]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中包含的物料中以每7.5重量份的細(xì)胞色素C計(jì)，凍干賦形劑的量為7.5~150重量份，例如7.5~100重量份，例如7.5~75重量份。
[0017]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中所述抗氧劑選自亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉及其組合。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中所述抗氧劑是亞硫酸鈉和亞硫酸氫鈉的組合。根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中所述抗氧劑是亞硫酸鈉和亞硫酸氫鈉二者以重量比1:0.5~2比例的組合，例如是以重量比1:0.75~1.5比例的組合，例如是以重量比1:0.8~1.2比例的組合。
[0018]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中包含的物料中以每7.5重量份的細(xì)胞色素C計(jì)，抗氧劑的量(如為組合使用抗氧劑則該量為全部抗氧劑的總和)為I~10重量份,例如I~5重量份,例如2~3重量份。
[0019]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中還任選地包括L-半胱氨酸。
[0020]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中包含的物料中以每7.5重量份的細(xì)胞色素C計(jì)，L-半胱氨酸的量為I~10重量份，例如I~5重量份，例如I~2重量份。
[0021]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中還任選地包括酸堿調(diào)節(jié)劑。
[0022]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中所述的酸堿調(diào)節(jié)劑(在本領(lǐng)域亦可稱為PH調(diào)節(jié)劑)選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、鹽酸、磷酸、硝酸、硫酸、或其組合。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的酸堿調(diào)節(jié)劑是鹽酸溶液或者氫氧化鈉溶液，例如IM鹽酸溶液或者IM氫氧化鈉溶液。
[0023]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其加水溶解和/或稀釋制成每Iml中含細(xì)胞色素C3mg的溶液，該溶液的pH值為6.0~7.5，例如該溶液的pH值為6.5~
7.5，例如該溶液的pH值為7.0~7.5。
[0024]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中包含:細(xì)胞色素C7.5重量份、凍干賦形劑7.5~150重量份、抗氧劑I~10重量份、以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑。
[0025]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中包含:細(xì)胞色素C7.5重量份、凍干賦形劑7.5~100重量份、抗氧劑I~5重量份、以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑。
[0026]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中包含:細(xì)胞色素C7.5重量份、凍干賦形劑7.5~75重量份、抗氧劑2~3重量份、以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑。
[0027]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中還包含L-半胱氨酸。
[0028]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中包含:細(xì)胞色素C7.5重量份、凍干賦形劑7.5~150重量份、L-半胱氨酸I~10重量份、抗氧劑I~10重量份、以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑。[0029]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中包含:細(xì)胞色素C7.5重量份、凍干賦形劑7.5~100重量份、L-半胱氨酸I~5重量份、抗氧劑I~5重量份、以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑。
[0030]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中包含:細(xì)胞色素C7.5重量份、凍干賦形劑7.5~75重量份、L-半胱氨酸I~2重量份、抗氧劑2~3重量份、以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑。
[0031]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其加水溶解并稀釋制成每Iml中含細(xì)胞色素C3mg的溶液，該溶液的pH值為6.0~7.5，例如該溶液的pH值為6.5~7.5，例如該溶液的pH值為7.0~7.5。
[0032]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其是冷凍干燥粉針劑。
[0033]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其在冷凍干燥之前的溶液除包括細(xì)胞色素C、凍干賦形劑、抗氧劑、以及任選的L-半胱氨酸和任選的酸堿調(diào)節(jié)劑外，還包括注射用水。
[0034]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其在冷凍干燥之前的溶液除包括細(xì)胞色素C、凍干賦形劑、抗氧劑、以及任選的L-半胱氨酸和任選的酸堿調(diào)節(jié)劑外還包括注射用水，所述溶液的固形物含量為1.5~20%(w/v)，例如2~15%(w/v)，例如2~12%(w/v)。
[0035]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其用注射用水復(fù)溶到基本上與冷凍干燥前溶液相同的體積，所得溶液中的固形物含量為1.5~20%(w/v)，例如2~15%(w/v)，例如 2 ~12%(w/v)。
[0036]眾所周知，經(jīng)低溫冷凍-真 空干燥而獲得的冷凍干燥粉針劑(通常簡稱為凍干粉針劑或凍干粉針)，其是首先將各物料用溶劑溶解(通常而言是用水溶解)，配制成一溶液，然后使該溶液進(jìn)行低溫冷凍，再進(jìn)行抽真空、升華、干燥而獲得的一種基本無水(通常而言水含量低于8%，特別是通常低于5%，特別是通常低于3%)的粉末狀物或塊狀物。因此，該固體凍干物的酸堿度通常通過配制過程調(diào)節(jié)溶液的PH值來控制；或者可以通過處方調(diào)整以使獲得的固體凍干物在規(guī)定的溶解/稀釋程度下控制該溶解/稀釋液的PH值來控制(此稱為控制固體凍干物的酸堿度)；后一方式通常更為普遍使用，例如藥典中所載的諸多凍干粉針劑均以此方式控制制品的酸堿度，而這種方式控制產(chǎn)品的酸堿度通?？梢圆痪唧w規(guī)定酸堿調(diào)節(jié)劑的處方量，而僅規(guī)定終產(chǎn)品的酸堿度即可。同樣適用于本發(fā)明的是，根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案所述的藥物組合物，其中所述任選的酸堿調(diào)節(jié)劑的量是，使所述凍干粉針劑用注射用水溶解成含活性成分3mg/ml濃度的溶液時(shí)該溶液的pH值在6.0~7.5范圍內(nèi)的量，例如該溶液的pH值在6.5~7.5范圍內(nèi)的量。
[0037]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中還任選地包含選自下列的其它種類的賦形劑:甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇、L-半胱氨酸、右旋糖苷、氯化鈉、及其組合。
[0038]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其為固體型的藥物組合物。
[0039]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其為冷凍干燥的藥物組合物。
[0040]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其為無菌凍干粉針劑。
[0041]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其為無菌凍干粉針劑，其在藥液的配制時(shí)經(jīng)過活性炭吸附處理過程。
[0042] 根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其為無菌凍干粉針劑，其在藥液的配制時(shí)經(jīng)過活性炭吸附處理過程，所述活性炭吸附處理中與活性炭一起還添加有紙漿。
[0043]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其為無菌凍干粉針劑，其在藥液的配制時(shí)經(jīng)過活性炭吸附處理過程，該活性炭吸附處理過程是:向包含活性成分的藥液中加入0.05~0.5%(w/v)活性炭，并加入紙漿，攪拌10~30分鐘。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的紙漿是以干濾紙配制的。在一個(gè)實(shí)施方案中，與活性炭一起加入的紙漿的量，以干濾紙計(jì)，在藥液中的濃度為0.05%~0.2%(w/v)，優(yōu)選0.05%~0.l%(w/v)。
[0044]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其為無菌凍干粉針劑，其是照以下方法配制得到的:
[0045](I)將各固體輔料與細(xì)胞色素C溶解于適量注射用水中；
[0046](2)用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.0~7.2 ;
[0047](3)加熱至50_60°C，加入0.05~0.5%(w/v)活性炭，并加入紙漿，保溫?cái)嚢?0~30分鐘；
[0048](4)將步驟(3)所得藥液先用濾紙過濾,接著依次用0.8 ii m和0.45 ii m的微孔濾膜進(jìn)行過濾，以除去活性炭和紙漿；
[0049](5)補(bǔ)加注射用水至適量，攪拌均勻，測定溶液pH值和任選的測定活性成分含量，必要時(shí)用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)該溶液至PH符合規(guī)定的范圍；
[0050](6)充入氮?dú)?4-6°C冷藏48h,依次用0.45 u m、0.22 u m的微孔濾膜無菌過濾,濾液灌裝入西林瓶中，冷凍干燥除去水分，壓塞，即得。
[0051]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中步驟(5)所述pH符合規(guī)定的范圍是指:當(dāng)將該溶液用注射用水稀釋至3mg/ml的濃度時(shí)，所得稀釋溶液的pH值在
6.0~7.5范圍內(nèi)，例如該稀釋溶液的pH值在6.5~7.5范圍內(nèi)，例如該稀釋溶液的pH值為7.0。盡管步驟(b)所得溶液的活性成分濃度高于終產(chǎn)品測定pH值的規(guī)定濃度，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地將步驟(b)溶液適當(dāng)稀釋(至約3mg/ml的濃度)并測定所得稀釋液的PH值，根據(jù)該pH值確定步驟(b)所得溶液需要調(diào)節(jié)酸堿性的幅度。
[0052]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中步驟(5)中所述補(bǔ)加注射用水至適量是指使得該藥液中固形物含量達(dá)到1.5~20%(w/v)，例如2~15%(w/v)，例如2~12%(w/v)。由此，步驟(1)中所述將各固體輔料與細(xì)胞色素C溶解于適量注射用水中，該適量注射用水是使得其中固形物濃度比步驟(5)中液體固形物濃度高。
[0053]已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在進(jìn)行炭吸附時(shí)，添加適量的紙漿獲得的注射液在貯藏過程中具有更好的物理穩(wěn)定性，特別是不溶性微粒變化(增加)不明顯。
[0054]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其中所述步驟(3)中加入的紙漿的量，以干濾紙計(jì)，在藥液中的濃度為0.05%~0.2%(w/v)，優(yōu)選0.05%~0.l%(w/v)。本領(lǐng)域技術(shù)人員公知在配制注射液時(shí)紙漿的使用方式，例如可照以下方式配制紙漿:取普通大張濾紙撕成碎片，用適量注射用水浸泡適時(shí)，用搗碎機(jī)打碎成粥狀即可。本領(lǐng)域還有其它制備紙漿的方法，例如記載中侯玉嵩的文獻(xiàn)(侯玉嵩，等，中成藥，1997年第19卷第4期第4頁)。紙漿的濃度通常可以根據(jù)使用需要確定，例如通?？梢允?0%~50%的寬泛范圍內(nèi)。在本發(fā)明下文配制注射液的工藝中，如未另外說明，所用紙漿是使用30%的紙漿（相當(dāng) 于30g干濾紙用注射用水適量制成100ml的漿）；步驟（2)中加入的紙漿的量，折算成干濾 紙計(jì)算，干濾紙?jiān)谌芤褐械臐舛葹?. 05%?0. 2%(w/v)，優(yōu)選0. 05%?0. l%(w/v)。
[0055]根據(jù)本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案的藥物組合物，其為冷凍干燥粉針劑，其照中 華人民共和國藥典2010年版二部（在本發(fā)明中可簡稱為“中國藥典2010版二部”或類似 稱呼）附錄IX C不溶性微粒檢查法中的“第一法（光阻法）”檢查，每個(gè)供試品容器中含 ^ 10um的微粒數(shù)小于6000粒，例如小于3000粒，例如小于1500粒，例如小于1000粒，例 如小于500粒，例如小于250粒；和/或，每個(gè)供試品容器中含≤25iim的微粒數(shù)小于600 粒，例如小于300粒，例如小于150粒，例如小于100粒，例如小于50粒，例如小于25粒。
[0056]本發(fā)明已經(jīng)出人意料地發(fā)現(xiàn)，在本發(fā)明組合物中添中適量作為賦形劑的甘露醇和 L-半胱氨酸時(shí)，可以賦予本發(fā)明冷凍干燥粉針組合物良好的制劑性能。
[0057]進(jìn)一步地，本發(fā)明第二方面提供了一種制備細(xì)胞色素C藥物組合物例如本發(fā)明第 一方面任一實(shí)施方案所述的細(xì)胞色素C藥物組合物例如冷凍干燥粉針劑的方法，所述細(xì)胞 色素C藥物組合物中包含：細(xì)胞色素C、凍干賦形劑、抗氧劑以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑；該方法 包括以下步驟：
[0058](1)將各固體輔料與細(xì)胞色素C溶解于適量注射用水中；
[0059](2)用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)溶液的pH值至7. 0?7. 2 ;
[0060](3)加熱至50_60°C，加入0. 05?0. 5%(w/v)活性炭，并加入紙漿，保溫?cái)嚢?0? 30分鐘；
[0061](4)將步驟（3)所得藥液先用濾紙過濾，接著依次用0. 8 y m和0. 45 y m的微孔濾 膜進(jìn)行過濾，以除去活性炭和紙漿；
[0062](5)補(bǔ)加注射用水至適量，攪拌均勻，測定溶液pH值和任選的測定活性成分含量， 必要時(shí)用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)該溶液至pH符合規(guī)定的范圍；
[0063](6)充入氮?dú)?4-6°C冷藏48h,依次用0. 45 u m、0. 22 u m的微孔濾膜無菌過濾,濾 液灌裝入西林瓶中，冷凍干燥除去水分，壓塞，即得。
[0064]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的方法，其中步驟（5)所述pH符合規(guī)定的范圍 是指：當(dāng)將該溶液用注射用水稀釋至3mg/ml的濃度時(shí)，所得稀釋溶液的pH值在6. 0?7. 5 范圍內(nèi)，例如該稀釋溶液的pH值在6. 5?7. 5范圍內(nèi)，例如該稀釋溶液的pH值為7. 0。盡 管步驟（b)所得溶液的活性成分濃度高于終產(chǎn)品測定pH值的規(guī)定濃度，但是本領(lǐng)域技術(shù)人 員可以容易地將步驟（b)溶液適當(dāng)稀釋（至約3mg/ml的濃度）并測定所得稀釋液的pH值， 根據(jù)該pH值確定步驟（b)所得溶液需要調(diào)節(jié)酸堿性的幅度。
[0065]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的方法，其中步驟（5)中所述補(bǔ)加注射用水至 適量是指使得該藥液中固形物含量達(dá)到1. 5?20%(w/v)，例如2?15%(w/v)，例如2? 12%(w/v)0由此，步驟（1)中所述將各固體輔料與細(xì)胞色素C溶解于適量注射用水中，該適 量注射用水是使得其中固形物濃度比步驟（5)中液體固形物濃度高。
[0066]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案所述的方法，其中所述酸堿調(diào)節(jié)劑是選自下列 的酸堿調(diào)節(jié)劑的水溶液：氫氧化鈉、氫氧化鉀、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、磷酸 氫二鉀、鹽酸、磷酸、硝酸、硫酸、或其組合。這些水溶液的濃度是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，例 如1?10%，例如2%?5%。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述的酸堿調(diào)節(jié)劑是鹽酸溶液或者氫氧化鈉溶液，例如IM鹽酸溶液或者IM氫氧化鈉溶液。
[0067] 根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案所述的方法，其中步驟(6)中除去水分后所得冷凍干燥物料中水分含量低于10%，優(yōu)選低于8%，優(yōu)選低于5%，更優(yōu)選低于3%。
[0068]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案所述的方法，其中所述的紙漿是以干濾紙配制的。在一個(gè)實(shí)施方案中，與活性炭一起加入的紙漿的量，以干濾紙計(jì)，在藥液中的濃度為0.05% ~0.2%(w/v)，優(yōu)選 0.05% ~0.l%(w/v)。
[0069]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述藥物組合物中包含:細(xì)胞色素C7.5重量份、凍干賦形劑7.5~150重量份、抗氧劑I~10重量份、以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑。
[0070]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述藥物組合物中包含:細(xì)胞色素C7.5重量份、凍干賦形劑7.5~100重量份、抗氧劑I~5重量份、以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑。
[0071]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述藥物組合物中包含:細(xì)胞色素C7.5重量份、凍干賦形劑7.5~75重量份、抗氧劑2~3重量份、以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑。
[0072]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述藥物組合物中還包含L-半胱氨酸。
[0073]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述藥物組合物中包含:細(xì)胞色素C7.5重量份、凍干賦形劑7.5~150重量份、L-半胱氨酸I~10重量份、抗氧劑I~10重量份、以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑。
[0074]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述藥物組合物中包含:細(xì)胞色素C7.5重量份、凍干賦形劑7.5~100重量份、L-半胱氨酸I~5重量份、抗氧劑I~5重量份、以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑。
[0075]根據(jù)本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案的方法，其中所述藥物組合物中包含:細(xì)胞色素C7.5重量份、凍干賦形劑7.5~75重量份、L-半胱氨酸I~2重量份、抗氧劑2~3重量份、以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑。
[0076]進(jìn)一步地，本發(fā)明第三方面提供了本發(fā)明第一方面任一實(shí)施方案所述細(xì)胞色素C藥物組合物或者本發(fā)明第二方面任一實(shí)施方案所制備的細(xì)胞色素C藥物組合物在制備用于各種組織缺氧急救及其的輔助治療，如一氧化碳中毒、催眠藥中毒、氰化物中毒、新生兒窒息、嚴(yán)重休克期缺氧、腦血管意外、腦震蕩后遺癥、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困難和各種心臟疾患引起的心肌缺氧的治療的藥物中的用途。
[0077]在本發(fā)明上述制備方法的步驟中，雖然其描述的具體步驟在某些細(xì)節(jié)上或者語言描述上與下文【具體實(shí)施方式】部分的制備例中所描述的步驟有所區(qū)別，然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明全文的詳細(xì)公開完全可以概括出以上所述方法步驟。
[0078]本發(fā)明的任一方面的任一實(shí)施方案，可以與其它實(shí)施方案進(jìn)行組合，只要它們不會(huì)出現(xiàn)矛盾。此外，在本發(fā)明任一方面的任一實(shí)施方案中，任一技術(shù)特征可以適用于其它實(shí)施方案中的該技術(shù)特征，只要它們不會(huì)出現(xiàn)矛盾。下面對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的描述。
[0079]本發(fā)明所引述的所有文獻(xiàn)，它們的全部內(nèi)容通過引用并入本文，并且如果這些文獻(xiàn)所表達(dá)的含義與本發(fā)明不一致時(shí)，以本發(fā)明的表述為準(zhǔn)。此外，本發(fā)明使用的各種術(shù)語和短語具有本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的一般含義，即便如此，本發(fā)明仍然希望在此對(duì)這些術(shù)語和短語作更詳盡的說明和解釋，提及的術(shù)語和短語如有與公知含義不一致的，以本發(fā)明所表述的含義為準(zhǔn)。
[0080]如上下文所述的，已經(jīng)出人意料地發(fā)現(xiàn)，在配液過程中使用活性炭和紙漿組合，可以使獲得的液體藥物組合物例如注射液具有良好的物理穩(wěn)定性。
[0081]本發(fā)明的包含細(xì)胞色素C的藥物組合物，盡管在某些實(shí)施方案中是以固體型的粉針劑提供的，但在是一些實(shí)施方案中，還可以將這些固體型的粉針劑組合物不經(jīng)過冷凍干燥處理而直接將藥液分裝到玻璃瓶中制成水針劑。溶液型的水針劑的制備方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的。
[0082]【含量測定】
[0083]本含量測定法用于本發(fā)明，可測定各種包含細(xì)胞色素C的試樣中的細(xì)胞色素C的
含量:
[0084]供試品溶液的制備:精密量取本品適量(約相當(dāng)于細(xì)胞色素ClOOmg),置IOml量瓶中，用水稀釋至刻度；
[0085]精密量取供試品溶液1ml，置50ml量瓶中，用磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫鈉1.38g與磷酸氫二鈉31.2g，加水適量使溶解成1000ml，調(diào)節(jié)pH值至7.3)稀釋至刻度，加連二亞硫酸鈉約15mg，搖勻，照紫外-可見分光光度法(中國藥典2010年版二部附錄IVA)，在約550nm的波長處，以間隔0.5nm找出最大吸收波長，測定吸光度，按細(xì)胞色素C的吸收系數(shù)
(EiH)為23.0計(jì)算供試品中細(xì)胞色素C的含量(mg/ml)。
[0086]【活力測定】
[0087]本活力測定法用于本發(fā)明，可以測定各種包含細(xì)胞色素C的試樣的細(xì)胞色素C活力:
[0088](I)磷酸鹽緩沖液(0.2mol/L):取磷酸氫二納71.64g，加水使溶解成1000ml，作為甲液。另取磷酸二氫鈉27.60g，加水使溶解成1000ml，作為乙液。取甲液81ml與乙液19ml，混勻，調(diào)節(jié)pH值至7.3 ;
[0089](2)磷酸鹽緩沖液(0.1moI/L):取磷酸鹽緩沖液(0.2mol/L) 500ml，加水稀釋至1000ml，調(diào)節(jié) pH 值至 7.3 ；
[0090](3)磷酸鹽緩沖液(0.02mol/L):取磷酸鹽緩沖液(0.2mol/L) 100ml，加水稀釋至1000ml，調(diào)節(jié) pH 值至 7.3 ；
[0091](4)琥珀酸鹽溶液:取琥珀酸與氫氧化鉀各4.72g，加水使溶解成100ml，調(diào)節(jié)pH值至7.3 ；
[0092](5)氰化鉀溶液:取氰化鉀0.65g，加水使溶解成100ml后，用稀硫酸調(diào)節(jié)pH值至
`7.3 ；
[0093](6)去細(xì)胞色素C的心懸浮液:取新鮮豬(牛)心2只，除去脂肪與結(jié)締組織，切成條，用絞肉機(jī)絞碎，置紗布兜中，用自來水沖洗約2小時(shí)(經(jīng)常攪動(dòng)，擠出血色素)，擠干，用水洗數(shù)次，擠干，置磷酸鹽緩沖液(0.lmol/L)中浸泡約I小時(shí)，擠干，重復(fù)浸泡I次，用水洗數(shù)次，擠干，置組織搗碎機(jī)內(nèi)，加磷酸鹽緩沖液(0.02mol/L)適量恰使豬(牛)心浸沒，搗成勻漿，離心10分鐘(普通離心機(jī))，取上層混懸液，加冰塊少量，迅速用稀醋酸調(diào)節(jié)PH值至約5.5，立即離心15分鐘，取沉淀，加等體積的磷酸鹽緩沖液(0.lmol/L)，用玻璃勻漿器磨勻后， 貯存于冰箱中；臨用時(shí)取1.0ml，加磷酸鹽緩沖液(0.lmol/L)稀釋至IOml ；
[0094](7)供試品溶液的制備:取供試品，加水制成每Iml中含細(xì)胞色素C約3mg的溶液；
[0095](8)測定法:取磷酸鹽緩沖液(0.2mol/L) 5ml、琥珀酸鹽溶液1.0ml與供試品溶液0.5ml，置25ml具塞比色管中，加去細(xì)胞色素C的心懸浮液0.5ml與氰化鉀溶液1.0ml，加水稀釋至IOml，搖勻，以同樣的試劑作空白，照紫外-可見分光光度法(中國藥典2010年版二部附錄IV A)，在550nm的波長處附近，間隔0.5min找出最大吸收波長，并測定吸光度，直至吸光度不再增大為止，作為酶還原吸光度；然后各加連二亞硫酸鈉約5mg,搖勻，放置約10分鐘，在上述同一波長處測定吸光度，直至吸光度不再增大為止，作為化學(xué)還原吸光度；按下式計(jì)算細(xì)胞色素C活力:
[0096]
【權(quán)利要求】
1.一種藥物組合物，其中包含:細(xì)胞色素C、凍干賦形劑、抗氧劑以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的藥物組合物，其特征在于: 所述凍干賦形劑選自甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇、L-半胱氨酸、右旋糖苷、氯化鈉、及其組合； 所述抗氧劑選自亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉及其組合； 其中包含的物料中以每7.5重量份的細(xì)胞色素C計(jì)，凍干賦形劑的量為7.5~150重量份，例如7.5~100重量份，例如7.5~75重量份； 其中包含的物料中以每7.5重量份的細(xì)胞色素C計(jì)，抗氧劑的量為I~10重量份，例如I~5重量份,例如2~3重量份；和/或 所述的酸堿調(diào)節(jié)劑選自氫氧化鈉、氫氧化鉀、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、鹽酸、磷酸、硝酸、硫酸、或其組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1-2任一項(xiàng)的藥物組合物，其特征在于: 其中還任選地包括L-半胱氨酸； 其中包含的物料中以每7.5重量份的細(xì)胞色素C計(jì)，L-半胱氨酸的量為I~10重量份，例如I~5重量份,例如 I~2重量份；和/或 其加水溶解和/或稀釋制成每Iml中含細(xì)胞色素C3mg的溶液，該溶液的pH值為6.0~7.5，例如該溶液的pH值為6.5~7.5，例如該溶液的pH值為7.0~7.5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的藥物組合物，其特征在于: 其中包含:細(xì)胞色素C7.5重量份、凍干賦形劑7.5~150重量份、抗氧劑I~10重量份、以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑； 或者，其中包含:細(xì)胞色素C7.5重量份、凍干賦形劑7.5~100重量份、抗氧劑I~5重量份、以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑； 或者，其中包含:細(xì)胞色素C7.5重量份、凍干賦形劑7.5~75重量份、抗氧劑2~3重量份、以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)的藥物組合物，其特征在于: 其中包含:細(xì)胞色素C7.5重量份、凍干賦形劑7.5~150重量份、L-半胱氨酸I~10重量份、抗氧劑I~10重量份、以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑； 或者，其中包含:細(xì)胞色素C7.5重量份、凍干賦形劑7.5~100重量份、L-半胱氨酸I~5重量份、抗氧劑I~5重量份、以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑； 或者，其中包含:細(xì)胞色素C7.5重量份、凍干賦形劑7.5~75重量份、L-半胱氨酸I~2重量份、抗氧劑2~3重量份、以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的藥物組合物，其特征在于: 其加水溶解并稀釋制成每Iml中含細(xì)胞色素C3mg的溶液，該溶液的pH值為6.0~7.5，例如該溶液的PH值為6.5~7.5，例如該溶液的pH值為7.0~7.5 ; 其是冷凍干燥粉針劑； 其在冷凍干燥之前的溶液除包括細(xì)胞色素C、凍干賦形劑、抗氧劑、以及任選的L-半胱氨酸和任選的酸堿調(diào)節(jié)劑外，還包括注射用水； 其在冷凍干燥之前的溶液除包括細(xì)胞色素C、凍干賦形劑、抗氧劑、以及任選的L-半胱氨酸和任選的酸堿調(diào)節(jié)劑外還包括注射用水，所述溶液的固形物含量為1.5~20%(w/v)，例如2~15%(w/v)，例如2~12%(w/v);和/或 其用注射用水復(fù)溶到基本上與冷凍干燥前溶液相同的體積，所得溶液中的固形物含量為 1.5 ~20%(w/v)，例如 2 ~15%(w/v)，例如 2 ~12%(w/v)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)的藥物組合物，其特征在于: 其中還任選地包含選自下列的其它種類的賦形劑:甘露醇、乳糖、蔗糖、葡萄糖、山梨醇、L-半胱氨酸、右旋糖苷、氯化鈉、及其組合； 其為固體型的藥物組合物； 其為冷凍干燥的藥物組合物； 其為無菌凍干粉針劑； 其為無菌凍干粉針劑，其在藥液的配制時(shí)經(jīng)過活性炭吸附處理過程； 其為無菌凍干粉針劑，其在藥液的配制時(shí)經(jīng)過活性炭吸附處理過程，所述活性炭吸附處理中與活性炭一起還添加有紙漿； 其為無菌凍干粉針劑，其在藥液的配制時(shí)經(jīng)過活性炭吸附處理過程，該活性炭吸附處理過程是:向包含活性成分的藥液中加入0.05~0.5%(w/v)活性炭，并加入紙漿，攪拌10~30分鐘；和/或 所述與活性炭一起加入的紙漿的量，以干濾紙計(jì)，在藥液中的濃度為0.05%~0.2%(w/v)，優(yōu)選 0.05% ~0.l%(w/v)。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的藥物組合物，其為無菌凍干粉針劑，其是照以下方法配制得到的: (1)將各固體輔料與細(xì)胞色素C溶解于適量注射用水中； (2)用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.0~7.2 ; (3)加熱至50-60。。，加入0.05~0.5%(w/v)活性炭，并加入紙漿，保溫?cái)嚢?0~30分鐘； (4)將步驟(3)所得藥液先用濾紙過濾，接著依次用0.8 y m和0.45 y m的微孔濾膜進(jìn)行過濾，以除去活性炭和紙漿； (5)補(bǔ)加注射用水至適量，攪拌均勻，測定溶液pH值和任選的測定活性成分含量，必要時(shí)用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)該溶液至PH符合規(guī)定的范圍； (6)充入氮?dú)猓?-6°C冷藏48h,依次用0.45 u m>0.22 u m的微孔濾膜無菌過濾,濾液灌裝入西林瓶中，冷凍干燥除去水分，壓塞，即得。
9.制備細(xì)胞色素C藥物組合物例如權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的細(xì)胞色素C藥物組合物例如冷凍干燥粉針劑的方法，所述細(xì)胞色素C藥物組合物中包含:細(xì)胞色素C、凍干賦形劑、抗氧劑以及任選的酸堿調(diào)節(jié)劑；該方法包括以下步驟: (1)將各固體輔料與細(xì)胞色素C溶解于適量注射用水中； (2)用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.0~7.2 ; (3)加熱至50-60。。，加入0.05~0.5%(w/v)活性炭，并加入紙漿，保溫?cái)嚢?0~30分鐘； (4)將步驟(3)所得藥液先用濾紙過濾，接著依次用0.8 y m和0.45 y m的微孔濾膜進(jìn)行過濾，以除去活性炭和紙漿；(5)補(bǔ)加注射用水至適量，攪拌均勻，測定溶液pH值和任選的測定活性成分含量，必要時(shí)用酸堿調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)該溶液至PH符合規(guī)定的范圍； (6)充入氮?dú)猓?-6°C冷藏48h,依次用0.45 u m>0.22 u m的微孔濾膜無菌過濾,濾液灌裝入西林瓶中，冷凍干燥除去水分，壓塞，即得。該方法進(jìn)一步地如說明書第二方面任一實(shí)施方案所述。
10.權(quán)利要求1-8任一項(xiàng)的細(xì)胞色素C藥物組合物或者權(quán)利要求9所制備的細(xì)胞色素C藥物組合物在制備用于各種組織缺氧急救及其的輔助治療，如一氧化碳中毒、催眠藥中毒、氰化物中毒、新生兒窒息、嚴(yán)重休克期缺氧、腦血管意外、腦震蕩后遺癥、麻醉及肺部疾病引起的呼吸困難和各種心`臟疾患引起的心肌缺氧的治療的藥物中的用途。
【文檔編號(hào)】A61K38/41GK103520123SQ201310529187
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月31日
【發(fā)明者】趙東明, 賈紅軍, 方專, 羅雋, 潘旭, 茍治君 申請人:成都天臺(tái)山制藥有限公司