載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒及制備方法、豌豆凝集素修飾方法和應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒及制備方法、豌豆凝集素修飾方法和應(yīng)用。載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒的制備方法為：將多西紫杉醇與聚羥基丁酸酯的三氯甲烷和/或二氯甲烷溶液混合均勻，再與聚乙烯醇的水溶液混合，超聲乳化3-10min，固化，去除有機(jī)溶劑；多西紫杉醇、聚羥基丁酸酯和聚乙烯醇的質(zhì)量比（0.8-2）：（4-10）：（20-50）。該方法改善多西紫杉醇的溶解度，制得的產(chǎn)品粒徑分布均勻，載藥量和包封率高，釋藥快，體外緩控釋藥，生物利用度高。豌豆凝集素修飾的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒提高了藥物靶向性和治療指數(shù)，為開發(fā)特異性糖介導(dǎo)的腫瘤靶向給藥系統(tǒng)奠定了基礎(chǔ)。
【專利說明】載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒及制備方法、豌豆凝集素修飾方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒和豌豆凝集素修飾的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒，以及二者的制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]多西紫杉醇(docetaxel，DTX)為紫杉烷類新型抗腫瘤藥物，通過抑制微管蛋白解聚而阻斷細(xì)胞有絲分裂，從而抑制腫瘤細(xì)胞的繁殖，發(fā)揮抗腫瘤活性。臨床研究證實，多西紫杉醇對乳腺癌、卵巢癌、肺癌、頭頸癌及胃癌等皆有較好療效，是治療卵巢癌的一線藥物。
[0003]但是，多西紫杉醇的水溶性極低，口服給藥生物利用度幾乎為零，現(xiàn)臨床采用其注射劑給藥，該給藥方式選用大量的有機(jī)溶劑作為溶媒，一般為乙醇及表面活性劑，給藥后會出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)，同時使用不便、注射疼痛、生產(chǎn)工藝復(fù)雜，患者用藥依從性較差，臨床應(yīng)用受到限制。另一方面，抗癌藥物多具有明顯的系統(tǒng)毒性，除抑制腫瘤細(xì)胞生長外，對機(jī)體正常細(xì)胞也會產(chǎn)生一定殺傷作用，從而降低抗癌藥物的治療指數(shù)。
[0004]為提高多西紫杉醇在水中的溶解度、減少不良反應(yīng)的發(fā)生、提高靶向性和抗腫瘤活性，國內(nèi)外學(xué)者致力于多西紫杉醇制劑學(xué)的研究，已有不少關(guān)于多西紫杉醇新型給藥系統(tǒng)的成果報道，例如:環(huán)糊精包合物、脂質(zhì)體、聚合物膠束等。這些新型微粒給藥系統(tǒng)通過一系列的靶向模式、釋放機(jī)制及遞送策略等來明顯地改善多西紫杉醇的體內(nèi)外藥動學(xué)行為，成為多西紫杉醇抗腫瘤給藥系統(tǒng)的研究熱點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)中多西紫杉醇在水中溶解度低、靶向性差等的缺陷，提供載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒和豌豆凝集素修飾的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒以及二者的制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明的制備方法，提供了一種新型的腫瘤靶向給藥系統(tǒng)，能夠顯著改善多西紫杉醇的溶解度；制得的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒以及豌豆凝集素修飾的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒的各項物理指標(biāo)穩(wěn)定，粒徑分布均勻，載藥量和包封率高，釋藥快，體外緩控釋藥，生物利用度高，減少了不良反應(yīng)；特別是豌豆凝集素修飾的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒，在前述效果的基礎(chǔ)上，還提高了藥物靶向性和治療指數(shù)，為開發(fā)特異性糖介導(dǎo)的腫瘤靶向給藥系統(tǒng)、分析“糖控”效應(yīng)對化療藥物的增敏作用奠定了基礎(chǔ)，實現(xiàn)“低毒、高效”的腫瘤化療新方案。[0006]本發(fā)明的目的之一在于，提供一種載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒的制備方法；所述的制備方法包括以下步驟:將多西紫杉醇與聚羥基丁酸酯的鹵代烴溶液混合均勻得混合液，將所述的混合液與聚乙烯醇的水溶液混合，超聲乳化3-10min，固化，去除有機(jī)溶劑，即可；所述的多西紫杉醇、聚羥基丁酸酯和聚乙烯醇的質(zhì)量比為(0.8-2):(4-10):(20-50);所述的聚羥基丁酸酯的鹵代烴溶液為聚羥基丁酸酯的三氯甲烷溶液和/或聚羥基丁酸酯的二氯甲烷溶液。[0007]本發(fā)明中，較佳的，所述的多西紫杉醇、聚羥基丁酸酯和聚乙烯醇的質(zhì)量比較佳的為(1.2-1.8):(6-9): (30-50)，更佳的為 1.6:8:40。
[0008]以下，針對本發(fā)明的聚羥基丁酸酯的鹵代烴溶液做以下的說明:
[0009]本發(fā)明中，所述的聚羥基丁酸酯(polyhydroxybutyrate, PHB)是一種微生物發(fā)酵合成的天然高分子材料，具有完全生物相容性和可生物降解特性，在本發(fā)明中作為包覆多西紫杉醇的載體材料使用。較佳的，所述的聚羥基丁酸酯為聚[(R)_3-羥基丁酸](Poly [ (R) -3-hydroxybutyric acid]),所述的聚[(R)_3_ 羥基丁酸]的重均分子量(Mw)為437000，購買廠家為 Sigma-Aldrich。
[0010]本發(fā)明中，所述的聚羥基丁酸酯的鹵代烴溶液較佳的為聚羥基丁酸酯的三氯甲烷溶液。所述的聚羥基丁酸酯的鹵代烴溶液的濃度較佳的為0.005-0.10g/mL，更佳的為
0.02g/mL。
[0011]所述的聚羥基丁 酸酯的鹵代烴溶液的制備方法較佳的為:將聚羥基丁酸酯與鹵代烴溶液混合，61-70°c條件下水浴加熱，冷凝，過濾，即可；其中，所述的加熱的溫度較佳的為700C ;所述的冷凝的時間較佳的為4-5小時，更佳的為4小時；所述的冷凝較佳的在蛇形冷凝管中冷凝；所述的過濾較佳的經(jīng)3號砂芯抽濾漏斗過濾，按照本領(lǐng)域常識，所述的3號砂芯抽濾漏斗的漏洞規(guī)格為35mL-3#。
[0012]關(guān)于上述制備方法的說明如下:載體材料聚羥基丁酸酯分子量較大，常溫下很難溶解，發(fā)明人經(jīng)過大量研究，選用具有水不溶性、易乳化、低沸點(diǎn)特性的三氯甲烷和/或二氯甲烷作為溶媒，加熱回流后，溶液中仍存在少許不溶物，進(jìn)一步用3號砂芯抽濾漏斗過濾，制得聚羥基丁酸酯的鹵代烴溶液。同時，考慮到三氯甲烷和二氯甲烷的毒性，最后一步需充分?jǐn)嚢瑁瑩]發(fā)除去有機(jī)溶劑。
[0013]本發(fā)明中，所述的聚乙烯醇(PVA)作為膠體穩(wěn)定劑使用，用以減少載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒的聚集。所述的聚乙烯醇(PVA)的水溶液的濃度較佳的為0.002-0.0lg/mL，更佳的為0.005g/mL。當(dāng)聚乙烯醇(PVA)的水溶液的濃度為0.005g/mL時，制得的載多西紫杉醇的聚羥基丁酸酯納米粒的粒徑最小，粒徑分布最均勻。
[0014]本發(fā)明中，所述的聚乙烯醇的水溶液的制備方法較佳的為:將聚乙烯醇與水混合，在20-25 °C溫度條件下放置5-10min，待其充分溶脹后，邊攪拌邊升溫至95-10(TC，水浴加熱90-150min，即可。本發(fā)明中，所述的聚乙烯醇的水溶液的制備方法更佳的為:將聚乙烯醇與水混合，在25°C溫度條件下放置lOmin，待其充分溶脹后，邊攪拌邊升溫至95°C，水浴加熱2小時，即可。
[0015]本發(fā)明中，較佳的，所述的多西紫杉醇與聚羥基丁酸酯的鹵代烴溶液混合均勻的方法為本領(lǐng)域常規(guī)的方法；所述的多西紫杉醇與聚羥基丁酸酯的鹵代烴溶液混合均勻的方法較佳的為渦旋。
[0016]本發(fā)明中，所述的混合液為藥物與載體材料的混合溶液(DTX-PHB)。
[0017]本發(fā)明中，較佳的，所述的混合液與聚乙烯醇的水溶液混合的方法和條件為本領(lǐng)域常規(guī)的方法和條件；所述的混合液與聚乙烯醇的水溶液混合的方法較佳的為向所述的聚乙烯醇的水溶液中滴加所述的混合液。
[0018]其中，較佳的，所述的滴加前，將所述的聚乙烯醇的水溶液超聲處理，使其分散均勻。所述的超聲處理的時間較佳的為0.5-2min，更佳的為lmin。所述的超聲處理的振幅較佳的為40%，脈沖較佳的為5s\5s。所述的超聲處理較佳的采用VCX130探頭式超聲波破碎儀(Sonics&materials,美國)處理。
[0019]其中，較佳的，所述的滴加時攪拌所述的聚乙烯醇的水溶液。所述的滴加時的攪拌較佳的為磁力攪拌。所述的滴加時的攪拌的速度為900-1 IOOrpm,所述的滴加時的攪拌的時間為 0.5-1.5min。
[0020]本發(fā)明中，較佳的，所述的超聲乳化在冰浴條件下進(jìn)行。
[0021]本發(fā)明中，所述的超聲乳化的時間較佳的為5min。所述的超聲乳化的振幅較佳的為40%，所述的超聲乳化的脈沖較佳的為5s\5s。
[0022]本發(fā)明中，較佳的，所述的超聲乳化后形成乳白色乳狀液。
[0023]本發(fā)明中，較佳的，所述的固化的方法為本領(lǐng)域常規(guī)的方法。所述的固化的方法較佳的為攪拌固化。所述的攪拌固化較佳的為磁力攪拌。所述的攪拌固化的速度較佳的為400-600rpm,更佳的為500rpm ;所述的攪拌固化的時間較佳的為6_7h,更佳的為6h ;所述的攪拌固化的溫度較佳的為20-27 °C。
[0024]本發(fā)明中，較佳的，所述的去除有機(jī)溶劑的方法為本領(lǐng)域常規(guī)的方法。所述的去除有機(jī)溶劑的方法較佳的為揮發(fā)。
[0025]本發(fā)明中，較佳的，所述的去除有機(jī)溶劑后得到帶淡藍(lán)色乳光的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒溶液(DTX-PHB-NPs )。
[0026]本發(fā)明中，較佳的，所述的去除有機(jī)溶劑后，離心和/或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。
[0027]其中，所述的離心的目的 是進(jìn)一步去除雜質(zhì)，富集載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒。所述的離心的方法和條件為本領(lǐng)域常規(guī)的方法和條件。所述的離心的轉(zhuǎn)速較佳的為8000-12000rpm，更佳的為IOOOOrpm ;所述的離心的時間較佳的為20_40min，更佳的為30mino
[0028]其中，所述的離心后，棄去上清液，并洗滌得到的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒。按照本領(lǐng)域常識，所述的上清液中包括微量的雜質(zhì)，如三氯甲烷和/或未形成納米粒的材料等。所述的洗滌的目的是去除載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒表面殘留的雜質(zhì)。所述的洗滌較佳的為用磷酸鹽緩沖液(PBS，pH7-8)洗滌2-4次，更佳的為用磷酸鹽緩沖液(PBS，pH7.4)洗滌 3 次。
[0029]本發(fā)明中，較佳的，所述的去除有機(jī)溶劑后還進(jìn)行凍干。
[0030]本發(fā)明中，載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒的制備方法一個較佳的技術(shù)方案為:
[0031](I)將多西紫杉醇與聚[(R)-3_羥基丁酸]的三氯甲烷溶液混合均勻得混合液；所述的聚[(R)_3-羥基丁酸]的三氯甲烷溶液的濃度為0.02g/mL;
[0032](2)將聚乙烯醇的水溶液超聲處理Imin，在攪拌條件下，向所述的聚乙烯醇的水溶液中滴加步驟(I)中所述的混合液；所述的攪拌的速度為lOOOrpm，所述的聚乙烯醇(PVA)的水溶液的濃度為0.005g/mL ；
[0033](3)冰浴條件下超聲乳化5min,超聲乳化的振幅為40%,脈沖為5s\5s,磁力攪拌固化，攪拌的速度為500rpm,攪拌的時間為6h,揮發(fā)去除有機(jī)溶劑，即可；
[0034]其中，所述的多西紫杉醇、聚羥基丁酸酯和聚乙烯醇的質(zhì)量比為1.6:8:40。
[0035]本發(fā)明中，載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒的制備方法一個更佳的技術(shù)方案為:
[0036](I)將1.6mg的多西紫杉醇與0.4mL的聚[(R) _3_羥基丁酸]的三氯甲烷溶液混合均勻得混合液；所述的聚[(R)-3-羥基丁酸]的三氯甲烷溶液中的聚[(R)-3-羥基丁酸]的含量為8mg ；
[0037](2)將SmL的聚乙烯醇的水溶液超聲處理Imin，在攪拌條件下，向所述的聚乙烯醇的水溶液中滴加步驟(I)中所述的混合液；所述的攪拌的速度為lOOOrpm，所述的聚乙烯醇(PVA)的水溶液中的聚乙烯醇的含量為40mg ；
[0038](3)冰浴條件下超聲乳化5min,超聲乳化的振幅為40%,脈沖為5s\5s,磁力攪拌固化，攪拌的速度為500rpm,攪拌的時間為6h,揮發(fā)去除有機(jī)溶劑，即可。
[0039]本發(fā)明的目的之二在于，提供如上所述的方法制得的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒。所述的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒的粒徑較佳的為100-200nm，更佳的為(172.5±0.64) nm;所述的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒的包封率較佳的為(62.6±0.92)%;所述的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒的載藥量較佳的為(6.1±1.97)%。
[0040]本發(fā)明的目的之三在于，提供如上所述的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0041]本發(fā)明的目的之四在于:提供一種豌豆凝集素修飾的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒的制備方法；所述的制備方法包括以下步驟:將如上所述的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒與豌豆凝集素的溶液混合均勻，在2-6°C溫度下靜置10-12h，即可；其中，所述的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒中的多西紫杉醇與所述的豌豆凝集素的質(zhì)量比為1:(0.1-0.5)。`
[0042]凝集素是一種能夠?qū)δ骋惶禺愋蕴腔鶎Ｒ恍越Y(jié)合的蛋白質(zhì)，本研究使用的豌豆凝集素(Pisum sativum agglutinin, PSA)是從豌豆中提取的植物凝集素,對維系腫瘤細(xì)胞存活與生長的葡萄糖具有綁定特異性。發(fā)明人經(jīng)過大量研究發(fā)現(xiàn):維系腫瘤細(xì)胞生長的葡萄糖濃度(>25mmol/L)通常是正常組織糖濃度(3.89-6.llmmol/L)的5倍以上。這為豌豆凝集素修飾的載藥系統(tǒng)向高糖濃度腫瘤部位介導(dǎo)創(chuàng)造了重要條件，非常有利于實現(xiàn)腫瘤組織的糖介導(dǎo)給藥，增強(qiáng)化療藥物的作用。
[0043]植物凝集素作為聚羥基丁酸酯(PHB)的調(diào)節(jié)蛋白，能夠緊緊吸附在聚羥基丁酸酯(PHB)顆粒表面，利用該特性，對載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒(DTX-PHB-NPs)進(jìn)行豌豆凝集素化修飾，構(gòu)建豌豆凝集素修飾的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒(DTX-PHB-PSA-NPs)給藥系統(tǒng)。聚羥基丁酸酯(PHB)納米粒上富集的豌豆凝集素(PSA)到達(dá)腫瘤組織后，競爭瘤細(xì)胞內(nèi)的糖供給，抑制葡萄糖供給瘤細(xì)胞，能量限制聯(lián)合化療，顯示出更高的藥物敏感性，使藥物對腫瘤細(xì)胞的生長抑制和促凋亡作用更加突出。
[0044]本發(fā)明中，較佳的，所述的豌豆凝集素修飾的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒中的豌豆凝集素的重均分子量(Mw)為49kDa，狀態(tài)為凍干粉。
[0045]本發(fā)明中，較佳的，所述的豌豆凝集素修飾的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒中的多西紫杉醇與所述的豌豆凝集素的質(zhì)量比為1:0.35。
[0046]本發(fā)明中，較佳的，所述的靜置的溫度較佳的為4°C。
[0047]本發(fā)明中，所述的豌豆凝集素的溶液中的溶液較佳的為磷酸鹽緩沖液(PBS)、三羥甲基氨基甲烷緩沖液(Tris緩沖液)和去離子水中的一種或多種；其中，所述的磷酸鹽緩沖液的PH值較佳的為7.0-7.6，更佳的為pH7.0-7.4，進(jìn)一步更佳的為pH7.4。
[0048]本發(fā)明的目的之五在于，提供所述的豌豆凝集素修飾的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒的制備方法制得的豌豆凝集素修飾的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒。本發(fā)明中，所述的豌豆凝集素修飾的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒中的豌豆凝集素與載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒的結(jié)合率較佳的為(26.91±0.39)%。
[0049]本發(fā)明的目的之六在于，提供如上所述的豌豆凝集素修飾的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0050]在符合本領(lǐng)域常識的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實例。
[0051]本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。
[0052]本發(fā)明的積極進(jìn)步效果在于:本發(fā)明的制備方法提供了一種新型的腫瘤靶向給藥系統(tǒng)，能夠顯著改善多西紫杉醇的溶解度；制得的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒和豌豆凝集素修飾的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒的各項物理指標(biāo)穩(wěn)定，粒徑分布均勻，載藥量和包封率高，釋藥快，體外緩控釋藥，生物利用度高，減少了不良反應(yīng)；特別是豌豆凝集素修飾的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒，在前述效果的基礎(chǔ)上，還提高了藥物靶向性和治療指數(shù)，為開發(fā)特異性糖介導(dǎo)的腫瘤靶向給藥系統(tǒng)、分析“糖控”效應(yīng)對化療藥物的增敏作用奠定了基礎(chǔ)，實現(xiàn)“低毒、高效”的腫瘤化療新方案。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0053]圖1為載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒(DTX-PHB-NPs)和空白聚羥基丁酸酯納米粒的透射電鏡照片(A:空白聚羥 基丁酸酯納米粒(PHB-NPs)，X4000 ；B:載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒(DTX-PHB-NPs )，X 4000 )
[0054]圖2為載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒(DTX-PHB-NPs)的粒徑分布圖。
[0055]圖3為載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒(DTX-PHB-NPs)的電位分布圖。
[0056]圖4為載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒(DTX-PHB-NPs)的體外釋放曲線。
[0057]圖5為豌豆凝集素(PSA)的凝膠滲透HPLC色譜圖(A:不含豌豆凝集素(PSA)的流動相溶液:含豌豆凝集素(PSA)的流動相溶液)。
[0058]圖6為用豌豆凝集素修飾載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒的示意圖。
【具體實施方式】
[0059]下面通過實施例的方式進(jìn)一步說明本發(fā)明，但并不因此將本發(fā)明限制在所述的實施例范圍之中。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規(guī)方法和條件，或按照商品說明書選擇。
[0060]本發(fā)明的下述實施例中使用的產(chǎn)品的購買廠家及其型號為:
[0061]多西紫杉醇:上海北卡醫(yī)藥技術(shù)有限公司，含量:98.7% ；
[0062]聚[(R)-3-羥基丁酸]:(Mw=437000,natural origin, Sigma-Aldrich)；
[0063]三氯甲烷:國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；
[0064]聚乙烯醇(PVA):Mw=13, 000 -23，000,87% -89%hydrolyzed, Sigma-Aldrich[0065]豌豆凝集素:Mw=49kDa,lyophiIized powder, Medicago
[0066]實施例1
[0067]載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒的制備方法。實施例1中使用的儀器如表I所
/Jn ο
[0068]表I實施例1中使用的儀器及其購買廠家和型號
[0069]
【權(quán)利要求】
1.一種載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒的制備方法，其特征在于:所述的制備方法包括以下步驟:將多西紫杉醇與聚羥基丁酸酯的鹵代烴溶液混合均勻得混合液，將所述的混合液與聚乙烯醇的水溶液混合，超聲乳化3-10min，固化，去除有機(jī)溶劑，即可；所述的多西紫杉醇、聚羥基丁酸酯和聚乙烯醇的質(zhì)量比為(0.8-2):(4-10):(20-50);所述的聚羥基丁酸酯的鹵代烴溶液為聚羥基丁酸酯的三氯甲烷溶液和/或聚羥基丁酸酯的二氯甲烷溶液。
2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述的多西紫杉醇、聚羥基丁酸酯和聚乙烯醇的質(zhì)量比為(1.2-1.8):(6-9): (30-50)，較佳的為1.6:8:40 ； 所述的聚羥基丁酸酯的鹵代烴溶液的濃度為0.005-0.10g/mL，較佳的為0.02g/mL ;所述的聚羥基丁酸酯的鹵代烴溶液的制備方法較佳的為:將聚羥基丁酸酯與鹵代烴溶液混合，61-70°C條件下水浴加熱，冷凝，過濾，即可；其中，所述的加熱的溫度較佳的為70°C ;所述的冷凝的時間較佳的為4-5小時，更佳的為4小時；所述的過濾較佳的經(jīng)3號砂芯抽濾漏斗過濾，所述的3號砂芯抽濾漏斗的漏洞規(guī)格為35mL-3# ； 所述的聚乙烯醇的水溶液的濃度較佳的為0.002-0.01g/mL,更佳的為0.005g/mL ;所述的聚乙烯醇的水溶液的制備方法較佳的為:將聚乙烯醇與水混合，在20-25 V溫度條件下放置5-10min，待其溶脹后，邊攪拌邊升溫至95-100°C，水浴加熱90_150min，即可；所述的聚乙烯醇的水溶液的制備方法更佳的為:將聚乙烯醇與水混合，在25°C溫度條件下放置lOmin，待其溶脹后，邊攪拌邊升溫至95°C，水浴加熱2小時，即可； 所述的多西紫杉醇與聚羥基丁酸酯的鹵代烴溶液混合均勻的方法為渦旋； 所述的混合液與聚乙烯醇的水溶液混合的方法為向所述的聚乙烯醇的水溶液中滴加所述的混合液； 所述的滴加前，將所述的聚乙烯醇的水溶液超聲處理，使其分散均勻；所述的超聲處理的時間較佳的為0.5-2min，更佳的為Imin ;所述的超聲處理的振幅較佳的為40%，脈沖較佳的為5s\5s ;所述的超聲處理較佳的采用VCX130探頭式超聲波破碎儀處理； 所述的滴加時攪拌所述的聚乙烯醇的水溶液；所述的滴加時的攪拌較佳的為磁力攪拌；所述的滴加時的攪拌的速度為900-1100rpm，所述的滴加時的攪拌的時間為0.5-1.5min。
3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于:所述的超聲乳化在冰浴條件下進(jìn)行； 所述的超聲乳化的時間較佳的為5min ;所述的超聲乳化的振幅較佳的為40%，所述的超聲乳化的脈沖較佳的為5s\5s ； 所述的固化的方法為攪拌固化；所述的攪拌固化較佳的為磁力攪拌；所述的攪拌固化的速度較佳的為400-600rpm,更佳的為500rpm ;所述的攪拌固化的時間較佳的為6_7h,更佳的為6h ;所述的攪拌固化的溫度較佳的為20-27°C ； 所述的去除有機(jī)溶劑的方法為揮發(fā)； 所述的去除有機(jī)溶劑后，離心和/或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)；其中，所述的離心的轉(zhuǎn)速較佳的為8000-12000rpm,更佳的為IOOOOrpm ;所述的離心的時間較佳的為20_40min，更佳的為30min ;所述的離心后，棄去上清液，并洗滌；所述的洗滌較佳的為用PH7-8的磷酸鹽緩沖液洗滌2-4次，更佳的為用pH7.4的磷酸鹽緩沖液洗滌3次； 所述的去除有機(jī)溶劑后還進(jìn)行凍干。
4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于: 所述的制備方法包括以下步驟: (1)將多西紫杉醇與聚[(R)_3-羥基丁酸]的三氯甲烷溶液混合均勻得混合液；所述的聚[(R)_3-羥基丁酸]的三氯甲烷溶液的濃度為0.02g/mL; (2)將聚乙烯醇的水溶液超聲處理lmin，在攪拌條件下，向所述的聚乙烯醇的水溶液中滴加步驟(I)中所述的混合液；所述的攪拌的速度為lOOOrpm，所述的聚乙烯醇的水溶液的濃度為 0.005g/mL ； (3)冰浴條件下超聲乳化5min,超聲乳化的振幅為40%,脈沖為5s\5s,磁力攪拌固化，攪拌的速度為500rpm,攪拌的時間為6h,揮發(fā)去除有機(jī)溶劑，即可； 其中，所述的多西紫杉醇、聚羥基丁酸酯和聚乙烯醇的質(zhì)量比為1.6:8:40 ； 較佳的，所述的制備方法包括以下步驟: (1)將1.6mg的多西紫杉醇與0.4mL的聚[(R)_3_羥基丁酸]的三氯甲烷溶液混合均勻得混合液；所述的聚[(R)_3-羥基丁酸]的三氯甲烷溶液中的聚[(R)_3-羥基丁酸]的含量為8mg ； (2)將SmL的聚乙烯醇的水溶液超聲處理lmin，在攪拌條件下，向所述的聚乙烯醇的水溶液中滴加步驟(I)中所述的混合液；所述的攪拌的速度為lOOOrpm，所述的聚乙烯醇的水溶液中的聚乙烯醇的含量為40mg ； (3)冰浴條件下超聲乳化5min,超聲乳化的振幅為40%,脈沖為5s\5s,磁力攪拌固化，攪拌的速度為500rpm,攪拌的時間為6h,揮發(fā)去除有機(jī)溶劑，即可。
5.如權(quán)利要求1-4所述的制備方法制得的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒；所述的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒的粒徑較佳的為100-200nm，更佳的為(172.5±0.64)nm ;所述的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒的包封率較佳的為(62.6±0.92) % ;所述的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒的載藥量較佳的為(6.1 ±1.97) %。
6.如權(quán)利要求5所述的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
7.—種豌豆凝集素修飾的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒的制備方法，其特征在于:所述的制備方法包括以下步驟:將如權(quán)利要求5所述的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒與豌豆凝集素的溶液混合均勻，在2-6°C溫度下靜置10-12h，即可；其中，所述的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒中的多西紫杉醇與所述的豌豆凝集素的質(zhì)量比為1:(0.1-0.5)。
8.如權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于:所述的豌豆凝集素修飾的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒中的豌豆凝集素的重均分子量為49kDa，狀態(tài)為凍干粉； 所述的豌豆凝集素修飾的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒中的多西紫杉醇與所述的豌豆凝集素的質(zhì)量比為1:0.35 ； 所述的靜置的溫度為4°C ； 所述的豌豆凝集素的溶液中的溶液較佳的為磷酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷緩沖液和去離子水中的一種或多種；其中，所述的磷酸鹽緩沖液的pH值較佳的為7.0-7.6，更佳的為pH7.0-7.4，進(jìn)一步更佳的為pH7.4。
9.如權(quán)利要求7或8所述的制備方法制得的豌豆凝集素修飾的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒；所述的豌豆凝集素修飾的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒中的豌豆凝集素與載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒的結(jié)合率較佳的為(26.91±0.39)%。
10.如權(quán)利要求9所述的豌豆凝集素修飾的載多西紫杉醇聚羥基丁酸酯納米粒在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。 ·
【文檔編號】A61K47/34GK103446060SQ201310433512
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年9月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月22日
【發(fā)明者】李鳳前, 董文鳳, 李菲, 杜麗 申請人:上海市第八人民醫(yī)院