微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑的制備方法及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑的制備方法及其應(yīng)用，具體是以微藻生產(chǎn)二十二碳六烯酸，即DHA的下腳藻粕為原材料，經(jīng)粉碎、酶解、離心、水浴加熱、抽真空、超濾、冷凍干燥，獲得微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑。生產(chǎn)出來(lái)的皮膚外用粉劑具有抗菌止癢、消炎消腫的功效，適用于神經(jīng)性皮炎、接觸性皮炎、慢性濕疹、蟲(chóng)咬性皮炎及瘙癢性皮膚病的局部治療。本發(fā)明的生產(chǎn)工藝無(wú)毒無(wú)害無(wú)污染，優(yōu)異、穩(wěn)定可靠，把藻粕下腳料廢物變成醫(yī)藥產(chǎn)品，大大增加了廢物的利用率，具有顯著的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益。
【專利說(shuō)明】微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑的制備方法及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，更具體涉及了一種微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑的制備方法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]皮膚瘙癢、紅腫、發(fā)炎是常見(jiàn)的皮膚病，也是一種多發(fā)病之一，嚴(yán)重影響人們的健康，通常分為神經(jīng)性皮炎、接觸性皮炎、慢性濕疹、蟲(chóng)咬性皮炎及瘙癢性皮膚病等。患者通常感到瘙癢、疼痛、麻木、灼熱等而忍不住去搔抓或摩擦，會(huì)導(dǎo)致皮膚疤痕，嚴(yán)重者會(huì)導(dǎo)致皮膚癌。因此，一種特效的皮膚抗菌止癢消炎消腫的無(wú)毒無(wú)害無(wú)副作用的藥物是眾患者迫切所求，而微藻柏蛋白質(zhì)降解后的生物肽中就有此優(yōu)良功能的活性成分。微藻如裂殖壺菌藻{Schizochytri應(yīng)sp.)、吾肯氏壺藻(Ulkenia amoeboit/a)、寇氏隱甲藻(Crypthecodiniumcohnii)等是用來(lái)提取DHA (二十二碳六烯酸)，其殘余物藻柏中不但含有微量殘余DHA、磷月旨，而且含有一定量的蛋白質(zhì)、多肽、寡肽、氨基酸以及多糖類等，是一種食品源的醫(yī)藥提取用原材料，已經(jīng)被證實(shí)其無(wú)毒無(wú)害無(wú)副作用。其中DHA是二十二碳六烯酸，俗稱腦黃金，是一種對(duì)人體非常重要的多不飽和脂肪酸，屬于Omega-3不飽和脂肪酸家族中的重要成員。從榨油下腳料藻柏中通過(guò)蛋白酶降解的方法獲取醫(yī)藥用物質(zhì)，是把廢物變成寶貝，是一項(xiàng)卓越的資源再利用，不但有重要的醫(yī)藥用途，而且還對(duì)環(huán)境起到一定的保護(hù)作用。用微藻柏酶解肽來(lái)治療皮膚病的應(yīng)用，迄今尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。因此，研制一種利用微藻柏肽制備皮膚抗菌止癢消炎消腫劑的方法及其應(yīng)用具有十分重要的意義。
[0003]

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明目的是提供 一種可以有效治療神經(jīng)性皮炎、接觸性皮炎、慢性濕疹、蟲(chóng)咬性皮炎、瘙癢性皮膚病以及外陰瘙癢的微藻肽皮膚抗菌止癢消腫的制備方法及其應(yīng)用。
[0005]為實(shí)現(xiàn)此目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
一種微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑的制備方法，其特征在于:以微藻生產(chǎn)二十二碳六烯酸，即DHA的下腳藻柏為原材料。先將藻柏粉碎成粉末無(wú)顆粒，然后加入磷酸鹽緩沖液，邊加邊攪拌均勻后，加入食品級(jí)蛋白酶并在一定條件下酶解混合物，離心取上清液，恒溫間接加熱，抽真空后，超濾，冷凍干燥獲得微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑。
[0006]其中，所述的微藻包括但不限于天然或發(fā)酵的菌體微藻，如裂殖壺菌藻{Schizochytri 應(yīng) sp.)、吾肯氏壺藻(Ulkenia amoeboi t/a )、寇氏隱甲藻(Cryp thecodini umcohnii )等。
[0007]所述的磷酸鹽緩沖液為PBS，pH值為7.2-7.8之間；加入藻柏粉末的重量與PBS的體積比是I:6~10.ο
[0008]所述的食品級(jí)蛋白酶主要是胃蛋白酶和胰蛋白酶即酶切位點(diǎn)包括賴氨酸和精氨酸的酶類，此雙酶協(xié)同作用，按1:1比例加入到藻柏液體混合物中，各酶與藻柏的重量比例是I %-3 %，酶解時(shí)間在3-6小時(shí)之間。
[0009]所述離心轉(zhuǎn)速限制在4500-8000 rpm，時(shí)間控制在10-20 min ;所述的恒溫間接加熱為水浴但不限于水浴，其溫度為70°C ;所述的抽真空其真空度在0.09-0.1 MPa范圍內(nèi)，時(shí)間控制在1.5-2小時(shí)；所述的超濾是指截留分子量為6000 Da以下的超濾液體，冷凍干燥獲得微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑。
[0010]所述的微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑的主要成分是酶降解蛋白質(zhì)所獲得的生物活性肽，并包含有活性肽混合物的任何一種或超過(guò)一種物質(zhì)，所構(gòu)成的微藻肽具有皮膚抗菌止癢消炎消腫作用，其包含物也具有抗菌止癢消腫的功效。
[0011]一種微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑的應(yīng)用，不但能夠殺死皮膚表面的細(xì)菌，還能夠消除由中性粒細(xì)胞引發(fā)的炎癥反應(yīng)，對(duì)神經(jīng)末梢有抑制作用，同時(shí)對(duì)皮膚表面細(xì)胞具有修復(fù)作用。因此，所述皮膚抗菌止癢消炎消腫劑主要用于制備治療神經(jīng)性皮炎、接觸性皮炎、慢性濕疹、蟲(chóng)咬性皮炎、瘙癢性皮膚病以及外陰瘙癢的局部治療藥物或消毒用品或化妝
品O
[0012]本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)是:
本發(fā)明的皮膚抗菌止癢消炎消腫劑，具有療效快、效果好、藥效穩(wěn)定、使用方便等優(yōu)點(diǎn)。
[0013]本發(fā)明的原材料微藻柏來(lái)自微藻菌類，微藻菌類屬于國(guó)家批準(zhǔn)的強(qiáng)制添加的食品
營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑DHA的食品原料來(lái)源，制備方法技術(shù)含量較高，應(yīng)用現(xiàn)代高科技設(shè)備，提高微藻
原料的利用率，在生產(chǎn)過(guò)程中也無(wú)任何有毒有害的化學(xué)試劑的使用，綠色環(huán)保，其制備出的
產(chǎn)品無(wú)毒無(wú)害無(wú)副作用，優(yōu)于現(xiàn)有市場(chǎng)上銷售的皮膚病藥膏，應(yīng)用于治療皮膚病方面，抗 菌止癢效果顯著，也有一定的消炎消腫作用，應(yīng)用前景非常廣闊，具有顯著的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效.、
Mo
[0014]
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0015]圖1是本發(fā)明的微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑抑制金黃色葡萄球菌的作用效
果O
[0016]圖2是患者被蚊子叮咬后，使用微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑的前后對(duì)比效果圖。
[0017]【具體實(shí)施方式】
下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。這些實(shí)施舉例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。
[0018]一、下列實(shí)施例所列舉的所有微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑的制備方法，都具有本發(fā)明涉及的方法而不限于所列舉方法，凡依本發(fā)明申請(qǐng)專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應(yīng)屬于本發(fā)明的涵蓋范圍。
[0019]實(shí)施例1
(I)微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑的制備
裂殖壺菌藻DHA (二十二碳六烯酸)油下腳藻柏，粉碎成粉末無(wú)顆粒狀，稱取I kg，置于酶解罐中，加入8 L pH為7.2的PBS，攪拌均勻后，加入10 g胃蛋白酶和10 g胰蛋白酶，在37 °C水解3 h，冷卻至室溫后，離心轉(zhuǎn)數(shù)為4500 rpm，離心10 min分出上清液和沉淀，取上清液；在70°C溫度和真空度為0.09 MPa條件下，抽真空I h，滅酶并脫除腥味；采用截留分子量6000Da的超濾膜超濾，取超濾液體，冷凍干燥，即得微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑。
[0020](2)抗菌實(shí)驗(yàn)
采用金黃色葡萄球菌進(jìn)行抗菌實(shí)驗(yàn)。即先將菌斜面接種活化，置于37°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，次日觀察斜面長(zhǎng)出純金黃色葡萄球菌；對(duì)于已經(jīng)活化的金黃色葡萄球菌取少量置于IOOml液體培養(yǎng)基(配制500ml體系中，牛肉膏2.5g，蛋白胨7.5g和NaCl 2.5g)中進(jìn)行搖床(37°C，150r/min)培養(yǎng)12h，可看到培養(yǎng)液由澄清變成渾濁。
[0021]將微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑制成濃度為0.1 mg/ml的液體，取100 ml，加入到有固體培養(yǎng)基(配制500 ml體系中，牛肉膏2.5 g，蛋白胨7.5 g，NaCl 2.5 g和瓊脂7.5 g)的培養(yǎng)皿中，涂均勻，同時(shí)，以不加微藻肽的空白作為對(duì)照；最后再加入80 ul已經(jīng)被稀釋40000倍的菌懸液，在培養(yǎng)皿平板上涂均勻，倒置于37 °C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，觀察24 h后菌體生長(zhǎng)情況。
[0022]培養(yǎng)24 h結(jié)果如圖1所示，其中(a)為實(shí)驗(yàn)組24小時(shí)培養(yǎng)的結(jié)果，金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)被抑制；(b)為對(duì)照組在24小時(shí)后長(zhǎng)出大量金黃色葡萄球菌。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，微藻肽對(duì)金黃色葡萄球菌具有較強(qiáng)的抑制作用。
[0023](3)人體皮膚刺激性試驗(yàn)
選擇皮膚健康的成人，以前臂內(nèi)側(cè)區(qū)域?yàn)槭茉嚥课?，一?cè)為試驗(yàn)區(qū)，另一側(cè)為對(duì)照區(qū)，取四層醫(yī)用紗布剪成I cm2，涂上微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑制成的皮膚消炎消腫止癢膏約0.05 g，貼在前臂內(nèi)側(cè)并蓋上聚丙烯塑料薄膜，用醫(yī)用膠布固定，試驗(yàn)期間適用者不食用辛辣食物、刺激性食物，實(shí)驗(yàn)部位不沾水。
[0024]24小時(shí)揭開(kāi)觀察，實(shí)驗(yàn)部位均顯陰性，即無(wú)紅斑、丘疹、水腫或其他過(guò)敏現(xiàn)象發(fā)生，試驗(yàn)連續(xù)一周時(shí)間，均無(wú) 紅斑、丘疹、水腫或其他過(guò)敏現(xiàn)象發(fā)生，證明對(duì)皮膚無(wú)刺激性，且無(wú)毒無(wú)害無(wú)副作用。
[0025]實(shí)施例2
吾肯氏壺藻DHA (二十二碳六烯酸)油下腳藻柏，粉碎成粉末無(wú)顆粒狀，稱取I kg，置于酶解罐中，加入10 L pH為7.4的PBS，攪拌均勻后，加入20 g胃蛋白酶和20 g胰蛋白酶，在37 °C水解6 h，冷卻至室溫后，離心轉(zhuǎn)數(shù)為4500 rpm，離心10 min分出上清液和沉淀，取上清液；在70°C溫度和真空度為0.09 MPa條件下，抽真空1.5 h，滅酶并脫除腥味；采用截留分子量5000Da的超濾膜超濾，取超濾液體，冷凍干燥，即得微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑。
[0026]該微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑進(jìn)行人體皮膚刺激性試驗(yàn)，無(wú)紅斑、丘疹、水腫或其他過(guò)敏現(xiàn)象發(fā)生，證明對(duì)皮膚無(wú)刺激性，且無(wú)毒無(wú)害無(wú)副作用。
[0027]實(shí)施例3
寇氏隱甲藻DHA (二十二碳六烯酸)油下腳藻柏，粉碎成粉末無(wú)顆粒狀，稱取I kg，置于酶解罐中，加入6 L pH為7.4的PBS，攪拌均勻后，加入10 g胃蛋白酶和10 g胰蛋白酶，在37 °C水解5 h，冷卻至室溫后，離心轉(zhuǎn)數(shù)為6000 rpm，離心20 min分出上清液和沉淀，取上清液；在70°C溫度和真空度為0.10 MPa條件下，抽真空2 h，滅酶并脫除腥味；采用截留分子量4000Da的超濾膜超濾，取超濾液體，冷凍干燥，即得微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑。
[0028]該微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑進(jìn)行人體皮膚刺激性試驗(yàn)，無(wú)紅斑、丘疹、水腫或其他過(guò)敏現(xiàn)象發(fā)生，證明對(duì)皮膚無(wú)刺激性，且無(wú)毒無(wú)害無(wú)副作用。
[0029]實(shí)施例4 裂殖壺菌藻DHA (二十二碳六烯酸)油下腳藻柏，粉碎成粉末無(wú)顆粒狀，稱取I kg，置于酶解罐中，加入6 L pH為7.6的PBS，攪拌均勻后，加入30 g胃蛋白酶和30 g胰蛋白酶，在37 °C水解6 h，冷卻至室溫后，離心轉(zhuǎn)數(shù)為7000 rpm，離心I min分出上清液和沉淀，取上清液；在70°C溫度和真空度為0.10 MPa條件下，抽真空1.5 h，滅酶并脫除腥味；采用截留分子量3000Da的超濾膜超濾，取超濾液體，冷凍干燥，即得微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑。
[0030]該微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑進(jìn)行人體皮膚刺激性試驗(yàn)，無(wú)紅斑、丘疹、水腫或其他過(guò)敏現(xiàn)象發(fā)生，證明對(duì)皮膚無(wú)刺激性，且無(wú)毒無(wú)害無(wú)副作用。
[0031]實(shí)施例5
吾肯氏壺藻DHA (二十二碳六烯酸)油下腳藻柏，粉碎成粉末無(wú)顆粒狀，稱取I kg，置于酶解罐中，加入6 L pH為7.8的PBS，攪拌均勻后，加入10 g胃蛋白酶和10 g胰蛋白酶，在37 °C水解6 h，冷卻至室溫后，離心轉(zhuǎn)數(shù)為8000 rpm，離心15 min分出上清液和沉淀，取上清液；在70°C溫度和真空度為0.10 MPa條件下，抽真空1.5 h，滅酶并脫除腥味；采用截留分子量2800Da的超濾膜超濾，取超濾液體，冷凍干燥，即得微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑。
[0032]該微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑進(jìn)行人體皮膚刺激性試驗(yàn)，無(wú)紅斑、丘疹、水腫或其他過(guò)敏現(xiàn)象發(fā)生，證明對(duì)皮膚無(wú)刺激性，且無(wú)毒無(wú)害無(wú)副作用。
[0033]二、下列實(shí)施例所列舉的所有微藻柏皮膚抗菌止癢消炎消腫劑，都具有本發(fā)明涉及的藥物功能而不限于所列舉功能。
[0034]實(shí)施例6:神經(jīng)性皮炎
黑龍江省哈爾濱市孫先生，年齡44歲，銀屑病，久治不愈，背部手背分布，奇癢難耐，使用醫(yī)生所開(kāi)市售藥膏，無(wú)顯著療效，改用本發(fā)明的微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑，配制成10 ug/ml，裝入噴劑瓶，噴涂后立即止癢，每天噴涂3次，一周后，手背部分有減少，好轉(zhuǎn)，即止癢效果明顯，消炎消腫效果需要一段時(shí)間連續(xù)給藥方能見(jiàn)療效。
[0035]實(shí)施例7:蚊蟲(chóng)叮咬性皮炎
福州市臺(tái)江區(qū)王女士，年齡54歲，雜貨店業(yè)主，在店里經(jīng)常被蚊子叮咬，奇癢難耐，使用本發(fā)明的微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑，配制成I mg/ml，裝入噴劑瓶，噴涂后立即止癢，一天后，紅腫泡緊縮(如圖2)。即止癢效果特別明顯，消炎消腫效果需要一天時(shí)間見(jiàn)療效，5天后痊愈。
[0036]實(shí)施例8:濕疹性皮炎
黑龍江省伊春市曹先生，年齡48歲，不明原因左手背部紅腫、泡狀、奇癢，醫(yī)生診斷為丘疹皮炎，使用醫(yī)生所開(kāi)市售藥膏，無(wú)顯著療效，改用本發(fā)明的微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑，配制成I mg/ml，裝入噴劑瓶，噴涂后立即止癢，連續(xù)噴涂3天，泡明顯皺縮，4天后痊愈。
[0037]實(shí)施例9:接觸性皮炎
黑龍江省伊春市尹先生，年齡50歲，系褲腰帶接觸皮膚導(dǎo)致腰部皮膚紅腫、泡狀、觸癢，涂抹本發(fā)明的微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑，涂上后，接觸即不癢了，半天后紅腫消失，泡緊縮，破皮處結(jié)硬殼，3天痊愈。
[0038]實(shí)施例10:瘙癢性皮炎
黑龍江省伊春市朱女士，年齡46歲，外陰部瘙癢，涂抹本發(fā)明的微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑，立即止癢，當(dāng)天痊愈。
[0039] 實(shí)施例11:蚊蟲(chóng)叮咬性皮炎
黑龍江省伊春市姜先生，年齡54歲，釣魚(yú)愛(ài)好者，經(jīng)常被蚊子叮咬，奇癢，使用本發(fā)明的微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑，制備過(guò)程中采用超濾3000Da的超濾膜，獲得含6000Da產(chǎn)物的包含物，配制成0.1 mg/ml，裝入噴劑瓶，噴涂后立即止癢，一天后，紅腫部位消失，SP止癢效果特別明顯，消炎消腫效果需要一天時(shí)間見(jiàn)療效。
【權(quán)利要求】
1.一種微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑的制備方法，其特征在于:以微藻生產(chǎn)二十二碳六烯酸，即DHA的下腳藻柏為原材料，先將藻柏粉碎成粉末無(wú)顆粒，然后加入磷酸鹽緩沖液，邊加邊攪拌均勻后，加入食品級(jí)蛋白酶并在一定條件下酶解混合物，離心取上清液，恒溫間接加熱，抽真空后，超濾，冷凍干燥獲得微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑的制備方法，其特征在于:所述微藻包括天然或發(fā)酵的菌體微藻。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑的制備方法，其特征在于:所述的磷酸鹽緩沖液為PBS，pH值為7.2-7.8之間；加入藻柏粉末的重量與PBS的體積比1:6-10。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑的制備方法，其特征在于:所述的食品級(jí)蛋白酶主要是胃蛋白酶和胰蛋白酶即酶切位點(diǎn)包括賴氨酸和精氨酸的酶類，此雙酶協(xié)同作用，按1:1比例加入到微藻柏液體混合物中，各酶與微藻柏的重量比例是I%-3 %，酶解時(shí)間在3-6小時(shí)之間。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑的制備方法，其特征在于:所述離心轉(zhuǎn)速限制在4500-8000 rpm,時(shí)間控制在10-20 min ;所述的恒溫間接加熱為水浴但不限于水浴，其溫度為70°C ;所述的抽真空其真空度在0.09-0.1 MPa范圍內(nèi)，時(shí)間控制在1-2小時(shí)；所述的超濾是指截留分子量為6000 Da以下的超濾液體，冷凍干燥獲得微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑的制備方法，其特征在于:所述的皮膚抗菌止癢消炎消腫劑主要成分是生物活性肽，并包含有蛋白酶酶解微藻柏的其中一種或超過(guò)一種物質(zhì)。
7.—種如權(quán)利要求1、6所述的微藻肽皮膚抗菌止癢消炎消腫劑的應(yīng)用，其特征在于:所述皮膚抗菌止癢消炎消腫劑可以制成藥物或消毒用品或化妝品，用于治療神經(jīng)性皮炎、接觸性皮炎、慢性濕疹、蟲(chóng)咬性皮炎、瘙癢性皮膚病或外陰瘙癢。
【文檔編號(hào)】A61P17/00GK103463143SQ201310429427
【公開(kāi)日】2013年12月25日 申請(qǐng)日期:2013年9月22日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月22日
【發(fā)明者】李 昊 申請(qǐng)人:李 昊