一種過敏性哮喘的組合物及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種過敏性哮喘的組合物及其制備方法，其各組成成分及所占比例為：人參抽出濃縮液粉末10％，五加皮抽出濃縮液粉末10％，榆根皮抽出濃縮液粉末10％，枳椇子抽出濃縮液粉末10％，葛根抽出濃縮液粉末10％，桔梗抽出濃縮液粉末50％。該過敏性哮喘的組合物有效抑制支氣管哮喘的氣道炎癥。
【專利說明】一種過敏性哮喘的組合物及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種過敏性哮喘的組合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]過敏性哮喘(哮喘)是嚴(yán)重威脅人類健康的慢性免疫變態(tài)反應(yīng)性疾病，近年來其發(fā)病率在全球迅速增長，占哮喘疾病總?cè)藬?shù)的2/3，近80%兒童和成人哮喘為過敏性哮喘，已成為最常見的慢性呼吸道疾病。在我國40多個(gè)大中城市，對40萬兒童進(jìn)行的大規(guī)模調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，兒童哮喘的發(fā)病率與10年前相比增加了 2.6倍，達(dá)到2.05%。WHO報(bào)道，預(yù)測到2025年還將出現(xiàn)I億例新的哮喘病患者，哮喘病將帶給各國政府、家庭及患者十分沉重的負(fù)擔(dān)，已成為全球關(guān)注的公眾健康問題。
[0003]哮喘是由嗜酸性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞等多種炎癥細(xì)胞參與的以氣道高反應(yīng)性和慢性氣道炎癥為特征的免疫變態(tài)反應(yīng)性疾病。一直以來在哮喘病的治療方法中有一個(gè)誤區(qū)，就是對癥不對因，在治療的時(shí)候通常都是用一些抗過敏的激素類的藥物，糖皮質(zhì)激素不論對慢性哮喘還是急性哮喘發(fā)作都是最有效的治療藥物，已成為防治哮喘的一線藥物。據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，具有誘導(dǎo)嗜酸性粒細(xì)胞凋亡，抑制肺成纖維細(xì)胞合成IL-6，抑制平滑肌釋放IL-8和嗜酸性粒細(xì)胞活化趨化因子，抑制上皮細(xì)胞釋放GM-CSF及T細(xì)胞增生等的作用。糖皮質(zhì)激素作為治療哮喘的主要藥物，長期反復(fù)使用可引起耐藥性和嚴(yán)重的副作用。因此，有必要研究哮喘的發(fā)病機(jī)理，尋求無耐藥性和嚴(yán)重副作用的標(biāo)本兼治哮喘防治新方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于克服上述技術(shù)存在的缺陷，提供一種過敏性哮喘的組合物及其制備方法。
[0005]其具體技術(shù)方案為 :
[0006]一種過敏性哮喘的組合物，其各組成成分及所占比例為:人參抽出濃縮液粉末10%，五加皮抽出濃縮液粉末10%，榆根皮抽出濃縮液粉末10%，枳犋子抽出濃縮液粉末10%，葛根抽出濃縮液粉末10%，桔梗抽出濃縮液粉末50%。
[0007]—種本發(fā)明所述的過敏性哮喘的組合物的制備方法，包括以下步驟:1)將權(quán)利要求I所述原材料按照其所述質(zhì)量百分含量放入提取用過濾器中；
[0008]2)將過濾器注入提取機(jī)械中再加入10倍的純凈水；
[0009]3)在110°C溫度下進(jìn)行第一次提取24h ；
[0010]4)將第一次提取物加壓過濾后進(jìn)行第二次提取；
[0011]5)第二次提取時(shí)原料中注入10倍的79%酒精；
[0012]6)在 100°C下提取 24h ；
[0013]7)將提取液真空濃縮至60_70brix ；
[0014]8)70°C 干燥；
[0015]9)粉碎；[0016]10)按比例混勻；
[0017]11)每粒膠囊中裝入500mg ；
[0018]12)灌裝；
[0019]13)裝箱。
[0020]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果為:我們成功制作了支氣管哮喘小鼠模型，發(fā)現(xiàn)哮喘模型組小鼠支氣管肺泡灌洗液中炎癥細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)較正常對照組明顯升高，差異顯著(P <0.05);哮喘組小鼠支氣管肺泡灌洗液中IL-4、IL-5、TNF-a水平升高和IFN-Y水平降低，與正常對照組比較差異顯著(P < 0.05)；哮喘模型組為哮喘組支氣管管腔被粘液所堵塞，黏膜上皮增生，黏膜下層增寬，氣道壁及氣道平滑肌明顯增厚，炎癥細(xì)胞明顯侵潤(P <0.05):哮喘模型組支氣管粘膜杯狀細(xì)胞明顯增生和增厚，一般呈粉紅色(P < 0.05)。但是，我們發(fā)現(xiàn)過敏性哮喘的組合物分低、高劑量連續(xù)灌胃服用十天后，小鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)較哮喘模型組明顯降低，差異顯著(P < 0.05);支氣管肺泡灌洗液中細(xì)胞因子IL-4、IL-5、IL-13水平降低和IFN-Y水平升高，差異顯著(P <0.05);光鏡下觀察HE染色，支氣管管腔被粘液所堵塞、黏膜上皮增生、黏膜下層增寬、氣道壁及氣道平滑肌明顯增厚、炎癥細(xì)胞明顯侵潤等癥狀明顯減輕(P < 0.05);光鏡下觀察和PAS (過碘酸雪夫)染色結(jié)果顯示，支氣管粘膜杯狀細(xì)胞增生和增厚明顯得到抑制，上述改變較哮喘組明顯減輕(P <0.05)。表明，過敏性哮喘的組合物有效抑制支氣管哮喘的氣道炎癥。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0021]圖1是支氣管肺泡灌洗液中炎癥細(xì)胞總數(shù)和各類炎癥細(xì)胞的變化圖，其中圖1a是正常組，圖1b是模型組，圖1c是清氣丸低劑量組，圖1d是清氣丸高劑量組；
[0022]圖2是肺組織HE染 色(X 200)，其中圖2a是正常組，圖2b是模型組，圖2c是清氣丸低劑量組，圖2d是清氣丸高劑量組；
[0023]圖3是肺組織PAS染色(X 200)，其中圖3a是正常組，圖3b是模型組，圖3c是清氣丸低劑量組，圖3d是清氣丸高劑量組。
【具體實(shí)施方式】
[0024]下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)地說明
[0025]1.哮喘模型的復(fù)制
[0026]無特異病原體影響的6?8周齡雄性BALB/c小鼠40只(延邊大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，體重18?22g,隨機(jī)分為四組:正常組(η = 10);模型組(η = 10);清氣丸低劑量組(η = 10);清氣丸高劑量組(η = 10)。正常組不給任何刺激。哮喘模型組小鼠第1、14天，用20g雞卵清蛋白(OVA)和2.25氫氧化鋁溶入200ul生理鹽水中腹腔注射致敏，第21、22、23天連續(xù)3天3 %的OVA生理鹽水溶液霧化吸入激發(fā)哮喘。對照組用生理鹽水代替3 %的OVA生理鹽水溶液霧化吸入。清氣丸低、高劑量組在3%的OVA生理鹽水溶液霧化吸入前一天按200、400mg/kg/d灌胃，共計(jì)11天。末次激發(fā)24h后處死小鼠，剪開頸部皮膚，并于氣管正中處剪一小口，插入氣管套管。以磷酸鹽緩沖液ImL行支氣管肺泡灌洗，來回沖洗3次，收集BALF。混勻BALF，取其中50 μ L加入等量的細(xì)胞計(jì)數(shù)液，用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)細(xì)胞。余液4°C、3000r/min離心lOmin，取上清液，_80°C低溫保存，待測細(xì)胞因子。沉淀涂片，高倍鏡下觀察嗜酸性粒細(xì)胞、中性粒細(xì)胞及淋巴細(xì)胞分類。取右肺下葉，放入液氮中速凍，_80°C保存。
[0027]2.檢測末梢血液和支氣管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)內(nèi)哮喘特異性指標(biāo)的變化
[0028]①BALF采取方法:麻醉處死并取血后的小鼠，沿正中線切開頸胸部，并剝離氣管周圍的肌組織，暴露氣管頸段切開，將細(xì)靜脈管插入氣管中，注入Iml的生理鹽水溶液，然后回抽，取得BALF。取得的BALF在200 X g，4°C下離心10分鐘，分離上清液，保存在_20°C。余下細(xì)胞用適量的生理鹽水溶液再懸浮，然后進(jìn)行細(xì)胞涂片使細(xì)胞沉淀在載玻片上。
[0029]②細(xì)胞染色及細(xì)胞因子的測定:載玻片上涂抹的血液細(xì)胞和BALF的細(xì)胞用Diff-quik染色，在100倍光學(xué)纖維鏡下，每只小鼠隨機(jī)抽取載玻片，取10個(gè)視野記錄每平方毫米內(nèi)的細(xì)胞數(shù)(n/mm2)，用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差表示，在100倍的倍率下攝片。利用ELISA Kit測定細(xì)胞因子IFN- Y、Th2細(xì)胞因子(IL-4、IL_5、IL-13等)和炎癥活性物質(zhì)。
[0030]3.組織學(xué)觀察
[0031]小鼠處死后，取出肺置于10%的甲醛溶液中固定，然后常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片(厚度4?5 μ m)，進(jìn)行組織化學(xué)染色、觀察肺部炎癥。肺組織炎癥病理學(xué)分級(jí)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):
[0032]O分:周圍血管和支氣管無細(xì)胞浸潤，無水腫，無上皮細(xì)胞損傷。
[0033]I分:周圍血管和支氣管輕度炎癥細(xì)胞浸潤、無組織損傷，輕度水腫，上皮細(xì)胞輕度損傷。
[0034]2分:周圍血管和支氣管輕-中度炎癥細(xì)胞浸潤、輕度組織損傷，中度肺泡和細(xì)支氣管水腫，上皮細(xì)胞輕度損傷 。
[0035]3分:周圍血管和支氣管中度炎癥細(xì)胞浸潤、輕度組織損傷，區(qū)域性合病灶性水腫，上皮細(xì)胞中度損傷。
[0036]4分:周圍血管和支氣管中-重度炎癥細(xì)胞浸潤、明顯組織損傷，明顯水腫，上皮細(xì)胞中度損傷。
[0037]5分:周圍血管和支氣管重度炎癥細(xì)胞浸潤、明顯組織損傷，肺炎樣水腫，上皮細(xì)胞變形。
[0038]本發(fā)明技術(shù)效果通過卵白蛋白致敏復(fù)制哮喘動(dòng)物模型，采用灌胃方式給藥用過敏性哮喘的組合物來干預(yù)治療模型小鼠的氣道炎癥。結(jié)果提示過敏性哮喘的組合物灌胃治療能明顯降低小鼠支氣管肺泡灌洗液中嗜酸性粒細(xì)胞的聚集和浸潤，明顯減輕肺組織局部的炎癥，減輕氣道炎癥平滑肌增生及氣道上皮下膠原沉積。
[0039]1、支氣管肺泡灌洗液中炎癥細(xì)胞的變化
[0040]正常對照組支氣管肺泡灌洗液中炎癥細(xì)胞總數(shù)和各類炎癥細(xì)胞數(shù)非常的少見。支氣管哮喘模型組小鼠支氣管肺泡灌洗液中炎癥細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)較正常對照組明顯升高，差異顯著(P <0.05)。過敏性哮喘的組合物主要成分為人參、五加皮、榆根皮、枳犋子、葛根、桔梗等。人參具有鎮(zhèn)靜大腦、調(diào)節(jié)神經(jīng)、刺激血管、促進(jìn)代謝、恢復(fù)疲勞、增強(qiáng)肝臟解毒功能、改善骨髓造血能力、活躍內(nèi)分泌系統(tǒng)、加強(qiáng)機(jī)體免疾反應(yīng)等功效；五加皮有抗炎鎮(zhèn)痛作用、抗應(yīng)激作用、提高免疫、抗鎘致突變作用、促進(jìn)核酸合成等藥理作用；枳犋子有顯著的解酒、保肝、抗肝纖維化及抗衰老、抗疲勞等作用；葛根對冠心病、動(dòng)脈硬化有較好的改善作用、可降低血壓、增加腦血流量、增加冠脈血流量、對心肌有保護(hù)作用、有解痙、解熱及降低血糖作用；桔梗具有祛痰、鎮(zhèn)咳、抗炎、降血壓、抗腫瘤、提高人體免疫力等廣泛的藥理活性。以上表明過敏性哮喘的組合物通過合理的配比都具有明顯的抗炎作用，可有效抑制氣道炎癥。而過敏性哮喘的組合物低、高劑量組小鼠灌胃給予以后支氣管肺泡灌洗液中炎癥細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞計(jì)數(shù)較哮喘模型組明顯降低，差異顯著(p<0.05)，見圖1和表I。
[0041]從圖1中我們可以看到哮喘模型組小鼠支氣管肺泡灌洗液中炎癥細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)較正常對照組明顯升高，差異顯著(P <0.05);而過敏性哮喘的組合物劑量組小鼠BALF中細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)較哮喘模型組明顯降低，差異顯著(P < 0.05)，見表I。
[0042]表I各組小鼠支氣管肺泡灌洗液中炎癥細(xì)胞總數(shù)和分類結(jié)果(X106/mL，7±s)
[0043]
【權(quán)利要求】
1.一種過敏性哮喘的組合物，其特征在于，其各組成成分及所占比例為:人參抽出濃縮液粉末10%，五加皮抽出濃縮液粉末10%，榆根皮抽出濃縮液粉末10%，枳犋子抽出濃縮液粉末10%，葛根抽出濃縮液粉末10%，桔梗抽出濃縮液粉末50%。
2.—種權(quán)利要求1所述的過敏性哮喘的組合物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)將權(quán)利要求1所述原材料按照其所述質(zhì)量百分含量放入提取用過濾器中； 2)將過濾器注入提取機(jī)械中再加入10倍的純凈水； 3)在110°C溫度下進(jìn)行第一次提取24h； 4)將第一次提取物加壓過濾后進(jìn)行第二次提??； 5)第二次提取時(shí)原料中注入10倍的79%酒精； 6)在100°C下提取24h； 7)將提取液真空濃縮至60-70brix； 8)70°C干燥； 9)粉碎； 10)按比例混勻； 11)每粒膠囊中裝入500mg`； 12)灌裝； 13)裝箱。
【文檔編號(hào)】A61P11/06GK103432230SQ201310355839
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年8月13日 優(yōu)先權(quán)日:2013年8月13日
【發(fā)明者】李官浩, 金炯國, 延光海, 汪庭瑞 申請人:李官浩