本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及延齡草苷在制備用于預(yù)防和/或治療小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的相關(guān)疾病、尤其是神經(jīng)免疫炎癥性疾病的藥物中的用途，尤其是涉及延齡草苷在制備用于預(yù)防和/或治療腦卒中、阿爾茨海默病、帕金森病、腦外傷、多發(fā)性硬化、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥、艾滋病相關(guān)癡呆、瘋牛病等免疫相關(guān)疾病的藥物中的用途。另外，本發(fā)明還涉及包含延齡草苷的藥物組合物及其用途。

背景技術(shù)：
小膠質(zhì)細(xì)胞(microglia)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞中的一種，其體積最小，胞體呈桿狀或橢圓，表面有許多棘突。小膠質(zhì)細(xì)胞的作用主要與巨噬細(xì)胞相似，作為中樞神經(jīng)系統(tǒng)中參與免疫反應(yīng)的主要效應(yīng)細(xì)胞，在神經(jīng)系統(tǒng)原發(fā)性疾病或感染引起的炎癥中參與免疫應(yīng)答。中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病往往伴有神經(jīng)元細(xì)胞的大量壞死以及凋亡，而這些壞死病灶周圍聚集大量激活的小膠質(zhì)細(xì)胞，并且可以檢測(cè)到其分泌的NO、腫瘤壞死因子(TNF-α)、白介素6(IL-6)等細(xì)胞因子，因此其介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在這些疾病進(jìn)程中的作用逐漸被人們所重視。某些自身免疫性神經(jīng)系統(tǒng)疾病與小膠質(zhì)細(xì)胞相關(guān)，小膠質(zhì)細(xì)胞可通過提呈抗原激活T細(xì)胞而使神經(jīng)系統(tǒng)損傷。目前，這種小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)被認(rèn)為是多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病發(fā)生或惡化的可能機(jī)制，因而引起人們的廣泛關(guān)注。阿爾茨海默病又稱為早老性癡呆，是一種神經(jīng)退行性疾病，主要病理表現(xiàn)為大腦皮質(zhì)神經(jīng)元廣泛死亡，造成大腦萎縮，但是很少累及運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元。隨著研究的不斷深入，人們發(fā)現(xiàn)：通過對(duì)阿爾茨海默病死亡患者腦組織的解剖，除了可以觀察到廣泛的神經(jīng)元纖維絞扭成團(tuán)及大量壞死的神經(jīng)元細(xì)胞，還可以在其附近發(fā)現(xiàn)被激活的小膠質(zhì)細(xì)胞及其表達(dá)產(chǎn)物，例如TNF-α、IL-6等。這表明阿爾茨海默病與小膠質(zhì)細(xì)胞的激活有關(guān)。帕金森病主要表現(xiàn)是基底節(jié)的黑質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行性變性，屬于慢性疾病。人們發(fā)現(xiàn)帕金森病患者的腦內(nèi)有大量被激活的小膠質(zhì)細(xì)胞、炎癥因子等物質(zhì)，提示帕金森病的進(jìn)程與小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)有關(guān)(參見許玲等人的小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)與中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，現(xiàn)代免疫學(xué)，2011年，第31卷，第2期：160-163頁(yè))。近幾年來，隨著研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)小膠質(zhì)細(xì)胞(microglia)的異常激活在腦卒中、阿爾茨海默病、帕金森病、腦外傷、多發(fā)性硬化、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥、艾滋病相關(guān)癡呆、瘋牛病等疾病中都發(fā)揮重要作用，是上述疾病病理發(fā)展過程中造成神經(jīng)損傷的主要病因之一。小膠質(zhì)細(xì)胞是中樞神經(jīng)系統(tǒng)免疫細(xì)胞，在腦卒中、阿爾茨海默病、帕金森病、腦外傷等疾病的病理狀態(tài)下，微環(huán)境的微小變化即可激活小膠質(zhì)細(xì)胞，使其從靜息狀態(tài)快速轉(zhuǎn)向活化狀態(tài)。整個(gè)活化過程呈現(xiàn)瀑布效應(yīng)：分化、增殖，免疫分子表達(dá)或表達(dá)上調(diào)，遷移至損害部位，發(fā)生形態(tài)、免疫顯性和功能改變等。其形態(tài)上體積增大、胞體變圓并具有變形、吞噬作用；功能上開始大量表達(dá)一些與抗原識(shí)別和提呈有關(guān)的膜表面分子，如表達(dá)主要組織相容性復(fù)合物Ⅱ(MHC)等；超表達(dá)基質(zhì)蛋白酶9(MMP9)，降解血腦屏障。更重要的是，顯著上調(diào)許多細(xì)胞因子的分泌水平，其中少部分如GDNF促進(jìn)神經(jīng)元存活，而大部分如腫瘤壞死因子α(TNFα)、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)等具有神經(jīng)元損害作用，還有趨化因子如單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1)、不規(guī)則趨化因子(Fractalkine)、巨噬細(xì)胞炎性蛋白1(MIP-1)等介導(dǎo)白細(xì)胞趨化；還產(chǎn)生一氧化氮(NO)、活性氧簇(ROS)和類花生酸類(如前列腺素E2)等，導(dǎo)致繼發(fā)性腦損害。小膠質(zhì)細(xì)胞不僅是天然免疫效應(yīng)細(xì)胞，同時(shí)參與啟動(dòng)和調(diào)節(jié)獲得性免疫，參與多發(fā)性硬化發(fā)病。因此，抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的過度活化，平衡其分泌的各種促炎因子，可以有效預(yù)防和治療腦卒中、阿爾茨海默病、帕金森病、腦外傷、多發(fā)性硬化、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥、艾滋病相關(guān)癡呆、瘋牛病等疾病。以往的文獻(xiàn)或?qū)＠脖砻?，耐勒克?naloxone，JPharmacolExpTher2000,293：607-617)、右美沙芬(dextromethorphan，JPharmacolExpTher2003，305：212-218)、四氫異喹啉衍生物(CN101553229A，中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?00780045274.0，公開日2009年10月7日)、雷公藤氯內(nèi)酯醇T4(CN101332200A，中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?00810071485.8，公開日2008年12月31日)等可以通過抑制小膠質(zhì)細(xì)胞活化防治腦部炎癥相關(guān)疾病。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了延齡草苷可用于預(yù)防和/或治療小膠質(zhì)細(xì)胞活化介導(dǎo)的疾病、特別是小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的神經(jīng)毒性作用所引起的神經(jīng)免疫炎性疾病，更特別地所述疾病選自：腦卒中、阿爾茨海默病、帕金森病、腦外傷、多發(fā)性硬化、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥、艾滋病相關(guān)癡呆、瘋牛病?；谏鲜霭l(fā)現(xiàn)，完成了本發(fā)明。本發(fā)明還提供了包含延齡草苷的藥物組合物，以及包含延齡草苷的藥物組合物在制備用于預(yù)防和/或治療小膠質(zhì)細(xì)胞活化介導(dǎo)的疾病、特別是小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的神經(jīng)毒性作用所引起的神經(jīng)免疫炎性疾病中的用途，更特別地所述疾病選自：腦卒中、阿爾茨海默病、帕金森病、腦外傷、多發(fā)性硬化、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥、艾滋病相關(guān)癡呆、瘋牛病。本發(fā)明的第一方面提供下式的延齡草苷在制備用于預(yù)防和/或治療小膠質(zhì)細(xì)胞活化介導(dǎo)的疾病的藥物中的用途，在一個(gè)實(shí)施方案中，所述疾病是小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的神經(jīng)毒性作用所引起的神經(jīng)免疫炎性疾病。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述疾病選自：腦卒中、阿爾茨海默病、帕金森病、腦外傷、多發(fā)性硬化、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥、艾滋病相關(guān)癡呆、瘋牛病。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物給予有需要的對(duì)象的每日劑量以延齡草苷計(jì)為0.01-1000mg/kg體重，優(yōu)選為0.1-100mg/kg體重，更優(yōu)選為1-100mg/kg體重。在另一個(gè)實(shí)施方案中，延齡草苷是以延齡草苷單體的形式提供的，或者是以包含延齡草苷的植物提取物的形式、優(yōu)選以包含延齡草苷的蒺藜粗皂苷的形式提供的。優(yōu)選地，所述植物包括但不限于：蒺藜(Tribulusterrestris)、延齡草(Trilliumtschonoskiimaxim)。更優(yōu)選地，所述植物提取物、優(yōu)選蒺藜粗皂苷按重量計(jì)包含30％以上、優(yōu)選為60％以上、更優(yōu)選為90％以上的延齡草苷。本發(fā)明的第二方面提供一種用于預(yù)防和/或治療小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的藥物組合物，其含有預(yù)防和/或治療有效量的延齡草苷、或者包含延齡草苷的植物提取物、優(yōu)選包含延齡草苷的蒺藜粗皂苷，任選的其他藥物以及任選的藥學(xué)可接受的載體。優(yōu)選地，所述小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的疾病為小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的神經(jīng)毒性作用所引起的神經(jīng)免疫炎性疾病。特別地，所述小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的疾病選自：腦卒中、阿爾茨海默病、帕金森病、腦外傷、多發(fā)性硬化、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥、艾滋病相關(guān)癡呆、瘋牛病。在一個(gè)實(shí)施方案中，基于所述藥物組合物中活性成分的總重量，所述延齡草苷的含量為1-99％；優(yōu)選為20-80％；更優(yōu)選為40-60％；所述其他藥物的含量為99-1％；優(yōu)選為80-20％；更優(yōu)選為60-40％。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述其他藥物選自：左旋多巴、卡比多巴、司立吉林、苯海索、苯扎托品、金剛烷胺、溴隱亭、培高利特、他克林、石杉?jí)A甲、加蘭他敏、占諾美林、鹽酸多奈哌齊、酒石酸卡巴拉汀、鹽酸美金剛、吡拉西坦、甲磺酸雙氫麥角堿、己酮可可堿、麥角溴煙酯、阿司匹林、退黑素、姜黃素、去鐵敏、艾地苯醌、甲磺酸替拉扎特和維生素C。在一個(gè)實(shí)施方案中，藥學(xué)可接受的載體選自溶劑、稀釋劑、分散劑、助懸劑、表面活性劑、等滲劑、增稠劑、乳化劑、防腐劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、穩(wěn)定劑、水合劑、乳化加速劑、緩沖劑、吸收劑、著色劑、香味劑、甜味劑、離子交換劑、脫模劑、涂布劑、矯味劑、和抗氧化劑。優(yōu)選地，所述藥物組合物為單位劑量的制劑形式，該單位劑量的制劑形式中包含0.001mg-5000mg、優(yōu)選為0.1mg-1000mg、更優(yōu)選為1mg-100mg的延齡草苷。特別地，所述藥物組合物的劑型包括但不限于片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、錠劑、丸劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、糖漿劑、散劑、細(xì)粒劑、小丸劑、酏劑、注射劑、藥用滴劑、軟膏劑、洗劑、凝膠劑、乳膏、噴霧劑、栓劑、貼劑。本發(fā)明的延齡草苷一般以藥物組合物的形式使用，這種組合物含治療有效劑量的作為活性成分的延齡草苷和可藥用輔料。含有延齡草苷的藥物組合物可通過口服、注射或粘膜給藥，可以制成片劑、膠囊、粉劑、顆粒、錠劑等劑型供臨床應(yīng)用。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。本申請(qǐng)?zhí)峁┝酥兴巻误w延齡草苷具有以下功能：減少活化小膠質(zhì)細(xì)胞NO、TNF-α等細(xì)胞毒性炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生。從而為延齡草苷應(yīng)用于腦卒中、阿爾茨海默病、帕金森病、腦外傷、多發(fā)性硬化等腦部免疫炎癥相關(guān)疾病的防治提供了直接有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ)，既有很強(qiáng)的科學(xué)性和創(chuàng)新性，又有很高的開發(fā)應(yīng)用價(jià)值。如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“延齡草苷”也稱為地索苷或延年草甙。延齡草苷的分子量為576.76，分子式為C33H52O8，CAS號(hào)為14144-06-0。本發(fā)明所用的延齡草苷是根據(jù)例如中國(guó)專利申請(qǐng)CN201110187744.5制備的，或者也可以是由商業(yè)上獲得的。根據(jù)本發(fā)明，所用的延齡草苷還可以是以包含延齡草苷的植物提取物的形式、優(yōu)選以包含延齡草苷的蒺藜粗皂苷的形式提供的。如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的疾病”包括小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的神經(jīng)毒性作用所引起的神經(jīng)免疫炎性疾病。特別地，小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的疾病選自：腦卒中、阿爾茨海默病、帕金森病、腦外傷、多發(fā)性硬化、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥、艾滋病相關(guān)癡呆、瘋牛病。如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“腦卒中”在中醫(yī)上也稱為中風(fēng)，是一種突然起病的腦血液循環(huán)障礙性疾病。如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“阿爾茨海默病”又稱為早老性癡呆，是一種神經(jīng)退行性疾病，主要臨床表現(xiàn)為隱襲的、緩慢進(jìn)展的健忘和短期記憶喪失，日常生活能力進(jìn)行性減退，并有各種神經(jīng)精神癥狀和行為障礙。如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“帕金森病”是一種中老年人常見的運(yùn)動(dòng)障礙性疾病，又稱震顫麻痹，其主要病理改變?yōu)橹心X黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元變性壞死和腦內(nèi)路易小體的形成，臨床主要表現(xiàn)為靜止性震顫、肌強(qiáng)直、運(yùn)動(dòng)遲緩等癥狀。如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“腦外傷”是指外力造成的腦部創(chuàng)傷。如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“多發(fā)性硬化”是一種由自身免疫異常所致的中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥性脫髓鞘性疾病，病程中緩解-復(fù)發(fā)是重要特點(diǎn)。如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥”是一種漸進(jìn)和致命的神經(jīng)退行性疾病，累及上運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，又影響到下運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元及其支配的軀干、四肢和頭面部肌肉的一種慢性進(jìn)行性變性疾病。如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“艾滋病相關(guān)癡呆”是指艾滋病毒所引起的一種退行性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，臨床主要表現(xiàn)為癡呆。如本文所用的，術(shù)語(yǔ)“瘋牛病”又稱為牛海綿狀腦病，是由傳染因子引起的牛的一種進(jìn)行性神經(jīng)系統(tǒng)的傳染性疾病，是一種傳染性海綿狀腦病。該病的主要特征是牛腦發(fā)生海綿狀病變，并伴隨大腦功能退化，臨床表現(xiàn)為神經(jīng)錯(cuò)亂、運(yùn)動(dòng)失調(diào)、癡呆和死亡。如本文使用的，術(shù)語(yǔ)“治療”具有其一般含義，并且在本文特別地是指對(duì)已經(jīng)罹患小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的疾病特別是本發(fā)明所述的小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的動(dòng)物個(gè)體采用本發(fā)明的藥物進(jìn)行處理，以期對(duì)所述疾病產(chǎn)生治療、治愈、緩解、減輕等作用。類似地，如本文使用的，術(shù)語(yǔ)“預(yù)防”具有其一般含義，并且在本文特別地是指對(duì)可能罹患本發(fā)明所述小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的疾病或者對(duì)本發(fā)明所述小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的疾病具有罹患風(fēng)險(xiǎn)的動(dòng)物個(gè)體采用本發(fā)明的藥物進(jìn)行處理，以期對(duì)所述疾病產(chǎn)生防止、預(yù)防、阻止、隔斷等作用。可采用制劑領(lǐng)域中的常規(guī)技術(shù)，通過藥品生產(chǎn)中常用的提取分離純化手段得到本發(fā)明藥物組合物的原料的有效成分，與一種或更多種藥學(xué)可接受的載體混合，然后形成所需的劑型，來制備本發(fā)明的藥物組合物。如本文所用的，“藥學(xué)可接受的”表示當(dāng)以通常用藥劑量使用時(shí)沒有實(shí)質(zhì)的毒性作用，從而可被政府或與其相當(dāng)?shù)膰?guó)際組織批準(zhǔn)或者已被批準(zhǔn)用于動(dòng)物，更特別地用于人，或者被登錄在藥典上。本發(fā)明藥物組合物中可用的“藥學(xué)可接受的載體”可以是藥物制劑領(lǐng)域中任何常規(guī)的載體，特定載體的選擇將取決于用于治療特定患者的給藥方式或疾病類型和狀態(tài)。用于特定給藥模式的合適藥物組合物的制備方法完全在藥物領(lǐng)域技術(shù)人員的知識(shí)范圍內(nèi)。例如，可以作為藥學(xué)可接受的載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的溶劑、稀釋劑、分散劑、助懸劑、表面活性劑、等滲劑、增稠劑、乳化劑、粘合劑、潤(rùn)滑劑、穩(wěn)定劑、水合劑、乳化加速劑、緩沖劑、吸收劑、著色劑、離子交換劑、脫模劑、涂布劑、矯味劑、和抗氧化劑等。必要時(shí)，還可以在藥物組合物中加入香味劑、防腐劑和甜味劑等。如本文使用的，術(shù)語(yǔ)“有效量”是指本發(fā)明所述活性成分的量，該量足以對(duì)本發(fā)明所述的小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的疾病進(jìn)行有效的治療和/或預(yù)防。如本文使用的，術(shù)語(yǔ)“藥物組合物”具有其一般含義。此外，本發(fā)明的“藥物組合物”還可以以保健品、功能性食品、食品、食品添加劑等形式存在或提供?？刹捎弥扑庮I(lǐng)域特別是制劑領(lǐng)域中的常規(guī)技術(shù)，通過藥品生產(chǎn)中常用的提取分離純化手段得到本發(fā)明的藥物組合物的原料的有效成分，任選地與一種或更多種藥學(xué)可接受的載體混合，然后形成所需的劑型，來制備本發(fā)明的藥物組合物。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物，其為可以適用于口服給藥、胃腸外給藥或局部給藥、外用給藥的藥物制劑。本發(fā)明的藥物組合物可以制成片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊、口服液等多種形式。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。具體地說，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物，所述的藥物劑型包括但不限于：片劑、膠囊劑、顆粒劑、粉劑、注射液、注射用粉劑、透皮貼劑、軟膏劑、凝膠劑、栓劑、口服溶液、口服混懸液、注射用乳劑、口服乳劑等、緩釋片劑、控釋片劑。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。用于口服施用的劑型可包括例如片劑、丸劑、硬或軟膠囊劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、糖漿劑、散劑、粉劑、細(xì)粒劑、顆粒劑、小丸劑、酏劑等，并不限于此。除了活性成分外，這些制劑還可包含稀釋劑(例如乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇、纖維素和甘氨酸)、潤(rùn)滑劑(例如二氧化硅、滑石、硬脂酸或其鎂鹽、鈣鹽和聚乙二醇)。片劑還可包含粘合劑，例如硅酸鎂鋁、淀粉糊、明膠、黃芪膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和聚乙烯吡咯烷。必要時(shí)，其還可包含藥用添加劑，例如崩解劑(如淀粉、瓊脂、海藻酸或其鈉鹽)、吸收劑、著色劑、香味劑、甜味劑等。片劑可根據(jù)常用的混合、造粒或包衣的方法制備。用于腸道外施用的劑型可包括例如注射劑、藥用滴劑、軟膏劑、洗劑、凝膠劑、乳膏、噴霧劑、混懸劑、乳劑、栓劑、貼劑等，并不限于此。根據(jù)本公開的藥物組合物可口服或非腸道例如經(jīng)直腸、經(jīng)局部、經(jīng)皮膚、經(jīng)靜脈內(nèi)、經(jīng)肌內(nèi)、經(jīng)腹膜內(nèi)或經(jīng)皮下施用。如本文使用的，術(shù)語(yǔ)“個(gè)體”或者“動(dòng)物個(gè)體”具有其一般含義，并且在本文中可以指罹患或可能罹患本發(fā)明所述小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的疾病的個(gè)體或動(dòng)物個(gè)體，還可以指為了某種目的例如為了科學(xué)研究目的而使用的個(gè)體或動(dòng)物個(gè)體。具體地說，所述的個(gè)體例如是動(dòng)物個(gè)體，特別是哺乳動(dòng)物個(gè)體，例如人、豬、狗、貓、牛、羊、馬、大鼠、小鼠、家兔、豚鼠、猴等。更具體地說，本發(fā)明所述的個(gè)體是人?；钚猿煞值乃帉W(xué)可接受的劑量，即施用劑量，可以根據(jù)待治療對(duì)象的年齡、性別和體重、待治療的具體疾病或病理狀態(tài)、疾病或病理狀態(tài)的嚴(yán)重程度、施用途徑和診斷者的判斷而改變。考慮這些因素確定施用劑量在本領(lǐng)域技術(shù)人員的水平范圍內(nèi)。一般的劑量可以是0.01-1000mg/kg/日，具體地1-100mg/kg/日。然而，本公開的范圍不以任何方式受限于所述施用劑量。附圖說明為了更清楚地說明本發(fā)明，下面將對(duì)附圖作簡(jiǎn)單地介紹，其中：圖1：延齡草苷對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞活力的影響。BV-2細(xì)胞加入延齡草苷(1、5、10μmol/L)孵育24h后，棄上清，加入CCK-8，繼續(xù)孵育0.5h，于450nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。圖2：延齡草苷對(duì)激活小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞系BV-2產(chǎn)生炎癥介質(zhì)(NO)水平的影響。不同濃度的延齡草苷(1、5、10μmol/L)預(yù)孵育BV-2細(xì)胞0.5h，然后加入細(xì)菌細(xì)胞壁脂多糖(Lipopolysaccharide，以下簡(jiǎn)稱為L(zhǎng)PS)(0.1μg/mL)進(jìn)行刺激。培養(yǎng)24h后收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液，Greiss法檢測(cè)NO的濃度。#p＜0.05，與對(duì)照組相比；*p＜0.05，與模型組比較。圖3a-3d：分別示出延齡草苷對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β、IL-6、iNOS、COX-2mRNA表達(dá)的影響。小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞系BV-2加入延齡草苷(10μmol/L)預(yù)孵育0.5h，然后加入LPS(0.1μg/mL)進(jìn)行刺激8h。用PBS洗1次，以Trizol試劑提取細(xì)胞總RNA。采用TaqManReverseTranscriptionReagents試劑盒將總RNA(1.5μg)反轉(zhuǎn)錄為cDNA(20μl體系)。取1μl的cDNA產(chǎn)物用作定量PCR擴(kuò)增的模板。看家基因GAPDH作為內(nèi)參。值用均數(shù)+標(biāo)準(zhǔn)差(mean+SD)表示，n＝3。#p＜0.05，與對(duì)照組相比；*p＜0.05，與模型組比較。圖4：延齡草苷對(duì)激活小膠質(zhì)細(xì)胞系BV-2產(chǎn)生炎癥介質(zhì)TNF-α水平的影響。延齡草苷(10μmol/L)預(yù)孵育BV-2細(xì)胞0.5h，然后加入LPS(0.1μg/mL)進(jìn)行刺激。培養(yǎng)24h后收集細(xì)胞培養(yǎng)上清液，Elisa法檢測(cè)細(xì)胞因子TNF-α含量。值用均數(shù)+標(biāo)準(zhǔn)差(mean+SD)表示，n＝3。#p＜0.05，與對(duì)照組相比；*p＜0.05，與模型組比較。具體實(shí)施方式中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的小膠質(zhì)細(xì)胞來源于胚胎期的骨髓單核細(xì)胞，是腦內(nèi)免疫反應(yīng)的抗原遞呈細(xì)胞和主要的免疫效應(yīng)細(xì)胞，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)免疫反應(yīng)過程中發(fā)揮著非常關(guān)鍵的作用。正常情況下，腦內(nèi)的小膠質(zhì)細(xì)胞處于靜止?fàn)顟B(tài)。在腦卒中、阿爾茨海默病、帕金森病、腦外傷、多發(fā)性硬化、肌萎縮性脊髓側(cè)索硬化癥、艾滋病相關(guān)癡呆、瘋牛病等神經(jīng)退變性疾病發(fā)病過程中，小膠質(zhì)細(xì)胞異常激活，它的作用除了吞噬清除變性死亡的神經(jīng)元之外，還分泌促炎因子和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，可能參與炎癥反應(yīng)和神經(jīng)元的修復(fù)與再生。小膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)具有可塑性，在靜止?fàn)顟B(tài)為分支狀，接受損傷信號(hào)刺激后細(xì)胞體積增大，突起伸長(zhǎng)、增多，成為高度分支化的小膠質(zhì)細(xì)胞，這是介于靜止和激活之間的一種中間狀態(tài)，它們很快演變?yōu)榧せ畹男∧z質(zhì)細(xì)胞和腦吞噬細(xì)胞，所以可以根據(jù)形態(tài)的改變協(xié)助判斷小膠質(zhì)細(xì)胞是否處于激活狀態(tài)。在LPS作用下，NO形成和釋放量明顯增加。NO可抑制線粒體復(fù)合體I的活性，使線粒體合成ATP減少，細(xì)胞由于能量耗竭而死亡。NO還可以與超氧離子發(fā)生反應(yīng)形成毒性更大的亞硝酸鹽自由基，直接攻擊細(xì)胞的核酸、蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等生物大分子，引起細(xì)胞死亡。除了NO之外，激活的小膠質(zhì)細(xì)胞還會(huì)分泌多種細(xì)胞因子例如TNF-α、IL-1α、IL-1β、IFN-γ、IL-6、表皮生長(zhǎng)因子等，而細(xì)胞因子與炎癥反應(yīng)的發(fā)生和神經(jīng)元的損傷修復(fù)、再生密切相關(guān)。其中TNF-α在炎癥反應(yīng)過程中具有非常重要的作用。LPS能刺激小膠質(zhì)細(xì)胞分泌TNF-α，TNF-α可促進(jìn)星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞合成集落刺激因子(colonystimulatingfactor，CSF)。CSF可以作為白細(xì)胞趨化因子吸引血液循環(huán)中的粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞到達(dá)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥部位，參與炎癥反應(yīng)，從而放大了炎癥。TNF-α還可誘導(dǎo)神經(jīng)元MHCI表達(dá)上調(diào)，使它們易受MHCI限制性細(xì)胞毒性T細(xì)胞攻擊。此外，TNF-α可干擾神經(jīng)元和星形角質(zhì)細(xì)胞的電生理特性，體外研究發(fā)現(xiàn)TNF-α可影響細(xì)胞膜電位、細(xì)胞內(nèi)Ca2+平衡和長(zhǎng)時(shí)程增強(qiáng)，因此與炎癥過程中的細(xì)胞功能異常有關(guān)(參見周慧芳等人的帕金森病炎癥/免疫異常細(xì)胞模型的建立，中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志，2003年，第2卷，第1期：48-51頁(yè))。下面將結(jié)合附圖，以具體實(shí)施例的方式對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。顯然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明的一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。下述實(shí)施例中所用的實(shí)驗(yàn)材料和方法，如無特別說明，均為常規(guī)材料和方法。制備實(shí)施例1：制備延齡草苷片劑根據(jù)常用方法混合以上成分并制成片劑。制備實(shí)施例2：制備延齡草苷膠囊根據(jù)常用方法混合以上成分并裝入明膠膠囊中。制備實(shí)施例3：制備本發(fā)明藥物組合物的片劑根據(jù)常用方法混合以上成分并制成片劑。制備實(shí)施例4：制備本發(fā)明藥物組合物的膠囊根據(jù)常用方法混合以上成分并裝入明膠膠囊中。實(shí)施例1：延齡草苷對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞活力的影響B(tài)V-2細(xì)胞(購(gòu)自協(xié)和醫(yī)科大學(xué)細(xì)胞庫(kù))加入延齡草苷(1、5、10μmol/L)培養(yǎng)24h后，棄上清，加入CCK-8，繼續(xù)孵育0.5h，于450nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。結(jié)果如表1所示。表1：延齡草苷對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞活力的影響相應(yīng)的結(jié)果也示于圖1中。如圖1中所明確地示出的，延齡草苷不能抑制細(xì)胞活力，不引起細(xì)胞死亡。實(shí)施例2：延齡草苷對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞分泌炎性介質(zhì)的影響Greiss法的基本原理：生物系統(tǒng)中的NO釋放后很快轉(zhuǎn)變?yōu)镹O2-和NO3-，后兩者性質(zhì)穩(wěn)定，因此可以通過測(cè)定NO2-或NO3-來間接反映NO生成量。NO2-在酸性環(huán)境下與對(duì)氨基苯磺酸其加成反應(yīng)，其產(chǎn)物與N-(1-萘基)-乙二胺發(fā)生反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物在548nm處有吸收峰。完全DMEM培養(yǎng)基(購(gòu)自invitrogen公司)培養(yǎng)小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞系BV-2及原代培養(yǎng)的大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞。調(diào)整細(xì)胞濃度為4×105/mL，接種到48孔培養(yǎng)板內(nèi)過夜，加入不同濃度的延齡草苷(終濃度為1、5、10μmol/L)預(yù)孵育0.5h，然后加入內(nèi)毒素(LPS，終濃度0.1μg/mL)進(jìn)行刺激。實(shí)驗(yàn)分組：正常對(duì)照組、LPS組、陽(yáng)性對(duì)照組米諾環(huán)素(Mino)和延齡草苷加LPS組。用Greiss法檢測(cè)NO的濃度。表2：延齡草苷對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞分泌炎性介質(zhì)的影響結(jié)果：陽(yáng)性對(duì)照米諾環(huán)素(Mino)可以抑制LPS引起的NO的釋放。延齡草苷干預(yù)也能明顯抑制LPS引起的NO的釋放，并在1-10μmol/L濃度范圍內(nèi)呈劑量依賴性，見圖2。實(shí)施例3：延齡草苷對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β、IL-6、iNOS、COX-2mRNA表達(dá)的影響。小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞系BV-2，種于12孔培養(yǎng)板內(nèi)過夜，加入延齡草苷(10μmol/L)預(yù)孵育0.5h，然后加入LPS(0.1μg/mL)進(jìn)行刺激8h。用PBS洗1次，以Trizol試劑(購(gòu)自invitrogen公司)提取細(xì)胞總RNA。取樣品進(jìn)行波長(zhǎng)為260nm和280nm的紫外檢測(cè)，分析總RNA的度并進(jìn)行定量。采用TaqManReverseTranscriptionReagents試劑盒(由AppliedBiosystems公司出售)和oligod(T)16引物(購(gòu)自AppliedBiosystems公司)將總RNA(1.5μg)反轉(zhuǎn)錄為cDNA(20μl體系)。1μl的cDNA產(chǎn)物用作定量PCR擴(kuò)增的模板。PCR擴(kuò)增反應(yīng)采用SYBRGreenPCRMasterMixreagentkits試劑盒(AppliedBiosystems公司)和相應(yīng)特異引物。。表3：延齡草苷對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞IL-1β、IL-6、iNOS、COX-2mRNA表達(dá)的影響組別IL-1βmRNAIL-6mRNAiNOSmRNACOX-2mRNA正常對(duì)照組1.0091.0161.0271.075LPS組133.041100.53018.15514.791LPS+延齡草苷組5.5707.9236.8942.745結(jié)果：LPS可以顯著地增加BV-2細(xì)胞IL-1β、IL-6、iNOS、COX-2mRNA的表達(dá)；而延齡草苷顯著降低了LPS誘導(dǎo)的IL-1β、IL-6、iNOS、COX-2mRNA表達(dá)，見圖3。實(shí)施例4：延齡草苷對(duì)激活小膠質(zhì)細(xì)胞系BV-2產(chǎn)生炎癥介質(zhì)TNF-α水平的影響Elisa法基本原理：用特異性單抗包被的酶標(biāo)板吸附待測(cè)抗原，再順次將生物素標(biāo)記的單抗、結(jié)合辣根過氧化物酶的鏈酶卵白素連接于待測(cè)抗原，加底物TMB顯色，波長(zhǎng)450nm處測(cè)吸光度。完全DMEM培養(yǎng)基(含10％胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL鏈霉素)培養(yǎng)小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞系BV-2及原代培養(yǎng)的大鼠小膠質(zhì)細(xì)胞。調(diào)整細(xì)胞濃度為4×105/mL，接種到48孔培養(yǎng)板內(nèi)過夜，加入延齡草苷(終濃度10μmol/L)預(yù)孵育0.5h，然后加入內(nèi)毒素(LPS，終濃度0.1μg/mL)進(jìn)行刺激。實(shí)驗(yàn)分組：正常對(duì)照組、LPS組和延齡草苷加LPS組。培養(yǎng)24h收集各處理組細(xì)胞培養(yǎng)上清液，用Elisa法檢測(cè)細(xì)胞因子TNF-α含量。操作步驟按試劑盒說明書(R&DSystems公司)完成。表4：延齡草苷對(duì)激活小膠質(zhì)細(xì)胞系BV-2產(chǎn)生炎癥介質(zhì)TNF-α水平的影響組別TNF-α(pg/ml)正常對(duì)照組-46.458LPS組2104.578LPS+延齡草苷組342.138結(jié)果：在正常情況下小膠質(zhì)細(xì)胞BV-2培養(yǎng)上清中TNF-α含量極低，當(dāng)用0.1μg/mLLPS刺激后，TNF-α的含量顯著增高。而延齡草苷干預(yù)能明顯抑制LPS引起的TNF-α的釋放，見圖4。綜上所述，延齡草苷不僅能夠減少活化小膠質(zhì)細(xì)胞NO、TNF-α等細(xì)胞毒性炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生，而且能夠顯著降低LPS誘導(dǎo)的IL-1β、IL-6、iNOS、COX-2mRNA的表達(dá)。這表明延齡草苷可以用于防治小膠質(zhì)細(xì)胞活化介導(dǎo)的疾病，尤其是小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的神經(jīng)毒性作用所引起的神經(jīng)免疫炎性疾病，例如腦卒中、阿爾茨海默病、帕金森病、腦外傷、多發(fā)性硬化等。