專利名稱：丙型肝炎病毒b細(xì)胞表位肽puhi37及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于免疫學(xué)領(lǐng)域，具體地說，涉及丙型肝炎病毒B細(xì)胞表位肽PUHI37及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
丙型肝炎病毒(!fepatitis C virus，HCV)為單股正鏈RNA病毒，隸屬于黃病毒科。HCV基因組包括一個單一的長開放閱讀框編碼約由3000個氨基酸殘基組成的聚合蛋白。聚合蛋白在細(xì)胞和病毒蛋白酶的作用下，裂解為三種主要結(jié)構(gòu)蛋白和幾種病毒復(fù)制必須的非結(jié)構(gòu)蛋白。HCV基因組高度變異，高度變異的分離株之間僅有60%核苷酸序列是同源的。HCV目前可分為6個基因型及不同亞型，HCVlb和2a基因型在我國較為常見，其中以Ib型為主。某些地區(qū)有l(wèi)a、2b和3b型報道，6型主要見于香港和澳門地區(qū)，在南方邊境省份也可見此基因型。目前全球約有1.8億人感染了 HCV，其中約80%的感染者會慢性化，進(jìn)而發(fā)展為肝硬化和肝細(xì)胞性肝癌。在我國，HCV慢性感染者約為650萬。針對HCV慢性感染，最主要的治療方式為干擾素聯(lián)合利巴韋林的標(biāo)準(zhǔn)化治療，但針對基因I型和4型治療效果較差,且因毒副作用明顯，治療費(fèi)用較高，而使大量HCV感染者被迫放棄治療。由HCV感染導(dǎo)致的肝移植在西方國家已成為肝移植手術(shù)的最主要原因，在我國亦是重要原因之一，而標(biāo)準(zhǔn)化治療方案對阻斷HCV感染導(dǎo)致的移植肝臟再感染療效較差，迫切需要新的預(yù)防、治療方案。目前，已鑒定出較多的針對HCV包膜蛋白的保護(hù)性B細(xì)胞表位，例如313-327、396-407,412-423和613-621等，這些表位相應(yīng)的抗體針對HCV具有較好的中和活性。研究較多的一條保護(hù)性線性B細(xì)胞表位肽412-423 (QLINTNGSWHIN)，其相應(yīng)的抗體，命名為HCVI,已完成臨床二期實(shí)驗(yàn)，在黑猩猩動物模型中，250mg/kg HCVl能完全阻斷HCV代表株H77 (Ia基因亞型)的感染。這表明在HCV感染導(dǎo)致的肝移植領(lǐng)域，該抗體在阻斷移植肝臟HCV的再感染方面應(yīng)用前景廣闊，在HCV疫苗的研制方面，也有較為廣闊的應(yīng)用前景。一系列實(shí)驗(yàn)表明，保護(hù)性表位的鑒定，在HCV感染的預(yù)防和治療領(lǐng)域，都具有十分廣闊的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種新型的丙型肝炎病毒B細(xì)胞表位肽PUHI37及其應(yīng)用。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明提供了一種丙型肝炎病毒B細(xì)胞表位肽PUHI37，其氨基酸組成為TDVLLLNNTRPPQGN。本發(fā)明是將已報道的中國人Ib基因亞型HCV分離株包膜蛋白序列進(jìn)行序列比對，找出包膜蛋白全長的共識序列。應(yīng)用重疊肽的方法，將HCV包膜蛋白全長(共識序列)，即從第192位氨基酸至第746位氨基酸(以丙型肝炎病毒H77為參考標(biāo)準(zhǔn)，AccessionN0.NC- 004102)，拆分為57條不同的多肽(不包括跨膜區(qū))，其中序列192_35、384_413、444-523,544-613和624-717中，每條多肽長度為20個氨基酸，相鄰多肽重疊10個氨基酸；序列404-453、514-553和604-633中，每條多肽長度為15個氨基酸，相鄰多肽重疊10個氨基酸。通過人工合成法合成這些多肽，分別將這些多肽免疫Balb/c小鼠，以獲取多克隆抗體(抗血清)，共免疫3次，每次間隔2周，50 μ g/次。將獲得的多克隆抗體進(jìn)行效價檢測，方法包括間接ELISA(參考文獻(xiàn):Ndongo N, Berthillon P, Pradat P, Vieux C, Bordes I, BerbyF, Maynard M, Zoulim F，Trepo C, Petit MA.Hepatology2010; 52:1531-1542.)0 將血清按比例稀釋為 1:1000、1:2000、1:4000、1:8000、1:16000、1:32000、1:64000 和 1:128000 八個濃度，在1:128000稀釋比例下，490nm處OD值> 0.25，且1:128000稀釋濃度時多克隆抗體OD值與陰性對照孔OD值比值> 2，被判定為多克隆抗體效價合格。將獲得的HCV多克隆抗體，進(jìn)行HCV假病毒顆粒(HCV-pseudotyped particles, HCVpp)中和實(shí)驗(yàn),方法包括包裝具有熒光素酶報告基因的la、lb、2a、3a、4a、5和6共七種不同基因型/亞型的HCVpp(參考文獻(xiàn):Tong Y, Zhu Y, Xia X, Liu Y, Feng Y, Hua X, Chen Z, Ding H, Gao L, Wang Y, FeitelsonMA, Zhao P，Qi ZT.J Virol，2011; 85:2793-2802.)，然后將 57 種 HCV 多克隆抗體，分別按不同的稀釋比例，與七種不同基因型/亞型的HCVpp分別混合，然后加入至預(yù)接種Huh7.5細(xì)胞的96孔板中，72小時后檢測熒光素酶活性，并與對照孔進(jìn)行比較，以確定不同多克隆抗體中和 HCVpp 的活性(參考文獻(xiàn):Tarr AW, Urbanowicz RA, Jayaraj D, Brown RJ, McKeatingJA, Irving WL, Ball JK.J Virol2012; 86:2739-2749.)，進(jìn)而確定保護(hù)性 B 細(xì)胞表位肽。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，序列534-548 (以丙型肝炎病毒H77為參考標(biāo)準(zhǔn)，AccessionN0.NC_004102)為保護(hù)性B細(xì)胞表位肽，相應(yīng)的氨基酸組成為TDVLLLNNTRPPQGN，將其命名為PUHI37，其相應(yīng)的多克隆抗體能中和Ib基因亞型HCVpp。本發(fā)明還提供所述丙型肝炎病毒B細(xì)胞表位肽PUHI37在制備抗HCV藥物及HCV預(yù)防性疫苗中的應(yīng)用。以PUHI37表位肽作為免疫原，輔以佐劑免疫實(shí)驗(yàn)動物(如Balb/c小鼠)，制備多克隆抗體?；蛘?，以PUHI37表位肽作為免疫原，輔以佐劑免疫實(shí)驗(yàn)動物，采用雜交瘤技術(shù)和DNA重組技術(shù)，制備出識 別PUHI37表位肽抗原的人源化單克隆抗體。將以上制得的多克隆抗體或單克隆抗體單獨(dú)或聯(lián)合用于阻斷Ib基因型慢性HCV感染者肝移植術(shù)中及術(shù)后HCV再感染。本發(fā)明進(jìn)一步提供HCVlb基因亞型中和性抗體，其是以所述的丙型肝炎病毒B細(xì)胞表位肽PUHI37為免疫原，輔以佐劑免疫實(shí)驗(yàn)動物(如Balb/c小鼠)，制備的多克隆抗體。前述的中和性抗體，將PUHI37表位肽分別與載體蛋白KLH和BSA偶聯(lián)(其中，BSA偶聯(lián)表位肽用于免疫完成后Balb/c小鼠血清抗體滴度檢測)(參考文獻(xiàn)=DarwishIA, Alzoman NZ, Abuhejail RM, El-Samani TE.Chem Cent J2012; 6:125.), KLH 偶聯(lián)表位月太抗原和佐劑按等體積混合，乳化后，采用皮下注射法分3次免疫Balb/c小鼠，免疫完成后，收集血清中的抗體，即得。具體地，將PUHI37表位肽分別與載體蛋白KLH和BSA偶聯(lián)(其中，BSA偶聯(lián)表位肽用于免疫完成后Balb/c小鼠血清抗體滴度檢測)，KLH偶聯(lián)表位肽抗原和佐劑按等體積混合，乳化完全后，分別于第I天、15天、29天以頸背部多點(diǎn)皮下注射法免疫8-12周齡的Balb/c小鼠，共免疫3次，第一次使用氟氏完全佐劑，后兩次使用不完全氟氏佐劑，每只小鼠每次注射500 μ I乳化后抗原，抗原量為50 μ g，免疫完成后，血清中的抗體滴度采用間接ELISA方法進(jìn)行檢測。收集血清中的抗體，即得。
本發(fā)明通過重疊肽的方法，找到丙型肝炎病毒包膜蛋白新的線性保護(hù)性B細(xì)胞表位肽，并獲得了能夠中和丙型肝炎病毒Ib基因亞型HCVpp的保護(hù)性抗體，這些抗體識別的表位肽即為保護(hù)性B細(xì)胞表位肽，其氨基酸組成為TDVLLLNNTRPPQGN，位置為534-548(以丙型肝炎病毒H77為參考標(biāo)準(zhǔn)，Accession N0.NC_004102)。該保護(hù)性B細(xì)胞表位肽的確定，為HCV治療性抗體的研發(fā)和HCV預(yù)防性疫苗的研發(fā)提供了新的解決方案。


圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中篩選HCV包膜蛋白保護(hù)性B細(xì)胞表位肽的流程示意圖。圖2為本發(fā)明實(shí)施例2中保護(hù)性B細(xì)胞表位肽534-548 (PUHI37)相應(yīng)抗體效價檢測結(jié)果。圖3為本發(fā)明實(shí)施例3中保護(hù)性B細(xì)胞表位肽534-548 (PUHI37)相應(yīng)抗體的Ib基因亞型HCVpp中和實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例用于說明本發(fā)明，但不用來限制本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段，所用原料均為市售商品。實(shí)施例1丙型肝炎病毒B細(xì)胞表位肽PUHI37的獲得1.1多肽抗原及多克隆抗體的制備在NCBI數(shù)據(jù)庫中查找已報道的中國人Ib基因亞型HCV分離株HCV全長蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)，將收集到的序列 進(jìn)行比對，找出包膜蛋白全長(以丙型肝炎病毒H77為參考標(biāo)準(zhǔn)，Accession N0.NC_004102，氨基酸殘基位置為192-747)的共識序列。從第192為氨基酸殘基開始，人工合成長度為20個氨基酸的多肽，相鄰多肽重疊10個氨基酸(例如第一條序列為192-211，第二條則為202-221，以此類推)。序列404-453,514-553和604-633包括CD81 (HCV侵入細(xì)胞的受體之一)可能的結(jié)合位點(diǎn)，在此序列范圍內(nèi)的每條合成多肽長度為15個氨基酸，相鄰多肽重疊10個氨基酸。包膜蛋白跨膜區(qū)序列不在合成多肽范圍之內(nèi)，共合成57條多肽。將每條多肽分別與載體蛋白KLH和BSA偶聯(lián)(參考文獻(xiàn)=DarwishIA, Alzoman NZ, Abuhejail RM, El-Samani TE.Chem Cent J 2012; 6:125.)，其中，BSA 偶聯(lián)多肽用于免疫完成后Balb/c小鼠血清抗體滴度檢測，KLH偶聯(lián)多肽抗原和佐劑按等體積混合，乳化完全后分別于第I天、15天、29天以頸背部多點(diǎn)皮下注射的方法免疫Balb/c小鼠(8-12周齡)，共3次。第一次氟氏完全佐劑，后兩次為不完全氟氏佐劑，每只小鼠每次注射500 μ I乳化后抗原，抗原量為50 μ g。免疫完成后，血清中抗體滴度采用間接ELISA方法進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示46條多肽獲得相應(yīng)多克隆抗體(抗血清)，11條多肽未產(chǎn)生相應(yīng)抗體。1.2HCVpp 的制備HCVpp 由 HCV 包膜蛋白 E1E2 表達(dá)質(zhì)粒和 HIV gag/pol (pLPl)、HIV rev (pLP2)、編碼熒光素酶的pLenti6質(zhì)粒一起共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞獲得。HCV包膜蛋白E1E2表達(dá)質(zhì)粒是將HCV包膜蛋白E1E2編碼序列克隆至pCR3.1載體構(gòu)建而成，轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞后，可以表達(dá)出HCV包膜蛋白E1E2。本發(fā)明中所用7種不同基因型/亞型HCV包膜蛋白E1E2DNA編碼序列來自于不同基因型HCV感染者，將這些DNA編碼序列分別克隆至pCR3.1 (Invitrogen)載體，構(gòu)建HCV包膜蛋白E1E2表達(dá)質(zhì)粒，具體方法參考Lavillette D, Tarr AW, VoissetC，Donot P, Bartosch B,Bain C, Patel AH, Dubuisson J, Ball JK, Cosset FL.Hepatology2005;41:265-274.。HIV gag/pol (pLPl)、HIV rev (pLP2)、編碼熒光素酶的 pLenti6 質(zhì)粒購自invitrogen公司。HCVpp的制備過程包括:分別將7種不同基因型/亞型(基因la、lb、2a、3a、4a、5 和 6 型)的 HCV包膜蛋白 E1E2 表達(dá)質(zhì)粒與 HIV gag/pol (pLPl)、HIV rev(pLP2)、編碼熒光素酶的pLenti6質(zhì)粒一起共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，轉(zhuǎn)染后置于37°C細(xì)胞培養(yǎng)箱中，孵育48小時后收集含有HCVpp的細(xì)胞培養(yǎng)上清，即可獲得7種不同基因型/亞型的HCVpp(參考文獻(xiàn):Tong Y, Zhu Y, Xia X, Liu Y, Feng Y, Hua X, Chen Z, Ding H, Gao L, Wang Y, FeitelsonMA, Zhao P, Qi ZT.J Virol，2011; 85:2793-2802.)。0.45 μ m 濾器過濾后，應(yīng)用美國 PALL 公司IOOK超濾濃縮離心管濃縮20倍，即可用于HCVpp中和實(shí)驗(yàn)。1.3HCVpp中和實(shí)驗(yàn)和熒光素酶活檢測將Huh7.5細(xì)胞預(yù)接種于含DMEM完全培養(yǎng)基的96孔板中，接種密度為IXlO4/孔。置于37°C細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育。第二天，將含HCVpp的上清(20 μ I/孔)和不同的多克隆抗體及陰性對照血清以不同的稀釋比例混合(多克隆抗體及陰性對照血清稀釋比例分別為1:50、1:100、1:200、1:400、1:800)，未加多克隆抗體及陰性血清的HCVpp上清亦作為對照，并加入終濃度為4 μ g/ml的聚凝胺(polybrene),總體積為100 μ I/孔(不足100 μ I用DMEM完全培養(yǎng)基補(bǔ)足至IOOy 1)，37°C孵育I小時，然后加至96孔板中，每個稀釋濃度均做3個平行孔。37°C孵育5小時后，棄去細(xì)胞培養(yǎng)上清，更換為新鮮的完全DMEM培養(yǎng)基，37°C孵育72小時。用熒光素酶檢測系統(tǒng)(Promega)檢測，方法包括棄去細(xì)胞培養(yǎng)上清，PBS洗I遍，加入細(xì)胞裂解液20 μ I/孔，孵育10分鐘后加入底物熒光素100 μ I/孔，放入至熒光發(fā)光檢測儀讀取數(shù)值。1.4中和性多克隆抗體和保護(hù)性B細(xì)胞表位肽的確定與未加多克隆抗體和陰性對照血清的對照孔相比，加入多克隆抗體后，熒光素酶活性值降低50%及以上 ，認(rèn)為有中和活性。PUHI37相應(yīng)抗體在1:50稀釋比例時，能降低Ib基因亞型HCVpp感染細(xì)胞熒光素酶活性約50%，可以認(rèn)定為該多克隆抗體為中和性多克隆抗體，其識別的表位肽，即PUHI37 (氨基酸組成為TDVLLLNNTRPPQGN)，為保護(hù)性B細(xì)胞表位肽。篩選HCV包膜蛋白保護(hù)性B細(xì)胞表位肽的流程示意圖如圖1所示。實(shí)施例2保護(hù)性B細(xì)胞表位肽534-548 (PUHI37)相應(yīng)抗體制備及效價檢測1.1保護(hù)性B細(xì)胞表位肽534-548 (PUHI37)相應(yīng)抗體的制備將人工合成的丙型肝炎病毒B細(xì)胞表位肽PUHI37表位肽分別與KLH和BSA偶聯(lián)(參考文獻(xiàn):Darwish IA, Alzoman NZ, Abuhejail RM, El-Samani TE.Chem CentJ2012; 6:125.)，其中，BSA偶聯(lián)表位肽用于免疫完成后Balb/c小鼠血清抗體滴度檢測，KLH偶聯(lián)表位肽抗原和佐劑按等體積混合，乳化完全后分別于第I天、15天、29天以頸背部多點(diǎn)皮下注射的方法免疫Balb/c小鼠(8-12周齡)，共3次。第一次氟氏完全佐劑，后兩次為不完全氟氏佐劑，每只小鼠每次500 μ I乳化后抗原,抗原量為50 μ go1.2保護(hù)性B細(xì)胞表位肽534-548 (PUHI37)相應(yīng)抗體效價檢測免疫完成后，血清抗體滴度采用間接ELISA方法進(jìn)行檢測。具體方法包括:將BSA偶聯(lián)的相應(yīng)表位肽抗原包被于96孔板中，用含10%山羊血清的IXPBS進(jìn)行封閉，200 μ I/孔，37°C孵育I小時。用PBS洗3遍后，加入不同稀釋比例的多克隆抗體(抗血清)，稀釋比例分別為 I: 1000、1:2000、1:4000、1:8000、1:16000、1:32000、1:64000 和 1:128000，37。。孵育2小時。用PBST (含0.05%Tween20的1XPBS)洗4遍后，加入偶聯(lián)辣根過氧化物酶的抗小鼠IgG抗體，37°C孵育I小時。PBST洗4遍后，加入底物室溫孵育30分鐘，2N HCL終止反應(yīng)，測定490nm處的OD值。多克隆抗體的每個稀釋濃度均做3個平行孔。分別以稀釋比例和OD值為橫縱坐標(biāo)作圖，如果線性關(guān)系良好且多克隆抗體在1:128000稀釋濃度時OD值^ 0.25，且1:128000稀釋濃度時多克隆抗體OD值與陰性對照孔OD值比值> 2，說明該多克隆抗體效價良好，可用于HCVpp中和實(shí)驗(yàn)。保護(hù)性B細(xì)胞表位肽534-548 (PUHI37)相應(yīng)抗體效價檢測結(jié)果如圖2所示。實(shí)施例3B細(xì)胞表位肽534-548 (PUHI37)相應(yīng)抗體中和Ib基因亞型HCVpp感染Huh7.5細(xì)胞的檢測將所獲得的多克隆抗體進(jìn)行HCVpp中和實(shí)驗(yàn)。方法包括將Huh7.5細(xì)胞預(yù)接種于含DMEM完全培養(yǎng)基的96孔板中，接種密度為IXlO4/孔。置于37°C細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育。第二天，將含HCVpp的上清(20 μ I/孔)和不同的多克隆抗體及陰性對照血清以不同的稀釋比例混合(多克隆抗體及陰性對照血清稀釋比例分別為1:50、1:100、1:200、1:400、1:800),未加抗體及陰性血清的HCVpp上清亦作為對照，并加入終濃度為4 μ g/ml的聚凝胺(polybrene)，總體積為100 μ I/孔(不足100 μ I用DMEM完全培養(yǎng)基補(bǔ)至100μ 1)，37°C孵育I小時，加至96孔板中，每個稀釋濃度均做3個平行孔。37°C孵育5小時后，棄去細(xì)胞培養(yǎng)上清，更換為新鮮的完全DMEM培養(yǎng)基，37°C孵育72小時。用熒光素酶檢測系統(tǒng)(Promega)檢測，方法包括棄去細(xì)胞培養(yǎng)上清，PBS洗I遍，加入細(xì)胞裂解液20 μ I/孔，孵育10分鐘后加入底物熒光素100 μ I/孔，放入至熒光發(fā)光檢測儀讀取數(shù)值。將檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析，與未加多克隆抗體和陰性對照血清的對照孔相比，加入多克隆抗體后熒光素酶活性值降低50%及以上，認(rèn)為具有中和活性。從而進(jìn)一步驗(yàn)證該抗體對某一種或幾種基因型/亞型的HCVpp是否具有中和活性。保護(hù)性B細(xì)胞表位肽534-548 (PUHI37)相應(yīng)抗體的Ib基因亞型HCVpp中和實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3所不。雖然，上文中已經(jīng)用一般性說明及具體實(shí)施方案對本發(fā)明作了詳盡的描述，但在本發(fā)明基礎(chǔ)上，可以對之作一些修改或改進(jìn)，這對本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發(fā)明精神的基礎(chǔ)上所做的這些修改或改進(jìn)，均屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。參考文獻(xiàn)Ndongo N, Berthillon P, Pradat P, Vieux C，Bordes I, Berby Fj Maynard M，etal.Association of Anti_ElE2Antibodies with Spontaneous Recovery or SustainedViral Response to Therapy in Patients Infected with Hepatitis C Virus.Hepatology 2010;52:1531-1542.
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權(quán)利要求
1.丙型肝炎病毒B細(xì)胞表位肽PUHI37，其特征在于，其氨基酸組成為TDVLLLNNTRPPQGN。
2.權(quán)利要求1所述丙型肝炎病毒B細(xì)胞表位肽PUHI37在制備抗HCV藥物中的應(yīng)用。
3.權(quán)利要求1所述丙型肝炎病毒B細(xì)胞表位肽PUHI37在制備HCV預(yù)防性疫苗中的應(yīng)用。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，以PUHI37表位肽作為免疫原，輔以佐劑免疫實(shí)驗(yàn)動物，制備多克隆抗體。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，以PUHI37表位肽作為免疫原，輔以佐劑免疫實(shí)驗(yàn)動物，采用雜交瘤技術(shù)和DNA重組技術(shù)，制備出識別PUHI37表位肽抗原的人源化單克隆抗體。
6.HCVlb亞型中和性抗體，其是以權(quán)利要求1所述的丙型肝炎病毒B細(xì)胞表位肽PUHI37為免疫原，輔以佐劑免疫實(shí)驗(yàn)動物，制備的多克隆抗體。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的中和性抗體，其特征在于，將PUHI37表位肽與載體蛋白KLH偶聯(lián)，KLH偶聯(lián)表位肽抗原和佐劑按等體積混合，乳化后，采用皮下注射法分3次免疫Balb/c小鼠，免疫完成后，收集血清中的抗體，即得。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的中和性抗體，其特征在于，將PUHI37表位肽與載體蛋白KLH偶聯(lián)，KLH偶聯(lián)表位肽抗原和佐劑按等體積混合，乳化完全后，分別于第I天、15天、29天以頸背部多點(diǎn)皮下注射法免疫8-12周齡的Balb/c小鼠,共免疫3次,第一次使用氟氏完全佐齊U，后兩次使用不 完全氟氏佐劑，每只小鼠每次注射500 μ I乳化后抗原，抗原量為50 μ g，免疫完成后，收集血清中的抗體,即得。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種新型的丙型肝炎病毒B細(xì)胞表位肽PUHI37，采用重疊肽的方法，找到丙型肝炎病毒包膜蛋白新的線性保護(hù)性B細(xì)胞表位肽，并獲得了能夠中和丙型肝炎病毒1b基因亞型HCVpp的保護(hù)性抗體，這些抗體識別的表位肽，其氨基酸組成為TDVLLLNNTRPPQGN，位置為534-548(以丙型肝炎病毒H77為參考標(biāo)準(zhǔn)，Accession No.NC_004102)。該保護(hù)性B細(xì)胞表位肽的確定，為HCV治療性抗體的研發(fā)和HCV預(yù)防性疫苗的研發(fā)提供了新的解決方案。
文檔編號A61P31/14GK103145807SQ20131006217
公開日2013年6月12日 申請日期2013年2月27日 優(yōu)先權(quán)日2013年2月27日
發(fā)明者魏來, 劉如玉 申請人:北京大學(xué)人民醫(yī)院