專利名稱：取自鮮蒲公英的抗乙肝病毒組合物及其在制備抗乙肝病毒藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物，具體涉及一種取自鮮蒲公英的抗乙肝病毒的藥物組合物，以及該組合物在制備抗乙肝病毒藥物中的應(yīng)用，屬于中藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
乙型肝炎是乙型肝炎病毒引起的、以肝臟炎性病變?yōu)橹鞑⒁鸲嗥鞴贀p害的一種傳染性疾病。乙肝病毒感染的人群患上肝硬化和肝癌的相對危險至少增加1000倍，最終導(dǎo)致死亡。全世界約有20億人感染過HBV，慢性肝炎患者超過3.5億，我國是乙肝的高發(fā)區(qū)，據(jù)統(tǒng)計我國約有1.3億HBV攜帶者。乙肝的治療已成為世界各國共同關(guān)心的問題。盡管HBV疫苗的出現(xiàn)在一定程度上緩解了 HBV感染人群的增加，但仍有大量已感染HBV的患者急需得到更有效的治療?？共《局委熓侵委烪BV感染的關(guān)鍵。目前臨床上應(yīng)用和正在臨床研究中的抗乙肝病毒藥物主要為干擾素和核苷類似物(如a-干擾素和拉米夫定)。但是這些藥物有一定的副作用，價格昂貴且易產(chǎn)生耐藥性，故臨床應(yīng)用具有一定的局限性。因此，需要積極開發(fā)治療乙型肝炎的新藥。在我國，中藥用于HBV感染的治療已有悠久的歷史。中藥治療乙肝具有種類、數(shù)量較多，價格低廉，毒副作用小等優(yōu)勢，因此從中篩選出有效成分已經(jīng)成為當(dāng)前抗乙肝病毒新藥研發(fā)的熱點。目前已報道的抗乙肝病毒的復(fù)方制劑有小柴胡湯、復(fù)方六月雪、復(fù)方大黃等；單味藥有鹿角草、姜黃、雪靈芝、三葉青、黃芪等。蒲公英系菊科多年 生草本植物蒲公英Taraxacum mongoIicum Hand.Mazz.、喊地蒲公英Taraxacum sinicum Kitag.據(jù)報道全世界約有2000多種(小種觀點，大種觀點統(tǒng)計約300多種)，我國有70種、I變種，全國各地均有分布，又稱蒲公草、婆婆丁、地丁、黃花地丁等，具有清熱解毒，消腫散結(jié)，利尿通淋的功效。用于疔瘡腫毒，乳癰，瘰疬，目赤，咽痛，肺癰，腸癰，濕熱黃疸，熱淋 澀痛?，F(xiàn)代藥理研究表明，蒲公英具有廣譜抑菌，利膽保肝，抗內(nèi)毒素，健胃和免疫促進等作用。蒲公英屬藥材含有多種藥理活性成分，主要包括酚酸類、黃酮類、多糖、香豆素類、倍半萜內(nèi)酯類、三萜類、植物留醇類、色素類、揮發(fā)油等成分，其中酚酸和黃酮類成分最為豐富。目前文獻報道蒲公英共含有19種酚酸類化合物，以咖啡酸、綠原酸等為主；16種黃酮類化合物，以木犀草苷、木犀草素、槲皮素為主。近年來有關(guān)蒲公英藥理活性的報道，主要是針對蒲公英干藥材，沒有相關(guān)研究涉及對鮮蒲公英的抗乙肝病毒組合物及其在制備抗乙肝病毒藥物中的應(yīng)用。蒲公英屬藥材作為一種清熱解毒藥物在臨床上長期使用，療效確切。蒲公英具有多種藥理活性，但其發(fā)揮不同藥理作用的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)不盡相同。另外，蒲公英發(fā)揮抗乙肝病毒功效的物質(zhì)基礎(chǔ)并不是一類成分單獨組成，而是通過多類別組分協(xié)同作用，多組分多靶點共同發(fā)揮療效。因此，本發(fā)明從中醫(yī)藥整體性的角度出發(fā)，在組分結(jié)構(gòu)理論的指導(dǎo)下，結(jié)合藥物體外抗乙肝篩選模型，對鮮蒲公英抗乙肝病毒的物質(zhì)基礎(chǔ)進行確認，并對物質(zhì)基礎(chǔ)中各組分的配伍配比關(guān)系進行質(zhì)量控制研究，以達到最佳的抗乙肝病毒療效。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明從整體藥效出發(fā)，比較了鮮、干蒲公英抗乙肝病毒的藥效差異，發(fā)現(xiàn)鮮蒲公英的藥效明顯優(yōu)于干藥材。因此，本發(fā)明以鮮蒲公英為原料，目的是提供一種具有抗乙肝病毒藥用價值的鮮蒲公英有效組分組合物，并公開其在制備抗乙肝病毒藥物中的應(yīng)用，開發(fā)抗乙肝病毒相關(guān)制劑及保健品。本發(fā)明所述的取自鮮蒲公英的抗乙肝病毒有效組分組合物，主要包括鮮蒲公英多糖組分、酚酸組分和鮮蒲公英黃酮組分，其中多糖組分、酚酸組分和黃酮組分的重量比為
2-40: 3-70: 2-50。其中，所述的酚酸組分以咖啡酸、綠原酸、異綠原酸A為代表性成分；所述的黃酮組分以木犀草苷、木犀草素、槲皮素為代表性成分；所述的咖啡酸、綠原酸、異綠原酸A、木犀草苷、槲皮素、木犀草素的重量比為0.25-10: 2-40: 0.25-20: 0.5-20: 0-10: 1.5-20
o進一步優(yōu)化，本發(fā)明中多糖組分、酚酸組分和黃酮組分的重量比為
3-25: 8-40: 5-30 ;咖啡酸、綠原酸、異綠原酸A、木犀草苷、槲皮素、木犀草素的重量比為
0.25-5: 5-20: 2.5-15: 2-10: 0-8: 3-12。更優(yōu)化和更具體的方案是多糖組分、酚酸組分和黃酮組分的重量比為5-15: 15-30: 7-20 ;咖啡酸、綠原酸、異綠原酸A、木犀草苷、槲皮素、木犀草素的重量比為 1-4: 8-16: 6-10: 2-6: 1-5: 4-9。本發(fā)明推薦的最佳比例為，多糖組分、酚酸組分和黃酮組分的重量比為
9.3: 21.9: 15.1 ;咖啡酸、綠原酸、異綠原酸A、木犀草苷、槲皮素、木犀草素的重量比為
2.5: 11.3: 8.1: 4.8: 3.9: 6.4。本發(fā)明提供的鮮蒲公英抗乙肝病毒有效組分組合物，以新鮮蒲公英全草為原料，按以下步驟制備得到:步驟1:采新鮮蒲公英全草，洗凈，榨汁，藥渣用蒸餾水浸泡3-10h，繼續(xù)榨汁1-2次；步驟2:榨汁液濃縮、分離、干燥；步驟3:取榨汁液干燥粉末用蒸餾水溶解，過AB-8型、HP20型、DlOl型、HPD600型、HPD826型或NKA-9型大孔樹脂柱，蒸餾水洗脫得提取物I ;10% -30%體積百分比的乙醇洗脫得提取物II，濃縮、干燥得鮮蒲公英酚酸組分；50% -70%體積百分比的乙醇洗脫得提取物III，濃縮、干燥得鮮蒲公英黃酮組分；步驟4:將提取物I干燥，加適量的蒸餾水復(fù)溶，再加入Savage試劑除去蛋白，離心，得上清液；再用40-95%乙醇溶液沉淀，所得沉淀復(fù)溶后透析，冷凍干燥即得鮮蒲公英多糖組分；步驟5:將鮮蒲公英多糖組分、酚酸組分和黃酮組分混合，獲得組合物。本發(fā)明中鮮蒲公英抗乙肝 病毒有效組分組合物的制備，優(yōu)先選擇離心分離和常壓過濾進行沉淀或析出物與液體分離；樣品濃縮采用低溫減壓濃縮工藝，濃縮溫度< 50°C;干燥方法采用冷凍干燥。
本發(fā)明組合物制備抗乙肝病毒藥物以常規(guī)藥用制劑的形式來使用，所述組合物與制劑學(xué)允許的輔料混合，制成顆粒劑、片劑、丸劑、膠囊劑、針劑、粉針劑、口服液等劑型，按照藥用制劑生產(chǎn)領(lǐng)域中任何已知的方法可以制備口服使用的所需制劑，用于臨床的抗乙肝病毒藥物。上述制劑中可含有輔助物質(zhì)，如稀釋劑、潤濕劑、黏合劑、崩解劑、潤滑劑等；常用的稀釋劑如淀粉、微晶纖維素、糊精、乳糖等；常用的潤濕劑包括蒸餾水、乙醇；黏合劑有淀粉漿、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素、聚維酮等；常用的崩解劑有干淀粉、交聯(lián)聚維酮、羧甲淀粉鈉；潤滑劑有硬脂酸鎂、微粉硅膠、聚乙二醇類、滑石粉。上述的制劑可按照各種制劑常規(guī)的制備工藝制成。本發(fā)明利用HeepG2.2.15細胞篩選模型，對鮮、干藥材整體，及鮮蒲公英榨汁液經(jīng)大孔樹脂分離得到的組分配伍組合物進行了藥效篩選，結(jié)果說明，鮮藥材抗乙肝病毒的藥效明顯優(yōu)于干藥材；具有本發(fā)明結(jié)構(gòu)比的鮮蒲公英組合物均具有較好的抗乙肝病毒效果。本發(fā)明的優(yōu)點是:1、鮮蒲公英組合物具有抗乙肝病毒活性，該組合物及其抗乙肝病毒活性為首次報道。此藥物其最大優(yōu)點是天然產(chǎn)物，與現(xiàn)有抗乙肝病毒藥相比，價格低廉，毒副作用小，可長期使用無反彈，有望開發(fā)為新型的抗乙肝病毒藥物。2、鮮蒲公英組合物結(jié)合相關(guān)的制劑技術(shù)，開發(fā)價值高，生產(chǎn)方便，工藝簡單，具有廣闊的應(yīng)用前景。


圖1為UPLC酚酸類組分含量測定譜圖:1、咖啡酸；2、綠原酸；3、異綠原酸A圖2為UPLC酚酸類混合標(biāo)準品譜圖:1、咖啡酸；2、綠原酸；3、異綠原酸A圖3為UPLC黃酮類組分含量測定譜圖:4、木犀草苷；5、槲皮素；6、木犀草素圖4為UPLC黃酮類混合標(biāo)準品譜圖:4、木犀草苷；5、槲皮素；6、木犀草素圖5為本發(fā)明提取分離流程圖
具體實施例方式以下結(jié)合實施例及藥效試驗對本發(fā)明作進一步說明。實施例1取新鮮蒲公英全草5kg，洗凈后放入榨汁機中榨汁，過濾、離心分離榨汁液和藥渣，藥渣用2倍量蒸餾水浸泡3h，繼續(xù)榨汁1-2次，合并過濾、離心后的榨汁液，低溫減壓濃縮、冷凍干燥得凍干粉。將凍干粉用蒸餾水復(fù)溶以一定濃度上樣到處理好的AB-8型、HP20型、DlOl型、HPD600型、HPD826型或NKA-9型大孑樹脂柱，先用蒸餾水洗脫，收集洗脫液，低溫減壓濃縮，得提取物I，冷凍干燥，加適量的蒸餾水復(fù)溶，再加入Savage試劑除去蛋白，離心，得上清液；再用50%乙醇溶液沉淀，所得沉淀復(fù)溶后透析，冷凍干燥即得鮮蒲公英多糖組分；再用不同體積百分比的乙醇洗脫，收集10% -30%乙醇洗脫液，低溫減壓濃縮，得提取物II，冷凍干燥即得鮮蒲公英酚酸類組分；收集50% -90%乙醇洗脫液，低溫減壓濃縮，得提取物III，冷凍干燥即得鮮蒲公英黃酮類組分。將獲得的三個組分混合即得鮮蒲公英抗乙肝病毒有效組分組合物，其中鮮蒲公英多糖組分、酚酸組分和黃酮組分的重量比為
2-40: 3-70: 2-50 ;所述的咖啡酸、綠原酸、異綠原酸A、木犀草苷、木犀草素、槲皮素的重量比為 0.25-10: 2-40: 0.25-20: 0.5-20: 0-10: 1.5-20。
實施例2取新鮮蒲公英全草5kg，洗凈后放入榨汁機中榨汁，過濾、離心分離榨汁液和藥渣，藥渣用3倍量蒸餾水浸泡6h，繼續(xù)榨汁1-2次，合并過濾、離心后的榨汁液，低溫減壓濃縮、冷凍干燥得凍干粉。將凍干粉用蒸餾水復(fù)溶以一定濃度上樣到處理好的AB-8型、HP20型、DlOl型、HPD600型、HPD826型或NKA-9型大孔樹脂柱，先用蒸餾水洗脫，收集洗脫液，低溫減壓濃縮，得提取物I，冷凍干燥，加適量的蒸餾水復(fù)溶，再加入Savage試劑除去蛋白，離心，得上清液；再用60%乙醇溶液沉淀，所得沉淀復(fù)溶后透析，冷凍干燥即得鮮蒲公英多糖組分；再用不同體積百分比的乙醇洗脫，收集10% -35%乙醇洗脫液，低溫減壓濃縮，得提取物II，冷凍干燥即得鮮蒲公英酚酸類組分；收集50% -80%乙醇洗脫液，低溫減壓濃縮，得提取物III，冷凍干燥即得鮮蒲公英黃酮類組分。將獲得的三個組分混合即得鮮蒲公英抗乙肝病毒有效組分組合物，其中鮮蒲公英多糖組分、酚酸組分和黃酮組分的重量比為
3-25: 8-40: 5-30 ;所述的咖啡酸、綠原酸、異綠原酸A、木犀草苷、木犀草素、槲皮素的重量比為 0.25-5: 5-20: 2.5-15: 2-10: 0-8: 3-12。實施例3取新鮮蒲公英全草5kg，洗凈后放入榨汁機中榨汁，過濾、離心分離榨汁液和藥渣，藥渣用4倍量蒸餾水浸泡8h，繼續(xù)榨汁1-2次，合并過濾、離心后的榨汁液，低溫減壓濃縮、冷凍干燥得凍干粉。將凍干粉用蒸餾水復(fù)溶以一定濃度上樣到處理好的AB-8型、HP20型、DlOl型、HPD600型、HPD826型或NKA-9型大孔樹脂柱，先用蒸餾水洗脫，收集洗脫液，低溫減壓濃縮，得提取物I，冷凍干燥，加適量的蒸餾水復(fù)溶，再加入Savage試劑除去蛋白，離心，得上清液；再用70%乙醇溶液沉淀，所得沉淀復(fù)溶后透析，冷凍干燥即得鮮蒲公英多糖組分；再用不同體積百分比的乙醇洗脫，收集15% -30%乙醇洗脫液，低溫減壓濃縮，得提取物II，冷凍干燥即得鮮蒲公英酚酸類組分；收集50% -75%乙醇洗脫液，低溫減壓濃縮，得提取物III，冷凍干燥即得鮮蒲公英黃酮類組分。將獲得的三個組分混合即得鮮蒲公英抗乙肝病毒有效組分組合物，其中鮮蒲公英多糖組分、酚酸組分和黃酮組分的重量比為5-15: 15-30: 7-20 ;所述的咖啡酸、綠原酸、異綠原酸A、木犀草苷、木犀草素、槲皮素的重量比為 1-4: 8-16: 6-10: 2-6: 1-5: 4-9。實施例4取新鮮蒲公英全草5kg，洗凈后放入榨汁機中榨汁，過濾、離心分離榨汁液和藥渣，藥渣用5倍量蒸餾水浸泡10h，繼續(xù)榨汁1-2次，合并過濾、離心后的榨汁液，低溫減壓濃縮、冷凍干燥得凍干粉。將凍干粉用蒸餾水復(fù)溶以一定濃度上樣到處理好的AB-8型、HP20型、DlOl型、HPD600型、HPD826型或NKA-9型大孔樹脂柱，先用蒸餾水洗脫，收集洗脫液，低溫減壓濃縮，得提取物I，冷凍干燥，加適量的蒸餾水復(fù)溶，再加入Savage試劑除去蛋白，離心，得上清液；再用80%乙醇溶液沉淀，所得沉淀復(fù)溶后透析，冷凍干燥即得鮮蒲公英多糖組分；再用不同體積百分比的乙醇洗脫，收集10% -30%乙醇洗脫液，低溫減壓濃縮，得提取物II，冷凍干燥即得鮮蒲公英酚酸類組分；收集50% -70%乙醇洗脫液，低溫減壓濃縮，得提取物III，冷凍干燥即得鮮蒲公英黃酮類組分。將獲得的三個組分混合即得鮮蒲公英抗乙肝病毒有效組分組合物，其中鮮蒲公英多糖組分、酚酸組分和黃酮組分的重量比為9.3: 21.9: 15.1 ;所述的咖啡酸、綠原酸、 異綠原酸A、木犀草苷、木犀草素、槲皮素的重量比為 2.5: 11.3: 8.1: 4.8: 3.9: 6.4。
實施例5鮮蒲公英組合物的化學(xué)指紋圖譜和主要活性成分的含量測定(1)酚酸類組分含量測定色譜條件:ACQUITY UPLC(美國Waters公司，包括四元高壓梯度泵、真空脫氣機、自動進樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測器、Empower2色譜工作站)；色譜柱:ACQUITY UPLC BHl-C18(IOOmmX2.lmm，l.7iim);柱溫為 35°C ;流速:0.3mL/min ；檢測波長:325nm ;進樣量:4 y L ;流動相:A為乙腈，B為0.1 %甲酸水溶液，梯度洗脫條件:O 5min，A:2% 2% ；5 9min，A:2% 3% ；9 14min，A:3% 8% ；14 28min，A:8% 20% ；28 40min，A:20% 40% ;色譜圖見圖1和圖2。以指標(biāo)性成分咖啡酸、綠原酸、異綠原酸A的含量測定結(jié)果為依據(jù)，累積相似紫外吸收峰峰面積，根據(jù)峰面積與含量的關(guān)系，計算出本發(fā)明中總酚酸組分含量約占該溶劑部位整體含量的69.3%。(2)黃酮類組分含量測定色譜條件:ACQUITY UPLC(美國Waters公司，包括四元高壓梯度泵、真空脫氣機、自動進樣器、柱溫箱、二極管陣列檢測器、Empower2色譜工作站)；色譜柱:ACQUITY UPLC BHl-C18(IOOmmX2.lmm，l.7iim);柱溫為 35°C ;流速:0.3mL/min ；檢測波長:350nm ;進樣量:4 y L ;流動相:A為乙腈，B為0.1 %甲酸水溶液，梯度洗脫條件:O 5min，A:2% 2% ；5 9min，A:2% 3% ；9 14min，A:3% 8% ；14 28min，A:8% 20% ；28 40min，A:20% 40% ;色譜圖見圖3和圖4。以指標(biāo)性成分木犀草苷、槲皮素、木犀草素的含量測定結(jié)果為依據(jù)，累積相似紫外吸收峰峰面積，根據(jù)峰面積與含量的關(guān)系，計算出本發(fā)明中總黃酮組分含量約占該溶劑部位整體含量的63.6%。實施例6蒲公英組合物體外抗乙肝病毒研究本實驗采用經(jīng)典的體外抗乙肝病毒藥物篩選模型H印G2.2.15細胞模型，不同濃度的鮮、干藥材整體及不同配比的鮮蒲公英組合物給藥IfepG2.2.15細胞數(shù)天，取其細胞上清液，分別測定其乙肝表面抗原(HBsAg)，e抗原(HBeAg)的分泌和HBV DNA的表達情況，來判斷藥物是否有效，同時實驗過程中采用MTT法測定不同藥物組的細胞毒性。綜合以上實驗設(shè)計，對鮮蒲公英組合物進行體外抗乙肝病毒的藥效學(xué)研究，并以臨床上應(yīng)用得到證實的拉米夫定(3TC)作為陽性對照藥物，以此評價鮮蒲公英組合物的抗乙肝病毒效果。細胞毒性H印G2.2.15細胞復(fù)蘇后，以含20%胎牛血清的MEM培養(yǎng)基培養(yǎng)于細胞瓶中，80 %融合后，用胰酶消化l_4min，終止消化，棄上清，加適量培養(yǎng)基輕輕吹打，調(diào)整細胞濃度為5X 105/mL,接種于96孔細胞培養(yǎng)板中，每孔100 uL,37°C,5% CO2, 24h，細胞貼壁后用于實驗。吸除細胞上清，加入不同濃度的鮮、干蒲公英藥材及不同配比的鮮蒲公英組合物，進行培養(yǎng)6d，每3天更換一次含藥培養(yǎng)基，收集細胞上清于-70°C冰箱中備存，用于抗原及HBV DNA的檢測。用MTT法檢測藥物對H印G2.2.15細胞的毒性作用，在酶標(biāo)儀下于490/570nm波長讀取其OD值。實驗重復(fù)3次。鮮、干蒲公英藥材及不同配比的鮮蒲公英組合物對HBsAg和HBeAg分泌的影響采用ELISA法測定細胞上清液中HBsAg和HBeAg的分泌情況，取陽性藥3TC和鮮、干蒲公英藥材及不同配比的鮮蒲公英組合物不同給藥濃度的H印G2.2.15細胞上清，按照HBsAg、HBeAg酶聯(lián)免疫試劑盒操作說明操作，用酶標(biāo)儀，于、450/630nm雙波長讀取相應(yīng)的OD值，計算其對HBsAg和HBeAg的抑制率。鮮、干蒲公英藥材及不同配比的鮮蒲公英組合物對HBV DNA表達的抑制作用為進一步說明鮮蒲公英組合物具有一定的抗乙肝病毒作用，用熒光定量PCR試劑盒檢測HBVDNA的表達水平。HBV DNA的提取、擴增等所有操作均按試劑盒說明書進行。實驗結(jié)果分析(I)鮮、干蒲公英藥材抗乙肝病毒藥效分析MTT細胞毒性分析對于鮮、干蒲公英藥材抗乙肝病毒的分析，實驗采用多個濃度進行分析，取10、30、60、100、200、300、400ii g/mL的鮮、干蒲公英藥材作用于H印G2.2.15細胞,每3天收集細胞上清并換新鮮含藥培養(yǎng)基，于6d收集所有細胞上清，采用MTT法分析樣品不同濃度對細胞毒性的影響。MTT的結(jié)果顯示，鮮、干蒲公英藥材的濃度小于等于60 y g/mL時，細胞存活率> 95%。3TC陽性對照是通過多次實驗篩選的抗乙肝病毒較佳的濃度，數(shù)據(jù)分析只采用100iig/mL3TC與實驗樣品對比分析。所以，實驗樣品選取10、30、60 y g/mL三個濃度重復(fù)實驗，不同濃度的鮮、干蒲公英藥材及3TC的細胞毒性測定結(jié)果見表I。鮮、干蒲公英藥材對H印G2.2.15細胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制作用不同濃度的鮮、干蒲公英藥材對H印G2.2.15細胞分泌HBsAg和HBeAg的抑制作用見表2、表3。隨著濃度的增加，鮮、干蒲公英藥材對HBsAg和HBeAg的抑制率增加，當(dāng)濃度為60 u g/mL時，鮮藥材對HBsAg和HBeAg的抑制率分別為42.07%和31.84%;而干藥材對HBsAg和HBeAg的抑制率分別為30.37%和22.61%，由此分析，鮮、干蒲公英藥材對HBsAg和HBeAg均有抑制作用，且呈現(xiàn)濃度依耐性，鮮蒲公英對HBsAg和HBeAg抑制作用優(yōu)于干藥材。表I鮮、干蒲公英藥材對IfepG2.2.15細胞的毒性作用
權(quán)利要求
1.一種取自鮮蒲公英的抗乙肝病毒有效組分組合物，其特征在于該組合物的組成包括鮮蒲公英多糖組分、鮮蒲公英酚酸組分、鮮蒲公英黃酮組分，其中多糖組分、酚酸組分、黃酮組分的重量比為2-40: 3-70: 2-50。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取自鮮蒲公英的抗乙肝病毒有效組分組合物，其特征在于，所述的酚酸組分以咖啡酸、綠原酸、異綠原酸A為代表性成分；所述的黃酮組分以木犀草苷、木犀草素、槲皮素為代表性成分；所述的咖啡酸、綠原酸、異綠原酸A、木犀草苷、槲皮素、木犀草素的重量比為 0.25-10: 2-40: 0.25-20: 0.5-20: 0-10: 1.5-20。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的提取自鮮蒲公英的抗乙肝病毒有效組分組合物，其特征在于，所述的多糖組分、酚酸組分、黃酮組分的重量比:3-25: 8-40: 5-30;所述的咖啡酸、綠原酸、異綠原酸A、木犀草苷、槲皮素、木犀草素的重量比為0.25-5: 5-20: 2.5-15: 2-10:0-8: 3-12。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提取自鮮蒲公英的抗乙肝病毒有效組分組合物，其特征在于，所述的多糖組分、酚酸組分、黃酮組分的重量比:5-15: 15-30: 7-20；所述的咖啡酸、綠原酸、異綠原酸A、木犀草苷、槲皮素、木犀草素的重量比為1-4: 8-16: 6-10: 2-6: 1-5: 4-9。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提取自鮮蒲公英的抗乙肝病毒有效組分組合物，其特征在于，所述的多糖組分、酚酸組分、黃酮組分的重量比:9.3: 21.9: 15.1;所述的咖啡酸、綠原酸、異綠原酸A、木犀草苷、槲皮素、木犀草素的重量比為2.5: 11.3: 8.1: 4.8: 3.9: 6.4。
6.一種鮮蒲公英抗乙肝病毒有效組分組合物的制備方法，其特征在于按以下步驟制備得到: 步驟1:采新鮮蒲公英全草，洗凈`，榨汁，藥渣用蒸餾水浸泡3-10h，繼續(xù)榨汁1-2次； 步驟2:榨汁液濃縮、分離、干燥； 步驟3:取榨汁液干燥粉末用蒸餾水溶解，過AB-8型、HP20型、DlOl型、HPD600型、HPD826型或NKA-9型大孔樹脂柱，蒸餾水洗脫得提取物I ;10% -30%體積百分比的乙醇洗脫得提取物II，濃縮、干燥得鮮蒲公英酚酸組分；50% -70%體積百分比的乙醇洗脫得提取物III，濃縮、干燥得鮮蒲公英黃酮組分； 步驟4:將提取物I干燥，加適量的蒸餾水復(fù)溶，再加入Savage試劑除去蛋白，離心，得上清液；再用40-95%乙醇溶液沉淀，所得沉淀復(fù)溶后透析，冷凍干燥即得鮮蒲公英多糖組分； 步驟5:將鮮蒲公英多糖組分、酚酸組分和黃酮組分混合，獲得組合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的具有抗乙肝病毒作用的有效組分組合物的制備方法，其特征在于采用離心分離和常壓過濾進行沉淀或析出物與液體分離；樣品濃縮采用低溫減壓濃縮工藝，濃縮溫度< 50°C ;干燥方法采用冷凍干燥。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的具有抗乙肝病毒作用的有效組分組合物的制備方法，在步驟4中，將鮮蒲公英多糖組分、酚酸組分、黃酮組分與制劑學(xué)允許的輔料混合，制成顆粒劑、片劑、丸劑、膠囊劑、針劑、粉針劑、口服液等劑型，其特征在于，藥用輔料選自:稀釋劑、潤濕劑、黏合劑、崩解劑、潤滑劑等，其中， 所述的稀釋劑選自:淀粉、微晶纖維素、糊精、乳糖等；所述的潤濕劑選自:蒸餾水、乙醇； 所述的黏合劑選自:淀粉漿、甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素、聚維酮等； 所述的崩解劑選自:干淀粉、交聯(lián)聚維酮、羧甲淀粉鈉等； 所述的潤滑劑選自:硬脂酸鎂、微粉硅膠、聚乙二醇類、滑石粉。
9.一種取自鮮蒲公英的抗乙肝病毒組合物及其在制備抗乙肝病毒藥物中的應(yīng)用，其用途在于制備抗乙肝病毒制劑及保健品`。
全文摘要
本發(fā)明涉及鮮蒲公英抗乙肝病毒組合物及其在制備抗乙肝病毒藥物中的應(yīng)用，屬于中藥領(lǐng)域。該組合物中包括鮮蒲公英多糖組分、酚酸組分和黃酮組分，特征是多糖組分、酚酸組分和黃酮組分的重量比為2-40∶3-70∶2-50。優(yōu)化方案的酚酸組分以咖啡酸、綠原酸、異綠原酸A為代表性成分；黃酮組分以木犀草苷、槲皮素、木犀草素為代表性成分；咖啡酸、綠原酸、異綠原酸A、木犀草苷、槲皮素、木犀草素的重量比為0.25-10∶2-40∶0.25-20∶0.5-20∶0-10∶1.5-20。本發(fā)明以新鮮蒲公英為原料，經(jīng)大孔樹脂對有效組分進行分離純化、富集，將有效組分混合得鮮蒲公英抗乙肝病毒組合物，工藝簡便，能有效治療乙肝病毒引起的相關(guān)疾病，且成本低，能進行大規(guī)模生產(chǎn)。
文檔編號A61K31/715GK103099838SQ20131003257
公開日2013年5月15日 申請日期2013年1月29日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月29日
發(fā)明者賈曉斌, 施亞琴, 成旭東 申請人:蘇州海金沙生物科技有限公司