乳鐵蛋白和白質(zhì)的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明概括而言涉及腦白質(zhì)。具體而言，本發(fā)明涉及可以用于促進白質(zhì)發(fā)育和/或避免白質(zhì)損失的組合物。本發(fā)明的一個實施方案涉及用于促進白質(zhì)發(fā)育、治療或預(yù)防白質(zhì)的延緩發(fā)育和/或治療或預(yù)防白質(zhì)損失的含乳鐵蛋白的組合物。
【專利說明】乳鐵蛋白和白質(zhì)
[0001]本發(fā)明概括而言涉及腦白質(zhì)。具體而言，本發(fā)明涉及可以用于促進白質(zhì)發(fā)育和/或避免白質(zhì)損失的組合物。本發(fā)明的一個實施方案涉及用于促進白質(zhì)發(fā)育、治療或預(yù)防白質(zhì)的延緩發(fā)育和/或治療或預(yù)防白質(zhì)損失的含乳鐵蛋白的組合物。
[0002]營養(yǎng)素是生物生長和發(fā)育的必要條件。新生成組織的“結(jié)構(gòu)單元”可以作為預(yù)形成的單元源自膳食，或者經(jīng)由內(nèi)源性生物合成或生物轉(zhuǎn)化獲得。當(dāng)組織生長最快時(即在宮內(nèi)期期間)，該過程發(fā)生的速度最快。
[0003]在組織形成之后，所有的組織經(jīng)歷不同程度的重塑(或更新)，但重塑是相當(dāng)緩慢的過程、尤其對于中樞神經(jīng)系統(tǒng)。選出組織生長的非-必需或半-必需結(jié)構(gòu)單元的兩種主要來源的比例不是一項簡單的任務(wù)，因為(a)組織生長通常是相同緩慢的和(b)來自膳食來源的結(jié)構(gòu)單元與內(nèi)源性生物合成的那些難以區(qū)分。
[0004]然而該問題在人的營養(yǎng)中通常最為重要、特別是在嬰兒營養(yǎng)中。在快速生長階段期間，非-必需或半-必需營養(yǎng)素的可獲得性可影響內(nèi)源性生物合成，且可限制胎兒或新生兒的生長潛力。
[0005]妊娠和泌乳的女性和小于三歲的幼兒最容易遭受營養(yǎng)不良?？茖W(xué)證據(jù)已經(jīng)顯示生命早期的慢性營養(yǎng)不 良有不利的神經(jīng)病學(xué)后果，諸如弱的空間導(dǎo)航、記憶形成和記憶鞏固。
[0006]在生命的前三年營養(yǎng)更好的個體具有顯著更好的生活。在宮內(nèi)發(fā)育期間穿過胎盤屏障的營養(yǎng)素和在人乳中存在的營養(yǎng)素可代表改善早期腦發(fā)育的最適合的候選物(特別是在不利的產(chǎn)前暴露之后)。
[0007]適當(dāng)?shù)拇竽X發(fā)育是所有父母主要關(guān)心的問題。
[0008]人腦由灰質(zhì)、白質(zhì)和黑質(zhì)組成。灰質(zhì)由神經(jīng)元細胞體組成,且包含涉及記憶、視覺、聽覺、語言的腦區(qū)域，而且包含涉及情感和肌肉控制的腦區(qū)域。黑質(zhì)在學(xué)習(xí)、爭取獎勵和成癮中起作用。
[0009]根據(jù)Reiss等，Brain, 1995，第119卷，第5期，第1763-1774，在兒童中IQ與總腦體積正相關(guān)，特別是與腦額葉前區(qū)中的皮質(zhì)灰質(zhì)的體積正相關(guān)。還發(fā)現(xiàn)皮質(zhì)下灰質(zhì)有助于IQ的變化，盡管小于皮質(zhì)灰質(zhì)體積促進的程度。因此，在本領(lǐng)域中在促進灰質(zhì)的發(fā)育方面進行了努力。
[0010]白質(zhì)是如下的組織，信息通過其在神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)在灰質(zhì)的不同區(qū)域之間傳遞。髓磷脂包裹長神經(jīng)纖維，并提供允許快速和高效的信息傳遞的電絕緣。通過少突神經(jīng)膠質(zhì)細胞環(huán)繞軸突而建立絕緣的同心磷脂層的髓鞘形成加快神經(jīng)元傳遞。在兒童中腦白質(zhì)通路的成熟在認知、行為、情感和運動發(fā)育中是重要的因素。
[0011]白質(zhì)完整性由更好的功能連通性構(gòu)成，所述功能連通性可有助于建立廣泛分布的大腦功能，這被認為是復(fù)雜的行為自主控制的基礎(chǔ)(Luna B.1n:Aboitiz F等編撰.Fromattention to goal-directed behavior:neurodynamical, methodological and clinicaltrends.Heidelberg(德國):Springer-Verlag ；2009.第 249_274 頁)?？焖俸陀行У男畔鬟f對于適宜的腦性能也非常重要。因此，本領(lǐng)域中對也支持白質(zhì)的發(fā)育有強烈的需求。
[0012]本發(fā)明人已經(jīng)致力于該需求。[0013]因此，本發(fā)明的目的是為本領(lǐng)域提供特別允許其促進白質(zhì)發(fā)育的組合物和/或在白質(zhì)的發(fā)育較慢的階段后允許其趕上發(fā)育進度的組合物。如果該組合物還可用于通過母親營養(yǎng)來支持未出生嬰兒的發(fā)育，這將是進一步合乎需要的。
[0014]本發(fā)明人驚訝地看到他們可通過獨立的權(quán)利要求的主題實現(xiàn)這些目的。從屬權(quán)利要求進一步發(fā)展了本發(fā)明的構(gòu)思。
[0015]使用強高場MRI技術(shù),本發(fā)明人能證實母親乳鐵蛋白補充導(dǎo)致腦白質(zhì)體積(whitematter volume)顯著增加。
[0016]例如對于胼胝體內(nèi)容物的白質(zhì)體積顯示這種作用。
[0017]例如，對于宮內(nèi)生長受限(IUGR)的哺乳動物顯示了效果。宮內(nèi)生長受限(IUGR)，以前稱為宮內(nèi)發(fā)育遲緩，更常在看到懷孕末期看到，且可對嬰兒的發(fā)育具有負面作用。以下若干因素可以增加IUGR的可能性:諸如酗酒、凝血障礙、藥癮、高血壓或心臟病、腎病、營養(yǎng)不良、吸煙、感染和母體疾病。
[0018]可促進IUGR的胎兒危險因素包括例如遺傳問題或多胎妊娠。
[0019]可促進IUGR的胎盤和臍帶異常方面的危險因素包括:前置胎盤、胎盤增生或胎盤早剝，伴隨其他的胎盤異常。另外的危險因素是臍帶的位置繞頸或身體的一部分，這減少了臍帶血流。
[0020]乳鐵蛋白(血清唾液酸化糖蛋白)由人從胚胎至成年期分泌，且在初乳和乳中尤其豐富。該唾液酸化糖蛋白具有多種生理效應(yīng)，包括鐵內(nèi)穩(wěn)態(tài)的調(diào)節(jié)、細胞生長和分化、益生元和抗炎作用和免疫應(yīng)答的激發(fā)。
[0021]本發(fā)明人已經(jīng)證明在腦結(jié)構(gòu)和發(fā)育有負面改變的動物中，在妊娠期和哺乳期間母親的乳鐵蛋白的補充可修正和/或恢復(fù)腦結(jié)構(gòu)和/或發(fā)育的變化。
[0022]提供科學(xué)證據(jù)證實在宮內(nèi)生長受限(IUGR)的哺乳動物中乳鐵蛋白的補充，增加了腦白質(zhì)體積，例如胼胝體內(nèi)容物的腦白質(zhì)體積，并支持趕上生命早期的正常發(fā)育。
[0023]因此，本發(fā)明部分涉及含乳鐵蛋白的組合物，其用于促進白質(zhì)發(fā)育和/或治療或預(yù)防白質(zhì)的延緩發(fā)育。
[0024]本發(fā)明還涉及乳鐵蛋白在制備組合物中的應(yīng)用，所述組合物用于促進白質(zhì)發(fā)育和/或治療或預(yù)防白質(zhì)的延緩發(fā)育。
[0025]乳鐵蛋白(LF)，也稱為乳運鐵蛋白(LTF)，是已知顯示抗菌活性的球狀多功能蛋白質(zhì)，且是先天防御的部分的一部分，主要在粘液中。
[0026]乳鐵蛋白可以在例如乳和乳清及許多粘膜分泌物諸如眼淚和唾液中找到。因此，乳鐵蛋白可從例如乳中純化，或可重組制備。
[0027]本發(fā)明涉及從任何來源獲得的乳鐵蛋白。
[0028]來自乳或乳清的乳鐵蛋白，例如，具有其是從食品級組合物得到的天然成分的優(yōu)點，因此可以未經(jīng)進一步純化地用作食品組合物的富集級分。
[0029]本發(fā)明的組合物因此可包含作為富集乳鐵蛋白的乳或乳清級分而提供的乳鐵蛋白。
[0030]富集意指將乳鐵蛋白加入級分中，從而得到的級分的乳鐵蛋白含量高于沒有添加乳鐵蛋白的級分的乳鐵蛋白含量，或者以將級分中的天然乳鐵蛋白內(nèi)含物濃縮的方式處理乳或乳清。[0031]經(jīng)重組獲得的乳鐵蛋白具有以下優(yōu)點:其能容易地以高濃度制備。
[0032]人初乳具有相對高的乳鐵蛋白濃度，隨后是人乳，然后是牛乳。
[0033]在治療應(yīng)用中，組合物以足以至少部分上治愈或抑制障礙的癥狀和/或其并發(fā)癥的量施用。將足以完成該目的的量定義為"治療有效劑量"。對該目的有效的量將取決于本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的多個因素，諸如障礙的嚴重性和或患者體重和一般狀態(tài)。在預(yù)防性應(yīng)用中，將本發(fā)明的組合物以足以至少部分上降低發(fā)展為障礙的風(fēng)險的量施用于易罹患特定障礙或者處于特定障礙的風(fēng)險中的患者。將所述量定義為"預(yù)防有效劑量"。同樣，精確的量取決于多個患者特定因素，諸如患者的健康狀態(tài)和體重。
[0034]乳鐵蛋白可在本發(fā)明的框架內(nèi)以治療有效劑量和/或預(yù)防有效劑量內(nèi)施用。
[0035]典型的本發(fā)明的含乳鐵蛋白的組合物可包含至少1.6g/L的量的乳鐵蛋白。
[0036]例如，本發(fā)明的組合物可包含至少0.75% (w/w)、優(yōu)選至少1% (w/w)的濃度的乳鐵蛋白。
[0037]在一個實施方案中,將所述組合物以相當(dāng)于每天每kg體重攝入至少0.01g乳鐵蛋白、至少0.25g乳鐵蛋白、優(yōu)選至少0.5g乳鐵蛋白、更優(yōu)選至少Ig乳鐵蛋白的量施用。
[0038]例如，對于妊娠和/或泌乳的母親，組合物可以以相當(dāng)于攝入至少Ig乳鐵蛋白/kg體重/天的量被消耗。
[0039]對于兒童，組合物還可以以相當(dāng)于攝入至少200mg乳鐵蛋白/kg體重/天的量被消耗。
[0040]乳鐵蛋白可以以至少0.01g/100kcal、優(yōu)選至少0.lg/100kcal的濃度存在于組合物中。例如，乳鐵蛋白可以以約0.01g-100g、優(yōu)選0.1g - 50g、甚至更優(yōu)選2g - 25g/100kcal組合物的范圍存在于組合物中。
[0041]例如，乳鐵蛋白還可與其它的化合物、例如唾液酸和/或鐵組合使用。
[0042]本發(fā)明的組合物可例如包含至少約0.001重量唾液酸。在本發(fā)明的另外的實施方案中，組合物可包含至少約0.005重量或至少約0.01重量的唾液酸。
[0043]或者或另外,含乳鐵蛋白的組合物可包含約lmg/100g(w/w)至50mg/100g(w/w)的組合物、例如10mg/100g(w/w)至30mg/100g(w/w)的組合物的范圍的量的鐵。
[0044]乳鐵蛋白的良好的來源是乳清蛋白。本發(fā)明的組合物因此可包含含至少50%乳清蛋白(以重量計)的蛋白質(zhì)源。
[0045]白質(zhì)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)的組分，且包含大量的有髓鞘的軸突。白質(zhì)形成腦深部的大部分和脊髓的淺表。
[0046]因此，用本發(fā)明的組合物處理的白質(zhì)可以是腦的白質(zhì)、例如胼胝體的白質(zhì)。胼胝體是腦中連接左和右大腦半球、促進大腦半球溝通的最大的白質(zhì)結(jié)構(gòu)。胼胝體是真哺乳亞綱動物腦中的皮質(zhì)之下的寬的、平的神經(jīng)纖維束，位于腦縱裂，且也稱為巨大的連合束。
[0047]使用本發(fā)明的組合物例如增加白質(zhì)體積是可能的。
[0048]Marner 等的著作，2003, J.Comp.Neurol.462(2): 144-52 已經(jīng)顯不在體積和有髓鞘的軸突的長度兩方面，男人均具有比女人略微更多的白質(zhì)。在20歲的年齡，發(fā)現(xiàn)在男性中有髓鞘神經(jīng)纖維的總長度為176，000km，而發(fā)現(xiàn)女性的為149，000km。作者觀察到總長度每十年隨年齡減少約10%，由此80歲的男人具有97，200km，且女人具有82，000km。
[0049] 因此，本發(fā)明的組合物可用于治療、預(yù)防或改善年齡相關(guān)的白質(zhì)減少。[0050]由于白質(zhì)年齡相關(guān)的減少在約20歲的年齡開始，所以本發(fā)明的組合物可施用于至少20歲、至少30歲、至少40歲、至少50歲、至少60歲、至少70歲或至少80歲的個體。
[0051]本發(fā)明的組合物可以是任何適用于口服、腸內(nèi)或胃腸外施用的組合物。
[0052]例如，組合物可選自食物產(chǎn)品、動物食物產(chǎn)品、藥物組合物、營養(yǎng)配制物、營養(yǎng)保健品、飲料、食品添加劑、嬰兒喂養(yǎng)配方產(chǎn)品或母親食品組合物。
[0053]本發(fā)明的組合物可以施用于有需要的任何人、例如嬰兒、兒童和青少年以支持白質(zhì)發(fā)育，且可施用于成人或老年人以治療或預(yù)防年齡相關(guān)的白質(zhì)損失。
[0054]例如，本發(fā)明的組合物可施用于妊娠期間的母親、哺乳期間的母親、早產(chǎn)兒或足月產(chǎn)兒(term born babies)、嬰兒、幼兒、兒童和/或青少年。
[0055]特別地，乳鐵蛋白和/或本發(fā)明的組合物可施用于例如
[0056]-早產(chǎn)兒或經(jīng)歷過宮內(nèi)發(fā)育遲緩(可在妊娠期期間的任何不利事件(母親吸煙、母親藥物治療、低胎盤質(zhì)量、胎盤位置異常、母親和胎兒營養(yǎng)不良等)后發(fā)生)的足月產(chǎn)兒
[0057]-沒有任何宮內(nèi)發(fā)育遲緩的早產(chǎn)嬰兒 [0058]-非常低/低出生重量的嬰兒
[0059]-1UGR 嬰兒
[0060]_(例如出生時的低血氧-缺血或任何其他的不利事件后)顯示腦發(fā)育遲緩的新生兒和兒童
[0061]-顯示認知功能障礙、遲緩的新生兒和兒童。
[0062]乳鐵蛋白或本發(fā)明的組合物因此可以施用于兒童和/或妊娠期和/或泌乳期的母親。
[0063]用于本發(fā)明目的的術(shù)語“兒童”包括嬰兒且包括0-14歲的年齡范圍的個體。
[0064]〃嬰兒〃是低于12個月齡的兒童。
[0065]低于I個月月齡的人類嬰兒是新生兒或初生嬰兒。術(shù)語〃新生兒〃包括早產(chǎn)嬰兒、過熟兒、低出生體重嬰兒和足月新生兒。在達到一歲或開始走路后，嬰兒也被稱為〃幼兒〃(通常12-36個月)。
[0066]在本發(fā)明的一個實施方案中，將組合物施用于有IUGR嬰兒的母親或施用于IUGR嬰兒。
[0067]本發(fā)明的組合物在IUGR哺乳動物中可以特別有效。宮內(nèi)生長受限(IUGR)用于描述胎兒或嬰兒比根據(jù)妊娠的周數(shù)預(yù)期的小的狀況的術(shù)語。IUGR的胎兒或嬰兒經(jīng)常具有比相同孕齡的正常胎兒或嬰兒的重量少至少10%的重量。例如具有IUGR的胎兒可足月出生(37周妊娠之后)或早產(chǎn)出生(早于37周)。
[0068]本發(fā)明中描述的組合物可用于治療、預(yù)防或改善白質(zhì)障礙。
[0069]在兒童期的許多神經(jīng)病學(xué)障礙中，主要涉及腦的白質(zhì)。這些被稱為〃白質(zhì)障礙〃。它們一般基于MRI檢查結(jié)果來診斷。MRI的白質(zhì)異?？梢跃哂薪M織水平的許多不同的原因。例如，可能缺乏髓磷脂和/或髓磷脂可能退化。髓鞘中可能已經(jīng)形成無數(shù)空泡，或者白質(zhì)中可能已經(jīng)形成瘢痕組織。在有髓鞘神經(jīng)纖維等之間可能有增加量的水和/或可能損失神經(jīng)纖維。
[0070]因此，"白質(zhì)障礙"包括可對腦功能具有不同嚴重性的影響的許多不同的障礙。
[0071]白質(zhì)障礙可以是遺傳的或后天獲得的。[0072]后天獲得形式的白質(zhì)障礙的原因根據(jù)原因的類型可以細分為感染性-炎性的、非感染性-炎性的、毒性-代謝性的、創(chuàng)傷性的和低含氧量-缺血性的。
[0073]以下障礙可以是獲得性白質(zhì)障礙，例如
[0074]非-感染性-炎性障礙，諸如
[0075]多發(fā)性硬化及其變型
[0076]急性播散性腦脊髓炎(Acutedisseminated encephalopmyelitis)
[0077]感染性-炎性的障礙，諸如
[0078]先天性巨細胞病毒感染
[0079]亞急性硬化性全腦炎
[0080]亞急性HIV腦炎
[0081]亞急性CMV腦炎
[0082]進行性多灶性腦白質(zhì)炎
[0083]毒性-代謝性障礙，諸如
[0084]腦橋中央和腦橋外髓鞘破壞
[0085]維生素B12缺乏
[0086]葉酸缺乏
[0087]馬基法瓦-比恩亞米病
[0088]營養(yǎng)不良
[0089]中毒性腦病(內(nèi)源性-外源性)
[0090]低含氧量-缺血性的障礙，諸如
[0091]室周腦白質(zhì)軟化
[0092]多囊腦白質(zhì)病(Polycysticleukoencephalopathy)
[0093]遲發(fā)性的缺氧后-缺血性脫髓鞘
[0094]皮質(zhì)下動脈硬化性腦病(賓斯旺格病)
[0095]衰老相關(guān)的
[0096]脈管炎
[0097]輻射
[0098]創(chuàng)傷性障礙，諸如
[0099]剪切(Shearing)
[0100]水腫
[0101]由于涉及不同障礙的基因和蛋白質(zhì)眾多，遺傳性白質(zhì)障礙分類復(fù)雜，通?；谒婕暗纳锘瘜W(xué)途徑進行分類。
[0102]以下的障礙可以是遺傳性白質(zhì)障礙，例如:
[0103]溶酶體障礙
[0104]異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良
[0105]克拉伯病(球形細胞腦白質(zhì)營養(yǎng)不良)
[0106]GMl神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥(嬰兒變型)
[0107]GM2神經(jīng)節(jié)苷脂沉積癥(嬰兒變型)
[0108]嬰兒神經(jīng)元蠟樣質(zhì)脂褐質(zhì)沉積癥[0109]法布里病
[0110]唾液酸貯積障礙，Salla病
[0111]巖藻糖苷病
[0112]粘多糖病
[0113]過氧化物酶體失調(diào)
[0114]澤爾韋格綜合征
[0115]新生兒腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良
[0116]嬰兒雷弗素姆病
[0117]澤爾韋格樣綜合征
[0118]假性澤爾韋格綜合征
[0119]假性-新生兒腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良
[0120]雙功能蛋白質(zhì)缺乏
[0121]X-鏈鎖腎上腺腦白質(zhì)營養(yǎng)不良和腎上腺脊髓神經(jīng)病
[0122]雷弗素姆病
[0123]線粒體障礙
[0124]呼吸鏈缺陷
[0125]腦腱黃瘤病
[0126]DNA修復(fù)障礙
[0127]科克因病
[0128]PIBD 或 Tay 綜合征
[0129]髓磷脂蛋白質(zhì)類缺陷
[0130]佩利措伊斯-梅茨巴赫病
[0131]18q_ 綜合征
[0132]氛基酸病和有機酸病(organic acidopathies)
[0133]苯丙酮尿癥
[0134]I型戊二酸尿癥
[0135] 丙酸尿
[0136]非酮性高甘氨酸血癥
[0137]槭糖尿癥
[0138]卡納范病
[0139]L-2-羥基戊二酸尿癥
[0140]高同型半胱氨酸血癥
[0141]尿素循環(huán)缺陷
[0142]3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A裂解酶缺陷
[0143]絲氨酸合成缺陷
[0144]另外的障礙
[0145]半乳糖血癥
[0146]Sjdgren-Larssoii 綜合征
[0147]洛氏綜合征[0148]威爾遜病
[0149]亞力山大病
[0150]肌強直性肌營養(yǎng)不良
[0151]先天性肌營養(yǎng)不良
[0152]巨腦性腦白質(zhì)病伴皮質(zhì)下囊腫 [0153]消融性白質(zhì)/CACH
[0154]髓鞘形成功能衰退伴基底核和小腦萎縮
[0155]Aicard1-GoutiSres 綜合征
[0156]可以是白質(zhì)障礙的另外的障礙包括消融性白質(zhì)病、涉及腦干和脊髓和伴有乳酸鹽升高腦的白質(zhì)病、巨腦性腦白質(zhì)病伴皮質(zhì)下囊腫、髓鞘形成功能衰退、低促性腺功能減退癥和牙發(fā)育不全、髓鞘形成功能衰退伴基底核和小腦萎縮和多元醇代謝中的缺陷。
[0157]本領(lǐng)域那些技術(shù)人員會明白它們可以自由地組合本文所述的本發(fā)明的所有特征而不背離本發(fā)明所公開的范圍。特別地，為本發(fā)明的用途描述的特征可應(yīng)用于本發(fā)明的組合物，反之亦然。
[0158]從以下的實施例和附圖中可明白本發(fā)明的進一步的優(yōu)勢和特征。
[0159]圖1顯示對于從21天-大的小狗切除的腦進行均沿胼胝體(CC)定位的切片的DT圖像的采集。
[0160]圖2顯示在出生后21天(PND)使用稱為彌散張量成像(DTI)的先進的高場9.4TMR成像評價腦組織的微觀構(gòu)造的定量結(jié)果。
實施例:
[0161]為證實乳鐵蛋白對腦白質(zhì)的作用，本發(fā)明人選擇了廣為接受的和感興趣的母親補充模型。已發(fā)現(xiàn)例如，母親乳鐵蛋白補充通過增加胼胝體內(nèi)容物的腦白質(zhì)體積對神經(jīng)元保護和神經(jīng)發(fā)育具有顯著的益處，例如在宮內(nèi)生長受限(IUGR)的哺乳動物中如此。
[0162]在妊娠期的第三周期間用地塞米松(100μ g/kg/天)處理母獸來得到宮內(nèi)發(fā)育遲緩(IUGR)的模型。從妊娠期的開始至泌乳的結(jié)束(6周)將乳鐵蛋白以lg/kg/天的劑量水平不限制地口服施用于母獸。
[0163]測試以下3組動物:
[0164]組1:正常的小狗；在對照母獸中沒有乳鐵蛋白介入(假的=含鹽水緩沖液的滲透泵)。
[0165]組2:1UGR小狗；在地塞米松處理的母獸中沒有乳鐵蛋白介入。
[0166]組3:1UGR小狗；從妊娠期的開始至泌乳的結(jié)束向地塞米松處理的母獸補充bLf(lg/Kg/ 天)。
[0167]在出生后21天(PND)使用稱為彌散張量成像(DTI)的先進的高場9.4TMR成像離體評價腦組織的微觀構(gòu)造。
[0168]在出生后21天離體評價兩個IUGR小狗組和一個正常組的腦的微觀構(gòu)造。
[0169]在PND21將動物賁門內(nèi)灌注0.9%NaCl、然后是4%低聚甲醛。移出大腦，稱重，并在4%低聚甲醛中后固定過夜，然后在+4°C在IX磷酸鹽緩沖鹽水中儲存。用收發(fā)25-_鳥籠狀RF線圈進行離體DTI實驗。手動調(diào)節(jié)一階和二階勻場(shim)，水帶寬范圍為20至40Hz。使用加有Stejskal-Tanner擴散梯度的自旋回波程序。沿十二個空間方向:(x, y, O)、(X，-y, O)、(X，O, z)、(X，O,-Z)、(O, y, z)、(O, y, -z)以及六個相反方向應(yīng)用擴散梯度以抵消b-值交叉項。將強度、持續(xù)時間和彌散時間分別設(shè)為22G/cm、3ms和20ms，得到1184s.mm2的b-值。在填零至256X256的128X64卡式坐標(biāo)的方格取樣17 X 17mm2的視野，得到66 μ m的面內(nèi)象素尺寸。軸平面中需要15個0.5mm層厚的層面。掃描為平均10次，TE/TR=35/2000mso數(shù)據(jù)分析:使用自制Matlab (Mathworks, Natick, MA)軟件,從張量得到彌散值(Dmin、Dffled 和 Dfflax)。計算正交彌散(Dorth = (Dfflin, Dffled) /2)、平行彌散(D" = Dfflax)、平均彌散(DAV = (Dmin+Dmed+Dmax)/3)和各向異性分數(shù)(fractional anisotropy) (FA = [(3/2) X ((Dmin-MD)2+ (Dmed-MD)2+ (Dmax-MD)2) / (Dmin2+Dmed2+Dmax2) ] 1/2)。
[0170]程序允許在FA圖中手工描繪感興趣區(qū)(ROI)。分析了兩個不同的腦區(qū)域:在腦的5個不同的圖像平面的胼胝體(CC)和皮質(zhì)(CX)。
[0171]結(jié)果
[0172]MRI
[0173]已經(jīng)為該計劃 開發(fā)了新的MRI硬件(天線和夾持器(holder))。聯(lián)合用于彌散張量成像的最佳序列，分辨率的增強是之前的方案的約3.6-倍(分辨率從2.10-2mm3增加至
5.5.10_3mm3)。
[0174]對于從21天-大的小狗切除的腦進行均沿胼胝體(CC)定位的切片的DT圖像的采集。在PND21使用各向異性分數(shù)(FA)參數(shù)比較不同組之間的皮質(zhì)結(jié)構(gòu)和纖維束(CC)的完整性(對于所有組η = 6)(圖1)。
[0175]皮質(zhì):沒有觀測到FA值的不同。
[0176]在胼胝體中測定出對照-地塞米松組的FA值比對照-介質(zhì)組顯著降低(圖2)。這是由于可涉及髓鞘形成缺陷的DOTth的顯著增加。暴露于母獸乳鐵蛋白補充的小狗在它們的胼胝體中已顯示恢復(fù)的FA值(圖2)。胼胝體是腦中最大的白質(zhì)結(jié)構(gòu)，由組成2 - 2.5億個對側(cè)軸突突出物組成，其負責(zé)連接左和右大腦半球并促進大腦半球溝通。
[0177]總之，產(chǎn)前地塞米松暴露誘導(dǎo)腦結(jié)構(gòu)和發(fā)育的變化。整個妊娠期和泌乳期間的母親乳鐵蛋白補充可修正(恢復(fù))產(chǎn)前地塞米松暴露誘導(dǎo)的白質(zhì)腦結(jié)構(gòu)的變化，并促進白質(zhì)腦結(jié)構(gòu)的發(fā)育。這些發(fā)現(xiàn)是乳鐵蛋白補充對神經(jīng)保護和腦成熟過程具有益處的強有力的證據(jù)，例如在兒童中。
【權(quán)利要求】
1.用于促進白質(zhì)發(fā)育、治療或預(yù)防白質(zhì)延緩發(fā)育和/或治療或預(yù)防白質(zhì)損失的含乳鐵蛋白的組合物。
2.用于應(yīng)用的依據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其中所述組合物包含至少0.lg/100kcal組合物的量的乳鐵蛋白。
3.用于應(yīng)用的依據(jù)前述權(quán)利要求中的一項的組合物，其中乳鐵蛋白以約0.01g-1OOg,優(yōu)選0.1g - 50g、甚至更優(yōu)選2g - 25g/100kcal的濃度存在。
4.用于應(yīng)用的依據(jù)前述權(quán)利要求中的一項的組合物，其中將所述組合物以相當(dāng)于每天每kg體重攝入至少0.01g乳鐵蛋白的量施用。
5.用于應(yīng)用的依據(jù)前述權(quán)利要求中的一項的組合物，其中所述乳鐵蛋白作為富集乳鐵蛋白的乳或乳清級分而提供。
6.用于應(yīng)用的依據(jù)前述權(quán)利要求中的一項的組合物，其中所述組合物包含以重量計含至少50%乳清蛋白的蛋白質(zhì)源。
7.用于應(yīng)用的依據(jù)前述權(quán)利要求中的一項的組合物，其中所述白質(zhì)是腦白質(zhì)。
8.用于應(yīng)用的依據(jù)前述權(quán)利要求中的一項的組合物，其中所述白質(zhì)是胼胝體的白質(zhì)。
9.用于應(yīng)用的依據(jù)前述權(quán)利要求中的一項的組合物，其中白質(zhì)體積增加。
10.用于應(yīng)用的依據(jù)前述權(quán)利要求中的一項的組合物，其中所述組合物選自食物產(chǎn)品、動物食物產(chǎn)品、藥物組合物、營養(yǎng)配制物、營養(yǎng)保健品、飲料、食品添加劑、嬰兒喂養(yǎng)配方產(chǎn)品或母親食品組合物。
11.用于應(yīng)用的依據(jù)前述權(quán)利要求中的一項的組合物，其中將所述組合物施用于妊娠期間的母親、哺乳期間的母親、早產(chǎn)兒或足月產(chǎn)兒、嬰兒、幼兒、兒童和/或青少年。
12.用于應(yīng)用的依據(jù)前述權(quán)利要求中的一項的組合物，其中將所述組合物施用于有IUGR嬰兒的母親或施用于IUGR嬰兒。
13.用于應(yīng)用的依據(jù)前述權(quán)利要求中的一項的組合物，其用于治療或預(yù)防白質(zhì)障礙。
14.依據(jù)權(quán)利要求13使用的組合物，其中所述白質(zhì)障礙是遺傳的或后天獲得的。
【文檔編號】A61P25/00GK103957928SQ201280057156
【公開日】2014年7月30日 申請日期:2012年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2011年11月21日
【發(fā)明者】B·王, M·福雷 申請人:雀巢產(chǎn)品技術(shù)援助有限公司