專利名稱：疏清顆粒在制備抗手足口病病原體的藥物中的應(yīng)用的制作方法
疏清顆粒在制備抗手足口病病原體的藥物中的應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，尤其是指疏清顆粒新的藥物用途。
背景技術(shù)：
疏清顆粒是目前正在使用的中藥藥物，它的處方是石膏950g，大青葉570g，桑葉 570g，蘆根570g，甘草190g;制備方法是以上五味，取大青葉、蘆根、桑葉、甘草，照流浸膏劑項下滲漉法(中國藥典2010年版一部附錄10)，加65%藥材量的75%乙醇浸潰72小時，以IOOml/分鐘流速滲漉，收集10倍藥材量滲漉液，減壓回收乙醇，并濃縮至相對密度I.35^1. 38 (75°C)的清膏，再取石膏，加7倍藥材量的水先煎煮20分鐘后，加入浸渣，繼續(xù)煎煮45分鐘，共煎煮2次，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對密度I. 35 I. 38 (75°C)的清膏，合并兩清膏，攪勻，取清膏I份、糊精I份，混勻，制粒，干燥，制成1000個，即得。功能與主治清熱解毒，宣泄肺胃。用于小兒急性上呼吸道感染屬風(fēng)熱證，證見發(fā)熱，鼻塞、咽痛、 流涕、口渴、咳嗽、汗出、舌紅或苔薄黃。用法與用量口服，I歲以下，一次3g ;1 3歲，一次6g ;4 6 —次9g ;7歲以上，一次12g ;—日3次。注意宜飯后服用，禁與茶及含鞣酸類藥合用，肝功嚴重損害者禁用；體弱者慎用。個別患者發(fā)生惡心、嘔吐、腹瀉。規(guī)格每袋裝 6g。
手足口病是一種兒童傳染病，又名發(fā)疹性水皰性口腔炎。多發(fā)生于5歲以下兒童， 可引起手、足、口腔等部位的皰疹，少數(shù)患兒可引起心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜腦炎等并發(fā)癥。該病以手、足和口腔粘膜皰疹或破潰后形成潰瘍?yōu)橹饕R床癥狀。手足口病是由腸道病毒引起的傳染病，引發(fā)手足口病的腸道病毒有20多種(型)，其中以柯薩奇病毒A16型(Cox A16)和腸道病毒71型(EV71)為主。近年來手足口病的流行嚴重威脅了我國嬰幼兒健康， 鑒于手足口病重癥病例的病死率逐漸上升，中華人民共和國衛(wèi)生部已將其列入丙類管理的傳染病。
Cox A16屬小RNA病毒科腸道病毒屬A組腸道病毒成員，適合在濕、熱的環(huán)境下生存與傳播，對乙醚、去氯膽酸鹽等不敏感，75%酒精和5%來蘇亦不能將其滅活，但對紫外線及干燥敏感。各種氧化劑(高錳酸鉀、漂白粉等)、甲醛、碘酒都能滅活病毒。Cox A16 感染引起的手足口病由于癥狀輕微，合并癥發(fā)生率低和自限性等特點而未得到足夠的重視。近年有報道指出Cox A16感染可能與心肌炎、心包炎及其它嚴重疾病有關(guān)，甚至還可引起成人致死性肺炎。所以選擇有效的抗Cox A16的藥物及治療迫在眉睫。相對于價格高昂、缺乏理想抗病毒活性的傳統(tǒng)西藥，選擇價格低廉、藥源廣泛和不易產(chǎn)生抗藥性的中藥尤為需要。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供一種疏清顆粒在制備抗手足口病病原體的藥物中的應(yīng)用，以解決目前傳統(tǒng)西藥價格高昂、抗病毒活性不理想的問題。
本發(fā)明采取的技術(shù)方案是疏清顆粒在制備抗手足口病病原體的藥物中的應(yīng)用。
疏清顆粒在制備抗腸道病毒71型的藥物中的應(yīng)用。
疏清顆粒在制備抗柯薩奇病毒A16型的藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明所述疏清顆粒的處方是石膏90(Tl000g,大青葉54(T600g,桑葉54(T600g, 蘆根54(T600g，甘草17(T210g ;制備方法是以上五味，取大青葉、蘆根、桑葉、甘草，照流浸膏劑項下滲漉法(中國藥典2010年版一部附錄10)，加65%藥材量的75%乙醇浸潰72小時，以IOOml/分鐘流速滲漉，收集10倍藥材量滲漉液，減壓回收乙醇，并濃縮至相對密度I.35^1. 38 (75°C)的清膏，再取石膏，加7倍藥材量的水先煎煮20分鐘后，加入浸渣，繼續(xù)煎煮45分鐘，共煎煮2次，濾過，合并濾液，減壓濃縮至相對密度I. 35^1. 38(75°C)的清膏， 合并兩清膏，攪勻，取清膏I份、糊精I份，混勻，制粒，干燥，制成1000個，即得。
本發(fā)明所述疏清顆粒的處方是石膏950g，大青葉570g，桑葉570g，蘆根570g，甘草 190go
本發(fā)明抗病毒中藥“疏清顆粒”具有清熱解毒，宣泄肺胃之功效，用于小兒急性上呼吸道感染屬風(fēng)熱證，證見發(fā)熱，鼻塞、咽痛、流涕、口渴、咳嗽、汗出、舌紅或苔薄黃。價格低廉、藥源廣泛和不易產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點。本專利證明其還具有治療手足口病的功效，將為傳統(tǒng)抗病毒中藥的推廣、以及有效地預(yù)防、治療手足口病提供科學(xué)依據(jù)。用法與用量口服， I歲以下，一次3g ;1 3歲，一次6g ;4 6 —次9g ；7歲以上,一次12g ;—日3次。注意 宜飯后服用，禁與茶及含鞣酸類藥合用，肝功嚴重損害者禁用；體弱者慎用。個別患者發(fā)生惡心、嘔吐、腹瀉。規(guī)格每袋裝6g。
具體實施方式
本發(fā)明所述疏清顆粒的處方是石膏90(Tl000g,大青葉54(T600g,桑葉54(T600g, 蘆根 54(T600g，甘草 17(T210g ；本實施例優(yōu)選的疏清顆粒處方是石膏950g，大青葉570g，桑葉570g，蘆根570g，甘草190g ;制備方法是以上五味，取大青葉、蘆根、桑葉、甘草，照流浸膏劑項下滲漉法(中國藥典2010年版一部附錄10)，加65%藥材量的75%乙醇浸潰72小時，以IOOml/分鐘流速滲漉，收集10倍藥材量滲漉液，減壓回收乙醇，并濃縮至相對密度I. 35 I. 38 (75°C)的清膏，再取石膏，加7 倍藥材量的水先煎煮20分鐘后，加入浸渣，繼續(xù)煎煮45分鐘，共煎煮2次，濾過，合并濾液， 減壓濃縮至相對密度I. 35^1. 38 (75°C)的清膏，合并兩清膏，攪勻，取清膏I份、糊精I份， 混勻，制粒，干燥，制成1000個，即得。用法與用量口服，I歲以下，一次3g ;1 3歲，一次 6g ;4 6 —次9g ;7歲以上，一次12g ;—日3次。
疏清顆粒在制備抗手足口病病原體的藥物中的應(yīng)用。
疏清顆粒在制備抗腸道病毒71型的藥物中的應(yīng)用。
疏清顆粒在制備抗柯薩奇病毒A16型的藥物中的應(yīng)用。
下面通過試驗來進一步驗證本發(fā)明的藥效。
試驗例I疏清顆粒對抗腸道病毒71型(EV71)的體外抗病毒研究 I材料I.I細胞橫紋肌肉瘤(RD)細胞，吉林大學(xué)白求恩醫(yī)學(xué)院分子病毒學(xué)實驗室保存。細胞培養(yǎng)液分別為含2%、10%胎牛血清(GIBCO)的DMEM培養(yǎng)基(HyClone，批號NXD0607)和無血清的DMEM液。
I. 2病毒及檢測試劑盒EV71病毒為臨床分離株，經(jīng)本實驗室分離和qPCR鑒定，使用前經(jīng)RD細胞擴增，所有毒株均置一 80°C保存?zhèn)溆谩PCR檢測試劑盒腸道病毒71型病毒RNA檢測試劑盒(熒光PCR法)，YZB/國5939-2011。
1.3藥物疏清顆粒(吉林華康藥業(yè)股份有限公司，批號120602)，板藍根顆粒 (南寧市維威制藥有限公司，批號120405)。兩種藥物均用無血清的DMEM培養(yǎng)液配制成質(zhì)量濃度為100mg/ml，過濾除菌后做為儲備液，4°C保存。
2 方法2.I EV71半數(shù)組織培養(yǎng)感染量(TCID5tl)的測定超凈臺內(nèi)將培養(yǎng)不超過7天，形態(tài)良好，生長旺盛的RD細胞，制成I X 105/ml細胞懸液， 每孔100 μ I接種于96孔板中，37°C，5% CO2培養(yǎng)24 h至細胞長成單層。生物安全柜內(nèi)用無血清DMEM液進行10倍倍比稀釋制備ICT1 -IO-10共10個稀釋度的病毒液接種于上述已準備好的細胞中，每個稀釋度設(shè)3個復(fù)孔，每孔100 μ 1，置于37°C，5% CO2飽和濕度孵箱中繼續(xù)培養(yǎng)。第3天開始每天在倒置顯微鏡下觀察細胞病變情況，記錄細胞病變程度(CPE)。 CPE判定標(biāo)準:無CPE，記錄為(-)；0- 25% CPE，記錄為(+ ) ；25%-50% CPE，記錄為(+ + ) ；50%-75% CPE，記錄為(+ + + ) ；75% -100% CPE，記錄為(+ + + + )。第 7-8 天判定結(jié)果，按Reed-Muench法計算TCID5tl,判定公式為距離比例=(高于50%病變百分數(shù)-50%)/ (高于50%病變率的百分數(shù)-低于50%病變百分數(shù))TCID5tl的對數(shù)=高于50%病變的病毒最高稀釋度對數(shù)十距離比例X稀釋系數(shù)的對數(shù)2.2疏清顆粒和板藍根顆粒的抗病毒作用及半數(shù)有效濃度(IC5tl)的測定設(shè)細胞空白對照、病毒對照、板藍根顆粒陽性對照和疏清顆粒藥物組，共4個組。在超凈臺中，將濃度為2 X 105/ml的RD細胞懸液按每孔100 μ I接種于96孔板，37°C，5%C02培養(yǎng) 24 h，待細胞長成單層后棄去培養(yǎng)液，加入20 μ IIOOTCID5ci的EV71病毒液感染細胞，吸附一小時后，洗去病毒液。板藍根顆粒及疏清顆粒儲備液經(jīng)10倍倍比稀釋為10-0. 001 g · Γ1 的5個濃度梯度，各孔加入不同濃度的中藥100 μ 1，孵育48小時，倒置顯微鏡觀察藥物對細胞病變的抑制作用后，棄去藥液。每孔加5mg/mlMTT 10 μ 1，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，棄去培養(yǎng)液，加 DMSO每孔100 μ I溶解，用酶標(biāo)儀測定各孔在波長492nm處吸光度值A(chǔ)492。按下列公式計算藥物對病毒的抑制率，并用Probit回歸法計算藥物抑制病毒的IC5Q。
病毒抑制率=(A492藥物-A492病毒)/ (A492正常-A492病毒)X 100%2.3統(tǒng)計學(xué)方法以上各實驗重復(fù)3次，統(tǒng)計數(shù)據(jù)采用均數(shù)土標(biāo)準差(X土 s)表示，所得數(shù)據(jù)構(gòu)成計量資料，采用t檢驗進行統(tǒng)計分析，P < O. 05為差異有顯著性。
3.結(jié)果3.I EV71病毒經(jīng)qPCR試劑盒檢測，結(jié)果為陽性。
3. 2 EV71 TCID50 的測定 EV71 的 TCID5ci=KT6.323.3疏清顆粒的抗病毒作用及半數(shù)有效濃度IC5tl的測定本研究采用MTT法檢測藥物的體外抗病毒效應(yīng)，并計算疏清顆粒及對照藥物不同濃度下的病毒抑制率及半數(shù)有效濃度IC5tl，結(jié)果如表I所示。
表I疏清顆粒體外抗EV71病毒作用
權(quán)利要求
1.疏清顆粒在制備抗手足口病病原體的藥物中的應(yīng)用。
2.疏清顆粒在制備抗腸道病毒71型的藥物中的應(yīng)用。
3.疏清顆粒在制備抗柯薩奇病毒A16型的藥物中的應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求I或2或3所述的疏清顆粒是由如下質(zhì)量份數(shù)的原料制成的石膏 90(Tl000g，大青葉 54(T600g，桑葉 54(T600g，蘆根 54(T600g，甘草 17(T210g。
5.如權(quán)利要求4所述的疏清顆粒是由如下質(zhì)量份數(shù)的原料制成的石膏950g，大青葉 570g,桑葉 570g，蘆根 570g，甘草 190g。
6.如權(quán)利要求I或2或3所述的疏清顆粒的制備方法是取大青葉、蘆根、桑葉、甘草， 照中國藥典2010年版一部附錄10流浸膏劑項下滲漉法，加65%藥材量的75%乙醇浸潰72 小時，以IOOml/分鐘流速滲漉，收集10倍藥材量滲漉液，減壓回收乙醇，并濃縮至75°C時測相對密度I. 35^1. 38的清膏，再取石膏，加7倍藥材量的水先煎煮20分鐘后，加入浸渣，繼續(xù)煎煮45分鐘，共煎煮2次，濾過，合并濾液，減壓濃縮至75°C時測相對密度I. 35^1. 38的清膏，合并兩清膏，攪勻，取清膏I份、糊精I份，混勻，制粒，干燥，制成1000個。
7.如權(quán)利要求5所述的疏清顆粒的制備方法是取大青葉、蘆根、桑葉、甘草，照中國藥典2010年版一部附錄10流浸膏劑項下滲漉法，加65%藥材量的75%乙醇浸潰72小時，以 IOOml/分鐘流速滲漉，收集10倍藥材量滲漉液，減壓回收乙醇，并濃縮至75°C時測相對密度I. 35^1. 38的清膏，再取石膏，加7倍藥材量的水先煎煮20分鐘后，加入浸渣，繼續(xù)煎煮 45分鐘，共煎煮2次，濾過，合并濾液，減壓濃縮至75°C時測相對密度I. 35^1. 38的清膏，合并兩清膏，攪勻，取清膏I份、糊精I份，混勻，制粒，干燥，制成1000個。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種疏清顆粒在制備抗手足口病病原體的藥物中的應(yīng)用，屬于中藥領(lǐng)域。疏清顆粒在制備抗手足口病病原體的藥物中的應(yīng)用；疏清顆粒在制備抗腸道病毒71型的藥物中的應(yīng)用；疏清顆粒在制備抗柯薩奇病毒A16型的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明證明其還具有治療手足口病的功效，將為傳統(tǒng)抗病毒中藥的推廣、以及有效地預(yù)防、治療手足口病提供科學(xué)依據(jù)。
文檔編號A61K36/899GK102920944SQ201210478230
公開日2013年2月13日 申請日期2012年11月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月22日
發(fā)明者王放, 王鑫磊, 呼潔, 劉傳貴, 劉建偉, 張宇, 李平亞, 李凡 申請人:吉林華康藥業(yè)股份有限公司