專利名稱：一種抑菌劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，尤其涉及一種中藥抑菌組合。
背景技術(shù)：
金銀花(Lonicera japonica Thumb),又名雙花、銀花、忍冬花，為忍冬科多年生纏繞性木質(zhì)藤本植物忍冬的花蕾，是我國中草藥資源最重要的成員之一，在我國南北各地均有分布。其對于人體的生理功能主要為清熱解毒、疏散風(fēng)熱、涼血止痢。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明金銀花富含綠原酸、異綠原酸、黃酮類物質(zhì)、忍冬甙、肌醇及微量揮發(fā)油等，因而其對人體有積極作用。金銀花可以抗病原微生物，實(shí)驗(yàn)證明金銀花對各種致病菌、病毒，如金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、肺炎雙球菌、百日咳桿菌、傷寒桿菌、副傷寒桿菌、痢疾桿菌、霍亂弧菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、腦膜炎雙球菌、皮膚真菌、流感病毒、鉤端螺旋體等均有不同程度的抑制作用。另外金銀花還可以增強(qiáng)免疫功能，促進(jìn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，增強(qiáng)白細(xì)胞的吞噬功·能。金銀花因其較高的醫(yī)藥價值和其抗菌性、抗炎性、抗老化、防癌癥等許多醫(yī)藥應(yīng)用而獲得了人們的關(guān)注。中藥制劑濃縮液制成口服液或抑菌劑、涂覆劑等一次用劑量大，影響效果。

發(fā)明內(nèi)容
針對金銀花抑菌劑一次用量大的問題，本發(fā)明人經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)納米銀能有效增強(qiáng)金銀花提取液抑菌性能，減少金銀花抑菌劑的用量，且采用兩種低劑量的抑菌組合物，更加的安全本。本發(fā)明的目的在于提供一種金銀花納米銀抑菌劑，減少金銀花抑菌劑一次的用劑量和降低藥品對人體的毒性
本發(fā)明提供如下技術(shù)方案
一種抑菌劑，包含金銀花提取液、水溶性納米銀；
金銀花提取液制備包括如下步驟取干藥材金銀花，加水量為金銀花重量的9倍，經(jīng)95°〇水浴提取4 h，再經(jīng)過減壓濃縮得到提取液；所得提取液經(jīng)0.22 μ m濾膜過濾。最后提取液經(jīng)高壓液相色譜法對提取液中綠原酸含量進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)定量。抑制大腸桿菌0157:H7時金銀花提取液、水溶性納米銀的體積比為75 100:1。抑制藤黃微球菌時金銀花提取液、水溶性納米銀的體積比為6. 73 12. 5: I。算體積比時金銀花提取液中綠原酸含量為23.62 mg/g，水溶性納米銀濃度為10 mg/mL。水溶性納米銀顆粒粒徑為3 10 nm,納米銀外表包覆兩性聚合物。水溶性納米銀粒徑為3 10 nm，外表為羧基，依照下列方法制備加水量為金銀花重量的9倍，經(jīng)95 1水浴提取4 h，再經(jīng)過真空旋轉(zhuǎn)濃縮儀得到提取液。所述水溶性納米銀依照下列方法制備取22. 8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氫氧化鈉析出沉淀，過濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得到十四烷酸銀；稱取6. 7 g 20 mmoL/L十四烷酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入58 mL40 mmoL/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數(shù)次后，真空干燥，即得到納米銀粒子粉末。依照本方法制備的水溶性納米銀顆粒與金銀花提取液具有良好的協(xié)同抗菌作用。本發(fā)明還涉及上所述抑菌劑在抑制大腸桿菌0157:H7中的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及上述抑菌劑在抑制藤黃微球菌中的應(yīng)用。
本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明水溶性納米銀能有效增強(qiáng)金銀花抑菌性能，降低金銀花抑菌劑的用量，兩種藥物的合用對抑制大腸桿菌0157:H7和藤黃微球菌起到協(xié)同作用，同時本抑菌劑采用兩種低劑量的抑菌物質(zhì)，相對于使用高劑量的金銀花或者水溶性納米銀，更加的安全，可以作為安全可靠地外用涂覆劑等。


圖I金銀花提取液與納米銀之比為100:1對大腸桿菌0157:H7協(xié)同抑菌作用 (圖Ia 200 μ L金銀花提取液對大腸桿菌0157 :Η7的抑制作用，圖Ib 2 μ L的納米銀
對大腸桿菌0157: Η7的抑制作用，圖Ic 100 μ L金銀花提取液與I μ L納米銀對大腸桿菌0157 :Η7的協(xié)同抑菌作用。)。圖2金銀花提取液與納米銀之比為75:1對大腸桿菌0157 :Η7協(xié)同抑菌作用
(圖2a 150 μ L金銀花提取液對大腸桿菌0157 :Η7的抑制作用，圖2b 2 μ L的納米銀對大腸桿菌0157 :Η7的抑制作用，圖2c 75 μ L金銀花提取液、I μ L納米銀對大腸桿菌0157 :Η7的協(xié)同抑菌作用。)。圖3金銀花提取液與納米銀對藤黃微球菌協(xié)同抑菌作用
圖3a 200 μ L金銀花提取液對藤黃微球菌的抑制作用，圖3b 16 μ L的納米銀對藤黃微球菌的抑制作用，圖3c 100 μ L金銀花提取液與8 μ L納米銀對藤黃微球菌的協(xié)同抑菌作用。圖4金銀花提取液與納米銀對藤黃微球菌協(xié)同抑菌作用
圖4a 100 μ L金銀花提取液對藤黃微球菌的抑制作用，圖4b 16 μ L的納米銀對藤黃微球菌的抑制作用，圖4c 50 μ L金銀花提取液與8 μ L納米銀對藤黃微球菌的協(xié)同抑菌作用。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例中所用試劑均為常規(guī)試劑，依照常規(guī)方式配制即可。實(shí)施例I
I、金銀花提取液的制備過程稱取干藥材金銀花50 g，加水量為450 mL，在95 °C下提取4 h，經(jīng)過真空旋轉(zhuǎn)濃縮儀后，用O. 22 μ m濾膜除去提取液中的雜質(zhì)和細(xì)菌，最后用高效液相色譜法測得提取液中綠原酸含量為23.62 mg/g。2、水溶性銀納米顆粒制備
取22. 8 g十四烷酸溶于140 mL按2:5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氫氧化鈉析出沉淀，過濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得到十四烷酸銀；稱取6. 7 g濃度為20 mmoL/L十四烷酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入58 mL濃度為40 mmoL/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數(shù)次后，真空干燥，即得到納米銀粒子粉末。3、金銀花提取液與水溶性納米銀協(xié)同抑菌作用。a細(xì)菌的培養(yǎng)
挑取LB瓊脂培養(yǎng)基上的大腸桿菌0157:H7的單菌落于10 mL LB肉湯培養(yǎng)基中，置于37 °C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16 h，再按I %的接種量接種于5 mL的LB肉湯培養(yǎng)基中，37 °C培養(yǎng)4h后。取I mL上述菌液用O. 1%的蛋白胨水連續(xù)稀釋三個梯度，最終的菌液大約為IO6 CFU/mL。b水溶性納米銀與金銀花提取液在抑菌性能上的協(xié)同作用
分別取I mL上述已稀釋好的菌液于I. 5 mL滅菌的離心管中，向I號離心管中分別加Λ 200 μ L金銀花提取液(綠原酸含量為23.62 mg/g,下同)，向2號離心管中加入2 μ L濃度為10 mg/mL的水溶性納米銀，向3號離心管中加入100 μ L金銀花提取液和I μ L濃度為10 mg/mL的水溶性納米銀，不加入任何上述抑菌劑。為保證每管液體最終體積相等，差量用O. 1%的蛋白胨水補(bǔ)齊。置于37 °C培養(yǎng)2 h。每組實(shí)驗(yàn)平行三次。c平板計(jì)數(shù)
將實(shí)驗(yàn)組待測液用PBS連續(xù)稀釋兩個梯度，10°、10'10_2各取出200 μ L分別均勻涂布
在
LB固體平板上；空白組連續(xù)稀釋四個梯度，從10_2、10_3、10_4三個梯度分別均涂布在LB固體平板上。平板吹干后，37°C倒置培養(yǎng)12 h，長出菌落后計(jì)數(shù)，以30-300個菌落形成單位(CFU)為有效的計(jì)數(shù)范圍。每毫升原菌液活菌數(shù)=平板計(jì)數(shù)*稀釋倍數(shù)*5實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下
權(quán)利要求
1.一種抑菌劑，其特征在于包含金銀花提取液、水溶性納米銀；所述金銀花提取液制備包括如下步驟加水量為金銀花重量的9倍，經(jīng)95 1水浴提取4 h，再經(jīng)過真空旋轉(zhuǎn)濃縮儀得到提取液；所述水溶性納米銀依照下列方法制備取22. 8 g十四烷酸溶于140 mL按2: 5比例混合的甲醇和水中，向溶液中加入4 g的氫氧化鈉析出沉淀，過濾，將沉淀加入到100 mL濃度為10 mol/L水溶性的硝酸銀溶液中得到十四烷酸銀；稱取6. 7 g濃度為20mmoL/L十四燒酸銀于100 mL燒杯中，向燒杯中加入58 mL濃度為40 mmoL/L的三乙胺，80°C下電磁攪拌2 h，白色的十四烷酸銀粉末逐漸變成棕色，不溶的前體消失，加入20 mL丙酮沉淀析出，抽濾，用丙酮洗滌沉淀數(shù)次后，真空干燥，即得到納米銀粒子粉末。
2.如權(quán)利要求I所述的抑菌劑，其特征在于抑制大腸桿菌0157:H7時金銀花提取液、水溶性納米銀的體積比為75 100: I。
3.如權(quán)利要求I所述的抑菌劑，其特征在于抑制藤黃微球菌時金銀花提取液、水溶性納米銀的體積比為6. 73 12. 5:1。
4.如權(quán)利要求I所述的抑菌劑，其特征在于所得提取液經(jīng)O.22 μ m濾膜過濾。
5.如權(quán)利要求2所述的抑菌劑，其特征在于所述的金銀花提取液、水溶性納米銀體積比為100:1。
6.如權(quán)利要求I所述的抑菌劑，其特征在于所得的提取液經(jīng)高壓液相色譜法對提取液中綠原酸含量進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)定量。
7.如權(quán)權(quán)利要求Γ6任一所述抑菌劑在抑制大腸桿菌0157:H7中的應(yīng)用。
8.如權(quán)利要求1 6任一所述抑菌劑在抑制藤黃微球菌中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種抑菌劑，屬于中藥領(lǐng)域。抑菌劑中金銀花提取液與水溶性納米銀以75:1～100:1的比例混合，兩種藥物的合用對抑制大腸桿菌O157:H7、藤黃微球菌起到協(xié)同的作用。本發(fā)明的一種金銀花提取物與納米銀抑菌劑與現(xiàn)有的技術(shù)相比，解決了常規(guī)抑菌方法中金銀花抑菌劑用量較大的問題，同時采用兩種低劑量的抑菌物質(zhì)減少了微生物耐藥的發(fā)生機(jī)率、降低了其對人體的毒性，更加的安全。
文檔編號A61K33/38GK102895286SQ20121036649
公開日2013年1月30日 申請日期2012年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月28日
發(fā)明者魏華, 許恒毅, 曲鋒, 熊勇華, 賴衛(wèi)華, 徐鋒, 萬翠香, 郭亮 申請人:南昌大學(xué)