專利名稱：虎杖苷在制備預(yù)防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及天然植物活性成分虎杖苷的藥物新用途，具體地說(shuō)是涉及虎杖苷在制備預(yù)防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應(yīng)用，特別是涉及制備預(yù)防和治療進(jìn)行性的慢性腎小球疾病及足細(xì)胞病變相關(guān)(如腎小球硬化癥等)腎小球疾病藥物中的應(yīng)用。
ニ背景技術(shù)：
虎杖苷(Polydatin，CAS號(hào)65914-17-2)又名云杉新甙或白藜蘆醇甙，是ー種天然活性成分，其來(lái)源包括寥科植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc.的干燥根莖和根。中國(guó)糖尿病患病率為9. 7%，高于世界平均水平的6. 4%，已成為世界第一糖尿病大國(guó)。我國(guó)糖尿病高危人群高達(dá)I. 5億人。隨著糖尿病腎病發(fā)病率的逐年増加，糖尿病的并 發(fā)癥中，慢性腎小球疾病的發(fā)病率已經(jīng)上升到第一位。糖尿病性腎病發(fā)病后轉(zhuǎn)向末期腎衰竭(需透析)的比例非常高；與之類似，其它慢性腎小球疾病隨著病程進(jìn)展轉(zhuǎn)向透析吋，同樣會(huì)出現(xiàn)醫(yī)療費(fèi)用高漲等社會(huì)性重大問(wèn)題。因此，針對(duì)慢性腎小球疾病進(jìn)展相關(guān)的預(yù)防和治療藥劑需求十分強(qiáng)烈。就慢性腎小球疾病而言，足細(xì)胞(podocyte)病變?cè)谄浒l(fā)生發(fā)展過(guò)程是十分重要的病理事件。足細(xì)胞是位于腎小球毛細(xì)血管基底膜外側(cè)的臟層上皮細(xì)胞，因其胞漿在基底膜表面形成偽足樣突起而得名。足突之間的裂孔膜(split mernbrane)是腎小球?yàn)V過(guò)的最后一道屏障，因此足細(xì)胞損傷將導(dǎo)致蛋白尿出現(xiàn)。隨著對(duì)足細(xì)胞生物學(xué)研究的深入，尤其是在發(fā)現(xiàn)足細(xì)胞表達(dá)的ー些特異性蛋白分子之后，足細(xì)胞已被認(rèn)為是參與各種原發(fā)性或繼發(fā)性腎小球疾病進(jìn)展的關(guān)鍵細(xì)胞。原發(fā)性足細(xì)胞病常以微小病變、局灶節(jié)段性腎小球硬化以及膜性腎病的表現(xiàn)形式而發(fā)?。欢^發(fā)性足細(xì)胞病常見(jiàn)于感染相關(guān)性、藥物相關(guān)性、金屬類藥物相關(guān)性、自身免疫性、腫瘤相關(guān)性、腎移植相關(guān)性膜性腎病。目前國(guó)內(nèi)外尚未出現(xiàn)以腎小球病變?yōu)獒槍?duì)性目標(biāo)靶點(diǎn)的藥物，為抑制或延遲病程向透析轉(zhuǎn)變，臨床常用藥劑包括類固醇類藥物、抗凝藥物、免疫抑制劑、血管緊張素II受體拮抗劑類等。上述藥物改善作用有限，副作用明顯。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供天然植物活性成分虎杖苷的醫(yī)藥新用途，具體地說(shuō)是涉及虎杖苷在制備預(yù)防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應(yīng)用，特別是涉及制備用于進(jìn)行性的慢性腎小球疾病包括腎小球硬化癥的預(yù)防和治療藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明的技術(shù)解決方案提供虎杖苷在制備預(yù)防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應(yīng)用。虎杖苷在制備預(yù)防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的慢性腎小球疾病為腎小球足細(xì)胞病?；⒄溶赵谥苽漕A(yù)防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的慢性腎小球疾病為局灶性腎小球硬化癥?；⒄溶赵谥苽漕A(yù)防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的慢性腎小球疾病為IgA腎病?；⒄溶赵谥苽漕A(yù)防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的慢性腎小球疾病為膜性腎病?；⒄溶赵谥苽漕A(yù)防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的慢性腎小球疾病為膜增生性腎小球腎炎。該應(yīng)用包括了以虎杖苷為主料，配以本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知的藥用輔料(賦形齊U、助溶剤、控釋劑等)，用常規(guī)的制劑方法制成本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知的劑型(包括ロ服液、注射劑、膠囊劑、片劑、顆粒劑、微囊劑等)。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是，提供了對(duì)進(jìn)行性的慢性腎小球疾病具有確切改善和治療作用的 虎杖苷制備藥劑(保健品或藥物)，用于預(yù)防和治療進(jìn)行性的慢性腎小球疾病及足細(xì)胞病變相關(guān)(如腎小球硬化癥等)腎小球疾病。本發(fā)明具有3個(gè)明顯的進(jìn)步和優(yōu)點(diǎn)1、成分明確(虎杖苷)；2、目標(biāo)明確(腎小球疾病)；3、調(diào)節(jié)作用明確(明顯改善和治療作用)。本發(fā)明利用動(dòng)物模型在生化功能和組織細(xì)胞水平上科學(xué)地評(píng)價(jià)并證明了虎杖苷對(duì)慢性腎小球疾病的確切的改善和治療作用。本發(fā)明所涉及的虎杖苷對(duì)正常對(duì)照動(dòng)物慢性腎小球疾病相關(guān)指標(biāo)無(wú)顯著影響，具有很好的安全性。為了更好的理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面將用虎杖苷的藥理實(shí)驗(yàn)及結(jié)果來(lái)說(shuō)明其在制備預(yù)防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應(yīng)用。
四

圖I :PAS染色結(jié)果(果糖致腎小球病變大鼠模型)上排左圖正常對(duì)照；上排中圖正常對(duì)照+虎杖苷；上排右圖正常對(duì)照+匹格列酮；下排左圖果糖模型；下排中圖果糖模型+虎杖苷；下排右圖果糖模型+匹格列酮。圖2 :透射電鏡結(jié)果(果糖致腎小球病變大鼠模型)上排左圖正常對(duì)照；上排中圖正常對(duì)照+虎杖苷；上排右圖正常對(duì)照+匹格列酮；下排左圖果糖模型；下排中圖果糖模型+虎杖苷；下排右圖果糖模型+匹格列酮。圖3 :透射電鏡結(jié)果(阿霉素致腎小球硬化癥大鼠模型)左圖正常對(duì)照；中圖模型對(duì)照；右圖模型+虎杖苷。五具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例僅作為進(jìn)ー步闡述發(fā)明之用，不能用來(lái)限制本發(fā)明。實(shí)施例I :虎杖苷對(duì)果糖模型大鼠腎小球病變的改善治療作用。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，200-220克，雄性。藥物配制選用虎杖苷含量為20mg/片的用于腎小球疾病的預(yù)防或治療的片劑，超聲分散于生理鹽水中，用于灌胃給藥，給藥劑量為7. 5mg/kg。實(shí)驗(yàn)儀器高速冷凍離心機(jī)，組織切片機(jī)，酶標(biāo)儀，分光光度計(jì)，光學(xué)顯微鏡，透射電子顯微鏡等。實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ凸谴笫竽Ｐ汀?shí)驗(yàn)方法I、模型的建立動(dòng)物適應(yīng)環(huán)境I周后，隨機(jī)分成模型組和正常組，每組30只。果糖大鼠模型造模飲用水給予10%果糖溶液；正常組給予自來(lái)水，造模周期70天。2、造模4周后模型組和正常組分別設(shè)立虎杖苷和匹格列酮給藥組，每組10只。每天灌胃給予虎杖苷(7. 5mg/kg)和匹格列酮(4mg/kg)。該藥持續(xù)6周,給藥期間模型動(dòng)物繼續(xù)給予10%果糖溶液。3、收集血液尿液樣本，用于檢測(cè)生化指標(biāo)血肌酐、血尿素氮水平和尿白蛋白與尿 肌酐比值。4、動(dòng)物處死冰臺(tái)上分離腎臟組織，分為二部分，分別經(jīng)甲醛和戊ニ醛固定，常規(guī)切片。分別在光學(xué)顯微鏡(PAS染色)及透射電鏡下觀察腎小球組織形態(tài)學(xué)的改變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果A :腎功能生化指標(biāo)
Group 血肌酐血尿素氮尿白蛋白a = 10_fmg/dL)_fmmol/LTl_fmg/mg Cr.)
正常
+ 生理鹽水0.326±0.0124.209±0.3(H6.068± 1.726
+ 虎杖.H:7.5 mg/kg0.304 ±0.0074.503 士 0.4135.042 ±0.047
+ 匹格列酮4mg/kg0.319士0.0063.881 土0.2566.025 ±0.693
果糖模型
+ 生理鹽水0.362 ±0.012出8.885 士 0.406拼27.672 士 5.386++十
+7.5 mg/kg0.316 ±0.006***7.066 ± 0.684**3.174 ± 1.17ΓΜ
+ 匹格列圍4 mg/kg0.282 ± 0.007***3.663 士 0.449M*13.703 土 2.058w+++P<0. 001與正常+生理鹽水組比較；**P〈0.01，***P〈0.001與果糖模型+生理鹽水組比較果糖模型大鼠血肌酐、血尿素氮水平和尿白蛋白與尿肌酐比值均顯著高于正常組大鼠，其中血肌酐和血尿素氮水平升高，說(shuō)明果糖模型大鼠腎臟濾過(guò)能力下降；尿白蛋白與尿肌酐比值升高則提示果糖模型大鼠腎臟濾過(guò)屏障受到破壞；上述兩種腎功能濾過(guò)功能障礙均說(shuō)明果糖大鼠腎小球發(fā)生功能性損害?；⒄溶湛梢燥@著地緩解果糖引起的腎小球功能損傷，其效果超過(guò)陽(yáng)性對(duì)照藥物匹格列酮，而正常動(dòng)物給予虎杖苷則對(duì)上述指標(biāo)均未發(fā)現(xiàn)明顯變化。B:腎組織結(jié)構(gòu)損害如附圖I所示光鏡觀察到模型組大鼠腎小球PAS染色呈現(xiàn)明顯的陽(yáng)性反應(yīng)，提示果糖大鼠腎小球系膜基質(zhì)增生；虎杖苷給藥可以有效的改善果糖誘導(dǎo)的腎小球系膜基質(zhì)增生；相對(duì)于正常對(duì)照動(dòng)物，虎杖苷給藥組動(dòng)物腎小球系膜未見(jiàn)明顯變化。
如附圖2所示透射電鏡觀察到模型組足細(xì)胞足突融合變扁平，部分融合、消失，腎小球基底膜(GBM)增厚；虎杖苷給藥可以有效減輕上述足細(xì)胞及GBM病理性變化；相對(duì)于正常對(duì)照動(dòng)物，虎杖苷給藥組動(dòng)物腎小球足細(xì)胞未見(jiàn)明顯變化。通過(guò)腎功能指標(biāo)和組織結(jié)構(gòu)檢測(cè)結(jié)果表明，虎杖苷對(duì)于果糖模型大鼠腎小球功能和結(jié)構(gòu)損害有明顯的保護(hù)改善作用，其效用與匹格列酮相當(dāng)，其作用主要體現(xiàn)在對(duì)于腎小球足細(xì)胞和膜功能的保護(hù)上?；⒄溶战o藥對(duì)于正常動(dòng)物腎小球功能和結(jié)構(gòu)無(wú)顯著影響，說(shuō)明其用于腎小球疾病的預(yù)防和治療藥物的安全性。實(shí)施例2 :虎杖苷對(duì)阿霉素致腎小球硬化癥大鼠的腎小球病變的改善治療作用。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，200-220克，雄性。藥物配制選用虎杖苷含量為20mg/片的用于腎小球疾病的預(yù)防或治療的片劑，超聲分散于生理鹽水中，用于灌胃給藥，給藥劑量為75mg/kg。注射用鹽酸阿霉素(商品名法瑪新針；蘇法瑪西亞公司)。 實(shí)驗(yàn)方法局灶性節(jié)段性腎小球硬化是ー常見(jiàn)的原發(fā)性腎小球疾病，主要是由于腎小球血流動(dòng)力學(xué)的異常導(dǎo)致足細(xì)胞損傷，易進(jìn)展為終末期慢性腎衰竭。I、模型的建立動(dòng)物適應(yīng)環(huán)境I周后，隨機(jī)分成模型組和正常組，每組30只。模型組大鼠，經(jīng)尾靜脈注射阿霉素2. 5mg/kg (溶于生理鹽水O. 5mL中)；正常組尾靜脈注射生理鹽水O. 5mL。20d后，重復(fù)上述操作。2、于第2次注射阿霉素后I天，治療組每天灌胃給予虎杖苷(7. 5mg/kg)給藥持續(xù)12周。3、收集血液尿液樣本，用于檢測(cè)生化指標(biāo)血肌酐、血尿素氮水平和尿白蛋白與尿肌酐比值。4、動(dòng)物處死冰臺(tái)上分離腎臟組織，戊ニ醛固定切片。透射電鏡下觀察腎小球組織形態(tài)學(xué)改變。實(shí)驗(yàn)結(jié)果A :尿蛋白指標(biāo)
權(quán)利要求
1.虎杖苷在制備預(yù)防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的虎杖苷在制備預(yù)防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的慢性腎小球疾病為腎小球足細(xì)胞病。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的虎杖苷在制備預(yù)防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的慢性腎小球疾病為局灶性腎小球硬化癥。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的虎杖苷在制備預(yù)防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的慢性腎小球疾病為IgA腎病。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的虎杖苷在制備預(yù)防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的慢性腎小球疾病為膜性腎病。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的虎杖苷在制備預(yù)防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的慢性腎小球疾病為膜增生性腎小球腎炎。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的虎杖苷在制備預(yù)防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述的虎杖苷配以相應(yīng)劑型的輔料用常規(guī)的制劑方法制成口服液、膠囊劑、片劑、顆粒劑或微囊劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及天然單體化合物虎杖苷的醫(yī)藥新用途，具體地說(shuō)是涉及虎杖苷在制備預(yù)防和治療慢性腎小球疾病藥物中的應(yīng)用，特別是涉及制備預(yù)防和治療進(jìn)行性的慢性腎小球疾病及足細(xì)胞病變相關(guān)(如腎小球硬化癥等)腎小球疾病藥物中的應(yīng)用。動(dòng)物試驗(yàn)結(jié)果表明虎杖苷對(duì)果糖模型大鼠腎小球功能和器質(zhì)性損害有明顯的預(yù)防改善作用；對(duì)于腎小球硬化癥模型大鼠尿蛋白和腎小球足細(xì)胞損害有明顯的治療改善作用。利用虎杖苷配以相關(guān)輔料，用常規(guī)的制劑方法可制成針對(duì)性預(yù)防和治療腎小球疾病的保健品或藥物。上述保健品和藥物可用于包括糖尿病、代謝綜合征等涉及慢性腎小球損害的疾病；可用于腎小球硬化癥等涉及足細(xì)胞病變的疾病，可延緩和改善相關(guān)疾病中腎小球進(jìn)行性病程。
文檔編號(hào)A61K31/7034GK102824354SQ20121035961
公開(kāi)日2012年12月19日 申請(qǐng)日期2012年9月24日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月24日
發(fā)明者孔令東, 王偉, 潘穎, 丁曉琴 申請(qǐng)人:南京大學(xué)