專利名稱：雞傳染性法氏囊病卵黃抗體凍干保護劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬于禽類抗體保存技術領域，具體涉及一種雞傳染性法氏囊病卵黃抗體的凍干保護劑。
背景技術：
雞傳染性法氏囊病(Infectious bursal disease,總稱IBD),是由傳染性法氏囊病毒侵害幼雞免疫系統(tǒng)的一種急性接觸性傳染病。1957年首次發(fā)生于美國特拉華州的岡博羅，所以又稱為R博羅病。目前已遍布于世界養(yǎng)雞業(yè)發(fā)達的國家和地區(qū)，也是我國近幾年來嚴重威脅養(yǎng)雞業(yè)的重要疾病之一。該病一方面死亡率、淘汰率增加，另一方面導致免疫抑制，使多種疫苗對雞的免疫應答下降，致使免疫失敗，造成巨大的經(jīng)濟損失。卵黃抗體是當今生物科學研究領域的一項重大發(fā)現(xiàn)。母雞以特定抗原免疫后，能 產生相對應的特異性抗體，并將其有效地儲存于卵黃中，卵黃中的免疫球蛋白(IgG)稱卵黃抗體，又名卵黃免疫球蛋白(IgY)。自Williams等(1962)發(fā)現(xiàn)卵黃抗體以來，IgY以其取材方便，制作簡單，價格便宜等優(yōu)點，廣泛應用于動物疾病的診斷、預防和治療。其中，雞傳染性法氏囊病卵黃抗體是開發(fā)較早的一類卵黃抗體類產品，在臨床常作為雞傳染性法氏囊病的特效藥使用，有效率高達90%以上，是防治臨床雞傳染性法氏囊病的有力武器。目前，國內雞傳染性法氏囊病卵黃抗體制劑都是經(jīng)稀釋分裝而成的液體劑型，存在著體積大，運輸不便，需低溫保存和運輸。由于反復凍融和運輸不當很容易造成效價降低，而冷凍干燥能使萃取抗體在預先冷凍的狀態(tài)下，不經(jīng)液態(tài)直接升華除去水分而獲得凍干制劑，它避免了液態(tài)下保存的抗體易失活易變性的缺點，使產品質量穩(wěn)定，體積縮小，便于運輸及長時間保存。常用的凍干保護劑種類有多羥基化合物、糖類、蛋白質、聚合物、氨基酸、鹽和表面活性劑等。但鑒于畜禽養(yǎng)殖用藥開發(fā)的特點，凍干保護劑成本不能太高、凍干操作要簡單。因此，研發(fā)一種新的配方簡單、成本低廉和能夠批量制備的雞傳染性法氏囊病卵黃抗體凍干保護劑就顯得尤為迫切和重要。

發(fā)明內容
本發(fā)明主要目的是提供一種雞傳染性法氏囊病卵黃抗體的凍干保護劑，從而彌補現(xiàn)有技術的不足。本發(fā)明的雞傳染性法氏囊病卵黃抗體的凍干保護劑，為包含有甘露醇、右旋糖苷和甘氨酸的蒸餾水溶液。上述的凍干保護劑，其各組分濃度質量體積百分比g/ml為1-5%甘露醇、1-5%右旋糖苷、O. 8-1. 2%甘氨酸。上述凍干保護劑各組分濃度優(yōu)選為4%甘露醇、3%右旋糖苷、I %甘氨酸。上述的凍干保護劑中還加入有大豆蛋白胨，加入的大豆蛋白胨的質量體積百分比g/ml濃度為5-10%，優(yōu)選為8%。將雞傳染性法氏囊病卵黃抗體與上述凍干保護劑以體積比7:1比例混合，作為雞傳染性法氏囊病卵黃抗體凍干液體；將凍干液體在I小時內降溫至-40°c并維持4小時；然后在I小時內將制品從_40°C升至_8°C并維持14小時；0. 5小時將制品從_8°C升至28V并維持10小時完成雞傳染性法氏囊病卵黃抗體凍干制劑的制備。本發(fā)明的凍干保護劑組分簡單、成本低廉、易于制備，解決了雞傳染性法氏囊病卵黃抗體的長途運輸、保存的低溫儲存難題。使用效果表明凍干保護劑配方可使雞傳染性法氏囊病卵黃抗體在2-8°C下保存12個月以上，25°C下保存6個月以上，具有很好的應用效果O
具體實施例方式下面結合具體實施例來進一步描述本發(fā)明，但這些實例僅是范例性的，并不對本發(fā)明的常規(guī)方法構成任何限制。本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本發(fā)明的精神和范圍下可以對本發(fā)明的技術方案的細節(jié)和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發(fā)明保護范圍內。實施例I :雞傳染性法氏囊病卵黃抗體的凍干保護劑配制在IOOml的蒸餾水溶液中加入4g的甘露醇、3g的右旋糖苷、Ig的苷氨酸，混合均勻后，調pH值至7. 2 7. 4，經(jīng)滅菌處理后，2 8°C保存?zhèn)溆?。實施? :加入了大豆蛋白胨在IOOml的蒸餾水溶液中加入4g的甘露醇、3g的右旋糖苷、Ig的苷氨酸，再加入8g的大豆蛋白胨，調pH值至7. 2 7. 4，經(jīng)滅菌處理后2 8°C保存?zhèn)溆谩嵤├? :雞傳染性法氏囊病卵黃抗體的凍干將雞傳染性法氏囊病卵黃抗體與上述實施例I或實施例2的凍干保護劑以7:1比例混合，作為雞傳染性法氏囊病卵黃抗體凍干液體。預凍階段凍干液體常溫進箱，I小時將制品降至-40°C并維持4小時。升華階段1小時將制品從_40°C升至_8°C并維持14小時。解吸干燥階段0. 5小時將制品從_8°C升至28°C并維持10小時，凍干全程30. 5小時。將凍干后雞傳染性法氏囊病卵黃抗體的凍干制劑分別放置2_8°C和25°C環(huán)境下保存，定期觀察抗體的性狀、剩余水分和效力。性狀、剩余水分檢測方法參見現(xiàn)行《獸用生物制品檢驗規(guī)程》，抗體效價采用雙向瓊脂擴散試驗(AGP ):打孔將制備好的瓊脂板按模板用打孔器打孔，并挑出孔中的瓊脂。中心I孔，周圍6孔，孔徑3 mm,孔距4 mm,用熔化瓊脂補孔底。加樣中央孔加入標準瓊擴抗原，周圍孔分別加入2倍系列稀釋的待檢雞傳染性法氏囊病卵黃抗體，各孔加樣25 μ I。將加樣后的瓊脂板放入填有濕紗布的盒內，置20-25 °C室溫或37°C溫箱，24 h初判，72 h終判。結果判定待檢雞傳染性法氏囊病卵黃抗體與抗原孔之間也出現(xiàn)沉淀線，且與標準陽性血清沉淀線末端相吻合，即判為陽性。當待檢雞傳染性法氏囊病卵黃抗體與抗原孔之間無沉淀線出現(xiàn)時，即判為陰性。當待檢雞傳染性法氏囊病卵黃抗體最高稀釋度孔與抗原孔之間形成清晰沉淀線時，即判為瓊擴效價。結果雞傳染性法氏囊病卵黃抗體凍干后和2_8°C保存12個月、25°C保存6個月，抗體物理性狀保持穩(wěn)定，均為微黃色疏松團塊，易與瓶壁分離；剩余水分均為2. 32%左右；抗體效價均為1:128以上，未見下降。
表I雞傳染性法氏囊病卵黃抗體凍干制劑檢驗結果

權利要求
1.一種雞傳染性法氏囊病卵黃抗體凍干保護劑，其特征在于，所述的凍干保護劑為包含有甘露醇、右旋糖苷和甘氨酸的蒸餾水溶液。
2.如權利要求I所述的雞傳染性法氏囊病卵黃抗體凍干保護劑，其特征在于所述的甘露醇、右旋糖苷和甘氨酸的濃度分別為1_5%、1-5%和0. 8-1. 2%。
3.如權利要求2所述的雞傳染性法氏囊病卵黃抗體凍干保護劑，其特征在于所述的甘露醇、右旋糖苷和甘氨酸的濃度分別為4%、3%和I %。
4.權利要求I所述的凍干保護劑，其特征在于，還加入有大豆蛋白胨。
5.如權利要求4所述的凍干保護劑，其特征在于所述的大豆蛋白胨的濃度為5-10%。
6.如權利要求5所述的凍干保護劑，其特征在于所述的大豆蛋白胨的濃度為8%。
7.一種雞傳染性法氏囊病卵黃抗體凍干制劑，是將雞傳染性法氏囊病卵黃抗體與權利要求I或權利要求4所述的凍干保護劑以體積比7:1比例混合，作為雞傳染性法氏囊病卵黃抗體凍干液體；將凍干液體在I小時內降溫至_40°C并維持4小時；然后在I小時內將制品從-40°C升至-8°C并維持14小時；解吸干燥階段0. 5小時將制品從_8°C升至28°C并維持10小時完成雞傳染性法氏囊病卵黃抗體凍干制劑的制備。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種雞傳染性法氏囊病卵黃抗體的凍干保護劑，為包含有甘露醇、右旋糖苷和甘氨酸的蒸餾水溶液。上述的凍干保護劑中還可加入大豆蛋白胨。本發(fā)明的凍干保護劑組分簡單、成本低廉、易于制備。解決了雞傳染性法氏囊病卵黃抗體的長途運輸、保存的低溫儲存難題。本發(fā)明的凍干保護劑配方可使雞傳染性法氏囊病卵黃抗體在2-8℃下保存12個月以上，25℃下保存6個月以上。
文檔編號A61K47/36GK102813933SQ201210317060
公開日2012年12月12日 申請日期2012年8月30日 優(yōu)先權日2012年8月30日
發(fā)明者王宏華, 王雷, 凌紅麗, 王睿智, 叢雁方 申請人:青島康地恩藥業(yè)股份有限公司, 青島寶依特生物制藥有限公司