專(zhuān)利名稱(chēng)：包含含有不可水解共價(jià)鍵的聚合物結(jié)合劑的藥物組合物及其在治療乳糜瀉中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及包含聚合物結(jié)合劑的藥物組合物及其使用方法。更具體地，本發(fā)明涉·及用于結(jié)合谷蛋白或麥醇溶蛋白和/或源自谷蛋白或麥醇溶蛋白降解的肽的不可消化合成聚合物及其使用方法。
背景技術(shù)：
乳糜瀉，又稱(chēng)為谷蛋白不耐受，是ー種在遺傳性易感對(duì)象中以接觸面筋的麥醇溶蛋白級(jí)分或大麥和黒麥的類(lèi)似醇溶性蛋白(谷醇溶蛋白)之后的小腸粘膜損傷為特征的綜合征。乳糜瀉是ー種普通的自身免疫病癥，其具有遺傳、環(huán)境和免疫上的因素。此疾病與編碼人白細(xì)胞抗原DQ2和DQ8的基因密切相關(guān)(I)。鑒別出a-麥醇溶蛋白的ー種33個(gè)單位的片段，其具有幾個(gè)特征表明其為乳糜瀉患者中對(duì)谷蛋白炎性應(yīng)答的可能引發(fā)劑(2)。乳糜瀉的癥狀可為從輕度虛弱、骨痛和ロ瘡性口炎到慢性腹瀉、腹脹以及進(jìn)行性體重減輕(3)。由于廣泛的癥狀，乳糜瀉的存在可能難于診斷。那些受影響的患者遭受其腸固有層和隱窩區(qū)域的絨毛損傷(變短和絨毛扁平化)(3)。此外，在患有未治療或難治療乳糜瀉的患者中多達(dá)15%發(fā)展成胃腸道癌或淋巴瘤(4)。不含谷蛋白的飲食可預(yù)防此疾病的幾乎所有并發(fā)癥(5)。這樣的飲食涉及避免所有含有小麥、黒麥、大麥或其任何衍生物的產(chǎn)品。這是個(gè)困難的任務(wù)，因?yàn)樵诤芏嗉庸な称返某煞种锌砂l(fā)現(xiàn)許多隱藏的谷蛋白源。迄今，除了從乳糜瀉患者的飲食中排除含有谷蛋白的食物以外，還沒(méi)有可用于乳糜瀉患者的藥物療法。出人意料地，相對(duì)為數(shù)不多的治療策略目前正在探索中?；诳贵w耐受性和T細(xì)胞介導(dǎo)的對(duì)麥醇溶蛋白毒性肽的應(yīng)答或者基于阻斷IL-15介導(dǎo)的小腸粘膜變化的抗IL-15的中和抗體的開(kāi)發(fā)的方法正在研究中(6)。ー個(gè)有希望的途徑在于外源性酶的發(fā)現(xiàn)，所述外源性酶可在原位迅速降解毒性肽(7)。然而，與大規(guī)模酶生產(chǎn)相關(guān)的高成本和ロ服后可能的活性損失是其商業(yè)化的潛在限制。g在干擾谷蛋白活性T細(xì)胞的活化的互補(bǔ)性策略包括抑制谷蛋白肽與人白細(xì)胞抗原(HLA)DQ2(或DQ8)的結(jié)合。HLA在乳糜瀉發(fā)展中的關(guān)鍵作用使得其成為治療干預(yù)的明顯標(biāo)靶。最近解出的與脫氨基谷蛋白肽絡(luò)合的HLA-DQ2的X-射線晶體結(jié)構(gòu)已提供了用于開(kāi)發(fā)阻斷HLA-DQ2的化合物的重要信息(8)。已提議連蛋白拮抗劑作為乳糜瀉的治療劑。連蛋白是ー種涉及調(diào)節(jié)小腸內(nèi)分子間緊密結(jié)合的蛋白質(zhì)。其表達(dá)在乳糜瀉急性期期間已顯示出増加，所述乳糜瀉急性期是腸滲透性増加的臨床病況(9)。對(duì)于具有低含量或不含免疫毒性序列但又具有合理的烘焙質(zhì)量的谷類(lèi)的開(kāi)發(fā)研究也已進(jìn)行?？梢酝ㄟ^(guò)對(duì)古老小麥品種的選擇性培養(yǎng)(10)、通過(guò)涉及導(dǎo)致免疫激活序列的序列突變的轉(zhuǎn)基因技術(shù)(11)或通過(guò)將無(wú)毒的谷蛋白基因引入無(wú)害的有機(jī)體比如稻米內(nèi)(12)而開(kāi)發(fā)這些谷類(lèi)。盡管這些谷類(lèi)在技術(shù)上對(duì)工程師來(lái)說(shuō)是有希望的，但存在著這樣的可能性含有谷蛋白的谷類(lèi)的交叉授粉可能會(huì)導(dǎo)致再引入免疫毒性序列，這些谷類(lèi)的可獲得性會(huì)給患有乳糜瀉的患者帶來(lái)營(yíng)養(yǎng)上較好的飲食。聚合物結(jié)合劑(polymeric binder)大量的聚合物結(jié)合劑已經(jīng)用于治療或預(yù)防某些疾病。聚合物結(jié)合劑的經(jīng)典實(shí)例是消膽胺，其為ー種在腸內(nèi)多價(jià)螯合膽酸并因此降低膽固醇血液水平的陽(yáng)離子樹(shù)脂。近來(lái)，鹽酸司維拉姆(一種不含鋁和鈣、具有可忽略的副作用·的新型聚合磷酸酯結(jié)合剤)已被商業(yè)化用于治療透析患者中的高磷血癥。也許在該領(lǐng)域中最讓人感興趣的發(fā)現(xiàn)是陰離子的高分子量聚合物GT160-246，其表現(xiàn)出在體外和在體內(nèi)均中和艱難梭菌(Clostridium difficile)A毒素的活性(13)。此內(nèi)毒素最常被確認(rèn)為是感染性醫(yī)院腹瀉的原因。GT160-246提供了ー種有前途且安全的非抗微生物的治療和預(yù)防人類(lèi)中艱難梭菌結(jié)腸炎的方法。高分子量聚合物可在乳糜瀉中有潛在用途的這ー想法源于Auricchio等的研究
(14)，這ー研究證實(shí)了甘露聚糖(甘露糖同多糖)和こ酰葡萄糖胺低聚物顯示出對(duì)患有活性乳糜瀉患者的腸粘膜樣品的保護(hù)作用(14)。這些發(fā)現(xiàn)表明，凝集且有毒的肽被這些碳水
化合物所結(jié)合。Secundo等(26)探索了另ー種多糖-糊精-對(duì)麥醇溶蛋白ニ級(jí)結(jié)構(gòu)
的作用，并猜測(cè)糊精可用于制備用于患有乳糜瀉的患者的無(wú)毒食品衍生物。雖然有這些令人感興趣的初步數(shù)據(jù)，但還未進(jìn)行進(jìn)一歩的研究以在體內(nèi)證實(shí)這些發(fā)現(xiàn)。天然碳水化合物的主要缺點(diǎn)在于其在體內(nèi)條件下的可降解性，這將導(dǎo)致其在原位失活。本發(fā)明試圖滿(mǎn)足這些需要以及其它的需要。本說(shuō)明書(shū)參考了大量文獻(xiàn)，這些文獻(xiàn)的內(nèi)容均通過(guò)引用整體并入本文。

發(fā)明內(nèi)容
更具體地，根據(jù)本發(fā)明的ー個(gè)方面，提供了ー種包含聚合物結(jié)合劑和藥學(xué)可接受載體的藥物組合物，所述聚合物結(jié)合劑包含具有由不可水解的共價(jià)鍵構(gòu)成的主鏈的高分子量合成聚合物，所述聚合物能在PH低于谷蛋白和源自谷蛋白降解的肽的等電點(diǎn)時(shí)形成靜電鍵，并且能在胃腸道中與谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽結(jié)合。在所述藥物組合物的ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述聚合物結(jié)合劑能與谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽形成疏水性相互作用。在所述藥物組合物的另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述聚合物結(jié)合劑能形成氫鍵。在所述藥物組合物的另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述聚合物結(jié)合劑能在胃腸道中特異性地與谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽結(jié)合。在所述藥物組合物的另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述聚合物結(jié)合劑能在腸道中與谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽結(jié)合。在所述藥物組合物的另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述聚合物結(jié)合劑是甲基丙烯酸羥こ酯(HEMA)與4-苯こ烯磺酸鈉鹽水合物(SStNa)的共聚物。在所述藥物組合物的另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述聚合物結(jié)合劑是4-苯こ烯磺酸鈉鹽水合物(SStNa)的聚合物。在所述藥物組合物的另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述聚合物結(jié)合劑是甲基丙烯酸磺酸丙酯鉀鹽(SPMAK)的聚合物。在所述藥物組合物的另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述聚合物結(jié)合劑是線型的。在所述藥物組合物的另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述聚合物結(jié)合劑是星形的。在所述藥物組合物的另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述聚合物結(jié)合劑是3至18臂星形共聚物。在所述藥物組合物的另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述聚合物結(jié)合劑是5至18臂星形共聚物。在所述藥物組合物的另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述聚合物結(jié)合劑是5臂星形共聚物。在所述藥物組合物的另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述聚合物結(jié)合劑是8臂星形共聚物。在所述藥物組合物的另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述聚合物結(jié)合劑是18臂星形共聚物。在所述藥物組合物的另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述聚合物結(jié)合劑是HEMA與SStNa的共聚物，且HEMA/SStNa的摩爾百分比之比為93. 5/6. 5到約1/99。在所述藥物組合物的另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述共聚物是線型的HEMA/SStNa(51. 5/48. 5，摩爾％ )。在所述藥物組合物的另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述共聚物是線型的HEMA/SStNa(43/57，摩爾％ )。在所述藥物組合物的另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述共聚物的HEMA/SPMAK摩爾百分比之比為約93. 5/6. 5到約1/99(% )。在所述藥物組·合物的另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述共聚物的HEMA/SPMAK摩爾百分比之比為約86/14到約1/99。在所述藥物組合物的另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述共聚物是線型的HEMA/SPMAK (45/55，摩爾％ )。在另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物還包含連蛋白拮抗劑或HLA DQ2抑制劑。根據(jù)本發(fā)明的另ー個(gè)方面，提供了使用本發(fā)明的聚合物結(jié)合劑的方法，包括給患有乳糜瀉的患者施用藥物有效量的所述聚合物結(jié)合剤。 在ー個(gè)具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法用于在患者內(nèi)結(jié)合谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽。在另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法用于減少谷蛋白在患者體內(nèi)降解成毒性肽。在另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法用于減少谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽與患者的胃腸道粘膜的相互作用。在本發(fā)明另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述施用在所述患者進(jìn)食含有谷蛋白的膳食之前或期間進(jìn)行。在本發(fā)明方法的另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述施用在所述患者進(jìn)食含有谷蛋白的膳食之后進(jìn)行。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了本發(fā)明的聚合物結(jié)合劑在制備藥物中的用途。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了本發(fā)明的聚合物結(jié)合劑用于在有此需要的患者的胃腸道內(nèi)結(jié)合谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽的用途。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了本發(fā)明的聚合物結(jié)合劑在制備用于在有此需要的患者的胃腸道內(nèi)結(jié)合谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽的藥物中的用途。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了本發(fā)明的聚合物結(jié)合劑用于減少谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽與有此需要的患者的胃腸道粘膜的相互作用的用途。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了本發(fā)明的聚合物結(jié)合劑在制備用于減少谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽與有此需要的患者的胃腸道粘膜的相互作用的藥物中的用途。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了本發(fā)明的聚合物結(jié)合劑用于減少谷蛋白在有此需要的患者的胃腸道內(nèi)降解成毒性肽的用途。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了本發(fā)明的聚合物結(jié)合劑在制備用于減少谷蛋白在有此需要的患者的胃腸道內(nèi)降解成毒性肽的藥物中的用途。在本發(fā)明的用途的ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述患者患有乳糜瀉。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了包含本發(fā)明的聚合物結(jié)合劑的食物。在本發(fā)明的食物的ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述食物是含有谷蛋白的食物。在本發(fā)明的食物的ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述食物是面包。
·
根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了ー種使用本發(fā)明的食物的方法，包括給患有乳糜瀉的患者在其進(jìn)食期間施用所述食物。在ー個(gè)具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法用于結(jié)合所述患者的膳食中所含有的谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽。在另ー個(gè)具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法用于減少所述患者的膳食中所含有的谷蛋白降解成毒性肽。在ー個(gè)具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的方法用于減少谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽與所述患者的胃腸道粘膜的相互作用。根據(jù)本發(fā)明的另一方面，提供了一種制備供給患有乳糜瀉的患者的食物的方法，所述方法包括將本發(fā)明的聚合物結(jié)合劑加入到所述食物中。在本發(fā)明方法的ー個(gè)具體實(shí)施方案中，所述食物是含有谷蛋白的食物。本發(fā)明涉及高分子量的惰性、不可吸收的聚合物結(jié)合劑，其用來(lái)吸附谷蛋白和/或其降解產(chǎn)物。這樣的體系將有助于預(yù)防或減少谷蛋白對(duì)胃腸道粘膜的有害作用。不受此限制，猜測(cè)肽與所述聚合物的結(jié)合有兩個(gè)作用。首先，所述酶解和毒性片段的產(chǎn)生通過(guò)谷蛋白和/或其降解產(chǎn)物吸附到惰性支持物上而減緩。其次，與高分子量聚合物的絡(luò)合減少了肽的吸收和隨后的免疫應(yīng)答。因此，此體系提供了ー種供面臨不能確定不存在谷蛋白殘留或不可獲得不含谷蛋白的膳食的情況的患者的預(yù)防佐劑。盡管在本文中提出了具體的不可消化的合成聚合物，但本發(fā)明并非限定于此。如本文中所使用的，當(dāng)用于限定本發(fā)明的聚合物吋，術(shù)語(yǔ)“不可消化”意指具有由不可水解的共價(jià)鍵構(gòu)成的主鏈的聚合物。相信本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可容易地確定可根據(jù)本發(fā)明使用的其它不可消化的合成聚合物。同樣，可最優(yōu)化本文中所具體描述的聚合物以使其與谷蛋白及谷蛋白降解產(chǎn)物的親和カ最大化并使其與其它蛋白的結(jié)合最小化。當(dāng)然，一定比例的這些蛋白/肽將免于被吸附到本發(fā)明的聚合物上，但已表明，每日攝取4-14mg的麥醇溶蛋白不會(huì)引起乳糜瀉患者的小腸粘膜損傷(15)。當(dāng)然，這ー體系不會(huì)作為主要療法取代不含谷蛋白的飲食。然而，當(dāng)患者面臨不能確定不存在谷蛋白殘留或不可獲得不含谷蛋白的膳食的情況時(shí)，其可偶爾用作預(yù)防佐劑。本發(fā)明的聚合物結(jié)合劑可有利地減少谷蛋白和源于谷蛋白的肽的ロ服吸收。這些聚合物結(jié)合劑在胃腸道中起作用而不被吸收到血流中，從而使聚合物本身引起不良反應(yīng)的可能性最小化。在低于谷蛋白和源于谷蛋白的肽的等電點(diǎn)的PH下，所述聚合物結(jié)合劑帶負(fù)電荷而這些蛋白和肽帶正電荷，這使得可形成靜電相互作用。這些聚合物結(jié)合劑還可與這些蛋白和肽形成疏水性相互作用。在具體實(shí)施方案中，本發(fā)明的聚合物結(jié)合劑還具有形成氫鍵的能力。盡管最后的性質(zhì)可能是所希望的，但表明其并非是必需的，因?yàn)榘l(fā)現(xiàn)本發(fā)明的某些不具備此性質(zhì)的聚合物(例如甲基丙烯酸磺酸丙酯鉀鹽(SPMAK)的均聚物)也能與谷蛋白結(jié)合。不受此限制，可使用下表I中列出的単體合成這些聚合物結(jié)合剤。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可選擇這些(或其它)單體中的一種或更多種的組合以形成本發(fā)明的聚合物結(jié)合劑復(fù)I苯こ烯衍生物-苯こ烯磺酸鹽/酷-苯こ烯硫酸鹽/酷-苯こ烯磺胺酸鹽/酷·-磺苯基丙氨酸-酪氨酸硫酸鹽/酷-磺基苯こ基丙烯酰胺-磺基苯こ基甲基丙烯酰胺-こ烯基萘磺酸鹽/酷-こ烯基萘硫酸鹽/酷
-こ烯基聯(lián)苯磺酸鹽/酷-こ烯基聯(lián)苯硫酸鹽/酷-茴香腦磺酸鹽/酷-具有冠醚部分的苯こ烯-被N，N-ニ烷基酰氨基取代的苯こ烯-4-甲氧基苯こ烯_4_(2_(N, N-ニ甲基氛基)こ基)苯こ稀-4-(2-(N，N-ニ甲基氨基)甲基)苯こ烯_4-(2-(N, N-ニこ基氛基)こ基)苯こ稀-4- ニ(N, N- ニこ基氛基)勝基-a -甲基苯こ稀-4-こ烯基苯酚-3-こ稀基兒茶酌'~4~こ稀基苯こ麗-4-こ烯基苯甲酸-3-こ烯基苯甲酸-2-(4_こ稀基苯基)-1, 3- _■氧戍環(huán)-2-(4-こ烯基苯基)-1，3-ニ氧雜環(huán)己烷-4- ニ甲氧基甲基苯こ烯-(4-こ烯基苯甲醛ニ甲基縮醛)_2-(2_こ稀基苯基)-1, 3- _■氧戍環(huán)_2-(3_こ稀基苯基)-1, 3- _■氧戍環(huán)-I- (4-こ稀基苯基)-4-甲基-2,6, 7_ ニ氧雜ニ環(huán)[2. 2. 2]羊燒_4-(2-輕こ基)苯こ稀_4-(3-輕丙基)苯こ稀-4-{[4-(4-こ烯基苯基)丁氧基]甲基}-1-甲基-2，6，7-三氧雜ニ環(huán)[2.2.2]辛燒-4-こ烯基苯硫酚_4-(2-疏基こ基)苯こ稀-2-(4-こ烯基苯基)-2- 唑啉-N, N- ニこ基-4-こ稀基苯橫酸胺-N-甲基-N' -[(4-こ烯基苯基)磺酰基]哌嗪_4-氛基苯こ稀
_3-氛基苯こ稀
·
-4-氛基甲基苯こ稀-3-氛基甲基苯こ稀_4_(2_氛基こ基)苯こ稀帶有輕基的苯こ烯_(對(duì)こ烯基苯甲酰氨基)-P -殼ニ糖_(對(duì)こ烯基苯甲酰氨基)-P-乳糖-N-(對(duì)こ烯基節(jié)基)-L-古洛糖酸酰胺(gulonamide)-N-(對(duì)こ烯基節(jié)基)-6-D-葡糖ニ酸酰胺(glucaramide)-N-(對(duì)こ烯基芐基)-6-D-葡糖ニ酸酰胺-I-酷_4_丙稀酸氛基苯基-0 -乳糖昔-N-(對(duì)こ烯基節(jié)基)-D-葡萄糖醒酸酰胺(glucoronamide)-4-こ烯基芐基-D-葡萄糖(D-甘露糖)己糖醇-對(duì)[2-[N-(對(duì)こ烯基芐基)氨甲?；鵠こ基]苯基a-D-吡喃甘露糖苷-對(duì)[2-[N-(對(duì)こ烯基芐基)氨甲酰基]こ基]苯基@-D-吡喃甘露糖苷-N-(對(duì)こ烯基芐基)-5
-D-葡糖酰胺- a -吡喃甘露糖苷-吡喃甘露糖苷丙烯酸單體-丙烯酸縮水甘油酯-丙烯酸2-羥こ酯-甲基丙烯酸2-羥こ酯-甲基丙烯酸羥丙酯-甲基丙烯酸2-(N，N-ニ甲基氨基)こ酷-甲基丙烯酸2-(N，N-ニこ基氨基)こ酷-甲基丙烯酸3-磺基丙酯-甲基丙烯酸四氫吡喃酯-甲基丙烯酸芐酯-甲基丙烯酸2-葡糖酰胺こ酯-甲基丙烯酸2-乳ニ糖酰胺こ酯_丙稀酸2_ (2’，3’，4’，6’-四-0_こ酸基-0-D-卩比喃匍萄糖基氧基)こ酷-丙烯酸(4，5_ニ羥基-6-羥甲基-3-甲基甲酰氨基四氫-2H-2-吡喃基氧基)こ酷硫酸化単體-こ烯基硫酸鹽/酷-丙烯硫酸鹽/酷-丁烯硫酸鹽/酷-戊烯硫酸鹽/酷-己烯硫酸鹽/酷-庚烯硫酸鹽/酷·-辛烯硫酸鹽/酷-壬烯硫酸鹽/酷-癸烯硫酸鹽/酷^一烯硫酸鹽/酷-十二烯硫酸鹽/酯磺酸化単體-こ烯基磺酸鹽/酷-丙烯磺酸鹽/酷-丁烯磺酸鹽/酷-戊烯磺酸鹽/酷-己烯磺酸鹽/酷-庚烯磺酸鹽/酷-辛烯磺酸鹽/酷-壬烯磺酸鹽/酷-癸烯磺酸鹽/酷-十一烯磺酸鹽/酷-十二烯磺酸鹽/酷磷酸化単體-こ烯基磷酸鹽/酷-丙烯磷酸鹽/酷-丁烯磷酸鹽/酷-戊烯磷酸鹽/酷-己烯磷酸鹽/酷-庚烯磷酸鹽/酷-辛烯磷酸鹽/酷-壬烯磷酸鹽/酷-癸烯磷酸鹽/酷^一烯磷酸鹽/酷-十二烯磷酸鹽/酯其它-馬來(lái)酸酐
-N-丙烯酰化的3’ -磺基-路易斯酸X-Glc単體-a-唾液酸苷(sialoside)丙烯酰胺-N-こ烯基吡啶-N-こ烯基批咯燒酮(N-vinylpyrrolidinone)-こ烯基咪唑-1，3-ニ甲基-2-(4-こ烯基苯基)咪唑烷-3_(N-丙烯?；被?丙基-0-(3-D-卩比喃半乳糖基)-(I — 4)-2-こ酰氨基-2-脫氧-P -D-吡喃葡萄糖苷··-6_(N-丙烯酰基氨基)己基-0-(P-D-卩比喃半乳糖基)-(I — 4)-2-こ酰氨基-2-脫氧-P -D-吡喃葡萄糖苷-3- (N-丙烯?；被?丙基2-こ酰氨基-2-脫氧-P -D-吡喃葡萄糖苷-6- (N-丙烯?；被?己基2-こ酰氨基-2-脫氧-P -D-吡喃葡萄糖苷
-正戊烯基0 -D-吡喃半乳糖苷-正戊烯基-0-(2-こ酰氨基-2-脫氧-P -D-吡喃葡萄糖基)-(I — 4) -2-こ酰氨基-2-脫氧-P -D-吡喃葡萄糖苷-正戊烯基-0-( ^ -D-吡喃半乳糖基)-(I — 4) -2-こ酰氨基-2-脫氧-P -D-吡喃葡萄糖苷-正戊烯基-0-( ^ -D-吡喃半乳糖基)-(I — 4) - P -D-吡喃葡萄糖苷-正戊烯基-0-(^-D-吡喃半乳糖基)-(I — 4)-
-2-こ酰氨基-2-脫氧-P -D-吡喃葡萄糖苷-正戊烯基-0-( ^ -D-吡喃半乳糖基)-(I — 6) -2-こ酰氨基-2-脫氧-P -D-吡喃葡萄糖苷-正戊烯基-0-( ^ -D-吡喃半乳糖基)-(I — 3) -2-こ酰氨基-2-脫氧-P -D-吡喃葡萄糖苷-正烯基-2-こ酰氨基-2-脫氧-a-D-吡喃葡萄糖苷(及硫酸化衍生物)-2-N-丙烯酰基-氨基こ氧基4-0-( P -D-吡喃半乳糖基)-P _D_吡喃葡萄糖苷(及硫酸化衍生物)-N-馬來(lái)酰胺-2-脫氧-葡萄糖鈉鹽-N-馬來(lái)酰胺-I-脫氧-乳糖醇鈉鹽-巖藻糖-7-氧雜降冰片烯衍生物-C-Glc-7-氧雜降冰片烯衍生物-C-Man-7-氧雜降冰片烯衍生物含不對(duì)稱(chēng)葡萄糖的7-氧雜降冰片烯衍生物-O-Glc-7-氧雜降冰片烯衍生物-0-Man-7-氧雜降冰片烯衍生物含不對(duì)稱(chēng)甘露糖的7-氧雜降冰片烯衍生物-O-Man降冰片烯衍生物-糖衍生的聚(7-氧雜降冰片烯)-糖衍生的聚(降冰片烯)
當(dāng)本發(fā)明的聚合物結(jié)合劑具有由不可水解的共價(jià)鍵構(gòu)成的主鏈時(shí)，其也可包含含有可水解共價(jià)鍵的側(cè)鏈。本文中所用的術(shù)語(yǔ)“谷蛋白”指在各種谷物中所發(fā)現(xiàn)的蛋白族(protein group)。可將谷蛋白分級(jí)為こ醇可溶的谷醇溶蛋白和こ醇不溶的麥谷蛋白。來(lái)自小麥、黒麥、大麥和可能的燕麥的醇溶性谷醇溶蛋白在乳糜瀉患者中是有毒的。小麥谷醇溶蛋白的共同特征是高含量的谷氨酰胺(> 30% )和脯氨酸(> 15% )。小麥谷醇溶蛋白被分為a / 0、Y和 麥醇溶蛋白，其含有富含谷氨酰胺和脯氨酸的相似或重復(fù)的肽抗原決定簇，所述肽抗原決定簇似乎是所觀察到的谷蛋白毒性的原因。本文中所用的術(shù)語(yǔ)“源自谷蛋白降解的肽”指在谷蛋白攝取后會(huì)合乎需要地與本發(fā)明的聚合物結(jié)合的任何源自谷蛋白降解的肽。不受此限制，其包括列于Ciccocioppo中的所有肽(23)。本文中所用的術(shù)語(yǔ)“高分子量聚合物”指分子量為5000 5000000g/mol的聚合·物。本文中所用的術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)可接受載體”指利用常用賦形劑(比如在ModernPharmaceutics (27)中描述的那些)制備的溶液、混懸液、乳液、片劑或膠囊。本文中所用的術(shù)語(yǔ)本發(fā)明聚合物的“藥物有效量”指在有此需要的患者攝取谷蛋白后可有效降低谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽與胃腸道粘膜的相互作用的量。不受此限制，本發(fā)明聚合物的有效量可為約200mg至約15g姆天(例如200mg ；250mg ；300mg ；500mg ；750mg ；lg ；1. 5g ；2g ；2. 5g ；3g,5g ；7. 5g)。本文在表述“特異性地與谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽結(jié)合的聚合物結(jié)合剤”中所用的術(shù)語(yǔ)“特異性結(jié)合”指在胃腸道中相比干與其它的食物蛋白(比如酪蛋白和/或白蛋白)的結(jié)合，所述聚合物與源自食物攝入的疏水性的蛋白質(zhì)或肽(比如谷蛋白和源自谷蛋白的肽)結(jié)合得更多的能力。本發(fā)明包括線型或星形的聚合物。根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方案，星形聚合物具有3 18個(gè)臂。本文中所用的術(shù)語(yǔ)“有此需要的患者”指受乳糜瀉影響的人，其正在食用或已經(jīng)食入含有谷蛋白的膳食。本文中不用數(shù)詞表示或者冠以“所述(該/此)”指一個(gè)或多于ー個(gè)(即至少ー個(gè))的如此限定的語(yǔ)法對(duì)象。本文中所用的術(shù)語(yǔ)“包括”和“包含”指表述“包括但不限干”和“包含但不限干”，
并可互換使用。本文中所用的術(shù)語(yǔ)“比如(例如)”意指“比如(例如)但不限干”，并可互換使用。在閱讀以下僅通過(guò)實(shí)例方式給出并參考附圖對(duì)本發(fā)明具體實(shí)施方案所作的非限制性描述時(shí)，本發(fā)明的其它目的、優(yōu)點(diǎn)和特征將更加顯而易見(jiàn)。


在附圖中圖I表示用于合成本文中所述的聚合物的線型和多官能團(tuán)的ATRP引發(fā)劑的化學(xué)結(jié)構(gòu)。(i)PEG-ニ溴代大分子引發(fā)劑(macroinitiator) ; (ii)-I, 2, 3,4,6-五-0-異丁酉先溴_R_D_匍萄糖；(iii)十八-0-異丁酸溴-R-環(huán)糊精；(iv)八-0-異丁酸溴_鹿糖；圖2表示三份相同的在pH 6.8下白蛋白和a -麥醇溶蛋白與聚(HEMA-共-SStNa)結(jié)合的SDS-PAGE(實(shí)施例10) (A)蛋白標(biāo)準(zhǔn)物；⑶白蛋白和a -麥醇溶蛋白混合物；(C)白蛋白(40mg/L)、a -麥醇溶蛋白(40mg/L)和聚(HEMA-共-SStNa) (160mg/L)的混合物；圖3是線型聚(HEMA-共-SStNa)與麥醇溶蛋白、白蛋白以及酪蛋白在pH I. 2和
6.8下的結(jié)合譜，其中每個(gè)點(diǎn)對(duì)應(yīng)于實(shí)施例5 10和12 13的每個(gè)聚合物；圖4是線型聚(HEMA-共-SPMAK)與麥醇溶蛋白和白蛋白在pH I. 2和6. 8下的結(jié)合譜，其中每個(gè)點(diǎn)對(duì)應(yīng)于實(shí)施例17 21的每個(gè)聚合物；圖5以圖示表示在中性pH下聚合物結(jié)構(gòu)對(duì)麥醇溶蛋白的結(jié)合的影響(SStNa =·
25-31摩爾％ ;參見(jiàn)實(shí)施例9、14、15和16)；圖6以圖示表示在中性pH下聚合物結(jié)構(gòu)對(duì)麥醇溶蛋白的結(jié)合的影響(SPMAK =16-19摩爾％ ;參見(jiàn)實(shí)施例18、22、23和24)；圖7表示在模擬腸條件下本發(fā)明聚合物對(duì)麥醇溶蛋白消化的影響。在(a)不存在聚合物和(b)存在聚合物的情況下用胃蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶(PTC)消化的麥醇溶蛋白的比較HPLC譜圖。色譜圖(C)對(duì)應(yīng)于未處理的a-麥醇溶蛋白；圖8表示在采用PEG(Mn:35，000 ;空心圓形)、PVP(MW:58，000 ;實(shí)心矩形)、聚(HEMA-共-SStNa)(實(shí)施例10 ;空心三角形)和作為對(duì)照的完全培養(yǎng)基(實(shí)心星形)的溶液孵育后Caco-2單層的跨上皮細(xì)胞電阻(TEER)的變化。將細(xì)胞保持在添加了 10% FBS的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基中。聚合物濃度固定在lg/L ;和圖9表示兩種含有約50 % SStNa并具有兩個(gè)不同分子量的線型聚(HEMA-共-SStNa)(實(shí)施例10和11)在pH I. 2和6. 8下與麥醇溶蛋白和白蛋白的結(jié)合譜。
具體實(shí)施例方式材料a -麥醇溶蛋白由 lnstitut National de la Recherche Agronomique, (Nantes,France)惠供。其如Popineau等人所述從軟質(zhì)小麥(soft wheat)中純化而得(16_21)。簡(jiǎn)而言之，在將來(lái)自麩質(zhì)(從面粉中分離)的粗麥醇溶蛋白提取后，將麥醇溶蛋白亞族分離并依次通過(guò)離子交換色譜、尺寸排阻色譜和最后的疏水性相互作用色譜進(jìn)行純化。牛白蛋白購(gòu)自Serological Proteins (Kankakee, IL)。a-酪蛋白(來(lái)自牛奶)、SStNa, HEMA, SPMAK、R-D-葡萄糖、a-環(huán)糊精水合物、蔗糖(98 % )，聚(こニ醇)(PEG)(Mn 2000)、2_溴代異丁酰溴、溴化銅Cu(I)Br和2，2’聯(lián)吡啶均購(gòu)自Sigma-Aldrich(StLouis,MO)并原樣使用。Eppendorff 管、吸液頭和 96 孔板(Maximum Recovery)由 AxygenScientific (Union City, CA)提供。引發(fā)劑的合成由PEG、R-D-葡萄糖、蔗糖和a -環(huán)糊精制備原子轉(zhuǎn)移自由基聚合(ATRP)引發(fā)劑(圖I)。最后三個(gè)分子的溴官能化通過(guò)由Stenzel-Rosenbaum及合作者們所描述的方法而實(shí)現(xiàn)(22)。通過(guò)以下非限定性實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)ー步的詳細(xì)說(shuō)明。
實(shí)施例IPEG 二溴代大分子引發(fā)劑(i)的合成將H0-PEG-0H(Mn 2000，10g，5mmol)和三乙胺(10g，O. Imol)在 70ml 無(wú)水甲苯中的溶液在冰水浴中稍微冷卻。然后，向所述反應(yīng)混合物中緩慢加入2-溴代異丁酰溴(4. 91mL，0. 04mol)。將溶液溫?zé)嶂潦覝夭嚢?8小時(shí)。過(guò)濾混合物，蒸發(fā)一半的溶劑并在冷乙醚中沉淀PEG大分子引發(fā)劑(圖I (i))。沉淀后的產(chǎn)率90%。白色固體。1HNMR(S，ppm，CDCl3) :3.50 (188H)，1.80 (12H，s)。實(shí)施例2·
1，2，3，4，6-五-O-異丁酰溴-R-D-葡萄糖(ii)的合成將2-溴代異丁酰溴(50g，0. 22mol)緩慢加入到在氯仿(IOOmL)和吡啶(50mL)的無(wú)水混合物中的R-D-葡萄糖溶液(5. Og, O. 028mol)中。將溶液回流3小時(shí)并同時(shí)保持無(wú)水氣氛，然后于室溫下再攪拌12個(gè)小時(shí)。然后將其依次以冰冷的水、NaOH(O. 1M)和水清洗，并以無(wú)水MgSO4干燥。將粗產(chǎn)物從甲醇中重結(jié)晶而得到白色晶體(圖l(ii))。產(chǎn)率70%。1HNMr(CDCI3):I. 85-2. 04 (m，30H，H-7)，6. 42 (d，1H，H-1)，5. 25 (dd，1H, H-2)，5. 69 (t, 1H, H_3)，5. 35 (t, 1H, H_4)，4. 38 (m, 3H, H-5/6) ·實(shí)施例3十八-0-異丁酰滇-R-環(huán)糊精(iii)的合成通過(guò)向R-環(huán)糊精(5.0g，0.005mol)在無(wú)水吡啶(150mL)中的溶液中緩慢加入2-溴代異丁酰溴(50g，0. 22mol)而合成十八_0_異丁酰溴-R-環(huán)糊精。在無(wú)水氣氛下于室溫下攪拌溶液24小時(shí)。然后將其分別以冰冷的水、NaOH(O. 1M)和水清洗，然后以無(wú)水MgSO4干燥。將粗產(chǎn)物從甲醇/H20(3 l,v/v)中重結(jié)晶而得到白色晶體(圖l(iii))。產(chǎn)率55%。1HNMr(CDCI3):I. 95 (m，108H，H-7)，5. 84 (d，12H，H-1)，4. 46 (dd，6H，H-2)，5. 7 (m, 6H, H_3)，5. 13/5. 38 (t/dd, 6H, H_4)，4. 78 (dd, 6H, H_5)，4. 45 (m, 6H, H_6) ·實(shí)施例4八-0-異丁酰溴-蔗糖(iv)的合成通過(guò)向蔗糖(5. Og, O. 014mol)在無(wú)水吡啶(150mL)中的溶液中緩慢加入2_溴代異丁酰溴(50g，0.22mol)而合成八_0_異丁酰溴蔗糖。在無(wú)水氣氛下于室溫下攪拌溶液24小時(shí)。然后將其分別以冰冷的水、NaOH(O. 1M)和水清洗，然后以無(wú)水MgSO4干燥。將粗產(chǎn)物從甲醇/H20(3 1，v/v)中重結(jié)晶而得到白色晶體(圖I (vi))。產(chǎn)率50%。1HNMR(CDCl3) :1. 99(m，48H，H-7)，4· 15(d，1H，H-5，)，4· 46(m，5H，H-6，/I，/5)，4. 68(dt，2H，H-6)，4.81(d，lH，H-3’ )，5· 13 (dd，1Η，Η_2)，5. 38(t，lH，H_4，)，5. 67 (t, 1H, H-4)，5. 76 (t, 1H, H_3)，5. 85 (d, 1H, H-1) ·實(shí)施例5線型甲基丙烯酸羥乙酯(HEMA)4-苯乙烯磺酸鈉鹽水合物(SStNA)共聚物(純化后93. 5/6. 5摩爾％ )的合成將ATRP 引發(fā)劑 i (圖 I) (50mg) ,SStNa(O. 375g)和 HEMA(7. 12g)溶于 46mL 甲醇 /水(1/4)混合物中并在氬氣下脫氣15分鐘。然后在攪拌下于20°C下加入Bpy (20. 28mg)、Cu (I) Br (7. 2mg)和Cu (II) Br2 (3. 35mg)。24小時(shí)后，將溶液暴露于空氣中，深褐色溶液變成藍(lán)色，這表明Cu(I)被氧化成了 Cu(II)。通過(guò)將甲醇/水溶液通過(guò)硅膠柱(除去Cu(II)催化劑)而純化所述聚合物。將聚合物逆水透析(Spectra/Por no. I,截留分子量6000-8000, Spectrum Laboratories, Rancho Dominguez, CA)48 小時(shí)，然后凍干直至使用。Mw = 318700g/mol ；MW/Mn = 2. 54。實(shí)施例6線型甲基丙烯酸羥乙酯/4-苯乙烯磺酸鈉鹽水合物共聚物(純化后90. 3/9. 7摩爾％)的合成將ATRP 引發(fā)劑 i (圖 I) (50mg) ,SStNa(0. 375g)和 HEMA(7. 12g)溶于 46mL 甲醇 /水(1/4)混合物中并在氬氣下脫氣15分鐘。然后在攪拌下于20°C下加入Bpy(21.84mg)、Cu⑴Br (7. 2mg)和Cu (I I) Br2 (4. 48mg)。24小時(shí)后，將溶液暴露于空氣中，并按實(shí)施例5中敘述的方法純化聚合物。Mw = 331528，Mw/Mn = 2. 9?！?shí)施例7線型甲基丙烯酸羥乙酯/4-苯乙烯磺酸鈉鹽水合物共聚物(純化后87. 8/12. 2摩爾％)的合成將ATRP 引發(fā)劑 i (圖 I) (50mg) ,SStNa (0. 75g)和 HEMA (6. 747g)溶于 46mL 甲醇 /水(1/4)混合物中并在氬氣下脫氣15分鐘。然后在攪拌下于20°C下加入Bpy(15.6mg)和Cu (I) Br (7. 2mg)。24小時(shí)后，將溶液暴露于空氣中，并按實(shí)施例5中敘述的方法純化聚合物。Mw = 283600g/mol ；MW/Mn = 2. 57。實(shí)施例8線型甲基丙烯酸羥乙酯/4-苯乙烯磺酸鈉鹽水合物共聚物(純化后82. 4/17. 6摩爾％)的合成將ATRP 引發(fā)劑 i (圖 I) (50mg)、SStNa(l. 125g)和 HEMA(6. 426g)溶于 46mL 甲醇 /水(1/4)混合物中并在氬氣下脫氣15分鐘。然后在攪拌下于20°C下加入Bpy(15.6mg)和Cu(I)Cl (5mg)。24小時(shí)后，將溶液暴露于空氣中，并按實(shí)施例5中敘述的方法純化聚合物。Mw = 275500g/mol ；MW/Mn = 2. 5。實(shí)施例9線型甲基丙烯酸羥乙酯/4-苯乙烯磺酸鈉鹽水合物共聚物(純化后69/31摩爾％)的合成將 ATRP 引發(fā)劑 i (圖 I) (50mg)、SStNa (I. 5g)和 HEMA (5. 99g)溶于 46mL 甲醇 /水(1/4)混合物中并在氬氣下脫氣15分鐘。然后在攪拌下于20°C下加入Bpy(15.6mg)和Cu(I)Cl (5mg)。24小時(shí)后，將溶液暴露于空氣中，并按實(shí)施例5中敘述的方法純化聚合物。Mw = NA ；MW/Mn = NA。Mn(_ = 58100g/mol。實(shí)施例10線型甲基丙烯酸羥乙酯/4-苯乙烯磺酸鈉鹽水合物共聚物(純化后51. 5/48. 5摩爾％)的合成將ATRP 引發(fā)劑 i (圖 I) (50mg)、SStNa(3. 2g)和 HEMA(3. 95g)溶于 46mL 甲醇 /水(1/4)混合物中并在氬氣下脫氣15分鐘。然后在攪拌下于20°C下加入Bpy(15.6mg)和Cu (I) Br (7. 2mg)。24小時(shí)后，將溶液暴露于空氣中，并按實(shí)施例5中敘述的方法純化聚合物。Mw = 122000g/mol ；MW/Mn = 2. 23。
實(shí)施例H線型甲基丙烯酸羥乙酯/4-苯乙烯磺酸鈉鹽水合物共聚物(純化后43/57摩爾％)的合成將ATRP 引發(fā)劑 i (圖 I) (50mg)、SStNa (2. 4g)和 HEMA(Ig)溶于 23mL 甲醇 / 水(1/4)混合物中并在氬氣下脫氣15分鐘。然后在攪拌下于20°C下加入Bpy(15.6mg)和Cu (I) Br (7. 2mg)。24小時(shí)后，將溶液暴露于空氣中，并按實(shí)施例5中敘述的方法純化聚合物。Mn(_ = 55000g/molo實(shí)施例12線型甲基丙烯酸羥乙酯/4-苯乙烯磺酸鈉鹽水合物共聚物(純化后28/72摩爾％)的合成
·
將ATRP 引發(fā)劑 i (圖 I) (50mg)、SStNa(4. 8g)和 HEMA(I. 975g)溶于 46mL 甲醇 /水(1/4)混合物中并在氬氣下脫氣15分鐘。然后在攪拌下于20°C下加入Bpy(15.6mg)和Cu (I) Br (7. 2mg)。24小時(shí)后，將溶液暴露于空氣中，并按實(shí)施例5中敘述的方法純化聚合物。Mw = 65200g/mol ；MW/Mn = I. 95。實(shí)施例13線型聚(4-苯乙烯磺酸鈉鹽水合物)的合成將ATRP引發(fā)劑i (圖I) (50mg)和SStNa(6. 4g)溶于46mL水中并在氬氣下脫氣15分鐘。然后在攪拌下于20°C下加入Bpy(15.6mg)和Cu (I) Br (7. 2mg)。24小時(shí)后，將溶液暴露于空氣中，并按實(shí)施例5中敘述的方法純化聚合物。Mw = NA ；MW/Mn = NA。Mn(NME)=20000g/mol。實(shí)施例14線型聚(4-苯乙烯磺酸鈉鹽水合物)的合成將ATRP引發(fā)劑i (圖I) (50. 3mg)和SStNa (I. 56g)溶于20mL水中并在氬氣下脫氣15分鐘。然后在攪拌下于20°C下加入Bpy(15.6mg)和Cu (I) Br (7. 2mg)。24小時(shí)后，將溶液暴露于空氣中，并按實(shí)施例5中敘述的方法純化聚合物。Mw = NA ；MW/Mn = NA。Mn(NME)=57500g/molo實(shí)施例155臂星形甲基丙烯酸羥乙酯/4-苯乙烯磺酸鈉鹽水合物共聚物(純化后69/31摩爾％)的合成將ATRP 引發(fā)劑 ii (圖 I) (142. 6mg)、SStNa(I. 55g)和 HEMA(4. 616g)溶于30mL甲醇/水(8/1)混合物中并在氬氣下脫氣15分鐘。然后在攪拌下于20°C下加入Bpy (230. 75mg)和Cu (I)Br (106mg)。反應(yīng)I小時(shí)后，加入IOmL水，然后將溶液在室溫保持24小時(shí)。最后按實(shí)施例5中敘述的方法純化相應(yīng)的共聚物。Mw = 85000g/mol ；MW/Mn = I. 79。實(shí)施例168臂星形甲基丙烯酸羥乙酯/4-苯乙烯磺酸鈉鹽水合物共聚物(純化后75/25摩爾％)的合成將ATRP 引發(fā)劑 iv (圖 I) (141mg)、SStNa (I. 5g)和 HEMA (4. 616g)溶于 30mL 甲醇/水(8/1)混合物中并在氬氣下脫氣15分鐘。然后在攪拌下于20°C下加入Bpy(230.8mg)和Cu⑴Br (106mg)。反應(yīng)I小時(shí)后，加入IOmL水,然后將溶液在室溫保持24小時(shí)。最后按實(shí)施例5中敘述的方法純化相應(yīng)的共聚物。Mw = 210000g/mol ；MW/Mn = 2. 03。實(shí)施例1718臂星形甲基丙烯酸羥乙酯/4-苯乙烯磺酸鈉鹽水合物共聚物(純化后69/31摩爾％)的合成將ATRP 引發(fā)劑 iii (圖 I) (153. 5mg) ,SStNa (I. 5g)和 HEMA (4. 62g)溶于 30mL 甲醇/水(8/1)混合物中并在氬氣下脫氣15分鐘。然后在攪拌下于20°C下加入Bpy (230. 75mg)和Cu⑴Br (106mg)。反應(yīng)I小時(shí)后，加入IOmL水,然后將溶液在室溫保持24小時(shí)。最后按實(shí)施例5中敘述的方法純化相應(yīng)的共聚物。Mw = 206000g/mol ；MW/Mn = 2. 6。實(shí)施例18線型甲基丙烯酸羥乙酯(HEMA)/甲基丙烯酸磺酸丙酯鉀鹽(SPMAK)共聚物(純化·后86/14摩爾％ )的合成將ATRP 引發(fā)劑 i (圖 I) (100. 3mg)、SPMAK (I. 85g)和 HEMA (5. 62g)溶于 30mL甲醇中并在氬氣下脫氣15分鐘。然后在攪拌下于20°C下加入Bpy(31.96mg)和Cu(I)Br (15. Img)。24小時(shí)后，將溶液暴露于空氣中，并按實(shí)施例5中敘述的方法純化聚合物。Mw=NA ；MW/Mn = NA。Mn_) = 66500g/mol。實(shí)施例19線型甲基丙烯酸羥乙酯(HEMA)/甲基丙烯酸磺酸丙酯鉀鹽(SPMAK)共聚物(純化后83/17摩爾％ )的合成將ATRP 引發(fā)劑 i (圖 I) (102. lmg)、SPMAK (I. 90g)和 HEMA (5. 62g)溶于 30mL甲醇中并在氬氣下脫氣15分鐘。然后在攪拌下于20°C下加入Bpy(31.24mg)和Cu(I)Br (14. 34mg)。24小時(shí)后，將溶液暴露于空氣中，并按實(shí)施例5中敘述的方法純化聚合物。Mw = NA ；MW/Mn = NA。Mn_) = 84000g/molo實(shí)施例20線型甲基丙烯酸羥乙酯/甲基丙烯酸磺酸丙酯鉀鹽共聚物(純化后74/26摩爾％)的合成將ATRP 引發(fā)劑 i (圖 I) (100. 5mg)、SPMAK (3. 75g)和 HEMA (5. 622g)溶于 46mL 甲醇/水(1/1)混合物中并在氬氣下脫氣15分鐘。然后在攪拌下于20°C下加入Bpy(32mg)和Cu (I) Br (15. Img)。24小時(shí)后，將溶液暴露于空氣中，并按實(shí)施例5中敘述的方法純化聚合物。Mw = NA ；MW/Mn = NA。Mn(_ = 119000g/molo實(shí)施例21線型甲基丙烯酸羥乙酯/甲基丙烯酸磺酸丙酯鉀鹽共聚物(純化后45/55摩爾％ )的合成將ATRP 引發(fā)劑 i (圖 I) (100. 7mg)、SPMAK (5. 64g)和 HEMA (I. 752g)溶于 46mL 甲醇/水(1/1)混合物中并在氬氣下脫氣15分鐘。然后在攪拌下于20°C下加入Bpy(32mg)和Cu (I) Br (15. Img)。24小時(shí)后，將溶液暴露于空氣中，并按實(shí)施例5中敘述的方法純化聚合物。Mw = NA ；MW/Mn = NA。Mn_) = 108500g/molo實(shí)施例22線型聚(甲基丙烯酸磺酸丙酯鉀)的合成將ATRP 引發(fā)劑 i (圖 I) (100. 7mg)和 SPMAK (7. 5g)溶于 46mL 甲醇 / 水(1/1)混合物中并在氬氣下脫氣15分鐘。然后在攪拌下于20°C下加入Bpy(32mg)和Cu(I)Br (15. Img)。24小時(shí)后，將溶液暴露于空氣中，并按實(shí)施例5中敘述的方法純化聚合物。Mw = NA ；MW/Mn = NA。Mn_) = 120000g/mol。實(shí)施例235臂星形甲基丙烯酸羥乙酯/甲基丙烯酸磺酸丙酯鉀共聚物(純化后82. 4/17. 6摩爾％)的合成將ATRP 引發(fā)劑 ii (圖 I) (143mg)、SPMAK(I. 87g)和 HEMA(4. 61g)溶于 60mL 甲醇/水(8/1)混合物中并在氬氣下脫氣15分鐘。然后在攪拌下于20°C下加入Bpy(230.6mg)和Cu(I)Br(108mg)。24小時(shí)后，將溶液暴露于空氣中，并按實(shí)施例5中敘述的方法純化聚合物。Mw = 161000g/mol ；MW/Mn = 2. 4。實(shí)施例24·8臂星形甲基丙烯酸羥乙酯/甲基丙烯酸磺酸丙酯鉀共聚物(純化后81/19摩爾％ )的合成將ATRP 引發(fā)劑 iv (圖 I) (70. 5mg) ,SPMAK (0. 935g)和 HEMA (2. 3g)溶于 60mL 甲醇/水(8/1)混合物中并在氬氣下脫氣15分鐘。然后在攪拌下于20°C下加入Bpy(115.8mg)和Cu (I) Br (53. 9mg)。24小時(shí)后，將溶液暴露于空氣中，并按實(shí)施例5中敘述的方法純化聚合物。Mw = 227000g/mol ；MW/Mn = 2. 27。實(shí)施例2518臂星形甲基丙烯酸羥乙酯/甲基丙烯酸磺酸丙酯鉀共聚物(純化后82. 4/17. 6摩爾％)的合成將ATRP 引發(fā)劑 iii (圖 I) (75. 3mg) ,SPMAK (0. 923g)和 HEMA (2. 31g)溶于 60mL 甲醇/水(8/1)混合物中并在氬氣下脫氣15分鐘。然后在攪拌下于20°C下加入Bpy(115. 8mg)和Cu (I) Br (53. 9mg)。24小時(shí)后，將溶液暴露于空氣中，并按實(shí)施例5中敘述的方法純化聚合物。Mw = 342000g/mol ；MW/Mn = 2. 28。實(shí)施例26聚合物-麥醇溶蛋白結(jié)合的評(píng)價(jià)通過(guò)十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)，使用15% (w/v)分離凝膠評(píng)價(jià)麥醇溶蛋白與合成聚合物的結(jié)合選擇性和親和力。此外，還對(duì)聚合物對(duì)對(duì)照蛋白(即牛白蛋白和/或牛酪蛋白)的反應(yīng)性分別進(jìn)行了篩選。在PH 1.2和6.8時(shí)分別使用鹽酸和磷酸鹽緩沖液進(jìn)行結(jié)合研究。在PH I. 2和6. 8時(shí)將聚合物(80mg/L)和蛋白質(zhì)(40mg/L)混合在一起并孵育2小時(shí)。然后將溶液在15000g下離心30分鐘以從溶液中殘留的游離蛋白中分離出不溶性絡(luò)合物。然后通過(guò)SDS-PAGE分析上清液以測(cè)定游離蛋白質(zhì)的量。實(shí)施例27聚(HEMA-共-SStNa)與麥醇溶蛋白結(jié)合的選擇性如實(shí)施例26中所述，通過(guò)SDS-PAGE評(píng)價(jià)麥醇溶蛋白與不同線型聚(HEMA-共-SStNa)(在實(shí)施例5 10和12 14中報(bào)道了合成)的結(jié)合親和力，并與在腸pH(6.8)和胃pH(1.2)下白蛋白和酪蛋白的結(jié)合親和力進(jìn)行比較(圖3顯示了實(shí)施例5 10和12 13)。一般來(lái)說(shuō)，在兩個(gè)pH值下，相比于對(duì)照蛋白，聚合物都表現(xiàn)出了對(duì)麥醇溶蛋白更大的親和力。還必須指出，由于酪蛋白在酸性條件下的不溶性，因此未在pH I. 2下研究與酪蛋白的絡(luò)合。如圖3所示，可通過(guò)共聚物組成調(diào)節(jié)與麥醇溶蛋白的絡(luò)合。圖2還顯示了當(dāng)使共聚物與兩種蛋白一起孵育時(shí)，在SDS-PAGE上麥醇溶蛋白和線型聚(HEMA-共-SStNa)之間的選擇性結(jié)合(實(shí)施例10)，而白蛋白仍然游離于溶液中。如實(shí)施例26所述，通過(guò)SDS-PAGE評(píng)價(jià)麥醇溶蛋白對(duì)實(shí)施例14的線型聚(HEMA-共-SStNa)聚合物的結(jié)合親和力并與白蛋白的親和力進(jìn)行比較。結(jié)果如下在PH I. 2和6. 8下與白蛋白的絡(luò)合分別為78. 8%和11. 23% ^pH I. 2和6. 8下與麥醇溶蛋白的絡(luò)合分別為100%和71. 3%。實(shí)施例28聚(HEMA-共-SPMAK)組合物與麥醇溶蛋白結(jié)合的選擇性如實(shí)施例26所述，通過(guò)SDS-PAGE評(píng)價(jià)麥醇溶蛋白與不同線型聚(HEMA-共-SPMAK)(在實(shí)施例18 22中報(bào)道了合成)的結(jié)合親和力并與在腸pH(6. 8)和胃pH(1.2)下白蛋白的親和力進(jìn)行了比較(圖4)。當(dāng)將SStNa單體以SPMAK替代(特別是·在pH 6. 8下)時(shí)，觀察到與麥醇溶蛋白的更少結(jié)合(圖4)。對(duì)于50 100摩爾％比例的SPMAK,得到與麥醇溶蛋白的最佳絡(luò)合。實(shí)施例29共聚物結(jié)構(gòu)對(duì)與麥醇溶蛋白結(jié)合的影響分別使用源自葡萄糖、蔗糖和環(huán)糊精的引發(fā)劑合成5臂、8臂和18臂的星形聚(HEMA-共-SStNa)(實(shí)施例15 17)和聚(HEMA-共-SPMAK)(實(shí)施例23 25)。將其結(jié)合麥醇溶蛋白的能力與其線型對(duì)應(yīng)部分(分別為實(shí)施例9和18)進(jìn)行比較。結(jié)果示于圖5和圖6。對(duì)于約30摩爾％的SStNa固定百分比而言，8臂星形聚(HEMA-共-SStNa)的結(jié)合效率好于線型共聚物或其它星形共聚物(圖5)。在17摩爾％的SPMAK固定比例下，沒(méi)有觀察到在麥醇溶蛋白與線型或星形聚(HEMA-共-SPMAK)的結(jié)合上有顯著差別(圖6)。結(jié)論HEMA和SStNa或SPMAK的線型或星形無(wú)規(guī)共聚物表明在模擬胃腸道的pH條件下結(jié)合a -麥醇溶蛋白。實(shí)施例30共聚物分子量對(duì)與麥醇溶蛋白結(jié)合的影響在pH I. 2和6. 8下，均測(cè)試了含有約50 % SStNa的兩個(gè)不同重量的聚(HEMA-共-SStNa)(實(shí)施例10和11)與麥醇溶蛋白和白蛋白的結(jié)合。在本實(shí)驗(yàn)中，對(duì)每種蛋白分別測(cè)試。結(jié)果示于圖9。發(fā)現(xiàn)與麥醇溶蛋白的結(jié)合和結(jié)合的選擇性受到所述聚合物分子量的影響。實(shí)施例31共聚物對(duì)麥醇溶蛋白的酶促降解的預(yù)防麥醇溶蛋白的胃蛋白酶-胰蛋白酶消化物的制備采用均粘附于瓊脂糖上的胃蛋白酶(Sigma P0609 ；St Louis, Missouri, USA)和胰蛋白酶(Sigma T1763)，以及來(lái)自牛胰臟的a -胰凝乳蛋白酶(Sigma C4129)進(jìn)行a -麥醇溶蛋白的逐步酶促水解。將a-麥醇溶蛋白(IOmg)溶于5mL pH = I. 2的鹽酸緩沖液(IOmM)中并加入胃蛋白酶(38U)。在37°C磁力攪拌混合物2小時(shí)，這時(shí)以0. lmol/L NaOH調(diào)節(jié)pH至6. 8，并加入胰蛋白酶(0. 75U)和a-胰凝乳蛋白酶(0. 5U)。在20°C和6000g下將消化物離心30分鐘。然后在上清液中收集麥醇溶蛋白肽并通過(guò)0. 2 ii m的GHP過(guò)濾器過(guò)濾。米用配有1525 二兀泵、2487雙波長(zhǎng)吸收檢測(cè)器和Breeze ChromatographySoftware (Waters, Midford, MA)的Waters 高效液相色譜HPLC系統(tǒng)，分析所得的麥醇溶蛋白的胃蛋白酶-胰蛋白酶-胰凝乳蛋白酶消化物。在36°C下以ImL/分鐘的流速、215nm的檢測(cè)波長(zhǎng)和50 u I的進(jìn)樣量洗脫樣品。三氟乙酸用作離子配對(duì)劑，以經(jīng)60分鐘從100%緩沖液A至100%緩沖液B的線性梯度進(jìn)行洗脫。緩沖液A由0. I %三氟乙酸、95%水和5%乙腈組成，緩沖液B由0. I %三氟乙酸、5%水和95%乙腈組成。將每個(gè)樣品上清液的一部分在水中稀釋并在 C18 反相柱(Waters Nova-pack C 18, 60 A, 4 u m, 3. 9 X 300mm)上分析。麥醇溶蛋白-聚合物絡(luò)合物的酶促降解
·
將聚(HEMA-共-SStNa)(實(shí)施例10) (4g/L)和麥醇溶蛋白(2g/L)在pH 2下混合在一起并孵育2小時(shí)。然后，按以上所述進(jìn)行麥醇溶蛋白-聚合物絡(luò)合物的逐步酶促降解。按以上所述，使用HPLC分析聚合物結(jié)合劑對(duì)麥醇溶蛋白降解的作用(圖7)。當(dāng)所述麥醇溶蛋白與所述聚合物絡(luò)合時(shí)，檢測(cè)到明顯較少的降解產(chǎn)物(圖7)。實(shí)施例32聚合物對(duì)Caco-2單層完整性的作用評(píng)價(jià)聚(HEMA-共-SStNa)(實(shí)施例10)對(duì)Caco-2細(xì)胞單層完整性的作用并將其與 PEG (35kDa)和 PVP (58kDa)進(jìn)行比較(圖 8)。以2. 5XIO5細(xì)胞/cm2的播種密度在12孔Transwe丨I 聚碳酸酯過(guò)濾器(Corning, Acton, MA)上播種細(xì)胞。在添加了 10% (v/v)胎牛血清、非必需氨基酸溶液(0. ImM)、pH 7. 4的Hepes緩沖劑(IOmM)和青霉素-鏈霉素(相當(dāng)于100U/mL和100 u g/mL)的Dulbecco’s改良的必需培養(yǎng)基(DMEM)中培養(yǎng)Caco-2。每72小時(shí)更新培養(yǎng)基一次。將細(xì)胞在37°C、5% CO2下培養(yǎng)21-28天以在實(shí)驗(yàn)前形成分化的單層。在完全DMEM培養(yǎng)基中進(jìn)行毒性研究。米用 Millicell Electrical Resistance System (MiIlipore Corp.Bedford, MA)，使用單電極(World Precision Instruments, Sarasota, FL)在預(yù)定的時(shí)間點(diǎn)讀取跨上皮細(xì)胞電阻(TEER)的讀數(shù)。在聚(HEMA-共-SStNa)和對(duì)照聚合物(PVP、PEG)中，24小時(shí)后測(cè)定的TEER均顯示了初始值10%的減小(圖8)。這些結(jié)果表明聚(HEMA-共-SStNa)似乎并不強(qiáng)烈地干擾Caco-2細(xì)胞單層的完整性。實(shí)施例33 聚合物結(jié)合劑對(duì)降低麥醇溶蛋白和麥醇溶蛋白降解產(chǎn)物的毒性的作用的體內(nèi)測(cè)試通過(guò)測(cè)量已對(duì)谷蛋白或其降解產(chǎn)物敏感的動(dòng)物的免疫應(yīng)答而體內(nèi)評(píng)價(jià)所述聚合物降低谷蛋白毒性的能力。在存在或不存在聚合物結(jié)合劑的情況下，在表達(dá)HLA-DQ8的轉(zhuǎn)基因小鼠(24) 口服谷蛋白或其降解產(chǎn)物后，在該小鼠中測(cè)量免疫應(yīng)答。實(shí)施例34向食物中加入聚合物結(jié)合劑可將聚合物結(jié)合劑加入到受乳糜瀉影響的個(gè)體所用的含有谷蛋白的食物中。然后當(dāng)食物被吞下時(shí)，在這些食物中的聚合物結(jié)合劑可對(duì)抗食物中所含谷蛋白的有害效應(yīng)。不受此限制，這樣的食物包括煮熟的盤(pán)菜、谷物、焙烤品比如面包、糕點(diǎn)、餅、蛋糕、松餅、餅干等。可以向這些食物中以0.01% 10% (w/w)的濃度加入所述聚合物結(jié)合劑。還可將所述聚合物結(jié)合劑加入到不含谷蛋白的食物中以在含有含谷蛋白食物的膳食中消費(fèi)。不受此限制，這些不含谷蛋白的食物包括涂抹食物比如乳酪、果醬、黃油或可在含谷蛋白食物上或與含谷蛋白食物一起食用的任何食物。本發(fā)明還涉及以下各項(xiàng)實(shí)施方案I. 一種藥物組合物，所述藥物組合物包含聚合物結(jié)合劑和藥學(xué)可接受載體，所述聚合物結(jié)合劑包含具有由不可水解的共價(jià)鍵構(gòu)成的主鏈的高分子量合成聚合物，所述聚合物能在PH低于谷蛋白和源自谷蛋白降解的肽的等電點(diǎn)時(shí)形成靜電鍵，并且能在胃腸道中與谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽結(jié)合。2.實(shí)施方案I的藥物組合物，其中所述聚合物結(jié)合劑能與谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽形成疏水性相互作用。·3.實(shí)施方案I或2的藥物組合物，其中所述聚合物結(jié)合劑能形成氫鍵。4.實(shí)施方案I至3中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述聚合物結(jié)合劑能在胃腸道中特異性地與谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽結(jié)合。5.實(shí)施方案I至4的藥物組合物，其中所述聚合物結(jié)合劑能在腸道中與谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽結(jié)合。6.實(shí)施方案I至5中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述聚合物結(jié)合劑是甲基丙烯酸羥乙酯(HEMA)和4-苯乙烯磺酸鈉鹽水合物(SStNa)的共聚物。7.實(shí)施方案I至5中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述聚合物結(jié)合劑是甲基丙烯酸羥乙酯(HEMA)和甲基丙烯酸磺酸丙酯鉀鹽(SPMAK)的共聚物。8.實(shí)施方案I至5中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述聚合物結(jié)合劑是4-苯乙烯磺酸鈉鹽水合物(SStNa)的聚合物。9.實(shí)施方案I至5中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述聚合物結(jié)合劑是甲基丙烯酸磺酸丙酯鉀鹽(SPMAK)的聚合物。10.實(shí)施方案I至9中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述聚合物結(jié)合劑是線型的。11.實(shí)施方案I至9中任一項(xiàng)的藥物組合物，其中所述聚合物結(jié)合劑是星形的。12.實(shí)施方案11的藥物組合物，其中所述聚合物結(jié)合劑是3 18臂的星形共聚物。13.實(shí)施方案11的藥物組合物，其中所述聚合物結(jié)合劑是5 18臂的星形共聚物。14.實(shí)施方案11的藥物組合物，其中所述聚合物結(jié)合劑是5臂星形共聚物。15.實(shí)施方案11的藥物組合物，其中所述聚合物結(jié)合劑是8臂星形共聚物。16.實(shí)施方案11的藥物組合物，其中所述聚合物結(jié)合劑是18臂星形共聚物。17.實(shí)施方案6的藥物組合物，其中所述HEMA和SStNa的共聚物的HEMA/SStNa的摩爾百分比之比是約93. 5/6. 5至約1/99。18.實(shí)施方案4的藥物組合物，其中所述HEMA和SStNa的共聚物是線型的HEMA/SStNa (51. 5/48. 5 摩爾 ％ )。
19.實(shí)施方案4的藥物組合物，其中所述HEMA和SStNa的共聚物是線型的HEMA/SStNa (43/57 摩爾 ％ )。20.實(shí)施方案7的藥物組合物，其中所述HEMA和SPMAK的共聚物的HEMA/SPMAK摩爾百分比之比是約93. 5/6. 5至約1/99。21.實(shí)施方案7的藥物組合物，其中所述HEMA和SPMAK的共聚物的HEMA/SPMAK摩爾百分比之比是約86/14至約1/99。22.實(shí)施方案7的藥物組合物，其中所述HEMA和SPMAK的共聚物是線型的HEMA/SPMAK (45/55 摩爾 ％ )。23.實(shí)施方案I 22中任一項(xiàng)的藥物組合物，其還包含連蛋白拮抗劑或HLA DQ2抑制劑。24. 一種使用實(shí)施方案I 22中任一項(xiàng)的聚合物結(jié)合劑的方法，包括給患有乳糜·瀉的患者施用藥物有效量的所述聚合物結(jié)合劑。 25.實(shí)施方案24的方法，其用于在所述患者體內(nèi)結(jié)合谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽。26.實(shí)施方案24的方法，其用于減少谷蛋白在所述患者體內(nèi)降解成毒性肽。27.實(shí)施方案24的方法，其用于減少谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽與所述患者胃腸道粘膜的相互作用。28.實(shí)施方案24 27中任一項(xiàng)的方法，其中所述施用在所述患者進(jìn)食含有谷蛋白的膳食之前或期間進(jìn)行。29.實(shí)施方案24 27中任一項(xiàng)的方法，其中所述施用在所述患者進(jìn)食含有谷蛋白的膳食之后進(jìn)行。30.實(shí)施方案I 23中任一項(xiàng)的聚合物結(jié)合劑在制備藥物中的用途。31.實(shí)施方案I 22中任一項(xiàng)的聚合物結(jié)合劑用于在有此需要的患者的胃腸道內(nèi)結(jié)合谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽的用途。32.實(shí)施方案I 22中任一項(xiàng)的聚合物結(jié)合劑在制備用于在有此需要的患者的胃腸道內(nèi)結(jié)合谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽的藥物中的用途。33.實(shí)施方案I 22中任一項(xiàng)的聚合物結(jié)合劑用于減少谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽與有此需要的患者的胃腸粘膜相互作用的用途。34.實(shí)施方案I 22中任一項(xiàng)的聚合物結(jié)合劑在制備用于減少谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽與有此需要的患者的胃腸粘膜相互作用的藥物中的用途。35.實(shí)施方案I 22中任一項(xiàng)的聚合物結(jié)合劑用于減少谷蛋白在有此需要的患者的胃腸道內(nèi)降解成毒性肽的用途。36.實(shí)施方案I 22中任一項(xiàng)的聚合物結(jié)合劑在制備用于減少谷蛋白在有此需要的患者的胃腸道內(nèi)降解成毒性肽的藥物中的用途。37.實(shí)施方案31 36中任一項(xiàng)的用途，其中所述患者患有乳糜瀉。38. 一種食物，其含有實(shí)施方案I 22中任一項(xiàng)的聚合物結(jié)合劑。39.實(shí)施方案38的食物，其中所述食物是含有谷蛋白的食物。40.實(shí)施方案39的食物，其中所述食物是面包。41. 一種使用實(shí)施方案38 40中任一項(xiàng)的食物的方法，包括給患有乳糜瀉的患者在所述患者進(jìn)食期間施用所述食物。42.實(shí)施方案41的方法，用于結(jié)合所述患者的膳食中所含有的谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽。43.實(shí)施方案41的方法，用于減少所述患者的膳食中所含有的谷蛋白降解成毒性肽。44.實(shí)施方案41的方法，用于減少谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽與所述患者的胃腸粘膜的相互作用。45. 一種制備供患有乳糜瀉的患者使用的食物的方法，包括向所述食物中加入實(shí)施方案I 22中任一項(xiàng)的聚合物結(jié)合劑。46.實(shí)施方案41的方法，其中所述食物是含有谷蛋白的食物。
·
雖然以上已經(jīng)通過(guò)具體實(shí)施方案的方式對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，但可以在不背離如所附實(shí)施方案所定義的本發(fā)明的精神和實(shí)質(zhì)的情況下對(duì)其進(jìn)行修改。參考文獻(xiàn)I. Sollid L. M. (2002) Nat Rev Immunol 2,647-655.2. Shan L，Molberg 0，Parrot I.，Hausch F.，F(xiàn)iliz F.，Gray G. M.，SollidL M.，Kholsa C. (2002) Science 297，2275-2279.3. Charles H. Halsted，MD，" The Many Faces of Celiac Disease" (1996)NewEngland Journal of Medicine, May 2，1996—Volume 334，Number 18.4. Trier JS. Celiac sprue. (1991)N England J Med ；325 ;1709_1719.5. Ciacci, C.，C irillo, M.，CavalIaro, R. &Mazzacca, G. (2002)Digestion 66，178-185.6. F.，Shan, L，Santiago，N. A.，Gray, G. M. &Khosla，C. (2002) Am. J. Physiol.Gastrointest. Liver Phyiol. 283，G996-G1003.8. Kim C. Y. ,Quarsten H. ,Bergseng E. ,Kholsa C. ,Sollid L M. (2004)PNAS101，12,4175-4179.9. Fasano A.，Not T.，Wang W.，Uzzau S.，Berti I.，Tommasini A.，GoldblumS.E. (2000)，The Lancet 355，1518-1519.10. Molberg et al. (2005) Gastroenterology, 128, 393-401.11. Vader L. W. et al. (2003) Gastroenterology, 125,1105-1113.12. Sol I id L.M.，Kholsa C. (2005) Nat Clin Pract GastroenterolHepatol. 2 (3) ,140-147.13. Kurtz, C. B.，Cannon，E. P.，Brezzanl, A.，Pitruzello, M.，Dinardo, C.，Rinard，E.，Acheson，D. W. K.，F(xiàn)itzpatrick, R.，Kelly, P.，Shackett，K.，Papoulis，A. T.，Goddard，P. J.，Barker Jr, R. H.，Palace，G. P. &Klinger，J. D. (2001) Antimicrob. AgentsChemother. 45，2340-2347.14. Auricchio, S.，De Ritis，G.，De Vincenzi, M.，Magazzu, G.，Maiuri, L，Mancini, E.，Minetti，M.，Sapora, 0. &Silano，V. (1990)Gastroenterology99,973-978.15. Mothes，T. &Stern，M. (2003) Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. 15，461-463.16. Popineau，Y.，Lefebvre, J.，Godon，B.，(1980) Ann Technol. Agric. 29(2)，191-204.17. Popineau，Y.，Godon，B.，(1982) Cereal Chemistry 59(1)，55-62.18. Godon, B.，Leblanc, M. P.，Popineau，Y.，(1983) Qual. Plant Foods Hum.Nutr33，161-168.19. Popineau, Y. , (1985) J Cereal Sci，3，29_38.20. Popineau，Y.，Pineau，F(xiàn).，(1985) Lebensm-Wiss. u. Technol. 18，133-135.21. Popineau, Y. , Le Guerroue, J. L. , (1991) J Cereal Sci，14，231-241.22. Stenzel-Rosenbaum, M.，Davis, T. P.，Chen, V.，F(xiàn)ane，A. G. (2001)Macromolecules 34，5433-5438.·
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權(quán)利要求
1.一種用于口服用途的聚合物結(jié)合劑，其包含合成聚合物或共聚物，所述合成聚合物或共聚物包含以下的一種或更多種 (a)甲基丙烯酸羥乙酯(HEMA)與4-苯乙烯磺酸或其鹽的共聚物； (b)HEMA與甲基丙烯酸磺酸丙酯或其鹽的共聚物； (c)4-苯乙烯磺酸或其鹽的聚合物；和/或 (d)甲基丙烯酸磺酸丙酯或其鹽的聚合物。
2.權(quán)利要求I的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物具有高分子量。
3.權(quán)利要求I的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物具有由不可水解的共價(jià)鍵構(gòu)成的主鏈。
4.權(quán)利要求I的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物能在pH低于谷蛋白和源自谷蛋白降解的肽的等電點(diǎn)時(shí)形成靜電鍵。
5.權(quán)利要求I的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物能在胃腸道中與谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽結(jié)合。
6.權(quán)利要求I的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物能與谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽形成疏水性相互作用。
7.權(quán)利要求I的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物能形成氫鍵。
8.權(quán)利要求I的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物能在胃腸道中特異性地與谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽結(jié)合。
9.權(quán)利要求I的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物能在腸道中與谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽結(jié)合。
10.權(quán)利要求I的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物包含甲基丙烯酸羥乙酯(HEMA)與4-苯乙烯磺酸或其鹽的共聚物。
11.權(quán)利要求10的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物包含甲基丙烯酸羥乙酯(HEMA)與4-苯乙烯磺酸鈉鹽(SStNa)的共聚物。
12.權(quán)利要求11的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物包含甲基丙烯酸羥乙酯(HEMA)和4-苯乙烯磺酸鈉鹽水合物(SStNa)的共聚物。
13.權(quán)利要求I的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物包含甲基丙烯酸羥乙酯(HEMA)和甲基丙烯酸磺酸丙酯或其鹽的共聚物。
14.權(quán)利要求13的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物包含甲基丙烯酸羥乙酯(HEMA)和甲基丙烯酸磺酸丙酯鉀鹽(SPMAK)的共聚物。
15.權(quán)利要求I的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物包含4-苯乙烯磺酸或其鹽的聚合物。
16.權(quán)利要求15的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物包含4-苯乙烯磺酸鈉鹽(SStNa)的聚合物。
17.權(quán)利要求16的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物包含4-苯乙烯磺酸鈉鹽水合物(SStNa)的聚合物。
18.權(quán)利要求I的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物包含甲基丙烯酸磺酸丙酯或其鹽的聚合物。
19.權(quán)利要求18的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物包含甲基丙烯酸磺酸丙酯鈉鹽(SPMAK)的聚合物。
20.權(quán)利要求I的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物是線型的。
21.權(quán)利要求I的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物是星形的。
22.權(quán)利要求21的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物是3 18臂的星形共聚物。
23.權(quán)利要求21的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物是5 18臂的星形共聚物。
24.權(quán)利要求21的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物是5臂星形共聚物。
25.權(quán)利要求21的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物是8臂星形共聚物。
26.權(quán)利要求21的聚合物結(jié)合劑，其中所述合成聚合物或共聚物是18臂星形共聚物。
27.權(quán)利要求12的聚合物結(jié)合劑，其中所述HEMA和SStNa的共聚物的HEMA/SStNa的摩爾百分比之比是93. 5/6. 5至1/99。
28.權(quán)利要求12的聚合物結(jié)合劑，其中所述HEMA和SStNa的共聚物是線型的HEMA/SStNa，其中 HEMA/SStNa 的比例為 51. 5/48. 5 摩爾％。
29.權(quán)利要求12的聚合物結(jié)合劑，其中所述HEMA和SStNa的共聚物是線型的HEMA/SStNa，其中HEMA/SStNa的比例為43/57摩爾％。
30.權(quán)利要求14的聚合物結(jié)合劑，其中所述HEMA和SPMAK的共聚物的HEMA/SPMAK摩爾百分比之比是93. 5/6. 5至1/99。
31.權(quán)利要求14的聚合物結(jié)合劑，其中所述HEMA和SPMAK的共聚物的HEMA/SPMAK摩爾百分比之比是86/14至1/99。
32.權(quán)利要求14的聚合物結(jié)合劑，其中所述HEMA和SPMAK的共聚物是線型的HEMA/SPMAK，其中HEMA/SPMAK的比例為45/55摩爾％。
33.包含權(quán)利要求I 32中任一項(xiàng)的聚合物結(jié)合劑的組合物，其還包含連蛋白拮抗劑或HLA DQ2抑制劑。
34.權(quán)利要求I 32中任一項(xiàng)的聚合物結(jié)合劑在制備藥物中的用途。
35.權(quán)利要求I 32中任一項(xiàng)的聚合物結(jié)合劑在制備用于預(yù)防或減少谷蛋白對(duì)有此需要的患者的胃腸道粘膜的有害作用的藥物中的用途。
36.權(quán)利要求I 32中任一項(xiàng)的聚合物結(jié)合劑在制備用于在有此需要的患者的胃腸道內(nèi)結(jié)合谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽的藥物中的用途。
37.權(quán)利要求I 32中任一項(xiàng)的聚合物結(jié)合劑在制備用于減少谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽與有此需要的患者的胃腸道粘膜相互作用的藥物中的用途。
38.權(quán)利要求I 32中任一項(xiàng)的聚合物結(jié)合劑在制備用于減少谷蛋白在有此需要的患者的胃腸道內(nèi)降解成毒性肽的藥物中的用途。
39.權(quán)利要求36的用途，其中所述患者患有乳糜瀉。
40.一種食物，其含有權(quán)利要求I 32中任一項(xiàng)的聚合物結(jié)合劑。
41.權(quán)利要求40的食物，其中所述食物是含有谷蛋白的食物。
42.權(quán)利要求41的食物，其中所述食物是面包。
43.一種使用權(quán)利要求40 42中任一項(xiàng)的食物的方法，包括給有此需要的患者在所述患者進(jìn)食期間施用所述食物以預(yù)防或減少谷蛋白對(duì)所述患者的胃腸道粘膜的有害作用。
44.權(quán)利要求43的方法，用于結(jié)合所述患者的膳食中所含有的谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽。
45.權(quán)利要求43的方法，用于減少所述患者的膳食中所含有的谷蛋白降解成毒性肽。
46.權(quán)利要求43的方法，用于減少谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽與所述患者的胃腸道粘膜的相互作用。
47.權(quán)利要求43的方法，其中所述患者患有乳糜瀉。
48.一種制備供需要預(yù)防或減少谷蛋白對(duì)其胃腸道粘膜的有害作用的患者使用的食物的方法，包括向所述食物中加入權(quán)利要求I 32中任一項(xiàng)的聚合物結(jié)合劑。
49.權(quán)利要求48的方法，其中所述食物是含有谷蛋白的食物。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種包含聚合物結(jié)合劑和藥學(xué)可接受載體的藥物組合物，所述聚合物結(jié)合劑包含具有由不可水解的共價(jià)鍵構(gòu)成的主鏈的高分子量合成聚合物，所述聚合物能在pH低于谷蛋白和源自谷蛋白降解的肽的等電點(diǎn)時(shí)形成靜電鍵，并且能在胃腸道中與谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽結(jié)合。本發(fā)明還涉及使用所述聚合物結(jié)合劑用于結(jié)合谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽、用于減少谷蛋白降解成毒性肽或用于減少谷蛋白或源自谷蛋白降解的肽與胃腸道粘膜的相互作用的方法。
文檔編號(hào)A61P1/00GK102784165SQ20121026097
公開(kāi)日2012年11月21日 申請(qǐng)日期2006年10月27日 優(yōu)先權(quán)日2005年11月14日
發(fā)明者穆罕默德·納塞爾·埃丁, 讓-克里斯托弗·勒魯 申請(qǐng)人:瓦洛里塞森-勒謝什有限合伙公司