專(zhuān)利名稱(chēng)：重組水蛭素滴眼液及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含透明質(zhì)酸鈉的重組水蛭素滴眼液及其制備方法。
背景技術(shù)：
水蛭素是一類(lèi)最初從醫(yī)用水蛭唾液腺中分離得到的由65 66個(gè)氨基酸組成的多肽物質(zhì)，主要有HV1、HV2、HV3三種同源性很高的異構(gòu)體(Hirudin variant)。水蛭素可以通過(guò)直接抑制凝血酶的活性而有效地抑制動(dòng)脈、靜脈血栓的形成及彌散性血管內(nèi)凝血(DIC)，因此，水蛭素在預(yù)防和治療深度靜脈血栓、冠狀動(dòng)脈血栓、以及心絞痛等疾病方面具有極高的應(yīng)用價(jià)值。目前，國(guó)外已有兩個(gè)重組水蛭素產(chǎn)品批準(zhǔn)上市1. Desirudin (商品名 Revasc,瑞士 Novartis 產(chǎn)品)；2· Lepirudin (商品名RefIudan,英國(guó) Pharmion 及美國(guó)BerlexLaboratories產(chǎn)品)。兩者結(jié)構(gòu)上僅在N-端存在微小差異，Desirudin為Vall_Val2,而Lepirudin為L(zhǎng)eul_Tyr2。Desirudin用于手術(shù)時(shí)深度靜脈血栓(DVT)的預(yù)防與治療，Lepirudin用于肝素誘導(dǎo)的血小板減少性疾病病人的抗凝治療。此外，水蛭素在防治不穩(wěn)定性心絞痛、彌散性血管內(nèi)凝血、腦凝血、血栓靜脈炎及冠狀動(dòng)脈血栓等方面都具有巨大的潛在臨床應(yīng)用價(jià)值。吳梧桐等(中國(guó)發(fā)明專(zhuān)利，專(zhuān)利號(hào)03132224.7)藥理試驗(yàn)證明重組水蛭素對(duì)D-半乳糖及亞硒酸鈉誘導(dǎo)的白內(nèi)障均具有顯著防治效果，其發(fā)明的重組水蛭素滴眼液，采用殼聚糖為增稠劑，主要用于治療白內(nèi)障。然而，殼聚糖大分子具有活潑的羥基和氨基，在一定的條件下，容易發(fā)生水解、烷基化、?；Ⅳ燃谆?、磺化、硝化、鹵化、氧化、還原、縮合和絡(luò)合等化學(xué)反應(yīng)，并生成各種性質(zhì)不確定的殼聚糖衍生物。增稠劑大多數(shù)以物理增稠的原理來(lái)提高藥物的生物利用度，且必須達(dá)到一定濃度才可起作用。但是，物理增稠發(fā)揮的增效作用比較有限，當(dāng)粘度達(dá)到一定值時(shí)，藥效就不會(huì)隨著粘度的增大而增加。這類(lèi)增稠劑常用的有泊洛沙姆、卡波姆、羥丙甲纖維素等。此外，在這些增稠劑中，有些是牛頓流體，眨眼時(shí)會(huì)有疼痛感，且對(duì)pH和/或溫度敏感，另外一些還有較多的配伍禁忌。例如，泊洛沙姆溫度敏感性凝膠，雖然在25°C以上可由液相轉(zhuǎn)變?yōu)榘牍腆w，但當(dāng)回到低溫時(shí)，半固體凝膠卻很難回到液體狀態(tài)，因此用于大生產(chǎn)其工藝難以控制。另外，卡波姆凝膠由于鹽類(lèi)電解質(zhì)可使其粘性下降，堿土金屬離子以及陽(yáng)離子聚合物等也可與之結(jié)合成不溶性的鹽，強(qiáng)酸也可以使其失去粘性，因此，卡波姆有較多的配伍禁忌。羥丙甲纖維素等纖維素衍生物、聚乙烯醇以及聚乙烯吡咯烷酮等作為滴眼液的增稠劑，其缺點(diǎn)主要是它們屬于牛頓流體，粘度隨濃度的增大而提高但不受切變力(如眨眼時(shí)的切變力)的影響，有時(shí)為了產(chǎn)生明顯的增稠作用，必須添加其至一定濃度，然而當(dāng)粘度達(dá)到一定的程度時(shí)，會(huì)使眼瞼不易眨動(dòng)且對(duì)敏感的眼組織產(chǎn)生刺激，令使用者難以耐受[1]。因此，需要使用另外一種增稠劑，它一方面可以使重組水蛭素長(zhǎng)時(shí)間滯留病灶區(qū)，又不會(huì)對(duì)敏感的眼組織產(chǎn)生刺激作用，同時(shí)還可以保證重組水蛭素滴眼液的儲(chǔ)存穩(wěn)定性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種含有透明質(zhì)酸鈉的重組水蛭素滴眼液，其中所含的透明質(zhì)酸鈉具有防止藥液外溢流失、使藥物長(zhǎng)時(shí)間滯留病灶區(qū)的特點(diǎn)。本發(fā)明還提供了制備上述滴眼液的方法，它包括先溶脹透明質(zhì)酸鈉，然后分別溶解重組水蛭素、等滲調(diào)節(jié)劑、金屬絡(luò)合劑、防腐劑，并調(diào)節(jié)重組水蛭素滴眼液的PH值為4. O 7. 5。本發(fā)明還說(shuō)明了透明質(zhì)酸鈉、等滲調(diào)節(jié)劑、金屬絡(luò)合劑、防腐劑在制備滴眼液中的用途。本發(fā)明所述的透明質(zhì)酸鈉(SH)為增稠劑，透明質(zhì)酸鈉是透明質(zhì)酸(HA)的鈉鹽形式。透明質(zhì)酸又稱(chēng)玻璃酸，是以N-乙酰氨基葡萄糖和葡萄糖醛酸為雙糖重復(fù)單元構(gòu)成的粘 多糖類(lèi)物質(zhì)，通常以其鈉鹽形式存在，平均分子量可以是60 280萬(wàn)。不同分子量的透明質(zhì)酸鈉粘度不同，因此其用途也不同。本發(fā)明所述透明質(zhì)酸鈉的分子量大約是130萬(wàn)，屬于滴眼液級(jí)別。透明質(zhì)酸鈉廣泛存在于動(dòng)物組織細(xì)胞間質(zhì)和眼玻璃體中，主要的生理功能是保持組織水分和潤(rùn)滑作用等。藥學(xué)家研究發(fā)現(xiàn)，透明質(zhì)酸鈉不僅具有卡波姆、泊洛沙姆、羥丙甲纖維素、殼聚糖等高分子粘性物質(zhì)的優(yōu)點(diǎn)，還具有良好的生物相容性，在增加藥物黏度的同時(shí)，克服了眼瞼不易眨動(dòng)的缺點(diǎn)，使其成為滴眼液的良好載體[2]。凌沛學(xué)[3]研究發(fā)現(xiàn)透明質(zhì)酸鈉還能降低滴眼劑中防腐劑的不良反應(yīng)。正常情況下，使用含有透明質(zhì)酸鈉的滴眼液時(shí)，眼表自然存在的透明質(zhì)酸鈉形成一層膜覆蓋于角膜上皮表面，角膜上皮具有與透明質(zhì)酸鈉特異性結(jié)合位點(diǎn)，所以含透明質(zhì)酸鈉的藥物可以長(zhǎng)時(shí)間存留于眼表，有利于眼組織對(duì)藥物長(zhǎng)久有效的吸收。因此，透明質(zhì)酸鈉生物相容性極好，不但可以增粘，而且可以保濕，從而能在改善視力的同時(shí)保持眼部較長(zhǎng)時(shí)間的濕潤(rùn)，對(duì)改善視力起到了輔助作用。本發(fā)明所述的透明質(zhì)酸鈉可以使用市售產(chǎn)品。本發(fā)明所述的等滲調(diào)節(jié)劑可以是本領(lǐng)域常用的等滲調(diào)節(jié)劑，其主要作用是調(diào)節(jié)滴眼液的滲透壓，增加患者使用的順依性，可選用氯化鈉、硼酸鹽緩沖液、磷酸鹽緩沖液中的一種或幾種。在本發(fā)明的實(shí)施例中，使用的等滲調(diào)節(jié)劑為氯化鈉和硼酸鹽緩沖液。本發(fā)明所述的金屬絡(luò)合劑是本領(lǐng)域中的常用組分，其主要作用是防止滴眼液配制過(guò)程中各種金屬離子的影響，其選擇和含量皆遵循本領(lǐng)域的常規(guī)考慮。在本發(fā)明的實(shí)施例中，使用的金屬絡(luò)合劑為乙二胺四乙酸二鈉，它是本領(lǐng)域制劑中的常規(guī)金屬絡(luò)合劑。本發(fā)明所述的防腐劑是本領(lǐng)域制劑中的常規(guī)眼用防腐劑，其選擇和含量皆遵循本領(lǐng)域的常規(guī)考慮，可選用對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、硫柳汞或者苯扎溴銨中的一種或幾種混合物。在本發(fā)明的實(shí)施例中使用的防腐劑為對(duì)羥基苯甲酸乙酯，它是本領(lǐng)域制劑中的常規(guī)眼用防腐劑。本發(fā)明所述的pH調(diào)節(jié)劑是本領(lǐng)域中的常用組分，其選擇和含量皆可遵循本領(lǐng)域中的常規(guī)考慮，可選用氫氧化鈉或者鹽酸中的一種或兩種。本發(fā)明所述的藥學(xué)上可接受的載體是指在滴眼液中常用的載體。本發(fā)明中所述藥學(xué)上可接受的載體是液體。在本發(fā)明的實(shí)施例中，所述藥學(xué)上可接受的載體選用注射用水。本發(fā)明的重組水蛭素滴眼液的制備方法十分簡(jiǎn)單，可以采用常規(guī)的滴眼液生產(chǎn)工藝生產(chǎn)，簡(jiǎn)單物理混合即可。
本發(fā)明的重組水蛭素滴眼液，由于加入了透明質(zhì)酸鈉，它具有防止藥液外溢流失、使藥物長(zhǎng)時(shí)間滯留病灶區(qū)的作用，同時(shí)使眼表濕潤(rùn)舒適。此外，所述的滴眼液制備方法保證了滴眼液的澄明度及儲(chǔ)存穩(wěn)定性。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例細(xì)說(shuō)明本發(fā)明，這些實(shí)施例只是用于舉例說(shuō)明的目的，并不限制本發(fā)明的范圍實(shí)施例I重組水蛭素滴眼液配方 重組水蛭素InO. 02g
透明質(zhì)酸鈉O. Ig
硼酸1.116g
硼砂0.191g
氯化鈉0.22g
乙二胺四乙酸二鈉0.5g
對(duì)羥基苯甲酸乙酯0.03g
注射用水定容至IOOml制備工藝I.在60-80°C的水浴條件下，快速攪拌并緩緩將O. Ig透明質(zhì)酸鈉加入到70ml注射用水中，使其完全分散，充分溶脹，勿使粘結(jié)成團(tuán)，攪拌30分鐘左右即可完全溶解。2分別將硼酸、硼砂、氯化鈉、乙二胺四乙酸鈉和對(duì)羥基苯甲酸乙酯加入到上述透明質(zhì)酸鈉溶液中，攪勻溶解，然后定容至100ml，即得pH7. 4的滴眼液空白基質(zhì)。3.將重組水蛭素III加入到上述滴眼液空白基質(zhì)中，攪勻溶解，通過(guò)O. 22um濾器過(guò)濾除菌，然后分裝，即得重組水蛭素III滴眼液。實(shí)施例2兔眼刺激實(shí)驗(yàn)將實(shí)施例I中重組水蛭素III滴眼液按照新藥臨床前指導(dǎo)原則方法M進(jìn)行刺激性考察，選擇健康新西蘭兔4只，左眼每日給重組水蛭素III滴眼液5次，右眼給生理鹽水做空白對(duì)照，在1，24，48，72h進(jìn)行眼部檢查，觀察結(jié)膜、角膜、虹膜及其他可見(jiàn)損傷，連續(xù)觀察7d，根據(jù)眼刺激反應(yīng)分值標(biāo)準(zhǔn)記錄眼部反應(yīng)的分值(結(jié)果見(jiàn)表I)。表I各個(gè)觀察時(shí)間各組眼睛最后得分
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組Ih 24h 48h 72h 4d 5d 6d 7d
給藥一側(cè)眼睛00000000
對(duì)照一側(cè)眼睛00000000
結(jié)論重組水蛭素III滴眼液給藥一側(cè)眼睛眼角膜、虹膜和結(jié)膜未出現(xiàn)刺激性，與對(duì)照一側(cè)眼睛一樣，由此證明重組水蛭素III滴眼液無(wú)眼刺激性。實(shí)施例3穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)重組水蛭素III滴眼液測(cè)定抗凝活力后，分別置于4°C冰箱及室溫，在放置1，2，4周和3，6，12個(gè)月后，其抗凝活力及pH值沒(méi)有變化，外觀形狀、澄明度及無(wú)菌檢查均符合中華人民共和國(guó)藥典(二部)附錄IIIA對(duì)滴眼液的要求。實(shí)施例4藥效學(xué)實(shí)驗(yàn) 對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)的白內(nèi)障大鼠的治療作用實(shí)驗(yàn)藥物實(shí)施例I中的重組水蛭素111滴眼液實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠，雌雄各半，130±20g實(shí)驗(yàn)方法和結(jié)果I. SD大鼠白內(nèi)障模型建立取24只SD大鼠隨機(jī)分成4組，每組均為6只(雌雄各半)，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、白內(nèi)停對(duì)照組和重組水蛭素III滴眼液(2000ATU/ml)組。除正常對(duì)照組外，其它組SD大鼠均腹腔注射O. 08%的D-半乳糖溶液25mL/kg，相當(dāng)于20mg/kg，每日分2次給藥，上下午各I次，連續(xù)給14d，并飲用10% D-半乳糖溶液[5]，正常對(duì)照組按同樣方式腹腔注射同體積的生理鹽水。造模成功后，各組分別雙眼點(diǎn)滴給藥，各組給藥容積均為IOOuL/只/次，每日分3次給藥，連續(xù)30天。2.重組水蛭素111滴眼液對(duì)白內(nèi)障大鼠的治療作用給藥30天后，使用復(fù)方托吡卡胺滴眼液散瞳，用裂隙燈顯微鏡定期觀察大鼠晶狀體的混濁程度，觀察后記錄結(jié)果。晶狀體混濁程度按表3標(biāo)準(zhǔn)分別賦予不同分值，進(jìn)行組間t檢驗(yàn)。模型組大鼠未經(jīng)藥物治療，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)其晶狀體的混濁程度越來(lái)越高。重組水蛭素III滴眼液組與模型組晶狀體混濁程度相比，有極顯著差異(P < O. 01)，表明重組水蛭素III滴眼液可顯著緩解晶狀體混濁(見(jiàn)表2和圖I)。表2rHVIII滴眼液對(duì)SD大鼠晶狀體混濁程度的影響( ±S，η = 6)
權(quán)利要求
1.一種含有透明質(zhì)酸鈉的重組水蛭素滴眼液，其特征在于以透明質(zhì)酸鈉為增稠劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的滴眼液除重組水蛭素、透明質(zhì)酸鈉以外，還含有等滲調(diào)節(jié)劑、金屬絡(luò)合劑、防腐劑、以及藥學(xué)上可接受的載體。
3.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述滴眼液的制備方法，其特征在于將透明質(zhì)酸鈉、等滲調(diào)節(jié)劑、金屬絡(luò)合劑和防腐劑溶解于藥學(xué)上可接受的載體制成滴眼液空白基質(zhì)，然后將重組水蛭素溶解于該滴眼液空白基質(zhì)中，過(guò)濾除菌、分裝，制得重組水蛭素滴眼液。
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述的滴眼液，其特征在于所述的等滲調(diào)節(jié)劑選自氯化鈉、硼酸鹽緩沖液或者磷酸鹽緩沖液中的一種或幾種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述的滴眼液，其特征在于所述的金屬絡(luò)合劑為乙二胺四乙酸二鈉。
6.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述的滴眼液，其特征在于所述的防腐劑為對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、苯扎溴銨或硫柳汞中的一種或幾種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1、2所述的滴眼液，其特征在于所述藥學(xué)上可接受的載體是注射用水。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種以透明質(zhì)酸鈉為輔料的重組水蛭素滴眼液及其制備方法。本發(fā)明的技術(shù)特征在于重組水蛭素滴眼液中包含有透明質(zhì)酸鈉，它具有防止藥液外溢流失、使藥物長(zhǎng)時(shí)間滯留病灶區(qū)的作用。本發(fā)明還公布了重組水蛭素滴眼液的制備方法，該方法保證了滴眼液的澄明度及穩(wěn)定性。本發(fā)明制備的重組水蛭素滴眼液除包含重組水蛭素、透明質(zhì)酸鈉以外，還包括等滲調(diào)節(jié)劑、金屬絡(luò)合劑、防腐劑以及藥學(xué)上可接受的載體。具體制備方法是將透明質(zhì)酸鈉、等滲調(diào)節(jié)劑、金屬絡(luò)合劑、防腐劑溶解于藥學(xué)上可接受的載體中形成滴眼液空白基質(zhì)，然后將重組水蛭素溶解于滴眼液空白基質(zhì)中，過(guò)濾除菌、分裝，制得重組水蛭素滴眼液。制得的重組水蛭素滴眼液pH值為4.0～7.5。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明所述方法制備的重組水蛭素滴眼液具有防治白內(nèi)障的作用。
文檔編號(hào)A61K9/08GK102727874SQ20121024843
公開(kāi)日2012年10月17日 申請(qǐng)日期2012年7月18日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月18日
發(fā)明者王娜, 王靜, 譚樹(shù)華 申請(qǐng)人:中國(guó)藥科大學(xué)