專利名稱：茅蒼術(shù)抗胃癌有效組分的制備方法及其藥物制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及從茅蒼術(shù)中抗提取胃癌有效組分的提取及其藥物制劑，屬于中藥制劑領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
胃癌是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在我國(guó)其發(fā)病率居各類腫瘤的首位。胃癌的發(fā)病率約為整個(gè)消化道癌腫的40%-50%，占消化道癌腫的第一位。胃癌是由于正氣內(nèi)虛，加之飲食不節(jié)、情志失調(diào)等原因引起的，以氣滯、痰濕、瘀血蘊(yùn)結(jié)于胃，胃失和降為基本病機(jī)，以脘部飽脹或疼痛、納呆、消痩、黑便、脘部積塊為主要臨床表現(xiàn)的ー種惡性疾病。西醫(yī)對(duì)胃癌按組織學(xué)分類，分為腺癌、未分化癌、粘液癌、特殊類型癌(包括腺鱗癌、鱗狀細(xì)胞癌、類癌等)。胃癌可發(fā)生于胃的任何部位，但半數(shù)以上見(jiàn)于胃竇部，尤其是沿小彎側(cè)，其次是賁門，再次為胃底及胃體等部位。目前，胃癌的治療仍以外科為主，化療和放療為輔的治療手段，雖然近年來(lái)治療方法不斷改進(jìn)，胃癌的治療效果還不夠滿意。目前應(yīng)用中醫(yī)藥治療胃癌在臨床中占有重要地位，不僅表現(xiàn)在中醫(yī)中藥能預(yù)防和治療因化療和放療引起的毒性反應(yīng)和副作用，而且臨床實(shí)驗(yàn)證明胃癌術(shù)后單獨(dú)采用中藥也能有效防止復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，具有延長(zhǎng)生存期以及提高胃癌病人生存質(zhì)量的優(yōu)勢(shì)。茅蒼術(shù)為菊科植物茅蒼術(shù)/aflcea (Thunb. ) DC.干燥根莖,具有燥濕健脾，祛風(fēng)散寒，明目的功效，主治脘腹脹滿、泄瀉、水腫、風(fēng)濕痹痛、風(fēng)寒感冒、脾胃不和，泄瀉等癥。蒼術(shù)根莖中主要含蒼術(shù)酮、蒼術(shù)素、3-β羥基蒼術(shù)酮、3-β-こ?；n術(shù)酮、蒼術(shù)素醇、こ醚蒼術(shù)素醇、蒼術(shù)烯內(nèi)酯甲、蒼術(shù)烯內(nèi)酯丙、β-谷甾醇、欖香烯、S-愈創(chuàng)術(shù)烯、芹子烯、α -愈創(chuàng)術(shù)烯、綠葉烯、I，9-馬兜鈴ニ烯、欖香醇、3 β -羥基蒼術(shù)醇、3 β -醋酸基蒼術(shù)醇等。蒼術(shù)所含揮發(fā)油有驅(qū)風(fēng)健胃作用，所含苦味也有健胃、促進(jìn)食欲的作用。實(shí)驗(yàn)證明蒼術(shù)有明顯的抗副交感神經(jīng)介質(zhì)こ酰膽堿引起的腸痙攣。對(duì)正常家兔離體小腸的自發(fā)運(yùn)動(dòng)，蒼術(shù)使小腸張カ降低。對(duì)交感神經(jīng)介質(zhì)腎上腺素引起的兔腸肌松弛，蒼術(shù)制劑能促進(jìn)腎上腺素抑制作用的振幅恢復(fù)，此外，蒼術(shù)也可通過(guò)對(duì)抗膽堿作用而對(duì)抗鹽酸所致大鼠急性胃炎及幽門結(jié)扎所致大鼠胃潰瘍；另蒼術(shù)醇有促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)作用，對(duì)胃平滑肌也有輕微收縮作用。因此，蒼術(shù)常與其他中藥組成復(fù)方治療和預(yù)防胃癌，中國(guó)專利CN1903346A公開(kāi)了ー種治療胃癌的藥物，其中包括蒼術(shù)，但是該藥方采用大量的中藥材原料進(jìn)行配制，蒼術(shù)的抗癌作用成分及機(jī)制尚不清楚。本發(fā)明提供一種以茅蒼術(shù)有效組分制備及藥物制劑的方法，該有效組分和制劑對(duì)胃癌細(xì)胞存活有顯著的抑制效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種制備方法簡(jiǎn)單、生產(chǎn)エ藝簡(jiǎn)潔的從茅蒼術(shù)提取抗胃癌活性組分的方法并制備出療效良好的藥物制劑。為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明目的提供一種從茅蒼術(shù)中提取抗胃癌活性組分的方法。本發(fā)明的另ー個(gè)目的是提供以茅蒼術(shù)有效組分制備藥物的方法。
本發(fā)明所述的茅蒼術(shù)中抗胃癌活性組分的提取方法，按照下述步驟進(jìn)行
(O取茅蒼術(shù)粉末，加入8 12倍質(zhì)量的蒸餾水，回流提取f 3小時(shí)，提取f 3次，合并濾液，減壓濃縮至廣2 g/mL生藥量的茅蒼術(shù)水提液；
(2)將提取制得的茅蒼術(shù)水提液轉(zhuǎn)入分液漏斗中，加入O. 5^1. 5倍體積的石油醚，輕輕振搖，靜置，待溶液完全分層后，放出下層水溶液，收集石油醚部分；共萃取3飛次，合并石油醚萃取液，在40°C下減壓濃縮回收石油醚，濃縮液干燥即為茅蒼術(shù)水提液的石油醚部位；石油醚萃取后的剰余水溶液按上述方法再依次用こ酸こ酷、正丁醇萃取3飛次；こ酸こ酯萃取液在40°C下減壓濃縮，正丁醇萃取液在60°C下減壓濃縮，得こ酸こ酯部位，正丁醇部位。
(3)其中上述茅蒼術(shù)的石油醚部位、こ酸こ酯部位和正丁醇部位即為茅蒼術(shù)中提取抗胃癌活性組分。本發(fā)明的另ー個(gè)目的是提供了茅蒼術(shù)有效組分的藥物制劑。茅蒼術(shù)抗胃癌有效組分的藥物制劑，由質(zhì)量百分比的1% — 99%的茅蒼術(shù)抗胃癌有效組分和99% — 1%的賦形劑組成，優(yōu)選由質(zhì)量百分比的30% — 80%的茅蒼術(shù)有效組分和70%-20%的藥用賦形劑組成，最好由質(zhì)量百分比的50% — 70%的茅蒼術(shù)有效組分和50% — 30%的賦形劑組成。其中所述的賦形劑為聚こニ醇、硬脂酸、明膠、石蠟、滑石粉、微晶纖維素、こ基纖維素、淀粉、糖粉等。按藥劑學(xué)方法，可以將本發(fā)明的茅蒼術(shù)有效組分制備成多種臨床藥物劑型作為抗腫瘤藥物，包括ロ服制劑或非腸道給要得劑型。所說(shuō)的ロ服制劑選自于片劑、膠囊劑、丸剤、顆粒劑、混懸劑、滴丸、ロ服液體制劑中的任何ー種；所說(shuō)的非腸道給藥劑型選自于氣霧劑、或皮下給藥劑型當(dāng)中的ー種。本發(fā)明的抗胃癌藥物中的放療是指常規(guī)的賦形劑，如溶劑、崩解劑、矯味劑、防腐齊U、著色劑、粘合劑等。本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明可提供一種制備方法簡(jiǎn)單、生產(chǎn)エ藝簡(jiǎn)潔的從茅蒼術(shù)提取抗胃癌活性組分的方法并制備出療效良好的藥物制劑。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的茅蒼術(shù)有效組分具有抗胃癌作用，是通過(guò)以下藥效實(shí)驗(yàn)得到證實(shí)的。為了檢測(cè)本發(fā)明所得的抗胃癌活性組分的性能，將本發(fā)明所得的抗胃癌活性組分按照配制成0.5 1.5 mg/mL藥液，用于胃癌細(xì)胞處理，檢測(cè)提取物對(duì)胃癌細(xì)胞的抑制活性。抑癌實(shí)驗(yàn)證實(shí)，本發(fā)明所得的抗胃癌活性組分對(duì)胃癌細(xì)胞存活有顯著的抑制效果。實(shí)施例I茅蒼術(shù)有效組分提取
I)以20g茅蒼術(shù)粉末為原料，加入160 mL蒸餾水，加熱回流提取I h，提取液離心抽濾、濃縮I g/mL，得茅蒼術(shù)水提液。2)將步驟I)所得的提取液加入等體積石油醚，萃取3次，合并石油醚部。將步所得的水部位按照上述石油醚萃取的相同方法依次采用こ酸こ酷、正丁醇萃取，即得こ酸こ酷部位、正丁醇部位。3)將石油醚部位、こ酸こ酯部位和正丁醇部位配置成濃度為O. 5 mg/mL的溶液，得抗胃癌活性組分溶液。將上述實(shí)施例3所得的抗胃癌活性組分溶液經(jīng)O. 22 μ m無(wú)菌濾膜過(guò)濾，所得濾液用于胃癌細(xì)胞(BGC-823和SGC-7901)處理，采用MTT法測(cè)胃癌細(xì)胞的存活率。結(jié)果該抗癌活性組分對(duì)胃癌細(xì)胞的抑制率為BGC-823 :石油醚部位71. 6%，こ酸こ酯部位53. 4 %，正丁醇42. 2 % ；SGC-7901 :石油醚部位73. 7%，こ酸こ酯部位62. 5 %，正丁醇40. 9 %。結(jié)果表明這三個(gè)組分均具有抗胃癌活性。實(shí)施例2茅蒼術(shù)有效組分提取
I)以20g茅蒼術(shù)粉末為原料，加入 200 mL蒸餾水，加熱回流提取2 h，提取液離心抽濾、濃縮I. 5 g/mL，得茅蒼術(shù)水提液。2)將步驟I)所得的提取液加入等體積石油醚，萃取4次，合并石油醚部。將步所得的水部位按照上述石油醚萃取的相同方法依次采用こ酸こ酷、正丁醇萃取，即得こ酸こ酷部位、正丁醇部位。3)將石油醚部位、こ酸こ酯部位和正丁醇部位配置成濃度為I. O mg/mL的溶液，得抗胃癌活性組分溶液。將上述實(shí)施例2所得的抗胃癌活性組分溶液經(jīng)O. 22 μ m無(wú)菌濾膜過(guò)濾，所得濾液用于胃癌細(xì)胞(BGC-823和SGC-7901)處理，采用MTT法測(cè)胃癌細(xì)胞的存活率。結(jié)果該抗癌活性組分對(duì)胃癌細(xì)胞的抑制率為BGC-823 :石油醚部位80. 3%，こ酸こ酯部位65. 6 %，正丁醇51. 3 % ；SGC-7901 :石油醚部位84. 7%，こ酸こ酯部位74. 5 %，正丁醇52. 9 %。結(jié)果表明這三個(gè)組分均具有抗胃癌活性。實(shí)施例3茅蒼術(shù)有效組分提取
I)以20g茅蒼術(shù)粉末為原料，加入240 mL蒸餾水，加熱回流提取3 h，提取液離心抽濾、濃縮2 g/mL，得茅蒼術(shù)水提液。2)將步驟I)所得的提取液加入等體積石油醚，萃取5次，合并石油醚部。將步所得的水部位按照上述石油醚萃取的相同方法依次采用こ酸こ酷、正丁醇萃取，即得こ酸こ酷部位、正丁醇部位。3)將石油醚部位、こ酸こ酯部位和正丁醇部位配置成濃度為2. O mg/mL的溶液，得抗胃癌活性組分溶液。將上述實(shí)施例3所得的抗胃癌活性組分溶液經(jīng)O. 22 μ m無(wú)菌濾膜過(guò)濾，所得濾液用于胃癌細(xì)胞(BGC-823和SGC-7901)處理，采用MTT法測(cè)胃癌細(xì)胞的存活率。結(jié)果該抗癌活性組分對(duì)胃癌細(xì)胞的抑制率為BGC-823 :石油醚部位81. 5%，こ酸こ酯部位63. 5 %，正丁醇50. I % ；SGC-7901 :石油醚部位82. 6%，こ酸こ酯部位73. 6 %，正丁醇53. 8 %。結(jié)果表明這三個(gè)組分均具有抗胃癌活性。實(shí)施例4滴丸的制備
分別稱取300 g聚こニ醇4000，在水浴上熔化，再分別加入茅蒼術(shù)有效組分原料(石油醚部位)，こ酸こ酯部位，正丁醇部位)350 g，攪拌均勻，傾入保溫管中，調(diào)節(jié)恒溫裝置，使藥液在80— 90で下滴入冷卻過(guò)的液體石蠟中(溫度±4°C )，滴完后，將藥丸傾入濾紙上吸干石蠟油，再加入少量滑石粉，混勻，得茅蒼術(shù)有效組分滴丸1000粒。こ酸こ酯部位，正丁醇部位的滴丸制備方法同石油醚部位。實(shí)施例5微囊片的制備分別稱取硬脂酸30 g和40 mL明膠作為復(fù)方囊材，分別稱取茅蒼術(shù)有效組分(石油醚部位，乙酸乙酯部位，正丁醇部位)100 g作為囊心物，以壓縮空氣空氣通過(guò)噴霧凍結(jié)法成囊，囊徑為8 —100 Um0然后將微囊與微晶纖維素混勻，加10%乙基纖維素醇溶液混合制成囊材，通過(guò)18目尼龍篩制成顆粒，于35°C以下烘干，在放置干燥器內(nèi)24小時(shí)，加1% — 2%硬脂酸鎂壓片，得茅蒼術(shù)有效組分微囊片，片重為0. 3g。乙酸乙酯部位，正丁醇部位的微囊片制備方法同石油醚部位。實(shí)施例6膠囊劑的制備
茅蒼術(shù)有效組分石油醚部位原料1000 g，與藥用淀粉500 g混合均勻，裝入0#膠囊，每粒0. 35g。乙酸乙酯部位，正丁醇部位的膠囊劑制備方法同石油醚部位。
實(shí)施例7片劑的制備
茅蒼術(shù)有效組分石油醚部位原料lOOOg，淀粉500g，混合均勻，用適量乙醇制粒，經(jīng)整粒機(jī)整粒，壓片，每片0.25 g。乙酸乙酯部位，正丁醇部位的片劑的制備方法同石油醚部位。實(shí)施例8顆粒劑的制備
茅蒼術(shù)有效組分石油醚部位原料1500g，淀粉lOOOg，糖粉400g，混合均勻，用適量乙醇制粒，干燥、整粒、分裝即得。乙酸乙酯部位，正丁醇部位的滴丸制備方法同石油醚部位。實(shí)驗(yàn)例茅蒼術(shù)有效組分的體外對(duì)胃癌細(xì)胞的抑制作用
細(xì)胞人胃癌細(xì)胞株BGC-823和SGC-7901，由江蘇大學(xué)生命科學(xué)院醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供。試藥及藥材DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清(FBS)(Gibco公司);四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)、胰蛋白酶、DMSO (Sigma公司)；茅蒼術(shù)藥材采于江蘇句容。儀器MK3 型酶標(biāo)儀(Thermo Labsystems 公司)；FACS Calibur 流式細(xì)胞儀(BD公司，美國(guó))；Nikon TS100型倒置顯微鏡(Nikon公司)；Ti-2000熒光倒置顯微鏡(Nikon公司)；超凈工作臺(tái)(蘇州凈化設(shè)備廠)；INC02/108型C02培養(yǎng)箱(德國(guó)MEMMERT公司)。方法 MTT法取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期胃癌BGC-823和SGC-7901細(xì)胞移入96孔培養(yǎng)板，細(xì)胞密度為lX105/mL，每孔加入200 ML。將培養(yǎng)板移入細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)24 h，吸棄孔內(nèi)原培養(yǎng)液，加入梯度濃度藥物，設(shè)空白對(duì)照，移入細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)24 h和48 h，每組藥物設(shè)5個(gè)平行復(fù)孔。分別培養(yǎng)24 h后，每孔加入5 mg mL—1 MTT溶液20 ML，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)上清液，每孔加入DMSO 150 ML，使結(jié)晶充分溶解，用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度(OD)值，檢測(cè)波長(zhǎng)為490 nm，計(jì)算細(xì)胞增殖抑制率抑制率(％)= (I 一 OD藥物/OD空白對(duì)照)X 100%。表I MTT法測(cè)定兩種胃癌細(xì)胞的抑制率(%)
權(quán)利要求
1.茅蒼術(shù)中抗胃癌活性組分的提取方法，其特征在于按照下述步驟進(jìn)行 (O取茅蒼術(shù)粉末，加入8 12倍質(zhì)量的蒸餾水，回流提取f 3小時(shí)，提取f 3次，合并濾液，減壓濃縮至f 2 g/mL生藥量的茅蒼術(shù)水提液； (2)將提取制得的茅蒼術(shù)水提液轉(zhuǎn)入分液漏斗中，加入O.5^1. 5倍體積的石油醚，輕輕振搖，靜置，待溶液完全分層后，放出下層水溶液，收集石油醚部分；共萃取3飛次，合并石油醚萃取液，在40°C下減壓濃縮回收石油醚，濃縮液干燥即為茅蒼術(shù)水提液的石油醚部位；石油醚萃取后的剰余水溶液按上述方法再依次用こ酸こ酷、正丁醇萃取3飛次；こ酸こ酯萃取液在40°C下減壓濃縮，正丁醇萃取液在60°C下減壓濃縮，得こ酸こ酯部位，正丁醇部位； (3)其中上述茅蒼術(shù)的石油醚部位、こ酸こ酯部位和正丁醇部位即為茅蒼術(shù)中提取抗胃癌活性組分。
2.茅蒼術(shù)抗胃癌有效組分的藥物制劑，其特征在于由質(zhì)量百分比的1%— 99%的權(quán)利要求I制備得到的茅蒼術(shù)抗胃癌有效組分和99% — 1%的賦形劑組成，其中所述的賦形劑為聚こニ醇、硬脂酸、明膠、石蠟、滑石粉、微晶纖維素、こ基纖維素、淀粉或糖粉。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的茅蒼術(shù)抗胃癌有效組分的藥物制劑，其特征在于由質(zhì)量百分比的30% — 80%的茅蒼術(shù)有效組分和70%-20%的藥用賦形劑組成。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的茅蒼術(shù)抗胃癌有效組分的藥物制劑，其特征在于由質(zhì)量百分比的50% — 70%的茅蒼術(shù)有效組分和50% — 30%的賦形劑組成。
全文摘要
本發(fā)明茅蒼術(shù)抗胃癌有效組分的制備方法及其藥物制劑，屬于屬于中藥制劑領(lǐng)域。茅蒼術(shù)提取物的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位提取物具有明顯的體外抗胃癌作用。本發(fā)明涉及了茅蒼術(shù)抗胃癌有效組分的提取方法，并用體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)三種組分對(duì)胃癌細(xì)胞具有較好的抑制作用，同時(shí)也公開(kāi)了以茅蒼術(shù)抗胃癌有效組分為主要原料制備成片劑、膠囊劑、滴丸等藥物制劑。
文檔編號(hào)A61P35/00GK102670686SQ201210047728
公開(kāi)日2012年9月19日 申請(qǐng)日期2012年2月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年2月29日
發(fā)明者吳燕, 楊兵, 歐陽(yáng)臻, 王慶慶, 趙明, 韓邦興 申請(qǐng)人:江蘇大學(xué)