專利名稱：治療噪音性聽力損傷的藥物組合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及噪音性聽力損傷的預(yù)防和治療，具體地說是一種用來預(yù)防和治療由于噪音或其他應(yīng)激原所導(dǎo)致的聽力損傷或耳鳴的藥物組合物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
噪音性聽力損失(Noise-induced hearing loss，NIHL)常常會(huì)在日常工作和生活?yuàn)蕵分挟a(chǎn)生，并嚴(yán)重危害著人們的健康。隨著便捷式音樂播放器及高清音質(zhì)耳機(jī)的日益普及，噪音性聽力損失的發(fā)病率在近幾年內(nèi)呈現(xiàn)出持續(xù)上升的趨勢(shì)(Fligor and Cox, 2004； Serra et al.，2005)。雖然通過對(duì)自由基代謝途徑的研究，人們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了一些具有潛力的治療方法，用于降低NIHL的發(fā)病率，但是至今在臨床上還沒有一種能有效治療聽力損傷的藥物。這是由于NIHL的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，其中涉及到眾多細(xì)胞和相關(guān)的分子信號(hào)傳導(dǎo)通路，在很大程度上阻礙了研治NIHL方法及藥物的進(jìn)展。NIHL及其發(fā)病機(jī)制將受試者暴露于一定強(qiáng)度的噪音中，通過聽覺性腦干反應(yīng) (ABR)測(cè)試通?？梢詸z測(cè)到與聽力損失相關(guān)的兩個(gè)階段內(nèi)的聽覺狀況。在最初M小時(shí)內(nèi)， 暫時(shí)性聽覺閾值會(huì)顯著上升(TTS)。相比而言，在隨后的兩至三周內(nèi)，受試者聽覺雖然有所改善，但仍會(huì)有永久性聽覺閾值上升(PTS)的問題(e.g.，Clark, 1991 ；Quaranta et al.， 1998 ；Nordmann et al.，2000)。然而，噪音性聽力損傷的動(dòng)態(tài)變化和隨后的恢復(fù)過程與噪音的強(qiáng)度和持續(xù)時(shí)間等因素密切相關(guān)(Wang et al. ,2002 ；Harding and Bohne 2007)。 Wang等報(bào)道了 CBA/CaJ小鼠中的三種截然不同的NIHL模式(Wang et al.，2002)。以小鼠作為研究對(duì)象，給予中心頻率為8-16kHz強(qiáng)度為94dB聲壓級(jí)(SPL)的倍頻程噪聲(OBN)持續(xù)暴露2小時(shí)后，會(huì)立即出現(xiàn)明顯的TTS，而聽覺在兩周后幾乎完全恢復(fù)(無顯著的PTS)。 當(dāng)受試鼠暴露于強(qiáng)度為100至112dB SPL的倍頻程噪聲時(shí)，這種強(qiáng)度的噪聲暴露會(huì)導(dǎo)致TTS 和PTS都呈現(xiàn)出單調(diào)遞增的趨勢(shì)，但是聽覺功能在一定程度上仍可以恢復(fù)，即PTS低于TTS。 當(dāng)倍頻程噪聲強(qiáng)度高于116dB時(shí)，可能由于毛細(xì)胞網(wǎng)狀層發(fā)生區(qū)域性破裂等原因，致使PTS 很難恢復(fù)。這一能導(dǎo)致網(wǎng)狀層和淋巴管腔發(fā)生破裂的噪音強(qiáng)度被稱為“臨界水平點(diǎn)”或“拐點(diǎn)”(Bohne，1976，Wang et al. ,2002 ；Harding and Bohne,2007 ；Ohlemiller 2008)。大多數(shù)模式動(dòng)物的“臨界水平點(diǎn)”通常高于125至130dB的SPL，而對(duì)于小鼠來說，這一值可能會(huì)有所降低，或是當(dāng)模式動(dòng)物暴露于脈沖噪音下，這一值同樣會(huì)下降。在另一些動(dòng)物模型中，類似的現(xiàn)象也會(huì)發(fā)生(e. g.，Slepecky, 1986 ；Saunders et al.，1991 ；Lawner et al.， 1997 ；Ohlemiller et al. ,2000 ；Ohlemiller 2008a)。組織學(xué)上，當(dāng)受試動(dòng)物暴露于“臨界水平點(diǎn)”以上的噪音時(shí)，最明顯的病理變化是網(wǎng)狀層發(fā)生破裂，Corti器官/組織與基膜分離，內(nèi)毛和外毛細(xì)胞發(fā)生退化(IHCs和OHCs)。當(dāng)噪音強(qiáng)度低于“臨界水平點(diǎn)”時(shí)，耳蝸所受到的傷害主要表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面=Corti器官/組織的受損，螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元(SGNs) 末端腫脹，血管紋浮腫以及螺旋韌帶的損傷。NIHL與自由基代謝途徑在某些情況下，機(jī)械損傷和血流量減少會(huì)引起NIHL的產(chǎn)生(Spoendlin, 1971 ；Bohne, 1976 ；Ward et al. , 1981 ；Quirk et al. , 1991 ；Mulroy etal.，1998)。而導(dǎo)致NIHL發(fā)病的一個(gè)主要機(jī)制是由于噪音加快了耳蝸內(nèi)細(xì)胞的新陳代謝活動(dòng)，從而促進(jìn)了線粒體內(nèi)自由基的形成，過多的自由基最終會(huì)對(duì)耳蝸造成損傷(Lim and Melnick,1971 ；Lynch and Kil,2005 ；Henderson etal. ,2006 ；Campbell et al. ,2007 ； Darrat et al. ,2007 ；Kopke et al,2007 ；Le Prell et al.，2007b)。以下的研究足以表明該代謝/途徑與NIHL的形成密切相關(guān)⑴噪音會(huì)增加血管紋、OHCs、Corti器官/組織的支持細(xì)胞和螺旋神經(jīng)節(jié)中的自由基總量，并且在噪音暴露實(shí)驗(yàn)后的兩周內(nèi)，這些由自由基所造成的傷害會(huì)不斷的加重(Yamashita et al. ,2004) ； (2)內(nèi)源性抗氧化劑的減少以及過氧化物歧化酶活性的降低會(huì)增加機(jī)體對(duì)NIHL的易感性(Ohlemiller et al. , 1999 ；2000 ； McFadden et al.，2001) ； (3)抗氧化劑的增加能減少 NIHL 的發(fā)生(Yamasoba et al.，1998 ； Ohinata et al. ,2003 ；Duan et al. ,2004 ；Lynch et al. ,2004 ；Kramer et al. ,2006)。因此，在該領(lǐng)域中已有眾多研究集中在使用抗氧化藥物來預(yù)防和治療NIHL (Seidman et al., 1993 ；Hight et al. ；2003 ；McFadden et al.,2005 ；Yamashita et al. ,2005；Bielefeld et al. ,2007 ；Campbell et al. ,2007 ；Kopke et al. ,2007) 由于這些干預(yù)措施多數(shù)使用單一的化學(xué)藥物對(duì)NIHL進(jìn)行預(yù)防和治療，其療效很不理想，因此，有些研究針對(duì)自由基途徑中多個(gè)靶點(diǎn)或?qū)⒃撏緩脚c其他可能具有協(xié)同效應(yīng)的通路結(jié)合起來考慮，設(shè)計(jì)藥物組合物，來提高其治療效果(Yamasoba et al.，1999 ；Le Prell et al. ,2007a ；2007b) 這些研究表明，在NIHL形成中自由基代謝途徑發(fā)揮了重要作用，但同時(shí)，另一些研究者指出，其他信號(hào)通路的改變也可能導(dǎo)致NIHL的發(fā)生。 鈣離子信號(hào)通路和糖皮質(zhì)激素/應(yīng)激激素激信號(hào)通路在NIHL的發(fā)病中還涉及一些其他機(jī)制，如在NIHL初期興奮性神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸的過量釋放以及在OTHL末期細(xì)胞死亡途徑的發(fā)生(Puel et al. ,2002 ；Le Prell et al. ,2003 ；Guitton et al. ,2004 ；Zine and Van De Water 2004)。最近，有研究者發(fā)現(xiàn)了與NIHL形成相關(guān)的兩條新通路，即鈣離子信號(hào)通路和糖皮質(zhì)激素(GC)信號(hào)通路。鈣穩(wěn)態(tài)紊亂很有可能會(huì)引起創(chuàng)傷性神經(jīng)元損傷 (Nikonenko et al. ,2005 ；Werling et al. ,2007 ；Park et al. ,2008) 要想維持耳蝸內(nèi)的鈣穩(wěn)態(tài)，則主要通過對(duì)幾種鈣離子通道進(jìn)行調(diào)控，尤其是電壓門控鈣離子通道(VGCCs) (Rodrigues-Contreraz and Yamoah,2001 ；Adamson et al.，2002 ；Fuchs 2002 ；Schnee and Ricci，2003)。這類鈣離子通道具有重要的生理作用，它能控制鈣離子進(jìn)入神經(jīng)細(xì)胞及各種鈣離子依賴性的生理活動(dòng)，包括神經(jīng)遞質(zhì)的釋放、基因的表達(dá)以及維持突觸可塑性和神經(jīng)元的興奮性(Mattson 1990 ；Zipfel et al.，2000)。根據(jù)通道的藥理學(xué)特點(diǎn)及電生理性質(zhì)，可將其劃分為兩類高電壓門控性鈣通道和低電壓門控性鈣通道(Igelmimd et al.，1996 ；Lacinova et al.，2000 ；Perez-Reyes,2003 ；Yunker and McEnery，2003)。其中，根據(jù)所形成通道孔道的三種α亞基(1G、1H和II)基因序列同源性的差異，低電壓門控性鈣通道或稱為T型鈣通道(CaU)可進(jìn)一步被分為三種亞型，即Cav3. 1、Cav3. 2和 Cav3. 3 (Perez-Reyes, 2003 ；Yunker and McEnery，2003)。亞基 IG和 II 在 Corti 器官 /組織的支持細(xì)胞和毛細(xì)胞內(nèi)都有表達(dá)，同時(shí)，有研究表明在小鼠耳蝸的螺旋神經(jīng)節(jié)神經(jīng)元中亞基IH的表達(dá)量較高而亞基IG和II的表達(dá)量卻相對(duì)較低(Shen et al.，2007)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在小鼠暴露于噪音前后分別給予其抗驚厥藥，用于阻斷T型鈣通道可以預(yù)防NIHL的發(fā)生。這種對(duì)T型鈣通道的抑制作用也能對(duì)中風(fēng)后的神經(jīng)元起到一定的保護(hù)效果(Nikonenko et al.，2005)。因此，通過藥物來調(diào)控T型鈣通道的狀態(tài)就有可能防止因損傷引起的鈣穩(wěn)態(tài)的改變，從而預(yù)防隨后NIHL的發(fā)生。另一重要的信號(hào)通路，即糖皮質(zhì)激素信號(hào)通路與NIHL的發(fā)生也有很大關(guān)聯(lián)。在臨床上，主要運(yùn)用甲潑尼龍等人工合成的糖皮質(zhì)激素藥物來治療的多種神經(jīng)創(chuàng)傷性疾病，如脊髓損傷(Ahn and Fehlings, 2008 ；Xu et al.，2009)。同樣，該類激素也被用于治療多種耳蝸疾患導(dǎo)致的聽力損害，如自身免疫性內(nèi)耳病，耳鳴和美尼爾氏病(McCabe，1979，Dodson and Sismanis,2004 ；Dodson et al. ,2004 ；MacArthur et al.，2008)。雖然目前在臨床上還沒有使用糖皮質(zhì)激素治療噪音損傷的報(bào)道，但是已有眾多的證據(jù)表明，糖皮質(zhì)激素信號(hào)通道的改變?cè)贜IHL形成中發(fā)揮著重要的作用。首先，研究者發(fā)現(xiàn)通過對(duì)模式動(dòng)物進(jìn)行應(yīng)激性預(yù)處理(如應(yīng)激束縛、熱暴露或低強(qiáng)度的聲音刺激)，可以達(dá)到預(yù)防NIHL的效果(Paz et al.，2004 ；Wang and Liberman, 2002 ；Yoshida et al.，1999)。其次，由于噪音暴露本身是一種應(yīng)激性事件，因此，用阻滯劑預(yù)先阻斷糖皮質(zhì)激素信號(hào)通路會(huì)增加動(dòng)物對(duì)NIHL的易感性(Tahera et al.，2006a)。再者，糖皮質(zhì)激素藥物，如地塞米松和甲潑尼龍，能保護(hù)機(jī)體免于 NIHL (Canlon et al. , 2007 ；Henry, 1992 ；Lamm andArnold, 1998 ；Sendowski et al., 2006 ；Tabuchi et al. ,2006 ；Tahera et al. ,2006b ；Tahera et al. , 2006c ；Takahashi et al.，1996 ；Takemura et al.，2004)。此外，雖然糖皮質(zhì)激素與其受體(GR)和鹽皮質(zhì)激素受體都能相互結(jié)合，但鹽皮質(zhì)激素受體的拮抗劑對(duì)NIHL沒有作用(Tahera et al.，2006a)。 然而，一些報(bào)道表明GR信號(hào)通路在NIHL的發(fā)病中具有重要作用(Canlon et al.，2007 ； Tahera et al.，2006b ；Tahera et al.，2006c)。另一些研究結(jié)果顯示，在耳蝸內(nèi)存在GR的 mRNA和其翻譯后的蛋白，而前者在螺旋韌帶、螺旋緣及SGNs的細(xì)胞中同樣能被檢測(cè)到(ten Cate et al.，1993)。ten Cate等進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，Corti組織具有GR免疫反應(yīng)性(ten Cate et al. , 1993 ；Zuo et al.，1995，Shimazaki et al. ,2002) Erichsen 等報(bào)道了可以在兩周大小鼠的耳蝸中表達(dá)人源性GR(Erichsen et al.，1996)，并且其表達(dá)量隨著聲音的刺激而相應(yīng)增加(Tahera et al.，2006b)。與基于自由基代謝途徑理論的治療方法類似，使用單一的T型鈣通道阻滯劑，即糖皮質(zhì)激素類藥物或抗驚厥藥來預(yù)防OTHL的效果仍不甚理想(Canton et al.，2007 ；Shen et al. ,2007) 總之，現(xiàn)行治療NIHL方法主要是應(yīng)用以上所述的三類作用機(jī)理不同的化學(xué)藥物， 但是由于人們常常使用單一藥物來治療NIHL，使其只能單獨(dú)作用于某一條與NIHL相關(guān)的分子信號(hào)通路，對(duì)NIHL的療效相當(dāng)有限。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，提供一種治療噪音性聽力損傷的藥物組合物及其應(yīng)用。本發(fā)明的目的之一通過以下的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)治療噪音性聽力損傷的藥物組合物，其特征在于它含有治療有效劑量的鈣離子通道阻滯劑；或含有治療有效劑量的自由基清除劑；或含有治療有效劑量的糖皮質(zhì)激素；或含有治療有效劑量的鈣離子通道阻滯劑和自由基清除劑；或含有治療有效劑量的鈣離子通道阻滯劑和糖皮質(zhì)激素；或含有治療有效劑量的鈣離子通道阻滯劑、自由基清除劑和糖皮質(zhì)激素。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述鈣離子通道阻滯劑為已獲FDA批準(zhǔn)的能夠阻斷L 型鈣離子通道和/或T型鈣離子通道的抗高血壓或抗癲癇藥物。所述鈣離子通道阻滯劑為惡唑烷二酮的衍生物或丁二酰亞胺的衍生物。所述鈣離子通道阻滯劑為三甲雙酮、地爾硫卓或乙琥胺。所述藥物組合物中的自由基清除劑為一種或一種以上，所述自由基清除劑是已獲 FDA批準(zhǔn)的抗氧化劑，其用于清除過多的自由基、阻斷自由基信號(hào)傳遞。所述自由基清除劑為依布硒林、親水性的維生素C或疏水性的維生素E。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述藥物組合物中的糖皮質(zhì)激素為一種或一種以上， 所述糖皮質(zhì)激素是已獲FDA批準(zhǔn)的人工合成的皮質(zhì)激素類藥物，其用于激活糖皮質(zhì)應(yīng)激激素信號(hào)傳遞，優(yōu)選地，所述糖皮質(zhì)激素為甲潑尼龍。作為本發(fā)明的進(jìn)一步改進(jìn)，所述治療有效劑量范圍為1 1000mg/kg ·日，當(dāng)所述藥物組合物中同時(shí)含有鈣離子通道阻滯劑和自由基清除劑時(shí)，鈣離子通道阻滯劑與自由基清除劑的質(zhì)量比為1 5到1 10;當(dāng)所述藥物組合物中同時(shí)含有鈣離子通道阻滯劑和糖皮質(zhì)激素時(shí)，鈣離子通道阻滯劑與糖皮質(zhì)激素的質(zhì)量比為1 5到1 10。本發(fā)明的目的之二是提供上述藥物組合物在治療噪音性聽力損傷方面的應(yīng)用。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，優(yōu)點(diǎn)在于本發(fā)明使用三類已獲FDA批準(zhǔn)的藥物，即鈣離子通道阻滯劑、用于上調(diào)應(yīng)激激素信號(hào)通路的糖皮質(zhì)激素(合成類固醇藥物)以及與自由基代謝途徑相關(guān)的自由基清除劑(抗氧化劑)，通過將這三類不同的化學(xué)藥物以協(xié)同作用的方式聯(lián)合使用，可提高其治療NIHL的效果并且降低藥物的毒副作用。本發(fā)明的創(chuàng)新之處主要包括以下兩個(gè)方面(1)本發(fā)明將焦點(diǎn)放在11000余種已獲FDA批準(zhǔn)的藥物，這些藥物的藥理活性高、副作用小，并且能作用于多條信號(hào)通路；(2)本發(fā)明中所使用的聯(lián)合用藥策略不僅是針對(duì)已經(jīng)研究成熟的信號(hào)傳導(dǎo)通路，而且更加注重尋找和利用新的信號(hào)傳導(dǎo)通路。


圖1為實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1中的第一實(shí)驗(yàn)組給藥(三甲雙酮)前后的ABR閾移與空白對(duì)照組的對(duì)比圖。圖2為實(shí)驗(yàn)實(shí)施例2中的第二實(shí)驗(yàn)組給藥(地爾硫卓)前后的ABR閾移與空白對(duì)照組的對(duì)比圖。圖3為實(shí)驗(yàn)實(shí)施例3中的第三實(shí)驗(yàn)組給藥(甲潑尼龍)前后的ABR閾移與空白對(duì)照組的對(duì)比圖。圖4為實(shí)驗(yàn)實(shí)施例4中的第四實(shí)驗(yàn)組給藥(依布硒林)前后的ABR閾移與空白對(duì)照組的對(duì)比圖。圖5為實(shí)驗(yàn)實(shí)施例5中的第五實(shí)驗(yàn)組給藥(三甲雙酮+甲潑尼龍)前后的ABR閾移與空白對(duì)照組的對(duì)比圖。圖6為實(shí)驗(yàn)實(shí)施例6中的第六實(shí)驗(yàn)組給藥(地爾硫卓+依布硒林)前后的ABR閾移與空白對(duì)照組的對(duì)比圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。噪聲暴露實(shí)驗(yàn)設(shè)備
與先前所報(bào)道的方法相似(Shen et al.，2007)，噪聲暴露實(shí)驗(yàn)是在一個(gè)含有泡沫夾層的雙層壁的隔音室內(nèi)進(jìn)行。噪聲暴露裝置為一個(gè)21x 21x 11厘米大小的鐵絲籠，并通過基架將其安裝在一個(gè)B&K 3921轉(zhuǎn)盤上。該鐵絲籠位于一個(gè)尺寸為42X42的凸輪金屬框中，并以80秒轉(zhuǎn)一周的速度勻速旋轉(zhuǎn)。此外，在金屬框的四邊各安裝有一個(gè)摩托羅拉 KSN1020A型壓電陶瓷揚(yáng)聲器。這些兩兩相對(duì)的揚(yáng)聲器被定位在與鐵絲籠平行的位置，并朝向不同的方位，同時(shí)，它們?cè)诟髯缘腃rown D150A功率放大器的推動(dòng)下進(jìn)行工作。利用與揚(yáng)聲器相連的兩臺(tái)General Radio 1310型發(fā)生器產(chǎn)生噪音，并通過Krohn-Hite 3550型過濾器對(duì)其進(jìn)行處理，從而獲得頻率為4. 0-45. OkHz的噪音。最后，再設(shè)置好B&K 2231噪聲計(jì)的寬頻帶(0.2Hz-70kHz)，并將該噪聲計(jì)與B&K 4135型四分之一英寸的麥克風(fēng)相連，就能測(cè)量鐵絲籠中心位置的總噪音強(qiáng)度。小鼠的聽性腦干反應(yīng)(ABR)測(cè)試方法小鼠耳蝸通常能感受到2-100千赫頻率范圍內(nèi)的聲音，而對(duì)于5_40kHz頻率區(qū)域內(nèi)的聲音變化最為敏感。測(cè)試中主要使用“近場(chǎng)”聲波刺激，并對(duì)其進(jìn)行等級(jí)劃分。在此過程中，將揚(yáng)聲器靠近鐵絲籠中小鼠的耳朵(距離約為7厘米)使鼠耳周圍形成均質(zhì)聲場(chǎng)。 為了確保向不同動(dòng)物個(gè)體所提供的聲音刺激強(qiáng)度恒定不變，需要在鼠耳附近安置一個(gè)預(yù)先校準(zhǔn)過的B&K 4135型四分之一英寸的麥克風(fēng)。測(cè)試前，先用巴比妥(60mg/kg，i. p.)和硫酸阿托品(0.5mg/kg，i.p.)對(duì)全部小鼠進(jìn)行麻醉并且減輕其呼吸困難的現(xiàn)象。隨后，對(duì)小鼠的鼓膜進(jìn)行耳鏡檢查，以確保其完好無損。同時(shí)，使用恒溫控制加熱墊和直腸探頭將小鼠體溫維持在恒定的范圍內(nèi)(37士 1°C ) (Yellow Springs Instruments Model 73A)。此外， 需要在小鼠右耳后面、頭頂和后背的皮層中分別插入鉬金電極針。然后，將這些電極連接到 Grass P15差分放大器(100-10，000Hz，xlOO)上，再將其與定制的放大器相連，使信號(hào)實(shí)現(xiàn) 1000倍增益。最后，利用相關(guān)軟件使放大后的信號(hào)數(shù)字化。另外，通過對(duì)定制的電子開關(guān)的設(shè)定可以將Wavetek型號(hào)148振蕩器生成的正弦波刺激進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成周期為5ms的正弦波，其中包括1毫秒的上升/下降時(shí)間。再利用Crown D150A功率放大器使該正弦波信號(hào)放大，并將放大后的信號(hào)輸出至KSW020A型壓電陶瓷揚(yáng)聲器上。在所設(shè)定聲音的各個(gè)頻率和強(qiáng)度下，每20秒內(nèi)，利用以上裝置就會(huì)可產(chǎn)生1000次猝發(fā)音刺激。在所選定的頻率下， 將最小聲音強(qiáng)度間隔設(shè)定為5dB，就能測(cè)定對(duì)刺激產(chǎn)生響應(yīng)的最小聲壓強(qiáng)度(短潛伏期負(fù)波)。實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組以8周大的C57BL/6J小鼠(購自The Jackson Laboratory)作為受試對(duì)象，取耳廓反射正常的健康C57BL/6J小鼠52只，隨機(jī)分為七組，其中第一實(shí)驗(yàn)組8 只，第二實(shí)驗(yàn)組6只，第三實(shí)驗(yàn)組8只，第四實(shí)驗(yàn)組6只，第五實(shí)驗(yàn)組8只，第六實(shí)驗(yàn)組8只和空白對(duì)照組8只。實(shí)驗(yàn)藥品三甲雙酮(TMO)、地爾硫卓(diltiazem)、甲潑尼龍 (methlprenisolone)、依布硒林(ebselen)，均購自 Sigma-Aldrich 公司。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1 三甲雙酮(TMO)對(duì)噪音性聽力損傷的預(yù)防性作用以第一實(shí)驗(yàn)組中的8只8周大的自交系C57BL/6J小鼠為受試對(duì)象，在噪音暴露實(shí)驗(yàn)前先使用聽覺腦干反應(yīng)(ABR)方法測(cè)定小鼠的聽覺閾值。在噪音暴露實(shí)驗(yàn)前兩小時(shí)給予三甲雙酮(ΤΜ0)，藥物劑量為200mg/kg·日。然后進(jìn)行噪聲暴露實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)中所使用的噪音
7SPL的頻率范圍為0. 2 70赫茲，強(qiáng)度為110分貝，持續(xù)時(shí)間為30分鐘。在噪音暴露實(shí)驗(yàn)兩周后，利用聽覺腦干反應(yīng)(ABR)方法分析檢測(cè)小鼠耳朵的聽覺閾值，評(píng)定其聽力狀況，分析結(jié)果如圖1所示。對(duì)比圖1中給藥組的ABR閾移(ABR threshold shifts)和空白對(duì)照組的ABR閾移可見，三甲雙酮能夠減輕聽力損傷。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例2 地爾硫卓(diltiazem)對(duì)噪音性聽力損傷的預(yù)防性作用以第二實(shí)驗(yàn)組中的6只8周大的自交系C57BL/6J小鼠為受試對(duì)象，在噪音暴露實(shí)驗(yàn)前先使用聽覺腦干反應(yīng)(ABR)方法測(cè)定小鼠的聽覺閾值。在噪音暴露實(shí)驗(yàn)前兩小時(shí)給予地爾硫卓(diltiazem)，藥物劑量為150mg/kg ·日。然后進(jìn)行噪聲暴露實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)中所使用的噪音SPL的頻率范圍為0. 2 70赫茲，強(qiáng)度為110分貝，持續(xù)時(shí)間為30分鐘。在噪音暴露實(shí)驗(yàn)兩周后，利用聽覺腦干反應(yīng)(ABR)方法分析檢測(cè)小鼠耳朵的聽覺閾值，評(píng)定其聽力狀況，分析結(jié)果如圖2所示。對(duì)比圖2中給藥組的ABR閾移(ABR threshold shifts)和空白對(duì)照組的ABR閾移可見，地爾硫卓能夠減輕聽力損傷。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例3 甲潑尼龍(methlprenisolone)對(duì)噪音性聽力損傷的預(yù)防性作用以第三實(shí)驗(yàn)組中的8只8周大的自交系C57BL/6J小鼠為受試對(duì)象，在噪音暴露實(shí)驗(yàn)前先使用聽覺腦干反應(yīng)(ABR)方法測(cè)定小鼠的聽覺閾值。在噪音暴露實(shí)驗(yàn)前兩小時(shí)給予甲潑尼龍(methlprenisolone)，藥物劑量為10mg/kg ·日。然后進(jìn)行噪聲暴露實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)中所使用的噪音SPL的頻率范圍為0. 2 70赫茲，強(qiáng)度為110分貝，持續(xù)時(shí)間為30分鐘。在噪音暴露實(shí)驗(yàn)兩周后，利用聽覺腦干反應(yīng)(ABR)方法分析檢測(cè)小鼠耳朵的聽覺閾值，評(píng)定其聽力狀況，分析結(jié)果如圖3所示。對(duì)比圖3中給藥組的ABR閾移(ABR threshold shifts) 和空白對(duì)照組的ABR閾移可見，甲潑尼龍能夠減輕聽力損傷。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例4 依布硒林(ebselen)對(duì)噪音性聽力損傷的治療性作用以第四實(shí)驗(yàn)組中的6只8周大的自交系C57BL/6J小鼠為受試對(duì)象，在噪音暴露實(shí)驗(yàn)前先使用聽覺腦干反應(yīng)(ABR)方法測(cè)定小鼠的聽覺閾值。然后進(jìn)行噪聲暴露實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)中所使用的噪音SPL的頻率范圍為0. 2 70赫茲，強(qiáng)度為110分貝，持續(xù)時(shí)間為30分鐘。 在噪音暴露實(shí)驗(yàn)后的12小時(shí)給予依布硒林(ebselen)，藥物劑量為400mg/kg ·日。在噪音暴露實(shí)驗(yàn)兩周后，利用聽覺腦干反應(yīng)(ABR)方法分析檢測(cè)小鼠耳朵的聽覺閾值，評(píng)定其聽力狀況，分析結(jié)果如圖4所示。對(duì)比圖4中給藥組的ABR閾移(ABR threshold shifts)和空白對(duì)照組的ABR閾移可見，依布硒林(ebselen)能夠在一定程度上治療減輕聽力損傷。實(shí)驗(yàn)實(shí)施例5 三甲雙酮(TMO)和甲潑尼龍(methlprenisolone)聯(lián)合用藥對(duì)噪音性聽力損傷的治療性作用以第五實(shí)驗(yàn)組中的8只以8周大的自交系C57BL/6J小鼠為受試對(duì)象，在噪音暴露實(shí)驗(yàn)前先使用聽覺腦干反應(yīng)(ABR)方法測(cè)定小鼠的聽覺閾值。然后進(jìn)行噪聲暴露實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)中所使用的噪音SPL的頻率范圍為0. 2 70赫茲，強(qiáng)度為110分貝，持續(xù)時(shí)間為30分鐘。 在噪音暴露實(shí)驗(yàn)后的M小時(shí)同時(shí)給予三甲雙酮(TMO)和甲潑尼龍(methlprenisolone)兩種藥物，其中三甲雙酮的藥物劑量為200mg/kg ·日，甲潑尼龍的藥物劑量為10mg/kg 日。在噪音暴露實(shí)驗(yàn)兩周后，，利用聽覺腦干反應(yīng)(ABR)方法分析檢測(cè)小鼠耳朵的聽覺閾值，評(píng)定其聽力狀況，分析結(jié)果如圖5所示。對(duì)比圖5中給藥組的ABR閾移(ABR threshold shifts) 和空白對(duì)照組的ABR閾移可見，三甲雙酮和甲潑尼龍兩種藥物聯(lián)合用藥能夠在一定程度上治療減輕聽力損傷。
實(shí)驗(yàn)實(shí)施例6 地爾硫卓(diltiazem)和依布硒林(ebselen)聯(lián)合用藥對(duì)噪音性聽力損傷的治療性作用以第六實(shí)驗(yàn)組中的8只以8周大的自交系C57BL/6J小鼠為受試對(duì)象，在噪音暴露實(shí)驗(yàn)前先使用聽覺腦干反應(yīng)(ABR)方法測(cè)定小鼠的聽覺閾值。然后進(jìn)行噪聲暴露實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)中所使用的噪音SPL的頻率范圍為0. 2 70赫茲，強(qiáng)度為110分貝，持續(xù)時(shí)間為30分鐘。 在噪音暴露實(shí)驗(yàn)后的M小時(shí)同時(shí)給予地爾硫卓(diltiazem)和依布硒林(ebselen)兩種藥物，其中地爾硫卓的藥物劑量為150mg/kg ·日，依布硒林的藥物劑量為400mg/kg 日。在噪音暴露實(shí)驗(yàn)兩周后，利用聽覺腦干反應(yīng)(ABR)方法分析檢測(cè)小鼠耳朵的聽覺閾值，評(píng)定其聽力狀況，分析結(jié)果如圖6所示。對(duì)比圖6中給藥組的ABR閾移(ABR threshold shifts) 和空白對(duì)照組的ABR閾移可見，地爾硫卓和依布硒林兩種藥物聯(lián)合用藥能夠在一定程度上治療減輕聽力損傷。在上述的實(shí)驗(yàn)實(shí)施例1 6中，所述空白對(duì)照組進(jìn)行噪聲暴露實(shí)驗(yàn)的方法及參數(shù)與各實(shí)驗(yàn)組相同，區(qū)別僅在于空白對(duì)照組中的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物不給任何藥物。在實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)三類不同的化學(xué)藥物對(duì)小鼠的聽覺具有良好的保護(hù)作用(圖 1 圖4所示)。我們還發(fā)現(xiàn)聯(lián)合使用兩種不同的化學(xué)藥物，可以在噪聲暴露之后減低噪音對(duì)聽力損傷。(圖5、圖6所示)。本發(fā)明中，由于乙琥胺的分子結(jié)構(gòu)與地爾硫卓相似，故不再提供乙琥胺的藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
權(quán)利要求
1.治療噪音性聽力損傷的藥物組合物，其特征在于它含有治療有效劑量的鈣離子通道阻滯劑；或含有治療有效劑量的自由基清除劑；或含有治療有效劑量的糖皮質(zhì)激素；或含有治療有效劑量的鈣離子通道阻滯劑和自由基清除劑；或含有治療有效劑量的鈣離子通道阻滯劑和糖皮質(zhì)激素；或含有治療有效劑量的鈣離子通道阻滯劑、自由基清除劑和糖皮質(zhì)激素。
2.如權(quán)利要求1所述的治療噪音性聽力損傷的藥物組合物，其特征在于所述鈣離子通道阻滯劑為能夠阻斷L型鈣離子通道和/或T型鈣離子通道的抗高血壓或抗癲癇藥物。
3.如權(quán)利要求2所述的治療噪音性聽力損傷的藥物組合物，其特征在于所述鈣離子通道阻滯劑為惡唑烷二酮的衍生物或丁二酰亞胺的衍生物。
4.如權(quán)利要求2所述的治療噪音性聽力損傷的藥物組合物，其特征在于所述鈣離子通道阻滯劑為三甲雙酮、地爾硫卓或乙琥胺。
5.如權(quán)利要求1所述的治療噪音性聽力損傷的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物中的自由基清除劑為一種或一種以上，所述自由基清除劑是抗氧化劑。
6.如權(quán)利要求5所述的治療噪音性聽力損傷的藥物組合物，其特征在于所述自由基清除劑為依布硒林、親水性的維生素C或疏水性的維生素E。
7.如權(quán)利要求1所述的治療噪音性聽力損傷的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物中的糖皮質(zhì)激素為一種或一種以上，所述糖皮質(zhì)激素為甲潑尼龍。
8.如權(quán)利要求1所述的治療噪音性聽力損傷的藥物組合物，其特征在于所述治療有效劑量范圍為1 1000mg/kg ·日。
9.如權(quán)利要求1所述的治療噪音性聽力損傷的藥物組合物，其特征在于當(dāng)所述藥物組合物中同時(shí)含有鈣離子通道阻滯劑和自由基清除劑時(shí)，鈣離子通道阻滯劑與自由基清除劑的質(zhì)量比為1 5到1 10;當(dāng)所述藥物組合物中同時(shí)含有鈣離子通道阻滯劑和糖皮質(zhì)激素時(shí)，鈣離子通道阻滯劑與糖皮質(zhì)激素的質(zhì)量比為1 5到1 10。
10.權(quán)利要求1 9任一項(xiàng)所述的藥物組合物在治療噪音性聽力損傷方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及治療噪音性聽力損傷的藥物組合物，其特征在于它含有治療有效劑量的鈣離子通道阻滯劑；或含有治療有效劑量的自由基清除劑；或含有治療有效劑量的糖皮質(zhì)激素；或含有治療有效劑量的鈣離子通道阻滯劑和自由基清除劑；或含有治療有效劑量的鈣離子通道阻滯劑和糖皮質(zhì)激素；或含有治療有效劑量的鈣離子通道阻滯劑、自由基清除劑和糖皮質(zhì)激素。本發(fā)明使用三類已獲FDA批準(zhǔn)的藥物，通過將它們以協(xié)同作用的方式聯(lián)合使用，可提高其治療NIHL的效果并降低藥物毒副作用。創(chuàng)新之處在于這些藥物藥理活性高、副作用小，并能作用于多條信號(hào)通路；所用的聯(lián)合用藥策略不僅是針對(duì)已經(jīng)研究成熟的信號(hào)傳導(dǎo)通路，而且注重尋找利用新信號(hào)傳導(dǎo)通路。
文檔編號(hào)A61K31/554GK102512682SQ201210009298
公開日2012年6月27日 申請(qǐng)日期2012年1月12日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月12日
發(fā)明者王玉豐 申請(qǐng)人:王玉豐