專利名稱：緩釋性藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及緩釋性藥物組合物和緩釋性藥物組合物的制造方法。本申請主張通過參照援引于此的日本申請?zhí)卦?010-232113號的優(yōu)先權(quán)。
背景技術(shù)：
現(xiàn)有技術(shù)下，高分子材料由于能夠長時間有效地保持組織內(nèi)的藥物濃度，因此被廣泛利用于緩釋性藥物組合物中。高分子材料具有能夠與藥物物理性或化學(xué)性地結(jié)合、隨著生物體內(nèi)的分解的進行而使藥物游離的特性。作為該高分子材料，可舉出纖維素衍生物、淀粉衍生物、糊精衍生物、多糖 類、蛋白質(zhì)、多肽類、丙烯酸衍生物或乙烯衍生物等。作為蛋白質(zhì)的膠原蛋白的藥物緩釋特性，已知通過調(diào)節(jié)膠原蛋白濃度可將藥物的緩釋期間控制為數(shù)天左右的短時間至數(shù)月的長時間。例如，在專利文獻I公開了下述情況，即，當降低膠原蛋白濃度時，包含藥物的凝膠化膠原蛋白的分解變快，藥物的緩釋也加快，從而藥效期間在短時間內(nèi)結(jié)束，相反地，當提高膠原蛋白濃度時，凝膠化膠原蛋白的分解變慢，藥物的緩釋也變慢，從而可顯示長時間的藥效。但是，當膠原蛋白濃度高時，制劑化困難，需要很高的技術(shù)。相反地，當膠原蛋白濃度低時，向組織內(nèi)的注入或者藥物的添加和混合等操作性變?nèi)菀?，但是，在注入組織內(nèi)后，藥物緩釋速度加快，藥效被限定于短時間，不會顯示長時間的緩釋，因此具有無法充分獲得藥效等問題。專利文獻2中公開了在以膠原蛋白為必須構(gòu)成要素的載體中混合具有促進創(chuàng)傷愈合活性的生理活性物質(zhì)而成的促進創(chuàng)傷愈合用的局部用緩釋制劑。專利文獻2中記載的載體由選自膠原蛋白、白蛋白等蛋白質(zhì)，殼多糖等糖質(zhì)以及合成高分子構(gòu)成的群中的成分構(gòu)成。專利文獻2公開了藥物的緩釋特性取決于粉末、薄膜等劑型，但是，由于成形為這些劑型需要時間，因此缺乏簡便性。另外，在專利文獻3中公開了含有膠原蛋白、作為多糖類的糖胺聚糖以及藥物的緩釋性制劑。在專利文獻3中公開了糖胺聚糖控制膠原蛋白的纖維形成，從而作為藥物的控釋因子發(fā)揮作用。專利文獻3的緩釋性制劑為固體制劑并成形為針狀、棒狀等劑型，因此，與專利文獻2記載的制劑同樣地缺乏簡便性。已知膠原蛋白溶液在體外(in vitro)加熱至體溫左右時會發(fā)生凝膠化，另外已知通過預(yù)先在膠原蛋白溶液中添加單糖類或二糖類等糖可抑制凝膠化(非專利文獻1、非專利文獻2)。在凝膠化被抑制的狀態(tài)下，認為無法充分地發(fā)揮基于膠原蛋白的藥物的緩釋特性，因此，在作為緩釋性藥物用的載體而使用膠原蛋白時，無法使用組合單糖類等糖從而抑制凝膠化的技術(shù)。在先技術(shù)文獻專利文獻專利文獻1:日本公報、特開昭56-122317號專利文獻2:日本公報、特開平05-043453號專利文獻3:日本公報、特開平10-167987號非專利文獻
非專利文獻I:Hayashi 等、Factors Affecting the Interaction of CollagenMolecules as Observed by in Vitro Fibril Formation、J.Biochem.、 (1972)72、749非專利文獻2:Kuznetsova 等、Sugars and Polyols Inhibit Fibrillogenesisof Type I Collagen by Disrupting Hydrogen-Bonded Water Bridge s between theHelices、Biochemistry> (1998)37、11888

發(fā)明內(nèi)容
(發(fā)明要解決的問題)本發(fā)明的課題在于提供操作性良好且具有緩釋性這樣的、含有藥物和膠原蛋白的藥物組合物。(用于解決問題的方案)已知通過在膠原蛋白溶液中添加糖可抑制膠原蛋白的凝膠化，但是，本發(fā)明人等意外地發(fā)現(xiàn)當將含有糖的膠原蛋白溶液注射至生物體內(nèi)時膠原蛋白發(fā)生凝膠化。根據(jù)該發(fā)現(xiàn)，著眼于通過含有藥物、膠原蛋白以及糖的組合物可控制藥物的釋放速度，從而可將該組合物用作緩釋性藥物組合物，從而完成本發(fā)明。即,本發(fā)明包含以下內(nèi)容。1.一種緩釋性藥物組合物，其含有藥物、膠原蛋白以及選自單糖類、二糖類、三糖類及四糖類中的I種以上的糖。 2.上述I所述的緩釋性藥物組合物，其中，在給藥至體內(nèi)之前的糖的濃度是能夠抑制膠原蛋白的凝膠化的濃度。3.上述I或2所述的緩釋性藥物組合物，其中，糖為選自二糖類和三糖類中的I種以上的糖。4.上述I 3中所述的緩釋性藥物組合物，其中，膠原蛋白的濃度為0.01wt% 30wt%，糖的濃度為0.0lM 3M。5.上述I 4中任一項所述的緩釋性藥物組合物,其中，膠原蛋白是分子量為IkDa 2000kDa的膠原蛋白。6.上述I 5中任一項所述的緩釋性藥物組合物，其中，膠原蛋白為去端肽膠原蛋白。7.上述I 6中任一項所述的緩釋性藥物組合物，其中，緩釋性藥物組合物具有在給藥至體內(nèi)之前呈液狀、在給藥至體內(nèi)后凝膠化的性質(zhì)。8.上述I 7中任一項所述的緩釋性藥物組合物，其中，緩釋性藥物組合物能夠控制藥物的釋放速度。9.上述I 8中任一項所述的緩釋性藥物組合物，其中，藥物為蛋白質(zhì)。10.上述I 9中任一項所述的緩釋性藥物組合物，其中，緩釋性藥物組合物為血管生成調(diào)節(jié)劑。11.上述I 10中任一項所述的緩釋性藥物組合物，其中，藥物為bFGF。12.上述I 11中任一項所述的緩釋性藥物組合物，其中，緩釋性藥物組合物為液劑的形態(tài)。13.上述I 12中任一項所述的緩釋性藥物組合物，其中，緩釋性藥物組合物通過選自由皮內(nèi)注射、皮下注射、肌肉注射、體腔內(nèi)注射、向臟器直接給藥以及向組織直接給藥構(gòu)成的群中的給藥途徑進行給藥。14.上述I 13中任一項所述的緩釋性藥物組合物，其中，緩釋性藥物組合物用于治療血管阻塞性疾病和/或缺血性疾病。15.一種制造緩釋性藥物組合物的方法，其包括將藥物、膠原蛋白以及選自單糖類、二糖類、三糖類及四糖類中的I種以上的糖混合。16.上述15所述的制造緩釋性藥物組合物的方法，其中，糖的濃度是能夠抑制膠原蛋白的凝膠化的濃度。17.一種緩釋性主劑，其含有膠原蛋白以及選自單糖類、二糖類、三糖類及四糖類中的I種以上的糖。18.上述17所述的緩釋性主劑，其中，緩釋性主劑為液狀。19.上述17或18所 述的緩釋性主劑，其中，緩釋性主劑用于制造緩釋性藥物組合物。20.一種從緩釋性藥物組合物釋放藥物的速度的控制方法，其特征在于，在緩釋性藥物組合物中，將選自單糖類、二糖類、三糖類以及四糖類中的I種以上的糖與膠原蛋白混
合 ο(發(fā)明效果)根據(jù)本發(fā)明的緩釋性藥物組合物，能夠在生物體內(nèi)以具有即效性的釋放和緩慢的緩釋的組合方式來控制作為活性組分的藥物的釋放。根據(jù)本發(fā)明的緩釋性藥物組合物，在給藥后初期，由于通過添加糖而抑制了膠原蛋白的凝膠化，因此，能夠釋放出具有即效性的藥物，并且，在給藥后隨著時間的經(jīng)過而膠原蛋白在生物體內(nèi)凝膠化，因此，藥物的釋放速度變慢從而能夠緩慢地進行緩釋。另外，通常在調(diào)制添加有膠原蛋白的藥物組合物時，需要管理溫度，以免膠原蛋白凝膠化，但是，在本發(fā)明的緩釋性藥物組合物中，由于在膠原蛋白中添加有糖，因此抑制了凝膠化，從而能夠容易地在室溫下進行調(diào)制操作。


圖1是表示通過添加糖而產(chǎn)生的膠原蛋白的凝膠化抑制作用的圖。在圖中，a表示僅為膠原蛋白時的結(jié)果，b表示混合了膠原蛋白和0.0lM蔗糖時的結(jié)果，c表示混合了膠原蛋白和0.25M蔗糖時的結(jié)果。(參考例I)圖2是表示在體外(in vitro)確認添加糖對于藥物釋放速度的影響的結(jié)果的圖。在圖中，黑圈表示存在蔗糖時的結(jié)果，白圈表示不存在蔗糖時的結(jié)果。(實施例1)圖3是表示在體內(nèi)(in vivo)確認混合各成分的順序?qū)τ谀z原蛋白凝膠化的影響的結(jié)果的照片。在圖中，a c表示實施例2所記載的各種制劑的結(jié)果，d表示作為對照的制劑的結(jié)果。P表示溶菌酶，S表示鹿糖，AC表示去端肽膠原蛋白。(實施例2)圖4是表示在體內(nèi)(in vivo)確認混合順序?qū)τ谒幬镝尫潘俣鹊挠绊懙慕Y(jié)果的圖。(實施例3)圖5是表示在體內(nèi)(in vivo)確認藥物種類對于膠原蛋白凝膠化的影響的結(jié)果的圖。在圖中，a表示藥物為轉(zhuǎn)鐵蛋白(Transferrin)時的結(jié)果，b表示藥物為磷酸化酶(Phosphorylase)b時的結(jié)果，c表示藥物為肌球蛋白重鏈(Myosin heavy chain)時的結(jié)果，d表示藥物為I型鐵蛋白(Ferritin type I)時的結(jié)果，e表示藥物為甲狀腺球蛋白(Thyrogloblin)時的結(jié)果。(實施例4)圖6是表示確認藥物為bFGF的緩釋性藥物組合物產(chǎn)生的、體內(nèi)(in vivo)血管生成促進作用的結(jié)果的照片。在圖中，a表示含有2mg/mL bFGF、0.25M鹿糖、3% [w/v]膠原蛋白的制劑的結(jié)果，b表示含有2mg/mL bFGF>3% [w/v]膠原蛋白且不含鹿糖的制劑的結(jié)果，c表示不含bFGF和蔗糖而僅含有3% [w/v]膠原蛋白的制劑的結(jié)果。(實施例5)圖7是表示確認藥物為bFGF的緩釋性藥物組合物對于下肢缺血模型小鼠的藥效的結(jié)果的圖。(實施例6)圖8是表示對于藥物為bFGF的緩釋性藥物組合物進行第1-1I期臨床試驗的結(jié)果的圖。(實施例7)圖9是表示在體外(in vitro)確認添加糖對于各種膠原蛋白凝膠化的影響的結(jié)果的圖。在圖中，a表示不含溶菌酶、蔗糖而僅為0.1% [w/v]膠原蛋白的制劑的結(jié)果，b表示不含溶菌酶而含有0.25M蔗糖和0.1% [w/v]膠原蛋白的制劑的結(jié)果，c表示含有IOmg/mL溶菌酶、0.25M蔗糖以及0.1% [w/v]膠原蛋白的制劑的結(jié)果。(參考例2)圖10是表示在體外(in vitro)確認添加各種糖對于膠原蛋白凝膠化的影響的結(jié)果的圖。在葡萄糖和果糖的圖表中，a表示不含糖的制劑的結(jié)果，b表示以0.05M的濃度含有糖的制劑的結(jié)果，c表示以0.125M的濃度含有糖的制劑的結(jié)果，d表示以0.25M的濃度含有糖的制劑的結(jié)果，e表示以0.5M的濃度含有糖的制劑的結(jié)果。在蔗糖和麥芽糖的圖表中，a表示不含糖的制劑的結(jié)果，b表示以0.05M的濃度含有糖的制劑的結(jié)果，c表示以0.125M的濃度含有糖的制劑的結(jié)果，d表示以0.25M的濃度含有糖的制劑的結(jié)果。在棉子糖的圖表中，a表示不含糖的制劑的結(jié)果，b表示以0.05M的濃度含有糖的制劑的結(jié)果。在水蘇糖的圖表中，a表不不含糖的制劑的結(jié)果，b表不以0.05M的濃度含有糖的制劑的結(jié)果,c表不以0.125M的濃度含有 糖的制劑的結(jié)果。在表示0.05M的糖的比較的圖表中，a表示不含糖的制劑的結(jié)果，b表不含有葡萄糖的制劑的結(jié)果，c表不含有麥芽糖的制劑的結(jié)果，d表不含有棉子糖的制劑的結(jié)果，e表示含有水蘇糖的制劑的結(jié)果。(參考例3)圖11是表示在體外(in vitro)確認添加水蘇糖(四糖)對于膠原蛋白凝膠化的影響的結(jié)果的圖。在圖中，a表示不含水蘇糖的制劑的結(jié)果，b表示含有水蘇糖的制劑的結(jié)果。(參考例3)圖12是表示在體外(in vitro)確認添加麥芽四糖(四糖)或麥芽五糖(五糖)時對于膠原蛋白凝膠化的影響的結(jié)果的圖。在圖中，a表示不含糖的制劑的結(jié)果，b表示含有0.05M的糖的制劑的結(jié)果，c表示含有0.125M的糖的制劑的結(jié)果。(參考例4)圖13是表示在體外(in vitro)確認添加糖對于各種濃度的膠原蛋白凝膠化的影響的結(jié)果的圖。在圖中，a表示含有3% [w/v]膠原蛋白的制劑的結(jié)果，b表示含有0.4%[w/v]膠原蛋白的制劑的結(jié)果。(參考例5)圖14是表示在體外(in vitro)確認添加各種糖時對于膠原蛋白凝膠化的影響的結(jié)果的圖。(參考例6)圖15是表示在體內(nèi)(in vivo)確認添加糖對于各種濃度的膠原蛋白凝膠化的影響的結(jié)果的圖。在圖中，各照片左側(cè)所記載的數(shù)值表示制劑中的膠原蛋白的濃度。(實施例8)圖16是表示在體內(nèi)(in vivo)確認改變糖種類時對于膠原蛋白凝膠化的影響的結(jié)果的圖。在圖中，a j表示含有表3所示糖的制劑的結(jié)果。(實施例9)圖17是表示在體內(nèi)(in vivo)確認添加糖對于各種濃度的膠原蛋白凝膠化的影響的結(jié)果的圖。在圖中，a表示含有1% [w/v]膠原蛋白的制劑的結(jié)果。b表示含有0.5%[w/v]膠原蛋白的制劑的結(jié)果。(實施例10)圖18是表示在體外(in vitro)確認添加各種糖時對于膠原蛋白凝膠化的影響的結(jié)果的圖。在圖中，a表示不含糖時的結(jié)果，b表示含有蔗糖時的結(jié)果，c表示含有葡萄糖時的結(jié)果，d表示含有葡萄糖醛酸時的結(jié)果。(參考例7)圖19是表示確認藥物為甲狀腺球蛋白(Thyroglobulin)的緩釋性藥物組合物在體內(nèi)(in vivo)的藥物緩釋能力的結(jié)果的圖。(實施例11)圖20是表示確認藥物為甲狀腺球蛋白(Thyroglobulin)的緩釋性藥物組合物在體內(nèi)(in vivo)的凝膠化的結(jié)果的圖。(實施例11)圖21是表示確認藥物為甲狀腺球蛋白(Thyroglobulin)的緩釋性藥物組合物在體內(nèi)(in vivo)的藥物釋放量的經(jīng)時性變化的結(jié)果的圖。(實施例11)
具體實施例方式本發(fā)明涉及一種含有藥物、膠原蛋白以及選自單糖類、二糖類、三糖類及四糖類中的一種以上的糖的緩釋性藥物組合物。

本發(fā)明的緩釋性藥物組合物的特征在于，通過含有上述一種以上的糖，在被給藥至生物體內(nèi)之前呈液狀，而在被給藥至生物體內(nèi)后凝膠化。認為本發(fā)明的緩釋性藥物組合物在剛被給藥至生物體內(nèi)后，由于糖的存在而使凝膠化被抑制，但是，糖在生物體內(nèi)逐漸擴散，從而糖對于膠原蛋白的凝膠化的抑制解除，膠原蛋白重新獲得本來的性質(zhì)從而凝膠化。即，本發(fā)明的緩釋性藥物組合物在被給藥至生物體內(nèi)后緩慢地進行凝膠化，最終可發(fā)揮藥物的緩釋作用。認為本發(fā)明的緩釋性藥物組合物在剛被給藥至生物體內(nèi)后具有速釋性。由此，本發(fā)明的緩釋性藥物組合物具有速釋性和緩釋性，是使藥物的釋放速度受到控制的藥物組合物。在本發(fā)明中，所謂的“具有速釋性”是指藥物組合物在從剛給藥后到一定時間(初期)內(nèi)釋放出有效量的藥物。本發(fā)明的藥物組合物在初期以與不含膠原蛋白的組合物同等程度或者稍慢地釋放出藥物，并且比僅含有膠原蛋白而不含糖的組合物更快地釋放出藥物。例如，本發(fā)明的藥物組合物可以在5小時或更短時間、2小時或更短時間、I小時或更短時間、或者約30分鐘或更短時間內(nèi)，以足夠?qū)嶒瀸ο筇峁┧幬锏某醮呜摵蓜┝?initialloading dose)的量釋放出藥物。另外，在本發(fā)明中，所謂的“具有緩釋性”是指:與不含膠原蛋白的組合物相比，藥物組合物長期持續(xù)地釋放藥物，從而將生物體內(nèi)的藥物維持在適當?shù)臐舛?。例如，本發(fā)明的藥物組合物可以在從給藥后經(jīng)過12小時以上之后、經(jīng)過16小時以上之后、經(jīng)過I天以上之后至給藥后約3天為止、至約I周為止、至約I個月為止、或者從給藥后經(jīng)過I個月以上之后至約6個月為止的時間內(nèi)，以足夠?qū)嶒瀸ο蟮纳矬w內(nèi)提供藥物的連續(xù)維持劑量的量釋放出藥物。
進而，在本發(fā)明的緩釋性藥物組合物中，認為通過適當?shù)卣{(diào)節(jié)藥物、膠原蛋白以及糖的各成分的濃度、混合比、混合順序等，可以更加自如地控制藥物釋放速度。在本發(fā)明的緩釋性藥物組合物中，與現(xiàn)有的僅含有膠原蛋白而不含糖的組合物相比，可以增加初期的藥物釋放量，從而能夠賦予速釋性。例如，在以后述實施例1所記載的條件進行試驗的情況下，能夠在下述范圍內(nèi)調(diào)節(jié)藥物的釋放速度，其中，上述范圍是指:與現(xiàn)有的僅含有膠原蛋白而不含糖的組合物相比，使洗脫開始至O 6小時后的藥物洗脫量(藥物的累積釋放量)增加約5 30%，另外，使洗脫開始至6 48小時后的藥物洗脫量(藥物的累積釋放量)增加30 50%的范圍。另外，這些數(shù)值是本發(fā)明的緩釋性藥物組合物的初期的藥物釋放速度(發(fā)揮速釋性的時間范圍和該時間范圍內(nèi)的藥物的累積釋放量)的一例，本發(fā)明的初期的藥物釋放速度并不限于此，可根據(jù)藥物、糖以及膠原蛋白的種類或濃度進行控制。本發(fā)明的藥物組合物具有在被給藥至體內(nèi)之前呈液狀而在被給藥至體內(nèi)后凝膠化的性質(zhì)。認為本發(fā)明的藥物組合物的凝膠化是由膠原蛋白引起的。已知膠原蛋白的凝膠化通常是在生理條件下發(fā)生的。所謂的“生理條件”是指溫度為2°C 45°C、pH為4.0
10.0、鹽濃度為0.0lM 3.0M的條件。本發(fā)明的藥物組合物即使在被給藥至體內(nèi)之前置于生理條件下，也不會凝膠化而保持液狀不變。另外，在本發(fā)明中，液狀和凝膠化后的狀態(tài)可通過測量混濁度進行區(qū)分。例如，混濁度可以通過測量400nm時的吸光度進行確認。凝膠化的性質(zhì)是指具有將含膠原蛋白的組合物置于生理條件下時400nm時的吸光度上升的性質(zhì)、例如吸光度上升至1.0左右的性質(zhì)。本發(fā)明的緩釋性藥物組合物中所含的糖是選自單糖類、二糖類、三糖類以及四糖類中的I種以上的糖。作為單糖類，可例舉出木糖、阿拉伯糖、核糖等戊糖；葡萄糖、甘露糖、半乳糖、果糖、巖藻糖等己糖；肌醇、赤蘚醇等糖醇；氨基葡糖等氨基糖；葡糖醛酸等糖醛酸，作為二糖類可例舉出蔗糖、麥芽糖、乳糖、海藻糖、異麥芽糖，作為三糖類可例舉出棉子糖，作為四糖類可例舉出水蘇糖。本發(fā)明的緩釋性藥物組合物所含的糖優(yōu)選為選自二糖類和三糖類中的I種以上的糖，更優(yōu)選為二糖類。從調(diào)制藥物組合物時的操作性的觀點出發(fā)也優(yōu)選為二糖類或三糖類。本發(fā)明中，認為在取代選自單糖類、二糖類、三糖類以及四糖類中的I種以上的糖而使五糖類以上的多糖類與膠原蛋白共存從而制作緩釋性藥物組合物時，幾乎不會對基于 膠原蛋白的藥物緩釋性造成影響，從而無法調(diào)節(jié)藥物的緩釋速度。本發(fā)明的緩釋性藥物組合物中的糖的濃度是指藥物組合物中的最終濃度，為可抑制由膠原蛋白引起的凝膠化的濃度，且是即使將本發(fā)明的藥物組合物置于生理條件下也不會發(fā)生凝膠化的濃度。進而，本發(fā)明的藥物組合物中的糖濃度可以根據(jù)藥物組合物中的其他成分的添加而增加或減少，但是，優(yōu)選調(diào)節(jié)為整體上與生物體內(nèi)的滲透壓等滲的濃度。例如，糖濃度為0.0lM 3.0M，優(yōu)選為0.05M 1.0M，更優(yōu)選為0.1M 0.5M。當糖濃度低于0.0lM時，存在無法獲得凝膠化的抑制效果這一問題點，當糖濃度高于3.0M時，存在膠原蛋白的凝膠化完全被抑制從而組合物不具有藥物緩釋性這一問題點。另外，在本發(fā)明的緩釋性藥物組合物中，通過改變糖的種類或濃度，能夠調(diào)節(jié)藥物的釋放速度，并且能夠調(diào)節(jié)剛被給藥至生物體內(nèi)后的速釋性與由于膠原蛋白的凝膠化產(chǎn)生的緩釋性的平衡。速釋性與緩釋性的平衡可根據(jù)藥物的種類等進行調(diào)節(jié)。例如，當本發(fā)明的緩釋性藥物組合物中含有二糖類或三糖類時，由于對于膠原蛋白的凝膠化的抑制能力較高，因此，通過給藥后初期的藥物釋放，能夠?qū)崿F(xiàn)更高的局部濃度，從而能夠?qū)崿F(xiàn)更具即效性的藥物釋放。另一方面，當在本發(fā)明的緩釋性藥物組合物中含有單糖類或四糖類時，對于膠原蛋白的凝膠化的抑制能力較低，從而與含有二糖類或三糖類的制劑相比能夠減緩藥物的釋放速度。本發(fā)明的緩釋性藥物組合物中的糖的濃度如上所述，但是，可例舉出在二糖類的情況下優(yōu)選為0.05M 0.3M的濃度，在三糖類的情況下優(yōu)選為0.0lM 0.3M的濃度，在單糖類的情況下優(yōu)選為0.05M 0.5M的濃度，在四糖類的情況下優(yōu)選為0.05M 0.3M的濃度。本發(fā)明的緩釋性藥物組合物中的膠原蛋白只要是在生理條件下能夠凝膠化的膠原蛋白，便可以是任何膠原蛋白。膠原蛋白與作為膠原蛋白的改性物的明膠是不同的。膠原蛋白具有三條螺旋狀多肽鏈聚集所形成的三重螺旋結(jié)構(gòu)，而明膠不具有這種三重螺旋結(jié)構(gòu)。膠原蛋白的三重螺旋結(jié)構(gòu)由含有(Gly-X-Y)n(X和Y為任意的氨基酸)這一重復(fù)序列的分子形成。本發(fā)明的藥物組合物中的膠原蛋白的分子量為IkDa 2000kDa，優(yōu)選為IOkDa IOOOkDa,更優(yōu)選為IOOkDa 500kDa。當膠原蛋白的分子量小于IkDa時，存在膠原蛋白不會在生理條件下發(fā)生凝膠化這一問題點，當分子量大于2000kDa時，存在即使在生理條件以外的其他條件下膠原蛋白也發(fā)生凝 膠化從而制劑的使用變得困難這一問題點。另外，本說明書中的分子量是指總分子量，通常利用GPC法等進行測量。在本發(fā)明中，膠原蛋白當然可以使用各種類型的天然型膠原蛋白，也可以使用利用胃蛋白酶等蛋白酶處理后的去端肽膠原蛋白(atelocollagen) (Stenzel等、Collagen asa biomaterial、Annual Review of Biophysics and Bioengineering、(1974)3、231)等。去端肽膠原蛋白可使用源自雞、牛、豬、人等各種生物的去端肽膠原蛋白。另外，只要是在能夠生理學(xué)條件下發(fā)生凝膠化的物質(zhì)，也可以使用化學(xué)修飾后的膠原蛋白、如(Pro-Hyp-Gly)5等那樣含有Gly-X-Y (X和Y為任意氨基酸)的重復(fù)序列的合成多肽形成三重螺旋的膠原蛋白樣分子等。例如，由于明膠或膠原蛋白肽在生理條件下不會發(fā)生凝膠化，因此，不適合作為本發(fā)明的緩釋性藥物組合物中使用的膠原蛋白。本發(fā)明中的膠原蛋白的濃度是指藥物組合物中的最終濃度，只要是在生理條件下發(fā)生凝膠化的濃度便可以是任意濃度。例如，膠原蛋白的濃度為0.01wt% 30wt% (% [w/V])，優(yōu)選為 0.05wt% 20wt% (% [w/v]),更優(yōu)選為 0.1wt % IOwt % (% [w/v])。當膠原蛋白的濃度低于0.01wt% (% [w/v])時,存在不會發(fā)生膠原蛋白的凝膠化這一問題點，當膠原蛋白的濃度高于30wt% (% [w/v])時,存在無法以溶液的形式使用本發(fā)明的緩釋性藥物組合物這一問題點。本發(fā)明的緩釋性藥物組合物中的膠原蛋白與糖的混合比只要是糖能夠抑制膠原蛋白的凝膠化的混合比即可。例如，膠原蛋白與糖的混合比可以是相對于I重量份(Ig)的膠原蛋白而糖的重量(g)為1: 0.005 1: 5000，優(yōu)選為1: 0.01 1: 1000，更優(yōu)選為1: 0.02 1: 500，進一步優(yōu)選為1: 0.1 1: 100。當相對于I重量份(Ig)膠原蛋白的糖的重量(g)小于0.005時，存在無法獲得凝膠化的抑制效果這一問題點，當相對于I重量份(Ig)膠原蛋白的糖的重量(g)大于5000時，存在膠原蛋白的凝膠化完全被抑制從而組合物不具有藥物緩釋性這一問題點。另外，通過增大相對于I重量份(Ig)膠原蛋白的糖的重量(g)，能夠更高度地抑制凝膠化，從而能夠制作速釋性的比重更高的藥物組合物。在本發(fā)明的緩釋性藥物組合物中，膠原蛋白溶解在介質(zhì)中從而以膠原蛋白溶液的形式存在。介質(zhì)只要滿足生理條件下的pH、鹽濃度便可使用任何介質(zhì)。例如，可以使用注射用精制水、生理鹽水、緩沖液(例如生理性磷酸緩沖液、醋酸緩沖液、梓檬酸緩沖液)等介質(zhì)。本發(fā)明的緩釋性藥物組合物中作為有效成分含有藥物。藥物只要是具有預(yù)防和/或治療疾病或病情這樣的作用的生理活性物質(zhì)即可。例如，作為藥物可舉出具有促進組織再生或者促進或增強生理作用的作用的生理活性物質(zhì)、抗癌劑、抗生素等通常作為藥物使用的物質(zhì)。藥物可以是蛋白質(zhì)、肽、糖蛋白質(zhì)、多糖類、核酸、低分子化合物的任一種，優(yōu)選為蛋白質(zhì)、肽、糖蛋白質(zhì)。在本發(fā)明中，所謂的“肽”是指2個以上的氨基酸結(jié)合而成的分子，蛋白質(zhì)和肽實質(zhì)上意義相同。所謂的“糖蛋白質(zhì)”是指在蛋白質(zhì)上結(jié)合糖鏈而成的物質(zhì)。作為本發(fā)明中的藥物的蛋白質(zhì)可以是任何蛋白質(zhì)，例如可以使用分子量為IkDa IOOOkDa的蛋白質(zhì)。作為上述蛋白質(zhì)、肽以及糖蛋白質(zhì)，例如可舉出FGF(成纖維細胞生長因子)、EGF(表皮生長因子)、NGF(神經(jīng)生長因子)、IGF(胰島素樣生長因子)、CSF(集落刺激因子)、G-CSF(粒細胞集落刺激因子)、TGF(轉(zhuǎn)化生長因子)、VEGF(血管內(nèi)皮生長因子)、GH (生長激素)、ΕΡ0 (促紅細胞生成素)、HGF (肝細胞生長因子)、TNF_ α (腫瘤壞死因子)、TNF-β (淋巴毒素)、白細胞介素、干擾素、胰島素、ΡΤΗ(甲狀旁腺激素)、H)GF(血小板衍生生長因子)、疫苗抗原、抗體、溶菌酶(lysozyme、細胞壁溶解酶)、舍雷肽酶(消炎酶制劑)、鏈霉蛋白酶(消炎酶制劑)等。FGF優(yōu)選為bFGF(堿性成纖維細胞生長因子)。作為核酸可舉出:對酶、激素、細胞因子、集落刺激因子、凝固因子、調(diào)節(jié)蛋白、轉(zhuǎn)錄因子、受體或結(jié)構(gòu)蛋白進行編碼的基因，或者以這些基因為靶標的、寡核苷酸、由寡核苷酸等構(gòu)成的單鏈或雙鏈核酸構(gòu)成的反義寡核苷酸，siRNA, miRNA, RNA, DNA，適體等。本發(fā)明的緩釋性藥物組合物中的藥物的濃度只要是足夠在服用了本發(fā)明的緩釋性藥物組合物的實驗對象(患者)的體內(nèi)發(fā)揮預(yù)防和/或治療疾病或病情這樣的作用的濃度即可。藥物的濃度只要是與通常使用的藥品的有效性濃度為相同程度即可。另外，也可以是單獨使用藥物時有效性明顯的濃度，但也預(yù)料到通過與膠原蛋白混合而顯示有效性的濃度比單獨使用藥物時低或高的情況。本發(fā)明的緩釋性藥物組合物優(yōu)選用于局部，因此，只要通過側(cè)重于藥物的 局部濃度來決定緩釋性藥物組合物中的藥物濃度即可。本發(fā)明的緩釋性藥物組合物也可以還含有醫(yī)藥上允許的載體。作為醫(yī)藥上可被允許的載體，當本發(fā)明的緩釋性藥物組合物是能夠注入的注射劑時，也可以根據(jù)需要使用分散劑、表面活性劑、等滲劑、pH調(diào)節(jié)劑、無痛化劑、穩(wěn)定劑、保存劑、著色劑等。本發(fā)明的緩釋性藥物組合物優(yōu)選作為注射劑非口服地使用。例如可以給藥至皮內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、體腔內(nèi)或臟器、組織等中。另外，本發(fā)明的緩釋性藥物組合物，作為實驗對象可給藥至脊椎動物(例如魚類，兩棲類，爬蟲類，包括雞等鳥類，包括小鼠、大鼠、兔子、貓、狗、牛、豬、馬、山羊、綿羊、猴子、人等哺乳類)。當藥物為發(fā)揮血管生成調(diào)節(jié)作用的生理活性物質(zhì)時，本發(fā)明的緩釋性藥物組合物可作為血管生成調(diào)節(jié)劑進行使用。在本發(fā)明中，血管生成調(diào)節(jié)是指促進和/或抑制血管生成的作用。作為發(fā)揮血管生成調(diào)節(jié)作用的生理活性物質(zhì)，可以例舉出FGF(優(yōu)選為bFGF)、PDGF> VEGF> HGF> G-CSF、煙曲霉素、貝伐單抗(bevacizumab)、蘭尼單抗(ranibizumab)、將血管內(nèi)皮生長因子A(VEGF-A)的活性型中和的重組人源性單克隆Fab抗體、甲氰咪胍、塞來昔布、艾扎匹蘭(azaspirene)、哌加他尼(pegaptanib)(核酸藥物)等,優(yōu)選為bFGF。
本發(fā)明的血管生成調(diào)節(jié)劑在給藥至生物體內(nèi)時，由于能夠使作為活性組分且發(fā)揮血管生成調(diào)節(jié)作用的生理活性物質(zhì)的局部濃度提前升高，并且能夠使生理活性物質(zhì)長時間持續(xù)釋放從而維持適當?shù)臐舛?，因此，可被用于利用血管生成調(diào)節(jié)作用的各種治療用途中。當發(fā)揮血管生成調(diào)節(jié)作用的生理活性物質(zhì)為bFGF時，在2小時或更短時間、I小時或更短時間、30分鐘或更短時間、或者約10分鐘或更短時間內(nèi)，以足夠?qū)嶒瀸ο筇峁┏醮呜摵蓜┝康牧酷尫舃FGF。是指在從給藥后12小時以上、16小時以上、20小時以上至約24小時、約28小時或者約32小時為止的時間內(nèi)，以足夠?qū)嶒瀸ο筇峁゜FGF的連續(xù)維持劑量的量進行釋放。例如，可以按照bFGF的最終濃度達到25μ g/mL的方式調(diào)制血管生成調(diào)節(jié)劑，從而使實驗對象的局部的bFGF給藥量(劑量)達到約100 μ g 約500 μ g、優(yōu)選達到約200 μ g。本發(fā)明的血管生成調(diào)節(jié)劑的用途例如可舉出:促進血管生成、抑制血管生成、組織再生、創(chuàng)傷愈合、骨病治療、牙周病治療、軟骨病治療、癌癥治療，優(yōu)選用于促進血管生成或組織再生中。作為期待通過本發(fā)明的血管生成調(diào)節(jié)劑促進血管生成和/或再生組織從而改善癥狀的疾病，有血管阻塞性疾病和所有由該血管阻塞引起的缺血性疾病，具體普遍為慢性動脈阻塞性疾病，例如可舉出阻塞性動脈硬化、伯格病(Buerger' s disease)、糖尿病性壞疽、心肌梗塞、心絞痛等。本發(fā)明的血管生成調(diào)節(jié)劑的給藥量可根據(jù)治療目的的疾病、患者的年齡、體重等適當?shù)卣{(diào)整，例如在bFGF的情況下，通?？梢葬槍γ棵扇嘶颊邚募s0.01 μ g 約500 μ g的范圍、優(yōu)選為約I μ g 約300 μ g的范圍中選擇給藥量，并且將其注入到患部或其周邊部位。另外，當I次給藥效果不足時，也可以進行多次該給藥。本發(fā)明的緩 釋性藥物組合物可以通過將藥物、膠原蛋白以及糖的各成分按照規(guī)定濃度、混合比混合來制造。此時，藥物、膠原蛋白以及糖的混合順序并無特別限定，例如可以按照以下順序混合來制造。(I)在含有藥物和糖的混合物中添加膠原蛋白。(2)在含有藥物和膠原蛋白的混合物中添加糖。(3)在含有糖和膠原蛋白的混合物中添加藥物。另外，認為通過適當?shù)卣{(diào)整濃度、混合比、混合順序，能夠更為自如地控制藥物釋放速度。進而，本發(fā)明還包括含有膠原蛋白以及選自單糖類、二糖類、三糖類及四糖類中的I種以上的糖的緩釋性主劑。所謂的“緩釋性主劑”是指緩釋性藥物組合物用的溶劑或主齊U。通過在本發(fā)明的緩釋性主劑中添加混合作為活性組分的藥物，可以制造緩釋性藥物組合物。在本發(fā)明中，通過在含有藥物和膠原蛋白的藥物組合物中混合選自單糖類、二糖類、三糖類以及四糖類中的I種以上的糖，可以對藥物組合物賦予速釋性和緩釋性，從而還提供控制藥物釋放速度的方法。在本發(fā)明的緩釋性藥物組合物的制造方法或藥物釋放速度的控制方法中，考慮到膠原蛋白的凝膠化，在不存在糖的狀態(tài)下，優(yōu)選在膠原蛋白不會改性的溫度、優(yōu)選為2°C 10°C的低溫下進行混合操作，但是，在存在糖的狀態(tài)下，可以在0°C 50°C、更優(yōu)選為10°C 40°C下進行混合操作。
實施例以下，將本發(fā)明的內(nèi)容示于參考例和實施例中具體地對本發(fā)明進行說明，但是，本發(fā)明并不限定于此。(參考例I)糖對膠原蛋白溶液的凝膠化能力造成的影響的光譜評價具體地說，在膠原蛋白溶液(pH7.4、最終濃度3% [w/v])(產(chǎn)品名:高研去端肽膠原蛋白填充物)中，按照最終濃度為0M、0.0lM或者0.25M的方式添加蔗糖溶液并混合，一邊以37°C進行加熱一邊利用分光光度計測量400nm時的吸光度的經(jīng)時性變化。將結(jié)果表示于圖1中。在圖中，a表示僅含有膠原蛋白時的結(jié)果，b表示混合有膠原蛋白和0.0lM蔗糖時的結(jié)果，c表示混合有膠原蛋白和0.25M蔗糖時的結(jié)果。未添加蔗糖的膠原蛋白溶液大約10分鐘便凝膠化。在添加了蔗糖的膠原蛋白溶液中，根據(jù)蔗糖濃度而使凝膠化延遲。(實施例1)糖對來自膠原蛋白的藥物釋放造成的影響的確認作為藥物使用溶菌酶(最終濃度為2mg/mL) (SIGMA公司)，對于糖對來自膠原蛋白的藥物釋放造成的影響進行了確認。在將溶菌酶溶解于含有蔗糖(最終濃度為0.05M)的生理性緩沖液(PBS、pH為7.4)或者不含蔗糖的生理性緩沖液之后，與去端肽膠原蛋白溶液(最終濃度為3% [w/v])(產(chǎn)品名:高研去端肽膠原蛋白填充物)混合，從而制劑化。將得到的制劑緩慢地添加至試驗管內(nèi)以PBS為外液的溶液中并在37°C下加熱，利用HPLC(System IntegratorC-R7A[島津制作所]、系統(tǒng)控制器SCL-6B[島津制作所]、泵LC_9A[島津制作所]、脫氣器ERC-3522 [德國 Elma 公司]、檢測器 SPC_6AV[島津制作所]、柱；Cosmosil C18_AR[NACALAITESQUE株式會社])測量經(jīng)時地釋放至外液中的溶菌酶量。測量條件如下。洗脫開始液:含0.1%三乙胺(TEA)的30%乙腈溶液最終洗脫液:含0.1 % TEA的45%乙腈溶液的濃度梯度洗脫速度lmL/min洗脫時間:30分鐘檢測波長:220nm將其結(jié)果表不于圖2。在圖中，白圈表不不存在庶糖時的結(jié)果，黑圈表不存在庶糖時的結(jié)果。可知含有蔗糖時釋放至外液中的溶菌酶的量比不含蔗糖時多?？芍ㄟ^添加糖而加快了藥物從膠原蛋白溶液的釋放加快，從而使藥物的初期釋放量增加。(實施例2)制劑化順序?qū)δz原蛋白在生物體內(nèi)的凝膠化的影響的確認將溶菌酶(MW為14kDa)(最終濃度為2mg/mL)、蔗糖(最終濃度為0.25M)以及去端肽膠原蛋白(最終濃度為3% [w/v])(產(chǎn)品名:高研去端肽膠原蛋白填充物)這三種成分，按照下述a) c)所示改變順序進行混合，從而制劑化。a) (P+S)+AC制劑:首先將溶菌酶和蔗糖混合，接著添加去端肽膠原蛋白從而制劑化。b) (P+AO+S制劑:首先將溶菌酶和去端肽膠原蛋白混合，接著添加蔗糖從而制劑化。c) (S+AC)+P制劑:首先將鹿糖和去端肽膠原蛋白混合,接著添加溶菌酶從而制劑化。
對照制劑使用僅由去端肽膠原蛋白構(gòu)成的AC制劑。向小鼠(DDY、雌性、20周齡)的背部皮下分別注射100 μ L的上述a) c)的各制齊U。在注射至小鼠中24小時后，確認去端肽膠原蛋白是否在生物體內(nèi)凝膠化。將24小時后各制劑在生物體內(nèi)的狀態(tài)表示于圖3中。在圖中，a c表示上述a) c)的各制劑的結(jié)果,d表示對照制劑的結(jié)果。a) c)制劑和對照制劑均在小鼠背部皮下形成白色的凝膠。由此可知，添加混合糖的順序?qū)τ谀z原蛋白在生物體內(nèi)的凝膠化無影響，通過任一制劑化順序均可使膠原蛋白在生物體內(nèi)凝膠化、即形成作為藥物的釋放載體的形態(tài)。(實施例3)制劑化順序?qū)λ幬镝尫潘俣鹊挠绊懙拇_認將溶菌酶(MW為14kDa)、蔗糖以及去端肽膠原蛋白(產(chǎn)品名:高研去端肽膠原蛋白填充物)這三種成分，按照下述a) d)所示改變順序進行混合，從而制劑化。將各制劑注射至小鼠背部皮下，并在I小時后對釋放出的溶菌酶的量進行了測量。a) (P+S)+AC制劑:首先將溶菌酶和蔗糖混合，接著添加去端肽膠原蛋白從而制劑化。b) (P+AO+S制劑:首先將溶菌酶和去端肽膠原蛋白混合，接著添加蔗糖從而制劑化。c) (S+AO+P制劑:首先將蔗糖和去端肽膠原蛋白混合，接著添加溶菌酶從而制劑化。d)AC+P制劑 :將去端肽膠原蛋白和溶菌酶混合從而制劑化。所有制劑均按照溶菌酶、蔗糖以及去端肽膠原蛋白的最終濃度分別為5mg/mL、0.25M以及3% [w/v]的方式進行調(diào)制。在小鼠背部皮下注射100 μ L的a) d)的各制劑，在I小時后取出在體溫下發(fā)生凝膠化的制劑，并使用HPLC測量殘留在凝膠內(nèi)的溶菌酶量，從而計算出釋放出的溶菌酶量。將結(jié)果表示于圖4中。通過改變混合順序而使溶菌酶的釋放量發(fā)生了變動。由此可知，通過改變膠原蛋白、藥物、糖的混合順序，緩釋特性在生物體內(nèi)發(fā)生變化。另外，注射至小鼠背部皮下I小時后的制劑均發(fā)生凝膠化，從而維持了作為藥物的緩釋載體的形態(tài)。(實施例4)藥物分子量對膠原蛋白在生物體內(nèi)的凝膠化的影響的確認將在下表I中所記載的各種蛋白質(zhì)(最終濃度為10mg/mL),即藥物、鹿糖(最終濃度為0.25M)以及去端肽膠原蛋白(最終濃度為3% [w/v])(產(chǎn)品名:高研去端肽膠原蛋白填充物)這三種成分制劑化。制劑化是如下那樣進行，即，與實施例2c)的方法同樣地，在將蔗糖溶解于生理性緩沖液中之后與去端肽膠原蛋白溶液混合，接著添加溶解于生理性緩沖液的蛋白質(zhì)。[表 I] 所使用的蛋白質(zhì)及其分子量_蛋白質(zhì)_MW (kDa)
轉(zhuǎn)鐵蛋白(T1428、Sigma Aldrich)76
憐酸化酶 b (P6635、Sigma Aldrich)97
「01321
肌球蛋白重鏈(M7659、Sigma Aldrich)220
T 型鐵蛋I勺(F4503、Sigma Aldrich)440
甲狀腺球蛋白(T1001、SigmaAldrich)669對小鼠(ICR、雄性、8周齡、體重27_29g)的背部皮下一處位置注射含有表I所記載的蛋白質(zhì)的各制劑ΙΟΟμ L，在注射24小時后，對膠原蛋白是否在生物體內(nèi)凝膠化進行了確認。將24小時后各制劑在生物體內(nèi)的狀態(tài)表示于圖5中。在圖中，a表示轉(zhuǎn)鐵蛋白(Transferrin)的結(jié)果，b表示磷酸化酶(Phosphorylase)b的結(jié)果，c表示肌球蛋白重鏈(Myosin heavy chain)的結(jié)果，d表示I型鐵蛋白(Ferritin type I)的結(jié)果，e表示甲狀腺球蛋白(Thyrogloblin)的結(jié)果。所有制劑均在小鼠背部皮下形成凝膠。由此可知，藥物、尤其是蛋白質(zhì)的分子量對于膠原蛋白的凝膠化無影響，在任一種制劑中，膠原蛋白均在生物體內(nèi)凝膠化。(實施例5)本發(fā)明的制劑的效果確認I作為藥物 使用bFGF (MW為17kDa)(最終濃度為2mg/mL)，并將該藥物、蔗糖(最終濃度為0.25M)和去端肽膠原蛋白(最終濃度為3% [w/v])(產(chǎn)品名:高研去端肽膠原蛋白填充物)這三種成分依次混合，并將混合后的制劑20 μ L注射至小鼠(C57BL/6[SLC]、雌性、7周齡)的背部皮下。通過肉眼對3周后的注射部位處的組織形態(tài)進行了確認。將結(jié)果表示于圖6中。在注射了含有蔗糖的制劑(圖6a)的情況下，確認到在注射部位處的血管周圍帶有紅色(箭頭)，這暗示有毛細血管生成。另一方面。在注射了不含蔗糖的制劑(圖6b)的情況下，在注射部位周圍未發(fā)現(xiàn)明顯的紅色(箭頭)，從而認為與含有蔗糖的制劑相比而血管生成延遲。在作為對照而僅注射了膠原蛋白溶液的情況下，與不含蔗糖的制劑同樣地，未發(fā)現(xiàn)有毛細血管生成(圖6c)。這種皮下的bFGF效果的差異(圖6a與b之間的差異)，認為是由膠原蛋白凝膠化的過程中從制劑中釋放出bFGF的時間差所造成的，并且推測在含有蔗糖的制劑中，bFGF的釋放快，從而血管的生成也快。(實施例6)本發(fā)明的制劑的效果確認2I)制劑的調(diào)制在含有白糖的bFGF溶液(產(chǎn)品名:FIBLAST Spray (科研制藥株式會社))中添加膠原蛋白溶液(最終濃度為3% [w/v])(產(chǎn)品名:高研去端肽膠原蛋白填充物(株式會社高研))，從而制成bFGF 1.0mg/mL的制劑。2)后肢缺血模型動物的制作將34周齡的小鼠(C3H/He、雄性、日本SLC株式會社)分成2組(η = 10)，并在室溫為19.5°C 26.4°C、濕度為34.5% 75.4%、明暗周期為12小時、自由攝取飼料的環(huán)境下進行了馴化。將小鼠在異氟烷0.5% 4%麻醉下背位固定，將右后肢大腿部切開，并用線將大腿動脈的中樞側(cè)和末梢側(cè)以及潛在動脈的末梢側(cè)結(jié)扎，從而切斷血液流通。滴加青霉素G鉀鹽溶液，將切開部縫合。
3)對后肢缺血模型動物注射制劑在制成后肢缺血模型小鼠后，按照制劑的注射量為bFGF 100 μ g/動物的方式，使用注射器在缺血右后肢肌肉內(nèi)五處位置的每處位置注射20 μ Lo4)后肢血流量的測量在注射藥劑4周后，使用激光多普勒血流圖像儀(0Ζ-1、OMEGAffAVE株式會社)對后肢缺血部位處的血流的恢復(fù)進行了評價。將小鼠在異氟烷0.5% 4%麻醉下背位固定，測量右后肢(缺血肢)和左后肢(正常肢)的血流量，并計算出缺血肢/正常肢的血流量。結(jié)果以平均值土標準差(S.Ε.)表示，并通過Student的t檢驗對于顯著性差異(p<0.05)進行了評價。將結(jié)果表示于圖7中。在使用后肢缺血模型小鼠的實驗中，與作為對照的膠原蛋白注射組相比，在含蔗糖制劑注射組中，血流量明顯恢復(fù)。(實施例7)本發(fā)明的制劑的效果確認3。作為本發(fā)明制劑的效果確認，按照以下方式進行了第1-1I期臨床試驗。I)對象以下述病例為對象 ，S卩，患有屬于Fontaine II1、IV度且在安靜時疼痛或者具有缺血性潰瘍、壞死的下肢末梢性血管疾病，并且在實施了所有的內(nèi)科、外科治療后也無法改善臨床癥狀的患者中的、在獲得知情同意后相對于含bFGF的去端肽膠原蛋白(AC)的皮試呈陰性的病例。不設(shè)置年齡限制。適應(yīng)癥除外患者有下肢血液循環(huán)重建術(shù)(外科旁路手術(shù)、PTA)后3個月以內(nèi)的患者；具有心絞痛、心肌梗塞、缺血性心力衰竭等重度心功能障礙的患者；膠原蛋白病、惡性腫瘤(malignant neoplasm)、感染癥、糖尿病性視網(wǎng)膜病患者；孕婦；去端肽膠原蛋白溶液皮試呈陽性的患者。將作為本實施例對象的患者表示于下表2中。[表2]病例
權(quán)利要求
1.一種緩釋性藥物組合物，其特征在于，含有藥物、膠原蛋白以及選自單糖類、二糖類、三糖類及四糖類中的I種以上的糖。
2.如權(quán)利要求1所述的緩釋性藥物組合物，其特征在于，在給藥至體內(nèi)之前的糖的濃度是能夠抑制膠原蛋白的凝膠化的濃度。
3.如權(quán)利要求1或2所述的緩釋性藥物組合物，其特征在于，糖為選自二糖類和三糖類中的I種以上的糖。
4.如權(quán)利要求1 3中任一項所述的緩釋性藥物組合物，其特征在于，膠原蛋白的濃度為0.0lwt% 30wt%，糖的濃度為0.0lM 3M。
5.如權(quán)利要求1 4中任一項所述的緩釋性藥物組合物，其特征在于，膠原蛋白是分子量為IkDa 2000kDa的膠原蛋白。
6.如權(quán)利要求1 5中任一項所述的緩釋性藥物組合物，其特征在于，膠原蛋白為去端肽膠原蛋白。
7.如權(quán)利要求1 6中任一項所述的緩釋性藥物組合物，其特征在于，緩釋性藥物組合物具有在給藥至體內(nèi)之前呈液狀、在給藥至體內(nèi)后凝膠化的性質(zhì)。
8.如權(quán)利要求1 7中任一項所述的緩釋性藥物組合物，其特征在于，緩釋性藥物組合物能夠控制藥物的釋放速度。
9.如權(quán)利要求1 8中任一項所述的緩釋性藥物組合物，其特征在于，藥物為蛋白質(zhì)。
10.如權(quán)利要求1 9中任一項所述的緩釋性藥物組合物，其特征在于，緩釋性藥物組合物為血管生成調(diào)節(jié)劑。
11.如權(quán)利要求1 10中任一項所述的緩釋性藥物組合物，其特征在于，藥物為bFGF。
12.如權(quán)利要求1 11中任一項所述的緩釋性藥物組合物，其特征在于，緩釋性藥物組合物為液劑的形態(tài)。
13.如權(quán)利要求1 12中任一項所述的緩釋性藥物組合物，其特征在于， 緩釋性藥物組合物通過選自由皮內(nèi)注射、皮下注射、肌肉注射、體腔內(nèi)注射、向臟器直接給藥以及向組織直接給藥構(gòu)成的群中的給藥途徑進行給藥。
14.如權(quán)利要求1 13中任一項所述的緩釋性藥物組合物，其特征在于，緩釋性藥物組合物用于治療血管阻塞性疾病和/或缺血性疾病。
15.一種制造緩釋性藥物組合物的方法，其特征在于，包括將藥物、膠原蛋白以及選自單糖類、二糖類、三糖類及四糖類中的I種以上的糖混合。
16.如權(quán)利要求15所述的制造緩釋性藥物組合物的方法，其特征在于，糖的濃度是能夠抑制膠原蛋白的凝膠化的濃度。
17.一種緩釋性主劑，其特征在于，含有膠原蛋白以及選自單糖類、二糖類、三糖類及四糖類中的I種以上的糖。
18.如權(quán)利要求17所述的緩釋性主劑，其特征在于，緩釋性主劑為液狀。
19.如權(quán)利要求17或18所述的緩釋性主劑，其特征在于，緩釋性主劑用于制造緩釋性藥物組合物。
20.一種從緩釋性藥物組合物釋放藥物的速度的控制方法，其特征在于，在緩釋性藥物組合物中，將選自單糖類、二糖類、三糖類以及四糖類中的I種以上的糖與膠原蛋白混合。
全文摘要
本發(fā)明的課題在于提供操作性良好且具有緩釋性這樣的、含有藥物和膠原蛋白的藥物組合物；該課題通過含有藥物、膠原蛋白以及選自單糖類、二糖類、三糖類及四糖類中的1種以上的糖的緩釋性藥物組合物來解決；本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)，當將含有糖的膠原蛋白給藥至生物體內(nèi)時膠原蛋白發(fā)生凝膠化，并且根據(jù)該見解發(fā)現(xiàn)，利用含有藥物、膠原蛋白以及糖的組合物可以控制藥物的釋放速度，從而能夠?qū)⒃摻M合物用作緩釋性藥物組合物。
文檔編號A61P9/10GK103221066SQ201180049898
公開日2013年7月24日 申請日期2011年10月14日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月15日
發(fā)明者福島雅典, 松原弘明, 的場圣明, 土方重樹, 阿蘇雄, 佐藤勉 申請人:國立大學(xué)法人京都大學(xué), 京都府公立大學(xué)法人, 科研制藥株式會社, 株式會社高研