專利名稱：一種可用于美容和美體的促自體外周前體脂肪細(xì)胞增殖和增大的復(fù)合誘導(dǎo)劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)美容保健產(chǎn)品領(lǐng)域，特別地涉及一種可用于美容和美體的促自體外周前體脂肪細(xì)胞增殖和增大的復(fù)合誘導(dǎo)劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
目前，一般是通過外科整形或微創(chuàng)手術(shù)為面部軟組織缺損性凹陷、半面部萎縮畸形、乳房缺損及小乳癥等受術(shù)者采用直接注射填充物或移植自體或非自體組織等，使受術(shù)者達(dá)到軟組織填充作用或使得小乳癥患者乳房體積在原有基礎(chǔ)上得以適當(dāng)增大，并使先天性發(fā)育不全或不良的乳房、以及因某種后天因素導(dǎo)致乳腺萎縮或乳房體積縮小的乳房之形態(tài)更趨豐滿、勻稱和完美，并以此改變和改善體型、展現(xiàn)女性曲線之美的醫(yī)學(xué)技術(shù)。軟組織填充主要應(yīng)用于乳房發(fā)育不良者、哺乳或生育后所致的乳腺萎縮者、體重驟減后導(dǎo)致的胸部扁平者、乳房輕度松垂者、乳癌乳腺手術(shù)后乳房缺失者、或希望擁有更豐滿胸部的愛美女性。隨著社會(huì)的發(fā)展和經(jīng)濟(jì)條件的提高，更多愛美的女士希望擁有更加完美的體形、體態(tài)和體貌，因此，隆胸術(shù)或豐胸術(shù)已成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)美容和整形外科美容中最為常見的項(xiàng)目之一。 至今，隆乳或豐胸的方法主要分非手術(shù)方法、微創(chuàng)注射法、整形外科手術(shù)法三類。非手術(shù)方法主要包括口服藥物、外用藥物、物理刺激等。而無論采用那種方法都需要選擇合適的材料。隨著人類社會(huì)的發(fā)展，人們已經(jīng)研發(fā)出了一些新型豐乳的材料，例如生物高仿類材料， 自體細(xì)胞等。另外，如何通過外來材料來促進(jìn)機(jī)體脂肪組織的生成，從而自然達(dá)到豐胸的效果也是目前研究的熱點(diǎn)。一、外科手術(shù)或微創(chuàng)注射醫(yī)學(xué)美容中已開展使用的豐乳材料1.石蠟和硅膠本世紀(jì)初，最早有人將石蠟用于豐乳術(shù)，但隨后出現(xiàn)了一些可怕的并發(fā)癥，例如因栓塞引起的局部黑蒙、炎癥反應(yīng)、壞死、石蠟擴(kuò)散形成的石蠟瘤以及遲發(fā)的肉芽腫反應(yīng)等等，甚至在一些患者的石蠟瘤內(nèi)發(fā)現(xiàn)了硬癌樣變。到了 50年代，一些外科醫(yī)生開始積極應(yīng)用液體硅膠來取代石蠟，以達(dá)到使乳房隆起的目的，但石蠟注入后的并發(fā)癥同樣發(fā)生在液體硅膠注射后的患者身上，目前這兩種液體材料注射方法已被棄用。2.凝膠聚合物目前，世界整形外科中廣泛使用的液體豐乳材料為水凝膠聚合物。如吸水性聚丙烯酣胺凝膠，與其他內(nèi)部假體材料相比，它的優(yōu)點(diǎn)在于它具有膠凍稠度。因此可以在門診局麻條件下采用注射法把所需要的容量凝膠注入乳房組織，操作簡便。由于該凝膠屬于惰性生物相容材料，注入軟組織后它的物理性質(zhì)保持不變，因此迄今為止，沒有證據(jù)表明它能引起人體組織、器官及系統(tǒng)結(jié)構(gòu)與功能的破壞，能夠終生保留在人體組織中，產(chǎn)生穩(wěn)定的豐乳效果。然而，曾有2. 5%的患者出現(xiàn)了并發(fā)癥。產(chǎn)生并發(fā)癥的原因是外傷和感染(如流行性感冒，呼吸道急性感染)。在無外傷的情況下，多數(shù)并發(fā)癥出現(xiàn)于行經(jīng)期，出現(xiàn)的時(shí)間多在一周之內(nèi)。綜合大多數(shù)產(chǎn)生并發(fā)癥的病例，認(rèn)為在無外傷的情況下，多數(shù)并發(fā)癥出現(xiàn)在機(jī)體處于應(yīng)激狀態(tài)下或機(jī)體抵抗力下降時(shí)，例如呼吸道急性病毒感染、行經(jīng)期等，由此考慮，可能是條件致病菌感染。臨床表現(xiàn)為化膿性出血、急性化膿性乳腺炎以及胸大肌發(fā)炎。 治療可在門診局麻下行穿刺法，加以局部及全身抗生素治療。并發(fā)癥一般在經(jīng)過治療后很快痊愈，基本不會(huì)影響乳房造型效果，形態(tài)仍然滿意。吸水性聚丙烯酣胺凝膠的缺憾之一是不可能完整地從體內(nèi)清除，有時(shí)可被增生的纖維結(jié)締組織包繞，并形成硬結(jié)，令患者極端懊喪。建議僅注射至乳腺后間隙，而不行皮下及胸大肌下注射，可防止其彌散。因其可在長期慢性重力作用下移位，甚至進(jìn)入腋窩或腹壁，并被包繞固定形成硬結(jié)。若欲取出，可利用其親水性行乳腺后間隙抽吸，這樣可取出大部分，對(duì)患者可起到心理安慰作用，并解除其后顧之憂。3.自體組織自體組織移植豐乳的方法有三種游離真皮脂肪瓣移植和局部真皮脂肪瓣移植法以及近幾年發(fā)展起來的脂肪抽吸術(shù)后脂肪顆粒注射豐乳法。其中，游離真皮脂肪瓣移植豐乳的方法現(xiàn)已被絕大多數(shù)整形外科醫(yī)生放棄，因有較多的并發(fā)癥。主要有脂肪液化，壞死造成移植物的部分或全部吸收，以至有持久的引流液。另外，在患者的受區(qū)還會(huì)留下難看的瘢痕。1970年，Watson報(bào)道經(jīng)過10-15年，游離移植的真皮脂肪瓣逐漸纖維化、硬化，很少有不需要取出的。而發(fā)展并成熟于50年代的局部真皮脂肪瓣豐乳對(duì)那些由于良性或惡變前的腫瘤而行乳房皮下切除的患者有特殊意義。通常，乳房皮下切除后有許多皮膚存在，可在鄰近設(shè)計(jì)去表皮的真皮瓣來豐乳，其優(yōu)點(diǎn)是此種真皮脂肪瓣體積吸收少，真皮的彈性與正常乳腺組織質(zhì)地相似。但因組織量有限，常常不能滿足需要?，F(xiàn)在，局部真皮脂肪瓣的應(yīng)用已發(fā)展到各種帶蒂的肌皮瓣，而由于操作復(fù)雜，術(shù)后遺留瘢痕較多，不適用于一般地追求美感的豐乳術(shù)，常用于乳房再造。隨著脂肪抽吸術(shù)的臨床應(yīng)用，脂肪顆粒注射豐乳近年來世界上許多國家已廣泛應(yīng)用。脂肪抽吸可選在體表脂肪多的部位，如腹部、臀部、腿部、腰背部。 據(jù)國外報(bào)道，脂肪顆粒注射后6-8個(gè)月的吸收率約為50% ；國內(nèi)報(bào)道，經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，6-8個(gè)月的吸收率大約為40%。因此，應(yīng)用此項(xiàng)技術(shù)應(yīng)過度矯正(約30%)和反復(fù)注射(2-3個(gè)月重復(fù)注射一次)方能達(dá)到永久豐乳的目的。由于脂肪顆粒注射移植較整塊脂肪移植存活率大大提高，雖吸收率仍較高，但經(jīng)過反復(fù)注射可以達(dá)到穩(wěn)定的效果。目前脂肪自體移植已被整形美容外科應(yīng)用于填充面部軟組織缺損性凹陷、半面部萎縮畸形、乳房缺損及小乳癥，顏面部美容整形等領(lǐng)域，但它術(shù)后存在諸多問題，其中最主要的是移植后的脂肪組織和脂肪細(xì)胞液化和吸收及存活率不高等諸多不確定性因素所導(dǎo)致的術(shù)后效果不佳、或術(shù)后改善的效果難以長期維持等，由此造成術(shù)后需多次補(bǔ)充手術(shù)充填，大大增加了受術(shù)者的痛苦和費(fèi)用。而這，不僅暴露了該方法一定的缺陷和不足，從而影響了該方法的廣泛應(yīng)用。二、促進(jìn)脂肪組織生成的材料前脂肪細(xì)胞由脂肪干細(xì)胞分化而來，是一類具有增殖和向成熟脂肪細(xì)胞分化能力的特異化的前體細(xì)胞，是很好的種子細(xì)胞來源，可以作為治療許多面部凹陷和軟組織缺陷及豐胸美體的有益填充物。為此，人們想到了在合適的微環(huán)境條件下，人體脂肪組織中的前脂肪細(xì)胞在體內(nèi)與體外均可以有效增殖，并分化為成熟脂肪細(xì)胞，而這種前脂肪細(xì)胞的增殖和分化，不僅可使脂肪細(xì)胞數(shù)量增多，而且，還可使脂肪細(xì)胞的體積增大，從而使原位脂肪組織充盈和總體積相對(duì)增大。然而，人體脂肪組織中的前脂肪細(xì)胞的數(shù)量非常有限，因此我們希望通過應(yīng)用合理的外來材料刺激方式，達(dá)到前脂肪細(xì)胞的有效擴(kuò)增。目前有以下材料可促進(jìn)脂肪細(xì)胞的生成。(一)化學(xué)材料1.油酸油酸是單不飽和脂肪酸，有學(xué)者有研究證實(shí)油酸能促進(jìn)脂肪細(xì)胞PPAR γ、C/EBP α 及脂蛋白脂酶(LPL)mRNA的表達(dá)，而C/ΕΒΡα、PPARy兩種物質(zhì)是脂肪細(xì)胞分化的調(diào)控因子，在脂肪分化過程中起著決定性、關(guān)鍵性的作用。而由于成熟脂肪細(xì)胞可在體外由SW872 前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化得到，因此，有研究采用0. 6mmol/L油酸刺激SW872前脂肪細(xì)胞72小時(shí)，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)SW872前脂肪細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄因子PPAR- γ 2與C/EBP- α mRNA呈時(shí)序性表達(dá)， 均在誘導(dǎo)分化72h時(shí)表達(dá)最高，分別是誘導(dǎo)分化前的14. 15倍和14. 82倍。2.維生素C維生素C是屬于水溶性維生素，與脂溶性維生素不同的是它能促進(jìn)人前脂肪細(xì)胞的增值和分化。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)維生素C對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞和分化成的脂肪細(xì)胞的IV型膠原和其他膠原的合成與分泌均有促進(jìn)作用，脂滴的出現(xiàn)也加速了。有研究表明， ΙΟΟμπιοΙ/L的Vit C促進(jìn)豬前體脂肪細(xì)胞增殖能力最強(qiáng)；250 μ mol/L Vit C能顯著促進(jìn)豬前體脂肪細(xì)胞分化.其作用機(jī)制可能是通過對(duì)轉(zhuǎn)錄因子PPAR Y和RXRa及標(biāo)志基因LPL mRNA時(shí)序性表達(dá)的調(diào)控來進(jìn)行的，促進(jìn)生脂基因的表達(dá)，從而誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞的分化。3.葡萄糖有學(xué)者采用采用MTT比色法、油紅0染色提取法分別測定5 25mmol/L濃度葡萄糖對(duì)其增殖和分化的影響.結(jié)果顯示，高濃度葡萄糖能有效促進(jìn)大鼠前體脂肪細(xì)胞的增殖和分化(P < 0. 05)，并以15mmol/L濃度和20mmol/L濃度分別對(duì)增殖和分化的促進(jìn)作用最強(qiáng)·( 二)天然藥物及中藥提取物類研究發(fā)現(xiàn)許多重要成分都具有結(jié)合PPAR Y的特性，如有研究發(fā)現(xiàn)，中藥大黃的有效成分大黃素和人參皂甙Rbl都具有與PPAR γ結(jié)合的活性，并增加誘導(dǎo)分化過程中3T3-L1 前脂肪細(xì)胞PPAR Y和CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α (C/EBP α )的表達(dá)，促進(jìn)脂肪細(xì)胞的誘導(dǎo)分化。同時(shí)，研究發(fā)現(xiàn)現(xiàn)黃芪多糖可增加脂肪細(xì)胞葡萄糖的攝取和利用，促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的分化。蒲黃總黃酮(pollen typhaetotal fIavone, PTF)能明顯促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的增殖，在 0. 2g/L時(shí)可明顯促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的分化。(三)細(xì)胞因子類材料所謂細(xì)胞因子類材料可通過對(duì)體內(nèi)脂肪組織合成、蓄積等過程的調(diào)控而達(dá)到豐乳的效果，那么如何利用細(xì)胞因子類材料生成新的脂肪組織呢？其一，通過促進(jìn)細(xì)胞的增殖分化，脂肪組織內(nèi)含有成熟的脂肪細(xì)胞及間質(zhì)細(xì)胞，而間質(zhì)細(xì)胞又包括脂肪源性干細(xì)胞(Ascs)、巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、紅細(xì)胞、周細(xì)胞等。雖然成熟脂肪細(xì)胞屬于終分化細(xì)胞，但近年來的研究表明成熟的脂肪細(xì)胞在體外培養(yǎng)過程中，可粘附頂部貼壁生長，去分化為成纖維細(xì)胞樣脂肪細(xì)胞，且有高度的增殖能力。在這些細(xì)胞中，采用生長因子促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的增殖與分化的研究也是一個(gè)熱點(diǎn)，所謂前脂肪細(xì)胞(Preadipocyte)是由多能干細(xì)胞 (multipotential stem cell)或胚胎干細(xì)胞分化得來的特異性前體細(xì)胞，存在于脂肪細(xì)胞之間和細(xì)胞外基質(zhì)中的具有分裂增殖成為脂肪細(xì)胞和促進(jìn)血管生成的一種脂肪細(xì)胞。其二，利用細(xì)胞類因子為細(xì)胞的生長提供其所需要的營養(yǎng)物質(zhì)。1.表皮生長因子(Epidermal growth factor, EGF)表皮生長因子是由頌下腺等細(xì)胞分泌的可刺激多種細(xì)胞增殖的生長因子，是由53 個(gè)氨基酸殘基組成的肽鏈，鏈中含有6個(gè)半胱氨酸分子，半胱氨酸分子間形成穩(wěn)定的3個(gè)二硫鍵，其前體分子質(zhì)量超過lOOkDa。細(xì)胞有絲分裂的細(xì)胞周期分為Gl，S，G2和M期分裂，該生長因子具有很強(qiáng)的促分裂作用，體現(xiàn)在其可以活化CD2K(絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶)，通過CD2K的作用使細(xì)胞提前進(jìn)入S期。使細(xì)胞由靜止期進(jìn)入增殖期，促進(jìn)cDNA復(fù)制，推進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程，使分裂加快、細(xì)胞周期縮短。多項(xiàng)研究均表明EGF可以促進(jìn)前脂肪細(xì)胞增殖。 上述材料中說明表皮生長因子能促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的生長，然而不同研究證明表皮生長因子既能抑制前脂肪細(xì)胞分化，又能促進(jìn)其分化，因此有學(xué)者認(rèn)為EGF對(duì)前脂肪細(xì)胞的分化具有兩個(gè)階段，即抑制前體脂肪細(xì)胞分化，又促進(jìn)已經(jīng)開始分化脂肪細(xì)胞的脂肪生成。2.胰島素生長因子(insulin-like growth factor 1, IGF-1)胰島素生長因子是由肝臟、骨及軟骨組織細(xì)胞合成的一種生長因子，早在1978 年，Rinderknecht 等進(jìn)行了胰島素樣生長因子-l(insulin-like growth factor- 1， IGF-1)的氨基酸序列及其與胰島素原的結(jié)構(gòu)同源性，認(rèn)為IGF-I是一種單鏈蛋白質(zhì)，含有 70個(gè)氨基酸殘基，由3對(duì)二硫鍵連接，其分子量為7649kDa，并與胰島素原有明顯的同源性。 有學(xué)者采用IGF-I處理鼠棕色脂肪細(xì)胞24hDNA合成，胸嘧啶核苷結(jié)合都顯著增加，標(biāo)志著細(xì)胞增殖的加強(qiáng)。研究表明IGF-I可以顯著促進(jìn)大鼠前體脂肪細(xì)胞增殖，縮短倍增時(shí)間。而當(dāng)IGF-I濃度為80ng/mL，倍增時(shí)間由67. 49h下降到44. 24h，被認(rèn)為是適宜濃度。3.堿性成纖維細(xì)胞生長因子(Basic fibroblast growth factor, bFGF)堿性成纖維細(xì)胞生長因子在促進(jìn)細(xì)胞增殖、維持細(xì)胞活力方面具有重要的作用。 堿性成纖維細(xì)胞生長因子與脂肪組織的關(guān)聯(lián)在于，臨床上將其用于自體脂肪組織的移植， 其原理在于實(shí)驗(yàn)證明bFGF可以提高自體脂肪的成活率。然后有學(xué)者認(rèn)為bFGF是通過促進(jìn)移植脂肪內(nèi)的血管再生來提高脂肪的存活率，但未對(duì)明確定論該因子對(duì)脂肪細(xì)胞的影響， 在此研究背景下，有學(xué)者采用體外培養(yǎng)技術(shù)，從細(xì)胞水平上明確了 bFGF可以提高自體脂肪移植后的成活率，并且可以促進(jìn)脂肪組織中的前脂肪細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞。4.轉(zhuǎn)錄生長因子Kruppel樣轉(zhuǎn)錄因子(Kruppel-like factors，KLF)該類因子具有3個(gè)高度相似且連續(xù)的C2H2鋅指結(jié)構(gòu)，由于其具有眾多的靶基因，如細(xì)胞周期蛋白D(CyClinD)、氧化物酶增殖體激活受體 Y (peroxisome proliferator activated receptor γ , PPAR γ)、同源閱讀框基因 al0(Homeobox alO，HoxalO)、生長激素受體基因(growth hormone receptor gene, GHR)和胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白 2 (insulin-like growth factor binding protein-2, IGFBP2)等。其中，過氧化酶增殖激活受體(PPARs)為脂肪細(xì)胞分化調(diào)控最關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子，有三種亞型，分別是PPAR α、PPAR γ和PPAR δ，而PPAR γ能促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化，增加胰島素敏感性，降低血糖，有學(xué)者認(rèn)為PPARy對(duì)脂肪細(xì)胞分化進(jìn)行調(diào)控是通過與配體結(jié)合被激活后再與受體結(jié)合形成PPAR y RXR異二聚體，進(jìn)一步同反應(yīng)元件結(jié)合激活靶基因最終導(dǎo)致脂肪細(xì)胞分化成熟。在KLF轉(zhuǎn)錄因子中并不是所有的轉(zhuǎn)錄因子都具有促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的作用。其中KLF4、KLF5均能能促進(jìn)脂肪細(xì)胞的分化，而C/EBPs家族有 C/ΕΒΡαΧ/ΕΒΡβΧ/ΕΒΡγ等成員，其中C/ΕΒΡα在脂肪細(xì)胞分化中起著關(guān)鍵性作用，促進(jìn)PPARy的高度表達(dá)，保持分化細(xì)胞的表型。5.神經(jīng)肽 Y (Neurop印tide Y, NPY)神經(jīng)肽主要分布在小腦以外的腦組織和脊髓中，是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中含量最高的神經(jīng)肽之一，含有36個(gè)氨基酸神經(jīng)遞質(zhì)，這些神經(jīng)遞質(zhì)的共同特點(diǎn)為7個(gè)疏水性跨膜結(jié)構(gòu)、1 個(gè)膜外側(cè)N —糖基化位點(diǎn)和胞內(nèi)側(cè)的C-短氨基酸末端，它最早于1982年由Tatemoto從豬腦中提煉出的。有研究通過動(dòng)物中樞試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)注射NPY導(dǎo)致動(dòng)物攝食反應(yīng)增強(qiáng)，表現(xiàn)在攝食量和飲水量等方面，這主要是由于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的NPY在多種受體的協(xié)助下，與一些調(diào)控因子共同作用，如Leptin、insulin等，從而起到調(diào)控能量平衡和食物的攝取的作用，同時(shí)降低機(jī)體熱量的消耗，提高乙酰輔酶A和脂蛋白酯酶的活性，最終促使脂肪的生成。于此同時(shí)，在此過程中，神經(jīng)肽Y及其受體在其它一些因素的誘導(dǎo)之下，可能會(huì)直接或間接的作用于導(dǎo)致脂肪蓄積的相關(guān)細(xì)胞以及影響脂肪細(xì)胞增值和分化的前體脂肪細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等，最終產(chǎn)生局部或全身脂肪組織的增多。除此之外，NPY還能促進(jìn)血管生成，它的這種功效等同于血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、堿性成纖維生長因子(bFGF)兩種神經(jīng)遞質(zhì)，這就為細(xì)胞生長提供了所必須的營養(yǎng)物質(zhì)。而且研究發(fā)現(xiàn)NPY的這種促血管生成特性是呈濃度依賴的雙峰性的，最低濃度在PM級(jí)，最高濃度在IOnM級(jí)。Kuo發(fā)現(xiàn)10_1(lmOl/LNPY可以促進(jìn)前脂肪細(xì)胞3T3-L1的增殖和分化。我們研究還發(fā)現(xiàn)通過克隆表達(dá)NPY蛋白后，利用重組得到的NPY對(duì)3T3-L1前脂肪細(xì)胞的生長進(jìn)行了干預(yù)，結(jié)果表明，濃度為10_8M的NPY對(duì)3T3-L1 前脂肪細(xì)胞的增殖、分化有明顯作用。6.白細(xì)胞介素重組人白細(xì)胞介素6 (IL-6)是一多效應(yīng)炎癥細(xì)胞因子，被認(rèn)為是IL-6產(chǎn)生的主要場所，全身1/3左右的IL-6來自脂肪組織，且隨著肥胖程度的增加IL-6的產(chǎn)生及體內(nèi)IL-6 的含量隨肥胖程度的增加而增加。而有研究者觀察重組人白細(xì)胞介素IL-6其對(duì)SW872成熟脂肪細(xì)胞促?；鞍?ASP)分泌的影響，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同濃度的IL-6在不同時(shí)間點(diǎn)上對(duì)該細(xì)胞具有不同程度的抑制作用，而ASP是一種脂源性激素，對(duì)調(diào)節(jié)機(jī)體糖脂代謝的平和起著重要的作用，研究發(fā)現(xiàn)它的缺失會(huì)導(dǎo)致小鼠在餐后脂肪細(xì)胞TG和游離脂肪酸顯著升高。又有學(xué)者發(fā)現(xiàn)游離脂肪酸FFA可顯著上調(diào)人成熟脂肪細(xì)胞中NYGGF4基因的表達(dá)，而這種基因的表達(dá)能顯著促進(jìn)脂肪細(xì)胞的增殖。但矛盾的是，研究發(fā)現(xiàn)IL-6對(duì)人成熟脂肪細(xì)胞中NYGGF4基因表達(dá)具有一過性下調(diào)作用。有研究發(fā)現(xiàn)IL-6在生理濃度下(5 IOpg/ ml)能夠減少脂肪細(xì)胞的生長增殖，而當(dāng)IL-6的濃度增加到病理情況下時(shí)，細(xì)胞的代償功能消失，脂肪細(xì)胞數(shù)量增加，加劇了炎癥的發(fā)生。除此之外，白細(xì)胞介素還包含有其他類型， 如IL-18，IL-2等。而目前臨床醫(yī)學(xué)上關(guān)于白細(xì)胞介素對(duì)脂肪細(xì)胞的作用主要著手在它與肥胖的關(guān)系進(jìn)而產(chǎn)生對(duì)內(nèi)分泌疾病影響，如糖尿病。(四)激素類1.胰島素在胰島素的發(fā)展史上經(jīng)歷了動(dòng)物胰島素，基因工程人胰島素，胰島素類似物三個(gè)進(jìn)程，其中人胰島素和胰島素類似物目前在臨床上應(yīng)用較為廣泛，前者是由為胰腺β細(xì)胞合成和分泌，由兩條鏈組成的一種多肽激素，其中Α、Β兩鏈分別含有21個(gè)和30個(gè)氨基酸殘基，后者泛指在結(jié)構(gòu)上與胰島素相似，可正常模擬胰島素分泌的物質(zhì)，例如甘精胰島素，合成的人胰島素類似物，對(duì)結(jié)構(gòu)的改進(jìn)是將人胰島素A鏈21位由甘氨酸取代天冬氨酸，B鏈末端增加2個(gè)精氨酸。脂肪組織是胰島素的重要靶器官之一，其中就有學(xué)者認(rèn)為胰島素既能促進(jìn)脂肪的積聚，同時(shí)支持其他藥物的脂肪積聚作用和抗細(xì)胞凋亡活性。由于前脂肪細(xì)胞能增殖分化為脂肪細(xì)胞，因此目前認(rèn)為胰島素對(duì)前脂肪細(xì)胞的作用也會(huì)影響到脂肪細(xì)胞的增殖分化。而有研究認(rèn)為胰島素可以提高前脂肪細(xì)胞的分化率，胰島素在前脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)化中起相當(dāng)重要的。有學(xué)者提出不同濃度的胰島素對(duì)前脂肪細(xì)胞增殖分化所產(chǎn)生的作用不同，例如當(dāng)3T3-L1前脂肪細(xì)胞在Img(高濃度)胰島素作用下能形成單層，在4天以內(nèi)加入糖皮質(zhì)激素和MIX在12 24天內(nèi)誘發(fā)最大量的脂肪轉(zhuǎn)化，而在Ing (低濃度)胰島素下脂肪轉(zhuǎn)化率降低，只有在生長激素(growth hormone,GH)或IGF-I和EGF加入到培養(yǎng)基后再加入糖皮質(zhì)激素和MIX才能得到最大的轉(zhuǎn)化。除此之外，有學(xué)者進(jìn)行了普通胰島素和四種胰島素類似物對(duì)MCF7 (乳腺癌細(xì)胞)增殖情況的研究，其中研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)甘精胰島素濃度為 1. 5nmol/L-l. 5mmol/L時(shí)能明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖，而地特胰島素濃度在15nmol/L_l. 5mmol/L 時(shí)促增殖作用弱于人胰島素。而另有學(xué)者實(shí)驗(yàn)表明含甘精胰島素的血清對(duì)MCF7I增殖作用是含人胰島素血清的1. 11倍，而含地特胰島素的血清為含人胰島素血清的0. 99倍。2.前列腺素(PGI)前列腺素(PGI-2)能強(qiáng)烈促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的增殖和向成熟脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)化，前脂肪細(xì)胞上有PGI22受體，成熟脂肪細(xì)胞上有前列腺素E-2 (Prostaglandin E_2，PGE-2)受體， PGI-2 與受體結(jié)合升高環(huán)磷腺苷(cyclic adeno sinemonopho sphate，cAMP)及 Ca2+濃度， 從而引起前脂肪細(xì)胞的分化，使前脂肪細(xì)胞呈增生態(tài)。PGE-2受體結(jié)合后降低cAMP濃度，穩(wěn)定成熟脂肪細(xì)胞，有抗脂溶的作用，也有使脂肪組織增生肥大的作用。3.雌激素(Estrogen)雌激素(Estrogen)是在FSH作用下卵泡生長并合成所分泌的，主要有雌酮、雌二醇及雌三醇三種，它對(duì)代謝的作用比較廣泛，除了促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成，加速骨的生長等，還可刺激皮下組織及乳腺的脂肪生成。同時(shí)，雌激素常被應(yīng)用于更年期肥胖患者的治療，其作用機(jī)制在于雌激素可以使脂肪細(xì)胞內(nèi)mRNA增加，從而刺激瘦素的分泌，而減輕體重。除此之外，它還能直接作用于肥胖基因和降低神經(jīng)肽的含量。尤其應(yīng)注意的是，雖然雌激素能夠促進(jìn)已存在乳腺細(xì)胞的增殖增加，這說明它們也能對(duì)已經(jīng)存在乳腺癌具有促進(jìn)作用，同時(shí)它所產(chǎn)生代謝物具有潛在遺傳毒性致癌性，即使在非常低得濃度下也會(huì)產(chǎn)生致癌的效應(yīng)。4.糖皮質(zhì)激素糖皮質(zhì)激素是一種胰島素拮抗激素，其代表藥物為地塞米松，它能通過激活糖皮質(zhì)激素受體而發(fā)揮作用，并減少前脂肪細(xì)胞因子的表達(dá)，從而誘導(dǎo)前脂肪細(xì)胞的分化。有研究將MSCs孵育在含有10 %胎牛血清、10 %正常大鼠血清、10-8mol/L的地塞米松，5ug/ml胰島素的a-MEM培養(yǎng)基中，2天后撤去地塞米松，繼續(xù)孵育5 7天后，MSCs分化成為脂肪細(xì)胞。同時(shí)，由于大鼠NPY基因上游存在糖皮質(zhì)激素反應(yīng)元件且弓狀核NPY神經(jīng)元上存在糖皮質(zhì)激素受體，因此，糖皮質(zhì)激素對(duì)NPY基因的表達(dá)有直接效應(yīng)。有學(xué)者采用地塞米松2mg/ kg,注射入大鼠10d，結(jié)果發(fā)現(xiàn)下丘腦-垂體系統(tǒng)的NPY表達(dá)上調(diào)，但是Doyon等發(fā)現(xiàn)糖皮質(zhì)激素可以刺激虹鱒魚腦部視前區(qū)NPY mRNA的表達(dá)。除此之外，Zakrzew ska等分別給大鼠腦室和腹腔注射糖皮質(zhì)激素后發(fā)現(xiàn)，腦室注射糖皮質(zhì)激素使大鼠攝食及體重增加，下丘腦NPY的含量增加，而腹腔注射糖皮質(zhì)激素的結(jié)果恰恰相反，即大鼠食欲和體重下降，下丘腦NPY的含量減少。由此可見，糖皮質(zhì)激素作用于脂肪組織時(shí)，是否能促使下丘腦NPY增加尚不可知。5.腎上腺素有報(bào)道腎上腺素對(duì)人前脂肪細(xì)胞有刺激增殖、分化作用，而戴冰等用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測六味地黃超微飲片含藥血清對(duì)前脂肪細(xì)胞的增殖，以酶組織化學(xué)法檢測其對(duì)前脂肪細(xì)胞分化過程中的磷酸甘油脫氫酶(GPDH)的影響，油紅0染色方法測定其對(duì)細(xì)胞內(nèi)脂肪積聚的影響。在大鼠前脂肪細(xì)胞生長旺盛時(shí)加入腎上腺素，以該細(xì)胞內(nèi)的cAMP 水平作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，利用cAMP與125I-CAMP和特異性蛋白激酶競爭結(jié)合原理測定該細(xì)胞內(nèi) cAMP濃度。結(jié)果腎上腺素促進(jìn)大鼠前脂肪細(xì)胞的增殖，抑制分化過程中GPDH的升高及脂肪積聚；升高大鼠前脂肪細(xì)胞內(nèi)cAMP水平。結(jié)論腎上腺素-β受體-cAMP系統(tǒng)可能參與大鼠前脂肪細(xì)胞的增殖與分化。三、目前治療軟組織凹陷或豐胸技術(shù)的不足和發(fā)展趨勢目前治療軟組織凹陷和豐胸的方法主要分非手術(shù)方法、微創(chuàng)注射法、整形外科手術(shù)法三類。非手術(shù)方法主要包括口服藥物、外用藥物、物理刺激等?？诜に仡愃幬铮哉{(diào)節(jié)人體的激素水平，促進(jìn)乳腺發(fā)育，完善第二性征，但作用緩慢、長期服用副作用大，特別是容易誘發(fā)或促發(fā)乳腺癌。涂抹某些外用藥物，可經(jīng)皮膚吸收達(dá)到一定的目的，它使局部組織或乳腺腺體增生的同時(shí)也促進(jìn)脂肪合成，同樣，涂抹某些外用藥物，因皮膚屏障功能導(dǎo)致功效成分難以吸收而發(fā)揮作用，因此作用更加緩慢，加上藥物作用時(shí)間較短，不僅效果有限， 且遠(yuǎn)期效果不肯定，特別是有些外用藥物也存在一定風(fēng)險(xiǎn)、甚至可能誘發(fā)組織病變的發(fā)生和發(fā)展。利用機(jī)械的物理作用，如人工按摩、儀器刺激等，可改善乳房組織的血液循環(huán)，而且目前臨床上通用的微電腦豐胸儀模擬人體的生物微電波，刺激細(xì)胞更新再生，加速胸部血液循環(huán)，增強(qiáng)胸部纖維組織的韌性，促進(jìn)胸腺發(fā)育，從而改善胸部松弛、下垂、萎縮、外擴(kuò)等現(xiàn)象。其次還有針灸和電療隆胸法等，但這些方法需要方法合理、長期堅(jiān)持，而且對(duì)相對(duì)老化的乳房隆起作用不明顯，且外形欠佳。而整形外科多采用微創(chuàng)注射法和外科手術(shù)法進(jìn)行美容美體。微創(chuàng)注射法大多是利用注射器將填充材料填充軟組織凹陷處或隆乳材料通過乳房下皺壁打到乳腺后間隙、或者注射某些脂肪細(xì)胞激動(dòng)劑或促進(jìn)劑以促進(jìn)乳腺擴(kuò)增和乳房內(nèi)脂肪細(xì)胞體積增大和數(shù)量增多；而外科手術(shù)隆乳則大多是將乳房假體置入胸大肌或乳腺下，這些方法通常為醫(yī)學(xué)較為常用和規(guī)范的治療方法。無論采用微創(chuàng)注射、還是外科手術(shù)，都需要選擇合適的材料。目前的材料及方法多種多樣，可謂百花齊放，但良莠不齊。概括目前的材料及方法，主要分為自體組分和非自體成分兩大類。自體組分主要有自體干細(xì)胞移植、自體脂肪細(xì)胞顆粒注入、自體真皮脂肪瓣直接充填、誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞生長的重組人脂肪細(xì)胞激動(dòng)劑等。而非自體成分又分為生物類材料和非生物類材料。生物類材料主要有細(xì)胞因子、激素、膠原蛋白、透明質(zhì)酸鹽等注射劑；非生物材料又分為化學(xué)填充劑和天然藥物促進(jìn)劑。前者主要有液體石蠟、藥用硅膠油、硅膠囊假體植入、聚丙烯酰胺水凝膠等；而后者主要是從某些天然植物或中草藥中提取的單體成分或復(fù)合物制劑等?？梢哉f，進(jìn)行美容和美體時(shí)所使用的材料至關(guān)重要。因?yàn)?，所使用的材料不一，所引起的并發(fā)癥也不一樣。歸納起來，目前國內(nèi)使用的材料均存在這樣或那樣的問題、或者均存在著一定的應(yīng)用局限性和缺陷性及不足。自身脂肪干細(xì)胞填充是一種新的美容美體方法，使用受試者自身的脂肪干細(xì)胞，來修補(bǔ)組織缺陷或發(fā)育不全的乳房。由于該手術(shù)將不用植入人工填充物、且植入的脂肪干細(xì)胞擁有相同的基因，所以不會(huì)出現(xiàn)排異反應(yīng)。而且，由于使用的是從自身脂肪提取出來的干細(xì)胞，因此會(huì)很柔軟，看上去非常自然，還可避免人工填充物破裂或移位的危險(xiǎn)，疤痕較小，通常也不會(huì)變硬和疼痛，受術(shù)者不用為是否有毒或副作用感到擔(dān)憂。但該技術(shù)能達(dá)到可見的作用有限，且尚未達(dá)到臨床應(yīng)用的成熟水平，目前仍屬實(shí)驗(yàn)階段。而且，即使能順利使用自體干細(xì)胞移植進(jìn)行填充，在自體干細(xì)胞分離、純化、誘導(dǎo)、轉(zhuǎn)化、存活等各個(gè)環(huán)節(jié)較為繁瑣和麻煩，也存在一定難度和可操作性，且手術(shù)成本約3000美元至5000美元，費(fèi)用昂貴， 甚至存在較大風(fēng)險(xiǎn)性、以及遠(yuǎn)期療效和后遺癥等問題。如使用脂肪細(xì)胞顆粒注射隆胸，是通過手術(shù)抽取自體下腹部及大腿部的多余脂肪，在經(jīng)過分離純化成顆粒脂肪后直接注入局部組織，使缺陷或所需部位變得豐滿。雖然此方法無排異反應(yīng)及過敏反應(yīng)，但需要反復(fù)幾次才能達(dá)到預(yù)期效果，因此仍存在著手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)較大、受術(shù)者較為痛苦、后遺癥或合并癥不可避免等，特別是使用脂肪細(xì)胞顆粒注射一段時(shí)間后，大多數(shù)移植的脂肪細(xì)胞均會(huì)自動(dòng)發(fā)生脂肪液化、吸收、壞死、或出現(xiàn)皮下硬結(jié)、或再生性肉芽腫及感染性疾病等、嚴(yán)重時(shí)還會(huì)出現(xiàn)更加嚴(yán)重的后果；而且，對(duì)于隆胸來說，乳房嚴(yán)重萎縮或先天發(fā)育不良，則在手術(shù)后3-6個(gè)月內(nèi)，由于部分脂肪組織被吸收，使術(shù)后的乳房輕度的縮小、其挺拔度比假體隆胸遜色，少數(shù)人還需補(bǔ)充移植2-3次。如使用生物類填充劑膠原蛋白、明膠基質(zhì)、殼聚糖凝膠、透明質(zhì)酸等非自體的異體材料注射填充，雖然近期有一定效果，也相對(duì)安全，但有學(xué)者認(rèn)為，生物類材料注射不僅植入后的遠(yuǎn)期效果難以維持，而且常會(huì)引起組織的炎癥反應(yīng)、異物反應(yīng)、過敏反應(yīng)等。而注射另外一些非生物類材料的手術(shù)則是具有更大風(fēng)險(xiǎn)的手術(shù)方法，而且一旦出現(xiàn)并發(fā)癥、或注入的材料難以徹底清除，甚至可能給受術(shù)者帶來諸多后遺癥和終身痛苦。如使用化學(xué)填充劑聚丙烯酸胺水凝膠注射劑是一種無色透明類似果凍狀的液態(tài)物質(zhì)，雖然具有良好的親水性特點(diǎn)，適合用于身體軟組織充填，但由于聚丙烯酰胺水凝膠為液態(tài)，當(dāng)受重力作用后可向下流動(dòng)，隨著時(shí)間推移，水分被機(jī)體吸收、水凝膠周圍包膜攣縮大多可形成散在硬結(jié)，易于觸摸而與乳腺腫瘤混淆，且聚丙烯酸胺水凝膠難以在乳房組織形成固定狀態(tài)，具有一定的游走性、分散性和移位性。聚丙烯酸胺水凝膠作為化學(xué)制劑在體內(nèi)大劑量應(yīng)用，其長期存在的毒副作用和后期不良反應(yīng)已有越來越多的發(fā)現(xiàn)，如注射后局部破潰、竇道形成、乳房變形、出現(xiàn)硬結(jié)、血腫、包塊、或乳房形態(tài)學(xué)的變化、繼發(fā)感染，出現(xiàn)上肢運(yùn)動(dòng)障礙、疼痛等。已有一些曾接受聚丙烯酰胺水凝膠豐胸后的女性患者，她們術(shù)后除出現(xiàn)不同程度的乳房繼發(fā)感染、血腫、包塊，甚至這些注射材料在受術(shù)者乳房內(nèi)成為游離和游走的硬塊或硬結(jié)外，有些受術(shù)者乳房開始疼痛或瘙癢，且月經(jīng)周期改變、經(jīng)期嚴(yán)重失調(diào)， 嚴(yán)重者乳房變硬、變形，甚至不得不切除雙側(cè)乳房。特別是由于“聚丙烯酰胺水凝膠”中可能夾帶有毒的丙烯酰胺單體及其他重金屬，如流入血管，將造成循環(huán)系統(tǒng)傷害。另外，由于聚丙烯酰胺水凝膠(聚丙烯酰胺)不但是細(xì)菌的培養(yǎng)基，且在人體內(nèi)各種酶的作用下，有可能變成有劇毒的單體分子，不僅有可能導(dǎo)致癌癥，也可能損傷血液循環(huán)系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)和泌尿系統(tǒng)及損傷腎臟等，世界衛(wèi)生組織(WHO)已將這種物質(zhì)列為可疑致癌物之一，我國也于2006年起全面禁止使用之。還有硅凝膠一直被認(rèn)為是具有惰性和熱穩(wěn)定性的材料，多年來一直廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，尤其是整形醫(yī)學(xué)方面，但有關(guān)研究表明，硅凝膠及其中的雜質(zhì)，如其中的無機(jī)硅，有一定的生物毒性。遠(yuǎn)期反應(yīng)有兩個(gè)方面，局部主要形成異物肉芽腫，遠(yuǎn)期病理反應(yīng)，則由于硅凝膠泄漏經(jīng)淋巴管引流或被子巨噬細(xì)胞吞噬后引起遠(yuǎn)處的異物反應(yīng)，如發(fā)生腋窩聚硅酮淋巴結(jié)病，特別是在隆胸術(shù)后10年左右顯現(xiàn)。而且，硅凝膠假體隆胸術(shù)還需要做一個(gè)3cm 的手術(shù)切口，術(shù)后在乳房部位有可見疤痕，術(shù)后胸部稍有脹痛，如發(fā)生假體滲漏或破裂、假體排斥等，尤其是由于巨大的壓力所致，那么液態(tài)硅膠就可能移到附近組織，還可造成假體異形、移位、硬化、乳房包膜痙攣或萎縮等等。如果纖維囊也破裂或者被撕開，硅膠可能聚集在乳房里，其周圍會(huì)形成新的纖維囊。硅膠也有可能轉(zhuǎn)移到身體的其他部位。這些可能會(huì)導(dǎo)致乳房變形，影響乳房的穩(wěn)定性。硅凝膠假體置入隆胸后最常見的并發(fā)癥是纖維胞膜攣縮和其他并發(fā)癥，如凝膠性假瘤、乳腺癌等。而且，滲漏或破裂后的硅凝膠彌漫分布在纖維組織及乳腺小葉內(nèi)，部分乳腺小葉增生，腺泡上皮生長活躍，失去腺腔結(jié)構(gòu)，伴炎細(xì)胞浸潤及慢性肉芽腫改變，小葉內(nèi)纖維組織膠原化，并可見纖維瘤形成趨勢。部分組織為慢性炎性肉芽腫改變，組織中充滿膠樣物質(zhì)，周圍有異物巨細(xì)胞、慢性炎細(xì)胞浸潤和纖維組織透明變性。還有硅膠油注射式隆胸，應(yīng)用后的主要病理反應(yīng)為局部遠(yuǎn)期反應(yīng)，即慢性異物性肉芽腫性炎癥。臨床表現(xiàn)為乳腺局部硬結(jié)伴或不伴疼痛，長時(shí)間不能消除，影響患者身心健康；而且，有學(xué)者認(rèn)為，硅膠假體應(yīng)用、特別是硅膠微滴滲漏可能誘發(fā)自身免疫疾病、乳腺腫瘤等。 Kulber等對(duì)23例硅膠假體隆胸術(shù)后伴有腋窩淋巴結(jié)腫大者進(jìn)行淋巴結(jié)活檢，發(fā)現(xiàn)有7例硅膠肉芽腫與乳腺癌同時(shí)存在。國內(nèi)也有學(xué)者報(bào)道，使用硅膠假體隆胸術(shù)后并發(fā)乳腺癌1例。 同時(shí)，有學(xué)者觀察到受術(shù)者在膠樣物質(zhì)的周圍乳腺導(dǎo)管上皮明顯增生，屬癌前病變，具有乳腺浸潤癌發(fā)生的危險(xiǎn)性。為減少硅凝膠可能對(duì)身體造成影響，包括免疫性結(jié)締組織病或可能的致癌性及其它并發(fā)癥的發(fā)生，研制出了雙囊鹽水袋乳房假體。充注式鹽水假體有切口較小，能在術(shù)中決定乳房體積、及與硅凝膠假體相比包膜攣縮率較低等優(yōu)點(diǎn)。但雙囊鹽水袋乳房假體缺點(diǎn)為有液體感、易滲漏、隆胸的效果很難維持，且由于該假體比重較大，相對(duì)硅凝膠假體而言形態(tài)及手感欠佳，術(shù)后囊袋感明顯，水分子易滲漏，鹽水滲出后會(huì)造成乳房塌陷等影響外形， 同時(shí)人體內(nèi)長期放置會(huì)使鹽水囊內(nèi)部容易產(chǎn)生霉菌等問題，現(xiàn)在已基本被放棄。其它還有液體石蠟曾用于隆胸手術(shù)，但應(yīng)用液體石蠟注射法進(jìn)行隆乳，部分受術(shù)者出現(xiàn)了嚴(yán)重的并發(fā)癥，如乳房內(nèi)的硬結(jié)、腫塊、炎性反應(yīng)、以及遲發(fā)性肉芽腫反應(yīng)，石蠟在體表向下擴(kuò)散、擴(kuò)散后乳房外形不良、石蠟擴(kuò)散形成的石蠟瘤以及石蠟栓塞導(dǎo)致失明或死亡，等等。并有確鑿證據(jù)證明，用液體石蠟注射隆乳有誘發(fā)乳腺癌的可能；而且，上述并發(fā)癥發(fā)生后，治療難度很大，大部分只有行乳腺的切除術(shù)，以防晚期更嚴(yán)重的并發(fā)癥。因此，液體石蠟注射隆胸因副作用太大，早已停用或禁用。也有采用聚氨酯假體，但不能完全消除包膜攣縮，且這種假體置入更困難，在置入過程中聚氨酯涂層脆弱，很容易從硅凝膠外殼上脫罔?？傊S著科技的發(fā)展，醫(yī)用高分子材料研制的更新，美容美體術(shù)必會(huì)進(jìn)一步完善，從而為廣大女性提供更廣闊的求美空間，滿足廣大女士日益增長的審美需求。目前，發(fā)現(xiàn)越來越多的材料可以擴(kuò)增前脂肪細(xì)胞，促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的增殖與分化，這無疑為可以軟組織填充及隆胸手術(shù)帶來了新的思路。而前脂肪細(xì)胞由脂肪干細(xì)胞分化而來，是一類具有增殖和向成熟脂肪細(xì)胞分化能力的特異化的前體細(xì)胞，是很好的種子細(xì)胞來源，可以作為治療許多面部凹陷和軟組織缺
12陷及豐胸美體的有益填充物。為此，人們想到了在合適的微環(huán)境條件下，人體脂肪組織中的前脂肪細(xì)胞在體內(nèi)與體外均可以有效增殖，并分化為成熟脂肪細(xì)胞，而這種前脂肪細(xì)胞的增殖和分化，不僅可使脂肪細(xì)胞數(shù)量增多，而且，還可使脂肪細(xì)胞的體積增大，從而使原位脂肪組織充盈和總體積相對(duì)增大。然而，人體脂肪組織中的前脂肪細(xì)胞的數(shù)量非常有限，至今仍是制約其美容整形外科臨床應(yīng)用的一道難以突破的瓶頸。因此，要想得到足夠的自體前脂肪細(xì)胞必須大量的脂肪組織，而在臨床上要想獲得大量自體脂肪組織必須合適的人群，即必須有足夠脂肪組織可以抽取的人，而通常乳房發(fā)育不良的人，其可抽取的自體脂肪組織非常有限，而且，即使可以部分抽取，其難度也較大、且風(fēng)險(xiǎn)性更大。如果希望依靠很少的原位組織去進(jìn)行原代培養(yǎng)的前脂肪細(xì)胞，其在體外培養(yǎng)的時(shí)間雖然較短，但一般不超過7-8代。因此，無論作為種子細(xì)胞用于組織工程的研究，還是作為脂肪細(xì)胞注射移植而用于臨床充填修復(fù)軟組織缺損，都需要一種更好的方法，使之即可在體外大量擴(kuò)增，也能在體內(nèi)中胚層和皮下脂肪組織中自然增殖。某些細(xì)胞生長因子作為一類高度生物活性的有絲裂原，均具有高效促進(jìn)前脂肪細(xì)胞增殖的作用；而且這些細(xì)胞生長因子還可參與調(diào)節(jié)前脂肪細(xì)胞的分化及代謝功能，因此有望通過應(yīng)用合理的刺激方式，達(dá)到前脂肪細(xì)胞的有效擴(kuò)增。目前已有諸多細(xì)胞生長因子在成脂分化過程中作用的研究報(bào)道。IGF-I是比較確定的有效成脂劑，但EGF、TGF-β、 b-FGF、PDGF、TNF-a 2、IL-11等細(xì)胞生長因子有研究認(rèn)為其抑制成脂分化，也有認(rèn)為能促進(jìn)成脂分化，還有認(rèn)為未見明顯成脂分化作用；特別是這些細(xì)胞生長因子在不同種屬的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或不同來源的細(xì)胞及不同實(shí)驗(yàn)劑量時(shí)，對(duì)其相應(yīng)的靶細(xì)胞的作用又不完全一致。為此，我們希望可以利用上述學(xué)術(shù)理論、并希望克服單獨(dú)依賴細(xì)胞生長因子的弊端，通過從自體脂肪組織中得到前體脂肪細(xì)胞，然后，根據(jù)不同物質(zhì)或成分促增殖分化的作用機(jī)制互補(bǔ)，通過設(shè)計(jì)和設(shè)定合適的微環(huán)境條件和促前脂肪細(xì)胞增殖分化的復(fù)合體系聯(lián)合介導(dǎo)和共濟(jì)協(xié)同的干預(yù)作用下，在體內(nèi)或體外加快促進(jìn)其增殖分化成為成熟的脂肪細(xì)胞， 最后儲(chǔ)積脂肪，以此用它來填充面部凹陷、自身的軟組織缺損和促進(jìn)女性乳房內(nèi)脂肪細(xì)胞數(shù)量增多和體積增大，以達(dá)到自然美容、美體和豐胸的作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對(duì)背景技術(shù)中存在的缺點(diǎn)和問題加以改進(jìn)、創(chuàng)新，提供一種可用于美容和美體的促自體外周前體脂肪細(xì)胞增殖和增大的復(fù)合誘導(dǎo)劑及其制備方法。為了克服解決上述背景技術(shù)中存在的缺點(diǎn)(1) 口服激素類藥物，以調(diào)節(jié)人體的激素水平，促進(jìn)乳腺發(fā)育，完善第二性征，但作用緩慢、長期服用副作用大，特別是容易誘發(fā)或促發(fā)乳腺癌。(2)利用機(jī)械的物理作用，如人工按摩、儀器刺激等，可改善乳房組織的血液循環(huán)， 而且目前臨床上通用的微電腦豐胸儀模擬人體的生物微電波，刺激細(xì)胞更新再生，加速胸部血液循環(huán)，增強(qiáng)胸部纖維組織的韌性，促進(jìn)胸腺發(fā)育，從而改善胸部松弛、下垂、萎縮、外擴(kuò)等現(xiàn)象。其次還有針灸和電療隆胸法等，但這些需要方法合理、長期堅(jiān)持，而且對(duì)相對(duì)老化的乳房隆起作用不明顯，且外形欠佳。(3)通過外科手術(shù)一般采用填充材料填充達(dá)到填補(bǔ)效果，如使用生物類填充劑膠原蛋白、明膠基質(zhì)、殼聚糖凝膠、透明質(zhì)酸等非自體的異體材料注射填充，雖然近期有一定效果，也相對(duì)安全，但有學(xué)者認(rèn)為，生物類材料注射不僅植入后的遠(yuǎn)期效果難以維持，而且常會(huì)引起軟組織或乳房組織的炎癥反應(yīng)、異物反應(yīng)、過敏反應(yīng)等。而注射另外一些非生物類材料的手術(shù)則是具有更大風(fēng)險(xiǎn)的手術(shù)方法，而且一旦出現(xiàn)并發(fā)癥、或注入的材料難以徹底清除，甚至可能給受術(shù)者帶來諸多后遺癥和終身痛苦。(4)當(dāng)前較為先進(jìn)的技術(shù)_自體脂肪注射術(shù)，如使用脂肪細(xì)胞顆粒注射填充，是通過手術(shù)抽取自體下腹部及大腿部的多余脂肪，在經(jīng)過分離純化成顆粒脂肪后直接注入需要的部位。雖然此方法無排異反應(yīng)及過敏反應(yīng)，但需要反復(fù)幾次才能達(dá)到預(yù)期效果，因此仍存在著手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)較大、受術(shù)者較為痛苦、后遺癥或合并癥不可避免等，特別是使用脂肪細(xì)胞顆粒注射隆胸一段時(shí)間后，大多數(shù)移植的脂肪細(xì)胞均會(huì)自動(dòng)發(fā)生脂肪液化、吸收、壞死、或出現(xiàn)皮下硬結(jié)、或再生性肉芽腫及感染性疾病等、嚴(yán)重時(shí)還會(huì)出現(xiàn)更加嚴(yán)重的后果；而且，乳房嚴(yán)重萎縮或先天發(fā)育不良，則在手術(shù)后3-6個(gè)月內(nèi)，由于部分脂肪組織被吸收，使術(shù)后的乳房輕度的縮小、其挺拔度比假體隆胸遜色，少數(shù)人還需補(bǔ)充移植2-3次。(5)某些細(xì)胞生長因子作為一類高度生物活性的有絲裂原，均具有高效促進(jìn)前脂肪細(xì)胞增殖的作用；而且這些細(xì)胞生長因子還可參與調(diào)節(jié)前脂肪細(xì)胞的分化及代謝功能，因此有望通過應(yīng)用合理的刺激方式，達(dá)到前脂肪細(xì)胞的有效擴(kuò)增。目前已有諸多細(xì)胞生長因子在成脂分化過程中作用的研究報(bào)道。IGF-I是比較確定的有效成脂劑，但EGF、 TGF-β、b-FGF、PDGF、TNF-a 2、IL-Il等細(xì)胞生長因子有研究認(rèn)為其抑制成脂分化，也有認(rèn)為能促進(jìn)成脂分化，還有認(rèn)為未見明顯成脂分化作用；特別是這些細(xì)胞生長因子在不同種屬的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物或不同來源的細(xì)胞及不同實(shí)驗(yàn)劑量時(shí)，對(duì)其相應(yīng)的靶細(xì)胞的作用又不完全一致。如何確定這些物質(zhì)的最佳給藥濃度，如何避免這種局限及不足，如何提高治療的科學(xué)性和有效性及合理性是我們有待解決的問題。本發(fā)明所提供的一種可用于美容和美體的促自體外周前體脂肪細(xì)胞增殖和增大的復(fù)合誘導(dǎo)劑及其制備方法，正是針對(duì)上述存在的問題或局限設(shè)計(jì)研制和改進(jìn)創(chuàng)新的局部美容和美體制劑，本發(fā)明避免了當(dāng)前技術(shù)手段的一些不足之處，從局部促進(jìn)外周前脂肪細(xì)胞增殖與分化，使的治療部位脂肪細(xì)胞增多，達(dá)到填充，豐滿的作用，從而達(dá)到自然美容美體的效果。本發(fā)明一種可用于美容和美體的促自體外周前體脂肪細(xì)胞增殖和增大的復(fù)合誘導(dǎo)劑，其特征是由下述重量百分比的原料制成重組人神經(jīng)肽Y全長多肽0.0001 X IO-3 IX IO-3還原型輔酶II0.1 X IO-3 0.1乙酰輔酶A0.1 X ΙΟ·3 0.1堿性成纖維細(xì)胞生長因子0.0001 X IO-3 IX IO.3地塞米松注射液0.01 X IO-3 0.1自體富集血小板血漿5 100油酸0.005 10游離脂肪酸0.1 10黃芪多糖0.0 卜 10蒲黃總黃酮0.0 卜 10人參皂甙Rbl0.0 卜 10姜黃素0.001 1.0
上述原料的總重量百分比為100%。
本發(fā)明所述的一種可用于美容和美體的促自體外周前體脂肪細(xì)胞增殖和增大的
復(fù)合誘導(dǎo)劑，其特征是由下述優(yōu)選重量百分比的原料制成
15重組人神經(jīng)肽Y全長多肽0.1X10還原型輔酶II0.0033乙酰輔酶A0.0035堿性成纖維細(xì)胞生長因子0.1X10自體富集血小板血漿86.4油酸0.52游離脂肪酸0.52黃芪多糖6蒲黃總黃酮6人參皂甙Rbl0.5姜黃素0.053上述原料的總重量百分比為100%。本發(fā)明的另一目的是提供一種可用于美容和美體的促自體外周前體脂肪細(xì)胞增殖和增大的復(fù)合誘導(dǎo)劑的制備方法(1)富集血小板血漿的制備嚴(yán)格按照人體抽血的規(guī)范化要求，迅速采集受術(shù)者的肘中靜脈血、并同時(shí)收集到含抗凝劑的采血管中，輕輕顛倒混勻；然后以1500g離心 6min，吸取全部上層血漿和中間層血小板濃縮物及緊鄰中間層的部分紅細(xì)胞至另一離心管，再以IOOOg離心6min，此時(shí)液體分為兩層，吸取四分之三上清液棄掉，剩余的即為富集血小板血漿；(2)水溶性成分的配制按上述一種促進(jìn)自體外周前體脂肪細(xì)胞增殖和增大的富集血小板血漿復(fù)合誘導(dǎo)劑的原料配比，用分析天平稱取黃芪多糖、蒲黃總黃酮溶于自體血漿中，充分?jǐn)嚢枞芙猓旌暇鶆?，然后將此體系自然放置，待三十分鐘后，過濾消毒后，再依次加入重組人神經(jīng)肽Y全長多肽、還原型輔酶II、乙酰輔酶A、堿性成纖維細(xì)胞生長因子， 待用；(3)油溶性成分的配制按照上述劑量，用分析天平稱取油酸，并置于洗凈消毒過干燥過的三角燒瓶中；然后加入游離脂肪酸，并在不斷攪拌的條件下加熱至50°C，使其充分混合均勻，將其作為油溶性成分，消毒待用；(4)醇溶性成分的配制用分析天平準(zhǔn)確稱取配方量的姜黃素，置于另一個(gè)經(jīng)過洗凈消毒干燥過的三角瓶中，然后加入等量lmol/L的氫氧化鈉溶解后，混合均勻，反應(yīng)三十分鐘，制備成鈉鹽，再用lmol/L氯化氫調(diào)整溶液pH值到5. 5-6. 5之間即可，然后消毒待用；(5)用法待判斷或評(píng)價(jià)其完全符合國家相關(guān)規(guī)定和標(biāo)準(zhǔn)及批準(zhǔn)文號(hào)后，即可在合法的醫(yī)療單位或美容機(jī)構(gòu)使用。可通過美容注射器分別吸取不同體系的液體于皮下注射即可。本發(fā)明組方基本原則簡單地講，本發(fā)明的組方采用的是水溶性、油溶(脂溶)性和醇溶性三種液體相所共同組成的用于促進(jìn)人體前脂肪細(xì)胞增殖和分化的誘導(dǎo)劑體系，通過其對(duì)離體培養(yǎng)細(xì)胞或在體誘導(dǎo)刺激的方式使前脂肪細(xì)胞有限增殖和有序分化，以實(shí)現(xiàn)和達(dá)成皮下脂肪細(xì)胞數(shù)量增加和體積增大及維持其細(xì)胞血供和營養(yǎng)等，并保持和維護(hù)該脂肪細(xì)胞在生理?xiàng)l件下的正常生存、生長和生命活動(dòng)。具體地講，本發(fā)明的組方采用國際上最新發(fā)現(xiàn)的外周脂肪細(xì)胞激動(dòng)劑神經(jīng)肽 Y(NPY)的高效和高量表達(dá)脂肪細(xì)胞增殖分化效應(yīng)分子及促進(jìn)中胚層及皮下脂肪組織中前脂肪細(xì)胞增殖和分化的生物學(xué)作用；并發(fā)揮堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)具有協(xié)同促進(jìn)前脂肪細(xì)胞在體內(nèi)的增殖和分化和加快皮下組織內(nèi)形成血管、使移植或增殖分化后的脂肪細(xì)胞縮短在體內(nèi)缺血缺氧時(shí)間、以提高更多脂肪細(xì)胞存活率的優(yōu)勢作用；再以乙酰輔酶A(Acetyl CoA)為前脂肪細(xì)胞提供合成脂肪酸和脂肪所需要的前體原料以加速前脂肪細(xì)胞的分化速率，促使脂肪細(xì)胞中脂肪含量更多增加和細(xì)胞體積不斷增大的作用效果；同時(shí)以還原型輔酶II(NADP)作為體內(nèi)脂肪合成酶的重要輔助因子及其在體內(nèi)脂肪合成代謝反應(yīng)中發(fā)揮遞氫作用和抗氧化作用，使前脂肪細(xì)胞在增殖分化過程中盡量減少自由基所致的過氧化損傷，以維持原位脂肪細(xì)胞或已增殖和分化后的脂肪細(xì)胞存活和代謝穩(wěn)定。最后輔以富集血小板自體血漿所具有的細(xì)胞生長、生存和生活所需要的各種營養(yǎng)成分以及氧分壓、二氧化碳含量、滲透壓、PH值、無機(jī)離子、粘附因子及細(xì)胞生長因子等對(duì)前脂肪細(xì)胞的增殖分化和脂肪組織的形成等均具有重要的調(diào)控作用，特別是富集血小板自體血漿中的血小板刺激、釋放和激活的各種細(xì)胞生長因子，使前脂肪細(xì)胞得到最大限度的增殖和分化，從而使其細(xì)胞數(shù)量和體積得到明顯的增加和提升。組方中各種功效成分的作用機(jī)制，如下神經(jīng)肽Y(NPY)的作用機(jī)制神經(jīng)肽Y(NPY)是最為活躍的多肽類遞質(zhì)、也是最新發(fā)現(xiàn)的外周脂肪細(xì)胞的激動(dòng)劑和效應(yīng)分子。NPY存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的NPY在其多樣化受體的協(xié)助下，不僅可通過神經(jīng)系統(tǒng)傳遞與L印tin、Ghrelin. Insulin、OrexinA和OrexinB等其它調(diào)控因子的共同作用，完成其重要而又復(fù)雜的食物攝取和能量平衡的調(diào)控，以加強(qiáng)刺激食欲，明顯增加能量攝入，同時(shí)降低機(jī)體的熱量消耗，使能量在體內(nèi)過量蓄積，且能提高脂肪組織中脂蛋白脂酶和乙酰輔酶A羧化酶活性，不斷刺激脂肪生成并逐步形成脂肪組織增多；而存在于外周組織中的NPY，則可在某些因素誘導(dǎo)其表達(dá)增多，使游離在外周組織和體液微環(huán)境及細(xì)胞基質(zhì)中的NPY增多，直接和間接地作用于脂肪蓄積的關(guān)聯(lián)細(xì)胞及前體脂肪細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞等引起脂肪細(xì)胞增殖和分化而進(jìn)一步導(dǎo)致局部或全身脂肪組織的增多，特別是通過與外周脂肪細(xì)胞膜上G蛋白偶聯(lián)受體(NPY1R、NPY2R、NPY3R、NPY4R、NPY5R 和NPY6R)特異性結(jié)合，從而發(fā)揮其對(duì)前脂肪細(xì)胞增殖分化的促進(jìn)作用。而這種生物學(xué)作用及對(duì)脂肪細(xì)胞增殖分化的影響與NPY對(duì)過氧化物增殖體活化受體(PPARs)家族、C/EBPs家族、脂肪細(xì)胞確定分化依賴因子1(ADD1/SREBP1)等參與調(diào)節(jié)脂肪細(xì)胞分化蛋白的表達(dá)增多及多因素調(diào)控作用有關(guān)。我們的研究也證實(shí)應(yīng)用合適濃度的NPY，不僅能明顯促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的增殖和分化，且能顯著提高該細(xì)胞C/EBP α和PPAR γ的表達(dá)水平，而PPAR γ對(duì)脂
17肪細(xì)胞分化進(jìn)行調(diào)控是通過與配體結(jié)合被激活后再與受體結(jié)合形成PPAR-RXR異二聚體， 進(jìn)一步同反應(yīng)元件結(jié)合激活靶基因最終導(dǎo)致脂肪細(xì)胞分化成熟，而C/EBP α在脂肪細(xì)胞分化中起著關(guān)鍵性作用，促進(jìn)PPAR Y的高表達(dá)，保持分化細(xì)胞的表型。這說明，NPY加快促進(jìn)前脂肪細(xì)胞增殖和分化的分子調(diào)控機(jī)制很可能是與上調(diào)PPARY、C/ΕΒΡα表達(dá)水平有關(guān)， 同時(shí)這也提示，NPY能作為脂肪細(xì)胞膜上受體NPYR的有效促進(jìn)劑或激動(dòng)劑。堿性纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)作用機(jī)制前脂肪細(xì)胞的增殖和分化受NPY的影響和調(diào)控。然而任何細(xì)胞的生存都必須依賴于血管為之提供所必需的營養(yǎng)物質(zhì)，血管生成對(duì)機(jī)體正常生理功能的維持有至關(guān)重要的作用。而血管生成是一個(gè)在原有的毛細(xì)血管或微靜脈基礎(chǔ)上通過血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖遷移，從先前存在的血管處以芽生的方式生成新的毛細(xì)血管的受高度調(diào)控的過程。血管生成首先要在相關(guān)血管生成因子的作用下激活內(nèi)皮細(xì)胞， 激活的內(nèi)皮細(xì)胞再經(jīng)過遷移、增殖、分化的過程最終形成新的毛細(xì)血管，其中堿性纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)就是其中最為常見、最有潛能刺激內(nèi)皮細(xì)胞遷移、增殖、分化的促血管生成因子之一，它在新生血管形成過程中的多個(gè)環(huán)節(jié)如毛細(xì)血管基底膜降解、內(nèi)皮細(xì)胞遷移增生、膠原合成及小血管形成等過程中，均有明顯的促進(jìn)作用。因此，我們配方中設(shè)計(jì)并添加bFGF，不僅有利于前脂肪細(xì)胞的增殖分化發(fā)揮作用，而且對(duì)脂肪組織中的血管生成具有重要意義。不僅如此，bFGF是一種重要的活性多肽和功能蛋白，也是一種廣譜的有絲分裂源，對(duì)來源于中胚層的和外胚層的神經(jīng)細(xì)胞具有明顯的促進(jìn)增殖作用。加入重組人bFGF 可對(duì)前脂肪細(xì)胞有明顯的促增殖作用，一周可到達(dá)高峰，與對(duì)照組比較差異顯著；且加入的 bFGF能刺激前脂肪細(xì)胞倍增時(shí)間可提前12小時(shí)。除此之外，加入bFGF的前脂肪細(xì)胞分化明顯提前，細(xì)胞內(nèi)合成的脂肪小滴更多，使脂肪細(xì)胞體積增大，與對(duì)照組相比差異均有顯著性。由此可見，bFGF對(duì)體外培養(yǎng)的前脂肪細(xì)胞的有明顯的促增殖分化作用，且也能促進(jìn)了脂肪細(xì)胞的在體內(nèi)的增殖和分化；而且，它對(duì)人前脂肪細(xì)胞還有明顯的促成脂作用，加上其縮短了移植脂肪組織內(nèi)形成血管的時(shí)間，使移植的脂肪細(xì)胞縮短了體內(nèi)缺血缺氧的時(shí)間， 有更多的脂肪細(xì)胞存活，因此，其添加具有重要意義。還原型輔酶II (NADPH)的作用機(jī)制還原型輔酶II (NADP)是煙酰胺腺嘌呤二核苷酸，有氧化型(NADP+)和還原型(NADPH)兩種形式，是體內(nèi)許多還原酶的重要輔助因子， 它在前脂肪細(xì)胞增殖分化及體內(nèi)許多生化代謝反應(yīng)中發(fā)揮遞氫作用，特別是NADPH還可維持谷胱甘肽于還原狀態(tài)，為脂肪合成代謝需要的相關(guān)酶提供足夠的還原劑，保護(hù)一些含-SH 蛋白質(zhì)及脂肪合成酶免受氧化劑損傷，從而，提高前脂肪細(xì)胞良好的分化能力，同時(shí)使得前脂肪細(xì)胞在增殖和分化過程中盡可能減少自由基所導(dǎo)致的過氧化損傷，維持原位脂肪細(xì)胞或已增殖和分化后的脂肪細(xì)胞的存活和代謝穩(wěn)定。乙酰輔酶A的作用機(jī)制乙酰輔酶A (Acetyl CoA)是人體內(nèi)重要的生化樞紐物質(zhì)之一，它是丙酮酸脫羧和脂肪酸的氧化的產(chǎn)物，同時(shí)還是合成脂肪酸、酮體等能源物質(zhì)的前體物質(zhì)，也是合成膽固醇及其衍生物等生理活性物質(zhì)的前體物質(zhì)，即乙酰輔酶A可通過一系列生化反應(yīng)合成脂肪酸，而脂肪酸再經(jīng)生化合成轉(zhuǎn)變?yōu)橹?。由于脂肪是機(jī)體內(nèi)疏水性的高度還原的能源貯存形式，可被大量貯存，且利用速度較慢，這正好可以加速前脂肪細(xì)胞分化，促使脂肪細(xì)胞中脂肪含量增加、細(xì)胞體積增大。富集血小板自體血漿的作用機(jī)制前脂肪細(xì)胞在增殖和分化的整個(gè)過程中，該細(xì)胞所處的微環(huán)境條件及其介質(zhì)的影響至關(guān)重要，包括細(xì)胞生長和生存所需要的各種營養(yǎng)成分以及氧分壓、二氧化碳含量、滲透壓、PH值、無機(jī)離子、粘附因子及細(xì)胞生長因子等對(duì)前脂肪細(xì)胞的增殖分化和脂肪組織的形成等均具有重要的調(diào)控作用。富集血小板的自體血漿中含有前脂肪細(xì)胞增殖和分化所需要的最合適的微環(huán)境條件及該細(xì)胞生存、生長和生活(生命活動(dòng))所需要的最基本的體液和營養(yǎng)物質(zhì)及碳水化合物、脂類、蛋白質(zhì)、肽、氨基酸、維生素、無機(jī)鹽、微量元素、激素、酶、核酸、抗氧化劑、細(xì)胞生長因子及其它成分和能量等。氨基酸是組成蛋白質(zhì)的基本單位，也是細(xì)胞最基本的營養(yǎng)素，維生素是維持細(xì)胞生長的生物活性物質(zhì)，碳水化合物可提供細(xì)胞的能源，無機(jī)鹽是細(xì)胞組成所必需并參與細(xì)胞的代謝和細(xì)胞微環(huán)境中離子濃度的調(diào)控，促細(xì)胞生長因子能促進(jìn)和加快細(xì)胞生長發(fā)育及分裂增殖；除此之外，自體血漿還具備細(xì)胞生存和增殖的生理學(xué)和生物化學(xué)限度內(nèi)最佳的離子濃度、氣相含量(氧氣和二氧化碳含量)、滲透壓和PH條件等，是中胚層細(xì)胞及皮下脂肪細(xì)胞生存和生長的最佳環(huán)境條件，也是皮膚組織中新生細(xì)胞分裂和增殖的良好培養(yǎng)基，十分有利于細(xì)胞在生命活動(dòng)過程中的新陳代謝。特別是富集血小板自體血漿中的血小板具有刺激、釋放和激活各種細(xì)胞生長因子的功能，而這些被釋放和激活的相關(guān)細(xì)胞因子又會(huì)強(qiáng)化NPY、bFGF 等的生物學(xué)效應(yīng)、并在它們的共同參與之下，使前脂肪細(xì)胞得到最大限度的增殖和分化，從而，使其細(xì)胞數(shù)量和體積得到明顯的增加和提升。油酸(OA)的作用機(jī)制油酸(OA)為單不飽和脂肪酸。有研究證實(shí)，油酸能促進(jìn)脂肪細(xì)胞PPAR y、C/EBP α及脂蛋白脂酶(LPL)mRNA的表達(dá)，而C/ ΒΙ^、PPARs及LPL是脂肪細(xì)胞分化的決定性調(diào)控因子，在脂肪細(xì)胞分化中發(fā)揮關(guān)鍵性調(diào)節(jié)作用。PPARy、C/EBPa及 LPL的表達(dá)增高，表明油酸可促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的分化；而且，研究結(jié)果也表明，采用油酸誘導(dǎo)分化前脂肪細(xì)胞7 后，可見到脂肪細(xì)胞形態(tài)變圓、體積增大、甘油三酯總量明顯增加， 且油紅0染色觀察發(fā)現(xiàn)到其胞漿中含有豐富脂滴，細(xì)胞呈戒環(huán)狀，具備典型成熟脂肪細(xì)胞外觀。還有研究采用幾種已知的具有誘導(dǎo)前脂肪細(xì)胞分化作用的刺激因子，包括油酸、胰島素、IBMX、ASP和DEX，誘導(dǎo)前脂肪細(xì)胞分化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，油酸對(duì)前脂肪細(xì)胞的分化作用最強(qiáng)， 且其誘導(dǎo)分化可在很短的時(shí)間內(nèi)完成04h)，而且分化均勻、分化率高(>99%)，特別是明顯增加了前脂肪細(xì)胞中甘油三酯(TG)的合成量。游離脂肪酸(FFA)的作用機(jī)制游離脂肪酸(FFA)是合成脂肪的重要原料，也可加速促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化。其作用可能是通過調(diào)節(jié)11 β-羥化類固醇脫氫酶1(11 β-HSD1)的表達(dá)和活性所致。研究發(fā)現(xiàn)，如果11 β -HSDl基因激活或表達(dá)增強(qiáng)，則將明顯促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的分化，而當(dāng)11 β-HSDl基因沉默時(shí)，則大大抑制脂肪細(xì)胞的分化。這說明，脂肪細(xì)胞的正常分化需要11 β -HSDl的存在，而11 β -HSDl的高表達(dá)或過表達(dá)，則能夠加快促進(jìn)脂肪細(xì)胞的分化。而且，游離脂肪酸(FFA)促進(jìn)前體脂肪細(xì)胞分化還可通過對(duì)PPAR γ 2和C/EBP α 的調(diào)控完成的，且Ρ38ΜΑΡΚ通路是脂肪酸調(diào)控PPAR γ 2的重要途徑之一。黃芪多糖(APS)的作用機(jī)制黃芪多糖(APS)是黃芪的主要成分，它可增加脂肪細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取、利用和轉(zhuǎn)運(yùn)，從而促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的分化。研究還發(fā)現(xiàn)，黃芪多糖 (APS)在一定濃度范圍內(nèi)對(duì)前脂肪細(xì)胞的生長表現(xiàn)為增殖趨勢，且呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系； 特別是，黃芪多糖(APQ能促進(jìn)前脂肪細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)積聚，促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的不斷分化；而且，黃芪多糖(APQ還能夠在mRNA及蛋白水平促進(jìn)前脂肪細(xì)胞分化關(guān)鍵因子PPAR γ和C/ EBP α mRNA的表達(dá)，使前脂肪細(xì)胞增殖加快和脂肪積聚增多，促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的增殖和分化以及增加脂肪細(xì)胞分化過程中的脂質(zhì)堆積，最終導(dǎo)致脂肪細(xì)胞數(shù)量和體積增大。
蒲黃總黃酮(PTF)的作用機(jī)制蒲黃總黃酮(PTF)是蒲黃的主要有效成分，是蒲黃活血化瘀的主要活性成分之一，具有強(qiáng)烈的刺激動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生前列環(huán)素(PGU)和組織型纖溶酶原激活物(tPA)的活性；同時(shí)，可改善成熟脂肪細(xì)胞的葡萄糖消耗和游離脂肪酸(FFA)的溢出。蒲黃總黃酮(PTF)除了改善脂肪細(xì)胞對(duì)葡萄糖攝取，亦可提高其儲(chǔ)脂能力，減少外周游離脂肪酸(FFA)的濃度。而且，它同樣能增加脂肪細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取和利用；且蒲黃總黃酮(PTF)還能促進(jìn)PPAR YmRNA及C/EBP α的表達(dá)，其效應(yīng)與PPAR γ激動(dòng)劑格列酮相似，表現(xiàn)為促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的分化，并能促使前脂肪細(xì)胞在不斷分化過程中出現(xiàn)一定量的脂質(zhì)積聚，從而使前脂肪細(xì)胞的體積增大。人參皂苷Rbl (Rbl)的作用機(jī)制人參皂苷Rbl (Rbl)是人參和西洋參中的主要活性成分，具有降低血糖、增加脂肪細(xì)胞中脂質(zhì)的生成和分化。而脂肪細(xì)胞的分化又受到過氧化物酶體增殖物活化受體(PPARy)和CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白α (C/EBP α )兩類轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控，且兩者又共同調(diào)節(jié)其下游與維持成熟脂肪細(xì)胞表型的有關(guān)基因的表達(dá)，并且參與脂肪細(xì)胞的糖脂代謝。人參皂苷Rbl通過結(jié)合于脂肪細(xì)胞PPAR γ的配體結(jié)合域激活PPAR Y，從而上調(diào)PPAR γ和C/ΕΒΡα的表達(dá)，促進(jìn)前脂肪細(xì)胞向脂肪細(xì)胞的分化和抑制脂肪分解。正是由于人參皂苷Rbl (Rbl)能激活和過表達(dá)PPARy和C/ΕΒΡα，因此促進(jìn)了前脂肪細(xì)胞的分化。有研究表明，在脂肪細(xì)胞分化過程中，兩者的表達(dá)量明顯增加，其中 PPARy選擇性表達(dá)于脂肪細(xì)胞。另有研究證實(shí)，人參皂甙Rbl (Rbl)能夠促進(jìn)前脂肪細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞的程度，增加脂肪及甘油三酯(TG)的含量。在細(xì)胞和分子水平上，人參皂甙 Rbl(Rbl)正是通過增加PPAR γ和C/ΕΒΡα的表達(dá)量促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的，同時(shí)抑制基礎(chǔ)脂解，這可能是人參皂甙Rbl (Rbl)促進(jìn)前脂肪細(xì)胞分化及該細(xì)胞體積增大的原因之一。姜黃素(curcumin)的作用機(jī)制姜黃素(curcumin)是從中藥姜黃中提取的多酚類化合物和膳食食用色素，也是姜黃中主要活性成分。通常，姜黃素低濃度時(shí)能促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的增殖，而高濃度時(shí)則抑制其增殖，我們利用這一特性可使姜黃素在不同濃度時(shí)對(duì)前脂肪細(xì)胞增殖進(jìn)行必要的調(diào)控。同時(shí)，還可利用姜黃素具有促進(jìn)前脂肪細(xì)胞分化和降低脂肪細(xì)胞炎癥反應(yīng)等特點(diǎn)加強(qiáng)對(duì)前脂肪細(xì)胞分化的調(diào)控。而姜黃素的這些生物學(xué)效應(yīng)與其調(diào)控脂肪細(xì)胞內(nèi)多種關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，姜黃素可誘導(dǎo)PPAR γ表達(dá)、并增強(qiáng)其轉(zhuǎn)錄活性。姜黃素可與PPAR γ配體結(jié)合域反應(yīng)，誘導(dǎo)人皮下組織脂肪細(xì)胞分化。對(duì)姜黃素促進(jìn)脂肪細(xì)胞分化的研究顯示，用表達(dá)DNA結(jié)合區(qū)、人PPAR γ配體結(jié)合域和熒光素酶報(bào)告基因的載體轉(zhuǎn)染CV-I細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)姜黃素、脫甲氧基姜黃素及雙脫甲氧基姜黃素均有明顯的PPAR γ配體結(jié)合活性。由此可見，姜黃素使PPAR γ表達(dá)升高，可能是姜黃素作為配體直接與PPAR γ發(fā)生相互作用，并通過其正反饋調(diào)節(jié)機(jī)制上調(diào)PPAR y mRNA表達(dá)，從而促進(jìn)皮下前脂肪細(xì)胞的分化及脂肪合成增加，最終使脂肪細(xì)胞體積得以增大。此外，姜黃素結(jié)構(gòu)簡單易于合成，適合開發(fā)頗具價(jià)值的天然藥物，臨床應(yīng)用也具有良好的前景。綜上所述，本發(fā)明主要具有以下有益效果1.組方創(chuàng)新本組方也是本發(fā)明的技術(shù)核心，本發(fā)明組方將不同生物功效、作用途徑和理化性質(zhì)特性的功效成分有機(jī)結(jié)合、并組成良好的共濟(jì)協(xié)同作用所共同組成的用于促進(jìn)人體前脂肪細(xì)胞增殖和分化的誘導(dǎo)劑體系，通過其對(duì)離體培養(yǎng)細(xì)胞或在體誘導(dǎo)刺激的方式使前脂肪細(xì)胞有限增殖和有序分化，以實(shí)現(xiàn)和達(dá)成皮下脂肪細(xì)胞數(shù)量增加和體積增大及維持其細(xì)胞血供和營養(yǎng)等，并保持和維護(hù)該脂肪細(xì)胞在生理?xiàng)l件下的正常生存、生長和生命活動(dòng)。通俗地說，本發(fā)明產(chǎn)品不僅促進(jìn)前脂肪細(xì)胞有限增殖和有序分化，同時(shí)為在體新生長的脂肪細(xì)胞提供生存、生長所需的各種條件，本組方可以全方位，多層次地作用于前脂肪細(xì)胞。另外，本組方的原料不是隨意地添加。因?yàn)橛行┕πС煞?，過高或過低的濃度對(duì)前脂肪細(xì)胞沒有作用，甚至還可能引起的直接細(xì)胞毒性及生長和增殖抑制、甚至直接導(dǎo)致細(xì)胞損傷、破壞及無法生長，所以，只有充分研究各種功效成分添加濃度、增效協(xié)同劑復(fù)配，對(duì)前脂肪細(xì)胞有效生物學(xué)作用的影響，才能科學(xué)合理地應(yīng)用這些成分，并達(dá)到相應(yīng)的效果。本發(fā)明通過反復(fù)的實(shí)驗(yàn)探索，摸索出了合適濃度，對(duì)促進(jìn)前脂肪細(xì)胞增殖和分化具有確定的作用，可促進(jìn)其增殖分化成為成熟的脂肪細(xì)胞。2.協(xié)同效果好本組方采用國際上最新發(fā)現(xiàn)的外周脂肪細(xì)胞激動(dòng)劑神經(jīng)肽Y的高效促進(jìn)前脂肪細(xì)胞增殖和分化的生物學(xué)作用；并發(fā)揮堿性成纖維細(xì)胞生長因子具有協(xié)同促進(jìn)前脂肪細(xì)胞在體內(nèi)的增殖和分化和加快皮下組織內(nèi)形成血管、使移植或增殖分化后的脂肪細(xì)胞縮短在體內(nèi)缺血缺氧時(shí)間、以提高更多脂肪細(xì)胞存活率的優(yōu)勢作用；再以乙酰輔酶 A為前脂肪細(xì)胞提供合成脂肪酸和脂肪所需要的前體原料以加速前脂肪細(xì)胞的分化速率， 促使脂肪細(xì)胞中脂肪含量更多增加和細(xì)胞體積不斷增大的作用效果；同時(shí)以還原型輔酶 II作為體內(nèi)脂肪合成酶的重要輔助因子及其在體內(nèi)脂肪合成代謝反應(yīng)中發(fā)揮遞氫作用和抗氧化作用，使前脂肪細(xì)胞在增殖分化過程中盡量減少自由基所致的過氧化損傷，以維持原位脂肪細(xì)胞或已增殖和分化后的脂肪細(xì)胞存活和代謝穩(wěn)定。最后輔以富集血小板自體血漿所具有的細(xì)胞生長、生存和生活所需要的各種營養(yǎng)成分以及氧分壓、二氧化碳含量、滲透壓、PH值、無機(jī)離子、粘附因子及富集血小板自體血漿中的血小板刺激、釋放和激活的各種細(xì)胞生長因子等對(duì)前脂肪細(xì)胞的增殖分化和脂肪組織的形成等均具有重要的調(diào)控作用；另外，這些被釋放和激活的相關(guān)細(xì)胞因子又會(huì)強(qiáng)化NPY、bFGF等的生物學(xué)效應(yīng)，最大限定發(fā)揮它們的作用，使前脂肪細(xì)胞得到最大限度的增殖和分化，從而，使其細(xì)胞數(shù)量和體積得到明顯的增加和提升。3.安全性高本發(fā)明中主要以富集血小板自體血漿作為促進(jìn)前脂肪細(xì)胞增殖和增大功效成分的基礎(chǔ)原料，所有組方原料來源方便、制備簡單，成本較低廉；另外，大部分功效成分來源于自體、內(nèi)源性、天然成分，免疫原性小，具有良好的組織相容性；同時(shí)，本發(fā)明通過局部作用促進(jìn)軟組織或女性乳腺中前體脂肪的增殖和分化而達(dá)到隆胸作用。這種方法，避免了口服激素類藥物作用緩慢、長期服用副作用大，特別是容易誘發(fā)或促發(fā)乳腺癌的不足；同時(shí)，避免了通過外科手術(shù)填充的生物類填充劑、非生物類填充劑常會(huì)引起乳房組織的炎癥反應(yīng)、異物反應(yīng)、過敏反應(yīng)以及易變形等安全性高。4.療效好本發(fā)明采用國際上最新發(fā)現(xiàn)的外周脂肪細(xì)胞激動(dòng)劑神經(jīng)肽Y(NPY)的高效和高量表達(dá)脂肪細(xì)胞增殖分化效應(yīng)分子及促進(jìn)中胚層及皮下脂肪組織中前脂肪細(xì)胞增殖和分化的生物學(xué)作用；并發(fā)揮堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)具有協(xié)同促進(jìn)前脂肪細(xì)胞在體內(nèi)的增殖和分化和加快皮下組織內(nèi)形成血管、使移植或增殖分化后的脂肪細(xì)胞縮短在體內(nèi)缺血缺氧時(shí)間、以提高更多脂肪細(xì)胞存活率的優(yōu)勢作用；再以乙酰輔酶A (Acetyl CoA)為前脂肪細(xì)胞提供合成脂肪酸和脂肪所需要的前體原料以加速前脂肪細(xì)胞的分化速率，促使脂肪細(xì)胞中脂肪含量更多增加和細(xì)胞體積不斷增大的作用效果；同時(shí)以還原型輔酶II(NADP)作為體內(nèi)脂肪合成酶的重要輔助因子及其在體內(nèi)脂肪合成代謝反應(yīng)中發(fā)揮遞
21氫作用和抗氧化作用，使前脂肪細(xì)胞在增殖分化過程中盡量減少自由基所致的過氧化損傷，以維持原位脂肪細(xì)胞或已增殖和分化后的脂肪細(xì)胞存活和代謝穩(wěn)定。最后輔以富集血小板自體血漿所具有的細(xì)胞生長、生存和生活所需要的各種營養(yǎng)成分以及氧分壓、二氧化碳含量、滲透壓、PH值、無機(jī)離子、粘附因子及細(xì)胞生長因子等對(duì)前脂肪細(xì)胞的增殖分化和脂肪組織的形成等均具有重要的調(diào)控作用，特別是富集血小板自體血漿中的血小板刺激、 釋放和激活的各種細(xì)胞生長因子，使前脂肪細(xì)胞得到最大限度的增殖和分化，從而使其細(xì)胞數(shù)量和體積得到明顯的增加和提升?？梢钥闯觯景l(fā)明產(chǎn)品可以全方位，多途徑，多層次地促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的增殖和分化。其結(jié)果就是可以增加脂肪細(xì)胞的數(shù)量，增大細(xì)胞的體積，從而自然地、逐漸地達(dá)到隆胸的效果，可真正做到一勞永逸地解決乳房缺陷問題；同時(shí)由于其豐胸的效果是通過促進(jìn)自體脂肪細(xì)胞的增殖和增大而達(dá)到的，因此其效果自然、真實(shí)；另外，由于本發(fā)明產(chǎn)品作用于局部，不會(huì)引起其它部位脂肪細(xì)胞的增殖，不會(huì)轉(zhuǎn)移到其它部位，作用效果穩(wěn)定，療效明顯。5.順應(yīng)性好不像其它的方法，對(duì)受術(shù)者都具有一定的要求。比如，自體脂肪注射術(shù)，手術(shù)者需為較胖患者，才能抽取自體脂肪顆粒，即使可以部分抽取，其難度也較大、且風(fēng)險(xiǎn)性更大；而對(duì)于通過手術(shù)填充的方法，更是對(duì)手術(shù)者的身體狀況具有一定的要求。而本發(fā)明產(chǎn)品僅局部作用于需要增殖的部位，通過全方位促進(jìn)前脂肪細(xì)胞的增殖和分化，為合成脂肪提供原料，改善脂肪細(xì)胞的微環(huán)境，不良反應(yīng)小，無需手術(shù)，可適用于不同年齡層次的女性，能為廣大女性所接受。6.應(yīng)用性強(qiáng)本發(fā)明產(chǎn)品制備簡單，成本低廉、制備工藝簡單、不需要特殊儀器設(shè)備、實(shí)際操作容易、節(jié)省原材料、降低環(huán)境污染、低碳環(huán)保。本發(fā)明產(chǎn)品使用方便，易于推廣和產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)，應(yīng)用性極強(qiáng)，適合有合法醫(yī)療美容資格的基層單位以上使用。


圖1. 一種可用于美容和美體的促自體外周前體脂肪細(xì)胞增殖和增大的復(fù)合誘導(dǎo)劑的制備工藝流程及技術(shù)路線。
具體實(shí)施例方式一種可用于美容和美體的促自體外周前體脂肪細(xì)胞增殖和增大的復(fù)合誘導(dǎo)劑各原料述優(yōu)選重量百分比重組人神經(jīng)肽Y全長多肽0.1X10還原型輔酶II0.0033乙酰輔酶A0.0035堿性成纖維細(xì)胞生長因子0.1X10自體富集血小板血漿86.4油酸0.52游離脂肪酸0.52黃芪多糖6蒲黃總黃酮6人參皂甙Rbl0.5姜黃素0.053上述原料的總重量百分比為100%。一種可用于美容和美體的促自體外周前體脂肪細(xì)胞增殖和增大的復(fù)合誘導(dǎo)劑，其制備方法包括以下步驟(以配制IOOg為例)(1)富集血小板血漿的制備嚴(yán)格按照人體抽血的規(guī)范化要求，迅速采集受術(shù)者的肘中靜脈血、并同時(shí)收集到含抗凝劑的采血管中，輕輕顛倒混勻；然后以1500g離心 6min，吸取全部上層血漿和中間層血小板濃縮物及緊鄰中間層的部分紅細(xì)胞至另一離心管，再以IOOOg離心6min，此時(shí)液體分為兩層，吸取四分之三上清液棄掉，剩余的即為富集血小板血漿；(2)水溶性成分的配制按上述一種促進(jìn)自體外周前體脂肪細(xì)胞增殖和增大的富集血小板血漿復(fù)合誘導(dǎo)劑的原料配比，用分析天平稱取黃芪多糖6g、蒲黃總黃酮6g溶于自體血漿中，充分?jǐn)嚢枞芙?，混合均勻，然后將此體系自然放置，待三十分鐘后，過濾消毒后，再依次加入重組人神經(jīng)肽Y全長多肽0. 1 X 10_3g、還原型輔酶II 0. 0033g、乙酰輔酶 AO. 0035g、堿性成纖維細(xì)胞生長因子0. IX 10_3g，待用；(3)油溶性成分的配制按照上述劑量，用分析天平稱取油酸0.52g，并置于洗凈消毒過干燥過的三角燒瓶中；然后加入游離脂肪酸0. 52g，并在不斷攪拌的條件下加熱至 50°C，使其充分混合均勻，將其作為油溶性成分；(4)醇溶性成分的配制用分析天平準(zhǔn)確稱取配方量的姜黃素0.053g，置于另一個(gè)經(jīng)過洗凈消毒干燥過的三角瓶中，然后加入等量lmol/L的氫氧化鈉溶解后，混合均勻， 反應(yīng)三十分鐘，制備成鈉鹽，再用lmol/L氯化氫調(diào)整溶液pH值到5. 5-6. 5之間即可。本發(fā)明所述的實(shí)施例僅僅是對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式進(jìn)行的描述，并非對(duì)本發(fā)明構(gòu)思和范圍進(jìn)行限定，在不脫離本發(fā)明設(shè)計(jì)思想的前提下，本領(lǐng)域中工程技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做出的各種變型和改進(jìn)，均應(yīng)落入本發(fā)明的保護(hù)范圍，本發(fā)明請求保護(hù)的技術(shù)內(nèi)容，已經(jīng)全部記載在權(quán)利要求書中。
權(quán)利要求
1.一種可用于美容和美體的促自體外周前體脂肪細(xì)胞增殖和增大的復(fù)合誘導(dǎo)劑，其特征是由下述重量百分比的原料制成重組人神經(jīng)肽Y全長多肽還原型輔酶II 乙酰輔酶A堿性成纖維細(xì)胞生長因子自體富集血小板血漿油酸游離脂肪酸黃芪多糖蒲黃總黃酮人參皂甙Rbl姜黃素上述原料的總重量百分比為100%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種可用于美容和美體的促自體外周前體脂肪細(xì)胞增殖和增大的復(fù)合誘導(dǎo)劑，其特征是由下述優(yōu)選重量百分比的原料制成重組人神經(jīng)肽Y全長多肽0.1 X IO"3還原型輔酶II0.0033乙酰輔酶A0.0035堿性成纖維細(xì)胞生長因子0.1 X 10_3自體富集血小板血漿86.4油酸0.520.0001 XlO.3 IX IO-3 0.1 X IO-3 0.1 0.1 X IO-3 0.1 0.0001 X IO-3 IX IO-3 5 100 0.005 10 0.1 10 0.0 卜 10 0.0 卜 10 0.0 卜 10 0.001 1.0游離脂肪酸0.52黃甚多糖6蒲黃總黃酮6人參皂甙Rbl0.5姜黃素0.053上述原料的總重量百分比為100%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或權(quán)利要求2所述的一種可用于美容和美體的促自體外周前體脂肪細(xì)胞增殖和增大的復(fù)合誘導(dǎo)劑，其特征在于其制備方法包括以下步驟(1)富集血小板血漿的制備嚴(yán)格按照人體抽血的規(guī)范化要求，迅速采集受術(shù)者的肘中靜脈血、并同時(shí)收集到含抗凝劑的采血管中，輕輕顛倒混勻；然后以1500g離心6min，吸取全部上層血漿和中間層血小板濃縮物及緊鄰中間層的部分紅細(xì)胞至另一離心管，再以 IOOOg離心6min，此時(shí)液體分為兩層，吸取四分之三上清液棄掉，剩余的即為富集血小板血漿；(2)水溶性成分的配制按上述原料配比，用分析天平稱取黃芪多糖、蒲黃總黃酮溶于自體血漿中，充分?jǐn)嚢枞芙?，混合均勻，然后將此體系自然放置，待三十分鐘后，過濾消毒后，再依次加入重組人神經(jīng)肽Y全長多肽、還原型輔酶II、乙酰輔酶A、堿性成纖維細(xì)胞生長因子，待用；(3)油溶性成分的配制按照上述劑量，用分析天平稱取油酸，并置于洗凈消毒過干燥過的三角燒瓶中；然后加入游離脂肪酸，并在不斷攪拌的條件下加熱至50°C，使其充分混合均勻，將其作為油溶性成分；(4)醇溶性成分的配制用分析天平準(zhǔn)確稱取配方量的姜黃素，置于另一個(gè)經(jīng)過洗凈消毒干燥過的三角瓶中，然后加入等量lmol/L的氫氧化鈉溶解后，混合均勻，反應(yīng)三十分鐘，制備成鈉鹽，再用lmol/L氯化氫調(diào)整溶液pH值到5. 5-6. 5之間即可；上述三種體系的復(fù)合物即為一種促進(jìn)自體外周前體脂肪細(xì)胞增殖和增大的富集血小板血漿復(fù)合誘導(dǎo)劑。
全文摘要
本發(fā)明提供一種可用于美容和美體的促自體外周前體脂肪細(xì)胞增殖和增大的復(fù)合誘導(dǎo)劑及其制備方法。本發(fā)明采用水溶性、油溶性和醇溶性功效成分三種液相所共同組成的用于促進(jìn)人體前脂肪細(xì)胞增殖和分化的誘導(dǎo)劑體系，通過對(duì)離體培養(yǎng)細(xì)胞或在體誘導(dǎo)刺激的方式使前脂肪細(xì)胞有限增殖和有序分化，以實(shí)現(xiàn)和達(dá)成皮下脂肪細(xì)胞數(shù)量增加和體積增大及維持其細(xì)胞血供和營養(yǎng)等，并保持和維護(hù)該脂肪細(xì)胞在生理?xiàng)l件下的正常生存、生長和生命活動(dòng)，其結(jié)果可以增加脂肪細(xì)胞的數(shù)量，增大細(xì)胞的體積，從而達(dá)到明顯、自然的隆胸效果；本發(fā)明主要成分來源于自體，天然植物成分，且此體系作用于局部，安全性高；另外，該體系制備簡單，經(jīng)濟(jì)，具有廣闊的市場前景。
文檔編號(hào)A61L27/38GK102357263SQ20111034903
公開日2012年2月22日 申請日期2011年11月4日 優(yōu)先權(quán)日2011年11月4日
發(fā)明者丁克祥, 丁宇, 丁振華, 左夏林, 楊永鵬, 羅迎霞, 董萍 申請人:丁克祥, 董萍