專利名稱：帽蕊木有效部位及其提取方法和在制備保肝護(hù)肝藥物方面的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，具體涉及一種帽蕊木有效部位及其提取方法，該帽蕊木有效部位具有保肝護(hù)肝作用。
背景技術(shù)：
肝損傷是多種因素如毒物(CC14、AP、IC)的中間產(chǎn)物與大分子物質(zhì)共價(jià)結(jié)合、缺氧、脂質(zhì)過氧化、細(xì)胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)失調(diào)和內(nèi)毒素相互作用的結(jié)果，而非單一的作用。肝損傷引發(fā)的肝臟疾病已成為常見病、多發(fā)病，更為嚴(yán)重的是其引發(fā)的肝功能衰竭和肝性腦病等，發(fā)病率和死亡率高，極大地威脅著人類健康。很多因素都可引起肝損傷。體內(nèi)模型特別是化學(xué)性肝損傷模型在形態(tài)學(xué)、病理生理學(xué)的某些方面與人慢性肝病較為相似。腹腔注射CCl4 植物油溶液是目前常用的肝炎模型。CCl4引起肝損傷的機(jī)制是CCl4在肝微粒體細(xì)胞色素 P450激活下生成自由基CCI3·及Cl·，這些自由基可與肝細(xì)胞內(nèi)大分子發(fā)生共價(jià)結(jié)合，也可攻擊膜下不飽和脂質(zhì)，引起脂質(zhì)過氧化，從而使肝細(xì)胞損傷，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)GPT、GOT滲入血液， 表現(xiàn)為血清中GPT、G0T活性升高。SOD活性及MDA含量?？煞从丑w內(nèi)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)程度， 間接反映機(jī)體組織、細(xì)胞損傷的程度。通過檢測小鼠肝勻漿中的SOD活性及MDA含量可反映出藥物對(duì)肝細(xì)胞的保護(hù)作用。因此，以血清GPT、G0T、肝組織SOD活性及MDA含量作為指標(biāo)來探討藥物對(duì)肝臟的保護(hù)作用是非常有意義的。目前，肝損傷的治療方法有很多，雖然均有一定的療效，但也存在著明顯的不足。 首先，西藥具有較大的毒副作用，且療效并不確切。其次，實(shí)驗(yàn)和臨床研究證實(shí)，中藥在抗菌抗病毒、改善肝功能、抗氧化、改善微循環(huán)、調(diào)節(jié)免疫功能以及抗肝纖維化等方面顯示出良好的療效，安全、可靠、有效，進(jìn)一步顯示出中醫(yī)辨證論治的合理性，突顯了中藥在治療肝損傷，尤其是內(nèi)毒素性急性肝損傷方面的良好前景。帽蕊木(Mit ragyna rotund folia Kuntze )為茜草科帽蕊木屬(M itragyna L. )植物。本屬植物約有10種，非洲分布4種，亞洲分布6種，大多位于印度、孟加拉、緬甸、 泰國和老撾等國家。我國僅有1種，產(chǎn)于云南南部海拔IOOOm處的密林中。該屬的植物民間用途廣泛，可用于發(fā)熱、疝氣、肌肉疼痛的治療，抗瘧，并可驅(qū)蟲。帽蕊木屬植物的研究主要集中在吲哚類生物堿成分上，藥理研究也相當(dāng)明確，主要為抗腫瘤、心血管疾病和抗菌活性。文獻(xiàn)研究表明，帽蕊木具有很好的抗氧化能力。國內(nèi)外尚未見到有關(guān)于帽蕊木提取物具有保肝護(hù)肝作用的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種帽蕊木有效部位，該有效部位具有保肝護(hù)肝作用，可用來制備保護(hù)急性肝損傷的藥物。本發(fā)明還提供了該有效部位的提取方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取如下技術(shù)方案
一種帽蕊木有效部位，其選自帽蕊木莖皮和/或葉用丙酮水溶液提取后萃取得到的正丁醇部位；該有效部位經(jīng)下述方法提取獲得取干燥的帽蕊木莖皮和葉粉碎后，分別用體積比為7:3的丙酮水溶液進(jìn)行浸提，浸提液濃縮得浸膏；將浸膏分散于蒸餾水中，然后依次用溶劑石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行萃?。惠腿∫簱]干溶劑后即分別得到帽蕊木莖皮和葉的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位，其中，正丁醇部位為有效部位。所述帽蕊木有效部位的提取方法，其包括如下步驟取干燥的帽蕊木莖皮和葉粉碎后，分別用體積比為7:3的丙酮水溶液進(jìn)行浸提，浸提液濃縮得浸膏；將浸膏分散于蒸餾水中，然后依次用溶劑石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行萃取(以各萃取三次為宜)；萃取液揮干溶劑(如萃取液可通過真空減壓干燥的方法來揮干溶劑)后即分別得到帽蕊木莖皮和葉的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位，其中，正丁醇部位為有效部位。具體的，干燥的帽蕊木莖皮和葉粉碎后，分別用體積比為7:3的丙酮水溶液在室溫下浸泡2 - 4次，每次7天，合并所得浸提液并濃縮成浸膏。所述帽蕊木有效部位在制備保肝護(hù)肝藥物方面的應(yīng)用，尤其是在制備具有保護(hù)急性肝損傷藥物方面的應(yīng)用。本發(fā)明所述帽蕊木有效部位選自帽蕊木莖皮和葉分別用丙酮水溶液(Vwfi=V7J^ =7:3)提取后萃取得到的正丁醇部位。為證實(shí)該有效部位的保肝護(hù)肝作用，本發(fā)明以聯(lián)苯雙酯為陽性對(duì)照，分別考察了帽蕊木的莖皮正丁醇部位(MRFBU)和葉正丁醇部位(MRLBU) 對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠的治療作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，帽蕊木的莖皮正丁醇部位 (MRFBU)和葉正丁醇部位(MRLBU)各劑量組均能顯著降低肝損傷小鼠的GPT、G0T活力。除了帽蕊木的葉正丁醇部位中劑量組外，其它劑量組均能顯著降低小鼠肝組織的MDA含量， 升高SOD活力。由此充分表明，本發(fā)明帽蕊木的莖皮正丁醇部位(MRFBU)和葉正丁醇部位 (MRLBU)對(duì)急性肝損傷具有很好的保護(hù)作用。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
一種帽蕊木有效部位，其選自帽蕊木莖皮和/或葉用丙酮水溶液提取后萃取得到的正丁醇部位；該有效部位經(jīng)下述方法提取獲得取干燥的IOOOg帽蕊木莖皮和IOOOg帽蕊木葉粉碎后，分別用體積比為7:3的丙酮水溶液在室溫下浸泡3次(丙酮水溶液的添加量為帽蕊木莖皮或葉粉末重量的3 — 5倍)，每次7天，合并3次所得浸提液并濃縮成浸膏；將所得的莖皮和葉兩種浸膏分別分散于IOOOml蒸餾水中，然后依次用溶劑石油醚(3000ml)、 乙酸乙酯(3000ml)和正丁醇(3000ml)進(jìn)行萃取，各萃取三次；萃取液揮干溶劑后即分別得到帽蕊木莖皮和葉的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位，其中帽蕊木莖皮正丁醇部位41 g (記為MRFBU，提取率4. 1%)和帽蕊木葉正丁醇部位38g (記為MRLBU，提取率3. 8%) 為有效部位。具體的萃取過程為先用石油醚萃取三次，萃取液分層，取上層石油醚部分(揮干后即為石油醚部位)，下層為水層；水層再用乙酸乙酯萃取三次，萃取液分層，取上層乙酸乙酯部分(揮干后即為乙酸乙酯部位)，下層為水層；水層最后用正丁醇萃取三次，萃取液分層，取上層正丁醇部分(揮干后即為正丁醇部位)。這樣操作的目的在于將浸膏中的有效成分按極性從小到大的順序依次萃取出來，因溶劑石油醚、乙酸乙酯和正丁醇的極性是遞增的。
效果試驗(yàn)
(一)主要試劑與儀器
四氯化碳(分析純)購自開封化學(xué)試劑總廠；橄欖油購自上海衛(wèi)輝化學(xué)試劑廠；聯(lián)苯雙酯滴丸購自浙江萬邦藥業(yè)有限公司，批號(hào)090205 ；考馬斯亮藍(lán)G250購自上?；瘜W(xué)試劑公司分裝廠，批號(hào)20050115 ；牛清蛋白購自北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號(hào) 20100526 ；其它試劑均為分析純。谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)試劑盒、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)測定試劑盒均購于南京建成生物工程研究所。0. 4V%CC14油溶液取四氯化碳分散到橄欖油中，用磁力攪拌器強(qiáng)力攪拌2 h ；現(xiàn)用現(xiàn)配。UV 2000型紫外可見分光光度計(jì)(尤尼可上海儀器有限公司)；Multiskan MK3酶標(biāo)儀(Thermo Electron) ；LRH-150恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒科技有限公司)。(二)實(shí)驗(yàn)方法
取健康的成年雄性昆明小鼠(4 6周齡，體重20 士 2 g) 90只，隨機(jī)分為9組，每組 10只。分別為空白組、模型組、聯(lián)苯雙酯陽性對(duì)照組(70 mg/kg)、帽蕊木莖皮正丁醇部位 (MRFBU)高、中、低劑量組(300、150、75mg/kg)和帽蕊木葉正丁醇部位(MRLBU)高、中、低劑量組(300、150、75mg/kg，給藥組劑量依據(jù)對(duì)該藥物體外抗氧化活性確定)。除模型組外，空白組用0. 5%的羥甲基纖維素鈉水溶液(CMC-Na)灌胃，其它試驗(yàn)組用0. 5%CMC-Na分別配制成相應(yīng)濃度灌胃給藥，1次/天，連續(xù)給藥8天。于末次給藥2 h后對(duì)小鼠進(jìn)行造模(即按照0. 1 mL/10g小鼠體重腹腔注射0. 4V%四氯化碳油溶液，空白組除外)。禁食不禁水16 h 后，摘除小鼠眼球取血并分離出血清，檢測GPT和GOT。快速分離肝臟，制備10%和1%的肝臟組織勻漿液，離心取上清液，0-3°C保存，測MDA和S0D，考馬斯亮藍(lán)除蛋白。(三)實(shí)驗(yàn)結(jié)果
表1帽蕊木正丁醇部位對(duì)急性肝損傷小鼠GPT和GOT的影響(StS, 11=10)
權(quán)利要求
1.一種帽蕊木有效部位，其特征在于，選自帽蕊木莖皮和/或葉用丙酮水溶液提取后萃取得到的正丁醇部位。
2.權(quán)利要求1所述帽蕊木有效部位的提取方法，其特征在于，包括如下步驟取干燥的帽蕊木莖皮和葉粉碎后，分別用體積比為7:3的丙酮水溶液進(jìn)行浸提，浸提液濃縮得浸膏； 將浸膏分散于蒸餾水中，然后依次用溶劑石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行萃??；萃取液揮干溶劑后即分別得到帽蕊木莖皮和葉的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位，其中，正丁醇部位為有效部位。
3.如權(quán)利要求2所述的提取方法，其特征在于，干燥的帽蕊木莖皮和葉粉碎后，分別用體積比為7:3的丙酮水溶液在室溫下浸泡2 - 4次，每次7天，合并所得浸提液并濃縮成浸膏。
4.權(quán)利要求1所述帽蕊木有效部位在制備保肝護(hù)肝藥物方面的應(yīng)用。
5.權(quán)利要求1所述帽蕊木有效部位在制備具有保護(hù)急性肝損傷藥物方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，具體涉及一種帽蕊木有效部位，其選自帽蕊木莖皮和/或葉用丙酮水溶液提取后萃取得到的正丁醇部位；該有效部位經(jīng)下述方法提取獲得取干燥的帽蕊木莖皮和葉粉碎后，分別用體積比為7:3的丙酮水溶液進(jìn)行浸提，浸提液濃縮得浸膏；將浸膏分散于蒸餾水中，然后依次用溶劑石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進(jìn)行萃取；萃取液揮干溶劑后即分別得到帽蕊木莖皮和葉的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位，其中，正丁醇部位為有效部位。該帽蕊木的莖皮和葉提取物能夠顯著降低急性肝損傷小鼠血清中的GPT、GOT的活力以及小鼠肝組織中的MDA含量，升高SOD的活力，可用于制備保肝護(hù)肝藥物。
文檔編號(hào)A61K127/00GK102342991SQ20111032294
公開日2012年2月8日 申請(qǐng)日期2011年10月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月21日
發(fā)明者尹震花, 鞏芳, 康文藝, 李錕 申請(qǐng)人:河南大學(xué)