專利名稱:靈芝酸g在腫瘤治療中作為免疫增效劑和超抗原依賴的治療藥物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及靈芝酸的新用途,尤其涉及靈芝酸G(Gan0deriC acid G)的新用途。
背景技術(shù):
靈芝是中醫(yī)藥學(xué)寶庫(kù)中的珍品。自古以來(lái)流傳著許多關(guān)于靈芝的傳說(shuō),在這些神話般并帶有迷信色彩的傳說(shuō)中,將靈芝奉為“仙草”、“瑞草”,并視其為“吉祥如意”的象征。 我國(guó)古代文獻(xiàn)中,公元前一世紀(jì)左右的《神農(nóng)本草經(jīng)》、東晉葛洪的《抱樸子》、唐朝蘇敬的 《新修本草》、梁代陶弘景的《神農(nóng)本草經(jīng)集注》和《名醫(yī)別錄》以及明朝李時(shí)珍的《本草綱目》 等著作均在《神農(nóng)本草經(jīng)》的基礎(chǔ)上進(jìn)一步補(bǔ)充、修正了有關(guān)靈芝的論述。綜上所述,我國(guó)古代學(xué)者根據(jù)實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)得出,靈芝具有“扶正固本作用”,可以治療多種疾病?,F(xiàn)代科學(xué)技術(shù)證明,靈芝的主要有效成份包括靈芝多糖(Polysacchari de)、靈芝酸(Ganoderma Acid)和腺苷(Adenosine)等。近年來(lái),多糖的抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)活性作用倍受關(guān)注,有研究表明,多糖可以使受損的DNA得到恢復(fù)。北京醫(yī)科大學(xué)教授林志彬、張群豪等從細(xì)胞及分子水平觀察了靈芝多糖的抗腫瘤作用機(jī)制。2002年以后,對(duì)靈芝的有效成分研究又發(fā)展到對(duì)靈芝三萜(靈芝酸)活性成分的探討。目前,從靈芝中已分離得到的靈芝酸已達(dá)100多種,如靈芝酸々、8、(、03、?、6、1、1^嫩、1^、1 、1 。然而對(duì)靈芝酸免疫有關(guān)的研究甚少,尤其對(duì)具有保肝和毒殺腫瘤細(xì)胞等功用的機(jī)理不清楚。雖然有學(xué)者報(bào)道過(guò)靈芝可促進(jìn)DC成熟,但國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)中還沒(méi)有見(jiàn)到關(guān)于T、B細(xì)胞系在免疫方面的角色相關(guān)報(bào)道。有關(guān)靈芝酸抗腫瘤專利有CN1483423,主要與其它藥物配伍后用于癌癥的治療; 專利CN1480208的用途是作為放、化療減毒增效的藥物組合物;而專利CN1286119則是含 15%的靈芝酸作為健康品的制備方法。另外,靈芝酸單體的專利有CN1823788A,主要成分是靈芝酸Me及T作為增敏增效劑及抑制劑的應(yīng)用;專利CN1823787A為靈芝酸Me及T在制備癌轉(zhuǎn)移抑制中的應(yīng)用。靈芝酸G作為靈芝酸中的單體,其相關(guān)腫瘤抑制及在聯(lián)合用藥方面尚未見(jiàn)報(bào)道。目前,腫瘤化療中最大的問(wèn)題是腫瘤形成的耐藥性?,F(xiàn)代生物技術(shù)制藥中可以實(shí)現(xiàn)的有耐藥逆轉(zhuǎn)劑包括反義核酸與核酶,細(xì)胞因子(IL-2或TNF- α )、GSH耗竭劑、抗體及小分子抗體肽等。鑒于理想的增效藥物應(yīng)該對(duì)正常組織細(xì)胞毒性小、具有抗腫瘤活性、穩(wěn)定、 半衰期長(zhǎng)等。本項(xiàng)發(fā)明正與其符合。因此,具有直接的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問(wèn)題是公開(kāi)靈芝酸在制備多藥耐藥性癌癥化療增敏增效劑和抑制劑中的應(yīng)用,以滿足臨床醫(yī)學(xué)的需要。本發(fā)明所說(shuō)的靈芝酸為靈芝酸G(Gan0deriC acid G,縮寫GA_G)。發(fā)明人發(fā)現(xiàn),靈芝酸G小劑量使用能增加多藥耐藥性腫瘤對(duì)已產(chǎn)生耐藥性的化療藥物敏感,大劑量使用能抑制多種多藥耐藥性腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用且具有劑量依賴性,可將它們作為治療多藥耐藥性腫瘤的藥物和增敏增效劑,應(yīng)用于腫瘤的化療治療中。所說(shuō)的小劑量指的是1 5mg/(公斤體重·天)的劑量,所說(shuō)的大劑量指10 50mg/(公斤體重 天)的劑量。本發(fā)明還涉及一種組合物,包括治療有效量的靈芝酸G和醫(yī)學(xué)上可接受的載體??梢詫㈧`芝酸G與醫(yī)學(xué)上可接受的載體以組合物的形式,施加于需要治療的患者,一般劑量為1 50mg/(公斤體重 天)的劑量,具體劑量可根據(jù)患者年齡、病情等的不同進(jìn)行增減。所說(shuō)的載體是指藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的藥物載體,如稀釋劑、賦形劑如水等,填充劑如淀粉、蔗糖等,粘合劑如纖維素衍生物明膠、聚乙烯吡咯烷酮等,潤(rùn)滑劑如滑石粉等。本發(fā)明的靈芝酸G與上述載體構(gòu)成的組合物,可以通過(guò)口服、敷貼或注射等多種給藥形式施加于需要這種治療的患者。用于口服時(shí),可以將其制備成為常規(guī)的片劑、膠囊或口服液等;用于注射時(shí),可以將其采用本領(lǐng)域常規(guī)的方法,制備成為注射液;本發(fā)明的靈芝酸G的各種制劑,包括口服制劑、敷貼劑和注射劑等可以采用藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的方法進(jìn)行制備;制劑中,靈芝酸G的重量含量為0. 5 99. 9 %,優(yōu)選的含量為10 99. 9 %。本發(fā)明提供的靈芝酸G的各種制劑,在小劑量的情況下具有增強(qiáng)多藥耐藥性腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性的作用。所說(shuō)的小劑量指的是1 5mg/(公斤體重 天)的劑量。本發(fā)明提供的靈芝酸G的各種制劑,在大劑量的情況下具有抑制多藥耐藥性腫瘤細(xì)胞增殖的作用,說(shuō)明可以遏制腫瘤細(xì)胞的無(wú)限增殖能力,因而有可以進(jìn)一步發(fā)揮更大程度治療腫瘤的效果。所說(shuō)的大劑量指的是10 50mg/(公斤體重 天)的劑量。本發(fā)明提供的多藥耐藥性腫瘤化療中的抗癌劑和增敏增效劑,對(duì)多藥耐藥性癌細(xì)胞和非多藥耐藥性癌細(xì)胞有相同的細(xì)胞毒性,而且兩者差異不顯著(P < 0. 05)。所說(shuō)的靈芝酸G是通過(guò)發(fā)酵提純或是經(jīng)過(guò)靈芝實(shí)體直接分離提純的單體。所說(shuō)的超抗原是可以通過(guò)市售獲得。所說(shuō)的多藥耐藥性腫瘤為醫(yī)學(xué)上所屬的各類腫瘤,包括良性腫瘤各惡性腫瘤。而所說(shuō)的惡性腫瘤包括惡性黑色素瘤,惡性淋巴瘤,消化器官的腫瘤,肝癌,子宮瘤,白血病, 神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤,皮膚癌。動(dòng)物試驗(yàn)證明,本發(fā)明的抗癌劑和增敏增效劑,低毒,適合于人和哺乳類動(dòng)物經(jīng)口和非經(jīng)口給藥。本發(fā)明提供的多藥耐藥性腫瘤化療中的抗癌劑和增敏增效劑,通常能與不影響藥理學(xué)作用的輔料配合制成經(jīng)口或非經(jīng)口給藥的制劑。本發(fā)明的顯著優(yōu)點(diǎn)和技術(shù)上的進(jìn)步本發(fā)明提供的具有同時(shí)抗腫瘤和增敏增效作用的靈芝酸G單體,克服了傳統(tǒng)的以靈芝混合提取物作為藥物的缺陷,用現(xiàn)代生物技術(shù)作為發(fā)明的手段,明確了有效成分,運(yùn)用純化合物作為抗腫瘤藥物和增敏增效劑,減少了未知成分引起副作用的可能性,這種化合物具有顯著的同時(shí)抗腫瘤和增敏增效的作用(體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)),同時(shí)對(duì)人體正常細(xì)胞的細(xì)胞毒性較小,具有良好的應(yīng)用前景。
圖1不同濃度靈芝酸G對(duì)各種癌細(xì)胞的抑制作用。黑條,靈芝酸G濃度為Oyg/ml 黑格,靈芝酸G濃度為100 μ g/ml黑點(diǎn),靈芝酸G濃度為30 μ g/ml 白條,靈芝酸G濃度為300 μ g/ml圖2靈芝酸G增加裸鼠對(duì)順鉬的敏感性。圖3100 μ g/ml靈芝酸G對(duì)各種癌細(xì)胞及正常⑶4+T細(xì)胞的毒性作用。圖4超抗原依賴的靈芝酸G對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用。圖如超抗原依賴的靈芝酸G對(duì)A20細(xì)胞的殺傷作用圖4b超抗原依賴的靈芝酸G對(duì)HeLa細(xì)胞的殺傷作用
具體實(shí)施例方式下面通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明內(nèi)容作進(jìn)一步說(shuō)明。所舉之例并不限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。實(shí)施例中的所有腫瘤細(xì)胞株均由日本東京女子醫(yī)科大學(xué)微生物免疫研究室提供。 所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均來(lái)自同實(shí)驗(yàn)室實(shí)驗(yàn)所獲得。實(shí)施例1利用3H法測(cè)定U-937、Ramos、K562、Raji, THP-I腫瘤細(xì)胞的抑制作用。對(duì)數(shù)期細(xì)胞按IO4/孔接種于96孔圓底培養(yǎng)板,每孔200 μ 1,平行3孔,對(duì)照組添加等量培養(yǎng)液,用濃度分別為0、30、100、300 μ g/ml的靈芝酸G添加后,置37°C 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)72小時(shí),計(jì)數(shù)前6小時(shí)前加入咕,然后計(jì)數(shù)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)數(shù)量并做圖。實(shí)施例2對(duì)數(shù)期KB-A-I細(xì)胞106/ml濃度,0. 2ml/每只接種裸鼠腋下,裸鼠SPF環(huán)境下生長(zhǎng) 15天,分離實(shí)體瘤,無(wú)菌條件下接種實(shí)驗(yàn)裸鼠左右腋下,5天后藥物腹腔注射治療,按順鉬 (Cisplatin DDP)組和順鉬加靈芝酸G組進(jìn)行治療。5天為一療程,共治療2個(gè)療程。停藥 6天后處死裸鼠,取實(shí)體瘤稱重計(jì)算腫瘤抑制率。腫瘤抑制率(% )=[(對(duì)照組實(shí)體瘤平均重量數(shù)-給藥組實(shí)體瘤平均重量數(shù))/ 對(duì)照組實(shí)體瘤平均重量數(shù)]X100實(shí)施例3利用3H 法測(cè)定 KB-A-l、U-937、Ramos、K562、Raji、THP_l、A20、Hela 及 CD4+ 正常人 T細(xì)胞的毒性作用,對(duì)數(shù)期細(xì)胞按IO4/孔接種于96孔圓底培養(yǎng)板,每孔200 μ 1,平行3孔, 對(duì)照孔添加等量培養(yǎng)液,用濃度為100μ g/ml的靈芝酸G刺激,置37°C 5% CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng) 72小時(shí),計(jì)數(shù)前6小時(shí)前加入3H,然后計(jì)算藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率,并以細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度作圖。實(shí)施例4用紅色熒光染色腫瘤細(xì)胞A20、Hela 30秒1640培養(yǎng)液洗滌3次,超抗原和超抗原加靈芝酸G分別刺激腫瘤細(xì)胞與T細(xì)胞1 1于96孔培養(yǎng)板中混合培養(yǎng)2小時(shí),收集細(xì)胞并洗滌固定,用綠色熒光標(biāo)記的Caspase-3染色腫瘤細(xì)胞,用流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)死亡的腫瘤細(xì)胞數(shù)目作圖。
權(quán)利要求
1.靈芝酸G在制備腫瘤化療時(shí)的增效劑,或是聯(lián)合超抗原時(shí)作為治療劑使用,所說(shuō)的靈芝酸G 為靈芝中的單體(化學(xué)名 Lanost-8-en-26-oic acid,3,7,12-trihydroxy-ll, 15, 23-trioxo-, (3 β,7 β,12 β )-,分子式 C30H4408)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用,其特征在于,所說(shuō)的腫瘤是指醫(yī)學(xué)上所屬的各類腫瘤, 包括良性及惡性。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用,其特征在于,所說(shuō)的惡性腫瘤包括惡性黑色素瘤,惡性淋巴瘤,消化器官的腫瘤,肝癌,子宮瘤,白血病,神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤,皮膚癌。
4.一種組合物,包括治療有效量的靈芝酸G和醫(yī)學(xué)上可接受的載體。
5.超抗原依賴是指各種方式包括醫(yī)學(xué)上可接受的聯(lián)合用藥。
6.根據(jù)5中所提的超抗原包括所有能誘導(dǎo)人類T細(xì)胞克隆活化的超抗原包括細(xì)菌性、 病毒及植物性超抗原。
全文摘要
本發(fā)明涉及靈芝酸的一種新用途,尤其涉及靈芝酸G(Ganoderic acid G)在各種腫瘤治療中的應(yīng)用。本發(fā)明的靈芝酸G的各種制劑,包括片劑、膠囊劑等固型制劑、軟膏、貼敷劑、注射劑等可以采用藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的方法進(jìn)行制備。本發(fā)明提供的腫瘤治療藥物靈芝酸G,小劑量下具有直接抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用,而此時(shí)對(duì)于正常組織細(xì)胞的毒性作用不強(qiáng),對(duì)于進(jìn)一步治療腫瘤的效果,則在添加超抗原后得到實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明的顯著的優(yōu)點(diǎn)和技術(shù)上的進(jìn)步本發(fā)明的靈芝酸G與超抗原聯(lián)合時(shí),在體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中都能有效發(fā)揮其殺傷多種腫瘤細(xì)胞。
文檔編號(hào)A61K31/575GK102440994SQ20111029161
公開(kāi)日2012年5月9日 申請(qǐng)日期2011年9月30日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月30日
發(fā)明者李仲娟, 楊朝令 申請(qǐng)人:李仲娟, 楊朝令