專利名稱：病毒感染的脂質(zhì)體治療的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本申請總地涉及用于治療病毒感染的方法和組合物，更具體地說，涉及使用脂質(zhì)體來治療病毒感染的方法和組合物。
背景技術(shù)：
乙型肝炎病毒。乙型肝炎病毒(HBV，IfepB)是包括可導(dǎo)致一些患者死亡的肝纖維化、肝硬化、炎性肝病和肝癌在內(nèi)的急性和慢性肝病的致病因素，例如，參見，Joklik, Wolfgang K. , Virology,第三版，Appleton&Lange, Norwalk, Conn. ,1988(ISBN0-8385-9462-X)。盡管獲得了有效的疫苗，但是全世界超過280，000, 000人，S卩，占世界人口的5%,仍然長期感染上病毒,例如,參見Locarnini, S. A.,等人，Antiviral Chemistry&Chemotherapy(1996)7(2) :53_64。這種疫苗對于已經(jīng)感染上病毒的人沒有治療價(jià)值。在歐洲和北美洲，人口的0. 1%到I %發(fā)生感染。據(jù)估計(jì)，獲得感染的個(gè)體的15%到20%從HBV感染發(fā)展為肝硬化或另外的長期喪失勞動(dòng)能力(chronic disability)。一旦形成肝硬化，發(fā)病率和死亡率相當(dāng)大，具有約5年的患者生存時(shí)間，例如，參見Blume，H.，E.，等人，Advanced Drug Delivery Reviews(1995)17 :321-331。丙型肝炎病毒。全世界大約170,000,000人，S卩，占世界人口的3%，例如，參見WHO, J. Viral. Hepat. 1999 ;6 :35_47，和在美國大約400萬人感染上丙型肝炎病毒(HCV,HepC)。急性感染上HCV的個(gè)體的約80%變成慢性感染。因此，HCV是慢性肝炎的主要致病因素。一旦發(fā)生慢性感染，如果不經(jīng)治療病毒幾乎不被清除。在罕見病例中，HCV感染引起臨床急性疾病和甚至是肝功能衰竭。慢性HCV感染可因個(gè)體之間的差異而顯著不同，其中一些個(gè)體會(huì)罹患臨床非顯著性的或極微的肝疾病，并且從不發(fā)展成并發(fā)癥，而其它個(gè)體會(huì)罹患臨床顯著的慢性肝炎并且可能接著發(fā)展成肝硬化。感染HCV并確實(shí)發(fā)展為肝硬化的個(gè)體的約20%會(huì)發(fā)展為晚期肝病并且具有增加的發(fā)展為原發(fā)性肝癌的風(fēng)險(xiǎn)?？共《舅幬锢绺蓴_素，其單獨(dú)或與利巴韋林聯(lián)合使用，在高達(dá)80 %的患者中是有效的。(Di Bisceglie，A.M，和 Hoofnagle，J.H. 2002，Ifepatology 36，S121-S127)，但是許多患者對這種聯(lián)合治療形式不耐受。牛病毒性腹瀉病毒。牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)分布于全世界范圍內(nèi)并且在大多數(shù)牛群中普遍存在。BVDV也通常被用作HCV的組織培養(yǎng)代用品。有兩種BVDV的病毒生物型非致細(xì)胞病變型(ncp)和致細(xì)胞病變型(cp)。病毒生物型的分類基于培養(yǎng)細(xì)胞中的致細(xì)胞病變作用并且與毒力無關(guān)。Ncp BVDV在牛中是常見的，而cp生物型相對少見，并且在病毒基因組中發(fā)生特異性突變后從ncp株產(chǎn)生。在組織培養(yǎng)中用cp BVDV株感染細(xì)胞以在、細(xì)胞單層上形成凋亡細(xì)胞集簇(斑塊)為特征，可在顯微鏡下容易地監(jiān)控這一特征。人類免疫缺陷病毒。人類免疫缺陷病毒(HIV)是獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)和相關(guān)病癥的致病因素。至少有截然不同的兩類HIV=HIV-I和HIV-2。另外，大量的遺傳異質(zhì)性存在于每種這些類型的群體中。因?yàn)锳IDS流行病的發(fā)病，大約2000萬人已死亡，并且據(jù)估計(jì)，超過4000萬人目前仍攜帶HIV-1/AIDS，在全世界內(nèi)每天有14000人被感染。已經(jīng)開發(fā)了多種抗病毒治療劑和診斷手段，使得至少對于獲得所述手段的那些人而言已經(jīng)大大地改善了數(shù)量和生活質(zhì)量。這些藥物中大多數(shù)干擾病毒蛋白質(zhì)或諸如逆轉(zhuǎn)錄和蛋白酶活性的過程。不幸地是，這些療法未能消除感染，許多療法的不需要的作用是嚴(yán)重的，對于目前應(yīng)用的每種抗病毒類型都存在耐藥性HIV株。作為治療劑的N- 丁基脫氧野尻霉素(NB-DNJ)。NB-DNJ，又稱N- 丁基-1，5- 二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡糖醇，抑制由ER葡糖苷酶I和II參與的過程，并且已經(jīng)顯示通過引起人類免疫缺陷病毒(HIV)和肝炎病毒特別是諸如乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、牛病毒性腹瀉病毒等等病毒的糖蛋白的錯(cuò)折疊和/或ER-滯留而發(fā)揮有效的抗病毒作用。描述了合成NB-DNJ和其它N-取代的脫氧野尻霉素衍生物的方法，例如，在美國專利5，622，972，4，246，345，4，266，025 4，405，714 和 4，806，650 中。討論了 NB-DNJ 的抗病毒效果，例如在美國專利6，465，487 ;6，545,021 ;6，689，759 ;6，809，083中涉及肝炎病毒，和在美國專利4，849，430中涉及HIV病毒。葡糖苷酶抑制劑如NB-DNJ已顯示在細(xì)胞培養(yǎng)中和在使用旱獺動(dòng)物模型中都有效地治療 HBV 感染，例如，參見 T. Block, X. Lu, A. S. Mehta, B. S. Blumberg, B. Tennant,M. Ebling, B. Korba, D. M. Lansky, G. S. Jacob 和 R. A. Dwek, Nat Med. 1998May ；4 (5) :610_4。NB-DNJ抑制HBV粒子的分泌并引起HBV DNA的胞內(nèi)滯留。NB-DNJ已顯示是對抗BVDV ( 一種用于HCV的細(xì)胞培養(yǎng)模型)的強(qiáng)抗病毒物質(zhì)，例如，參見 Branza-Nichita N, Durantel D, Carrouee-Durantel S, Dwek RA, Zitzmann N.,J Virol. 2001Apr ；75(8) :3527-36 ；Durantel, D.，等人，J. Virol.，2001，75，8987-8998 ；N. Zitzmann，等人，PNAS, 1999，96，11878-11882。使用NB-DNJ進(jìn)行治療導(dǎo)致病毒后代的感染性降低，對被分泌的病毒的實(shí)際數(shù)量的影響較少。NB-DNJ已顯示是抗HIV的抗病毒劑；治療導(dǎo)致對從HIV感染細(xì)胞釋放的病毒粒子數(shù)的影響較低，然而，被釋放的感染性病毒的量被大大降低，例如，參見P. B. Fischer,M. Collin,等人(1995)，J. Virol. 69 (9) :5791-7 ；P. B. Fischer, G. B. Kar Is son, T. Butters,R. Dwek 和 F. Platt, J. Virol. 70 (1996a), pp. 7143-7152, P. B. Fischer, G. B. Kar Is son,R. Dwek 和 F. Platt, J. Virol. 70 (1996b) ,pp. 7153-7160。在 HIV-I 感染患者中進(jìn)行了牽涉NB-DNJ的臨床試驗(yàn)，結(jié)果表明抗病毒活性所需的濃度太高并且在患者中產(chǎn)生嚴(yán)重的副作用，例如，參見 Fischl M. A.，Resnick L.，Coombs R.，Kremer A. B.，Pottage J. C. Jr, FassR. J. , Fife K. H. , Powderly ff. G. , Collier A. C. , Aspinall R. L.,等人，J. Acquir. Immune.Defic. Syndr. 1994 Feb ；. 7(2) :139-47 目前不存在對抗 NB-DNJ 治療的突變 HIV 株。ER蛋白質(zhì)折疊以及葡糖苷酶I和II。由葡糖苷酶抑制顯示的抗病毒效果被認(rèn)為是病毒糖蛋白在ER內(nèi)的錯(cuò)折疊或滯留的結(jié)果，主要通過阻斷進(jìn)入鈣聯(lián)接蛋白/肌鈣網(wǎng)蛋白循環(huán)進(jìn)行。在將三葡糖基化低聚糖(G1 C3Man9GlcNAc2)轉(zhuǎn)移到生長多肽鏈中的Asn-X-Ser/Thr共有序列之后，必要的是可以發(fā)生三個(gè)a-連接的葡萄糖殘基在進(jìn)一步加工成為成熟碳水化合物單位之前被釋放。另外，兩個(gè)靠外側(cè)的葡萄糖殘基必需經(jīng)過修整以被允許進(jìn)入鈣聯(lián)接蛋白/肌I丐網(wǎng)蛋白循環(huán)用于適當(dāng)折疊，例如，參見Bergeron, J. J.等人,Trends Biochem.Sci.，1994，19，124-128 ；Peterson, J. R.等人，Mol. Biol. Cell, 1995,6,1173-1184。初步加工受位于ER的具有內(nèi)腔取向的催化結(jié)構(gòu)域的內(nèi)在膜(integral membrane)酶(葡糖苷酶I)的影響，該酶特異性裂解a 1-2連接的葡萄糖殘基；接著是葡糖苷酶II發(fā)揮作用，該酶II釋放a 1-3連接的葡萄糖組分中的兩個(gè)。脂質(zhì)體。脂質(zhì)體可以直接遞送水溶性化合物到細(xì)胞內(nèi)，繞過作為分子屏障的細(xì)胞膜。PH敏感脂質(zhì)體制劑可包含 將磷脂酰乙醇胺(PE)或其衍生物(例如DOPE)與含有酸性基團(tuán)的化合物(其在中性PH下可作為穩(wěn)定劑)的組合。膽固醇半琥珀酸酯(CHEMS)與其它的體內(nèi)兩性分子穩(wěn)定劑相比可以是良好的穩(wěn)定化分子，因?yàn)槠淠懝檀蓟x予包含PE的小泡以更高的穩(wěn)定性。通過脂質(zhì)體介導(dǎo)的遞送的體內(nèi)效力可強(qiáng)烈地依賴于與可以影響其藥代動(dòng)力學(xué)和生物分布的血清組分(調(diào)理素)的相互作用。PH敏感脂質(zhì)體可以迅速地從血液循環(huán)中被清除，積聚在肝和脾內(nèi)，然而脂質(zhì)與共價(jià)連接的聚乙二醇(PEG)的內(nèi)含物可以通過穩(wěn)定DOPE CHEMS脂質(zhì)體上的凈負(fù)電荷來克服由網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)進(jìn)行的清除。D0PE-CHEMS和DOPE-CHEMS-PEG-PE脂質(zhì)體及其制備方法描述在例如V. A. Slepushkin, S. Simoes, P. Dazin, M. S. Newman, L. S. Guo 和 M. C. P. de Lima, J. Biol.Chem. 272 (1997) 2382-2388 ；以及 S. Simoes, V. Slepushkin, N. Duzgunes 和 M. C. Pedroso deLima, Biomembranes 1515(2001)23-37中，兩篇文獻(xiàn)全文并入本文作為參考。包封在DOPE-CHEMS中的N3-DNJ(摩爾比為6 4)的遞送公開在美國專利申請US2003/0124160 中。發(fā)明概述一個(gè)實(shí)施方案提供了治療病毒感染的方法，該方法包括對有此需要的宿主給藥組合物，該組合物包括(a)包含DOPE和CHEMS脂質(zhì)的脂質(zhì)體，和(b)包封在脂質(zhì)體內(nèi)的一種或多種治療劑，其中病毒感染是ER膜出芽病毒感染或質(zhì)膜出芽病毒感染；其中一種或多種治療劑包括N- 丁基脫氧野尻霉素(NB-DNJ)，并且其中所述給藥導(dǎo)致遞送一種或多種治療劑進(jìn)入感染有引發(fā)感染的病毒的細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)內(nèi)以及將脂質(zhì)體的一種或多種脂質(zhì)并入細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜內(nèi)。本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案提供了治療病毒感染的方法，該方法包括對有此需要的宿主給藥組合物，該組合物包括(a)包含DOPE、CHEMS和PEG-PE脂質(zhì)的脂質(zhì)體，和(b)包封在脂質(zhì)體內(nèi)的一種或多種治療劑。該一種或多種治療劑可包括N-丁基脫氧野尻霉素(NB-DNJ)。又一個(gè)實(shí)施方案提供了一種方法，該方法包括對有此需要的宿主給藥組合物，該組合物包括(a)pH敏感脂質(zhì)體，和(b)包封在脂質(zhì)體內(nèi)的抗原，其中給藥導(dǎo)致由抗原遞呈細(xì)胞的主要組織相容性分子I類進(jìn)行的抗原遞呈增加。又一個(gè)實(shí)施方案提供了治療HIV感染的方法，該方法包括對有此需要的宿主給藥組合物，該組合物包括與gpl20/gp41復(fù)合物祀向部分結(jié)合的脂質(zhì)體。又一個(gè)實(shí)施方案提供了一種組合物，該組合物包括包含DOPE、CHEMS和PEG-PE脂質(zhì)的脂質(zhì)體和包封在脂質(zhì)體內(nèi)的至少一種治療劑如N- 丁基脫氧野尻霉素(NB-DNJ)。又一個(gè)實(shí)施方案提供了一種組合物，該組合物包括pH敏感脂質(zhì)體和包封在脂質(zhì)體內(nèi)的抗原。又一個(gè)實(shí)施方案提供了一種組合物，該組合物包括與gpl20/gp41復(fù)合物靶向部分結(jié)合的脂質(zhì)體。另一個(gè)實(shí)施方案提供了治療或預(yù)防病毒感染的方法，該方法包括對有此需要的宿主給藥組合物，該組合物包括(a)包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體，和(b)包封在脂質(zhì)體內(nèi)的至少一種抗病毒治療劑，其中所述接觸導(dǎo)致遞送至少一種治療劑進(jìn)入感染有引發(fā)感染的病毒的細(xì)胞的ER腔內(nèi)，以及將脂質(zhì)體的一種或多種脂質(zhì)并入細(xì)胞的ER膜內(nèi)。又一個(gè)實(shí)施方案提供了一種組合物，該組合物包括包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體以及包封在脂質(zhì)體內(nèi)的至少一種抗病毒治療劑。
又一個(gè)實(shí)施方案提供了治療病毒感染的方法，該方法包括對有此需要的宿主給藥組合物，該組合物包括(a)包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體，和(b)嵌入脂質(zhì)體的脂質(zhì)層內(nèi)的至少一種抗病毒蛋白，其中所述接觸導(dǎo)致將脂質(zhì)體的一種或多種脂質(zhì)并入感染有引發(fā)感染的病毒的細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜內(nèi)。又一個(gè)實(shí)施方案提供了一種組合物，該組合物包括(a)包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體，和
(b)嵌入脂質(zhì)體的脂質(zhì)層內(nèi)的至少一種抗病毒蛋白。又一個(gè)實(shí)施方案提供了一種組合物，該組合物包括包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體以及包封在脂質(zhì)體內(nèi)的至少一種治療劑。又一個(gè)實(shí)施方案提供了治療或預(yù)防生理學(xué)病況的方法，該方法包括對有此需要的受試者給藥組合物，該組合物包括包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體以及包封在脂質(zhì)體內(nèi)的至少一種治療劑。又一個(gè)實(shí)施方案提供了一種組合物，該組合物包括包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體以及嵌入脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙分子層內(nèi)的至少一種蛋白質(zhì)。又一個(gè)實(shí)施方案提供了治療或預(yù)防生理學(xué)病況的方法，該方法包括對有此需要的受試者給藥組合物，該組合物包括包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體以及嵌入脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙分子層內(nèi)的至少一種蛋白質(zhì)。


圖I表示在經(jīng)由DCPP-Rh脂質(zhì)體遞送后去淬滅的鈣黃綠素和熒光標(biāo)記脂質(zhì)(Rh-PE)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)定位。圖2表示在CHO和MDBK細(xì)胞中DCPP脂質(zhì)體的毒性。包封PBS的DCPP脂質(zhì)體以最終脂質(zhì)濃度為0-500 u M被加入到CHO細(xì)胞中，以0-150 u M的濃度被加入到MDBK細(xì)胞中。細(xì)胞和脂質(zhì)體進(jìn)行培養(yǎng)5天，然后通過錐蟲藍(lán)染色測量細(xì)胞生存率。結(jié)果用與未處理的對照相比的活細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)表示。圖3是表示在包封有脫氧野尻霉素(DNJ)、N_ 丁基脫氧野尻霉素(NB-DNJ)和N-壬基脫氧野尻霉素(NN-DNJ)化合物的條件下在CHO細(xì)胞中DCPP-Rh脂質(zhì)體的攝取和細(xì)胞內(nèi)鈣黃綠素去淬滅的圖表。制備了包封有在兩種不同濃度下的每個(gè)化合物的DCPP-Rh脂質(zhì)體。通過并入細(xì)胞膜內(nèi)的Rh-PE測量的脂質(zhì)體攝取以及作為細(xì)胞內(nèi)釋放量度的鈣黃綠素去淬滅在用脂質(zhì)體進(jìn)行5分鐘脈沖然后在新鮮的培養(yǎng)基中進(jìn)行30分鐘追蹤后進(jìn)行測定。圖4表示包含各種DNJ分子的DCPP脂質(zhì)體的pH敏感性。
圖5是表示在用NB-DNJ治療后BVDV分泌的圖表游離遞送相對于用DCPP脂質(zhì)體介導(dǎo)的遞送。在用以游離形式或經(jīng)由脂質(zhì)體以最終脂質(zhì)濃度為50 PM被加入到培養(yǎng)基中的NB-DNJ治療期間從被感染的MDBK細(xì)胞分泌的BVDV粒子，在3天培養(yǎng)后通過實(shí)時(shí)PCR測定。結(jié)果用通過實(shí)時(shí)PCR檢測的RNA拷貝數(shù)與未處理的對照相比的百分?jǐn)?shù)表示。圖6表示NB-DNJ對ncp BVDV感染性的效果游離遞送相對于用DCPP脂質(zhì)體介導(dǎo)的遞送。在以游離形式或經(jīng)由脂質(zhì)體以最終脂質(zhì)濃度為50 U M被加入到培養(yǎng)基中的NB-DNJ存在的條件下由被感染的MDBK細(xì)胞產(chǎn)生的ncp BVDV粒子的感染性，通過與原初MDBK細(xì)胞培養(yǎng)3天進(jìn)行測量。使用DAPI復(fù)染色作為對照通過存在于MDBK細(xì)胞中的非結(jié)構(gòu)BVDV蛋白的免疫熒光染色檢測被感染細(xì)胞。得自BVDV分泌的數(shù)據(jù)(圖2)用于最終百分感染性的歸一化計(jì)算。圖7表示NB-DNJ針對cp BVDV的抗病毒效果游離遞送相對于用DC脂質(zhì)體介導(dǎo)的遞送。感染有cp BVDV的MDBK細(xì)胞在存在游離的或包含在DC脂質(zhì)體內(nèi)的NB-DNJ的條 件下生長3天。包含被分泌的病毒的上清液用于感染原初MDBK。在3天后，在顯微鏡下計(jì)數(shù)得到的斑塊(收率測定)。圖8表示在NB-DNJ存在的條件下對表達(dá)的HIV包膜蛋白gpl20的聚糖加工的抑制游離遞送相對于用DCPP脂質(zhì)體介導(dǎo)的遞送。表達(dá)可溶形式的gpl20的CHO細(xì)胞與NB-DNJ培養(yǎng)，NB-DNJ以游離形式或經(jīng)由脂質(zhì)體以最終脂質(zhì)濃度微100 y M被加入到培養(yǎng)基中。通過由ER葡糖苷酶進(jìn)行的葡萄糖修整的抑制測定的NB-DNJ活性的測量如下進(jìn)行在捕獲法ELISA中單克隆抗體2G12和bl2與用NB-DNJ處理的gpl20的結(jié)合。圖9 (A-C)表示游離的NB-DNJ對八個(gè)單獨(dú)的HIV-I初次分離物的抗病毒效果。圖9A表示用不同濃度的NB-DNJ處理四周的八個(gè)分離物的平均p24分泌。誤差棒顯示對于每種治療在分離物之間的標(biāo)準(zhǔn)偏差確定。圖9B顯示在用O-ImM濃度的游離的NB-DNJ進(jìn)行初步處理后每個(gè)初次分離物的分泌。圖9C表示在三周處理后個(gè)別的初次分離物對NB-DNJ的敏感性。所有值用未處理的對照的百分?jǐn)?shù)表示，并且數(shù)據(jù)表示從兩個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的三個(gè)重復(fù)樣品獲得的平均值。關(guān)于每種處理的近似IC50和IC90通過圖表中的灰色(點(diǎn)狀)線表示。圖10A-H提供的數(shù)據(jù)顯示脂質(zhì)體如何增加NB-DNJ針對八個(gè)HIV-1的初次分離物的抗病毒活性。感染有每個(gè)分離物的PBMC (用圖表A到H表示)用包封有各種濃度的NB-DNJ的脂質(zhì)體(L)處理四周。用在培養(yǎng)基中的500 的游離NB-DNJ(F)的處理作為關(guān)于抗病毒活性的參考被顯示。圖例指出對于每種處理NB-DNJ的最終濃度。所有值用未處理的對照的百分?jǐn)?shù)表示，并且數(shù)據(jù)表示從兩個(gè)獨(dú)立實(shí)驗(yàn)的三個(gè)重復(fù)樣品獲得的平均值。圖11表示由感染有大量HIV-I分離物的細(xì)胞進(jìn)行的sCD4-脂質(zhì)體和免疫脂質(zhì)體的攝取。sCD4-脂質(zhì)體和MAb-脂質(zhì)體結(jié)合物與感染有九個(gè)不同的初次分離物(括號(hào)內(nèi)為進(jìn)化枝)的PBMCs培養(yǎng)。增加的攝取通過在培養(yǎng)之后在細(xì)胞中的熒光脂質(zhì)的增加來測量。所有值被歸一化到“非感染的僅有脂質(zhì)體”的對照，并且數(shù)據(jù)代表從一個(gè)實(shí)驗(yàn)的三個(gè)重復(fù)值獲得的平均土標(biāo)準(zhǔn)誤差。對于每個(gè)感染使用一系列單向方差分析然后是在此之后的Tukey試驗(yàn)以檢驗(yàn)在不同靶分子的有效性之間的差異，檢測相對攝取數(shù)據(jù)。在脂質(zhì)體結(jié)合物和僅有脂質(zhì)體對照之間的攝取的顯著差異(P < 0. 0001)用星號(hào)表示。圖12A-H表示包封NB-DNJ的s⑶4_脂質(zhì)體的強(qiáng)力的協(xié)同抗病毒活性。感染有每個(gè)分離物的PBMC (用圖表A到H表示)用包封有各種濃度的NB-DNJ的s⑶4-脂質(zhì)體(⑶4-L)處理四周。用在培養(yǎng)基中的500 u M的游離NB-DNJ(F)的處理作為關(guān)于抗病毒活性的參考被顯示。圖例指出對于每種處理NB-DNJ的最終濃度。所有值用未處理的對照的百分?jǐn)?shù)表示，并且數(shù)據(jù)表示從一個(gè)實(shí)驗(yàn)的三個(gè)重復(fù)樣品獲得的平均值。圖13A-E表示在用各種脂質(zhì)體制劑脈沖15分鐘后在MDBK細(xì)胞內(nèi)的羅丹明標(biāo)記PE的典型的熒光圖像。特別地，圖13A表示DOPE CHEMS Rh-PE(6 4 0. I)的數(shù)據(jù)；圖 13B 表示 DOPC CHEMS Rh-PE (6 4 0. I)的數(shù)據(jù)；圖 13C表示 DOPE CHEMS PI Rh-PE (6 : 4 : I : 0. I)的數(shù)據(jù)；圖 13D 表示 DOPE CHEMS PI Rh-PE (6 : 4 : 2 : 0. I)的數(shù)據(jù)和圖 13E 表示DOPE CHEMS PI Rh-PE(6 4 3 0. I)的數(shù)據(jù)。在時(shí)間點(diǎn)0、1、2、5、24 和 48 小時(shí)觀察每種脂質(zhì)體制劑的Rh-PE的細(xì)胞內(nèi)定位。使用DAPI復(fù)染色來目測所有細(xì)胞。圖14表示使用各種包含Rh標(biāo)記的PE的脂質(zhì)體制劑處理被cp-BVDV-感染的MDBK 細(xì)胞和未被感染的MDBK細(xì)胞并且在培養(yǎng)3天后測量Rh-PE脂質(zhì)的分泌的效果。在用相同脂質(zhì)體組合物處理的被感染細(xì)胞和未被感染細(xì)胞之間的Rh-PE分泌的增加是由于包含Rh-PE脂質(zhì)的病毒粒子的分泌所導(dǎo)致，該病毒粒子從ER膜出芽。發(fā)明詳述除非另外說明，否則“一”或“一種”表示“一種或多種”。術(shù)語的定義本文使用的術(shù)語“病毒感染”是指這樣的患病狀態(tài)，其中病毒侵入健康的細(xì)胞，使用細(xì)胞的再生機(jī)構(gòu)進(jìn)行繁殖或復(fù)制并最終使細(xì)胞裂解導(dǎo)致細(xì)胞死亡，釋放病毒粒子并通過新產(chǎn)生的后代病毒感染其它細(xì)胞。某些病毒的潛伏性感染也是可能的病毒感染結(jié)果。本文使用的術(shù)語“治療或預(yù)防病毒感染”是指抑制特定病毒的復(fù)制，抑制病毒傳播，或防止病毒在其宿主中自我創(chuàng)建，和改善或緩解由病毒感染引起的疾病的癥狀。如果病毒負(fù)荷下降、死亡率和/或發(fā)病率降低，則該治療被認(rèn)為具有治療性。術(shù)語“治療劑”是指任何試劑，如分子或化合物，其可幫助治療生理學(xué)病況，諸如病毒感染或由其引起的疾病。本文使用的術(shù)語“協(xié)同效應(yīng)”是指聯(lián)合效果，其比任何一種或多種單個(gè)治療劑的加合效果更有效。本文使用的協(xié)同效應(yīng)是指使用較低量(劑量)的任一單一療法(eithersingle therapy)來治療或預(yù)防生理學(xué)病況如病毒感染或由其引起的疾病的能力。更低劑量可導(dǎo)致治療的毒性更低而效力不降低。另外，協(xié)同效應(yīng)可導(dǎo)致效力改善，例如抗病毒活性的改善。最后，對于病毒感染，協(xié)同效應(yīng)可導(dǎo)致避免或降低病毒針對單個(gè)治療劑或單個(gè)療法的抗性的改善。脂質(zhì)體可被定義為是包括球形雙分子層構(gòu)造的脂質(zhì)的有機(jī)化合物。本文論述的脂質(zhì)體可包括由以下縮寫表示的一種或多種脂質(zhì)CHEMS表示膽固醇半琥珀酸酯脂質(zhì)。DOPE表示二油酰磷脂酰乙醇胺脂質(zhì)。DOPC表示二油酰磷脂酰膽堿脂質(zhì)。PE表示磷脂酰乙醇胺脂質(zhì)。PEG-PE表示聚乙二醇(2000) - 二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺脂質(zhì)。Rh-PE表示麗絲胺羅丹明(lissamine rhodamine)B-磷脂酰乙醇胺脂質(zhì)。
MCC-PE表示I，2- 二油?；?sn-甘油_3_磷脂乙醇胺_N_ [4-(對-馬來酰亞胺基甲基)環(huán)己烷-甲酰胺]脂質(zhì)。PI表示磷脂酰肌醇脂質(zhì)。術(shù)語“胞內(nèi)遞送”是指被包封的物質(zhì)從脂質(zhì)體遞送進(jìn)入任何胞內(nèi)隔室內(nèi)。IC50或IC90 (抑制濃度50或90)是指為實(shí)現(xiàn)病毒感染分別降低50%或90%所使用的治療劑的濃度。DC脂質(zhì)體是指包括摩爾比為6 3的DOPE和CHEMS脂質(zhì)的脂質(zhì)體。DCPP脂質(zhì)體是指包括摩爾比為6 4 0.3的DOPE、CHEMS和PEG-PE脂質(zhì)的脂 質(zhì)體。PBMC表示外周血單核細(xì)胞。s⑶4表示可溶性⑶4分子?！翱扇苄寓?”或“s⑶4”或“D1D2”是指⑶4分子或其片段，其位于含水溶液中并且其通過改變HIV Env的構(gòu)造可模仿天然的膜錨定⑶4的活性，這可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所理解?？扇苄寓?的一個(gè)實(shí)例是例如在Salzwedel等人 J.Virol. 74 :326333, 2000中描述的雙結(jié)構(gòu)域可溶性CD4(sCD4或D1D2)。MAb表示單克隆抗體。DNJ表示脫氧野尻霉素。NB-DNJ表不N- 丁基脫氧野尻霉素。NN-DNJ表不N-壬基脫氧野尻霉素。BVDV表示牛病毒性腹瀉病毒。HBV表不乙型肝炎病毒。HCV表示丙型肝炎病毒。HIV表示人類免疫缺陷病毒。Ncp表示非致細(xì)胞病變型。Cp表示致細(xì)胞病變型。ER表示內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。CHO表示中國倉鼠卵巢細(xì)胞MDBK 表示 Madin-Darby 牛腎細(xì)胞。PCR表示聚合酶鏈反應(yīng)。FOS表示游離的低聚糖。HPLC表示高效液相色譜法。PHA表示植物血細(xì)胞凝集素。FBS表示胎牛血清。TCID50表示50%組織培養(yǎng)感染劑量。ELISA表示酶聯(lián)免疫吸附測定。IgG 表不免疫球蛋白(immunoglobuline)。DAPI表示4'，6-二脒基-2-苯基吲哚。PBS表示磷酸鹽緩沖鹽水。病毒感染的脂質(zhì)體治療本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)接觸細(xì)胞時(shí)，包含DOPE、CHEMS和/或PEG-PE脂質(zhì)的pH敏感脂質(zhì)體，諸如DC脂質(zhì)體或DCPP脂質(zhì)體，能夠繞過細(xì)胞的內(nèi)吞作用之后的細(xì)胞的內(nèi)體途徑并遞送包封在脂質(zhì)體內(nèi)的材料直接進(jìn)入細(xì)胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)，S卩，ER腔。脂質(zhì)體的一種或多種脂質(zhì)還可以并入細(xì)胞的ER膜內(nèi)。這一發(fā)現(xiàn)可提供關(guān)于病毒感染(對于該病毒感染，病毒需要從ER膜出芽，諸如HBV、HCV和BVDV感染)的治療的主要推斷性結(jié)論因?yàn)橹|(zhì)體的脂質(zhì)并入感染有病毒的細(xì)胞的ER膜可以改變出芽病毒粒子的被膜，并因此降低感染性。本發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)了 N- 丁基脫氧野尻霉素(NB-DNJ)包封在DCPP脂質(zhì)體內(nèi)，與其它脫氧野尻霉素化合物如脫氧野尻霉素(DNJ)或N-壬基脫氧野尻霉素(NN-DNJ)的DCPP包封相比,可以提供增加的細(xì)胞內(nèi)遞送。這種NB-DNJ的增加的細(xì)胞內(nèi)遞送可以導(dǎo)致NB-DNJ的體內(nèi)活性增強(qiáng)。另外，本發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了包括DOPE、CHEMS和/或PEG-PE脂質(zhì)的脂質(zhì)體，諸如DCPP脂質(zhì)體，自身可具有抗病毒效果，即，與包封在脂質(zhì)體內(nèi)的任何治療劑無關(guān)，并且DCPP脂質(zhì)體和包封在脂質(zhì)體內(nèi)的治療劑諸如NB-DNJ針對病毒可以協(xié)同起作用。因此，一個(gè)實(shí)施方案是治療ER膜病毒出芽感染即病毒出芽可發(fā)生在ER膜處的病 毒感染諸如HBV、HCV或BVDV感染。該方法可包括使感染有引發(fā)感染的病毒的細(xì)胞接觸組合物，在該組合物中，NB-DNJ被包封在包含DOPE和CHEMS脂質(zhì)的脂質(zhì)體內(nèi)。這種接觸可提供協(xié)同治療，導(dǎo)致遞送脂質(zhì)體的一種或多種脂質(zhì)到被接觸細(xì)胞的ER膜，改變該膜從而降低子代病毒的感染性，以及通過釋放被包封的NB-DNJ直接進(jìn)入細(xì)胞的ER腔內(nèi)實(shí)現(xiàn)協(xié)同治療。另一個(gè)實(shí)施方案是通過使感染有引發(fā)感染的病毒的細(xì)胞接觸組合物來治療病毒感染的方法，該組合物包含I)包含D0PE、CHEMS和PEG-PE脂質(zhì)的脂質(zhì)體，和2)包封在脂質(zhì)體內(nèi)的治療劑。病毒感染可以是，例如，HCV, HBV, BVDV, HIV，莫洛尼鼠科白血病病毒，鼠科肝炎病毒，I型和2型單純皰疫病毒，巨細(xì)胞病毒，辛德畢斯病毒，西門利克森林病毒，皰疫性口腔炎病毒，甲型流感病毒，麻疹病毒，登革熱病毒或日本腦炎病毒，諸如在R. A. Dwek,等人，Nat. Rev. Drug Discov. 2002Jan ； I (I) :65-75 中公開的。在一些實(shí)施方案中，包封在脂質(zhì)體內(nèi)的治療劑可以是a-葡糖苷酶抑制劑。在一些實(shí)施方案中，a-葡糖苷酶抑制劑可以是ERa-葡糖苷酶抑制劑。通常，任何依賴于與鈣聯(lián)接蛋白和/或肌鈣網(wǎng)蛋白相互作用用于其病毒被膜糖蛋白的適當(dāng)折疊的病毒可以作為ERa-葡糖苷酶抑制劑的靶標(biāo)。a -葡糖苷酶抑制劑可以是這樣的試劑，與不存在該試劑的條件下的a _葡糖苷酶的酶活性相比，該試劑抑制宿主a -葡糖苷酶的酶活性至少約10%，至少約15%，至少約20 %，至少約25 %，至少約30 %，至少約35 %，至少約40 %，至少約50 %，至少約60 %，至少約70%，至少約80%，或至少約90%，或更高。術(shù)語“ a -葡糖苷酶抑制劑”包括天然存在的和合成的抑制宿主a-葡糖苷酶活性的試劑。適當(dāng)?shù)腶 -葡糖苷酶抑制劑包括但不限于脫氧野尻霉素和N-取代的脫氧野尻霉素，諸如以下的式II的化合物及其可藥用鹽OX
w、r^V、、、。Y
I
Ri
II,其中R1選自被取代的或未被取代的烷基，被取代的或未被取代的環(huán)烷基，被取代的或未被取代的芳基，或被取代的或未被取代的氧雜烷基，選自但不限于芳基烷基，環(huán)烷基烷基，支鏈或直鏈的烷基，和氧雜烷基；并且其中W、X、Y和Z各自獨(dú)立地選自氫，烷?；?，芳酰基和鹵代烷?；?。在一些的這種實(shí)施方案中，Rl選自乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基，戊基，新戊基，異戊基，己基，-(CH2)2O(CH2)5CH3, -(CH2)2O(CH2)6CH3, -(CH2)6OCH2CH3,和_(CH2)20CH2CH2CH3。在其它的這種實(shí)施方案中，R1為丁基，并且W，X，Y和Z都為氫。在一些實(shí)施方案中，式II的化合物選自但不限于N_(正己基-)-1,5-二脫氧-I,5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(正庚基-)-1,5- 二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(正辛基-)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(正辛基-)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(正壬基-)-l，5- 二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(正癸基-)-1，5- 二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(烷基-)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(正壬基-)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(正癸基-)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N- (
燒基_) _1，5- 二脫氧-1，5-亞氛基-D-匍萄糖醇；N_ (正十二燒基-)-1，5- 二脫氧-1，5_亞氨基-D-葡萄糖醇；N- (2-乙基己基)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N- (4-乙基己基)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N- (5-甲基己基)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(3-丙基己基)-I，5-二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(1-戊基戊基己基)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N- (I- 丁基丁基)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N- (7-甲基辛基_)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N- (8-甲基壬基)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N- (9-甲基癸基)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(10-甲基i^一烷基)-I，5-二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(6-環(huán)己基己基_)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N- (4-環(huán)己基丁基)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(2-環(huán)己基乙基)-1，5- 二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N- (I-環(huán)己基甲基)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N- (I-苯基甲基)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N- (3-苯基丙基)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N- (3- (4-甲基)-苯基丙基)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N- (6-苯基己基)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇；N-(正壬基-)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(正癸基-)-l，5- 二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(正i^一烷基-)-1，5- 二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(正十二烷基-)-1，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N- (2-乙基己基)-I，5- 二脫氧-I，5-亞、氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(4-乙基己基)-1，5- 二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(5-甲基己基)-I，5- 二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(3-丙基己基)-1，5_ 二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(1-戊基戊基己基)_1，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N- (I- 丁基丁基)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N- (7-甲基辛基_)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(8-甲基壬基)-I，5- 二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(9-甲基癸基)-1，5_ 二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(10-甲基i^一烷基)_1，5- 二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(6-環(huán)己基己基-)-l，5- 二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N- (4-環(huán)己基丁基)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(2-環(huán)己基乙基)-1，5- 二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(1-環(huán)己基甲基)_1，5- 二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(1-苯基甲基)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N- (3-苯基丙基)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N- (3- (4-甲基)-苯基丙基)-I，5- 二脫氧-I，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四丁酸酯；N-(6-苯基己基)-1，5- 二脫氧-1，5-亞氨基-D-葡萄糖醇，四 丁酸酯；其可藥用鹽；和它們中任何兩種或更多種的混合物。適當(dāng)?shù)腶 -葡糖苷酶抑制劑還包括N-氧雜烷基化脫氧野尻霉素，諸如在US專利4，639，436中描述的N-羥基乙基DNJ(米格列醇(Miglitol)或Glyset )。適當(dāng)?shù)腶 -葡糖苷酶抑制劑還包括栗精胺和栗精胺衍生物，諸如在美國專利申請2006/0194835中公開的式(I)的化合物及其可藥用鹽，包括6_0_丁酰基栗精胺(西戈斯韋(celgosivir)),以及在PCT公報(bào)W001054692中公開的式II的化合物及其可藥用鹽。在一些實(shí)施方案中，a-葡糖苷酶抑制劑可以為阿卡波糖(0-4，6-二脫氧-4-[ [ (1S，4R，5S，6S) -4,5,6-三羥基-3-(羥基甲基)_2_環(huán)己烯-I-基]氨基]-a -D-吡喃葡萄糖基-(I — 4) -0- — -D-吡喃葡萄糖基-(I — 4) -D-葡萄糖)，或Precose 。阿卡波糖公開在美國專利4，904，769中。在一些實(shí)施方案中，a-葡糖苷酶抑制劑可以為高度純化形式的阿卡波糖(例如，參見美國專利4，904，769)。在一些實(shí)施方案中，包封在脂質(zhì)體內(nèi)的治療劑可以是離子通道抑制劑。在一些實(shí)施方案中，離子通道抑制劑可以是抑制HCV p7蛋白質(zhì)活性的試劑。離子通道抑制劑及其鑒定方法在美國專利公報(bào)2004/0110795中詳述。適當(dāng)?shù)碾x子通道抑制劑包括式I的化合物及其可藥用鹽，包括N- (7-氧雜-壬基)-I，5，6-三脫氧-I，5-亞氨基-D-半乳糖醇(N-7-氧雜-壬基 6-MeDGJ 或 UT231B)和 N-10-氧雜十一烷基(undecul)-6-MeDGJ。適當(dāng)?shù)碾x子通道抑制劑還包括但不限于N-壬基脫氧野尻霉素，N-壬基半乳糖脫氧野尻霉素(deoxynogalactonojirimycin)和N-氧雜壬基半乳糖脫氧野尻霉素(deoxynogalactonoj irimycin)。在一些實(shí)施方案中，包封在脂質(zhì)體內(nèi)的治療劑可包括亞氨基糖。適當(dāng)?shù)膩啺被前ㄌ烊淮嬖诘膩啺被呛秃铣傻膩啺被?。在一些?shí)施方案中，亞氨基糖可以是脫氧野尻霉素或N-取代的脫氧野尻霉素衍生物。適當(dāng)?shù)腘-取代的脫氧野尻霉素衍生物的實(shí)例包括但不限于本申請的式II的化合物，美國專利6，545,021的式I的化合物，以及N-氧雜烷基化脫氧野尻霉素，諸如在美國專利4，639，436中描述的N-羥基乙基DNJ(米格列醇或GIySet )。
在一些實(shí)施方案中，亞氨基糖可以是栗精胺或栗精胺衍生物。適當(dāng)?shù)睦蹙费苌锇ǖ幌抻谠诿绹鴮＠暾?006/0194835中公開的式(I)的化合物及其可藥用鹽，以及在PCT公報(bào)W001054692中公開的式II的化合物及其可藥用鹽。在一些實(shí)施方案中，亞氨基糖可以是半乳糖脫氧野尻霉素(nogalactojirimycin)或其N-取代的衍生物，諸如在PCT公報(bào)W099/24401和W001/10429中公開的那些。適當(dāng)?shù)腘-取代的半乳糖脫氧野尻霉素(deoxynogalactojirimycin)衍生物的實(shí)例包括但不限于N-燒基化半乳糖脫氧野尻霉素(deoxynogalactojirimycin) (N-燒基-1, 5_ 二脫氧-I,5-亞氨基-D-半乳糖醇)，諸如N-壬基半乳糖脫氧野尻霉素，和N-氧雜-燒基化半乳糖脫氧野尻霉素(N-氧雜-燒基_1，5- 二脫氧5-亞氨基-D-半乳糖醇)，諸如N-7-氧雜壬基半乳糖脫氧野尻霉素。在一些實(shí)施方案中，亞氨基糖可以是N-取代的I，5，6-三脫氧-I，5-亞氨基-D-半
乳糖醇(N-取代的MeDGJ)，包括但不限于以下的式I化合物
OH
kN^CH3
I
R
I其中R選自被取代的或未被取代的烷基，被取代的或未被取代的環(huán)烷基，被取代的或未被取代的雜環(huán)基，或被取代的或未被取代的氧雜烷基。在一些實(shí)施方案中，被取代的或未被取代的烷基和/或被取代的或未被取代的氧雜烷基包含I到16個(gè)碳原子或4到12個(gè)碳原子或8到10個(gè)碳原子。在一些實(shí)施方案中，被取代的或未被取代的烷基和/或被取代的或未被取代的氧雜烷基包括I到4個(gè)氧原子，并且在其它實(shí)施方案中包括I到2個(gè)氧原子。在其它的實(shí)施方案中，被取代的或未被取代的烷基和/或被取代的或未被取代的氧雜烷基包括I到16個(gè)碳原子和I到4個(gè)氧原子。因此，在一些實(shí)施方案中，R選自但不限于-(CH2) 60CH3, - (CH2) 60CH2CH3，- (CH2) 60 (CH2) 2CH3, - (CH2) 60 (CH2) 3CH3，- (CH2) 20 (CH2) 5CH3, - (CH2)20 (CH2) 6CH3 和-(CH2) 20 (CH2) 7CH3。N-取代的 MeDGJs 例如公開在 PCT 公報(bào) W001/10429 中。在一些實(shí)施方案中，包封在脂質(zhì)體內(nèi)的治療劑可包括下面式VIII的含氮化合物或其可藥用鹽
R3
R4V\ Zr2
R12 (VIII),其中R12為烷基諸如C1-C2tl或C1-C6或C7-C12或C8-C16并且還可包含I到5個(gè)或I到3個(gè)或I到2個(gè)氧，R12可以是被氧雜取代的烷基衍生物。被氧雜取代的烷基衍生物的實(shí)例包括3-氧雜壬基，3-氧雜癸基，7-氧雜壬基和7-氧雜癸基。
權(quán)利要求
1.一種組合物，其包括 (a)包含PI脂質(zhì)的脂質(zhì)體，和 (b)至少一種i)包封在脂質(zhì)體內(nèi)的至少一種治療劑；和ii)嵌入脂質(zhì)體的脂質(zhì)雙分子層內(nèi)的至少一種蛋白質(zhì)；其中脂質(zhì)體內(nèi)PI脂質(zhì)的摩爾濃度為5到50%。
2.權(quán)利要求I的組合物，其中脂質(zhì)體進(jìn)一步包含DOPE和CHEMS脂質(zhì)。
3.權(quán)利要求I或2的組合物，其中脂質(zhì)體內(nèi)PI脂質(zhì)的摩爾濃度為10到30%。
4.權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)的組合物，用于治療或預(yù)防病毒感染。
5.權(quán)利要求4的組合物，其中病毒感染是ER膜出芽病毒感染。
6.權(quán)利要求5的組合物，其中ER出芽病毒感染是HBV、HCV或BVDV感染。
7.權(quán)利要求4的組合物，其中感染是質(zhì)膜出芽感染。
8.權(quán)利要求7的組合物，其中質(zhì)膜出芽感染是HIV感染。
9.權(quán)利要求4-8任一項(xiàng)的組合物，其中至少一種治療劑包括抗病毒劑。
10.權(quán)利要求9的組合物，其中抗病毒劑包括a-葡糖苷酶抑制劑。
11.權(quán)利要求10的組合物，其中a-葡糖苷酶抑制劑包括NB-DNJ。
12.權(quán)利要求9的組合物，其中抗病毒劑包括離子通道抑制劑。
13.權(quán)利要求9的組合物，其中抗病毒劑包括亞氨基糖。
14.權(quán)利要求4-8任一項(xiàng)的組合物，其中至少一種蛋白質(zhì)是抗病毒蛋白。
15.權(quán)利要求4的組合物，用于治療或預(yù)防人的病毒感染。
全文摘要
通過遞送pH敏感脂質(zhì)體直接進(jìn)入內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER)膜可以治療病毒感染例如乙型肝炎(HBV)感染、丙型肝炎(HCV)感染和牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)感染。兩種示例性的脂質(zhì)體制劑是DOPE/CHEMS(DC脂質(zhì)體)和DOPE/CHEMS/PEG-PE(DCPP脂質(zhì)體)。DC和DCPP脂質(zhì)體可優(yōu)化N-丁基脫氧野尻霉素(NB-DNJ)的細(xì)胞內(nèi)遞送，并因此增加該亞氨基糖的體內(nèi)活性幾個(gè)數(shù)量級，并可用于與其它的治療劑例如干擾素和/或利巴韋林聯(lián)合使用。優(yōu)化的NB-DNJ直接釋放進(jìn)入ER內(nèi)還可用于其中NB-DNJ已知是有效的抗病毒劑的其它病毒如人類免疫缺陷病毒(HIV)的治療。
文檔編號(hào)A61P31/14GK102727437SQ20111025176
公開日2012年10月17日 申請日期2007年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月2日
發(fā)明者C·斯坎倫, N·尼奇塔-布蘭扎, N·齊茲曼, P·魯?shù)? R·A·德維克, S·佩特蘭斯庫, S·波洛克 申請人:牛津大學(xué)院長校長專家委員會(huì)