專利名稱：一種增強(qiáng)透皮給藥組合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物輸運(yùn)領(lǐng)域，具體地說，是關(guān)于一種增強(qiáng)透皮給藥組合物及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
藥物輸運(yùn)是臨床治療的技術(shù)基礎(chǔ)，藥物輸運(yùn)的效率將直接影響臨床各類疾病治療的效果。目前藥物輸運(yùn)的常規(guī)途徑主要包括以靜脈注射給藥和口服給藥為代表的全身性給藥方式以及以皮下、皮內(nèi)以及肌肉注射等為代表的局部給藥方式。但這些傳統(tǒng)的給藥方式會(huì)給患者帶來注射性皮炎、胃腸道等系統(tǒng)性毒性、大劑量長(zhǎng)期全身給藥所致不良反應(yīng)等諸多方面的不便。經(jīng)皮給藥的出現(xiàn)及時(shí)有效地為各類藥物制劑提供了更為安全可靠的運(yùn)輸途徑。經(jīng)皮給藥是藥物一種通過皮膚吸收的給藥方法，指藥物應(yīng)用于皮膚上后，穿過角質(zhì)層， 通過皮膚擴(kuò)散，在局部或全身(由毛細(xì)血管吸收進(jìn)入體循環(huán)達(dá)到有效血藥濃度)起到治療疾病的作用。與傳統(tǒng)的口服或注射給藥相比，經(jīng)皮給藥具有多重優(yōu)點(diǎn)，如避免藥物在胃腸道的降解及吸收問題、減少用藥的個(gè)體差異、通過持續(xù)透皮作用維持恒定有效的藥物作用濃度、避免峰谷現(xiàn)象、降低毒副反應(yīng)等，同時(shí)經(jīng)皮給藥還具有通過減少給藥次數(shù)使大多數(shù)病人易于接受，患者可以自主用藥，也可以隨時(shí)撤銷用藥；適合于有惡心、嘔吐癥狀以及老人、小孩等類別病人；可以局部給藥，特別適合于皮膚性疾病等諸多優(yōu)點(diǎn)。已嘗試的克服皮膚屏障進(jìn)而促進(jìn)透皮給藥效率的方法多種多樣，但歸納起來主要有物理協(xié)助和化學(xué)滲透促進(jìn)劑這兩大類。物理協(xié)助是其中一大類輔助藥物透皮的手段，其常規(guī)技術(shù)主要包括離子電滲促透(中國(guó)專利公開號(hào)CN1171278)、超聲波促透(中國(guó)專利公開號(hào)中國(guó)專利公開號(hào) CN101460214)、微針促透(中國(guó)專利公開號(hào)CN101862503A)、激光促透(中國(guó)專利公開號(hào) CN1119518)等，已證明對(duì)多種藥物有效，且適用于蛋白質(zhì)藥物。但這些方法需要特別的儀器，成本高，劑型靈活性差，不同程度上有疼痛不適感，不適合家庭的普遍使用等。目前國(guó)內(nèi)外已報(bào)道的化學(xué)滲透促進(jìn)劑是另一大類輔助藥物透皮的手段，主要包括表面活性劑類(中國(guó)專利公開號(hào)CN1293033)、亞砜類(中國(guó)專利公開號(hào)CN101744851A、中國(guó)專利公開號(hào)CN101073579)、吡咯烷酮類(中國(guó)專利公開號(hào)CN1M8462)、氮酮與其類似物(中國(guó)專利公開號(hào)CN101176790)、揮發(fā)油(中國(guó)專利公開號(hào)CN1012M227)、氨基酸及其衍生物(中國(guó)專利公開號(hào)CN101041692、中國(guó)專利公開號(hào)CN1615775)、磷脂和油酸(中國(guó)專利公開號(hào)CN160(^97)、醇醚類與多元醇類(中國(guó)專利公開號(hào)CN101940790A、中國(guó)專利公開號(hào)CN1161651)、萜類(中國(guó)專利公開號(hào)CN1615775)、胺類酰胺類(中國(guó)專利公開號(hào) CN1872341)等。大部分化學(xué)滲透促進(jìn)劑可能通過改變皮膚角質(zhì)層類脂排列，影響皮膚角質(zhì)層水合作用，提高皮膚表面角蛋白中含氮物質(zhì)與水的結(jié)合能力，溶解皮脂腺管內(nèi)皮脂，以及膨脹和軟化角質(zhì)層使汗腺、毛囊開口變大等機(jī)理，幫助藥物通過皮膚屏障而促進(jìn)藥物的吸收。化學(xué)滲透促進(jìn)劑對(duì)許多小分子藥物顯示有一定透皮增強(qiáng)效果，有些在臨床上已得到使用。然而，它們有兩大不足易造成皮膚過敏以及不能有效促進(jìn)大分子如蛋白質(zhì)類藥物透皮。由此可見，欲使蛋白質(zhì)藥物經(jīng)皮給藥成為可能，發(fā)展出能克服上述限制的新型透皮增強(qiáng)劑是關(guān)鍵。相比于靜脈注射給藥與口服給藥的高效率，透皮給藥優(yōu)點(diǎn)良多，但是效率較低始終是這項(xiàng)新型給藥方式的瓶頸。中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)納米生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室利用分子生物學(xué)體內(nèi)噬菌體展示技術(shù)成功獲得了一個(gè)由11個(gè)氨基酸組成的能高效幫助蛋白質(zhì)類藥物透皮的短肽TD-I (Application No. 60/740，613、Application No. 60/717，497、中國(guó)專利公開號(hào) CN1879888)。該專利公開了 TD-I能夠幫助胰島素ansulin)透過大鼠腹部皮膚進(jìn)入血液循環(huán)，可以使達(dá)到治療水平的胰島素透過糖尿病大鼠皮膚并產(chǎn)生良好的降糖效果，并能幫助人生長(zhǎng)激素(human growthhormone)透皮。這些工作在2006年4月期的《自然-—生物技術(shù)》雜志上發(fā)表，得到了國(guó)際同行的矚目。能高效幫助蛋白質(zhì)類藥物透皮顯然成為透皮“肽伴侶”TD-I的優(yōu)勢(shì)， 如何能夠提高TD-I攜帶蛋白質(zhì)藥物透皮效率也隨之成為了一個(gè)重要且具有包括臨床治療價(jià)值在內(nèi)的重要的研究課題。ATP(adenosine-triphosphate)中文名稱為腺嘌呤核苷三磷酸，又叫三磷酸腺苷 (腺苷三磷酸)，是生命活動(dòng)能量的直接來源，簡(jiǎn)稱為ATP，其結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)式是:A-P P P，其相鄰的兩個(gè)磷酸基之間的化學(xué)鍵非?；钴S，水解時(shí)可釋放約30. 54kJ/mol的能量，因此稱為高能磷酸鍵，用“ ”表示。在細(xì)胞的生命活動(dòng)中，ATP遠(yuǎn)離A的一個(gè)高能磷酸鍵容易斷裂， 釋放出一個(gè)磷酸和能量后成為二磷酸腺苷(ADP)。將ATP催化水解為ADP和磷酸根離子，是一個(gè)釋放能量的反應(yīng)，催化這一過程的酶是一種無機(jī)磷酸酶，稱為ATP酶。細(xì)胞膜上的ATP 酶由鈉離子和鉀離子激活，大體分為3類①線粒體內(nèi)膜質(zhì)子轉(zhuǎn)移ATP酶，②鈉，鉀-ATP酶(Na+，K+)-ATPase，③肌漿網(wǎng)系Ca2+-ATP酶。鈉，鉀-ATP酶由α、β兩亞基組成。α亞基為分子量約120KD的跨膜蛋白，具有Na、K結(jié)合位點(diǎn)；β亞基為小亞基，是分子量約50KD的糖蛋白，ATP酶特異性抑制劑為烏本苷。ATP與TD-I介導(dǎo)的蛋白質(zhì)藥物透皮效率的關(guān)系未見報(bào)道，本發(fā)明第一次將 ATP與TD-I介導(dǎo)的蛋白質(zhì)藥物透皮能力聯(lián)系在一起，并通過指出AIPase及其β亞基 (^subunit)在ATP促進(jìn)的TD-I介導(dǎo)的蛋白質(zhì)藥物透皮過程中的作用，進(jìn)一步找到增進(jìn) TD-I介導(dǎo)的蛋白質(zhì)藥物透皮效率的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，提供兩種透皮給藥組合物、兩種透皮給藥組合物的應(yīng)用、一種增強(qiáng)藥物透皮給藥的方法，還提供了一種三磷酸腺苷(ATP)的應(yīng)用，另外還提供了兩種含有透皮給藥組合物的藥物，以克服現(xiàn)有技術(shù)缺點(diǎn)和不足。本發(fā)明提供的藥物組合分為兩大類，均涉及三磷酸腺苷(ATP)促進(jìn)的、TD-I介導(dǎo)的藥物蛋白透過皮膚屏障發(fā)揮藥效。其中一類為TD-I與藥物蛋白混合給藥，即TD-I與藥物蛋白以混合物形式發(fā)揮作用；另一類為TD-I與藥物蛋白經(jīng)過分子生物學(xué)方法實(shí)現(xiàn)融合表達(dá)，即TD-I與藥物蛋白以融合蛋白的形式發(fā)揮藥效。此二類藥物組合形式顯示了 TD-I在促進(jìn)藥物蛋白穿透藥物屏障發(fā)揮藥效過程中的僅有的兩種可能的組合方式，即混合給藥方式和TD-I與效應(yīng)蛋白組合為融合蛋白的給藥方式。這些藥物或效應(yīng)蛋白不僅限于化學(xué)合成類多肽，也包括各種蛋白表達(dá)系統(tǒng) (原核、真核、哺乳動(dòng)物、昆蟲等表達(dá)系統(tǒng))表達(dá)出的基因工程等技術(shù)指導(dǎo)下的重組蛋白，以及一些特殊來源的蛋白質(zhì)類藥物，即任何本領(lǐng)域的技術(shù)人員所熟知的這些多肽或蛋白質(zhì)的生產(chǎn)技術(shù)，包括但不限于通過重組技術(shù)等標(biāo)準(zhǔn)的分子生物學(xué)技術(shù)來表達(dá)多肽和蛋白質(zhì)、從自然原料中分離多肽或蛋白質(zhì)、或者化學(xué)合成這些多肽和蛋白質(zhì)等，都包括在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明的第一個(gè)方面，一種增強(qiáng)透皮給藥的組合物，其特征在于，包括至少一種透皮給藥增強(qiáng)劑，以及三磷酸腺苷(ATP)。其中，所述透皮給藥增強(qiáng)劑為透皮增強(qiáng)肽。優(yōu)選的，所述透皮增強(qiáng)肽為TD-1。本發(fā)明所指的透皮藥物包括但不限于廣義上的“藥物”一用于化妝品及護(hù)膚品中的各種蛋白類生長(zhǎng)因子等。優(yōu)選的透皮給藥藥物為廣義上的“藥物”一即人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)和人 α 干擾素(IFN- α -2b)。本發(fā)明的第二個(gè)方面，一種增強(qiáng)藥物透皮給藥的方法，其特征在于，在透皮增強(qiáng)肽介導(dǎo)的透皮藥物輸運(yùn)過程中，將一種治療某疾病的有效劑量的藥物活性制劑或藥物與透皮給藥增強(qiáng)劑聯(lián)合，外加三磷酸腺苷(ATP)。本發(fā)明的第三個(gè)方面，一種三磷酸腺苷的應(yīng)用，其特征在于，用于提高透皮增強(qiáng)肽介導(dǎo)的透皮給藥運(yùn)輸途徑的輸運(yùn)效率和水平。其中，所述透皮增強(qiáng)肽為TD-1。在透皮增強(qiáng)肽介導(dǎo)的透皮藥物輸運(yùn)過程中，將一種治療某疾病的有效劑量的藥物活性制劑或藥物與透皮給藥增強(qiáng)劑聯(lián)合，外加三磷酸腺苷(ATP)，此處的三磷酸腺苷(ATP) 指的是提供能量的活性成分，包括但不限于常規(guī)來源得到的化學(xué)合成所得的三磷酸腺苷 (ATP)以及各種水解后發(fā)揮生理效用的成分依然為三磷酸腺苷(ATP)的三磷酸腺苷(ATP) 衍生物等。相比未添加外加三磷酸腺苷(ATP)的給藥，所述藥物活性制劑或藥物通過動(dòng)物或人的皮膚或者身體表面的給藥得到增強(qiáng)或促進(jìn)。本發(fā)明的第四個(gè)方面，提供了一種三磷酸腺苷(ATP)的應(yīng)用，用于提高透皮增強(qiáng)肽介導(dǎo)的透皮給藥運(yùn)輸途徑的輸運(yùn)效率和水平。其中，所述透皮增強(qiáng)肽為TD-1。本發(fā)明的第五個(gè)方面，一種含有透皮給藥組合物的藥物，包括至少一種治療某疾病的有效劑量的藥物活性制劑或藥物，其特征在于，還包括至少一種透皮給藥增強(qiáng)劑，以及三磷酸腺苷(ATP)。該藥物，包括至少兩種治療某疾病的有效劑量的藥物活性制劑或藥物，至少一種透皮給藥增強(qiáng)劑，以及三磷酸腺苷(ATP)，并提供了治療某疾病的有效劑量的藥物活性制劑或藥物、透皮給藥增強(qiáng)劑，以及三磷酸腺苷(ATP)的優(yōu)選給藥比例。優(yōu)選的，所述透皮給藥增強(qiáng)劑為透皮增強(qiáng)肽。所述透皮給藥增強(qiáng)劑為TD-1。優(yōu)選的透皮給藥藥物為廣義上的“藥物”一即人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)和人α干擾素 (IFN-α -2b)。本發(fā)明的第六個(gè)方面，提供了一種三磷酸腺苷(ATP)的應(yīng)用所涉及的機(jī)理，即闡釋了 Na+，K+-ATPase的β亞基(β subunit-ATPlBl)在三磷酸腺苷(ATP)促進(jìn)透皮增強(qiáng)劑介導(dǎo)的蛋白質(zhì)藥物透皮過程中發(fā)揮的作用。優(yōu)選的，所述透皮給藥增強(qiáng)劑為TD-1。優(yōu)選的透皮給藥藥物為廣義上的“藥物”一即人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)和人α干擾素(IFN-a-2b)。
本發(fā)明的第七個(gè)方面，提供了一種三磷酸腺苷(ATP)作為生物體能量供應(yīng)物的獨(dú)特生物學(xué)作用，即提高透皮增強(qiáng)肽介導(dǎo)的透皮給藥運(yùn)輸途徑的輸運(yùn)效率和水平。此種作用并非其余能量形式(如ADP、AMP、ATP- γ -S、GTP, AMP-PNP等)所能發(fā)揮之作用。優(yōu)選的，所述透皮給藥增強(qiáng)劑為TD-1。優(yōu)選的透皮給藥藥物為廣義上的“藥物”一即人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)和人α干擾素(IFN-a-2b)。本發(fā)明的有益效果相比于靜脈注射給藥與口服給藥的高效率，透皮給藥優(yōu)點(diǎn)良多，但是效率較低始終是透皮給藥方式的瓶頸。本發(fā)明利用ATP這一生物體直接能量供應(yīng)物，可以安全而無毒副作用地提高蛋白質(zhì)類藥物的透皮運(yùn)輸效率，為諸多蛋白質(zhì)藥物的臨床應(yīng)用提供了良好的前景。本發(fā)明通過提高透皮增強(qiáng)肽介導(dǎo)的透皮藥物輸運(yùn)過程中的ATP供應(yīng)量，對(duì)透皮增強(qiáng)肽介導(dǎo)的透皮藥物輸運(yùn)能力有顯著的促進(jìn)效果。通過與本發(fā)明的透皮給藥增強(qiáng)劑和三磷酸腺苷(ATP)的聯(lián)合用藥，一個(gè)很大范圍內(nèi)的藥物透皮給藥都可以得到增強(qiáng)和/或變得更便利。下面例舉了一些實(shí)施例。本發(fā)明提供了屬于能夠通過透皮給藥方式達(dá)到治療作用的藥物，它們能與本發(fā)明的物體直接能量供應(yīng)物ATP及透皮給藥增強(qiáng)劑聯(lián)合給藥。


圖1、透皮槽結(jié)構(gòu)示意圖。圖2、三磷酸腺苷(ATP)在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)TD-I-EGF融合蛋白在大鼠腹部皮膚組織中透皮效率的影響。圖3、三磷酸腺苷(ATP)對(duì)TD-I介導(dǎo)IFN- α -2b蛋白在大鼠腹部皮膚組織中透皮效率的影響。圖4、不同劑量的三磷酸腺苷(ATP)對(duì)TD-I-EGF融合蛋白在大鼠腹部皮膚組織中透皮效率的影響。圖5、不同劑量的三磷酸腺苷(ATP)對(duì)TD-I介導(dǎo)IFN-α _2b蛋白在大鼠腹部皮膚組織中透皮效率的影響。圖6、三磷酸腺苷(ATP)對(duì)TD-I-EGF融合蛋白在成人腋窩皮膚組織中透皮效率的影響。圖7、三磷酸腺苷(ATP)對(duì)TD-I介導(dǎo)IFN- α -2b蛋白在成人腋窩皮膚組織中透皮效率的影響。圖8、烏本苷(Ouabain)對(duì)TD_1_EGF融合蛋白在大鼠腹部皮膚組織中透皮效率的影響。圖9、烏本苷(Ouabain)對(duì)TD-I介導(dǎo)的IFN- α -2b蛋白在大鼠腹部皮膚組織中透皮效率的影響。圖 10、原核表達(dá)Na+，K+ATPase β subunit (ATPlBl)對(duì)TD-1-EGF 融合蛋白以及 TD-1 介導(dǎo)的IFN-α _2b蛋白在大鼠腹部皮膚組織中透皮效率的影響。圖11、三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)在不同時(shí)間點(diǎn)對(duì) TD-I-EGF融合蛋白在大鼠腹部皮膚組織中透皮效率的影響。圖12、三磷酸腺苷(ATP)、三磷酸鳥苷(GTP)、三磷酸腺苷水解類似物(ATP- γ -S)、一磷酸腺苷-亞氨二磷酸鹽(AMP-PNP)對(duì)TD-I介導(dǎo)的IFN-α -2b蛋白在大鼠腹部皮膚組織中透皮效率的影響。附圖標(biāo)記上槽100、下槽200、皮膚組織300、收集液400。
具體實(shí)施例方式以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明。應(yīng)理解，以下實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而非用于限定本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，或廠商提供的條件進(jìn)行。實(shí)施例1 TD-I-EGF和TD-1-EGF+ATP透皮藥物的比較TD-I為ACSSSPSKHCG的短肽；EGF為表皮生長(zhǎng)因子(本申請(qǐng)中ATP幫助TD-1介導(dǎo)融合透皮蛋白質(zhì)藥物透皮以人表皮生長(zhǎng)因子TD-1-huEGF為例，后文中huEGF用EGF表示)。TD-I-EGF來源于中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)納米生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室自行構(gòu)建重組質(zhì)粒，并使用大腸桿菌原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)并純化目的蛋白。簡(jiǎn)述如下通過使用PFN18A halotag 7 Flexi vector (Promega 公司)，構(gòu)建重組質(zhì)粒，再轉(zhuǎn)化入 KRX competent cells (Promega 公司)，葡萄糖、鼠李糖(Promega公司)在25°C，220rpm誘導(dǎo)表達(dá)目的蛋白，20h后收集菌體， 破碎后，使用Halo-Tag純化系統(tǒng)(Promega公司)純化出目的蛋白。之后flfestern-blotting 檢定TDl-EGF的表達(dá)、Western-blotting鑒定融合蛋白是否激活細(xì)胞ERK信號(hào)通路、MTT法檢測(cè)TDl-EGF是否促進(jìn)Balb/c-3T3細(xì)胞增殖以及TDl-EGF對(duì)Balb/C_3T3細(xì)胞遷移的影響驗(yàn)證原核表達(dá)出的目的蛋白是否具有生物學(xué)活性。再通過融合蛋白在大鼠體內(nèi)(in vivo), 體外(in vitro)透皮實(shí)驗(yàn)、融合蛋白在實(shí)驗(yàn)小型豬(in vivo)體內(nèi)透皮實(shí)驗(yàn)以及健康成人皮膚組織體外(in vitro)透皮實(shí)驗(yàn)等實(shí)驗(yàn)證實(shí)表達(dá)出的目的蛋白具有透皮功能。(注 TD-I-EGF的構(gòu)建、表達(dá)、生物學(xué)活性以及透皮活性鑒定見申請(qǐng)人的另一項(xiàng)專利申請(qǐng)《一種促進(jìn)蛋白質(zhì)類藥物表皮生長(zhǎng)因子透皮給藥的方法》，申請(qǐng)?zhí)?01110157776. 0。)三磷酸腺苷(ATP)購(gòu)自加拿大Bio Basic Inc.公司(貨號(hào)AB0020)。TD-I-EGF為已被證明的可透皮的融合蛋白質(zhì)類藥物，本實(shí)施例在TD-I介導(dǎo)的透皮融合蛋白質(zhì)藥物TD-I-EGF透皮給藥過程中同時(shí)應(yīng)用生物直接能量供應(yīng)物質(zhì)三磷酸腺苷 (ATP)，以研究ATP對(duì)于透皮融合蛋白質(zhì)藥物TD-I-EGF的透皮效率的影響。取完整無破損SD大鼠(SPF級(jí)，購(gòu)于安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，后述實(shí)驗(yàn)用SD 大鼠均為此來源)腹部皮膚組織，去毛后置于生理鹽水(0.9% Nacl水溶液)中待用。配制透皮藥物將純度達(dá)到95%以上的融合蛋白TD-I-EGF(儲(chǔ)液濃度lmg/mL)， 用吉爾森移液槍(Gilson，F(xiàn)rance)吸取50 μ L (對(duì)應(yīng)融合蛋白質(zhì)量為50 μ g)，用生理鹽水稀釋到500 μ L，即透皮槽上槽100透皮藥物給藥濃度為100 μ g/ml，如圖1所示，置于透皮槽上槽100作為TD-I-EGF組透皮藥物。另將純度達(dá)到95%以上的融合蛋白TD-I-EGF按 100 μ g/ml的濃度，用生理鹽水稀釋到500 μ 1，再向其中加入20mM的ATP，待ATP充分溶解后，置于Franz透皮槽上槽100作為TD-1-EGF+ATP組透皮藥物。透皮給藥將透皮槽下槽200內(nèi)注滿生理鹽水5ml并放入一個(gè)磁力攪拌子，透皮上槽與下槽之間蒙上之前準(zhǔn)備好的完好無損的大鼠腹部皮膚組織300，上槽內(nèi)分別加入之前配好的透皮用蛋白質(zhì)類藥物TD-I-EGF與TD-1-EGF+ATP。將透皮槽置于Franz透皮擴(kuò)散儀中，恒溫37°C、磁力攪拌轉(zhuǎn)速300rpm，分別在啟動(dòng)透皮擴(kuò)散儀的5min、4h和1 從透皮槽下槽200開口處取200 μ 1收集液400，并在5min、4h取樣后分別從透皮槽下槽開口處加入 200 μ 1生理鹽水維持下槽中收集液總體積不變。檢測(cè)將各個(gè)時(shí)間點(diǎn)從透皮槽下槽中取出的收集液作為待檢樣品，使用人表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子ELISA試劑盒(武漢博士德公司，商品編號(hào)ΕΚ0325)進(jìn)行定量檢測(cè)。計(jì)算透皮槽下槽收集液中的huEGF含量，繪制EGF含量標(biāo)準(zhǔn)曲線，由試劑盒自身配備的EGF標(biāo)準(zhǔn)品完成。根據(jù)試劑盒說明書完成測(cè)試后，各孔OD值在酶標(biāo)儀下使用450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值。 之后可根據(jù)由試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品繪制出的標(biāo)準(zhǔn)曲線推算出所測(cè)各時(shí)間點(diǎn)樣品的EGF的濃度，進(jìn)而推算出透皮槽下槽中的透皮藥物的整體絕對(duì)透過量。數(shù)據(jù)分析student，s_T test進(jìn)行數(shù)據(jù)分析并用Origin做圖。結(jié)果顯示，對(duì)比使用相同EGF量的融合蛋白TD-1-EGF和TD-1-EGF+ATP作為透皮藥物的兩組，發(fā)現(xiàn)在透皮槽下槽中檢測(cè)到的實(shí)際透皮量中，TD-1-EGF+ATP透皮組明顯具有更加良好的透皮效果，TD-1-EGF+ATP組透皮藥物比TD-I-EGF組透皮藥物的透皮量顯著增加。透皮量由TD-I-EGF組中的170. 3181 士45. 50218pg上升到TD-1-EGF+ATP組的 479. 38772士90. 75827pg(4 小時(shí)透皮取樣時(shí)間點(diǎn))；由 398. 62239士38. 35124pg 上升到 1337. 25643士Ml. 43141pg(16小時(shí)透皮取樣時(shí)間點(diǎn))。在TD-I-EGF融合蛋白透皮過程中加入20mM ATP與TD-I-EGF融合蛋白透皮對(duì)照組比較具有顯著性，如圖2所示。實(shí)施例2 TD-1+IFN- α -2b 和 TD-1+ATP+IFN- α -2b 透皮藥物的比較TD-I為ACSSSPSKHCG的短肽；IFN- α -2b為人α干擾素- 亞型(本申請(qǐng)中 ATP幫助TD-I以混合給藥方式幫助蛋白質(zhì)藥物透皮以人α干擾素_2b亞型為例，后文中 hu-IFN- α -2b 用 IFN 表示)。TD-I來源于上海吉爾生化有限公司(GLS)，IFN來源于安徽省安科生物工程科技股份有限公司(Anke-Bio)，三磷酸腺苷(ATP)購(gòu)自加拿大BioBasic Inc.公司(貨號(hào) AB0020)。IFN為已被證明的抗病毒、蛋白質(zhì)類藥物，本實(shí)施例在TD-I介導(dǎo)的透蛋白質(zhì)藥物 IFN透皮給藥過程中，同時(shí)應(yīng)用生物直接能量供應(yīng)物質(zhì)三磷酸腺苷(ATP)，以研究ATP對(duì)于蛋白質(zhì)藥物IFN在TD-I介導(dǎo)下的透皮效率的影響。取完整無破損SD大鼠(SPF級(jí)，購(gòu)于安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，后述實(shí)驗(yàn)用SD 大鼠均為此來源)腹部皮膚組織，去毛后置于生理鹽水(0. 9% Nacl水溶液)中待用。配制透皮藥物將純度達(dá)到95%以上的IFN(儲(chǔ)液濃度lmg/mL)，用吉爾森移液槍 (Gilson，F(xiàn)rance)吸取50 μ L(對(duì)應(yīng)融合蛋白質(zhì)量為50 μ g)，用生理鹽水稀釋到500 μ L， 再向其中加入TD-I多肽10 μ g，即透皮槽上槽100透皮藥物給藥濃度為100 μ g/ml，如圖1 所示，置于透皮槽上槽100作為TD-1+IFN組透皮藥物。另將純度達(dá)到95%以上的IFN按 100 μ g/ml的濃度，用生理鹽水稀釋到500 μ 1，再向其中加入TD-I多肽10 μ g和20mM的 ATP,待ATP充分溶解后，置于Franz透皮槽上槽100作為TD-1+IFN+ATP組透皮藥物。透皮給藥將透皮槽下槽200內(nèi)注滿生理鹽水5ml并放入一個(gè)磁力攪拌子，透皮上槽100與下槽200之間蒙上之前準(zhǔn)備好的完好無損的大鼠腹部皮膚組織300，上槽內(nèi)分別加入之前配好的透皮用蛋白質(zhì)類藥物TD-1+IFN與TD-1+IFN+ATP。將透皮槽置于Franz透皮擴(kuò)散儀中，恒溫37°C、磁力攪拌轉(zhuǎn)速300rpm，在啟動(dòng)透皮擴(kuò)散儀的1 從透皮槽下槽200開口處取200 μ 1收集液400。檢測(cè)將各個(gè)時(shí)間點(diǎn)從透皮槽下槽中取出的收集液作為待檢樣品，使用人-α干擾素含量ELISA檢測(cè)試劑盒(蘇州卡爾文生物科技有限公司)進(jìn)行定量檢測(cè)。計(jì)算透皮槽下槽收集液中的IFN含量，繪制IFN含量標(biāo)準(zhǔn)曲線，由試劑盒自身配備的IFN標(biāo)準(zhǔn)品完成。 根據(jù)試劑盒說明書完成測(cè)試后，各孔OD值在酶標(biāo)儀下使用450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值。之后可根據(jù)由試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品繪制出的標(biāo)準(zhǔn)曲線推算出所測(cè)各時(shí)間點(diǎn)樣品的IFN的濃度，進(jìn)而推算出透皮槽下槽中的透皮藥物的整體絕對(duì)透過量。數(shù)據(jù)分析student，s_T test進(jìn)行數(shù)據(jù)分析并用Origin做圖。結(jié)果顯示，對(duì)比使用相同IFN、TD-I量的TD-1+IFN和TD-1+IFN+ATP作為透皮藥物的兩組，發(fā)現(xiàn)在透皮槽下槽中檢測(cè)到的實(shí)際透皮量中，TD-1+IFN+ATP透皮組明顯具有更加良好的透皮效果，TD-1+IFN+ATP組透皮藥物比TD-1+IFN組透皮藥物的透皮量顯著增加。透皮量由TD-1+IFN組中的857. 893士 198. 78945pg上升到TD-1+IFN+ATP組的 1987. 983士221.43256pg(16小時(shí)透皮取樣時(shí)間點(diǎn))。在TD-1+IFN蛋白透皮過程中加入 20mMATP與TD-1+IFN融合蛋白透皮對(duì)照組比較具有顯著性，如圖3所示。實(shí)施例3 TD-I-EGF的透皮效率與ATP劑量的關(guān)系在TD-I介導(dǎo)的透皮融合蛋白質(zhì)藥物TD-I-EGF透皮給藥過程中同時(shí)應(yīng)用不同劑量(0mM-20mM)的生物直接能量供應(yīng)物質(zhì)三磷酸腺苷一-ATP，以檢測(cè)透皮融合蛋白質(zhì)藥物 TD-I-EGF的透皮效率與ATP劑量的關(guān)系。取完整SD大鼠腹部皮膚組織，去毛后置于生理鹽水(0.9% Nacl水溶液)中待用。配制透皮藥物，方法如下將純度達(dá)到95%以上的融合蛋白TD-I-EGF(儲(chǔ)液濃度 lmg/mL)，用吉爾森移液槍(Gilson，F(xiàn)rance)吸取50 μ L (對(duì)應(yīng)融合蛋白質(zhì)量為50 μ g)，用生理鹽水稀釋到500 μ L，即透皮槽上槽100透皮藥物給藥濃度為100 μ g/ml，置于透皮槽上槽作為TD-I-EGF組透皮藥物。另將純度達(dá)到95%以上的融合蛋白TD-I-EGF按上述同樣的方法稀釋到給藥濃度為100 μ g/ml，再向其中分別加入5mM、10mM、20mM和30mM的ATP，待 ATP充分溶解后，置于Franz透皮槽上槽作為TD-1-EGF+ATP組透皮藥物。透皮給藥將透皮槽下槽內(nèi)注滿生理鹽水5ml并放入一個(gè)磁力攪拌子，透皮上槽 100與下槽200之間蒙上之前準(zhǔn)備好的完好無損的大鼠腹部皮膚組織300，上槽內(nèi)分別加入之前配好的透皮用蛋白質(zhì)類藥物TD-I-EGF與TD-1-EGF+ATP。將透皮槽置于Franz透皮擴(kuò)散儀中，恒溫37°C、磁力攪拌轉(zhuǎn)速300rpm，在啟動(dòng)透皮擴(kuò)散儀的4h從透皮槽下槽開口處取 200 μ 1收集液400。檢測(cè)將4h時(shí)從透皮槽下槽中取出的收集液作為待檢樣品，使用人表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子ELISA試劑盒(武漢博士德公司，商品編號(hào)EK0325)進(jìn)行定量檢測(cè)。計(jì)算透皮槽下槽收集液中的huEGF含量，繪制EGF含量標(biāo)準(zhǔn)曲線，由試劑盒自身配備的EGF標(biāo)準(zhǔn)品完成。根據(jù)試劑盒說明書完成測(cè)試后，各孔OD值在酶標(biāo)儀下使用450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值。之后可根據(jù)由試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品繪制出的標(biāo)準(zhǔn)曲線推算出所測(cè)各時(shí)間點(diǎn)樣品的EGF的濃度，進(jìn)而推算出透皮槽下槽中的透皮藥物的整體絕對(duì)透過量。數(shù)據(jù)分析student，s_T test進(jìn)行數(shù)據(jù)分析并用Origin做圖。結(jié)果顯示，對(duì)比使用不同劑量的ATP與融合蛋白TD-1-EGF作為透皮藥物的兩組，發(fā)現(xiàn)在透皮槽下槽中檢測(cè)到的實(shí)際透皮量中，TD-I-EGF的透皮量與ATP的量呈正相關(guān)，EGF透皮絕對(duì)量由OmM ATP時(shí)的93. 07573士32. 33889pg，上升到5mM ATP時(shí)的 150. 45118士81. 30506pg,上升到 IOmM ATP 時(shí)的 306. 69786士50. 76858pg,20mM ATP 時(shí)的 450. 77399士69. 43009pg, 30mMATP 時(shí)的 662. 6217士72. 94506pg。在 TD-1-EGF 融合蛋白透皮過程中加入不同劑量的ATP與TD-I-EGF融合蛋白透皮對(duì)照組(不加入ATP透皮組)比較具有不同置信區(qū)間的顯著性，如圖4所示。實(shí)施例4 TD-I介導(dǎo)IFN的透皮效率與ATP劑量的關(guān)系在TD-I介導(dǎo)的蛋白質(zhì)藥物IFN透皮給藥過程中同時(shí)應(yīng)用不同劑量(0mM-20mM)的生物直接能量供應(yīng)物質(zhì)三磷酸腺苷一-ATP，以檢測(cè)TD-I介導(dǎo)的蛋白質(zhì)藥物IFN的透皮效率與ATP劑量的關(guān)系。取完整無破損SD大鼠(SPF級(jí)，購(gòu)于安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，后述實(shí)驗(yàn)用SD 大鼠均為此來源)腹部皮膚組織，去毛后置于生理鹽水(0. 9% Nacl水溶液)中待用。配制透皮藥物將純度達(dá)到95%以上的IFN(儲(chǔ)液濃度lmg/mL)，用吉爾森移液槍 (Gilson，F(xiàn)rance)吸取50 μ L(對(duì)應(yīng)融合蛋白質(zhì)量為50 μ g)，用生理鹽水稀釋到500 μ L， 再向其中加入TD-I多肽10 μ g，即透皮槽上槽100透皮藥物給藥濃度為100 μ g/ml，如圖1 所示，置于透皮槽上槽100作為TD-1+IFN組透皮藥物。另將純度達(dá)到95%以上的IFN按 100 μ g/ml的濃度，用生理鹽水稀釋到500 μ 1，再向其中加入TD-I多肽10 μ g和2mM、5mM、 IOmM和20mM的ATP，待ATP充分溶解后，置于Franz透皮槽上槽100作為TD-1+IFN+ATP組透皮藥物。透皮給藥將透皮槽下槽200內(nèi)注滿生理鹽水5ml并放入一個(gè)磁力攪拌子，透皮上槽與下槽之間蒙上之前準(zhǔn)備好的完好無損的大鼠腹部皮膚組織300，上槽內(nèi)分別加入之前配好的透皮用蛋白質(zhì)類藥物TD-1+IFN與TD-1+IFN+ATP。將透皮槽置于Franz透皮擴(kuò)散儀中，恒溫37°C、磁力攪拌轉(zhuǎn)速300rpm，在啟動(dòng)透皮擴(kuò)散儀的IMi從透皮槽下槽200開口處取 200 μ 1收集液400。檢測(cè)將各個(gè)時(shí)間點(diǎn)從透皮槽下槽中取出的收集液作為待檢樣品，使用人-α干擾素含量ELISA檢測(cè)試劑盒(蘇州卡爾文生物科技有限公司)進(jìn)行定量檢測(cè)。計(jì)算透皮槽下槽收集液中的IFN含量，繪制IFN含量標(biāo)準(zhǔn)曲線，由試劑盒自身配備的IFN標(biāo)準(zhǔn)品完成。 根據(jù)試劑盒說明書完成測(cè)試后，各孔OD值在酶標(biāo)儀下使用450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值。之后可根據(jù)由試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品繪制出的標(biāo)準(zhǔn)曲線推算出所測(cè)各時(shí)間點(diǎn)樣品的EGF的濃度，進(jìn)而推算出透皮槽下槽中的透皮藥物的整體絕對(duì)透過量。數(shù)據(jù)分析student，s_T test進(jìn)行數(shù)據(jù)分析并用Origin做圖。結(jié)果顯示，對(duì)比使用相同IFN、TD-I量的TD-1+IFN和TD-1+IFN+ATP作為透皮藥物的兩組，發(fā)現(xiàn)在透皮槽下槽中檢測(cè)到的實(shí)際透皮量中，TD-1+IFN+ATP透皮組明顯具有更加良好的透皮效果，透皮絕對(duì)量由2mMATP時(shí)的837. 321 士 138. 3355pg上升到 5mMATP 時(shí)的 1287. 983 士 201. ^56pg，IOmM ATP 時(shí)的 1887. 983401.上升到 450. 77399士69. 43009pg, 20mMATP 時(shí)的 2098. 983士311. 256pg。在 TD-I 介導(dǎo)的 IFN 透皮過程中加入不同劑量的ATP與TD-I單獨(dú)介導(dǎo)IFN透皮對(duì)照組(不加入ATP透皮組)比較具有不同置信區(qū)間的顯著性，如圖5所示。實(shí)施例5融合蛋白透過人類皮膚組織過程中TD-I-EGF和TD-1-EGF+ATP的比較
在TD-I介導(dǎo)的透皮融合蛋白質(zhì)藥物TD-I-EGF穿透人類皮膚組織給藥過程中同時(shí)應(yīng)用生物直接能量供應(yīng)物質(zhì)三磷酸腺苷(ATP)，以提高透皮融合蛋白質(zhì)藥物TD-I-EGF的透皮效率。健康的成年男性3人，取外科手術(shù)后腋窩皮膚組織置于生理鹽水(0. 9% Nacl水溶液)中待用。配制透皮藥物將純度達(dá)到95%以上的融合蛋白TD-I-EGF(儲(chǔ)液濃度lmg/mL)， 用吉爾森移液槍(Gilson，F(xiàn)rance)吸取50 μ L (對(duì)應(yīng)融合蛋白質(zhì)量為50 μ g)，用生理鹽水稀釋到500 μ L，即透皮槽上槽100透皮藥物給藥濃度為100 μ g/ml，置于透皮槽上槽作為 TD-I-EGF組透皮藥物。另將純度達(dá)到95%以上的融合蛋白TD-I-EGF按上述同樣方法稀釋到給藥濃度為100 μ g/ml，再向其中加入20mM的ATP，待ATP充分溶解后，置于Franz透皮槽上槽作為TD-1-EGF+ATP組透皮藥物。透皮給藥將透皮槽下槽內(nèi)注滿生理鹽水5ml并放入一個(gè)磁力攪拌子，透皮上槽 100與下槽200之間蒙上之前準(zhǔn)備好的完好無損的健康成年男性皮膚組織300，上槽內(nèi)分別加入之前配好的透皮用蛋白質(zhì)類藥物TD-I-EGF與TD-1-EGF+ATP。將透皮槽置于Franz透皮擴(kuò)散儀中，恒溫37°C、磁力攪拌轉(zhuǎn)速300rpm，在啟動(dòng)透皮擴(kuò)散儀的1 從透皮槽下槽開口處取200 μ 1收集液400。檢測(cè)將各個(gè)時(shí)間點(diǎn)從透皮槽下槽中取出的收集液作為待檢樣品，使用人表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子ELISA試劑盒(武漢博士德公司，商品編號(hào)ΕΚ0325)進(jìn)行定量檢測(cè)。計(jì)算透皮槽下槽收集液中的huEGF含量，繪制EGF含量標(biāo)準(zhǔn)曲線，由試劑盒自身配備的EGF標(biāo)準(zhǔn)品完成。根據(jù)試劑盒說明書完成測(cè)試后，各孔OD值在酶標(biāo)儀下使用450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值。 之后可根據(jù)由試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品繪制出的標(biāo)準(zhǔn)曲線推算出所測(cè)各時(shí)間點(diǎn)樣品的EGF的濃度，進(jìn)而推算出透皮槽下槽中的透皮藥物的整體絕對(duì)透過量。數(shù)據(jù)分析student，s_T test進(jìn)行數(shù)據(jù)分析并用Origin做圖。結(jié)果顯示，對(duì)比使用相同EGF量的融合蛋白TD-I-EGF和TD-1-EGF+ATP作為人類皮膚組織透皮藥物的兩組，發(fā)現(xiàn)在透皮槽下槽中檢測(cè)到的實(shí)際透皮量中，TD-1-EGF+ATP透皮組明顯具有更加良好的透皮效果，TD-1-EGF+ATP組透皮藥物比TD-I-EGF組透皮藥物的透皮量顯著增加。透皮16小時(shí)后，透皮量由TD-I-EGF組中的30. 88033 士 19. 55883pg上升到TD-1-EGF+ATP組的101. 59833士2. 92836pg。在TD-I-EGF融合蛋白透皮過程中加入20mM ATP與TD-I-EGF融合蛋白透皮對(duì)照組比較具有顯著性，如圖6所示。 實(shí)施例6 TD-I介導(dǎo)IFN穿透人類皮膚組織過程中添加ATP與不添加ATP的透皮效果比較在TD-I介導(dǎo)的蛋白質(zhì)藥物IFN透皮給藥過程中同時(shí)應(yīng)用不同劑量(0mM-20mM)的生物直接能量供應(yīng)物質(zhì)三磷酸腺苷一-ATP，以檢測(cè)TD-I介導(dǎo)的蛋白質(zhì)藥物IFN的透皮效率與ATP劑量的關(guān)系。健康的成年男性3人，取外科手術(shù)后腋窩皮膚組織置于生理鹽水(0. 9% Nacl水溶液)中待用。配制透皮藥物將純度達(dá)到95%以上的IFN(儲(chǔ)液濃度lmg/mL)，用吉爾森移液槍 (Gilson, France)吸取50 μ L(對(duì)應(yīng)融合蛋白質(zhì)量為50 μ g)，用生理鹽水稀釋到500 μ L， 再向其中加入TD-I多肽10 μ g，即透皮槽上槽100透皮藥物給藥濃度為100 μ g/ml，如圖1所示，置于透皮槽上槽100作為TD-1+IFN組透皮藥物。另將純度達(dá)到95%以上的IFN按 100 μ g/ml的濃度，用生理鹽水稀釋到500 μ 1，再向其中加入TD-I多肽10 μ g和20mM的 ATP,待ATP充分溶解后，置于Franz透皮槽上槽100作為TD-1+IFN+ATP組透皮藥物。透皮給藥透皮給藥將透皮槽下槽200內(nèi)注滿生理鹽水5ml并放入一個(gè)磁力攪拌子，透皮上槽與下槽之間蒙上之前準(zhǔn)備好的完好無損的大鼠腹部皮膚組織300，上槽內(nèi)分別加入之前配好的透皮用蛋白質(zhì)類藥物TD-1+IFN與TD-1+IFN+ATP。將透皮槽置于Franz 透皮擴(kuò)散儀中，恒溫37°C、磁力攪拌轉(zhuǎn)速300rpm，在啟動(dòng)透皮擴(kuò)散儀的4h從透皮槽下槽200 開口處取200 μ 1收集液400。檢測(cè)將各個(gè)時(shí)間點(diǎn)從透皮槽下槽中取出的收集液作為待檢樣品，使用人-α干擾素含量ELISA檢測(cè)試劑盒(蘇州卡爾文生物科技有限公司)進(jìn)行定量檢測(cè)。計(jì)算透皮槽下槽收集液中的IFN含量，繪制IFN含量標(biāo)準(zhǔn)曲線，由試劑盒自身配備的IFN標(biāo)準(zhǔn)品完成。 根據(jù)試劑盒說明書完成測(cè)試后，各孔OD值在酶標(biāo)儀下使用450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值。之后可根據(jù)由試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品繪制出的標(biāo)準(zhǔn)曲線推算出所測(cè)各時(shí)間點(diǎn)樣品的EGF的濃度，進(jìn)而推算出透皮槽下槽中的透皮藥物的整體絕對(duì)透過量。數(shù)據(jù)分析student，s_T test進(jìn)行數(shù)據(jù)分析并用Origin做圖。結(jié)果顯示，對(duì)比使用相同IFN、TD-1量的TD-1+IFN和TD-1+IFN+ATP作為透皮藥物的兩組，發(fā)現(xiàn)在透皮槽下槽中檢測(cè)到的實(shí)際透皮量中，TD-1+IFN+ATP透皮組明顯具有更加良好的透皮效果，透皮絕對(duì)量由不添加ATP時(shí)的138. 893士56. 78392pg上升到添加ATP時(shí)的388. 356 士 122. 6756pg。在TD-I介導(dǎo)的IFN透皮過程中加入ATP與TD-I單獨(dú)介導(dǎo)IFN 透皮對(duì)照組(不加入ATP透皮組)比較具有不同置信區(qū)間的顯著性，如圖7所示。實(shí)施例7烏本苷對(duì)透皮效率的影響在TD-I介導(dǎo)的透皮融合蛋白質(zhì)藥物TD-I-EGF以及IFN透皮給藥過程中同時(shí)應(yīng)用生物體水解ATP的ATP酶抑制劑-—烏本苷(Ouabain)，以檢測(cè)ATP水解受到抑制，即ATP 實(shí)際可利用量較少后，透皮融合蛋白質(zhì)藥物TD-I-EGF以及IFN的透皮效率是否受到影響。取完整SD大鼠腹部皮膚組織，去毛后置于生理鹽水(0.9% Nacl水溶液)中待用。配制透皮藥物將純度達(dá)到95%以上的融合蛋白TD-I-EGF(儲(chǔ)液濃度lmg/mL)， 用吉爾森移液槍(Gilson，F(xiàn)rance)吸取50 μ L (對(duì)應(yīng)融合蛋白質(zhì)量為50 μ g)，用生理鹽水稀釋到500 μ L，即透皮槽上槽100透皮藥物給藥濃度為100 μ g/ml，置于透皮槽上槽作為 TD-I-EGF組透皮藥物。另將純度達(dá)到95%以上的融合蛋白TD-I-EGF按上述同樣方法稀釋到給藥濃度為100 μ g/ml，再向其中加入50mM的烏本苷，待烏本苷充分溶解后，置于Franz 透皮槽上槽100作為TD-1-EGF+ouabain組透皮藥物。將純度達(dá)到95%以上的IFN(儲(chǔ)液濃度lmg/mL)，用吉爾森移液槍(Gilson， France)吸取50 μ L(對(duì)應(yīng)融合蛋白質(zhì)量為50 μ g)，用生理鹽水稀釋到500 μ L，再向其中加入TD-I多肽10 μ g，置于Franz透皮槽上槽100作為TD-1+IFN組透皮藥物。另將純度達(dá)到 95%以上的IFN、TD-1按上述同樣方法稀釋到給藥濃度，再向其中加入50mM的烏本苷，待烏本苷充分溶解后，置于Franz透皮槽上槽100作為TD-1+IFN+ouabain組透皮藥物。透皮給藥將透皮槽下槽內(nèi)注滿生理鹽水5ml并放入一個(gè)磁力攪拌子，透皮上槽100與下槽200之間蒙上之前準(zhǔn)備好的完好無損的大鼠腹部皮膚組織300，上槽內(nèi)分別加入之前配好的透皮用蛋白質(zhì)類藥物TD-I-EGF與TD-l-EGF+Ouabain、TD-1+IFN和TD-1+IFN+Ouabain。將透皮槽置于Franz透皮擴(kuò)散儀中，恒溫37°C、磁力攪拌轉(zhuǎn)速300rpm， 在啟動(dòng)透皮擴(kuò)散儀的4h從透皮槽下槽開口處取200 μ 1收集液400。檢測(cè)將各個(gè)時(shí)間點(diǎn)從透皮槽下槽中取出的收集液作為待檢樣品，使用人表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子ELISA試劑盒(武漢博士德公司，商品編號(hào)EK032O和人-α干擾素含量ELISA 檢測(cè)試劑盒(蘇州卡爾文生物科技有限公司)進(jìn)行定量檢測(cè)。計(jì)算透皮槽下槽收集液中的 huEGF、IFN含量，繪制EGF、IFN含量標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別由試劑盒自身配備的EGF及IFN標(biāo)準(zhǔn)品完成。根據(jù)試劑盒說明書完成測(cè)試后，各孔OD值在酶標(biāo)儀下使用450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值。之后可根據(jù)由試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品繪制出的標(biāo)準(zhǔn)曲線推算出所測(cè)各時(shí)間點(diǎn)樣品的EGF和IFN 的濃度，進(jìn)而推算出透皮槽下槽中的透皮藥物的整體絕對(duì)透過量。數(shù)據(jù)分析student，s_T test進(jìn)行數(shù)據(jù)分析并用Origin做圖。結(jié)果顯示，對(duì)比使用相同EGF量的融合蛋白TD-I-EGF和TD-1-EGF+Ouabain作為透皮藥物的兩組，發(fā)現(xiàn)在透皮槽下槽中檢測(cè)到的實(shí)際透皮量中，TD-1-EGF+ouabain透皮組的透皮效果受到明顯抑制，透皮量由TD-I-EGF組中的152. 05 士 56. 7109pg下降到 TD-1-EGF+Ouabain 組的 28. 06233士6. 4581pg。在 TD-1-EGF 融合蛋白透皮過程中加入 50mM Ouabain與TD_1_EGF融合蛋白透皮對(duì)照組比較具有顯著性。對(duì)比使用相同IFN、TD_1量的 TD-1+IFN和TD-1+IFN+Ouabain作為透皮藥物的兩組，發(fā)現(xiàn)在透皮槽下槽中檢測(cè)到的實(shí)際透皮量中，TD-1+IFN透皮組明顯具有更加良好的透皮效果，透皮絕對(duì)量由不添加Ouabain 時(shí)的 1987. 983pg士568. 38692pg 下降到添加 Ouabain 時(shí)的 588. 356士282. 6668pg。在 TD-I 介導(dǎo)、ATP增強(qiáng)的IFN透皮過程中加入Ouabain與TD-I介導(dǎo)、ATP增強(qiáng)的IFN透皮過程中不加入Ouabain比較具有不同置信區(qū)間的顯著性，如圖8、9所示。實(shí)施例8原核表達(dá)Na+，K+ATPase β subunit (ATPlBl)對(duì)透皮效率的影響在TD-I介導(dǎo)的透皮融合蛋白質(zhì)藥物TD-I-EGF及TD-I介導(dǎo)的蛋白質(zhì)藥物IFN透皮給藥過程中同時(shí)應(yīng)用生物直接能量供應(yīng)物質(zhì)三磷酸腺苷(ATP)，并在透皮過程中添加原核表達(dá)的 Na+，K+ATPase β subunit (ATPlBl)，以檢測(cè)外源 Na+，K+ATPase β subunit 是否對(duì)ATP 促透效率有影響，從而評(píng)估大鼠皮膚內(nèi)源性Na+，K+AIPase β subunit在ATP增強(qiáng)、TD-I介導(dǎo)的蛋白質(zhì)藥物透皮給藥是否具有重要的作用。取完整SD大鼠腹部皮膚組織，去毛后置于生理鹽水(0.9% Nacl水溶液)中待用。配制透皮藥物將純度達(dá)到95%以上的融合蛋白TD-I-EGF(儲(chǔ)液濃度lmg/mL)，用吉爾森移液槍(Gilson，F(xiàn)rance)吸取50 μ L(對(duì)應(yīng)融合蛋白質(zhì)量為50yg)，用生理鹽水稀釋到500 μ L，即透皮槽上槽100透皮藥物給藥濃度為100 μ g/ml，再向其中加入原核表達(dá)產(chǎn)物 GST 蛋白 20 μ g (表達(dá)載體為 pGex-6P-l, Pharmacia, USA, Cat. No. 27-4597-01，誘導(dǎo)劑為 IPTG,BBI, Canada. Cat. No. IB0168，誘導(dǎo)過程如下轉(zhuǎn)化 pGex_6p_l 質(zhì)粒于 BL-21-DE3 感受態(tài)細(xì)胞，Transgen, China, Cat. No. CB305，接種至LB培養(yǎng)基，待OD值達(dá)到0. 6-0. 8之間，加入ImM IPTG，25°C誘導(dǎo)5小時(shí)，高壓破碎細(xì)菌后收集蛋白，使用BCA試劑盒Beyotime，China， Cat. No. P0010S定量蛋白濃度)，置于透皮槽上槽100作為TD-1-EGF+GST組透皮藥物。另將純度達(dá)到95%以上的融合蛋白TD-I-EGF按上述同樣方法稀釋到給藥濃度為100 μ g/ml, 再向其中加入原核表達(dá)產(chǎn)物GST-ATP1B1蛋白20 μ g(表達(dá)載體為pGex-6P_l，Pharmacia, USA, Cat. No. 27-4597-01，誘導(dǎo)劑為 IPTG, BBI，Canada. Cat. No. IB0168，誘導(dǎo)過程如下轉(zhuǎn)化 pGex-6p-l-ATPlBl 質(zhì)粒于 BL-21-DE3 感受態(tài)細(xì)胞，Transgen, China, Cat. No. CB305，接種至LB培養(yǎng)基，待OD值達(dá)到0. 6-0. 8之間，加入ImM IPTG，25°C誘導(dǎo)5小時(shí)，高壓破碎細(xì)菌后收集蛋白，使用BCA試劑盒Beyotime，China, Cat. No. P0010S定量蛋白濃度)，置于透皮槽上槽100作為TD-1-EGF+GST-ATP1B1組透皮藥物。。將純度達(dá)到95%以上的蛋白IFN(儲(chǔ)液濃度lmg/mL)，用吉爾森移液槍(Gilson， France)吸取50 μ L(對(duì)應(yīng)融合蛋白質(zhì)量為50 μ g)，用生理鹽水稀釋到500 μ L，即透皮槽上槽100透皮藥物給藥濃度為100 μ g/ml,向其中加入TD-I多肽10 μ g后再向其中加入原核表達(dá)產(chǎn)物 GST 蛋白 20μ g (表達(dá)載體為 pGex-6P-l，Pharmacia, USA, Cat. No. 27-4597-01， 誘導(dǎo)劑為IPTG, BBI，Canada. Cat. No. IBO168，誘導(dǎo)過程如下轉(zhuǎn)化pGex_6p_l質(zhì)粒于 BL-21-DE3感受態(tài)細(xì)胞，Transgen, China, Cat. No. CB305,接種至LB培養(yǎng)基，待OD值達(dá)到 0. 6-0. 8之間，加入ImM IPTG，25°C誘導(dǎo)5小時(shí)，高壓破碎細(xì)菌后收集蛋白，使用BCA試劑盒 Beyotime, China, Cat. No. P0010S定量蛋白濃度)，置于透皮槽上槽100作為TD-1+IFN+GST 組透皮藥物。另將純度達(dá)到95%以上的蛋白IFN按上述同樣方法稀釋到給藥濃度為 100 μ g/ml,向其中加入TD-I多肽1(^8后再向其中加入原核表達(dá)產(chǎn)物651^^ 讓1蛋白 20 μ g (表達(dá)載體為 pGex-6P-l，Pharmacia, USA, Cat. No. 27-4597-01，誘導(dǎo)劑為 IPTG，BBI， Canada. Cat. No. IB0168)，誘導(dǎo)過程如下轉(zhuǎn)化 pGex-6p-l_ATPlBl 質(zhì)粒于 BL_21_DE3 感受態(tài)細(xì)胞，Transgen, China, Cat. No. CB305，接種至LB培養(yǎng)基，待OD值達(dá)到0. 6-0. 8之間，加入 ImM IPTG，25°C誘導(dǎo)5小時(shí)，高壓破碎細(xì)菌后收集蛋白，使用BCA試劑盒Beyotime，China, Cat. No. P0010S定量蛋白濃度)，置于透皮槽上槽100作為TD-1+IFN+GST-ATP1B1組透皮藥物。透皮給藥將透皮槽下槽內(nèi)注滿生理鹽水5ml并放入一個(gè)磁力攪拌子，透皮上槽 100與下槽200之間蒙上之前準(zhǔn)備好的完好無損的大鼠腹部皮膚組織300，上槽內(nèi)分別加入之前配好的透皮用蛋白質(zhì)類藥物TD-1-EGF+GST與TD-1_EGF+GST-ATP1B1、TD_1+IFN+GST 和TD-1+IFN+GST-ATP1B1。將透皮槽置于Franz透皮擴(kuò)散儀中，恒溫37°C、磁力攪拌轉(zhuǎn)速 300rpm，在啟動(dòng)透皮擴(kuò)散儀的4h從透皮槽下槽開口處取200 μ 1收集液400。檢測(cè)將各個(gè)時(shí)間點(diǎn)從透皮槽下槽中取出的收集液作為待檢樣品，使用人表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子ELISA試劑盒(武漢博士德公司，商品編號(hào)EK032O和人-α干擾素含量ELISA 檢測(cè)試劑盒(蘇州卡爾文生物科技有限公司)進(jìn)行定量檢測(cè)。計(jì)算透皮槽下槽收集液中的 huEGF、IFN含量，繪制EGF、IFN含量標(biāo)準(zhǔn)曲線，分別由試劑盒自身配備的EGF及IFN標(biāo)準(zhǔn)品完成。根據(jù)試劑盒說明書完成測(cè)試后，各孔OD值在酶標(biāo)儀下使用450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值。之后可根據(jù)由試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品繪制出的標(biāo)準(zhǔn)曲線推算出所測(cè)各時(shí)間點(diǎn)樣品的EGF和IFN 的濃度，進(jìn)而推算出透皮槽下槽中的透皮藥物的整體絕對(duì)透過量。數(shù)據(jù)分析student，s_T test進(jìn)行數(shù)據(jù)分析并用Origin做圖。結(jié)果顯示，對(duì)比使用相同EGF量的融合蛋白TD-I-EGF和TD-l_EGF+0uabain作為透皮藥物的兩組，發(fā)現(xiàn)在透皮槽下槽中檢測(cè)到的實(shí)際透皮量中，TD-1-EGF+GST-ATP1B1透皮組的透皮效果受到明顯抑制，透皮量由TD-1-EGF+GST組中的225. 45216士38. 8978pg下降到 TD-1-EGFTD-1-EGF+GST-ATP1B1 組的 71. 81568 士 17. 3321pg。在 TD-1-EGF+GST 融合蛋白透皮過程組與TD-1-EGF+GST-ATP1B1融合蛋白透皮對(duì)照組比較具有顯著性。對(duì)比使用相同 IFN、TD-1量的TD-1+IFN+GST和TD-1+IFN+GST-ATP1B1作為透皮藥物的兩組，發(fā)現(xiàn)在透皮槽下槽中檢測(cè)到的實(shí)際透皮量中，TD-1+IFN+GST透皮組明顯具有更加良好的透皮效果，透皮絕對(duì)量由 267. 987pg士89. 89843pg 下降到添加 GST-ATP1B1 時(shí)的 78. 8989士33. 8987pg。在 TD-I介導(dǎo)的IFN透皮過程中加入GST與TD-I介導(dǎo)的IFN透皮過程中加入GST-ATP1B1比較具有不同置信區(qū)間的顯著性，如圖10所示。實(shí)施例9不同能量形式作為透皮藥物的對(duì)比在TD-I介導(dǎo)的透皮融合蛋白質(zhì)藥物TD-I-EGF透皮給藥過程中同時(shí)應(yīng)用生物直接能量供應(yīng)物質(zhì)三磷酸腺苷(ATP)，以及各種ATP結(jié)構(gòu)類似能量供應(yīng)物，如ADP、AMP、 ATP- y -S、GTP、AMP-PNP等，以檢測(cè)諸多ATP結(jié)構(gòu)類似物型能量供應(yīng)物對(duì)透皮融合蛋白質(zhì)藥物TD-l-EGF、IFN的透皮效率是否有影響。取完整SD大鼠腹部皮膚組織，去毛后置于生理鹽水(0.9% Nacl水溶液)中待用。配制透皮藥物將純度達(dá)到95%以上的融合蛋白TD-I-EGF(儲(chǔ)液濃度lmg/mL)， 用吉爾森移液槍(Gilson，F(xiàn)rance)吸取60 μ L (對(duì)應(yīng)融合蛋白質(zhì)量為60 μ g)，用生理鹽水稀釋到500 μ L，即透皮槽上槽100透皮藥物給藥濃度為120 μ g/ml，置于透皮槽上槽100 作為TD-I-EGF組透皮藥物。另將純度達(dá)到95%以上的融合蛋白TD-I-EGF按上述同樣方法稀釋到給藥濃度為120μ g/ml，再向其中加入IOmM的ATP、ADP(BBI，AD0016D)以及 AMP (BBI, AD0016M)。將純度達(dá)到95%以上的蛋白IFN(儲(chǔ)液濃度lmg/mL)，用吉爾森移液槍(Gilson，F(xiàn)rance)吸取50 μ L(對(duì)應(yīng)蛋白質(zhì)量為50yg)，WATD_l多肽10 μ g，用生理鹽水稀釋到500 μ L，即透皮槽上槽100透皮藥物給藥濃度為100 μ g/ml，置于透皮槽上槽 100作為TD-1+IFN組透皮藥物。另將純度達(dá)到95%以上的蛋白IFN和10μ g TD-I按上述同樣方法稀釋到給藥濃度為100 μ g/ml，再向其中加入IOmM的ATP、GTP(BBI，⑶0250T)、 ATP- y -S(Sigma-Aldrich, A1388)、AMP-PNP (Sigma-Aldrich, A2647)。待各個(gè)能量形式化合物充分溶解后，置于Franz透皮槽上槽100作為TD-I-EGF+不同能量形式組(ATP、ADP、 AMP)和TD-1+IFN+不同能量形式組(GTP、ATP-γ-S、AMP-PNP)透皮藥物。透皮給藥將透皮槽下槽內(nèi)注滿生理鹽水5ml并放入一個(gè)磁力攪拌子，透皮上槽 100與下槽200之間蒙上之前準(zhǔn)備好的完好無損的大鼠腹部皮膚組織300，上槽內(nèi)分別加入之前配好的透皮用蛋白質(zhì)類藥物TD-I-EGF與TD-I-EGF+不同能量形式組(ATP、ADP、AMP) 以及TD-1+IFN與TD-1+IFN+不同能量形式組(GTP、ATP- γ -S、AMP-PNP)。將透皮槽置于 Franz透皮擴(kuò)散儀中，恒溫37°C、磁力攪拌轉(zhuǎn)速300rpm，分別在啟動(dòng)透皮擴(kuò)散儀的4h和1 從透皮槽下槽開口處取200 μ 1收集液400，并在4h取樣后分別從透皮槽下槽開口處加入 200 μ 1生理鹽水維持下槽中收集液總體積不變(IFN僅檢測(cè)4小時(shí)時(shí)間點(diǎn))。檢測(cè)將各個(gè)時(shí)間點(diǎn)從透皮槽下槽中取出的收集液作為待檢樣品，使用人表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子ELISA試劑盒(武漢博士德公司，商品編號(hào)EK032O和人-α干擾素含量ELISA 檢測(cè)試劑盒(蘇州卡爾文生物科技有限公司)進(jìn)行定量檢測(cè)。計(jì)算透皮槽下槽收集液中的 huEGF、IFN含量，繪制EGF、IFN含量標(biāo)準(zhǔn)曲線，由試劑盒自身配備的EGF標(biāo)準(zhǔn)品完成。根據(jù)試劑盒說明書完成測(cè)試后，各孔OD值在酶標(biāo)儀下使用450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度值。之后可根據(jù)由試劑盒標(biāo)準(zhǔn)品繪制出的標(biāo)準(zhǔn)曲線推算出所測(cè)各時(shí)間點(diǎn)樣品的EGF、IFN的濃度，進(jìn)而推算出透皮槽下槽中的透皮藥物的整體絕對(duì)透過量。數(shù)據(jù)分析student，s_T test進(jìn)行數(shù)據(jù)分析并用Origin做圖。結(jié)果顯示，對(duì)比使用相同EGF量的融合蛋白TD-I-EGF和TD_1_EGF+不同能量形式(ATP、ADP、AMP等)作為透皮藥物的兩組，如圖11所示，發(fā)現(xiàn)在透皮槽下槽中檢測(cè)到的實(shí)際透皮量中，TD-1-EGF+ATP透皮組明顯具有更加良好的透皮效果，透皮量由 409. 3749士96.35405pg 上升到 752. 08325士31. 77075pg,而 TD-1-EGF+ADP 組是 376. 5625 士 58. 33335pg, TD-l-EGF+AMP 組則是 240. 625 士97. 39585pg(4 小時(shí)透皮取樣時(shí)間點(diǎn))；由 TD-I-EGF 組中的 458. 8M25 士 104. 16675pg 上升到 TD-1-EGF+ATP 組的 1294. 7915 士 214. 0625pg，而 TD-1-EGF+ADP 組是 490. 625 士 10. 9375pg, TD-l-EGF+AMP 組則是397. 3958士 113. M17pg (16小時(shí)透皮取樣時(shí)間點(diǎn))。在TD-I-EGF融合蛋白透皮過程中加入IOmMATP與加入ADP、AMP以及TD-I-EGF融合蛋白透皮對(duì)照組比較具有顯著性。對(duì)比使用相同IFN量的融合蛋白TD-1+IFN和TD-1+IFN+不同能量形式(GTP、 ATP-γ-S、AMP-PNP等)作為透皮藥物的兩組，如圖12所示，發(fā)現(xiàn)在透皮槽下槽中檢測(cè)到的實(shí)際透皮量中，TD-1+IFN+ATP透皮組明顯具有更加良好的透皮效果，透皮量由 256. 3767 士66. 35405pg 上升到 732. 05375 士 109. 77565pg,而 TD-1+IFN+ATP- y -S 組是 387. 2317 士85. 367pg，TD_l+IFN+ATP_ γ-S 組是 356. 5625 士 125. 3565pg, TD-1+IFN+AMP-PNP 組則是220. 525士 103. 56pg(4小時(shí)透皮取樣時(shí)間點(diǎn))。在TD-I介導(dǎo)IFN蛋白透皮過程中加入IOmM ATP與加入ATP- γ -S、AMP-PNP以及TD-I單獨(dú)介導(dǎo)IFN蛋白透皮對(duì)照組比較具有顯著性。本發(fā)明的方法是通過在蛋白質(zhì)藥物經(jīng)TD-I透皮輸運(yùn)的系統(tǒng)中，引入三磷酸腺苷 (ATP)，以達(dá)到顯著提高蛋白質(zhì)藥物在TD-I介導(dǎo)下經(jīng)皮膚運(yùn)輸?shù)哪芰?，同時(shí)由于ATP是人體內(nèi)各個(gè)器官的直接供能以及儲(chǔ)能物質(zhì)，生物安全性優(yōu)于任何一種物理、化學(xué)促透裝置或試劑，所以具有良好的增強(qiáng)透皮藥物運(yùn)輸?shù)呐R床應(yīng)用前景。根據(jù)本發(fā)明公開的上述實(shí)施例，本發(fā)明的至少兩種透皮給藥增強(qiáng)劑以及三磷酸腺苷(ATP)的組合可以與常規(guī)經(jīng)皮方式給藥的藥物聯(lián)合使用，以提高藥物的透皮效果，這里的藥物活性制劑可以是適合局部或透皮釋放的一些能夠?qū)е吕硐氲木植炕蛳到y(tǒng)的效果符合物和傳統(tǒng)藥物。一些物質(zhì)包括許多復(fù)合物或者藥物能夠正常地通過包括皮膚在內(nèi)的皮膚表面和其它膜系統(tǒng)?；钚灾苿┌ǜ嗟姆N類與可以仿效的得到的種類老年癡呆藥物；止痛制劑如鎮(zhèn)靜劑；麻醉劑；抗抗粉刺劑；抗憂慮藥；抗風(fēng)濕藥；抗心律失常藥；平喘藥和其它呼吸系統(tǒng)藥物；抗生素包括細(xì)菌制劑；抗癌制劑包括抗腫瘤藥；抗糖尿病藥(胰島素等)；抗代謝異常藥(生長(zhǎng)激素等)；抗痛風(fēng)藥；解熱止痛抗炎藥；抗性功能障礙藥；中草藥；催產(chǎn)藥；催產(chǎn)拮抗藥；短、長(zhǎng)效避孕藥；節(jié)育藥；麻醉藥；全身骨骼肌松弛藥；皮膚病治療藥；抗寄生蟲藥；抗病毒藥；角質(zhì)促成劑；抗青光眼藥；散瞳用藥；中樞神經(jīng)興奮、抑制藥；抗癲癇藥；抗震顫麻痹藥；植物神經(jīng)及神經(jīng)肌內(nèi)接藥；心腦血管病治療藥；鎮(zhèn)痛藥；鎮(zhèn)靜催眠藥；利尿藥；助消化類藥；止瀉藥等一切含有蛋白質(zhì)類藥物的有形成分的中藥、西藥物。這對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來說是顯而易見的，因此同樣屬于本發(fā)明的范圍。另外需要指出的是本發(fā)明的至少兩種透皮給藥增強(qiáng)劑以及三磷酸腺苷(ATP)的組合可以與常規(guī)經(jīng)皮方式給藥的藥物聯(lián)合使用，以提高藥物的透皮效果，這里的藥物活性制劑可以是適合局部或透皮釋放的一些能夠?qū)е吕硐氲木植炕蛳到y(tǒng)的效果符合物和傳統(tǒng)藥物，也可以是導(dǎo)致理想的局部或系統(tǒng)的效果符合物和新定義下的“藥物”，如各種在化妝品和護(hù)膚品中應(yīng)用廣泛的具有一定生物學(xué)藥理學(xué)“藥用”功能的“藥物”，包括但不限于實(shí)施例中優(yōu)選的蛋白一人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)，EGF收縮毛孔、抗皺作用十分顯著，原因是EGF能促進(jìn)表皮細(xì)胞組織內(nèi)多種細(xì)胞的生長(zhǎng)分裂，使表皮細(xì)胞變得飽滿、恢復(fù)年輕狀態(tài)，它還可以促使膠原蛋白生長(zhǎng)能力，修復(fù)老化斷裂的膠原彈性纖維，所以被眾多科學(xué)家譽(yù)為“美麗因子”，此外還可以作為藥物幫助傷口的愈合和修復(fù)。此外，成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)，包括堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(bFGF)、酸性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(aFGF)均屬于本發(fā)明涵蓋的“為透皮給藥增強(qiáng)劑以及三磷酸腺苷(ATP)組合所增強(qiáng)的常規(guī)經(jīng)皮方式給藥的藥物”，即不僅限于增強(qiáng)經(jīng)皮給藥藥物的臨床利用率，增強(qiáng)一些重要的蛋白質(zhì)類生長(zhǎng)因子的透皮吸收途徑等也屬于本發(fā)明的發(fā)明內(nèi)容范圍之內(nèi)。 以上顯示和描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征和本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)。本行業(yè)的技術(shù)人員應(yīng)該了解，本發(fā)明不受上述實(shí)施例的限制，如本發(fā)明包括但不限于實(shí)施例中優(yōu)選的透皮增強(qiáng)劑(TD-I)、三磷酸腺苷(ATP)、經(jīng)皮給藥藥物的藥物比例，同樣包括但不限于實(shí)施例中優(yōu)選的透皮增強(qiáng)劑(TD-I)、三磷酸腺苷(ATP)、經(jīng)皮給藥藥物的藥物劑型，各種藥物可以是液體形式、膠劑、膏劑、洗劑、貼劑等以及各種藥物劑型的不同組合。即本發(fā)明的透皮釋放成分含有可以令人接受材料和/或一個(gè)或多個(gè)佐劑組成的一個(gè)或多個(gè)藥理學(xué)上令人接受的藥物載體。上述實(shí)施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明精神和范圍的前提下本發(fā)明還會(huì)有各種變化和改進(jìn)，這些變化和改進(jìn)都落入要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種增強(qiáng)透皮給藥的組合物，其特征在于，包括至少一種透皮給藥增強(qiáng)劑，以及三磷酸腺苷(ATP)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述透皮給藥增強(qiáng)劑為透皮增強(qiáng)肽。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其特征在于，所述透皮增強(qiáng)肽為TD-I。
4.權(quán)利要求1 3中任一項(xiàng)所述的增強(qiáng)透皮給藥組合物的應(yīng)用，其特征在于，用于提高透皮增強(qiáng)肽介導(dǎo)的蛋白質(zhì)類藥物的透皮運(yùn)輸能力。
5.一種增強(qiáng)藥物透皮給藥的方法，其特征在于，在透皮增強(qiáng)肽介導(dǎo)的透皮藥物輸運(yùn)過程中，將一種治療某疾病的有效劑量的藥物活性制劑或藥物與透皮給藥增強(qiáng)劑聯(lián)合，外加三磷酸腺苷(ATP)。
6.一種三磷酸腺苷的應(yīng)用，其特征在于，用于提高透皮增強(qiáng)肽介導(dǎo)的透皮給藥運(yùn)輸途徑的輸運(yùn)效率和水平。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述透皮增強(qiáng)肽為TD-1。
8.一種含有透皮給藥組合物的藥物，包括至少一種治療某疾病的有效劑量的藥物活性制劑或藥物，其特征在于，還包括至少一種透皮給藥增強(qiáng)劑，以及三磷酸腺苷(ATP)。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物，其特征在于，所述透皮給藥增強(qiáng)劑為透皮增強(qiáng)肽。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物，其特征在于，所述透皮增強(qiáng)肽為TD-I。
全文摘要
本發(fā)明提供一種增強(qiáng)透皮給藥組合物的應(yīng)用以及一種增強(qiáng)藥物透皮給藥的方法，還提供了一種三磷酸腺苷的應(yīng)用，另外還提供了一種含有透皮給藥組合物的藥物。本發(fā)明通過提高透皮增強(qiáng)肽介導(dǎo)的透皮藥物輸運(yùn)過程中的ATP供應(yīng)量，對(duì)透皮增強(qiáng)肽介導(dǎo)的透皮藥物輸運(yùn)能力有顯著的促進(jìn)效果。
文檔編號(hào)A61K38/18GK102225206SQ20111016319
公開日2011年10月26日 申請(qǐng)日期2011年6月17日 優(yōu)先權(quán)日2011年6月17日
發(fā)明者萬小妹, 張力, 汪昌麗, 王姍姍, 金佩佩, 阮仁全, 魏鵬飛 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)