專利名稱：用于治療糖尿病腎病的綠蘿花提取物、制備方法及用途的制作方法
用于治療糖尿病腎病的綠蘿花提取物、制備方法及用途
背景技術(shù)：
糖尿病腎病是糖尿病常見的并發(fā)癥，是糖尿病全身性微血管病變表現(xiàn)之一，臨床特征為蛋白尿，漸進(jìn)性腎功能損害，高血壓，水腫，晚期出現(xiàn)嚴(yán)重腎功能衰竭，是糖尿病患者的主要死亡原因之一。近年來隨著我國人口人均壽命延長，生活飲食習(xí)慣，結(jié)構(gòu)的改變，糖尿病的患病率呈直線上升趨勢，且由于治療方法的改善，生存時(shí)間的增加，從而腎臟及其它并發(fā)癥也增加。據(jù)最新統(tǒng)計(jì)，我國目前約有5000萬人正面臨著糖尿病的威脅。在美國，糖尿病腎病占終末期腎功能衰竭的首位，約為35% 38%。I型(IDDM)糖尿病發(fā)生糖尿病腎病比例較高，約為35% 50%，II型(NIDDM)發(fā)生率約20%左右。藏藥滇結(jié)香(Mdgeworthia gardneri )，為瑞香科(Thymelaeaceae )結(jié)香屬植物，花蕾、根河莖皮均可入藥。其中花蕾稱為綠蘿花，據(jù)記載，綠蘿花主治糖尿病、冠心病、高血壓、高血脂、血管炎、脈管炎等。現(xiàn)代藥理研究表明，綠蘿花醇提取物的乙酸乙酯萃取部分有較強(qiáng)的α-葡萄糖苷酶抑制及抗氧化作用；正丁醇萃取部分有較強(qiáng)的抗氧化作用。但目前對于綠蘿花提取物的藥理學(xué)報(bào)道較少， 尤其是綠蘿花提取物在治療糖尿病腎病方面還未見相關(guān)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決上述問題，本發(fā)明提供了一種用于治療糖尿病腎病的綠蘿花提取物、制備方法及用途。糖尿病腎病(diabetic nephropathy, DN)是糖尿病微血管并發(fā)癥之一，隨著糖尿病發(fā)病率的上升，DN已成為終末期腎病的主要病因，探討其發(fā)病機(jī)制與防治方法具有重要的臨床意義和社會(huì)意義。過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxi-some proliferator-activated receptor, PPAR)是核受體超家族中配體激活的轉(zhuǎn)錄因子之一， 有 3 種亞型=PPAR a、PPAR β、PPAR γ。研究發(fā)現(xiàn)，PPARii分布相當(dāng)廣泛，在胰島、心肌、骨骼肌、脂肪組織、皮膚、腦組織中均有較高表達(dá)。研究還發(fā)現(xiàn)在骨骼肌、心肌、脂肪組織中，PPARii均能夠增強(qiáng)脂肪酸的氧化和利用，是脂肪酸氧化酶的上游調(diào)節(jié)因子。因此PPARii被看作代謝綜合征的新的強(qiáng)有力的治療靶點(diǎn)。但是也有研究發(fā)現(xiàn)，在巨噬細(xì)胞中PPARii能夠促進(jìn)膽固醇內(nèi)流和脂質(zhì)沉積。這些研究提示PPARii在脂質(zhì)代謝中的作用具有組織特異性。脂毒性導(dǎo)致的胰島β 細(xì)胞功能障礙是代謝綜合征發(fā)病的中心環(huán)節(jié)之一，改善胰島β細(xì)胞脂代謝可能對代謝綜合征的防治起著重要作用。更重要的是，PPARy激活可抑制腎系膜細(xì)胞的各種病理變化。系膜細(xì)胞在腎臟疾病中起重要作用，在高糖刺激下，系膜細(xì)胞經(jīng)歷從靜止期表型到肌成纖維細(xì)胞樣增殖表型的去分化過程，表現(xiàn)為a-平滑肌肌動(dòng)蛋白增加、細(xì)胞外基質(zhì)合成增加，這種表現(xiàn)型的改變是糖尿病腎病發(fā)生的基本特征。此外，PPARy激活劑還能影響其它一些在糖尿病腎病發(fā)病機(jī)理中起重要作用的物質(zhì)，如單核細(xì)胞趨化蛋白-1 (monocyte chemoattractant protein-l，MCP-l)、蛋白激酶 C(protein kinase C，PKC)、絲裂原激活蛋白激酶(MAPK)等。 糖尿病腎病時(shí)，大量單核細(xì)胞在腎小球、腎小管間質(zhì)浸潤與細(xì)胞外基質(zhì)積聚、腎小球硬化相
3關(guān)。高糖狀態(tài)下腎小球和系膜細(xì)胞中PKC和MAPK活性升高是糖尿病腎病發(fā)病機(jī)制中的重要因素，PPAR γ激活劑以劑量依賴方式抑制PKC和MAPK活性。本發(fā)明申請將綠蘿花的不同極性部位的提取物開展了 PPA受體細(xì)胞模型活性評價(jià)，篩選出對PPAR0及PPARy激活作用明顯的極性部位提取物作為用于治療糖尿病腎病的綠蘿花提取物；具體為
用于治療糖尿病腎病的綠蘿花提取物制備方法，包括以下步驟
1)將綠蘿花藥材用1 5倍重量石油醚、乙醚或汽油回流提取2 5次，得到小極性溶劑回流液和殘?jiān)麵；
2)將殘?jiān)麵用用1 3倍重量50 90%乙醇或甲醇回流提取2 5次，得到醇溶劑回流液和殘?jiān)麵I ；
3)將殘?jiān)麵I用用1 3倍重量水回流提取2 5次，得到水提取液；
4)將醇溶劑回流液回收至無醇味，用1 3倍體積乙酸乙酯萃取3 5次，得到乙酸乙酯萃取液和母液I；
5)將母液I用水飽和過的用1 3倍體積正丁醇萃取3 5次，得到正丁醇萃取液和母液II ；
6)分別回收小極性溶劑回流液、乙酸乙酯萃取液、正丁醇萃取液和水提取液至干分別得到小極性提取部分、乙酸乙酯提取部分、正丁醇提取部分和水溶性部分。用于治療糖尿病腎病的綠蘿花提取物，包括小極性提取部分和乙酸乙酯提取部分一種或兩種的組合物。用于治療糖尿病腎病的綠蘿花提取物在治療糖尿病腎病中的應(yīng)用。本發(fā)明的有益技術(shù)效果是本發(fā)明申請?zhí)峁┝司G蘿花用于治療糖尿病腎病活性部位，為開發(fā)新的劑型改善或改變給藥途徑創(chuàng)造了條件。


圖1不同濃度PE對PPAR β的相對激活效應(yīng)； 圖2不同濃度EA對PPARii的相對激活效應(yīng)；
圖3不同濃度NB對PPARii的相對激活效應(yīng)； 圖4不同濃度RA對PPAR β的相對激活效應(yīng)； 圖5不同濃度PE對PPAR γ的相對激活效應(yīng)； 圖6不同濃度EA對PPAR γ的相對激活效應(yīng)； 圖7不同濃度NB對PPAR γ的相對激活效應(yīng)； 圖8不同濃度RA對PPAR γ的相對激活效應(yīng)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
稱取將綠蘿花藥材1. Ikg用3石油醚回流提取3次，得到小極性溶劑回流液和殘?jiān)麵 ； 將小極性溶劑回流液TLC分析，在254nm及365nm下均無特別明顯斑點(diǎn)，且噴濃硫酸-香草醛顯色劑顯黃色(條帶拖尾)，判斷該部分中主要含有脂肪酸及其酯類化合物。將殘?jiān)麵用70%乙醇或甲醇回流提取3次，得到醇溶劑回流液和殘?jiān)麵I ；將醇溶劑回流液采用鹽酸-鎂粉顯色反應(yīng)進(jìn)行檢識，同時(shí)采用分光光度法，以蘆丁做對照，測定吸光度，對提取物進(jìn)行分析，結(jié)果判定該組分含有黃酮類化合物。將殘?jiān)麵I用水回流提取3次，得到水提取液；
將醇溶劑回流液回收至無醇味，用2倍體積乙酸乙酯萃取3次，得到乙酸乙酯萃取液和母液I ；
將乙酸乙酯萃取液采用鹽酸-鎂粉顯色反應(yīng)進(jìn)行檢識，同時(shí)采用分光光度法，以蘆丁做對照，測定吸光度，乙酸乙酯萃取部位具有較強(qiáng)的藍(lán)色熒光，則含有香豆素類化合物。將母液I用水飽和過的用2倍體積正丁醇萃取3次，得到正丁醇萃取液和母液 II ；
分別回收小極性溶劑回流液、乙酸乙酯萃取液、正丁醇萃取液和水提取液至干分別得到小極性提取部分、乙酸乙酯提取部分、正丁醇提取部分和水溶性部分。其中，小極性提取部分命名為PE，乙酸乙酯提取部分命名為EA，正丁醇提取部分命名為NB，水溶性部分命名為RA。實(shí)施例2
對實(shí)施例1中制備得到的ΡΕ、EA、NB以及RA進(jìn)行PPARi^及PPAR γ的激活效應(yīng)評價(jià)。具體結(jié)論見圖l-8;結(jié)果顯示PE、EA、NB及RA均有激活PPARβ及PPAR γ的作用，其中PE和EA部分效果明顯。
權(quán)利要求
1.一種用于治療糖尿病腎病的綠蘿花提取物制備方法，特征在于包括以下步驟1)將綠蘿花藥材用1 5倍重量石油醚、乙醚或汽油回流提取2 5次，得到小極性溶劑回流液和殘?jiān)麵；2)將殘?jiān)麵用1 3倍重量50 90%乙醇或甲醇回流提取2 5次，得到醇溶劑回流液和殘?jiān)麵I ；3)將殘?jiān)麵I用用1 3倍重量水回流提取2 5次，得到水提取液；4)將醇溶劑回流液回收至無醇味，用1 3倍體積乙酸乙酯萃取3 5次，得到乙酸乙酯萃取液和母液I；5)將母液I用水飽和過的用1 3倍體積正丁醇萃取3 5次，得到正丁醇萃取液和母液II ；6)分別回收小極性溶劑回流液、乙酸乙酯萃取液、正丁醇萃取液和水提取液至干分別得到小極性提取部分、乙酸乙酯提取部分、正丁醇提取部分和水溶性部分。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法制備的用于治療糖尿病腎病的綠蘿花提取物，其特征在于包括小極性提取部分和乙酸乙酯提取部分一種或兩種的組合物。
3.權(quán)利要求1或2所述的用于治療糖尿病腎病的綠蘿花提取物在治療糖尿病腎病中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于治療糖尿病腎病的綠蘿花提取物、制備方法及用途，主要是提供了綠蘿花用于治療糖尿病腎病活性部位，為開發(fā)新的劑型改善或改變給藥途徑創(chuàng)造了條件。
文檔編號A61P3/10GK102204997SQ20111012897
公開日2011年10月5日 申請日期2011年5月18日 優(yōu)先權(quán)日2011年5月18日
發(fā)明者徐盼, 楊豐慶, 林葉新, 梁旭明, 鐘國躍 申請人:重慶市中藥研究院