專利名稱：核酸脂質體藥物制劑的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種核酸脂質體藥物制劑，其主要用于治療由基因的異常表達引起的相關疾病。
背景技術：
近年來，許多類型的核酸被用于治療一些疾病，發(fā)展成為新一代的基因療法。這些核酸包括用于基因治療的DNA、質粒、用于核酸干擾(RNA interference, RNAi)的小干擾核酸(small interfering RNA, siRNA)、反義分子、核酶、微小 RNA (microRNA, miRNA)、antagomirs (反義寡核苷酸的一種,用于沉默內源性的miRNA)及適體。當開發(fā)這些核酸藥物時，就有必要制備一種既容易制備又容易傳遞到靶組織的藥物制劑
發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種既容易制備又容易傳遞到靶組織的藥物制劑，用于治療由基因的異常表達引起的相關疾病。為了達到上述目的，本發(fā)明提供了一種核酸脂質體藥物制劑，其特征在于，含有陽離子脂質和核酸。所述的核酸脂質體藥物制劑的單分散粒徑為200納米以下。上述核酸脂質體藥物制劑通過以下方式制備將一種含有陽離子脂質的溶液及核酸水溶液混合，在此條件下陽離子脂質及核酸形成陽離子脂質核酸混合物，并在添加其他組分的情況下形成脂質體?；旌衔锟捎梢环N溶于有機溶劑(如乙醇和其易混溶的溶劑組成)的碳數(shù)大于6的陽離子脂質與siRNA水溶液混合而成。所得的混合物有確定的摩爾濃度，同時包含一定數(shù)量的由陽離子脂質產(chǎn)生的正電荷及一定數(shù)量的核酸中的核苷。包含有機陽離子脂質體的核酸混合物可立即作為藥物制劑使用或能冷凍保存?zhèn)溆茫部刹捎盟鶎兕I域的技術人員常用的方法進行化學加工。這種陽離子脂質復合物能夠用許多機械方法進行適當?shù)奶幚恚蛊淠軌虺蔀楣虘B(tài)或液態(tài)的核酸藥物。與含有陽離子脂質的溶液混合在一起的核酸溶液，是一種典型的水溶液，而陽離子脂質通常溶解于一種有機溶劑中，如乙醇。所述的核酸是DNA、RNA、反義核酸、適體、antagomir、miRNA、質粒、干擾核酸、核酶及siRNA中的一種或兩種以上的混合物。陽離子脂質同核酸中核苷的比例通常為2 3:1 (重量比)。本領域中技術應當理解為可用任何方法進行混合操作，如采用機械手段，如使用旋渦混合器或注射泵、攪拌器和T型管進行混合操作。所述的陽離子脂質包括任何一種在所選pH值下，如生理pH值(pH約為7. 0)能夠產(chǎn)生凈正電荷的脂質。本發(fā)明所使用的生理PH值指的是生物流體(如血液或淋巴液)的pH值及細胞區(qū)室(如內涵體、酸性內涵體及溶酶體中)的PH值。所述陽離子脂質，包括但不限于雙油基雙甲基氯化銨(N，N-dioleyl-N, N-dimethylammonium chloride, DODAC)> N，N- 二甲基 _2，3- 二油氧基丙胺(N，N-dimethyl-(2, 3-dioleyloxy)propylamine, D0DMA)、雙十八燒基二甲基溴化銨(N，N-distearyl-N, N- dimethylammonium bromide, DDAB)> I, 2-二油酸基-3- 二甲基丙二醇胺(1，2_di_ (9Z-octadecenoyI) -3-dimethylaminopropane,DODAP ), N- (N，，N，-二甲氨基乙基)氨甲?；?膽固醇(3- (N- (N，，N，-dimethylaminoethane) -carbamoyl) cholesterol, DC-Chol)> N，N- 二甲基-N-輕乙基-N- (I, 2_ 雙十四燒氧基)丙基溴化銨(N- (I, 2-dimyristyloxyprop-3-yl) -N, N-dimethyl-N- hydroxyethylammonium bromide, DMRIE )> I, 2- 二亞油氧基-N, N- 二甲基丙胺(1，2-Di lino ley loxy-N, N-dimethylaminopropane, DLinDMA)和 1，2- 二亞麻氧基-N，N- 二甲基丙胺(I, 2-Dilinoleny loxy-N, N-dimethy laminopropane, DLenDMA ) 以及在生理pH值下，帶正電或有一個正電荷的脂質1，2-雙十四燒基-3- 二甲基氨丙燒(I, 2-dimyristoyl-3-dimethyIaminopropane，DMDAP)、DODMA等等。這些脂質及類似物在申請?zhí)枮?8/316，399和專利號為5，208，036、5，264，618、5, 279,833和5，283，185美國專利中有所描述。此外，其他商業(yè)化制備的陽離子脂質也適用于本發(fā)明。在用于制備陽離子脂質體核酸混合物的實施例中，陽離子脂質包括但不限于D0DAC、二硬脂基二甲基銨鹽(di steary I dimethy lammonium, DSDMA )、DDAB、DODAP、DC-Cho I、 DMRIE、DLinDMA、DLenDMA及其混合物。在一個非限制性實施例中，在生理pH值下，有一個正電荷的陽離子脂質，包括但不限于D0DAP、D0DMA和DSDMA。在一些實施例中，陽離子脂質的組成包括一個質子化的叔胺頭部，C18烷基鏈尾部及一個酯鍵連接頭部與尾部，并含有0 3個雙鍵。這樣的脂質包括DSDMA、DLinDMA、DLenDMA和D0DMA。陽離子脂質也可由醚鍵連接并有一個可PH滴定的頭部，如D0DMA。陽離子脂質也可以是DODAC、DDAB、DODAP、DODMA、DLinDMA, DLenDMA或其混合物。在本專利中所使用的陽離子脂質為任何一種在生理pH值下能夠產(chǎn)生凈正電荷的脂質，這些脂質包括但不限于DODAC、DODMA, DSDMA, DDAB, DODAP,DOSPA、DOGS、DC-Cho I、DMRIE及其混合物。此外，其他商業(yè)化的陽離子脂質也可用于本發(fā)明中。多價陽離子脂質聚氨，如脂精胺(Lipospermine)也可被用于陽離子脂質核酸混合物的制備，包括脂精胺 GL-53 (N4-spermidine cholestryl carbarnate, GL-53)、脂精胺 GL-89 (I- (N4-Spermind) -2, 3-diIaurylglycerol carbamate，GL-89)、二掠櫚酸憐脂酸基乙醇戍基精胺(dipalmitoylphosphatidylethanolamylspermine, DPPES)、雙十八酸胺基甘氨酸基精胺(dioctadecylamido glycylspermine, Transfectam, D0GS)、3_ 二油酸氧-N- [2(精胺羧基酰胺)乙基]-N，N- 二甲基-I-丙基-三氟乙酸銨(2，3-dioleyloxy-N- [2(sperminecarboxamido)ethyl]-N, N-dimethy1-1-propanaminium trifluoroacetate)等。脂精胺和Iipospermidines是一種雙功能分子,包含一個或多個疏水鏈,其與三個或更多含氨的陽離子基團以共價鍵相連接，它可與核酸上的磷氧基團形成混合物。本發(fā)明的核酸脂質體藥物制劑還可包含疏水性脂質(特別是固醇，包括膽固醇)、磷脂以及PEG-脂質偶合物(特別是PEG-磷脂偶合物)。該藥物制劑將陽離子脂質核酸混合物置于水溶液中，同時將其與一種或多種上述所提及的脂質相混合。這些脂質溶于有機溶齊U，特別是無毒的質子溶劑，如乙醇。接下來將除去有機溶劑以便給藥。所述的磷脂包括但不限于磷脂酰乙醇胺、卵磷脂、磷脂酰肌醇及心磷酯等。所述的疏水性脂質包括留醇動物留醇(如膽固醇、二油酰磷脂酰乙醇胺)，植物甾醇(如菜子留醇、谷留醇和豆留醇)和其他本領域常用的疏水脂質。本發(fā)明提供藥學上可接受的其用于核酸、質粒、反義核酸、核酶、適體、antagomirs, miRNA、基因沉默干擾核酸及其混合物的治療傳輸。這種混合物可用于哺乳動物疾病的預防與治療。本發(fā)明要求的脂質/核酸藥物制劑可通過在水溶液中混合一種陽離子脂質核酸混合物及其他脂質產(chǎn)生的核酸脂質混合物。其用于質粒DNA作為核酸的基因治療、反義核酸的下調基因治療、核酶、antagomirs、miRNA、干擾核酸或用適體作為核酸抑制其他疾病的個體給藥。


圖I是小鼠肝臟不同PEG (分子量為2000 Da)偶聯(lián)的脂質的劑型篩選結果圖。通過尾靜脈，向Balb/C小鼠體內注射劑量為0. 2ml的PPIB siRNA，注射48小時后，收集肝臟，用實時定量PCR的方法(GAPDH作為參照基因)分析基因的表達。每個數(shù)據(jù)點表示為平均值+標準誤(樣本數(shù)為6)。結果顯示，PPIB siRNA藥物制劑顯示很好的沉默效果。 圖2是藥物制劑中粒子的粒徑測定結果圖。包含siRNA的10 W藥物制劑溶液用I ml 9% NaCl溶液稀釋，粒子粒徑用粒徑分析儀測量。結果顯示，藥物制劑中粒子的粒徑小于 200 納米(nanometer, nm)。圖3是脂質體包埋和未包埋的無化學修飾的siRNA的化學穩(wěn)定性測定結果圖。月旨質體包埋和未包埋的siRNA與95%小鼠血清共孵育不同時間。從反應物中取出樣品加入5W緩沖液立刻在乙醇-干冰浴中冷凍。樣品通過聚丙烯酰胺電泳系統(tǒng)(Bio-Rad公司)分離，凝膠用溴化乙錠染色并拍照后進行siRNA降解分析。結果顯示，脂質體包埋的siRNA穩(wěn)定性很好，而脂質體未包埋的siRNA在小鼠血清中孵育I小時時開始降解。圖4是siRNA劑量依賴和相應血清中膽固醇水平變化測定結果圖。通過劑量依賴的方法，未修飾的siRNA配成藥物制劑后在小鼠肝臟中抑制了 ApoB基因。降低的血液膽固醇水平與抑制的ApoB基因相關。通過尾靜脈，向Balb/C小鼠體內注射劑量為0. 2ml的基于LIPLEX劑型的siRNA，在特定的時間點，收集肝臟組織，用實時定量PCR的方法(GAPDH作為參照基因)分析基因的表達。每個數(shù)據(jù)點表示為平均值+標準誤(樣本數(shù)為6)。圖5是沉默ApoB基因劑型的有效作用時間和相應血清中膽固醇水平變化測定結果圖。14天后，在小鼠肝臟中，基于LIPLEX劑型的單一劑量的未修飾siRNA抑制了 ApoB基因的表達，并降低了血液中膽固醇水平。通過尾靜脈，向Balb/C小鼠體內注射劑量為0. 2ml的基于LIPLEX劑型的單一劑量siRNA，在特定的時間點，收集肝臟組織，用實時定量PCR的方法(GAPDH作為參照基因)分析基因的表達。每個數(shù)據(jù)點表示為平均值+標準誤(樣本數(shù)為6)。圖6是熒光標記的siRNA藥物制劑在肝臟中分布結果圖。圖6中，siRNA用Cy5熒光素標記并制成相應藥物制劑，通過尾靜脈，向Balb/C小鼠體內注射劑量為0. 2ml的基于LIPLEX劑型的單一劑量siRNA。在注射后12小時，組織做成可供熒光顯微觀察的切片。結果顯示，熒光標記的siRNA藥物制劑成功傳輸?shù)叫∈蟾闻K中，圖中實驗組有熒光顯示(紅色)。
具體實施例方式本發(fā)明通過以下方式實施1、一種藥物制劑包含一種陽離子脂質核酸混合物和一種PEG-磷脂偶合物；
2、一種藥物制劑包含一種陽離子脂質核酸混合物，如DODAP和DODAP-核酸偶合物；
3、一種藥物制劑包含一種陽離子脂質核酸混合物和一種磷脂(如磷脂酰乙醇胺或卵磷 脂)； 4、一種藥物制劑包含一種陽離子脂質核酸混合物、一種磷脂(如磷脂酰乙醇胺)及一種疏水脂質(如疏水固醇，特別是疏水膽固醇)；
5、一種藥物制劑包含一種陽離子脂質核酸混合物、一種磷脂(如磷脂酰乙醇胺)、一種固醇(特別是膽固醇)及一種PEG-磷脂偶合物(特別是PEG-DMPE偶合物)；
6、一種藥物制劑包含一種陽離子脂質核酸混合物、一種磷脂(如磷脂酰乙醇胺)及一種PEG-磷脂偶合物，特別是PEG-DMPE偶合物；
7、一種藥物制劑包括陽離子脂質核酸混合物、一種固醇，特別是膽固醇及一種PEG-磷脂偶合物，特別是PEG-DMPE偶合物；
8、一種藥物制劑包含一種陽離子脂質核酸混合物及一種PEG-脂質偶合物，特別是PEG-磷脂偶合物；
9、一種藥物制劑包含一種陽離子脂質核酸混合物和一種磷脂(如磷脂酰乙醇胺)；
10、一種藥物制劑包含一種陽離子脂質核酸混合物、一種磷脂(如磷脂酰乙醇胺)及一種疏水脂質(如疏水固醇、特別是疏水膽固醇)；
11、一種藥物制劑包含一種陽離子脂質核酸混合物、一種磷脂(如磷脂酰乙醇胺)、一種疏水脂質(如疏水固醇、特別是疏水膽固醇)和一種PEG-脂質偶合物(特別是PEG-磷脂偶合物);
12、一種藥物制劑包含一種陽離子脂質核酸混合物和一種疏水脂質(如疏水固醇、特別是疏水膽固醇);
13、一種藥物制劑包含一種陽離子脂質核酸混合物、一種疏水脂質(如疏水固醇、特別是疏水膽固醇)及一種PEG-脂質偶合物(特別是PEG-磷脂偶合物)；
14、一種藥物制劑包含一種陽離子脂質核酸混合物、一種磷脂(如磷脂酰乙醇胺)、一種疏水磷脂(如疏水固醇，特別是膽固醇);
15、一種藥物制劑包含一種陽離子脂質核酸混合物、一種磷脂(如磷脂酰乙醇胺)、一種疏水磷脂(如疏水固醇，特別是膽固醇)及一種PEG-脂質偶合物(特別是PEG-磷脂偶合物)；
16、一種藥物制劑包含一種陽離子脂質核酸混合物、一種磷脂(如磷脂酰乙醇胺)及一種PEG-脂質偶合物(特別是PEG-磷脂偶合物)；
17、一種藥物制劑包含一種陽離子脂質核酸混合物和一種疏水磷脂(如疏水固醇，特別是膽固醇)；
18、一種藥物制劑包含一種陽離子脂質核酸混合物、一種疏水磷脂(如疏水固醇，特別是膽固醇)及一種PEG-脂質偶合物(特別是PEG-磷脂偶合物)；
19、一種藥物制劑包含一種陽離子脂質核酸混合物和PEG-磷脂偶合物。本發(fā)明所述的核酸/脂質體藥物制劑可通過不同的方式給藥，如通過靜脈、腸外或腹腔進行給藥。在一些實施例中，siRNA可傳輸至細胞內，如肺、肝或發(fā)炎組織等一些靶組織的細胞內。本發(fā)明還提供了一種siRNA體內傳輸?shù)姆椒ā：怂?脂質體藥物制劑可通過靜脈、皮下及腹腔給藥。在一些實施例中，本發(fā)明提供了一種將siRNA體內傳輸至哺乳動物肺部的方法。在一些實施例中，本發(fā)明提供了一種治療哺乳動物疾病的方法。本發(fā)明中，一種具有治療效果的藥物制劑包括核酸、陽離子脂質、磷脂、膽固醇和PEG-磷脂偶合物，可以治療由基因表達或過表達有關引起的的疾病。本發(fā)明所述藥物制劑可通過不同粘膜給藥模式進行給藥，包括口服、直腸、陰道、鼻腔、肺內或透皮給藥，或者通過眼、耳、皮膚或者粘膜表面進行給藥。在本發(fā)明中，粘膜組織層包括上皮細胞層，上皮細胞包括肺、氣管，支氣管、肺泡、鼻、口、表皮或腸胃細胞。本發(fā)明所述藥物制劑可通過傳統(tǒng)的動力系統(tǒng)進行給藥，如機械噴霧裝置以及壓力驅動、電驅動或其他動力系統(tǒng)給藥。本發(fā)明所述藥物制劑可制備成水溶液進行鼻部或肺部噴霧給藥，以及所屬領域技術人員所用的不同方法配置成噴霧進行給藥。本發(fā)明所述藥物制劑傳輸至肺部可通過形成滴狀、粒狀或者噴霧(如氣溶膠化、粉化或霧化及噴灑)等方式進行。復合物、氣溶膠或者噴霧的粒子可以是固態(tài)或液態(tài)形式。作為鼻部噴霧給藥的首選方式見專利號為4，511，069的 美國專利。根據(jù)本發(fā)明的方法溶解藥物制劑所得的水溶液或其進行消毒的溶液，容易制備成上述噴霧給藥溶液。該藥物制劑溶液也可制成多劑量的形式，如專利號為4，511，069的美國專利中所述的密封配藥體系。其他形式的鼻部噴霧給藥亦如皮膚全身給藥方法《皮膚全身給藥方法》(Y. ff. Chien 等人，Elsevier Publishers , New York, 1985)及專利號為4，778，810的美國專利中所述。而氣溶膠傳輸形式包括，如壓縮空氣、噴射、超聲及壓電噴霧法等。這種方式可將有生物活性的組分溶解或分散在制藥溶劑里，如水、乙醇或其混合物的溶劑。本發(fā)明所述鼻部或肺部噴霧溶液，包括藥物或制成制劑形式并添加了表面活性劑(如聚山梨醇80)及一種或多種緩沖溶液的藥物。在本發(fā)明所述的實施例中，鼻部給藥制劑還可包括壓縮氣體，其pH值在6. 8 7. 2之間。其藥物制劑為弱酸性(pH4 6)的水溶性緩沖溶液。其他成分主要作用是增強或保持其化學穩(wěn)定性，包括防腐劑、表面活性劑、分散劑或氣體等。在一些實施例中，本發(fā)明公開了一種包括了含有本發(fā)明所示組分的藥物制劑及為進行肺部、粘膜或鼻腔噴霧或氣溶膠給藥的傳動裝置。本發(fā)明所述藥物制劑可以是液體，如滴液乳液、乳液形式或是氣溶膠形式。本發(fā)明所述藥物制劑也可以是固體，給藥前可將其溶解為液體。這種固體可作為粉末給藥，其形式可為膠囊、藥片或凝膠狀。下述實施例僅用于闡明本發(fā)明，并非是對本發(fā)明進行限制。實施例I
核酸/脂質體傳輸系統(tǒng)的制備
核酸/脂質體傳輸系統(tǒng)藥物制劑由以下組分組成
I > DODAP (Avanti Polar Lipids 公司)；
2、siRNA :每只老鼠40吒(2 mg/Kg)或者每3只老鼠劑量為120吒；
3> DMPE (Avanti Polar Lipids 公司)；
4、膽固醇(Sigma公司)；
5、PEG-DMPE偶合物(Avanti Polar Lipids 公司)。溶液中包含siRNA及脂質體，其濃度為DODAP 20mg/mL氯仿溶液和磷脂酰乙醇胺25mg/mL 氯仿溶液(Avanti Polar Lipids 公司)。每120吒siRNA與400吒DODAP通過下述方法配置成DODAP/siRNA溶液
將6. 48 mg的DODAP溶于0. 260 ml氯仿中，將其轉移至干燥潔凈的硅硼玻璃瓶內，蒸發(fā)除去氯仿,并用真空泵真空干燥12小時以除去殘余氯仿。小瓶內加入3 mL 95%乙醇水溶液后，用TEFLON* - lined cap密封，并在瓶口纏上密封帶。通過約2 min的渦流旋轉或超聲使其澄清透明。將瓶中液體均分在6個離心管中，并標記為1、5、9、13、17和18，每個離心管中有500 ML DODAP的95%乙醇水溶液，其中含DODAP 1.08 mg。在渦流混合器攪動下，用注射器將DODAP溶液滴入siRNA的水溶液中，其時間大約為2 min?；旌虾螅珼ODAP/siRNA溶液為略微模糊的溶液。取出一定量的溶液與其他組分混合，包括320 I^g的DMPE(35mol%)乙醇溶液，400吒膽固醇(45mol%)乙醇溶液，及80吒DMPE-PEG 2K (I mol%)乙醇 溶液?；旌弦河?倍體積的緩沖鹽溶液稀釋。注射前,樣品使用Thermo Fisher公司透析袋(3.5MWC0，3 ml體積)進行透析以去除乙醇，并將其濃縮至合適濃度。每只老鼠注射200W該溶液(其中約含40吒siRNA)。所述的siRNA用于抑制ApoB基因或PPIB基因中的一種，其不同藥物制劑配方的基因沉默效果見圖1、4和5。實施例2 粒徑分析
將10 20 W的siRNA藥物制劑溶液用0. 9%氯化鈉溶液進行稀釋，200 nm無菌過濾膜過濾。放入經(jīng)壓縮空氣清潔的I ml塑料管內并蓋上蓋子，用粒徑分析儀(Bix)Okhaven公司，型號為90 plus)檢測其粒徑。并在測量前,用90 nm及200 nm的聚乙烯標樣(DukeScientific公司)進行儀器校準。實施例3
DODAP和siRNA干粉的制備
在所制備的DODAP和siRNA混合物中加入山梨糖醇，形成最終濃度為2%、4%、6%及10%的山梨糖醇懸浮液，該懸浮液凍干成粉末并于-20° C保存。陽離子DODAP脂質及siRNA混合物及注射用藥物制劑溶液的制備
DODAP脂質siRNA混合物干粉重新分散于純水中。在一定量的該溶液中添加其他組分，包括320吒的DMPE (35mol%)乙醇溶液，400吒的膽固醇(45mol%)乙醇溶液，及80吒的DMPE-PEG 2K (I mol%)乙醇溶液。將混合液3倍稀釋，透析除去乙醇并濃縮至適于注射濃度。每只老鼠注射200耵該藥物制劑(其中約含40 I^g siRNA)。實施例4
siRNA在小鼠血清中穩(wěn)定性測試
用2 Ug脂質體包埋和未包埋的siRNA分別與收集的新鮮小鼠血清在37°C共孵育。siRNA與血清的比例為1:19。孵育一段時間，按不同時間點取出等量體積置于一新的離心管中，加入RNA上樣緩沖液，立即用乙醇-干冰浴冷凍，置于-80°C保存?zhèn)溆谩悠酚?2%的聚丙烯酰胺凝膠電泳分析，并用溴化乙錠染色觀察siRNA的完整性。實施例5
體內(in vira )基因沉默分析所有動物實驗研究按照由動物管理和使用委員會(Institutional Animal Care andUse Committee , IA⑶C )批準的動物實驗操作程序進行。圖4和圖5中顯示通過尾靜脈注射一定劑量的siRNA藥物制劑至BAL/C小鼠(Charles River)體內。圖4顯示2天后取出的肝臟，在圖5中顯示了在指定時間點檢測的ApoB基因的表達水平。肝臟組織置于含有蛋白酶K的細胞和組織裂解液(Sigma公司)中，并用高剪切力裂解?？俁NA用RNA提取試劑盒提取(Qiagen公司)。用與靶基因互補的合成的DNA探針，通過實時定量PCR (Bioline公司)的方法檢測。實施例6
siRNA藥物制劑肝臟傳輸效率測定
將Cy5標記的siRNA藥物制劑按2mg/kg的劑量通過靜脈注射到小鼠體內。注射后24h 收集肝臟組織。將組織切片并固定到載玻片上后，在熒光顯微鏡下進行組織學檢查，結果如圖6所示，可以觀察到有siRNA注射的實驗組有明顯的紅色熒光分布。
權利要求
1.一種核酸脂質體藥物制劑，其特征在于，含有陽離子脂質和核酸。
2.如權利要求I所述的核酸脂質體藥物制劑，其特征在于，所述的陽離子脂質為雙油基雙甲基氯化銨、N，N- 二甲基-2，3- 二油酰氧基丙胺、雙十八烷基二甲基溴化銨、1，2- 二油?；?3- 二甲基丙二醇胺、N- (N’，N’ - 二甲氨基乙基)氨甲?；?膽固醇、N，N- 二甲基-N-羥乙基-N- (I, 2-雙十四烷氧基)丙基溴化銨、1，2- 二亞油氧基-N，N- 二甲基丙胺、1，2-二亞麻氧基-N，N-二甲基丙胺、二硬脂基二甲基銨鹽、脂精胺GL-53和脂精胺GL-89中的一種或兩種以上的混合物。
3.如權利要求I所述的核酸脂質體藥物制劑，其特征在于，所述的核酸是DNA、RNA、反義核酸、適體、antagomir、miRNA、質粒、干擾核酸、核酶及siRNA中的一種或兩種以上的混合物。
4.如權利要求I所述的核酸脂質體藥物制劑，其特征在于，還含有磷脂。
5.如權利要求4所述的核酸脂質體藥物制劑，其特征在于，所述的磷脂為磷脂酰乙醇胺、磷酯酰膽堿、鞘磷脂或磷脂酰肌醇。
6.如權利要求I所述的核酸脂質體藥物制劑，其特征在于，還含有疏水性脂質。
7.如權利要求6所述的核酸脂質體藥物制劑，其特征在于，所述的疏水性脂質為膽固醇。
8.如權利要求I所述的核酸脂質體藥物制劑，其特征在于，還含有聚乙二醇-脂質偶合物。
9.如權利要求I所述的核酸脂質體藥物制劑，其特征在于，所述的聚乙二醇-脂質偶合物為聚乙二醇-磷脂偶合物。
10.如權利要求9所述的核酸脂質體藥物制劑，其特征在于，所述的聚乙二醇-磷脂偶合物為聚乙二醇-DMPE偶合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種核酸脂質體藥物制劑，其特征在于，含有陽離子脂質和核酸。本發(fā)明的核酸脂質體藥物制劑還可包含疏水性脂質、磷脂以及聚乙二醇-脂質偶合物中的至少一種。本發(fā)明的核酸脂質體藥物制劑主要用于治療由基因的異常表達引起的相關疾病。
文檔編號A61K47/28GK102727436SQ20111009473
公開日2012年10月17日 申請日期2011年4月15日 優(yōu)先權日2011年4月15日
發(fā)明者主輝, 朱遠源, 李鐵軍, 陳建新 申請人:百奧邁科生物技術有限公司