專利名稱：一種多肽胸腺法新的合成方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及多肽固相合成領(lǐng)域，尤其涉及胸腺法新的固相合成方法。
背景技術(shù)：
胸腺肽(又名胸腺素、胸腺五肽、Thymosin)是胸腺組織分泌的具有生理活性的一組多肽。能促進(jìn)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞吞噬活性，可用于治療多種免疫缺陷病。單用胸腺法新(Thymosin α 1)治療慢性乙肝中內(nèi)外有研究表明，單用胸腺法新治療慢性乙肝，持續(xù)應(yīng)答率(ALT復(fù)常+DNA轉(zhuǎn)陰+HBeAg轉(zhuǎn)陰)在37%左右，與單用干擾素相近，不過沒有干擾素的毒副作用。在中國臺(tái)灣應(yīng)用胸腺法新治療慢性乙肝的臨床研究表明，胸腺法新具有延遲的治療效應(yīng)。當(dāng)胸腺法新治療結(jié)束后，ALT有一過性升高，同時(shí)伴有HBeAg的血清轉(zhuǎn)換，HBV DNA 消失。HBV DNA轉(zhuǎn)陰率及血清轉(zhuǎn)換優(yōu)越性的研究結(jié)果表明單用胸腺法新治療慢性乙肝有長期療效，而沒有明顯不良反應(yīng)。對(duì)于晚期肝纖維化患者，高劑量的胸腺法新治療效果較好。目前化學(xué)合成胸腺肽有主要有固相合成法，如第八屆中國化學(xué)會(huì)分析化學(xué)年會(huì)暨第八屆全國原子光譜學(xué)術(shù)會(huì)議上報(bào)道了化學(xué)合成胸腺法新的分離與純化工藝研究，對(duì)Fmoc 固相方法合成胸腺法新進(jìn)行分析雖然固相合成工藝已經(jīng)非常成熟，但是很難合成的序列的氨基酸的最終產(chǎn)率可能會(huì)很低(30% -45% )，從經(jīng)濟(jì)的角度來看這可能會(huì)限制工藝的放大，從制藥行業(yè)對(duì)多肽純度的要求來看會(huì)導(dǎo)致多肽純度不足。胸腺肽的酸性殘留位置、β氨基酸(Thr-Thr，Val-Val)的連續(xù)存在和需要大量的保護(hù)基來保護(hù)多肽(20個(gè)側(cè)鏈保護(hù)基團(tuán))，此外，據(jù)報(bào)道，這個(gè)肽的兩個(gè)片段(1-10和 11-28)可以形成折疊結(jié)構(gòu)，所有的這些特征表明用現(xiàn)有的固相合成多肽的方法來合成該多肽是非常困難的。因此本領(lǐng)域迫切需要提供一種簡便有效的合成胸腺法新的方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在提供一種多肽固相合成胸腺法新的制備方法。本發(fā)明提供了一種如式I所示的胸腺法新的固相合成制備方法，所述的方法包括步驟(1)將Fm0C-Asn(Trt)-OH和羥基官能樹脂混合，經(jīng)酯化反應(yīng)得到 Fmoc-Asn (Trt)-樹月旨；(2)將Fmoc-Asn (Trt)-樹脂和去保護(hù)劑混合，得到Asn (Trt)-樹脂；(3)將 Fmoc-Glu (OtBu) -OH 禾口 Asn(Trt)-豐對(duì)月旨縮合，得至Ij Fmoc-Glu (OtBu) -Asn (Trt)-樹脂；
(4)按照固相合成的方法重復(fù)步驟(2)和(3)的脫Fmoc和將氨基酸同樹脂上的多肽縮合的步驟，將氨基酸自C端向N端按照Glu至Ser的順序依次同樹脂上的多肽縮合，形成如式Π所示的多肽樹脂；和(5)使式II所示多肽樹脂上的多肽和樹脂分離，得到如式I所示的胸腺法新；
權(quán)利要求
1. 一種如式I所示的胸腺法新的固相合成制備方法，其特征在于，所述的方法包括步驟(1)將Fmoc-Asn(Trt) -OH和羥基官能樹脂混合，經(jīng)酯化反應(yīng)得到Fmoc-Asn (Trt)-樹脂；(2)將Fmoc-Asn(Trt)-樹脂和去保護(hù)劑混合，得到Asn (Trt)-樹脂；(3)將Fmoc-Glu (OtBu) -OH 禾口 Asn(Trt)-豐對(duì)月旨縮合，得至Ij Fmoc-Glu (OtBu) -Asn (Trt)-樹脂；(4)按照固相合成的方法重復(fù)步驟( 和( 的脫Fmoc和將氨基酸同樹脂上的多肽縮合的步驟，將氨基酸自C端向N端按照Glu至kr的順序依次同樹脂上的多肽縮合，形成如式II所示的多肽樹脂；和(5)使式II所示多肽樹脂上的多肽和樹脂分離，得到如式I所示的胸腺法新；
2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的酯化反應(yīng)是將 Fmoc-Asn(Trt)-0H、羥基官能樹脂和2，6-二氯苯甲酰氯在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液中混合進(jìn)行。
3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的去保護(hù)劑以其總體積計(jì)，其中含有 3%-20%哌啶，0. 5%-10%二環(huán)脒(DBU)，和 01M-0. 5M1-羥基苯并三唑(HOBt)。
4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的去保護(hù)劑以其總體積計(jì)，其中含有-10%哌嗪和0. 1M-0. 5M1-羥基苯并三唑(HOBt)。
5.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述的氨基酸和樹脂的縮合在在選自下述的一種或多種縮合劑的存在下進(jìn)行N，N’ - 二異丙基碳二亞胺(DIC)、0-(苯并三唑-1-基)-N，N, N, N-四甲基脲四氟硼酸(TBTU)、三羥甲基丙烷(TMP)、二異丙基乙胺 (DIPEA)、1-羥基苯并三唑(HOBt)。
6.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述的縮合劑中含有N，N’- 二異丙基碳二亞胺(DIC)U-羥基苯并三唑(HOBt)、0-(苯并三唑-1-基)-N，N，N，N-四甲基脲四氟硼酸(TBTU)和三羥甲基丙烷TMP)。
7.如權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述的縮合劑中含有N，N’- 二異丙基碳二亞胺(DIC)U-羥基苯并三唑(HOBt)、0-(苯并三唑-1-基)-N，N，N，N-四甲基脲四氟硼酸(TBTU)和二異丙基乙胺(DIPEA)。
8.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟(5)在各物質(zhì)配比為92-97三氟乙酸(TFA) 1. 5-4三異丙基硅烷(TIS) 1.5-4水的切割劑存在下進(jìn)行。
9.如權(quán)利要求1-8人員所述的制備方法，其特征在于，所述的羥基官能樹脂選自 PEG-王樹月旨、HypoGe 1 200PHB，HypoGe 1 400PHB，NovaPEG 王樹脂。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種多肽固相合成胸腺法新的制備方法，所述的方法包括步驟(1)將Fmoc-Asn(Trt)-OH和羥基官能樹脂混合，經(jīng)酯化反應(yīng)得到Fmoc-Asn(Trt)-樹脂；(2)將Fmoc-Asn(Trt)-樹脂和去保護(hù)劑混合，得到Asn(Trt)-樹脂；(3)將Fmoc-Glu(OtBu)-OH和Asn(Trt)-樹脂縮合，得到Fmoc-Glu(OtBu)-Asn(Trt)-樹脂；(4)按照固相合成的方法重復(fù)步驟(2)和(3)的脫Fmoc和將氨基酸同樹脂上的多肽縮合的步驟，將氨基酸自C端向N端按照Glu至Ser的順序依次同樹脂上的多肽縮合，形成如式II所示的多肽樹脂；和(5)使式II所示多肽樹脂上的多肽和樹脂分離，得到如式I所示的胸腺法新。
文檔編號(hào)A61P31/20GK102199205SQ20111006987
公開日2011年9月28日 申請(qǐng)日期2011年3月22日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月22日
發(fā)明者張巍, 王仕銀, 袁劍琳 申請(qǐng)人:海南雙成藥業(yè)股份有限公司