專利名稱：：肺炎鏈球菌抗原的制作方法肺炎鏈球菌抗原本申請(qǐng)是發(fā)明名稱為“肺炎鏈球菌抗原”，國(guó)際申請(qǐng)日為2004年4月15日，國(guó)際申請(qǐng)?zhí)枮镻CT/EP2004/003984，進(jìn)入中國(guó)國(guó)家階段日期為2005年10月17日，中國(guó)申請(qǐng)?zhí)枮?00480010200.X的分案申請(qǐng)。本發(fā)明涉及分離的編碼肺炎鏈球菌(Str印tococcuspneumoniae)抗原的核酸分子，所述抗原適合用于制備預(yù)防和治療由肺炎鏈球菌引起的細(xì)菌感染的藥物。肺炎鏈球菌(肺炎球菌屬)是小刀狀、革蘭氏陽性的、兼性厭氧的細(xì)菌。它是作為人類和實(shí)驗(yàn)性動(dòng)物病原的僅有的具有莢膜的生物。莢膜是抗原性的，并且形成通過血清型對(duì)肺炎球菌分類的基礎(chǔ)。基于它們與類型特異性抗血清的反應(yīng)，已經(jīng)鑒定了90個(gè)血清型。已經(jīng)顯示大多數(shù)肺炎鏈球菌血清型造成嚴(yán)重的疾病，并且估計(jì)十個(gè)最常見的血清型對(duì)全世界的約62%的侵入性疾病負(fù)責(zé)。分類和血清型流行隨年齡組和地理區(qū)域而不同。肺炎球菌是呼吸道常見的寄居物，并且可以從5%-70%的正常成人的鼻咽分離。無癥狀帶菌者的比率隨年齡、環(huán)境和上呼吸道感染的存在而變化。僅有5%-10%的沒有孩子的成年人是帶菌者。在學(xué)校和孤兒院，27%-58%的學(xué)生和居民可以是帶菌者。在軍事設(shè)施上，多至50%-60%的服務(wù)人員可以是帶菌者。帶菌者的延續(xù)時(shí)間是變化的，并且通常在兒童中延續(xù)時(shí)間比在成年人中的時(shí)間更長(zhǎng)(綜述于EpidemiologyandPreventionofVaccine-PreventableDiseases,第7版，第二次印刷ThePinkBook)。對(duì)帶菌者與天然免疫性之間的關(guān)系了解的很少。此外，對(duì)使疾病發(fā)生在帶菌者中的免疫機(jī)制了解的很少。肺炎鏈球菌是在生命階段的盡頭的人類疾病和在具有潛在疾病的那些人中的重要試劑。與所有其它可疫苗預(yù)防的疾病的組合相比，肺炎球菌性疾病造成了更多的人死亡-在美國(guó)每年約有40，000或更多。肺炎球菌性疾病的主要臨床綜合征包括肺炎、菌血癥和腦膜炎。當(dāng)誘病條件存在時(shí)，疾病最經(jīng)常發(fā)生，特別是肺病。其是一種常見的先行病毒性呼吸道感染的細(xì)菌性并發(fā)癥，諸如流行性感冒和麻疹，以及慢性疾病的常見細(xì)菌性并發(fā)癥，諸如慢性阻塞性肺病、糖尿病、充血性心臟衰竭、腎衰竭、煙熏和醇中毒。在呼吸疾病更加流行的冬季和早春，肺炎球菌的感染更為常見。免疫缺陷(脾功能異常、醫(yī)原(iatrogen)等)是形成致命肺炎球菌感染的風(fēng)險(xiǎn)因子，因?yàn)槠錅p少了細(xì)菌清除率和缺乏抗體。培養(yǎng)階段很短，1-3天。癥狀包括突然發(fā)燒和惡寒戰(zhàn)栗或強(qiáng)直、排痰性咳、胸膜炎胸痛、呼吸困難(dyspnoe)、心動(dòng)過速和缺氧。肺炎鏈球菌是造成美國(guó)88%菌血癥感染的原因。肺炎是侵入性肺炎球菌性疾病的最常見的形式150.000-570.000病例/年(美國(guó))。36%的成年人群體獲得性肺炎和50%的醫(yī)院獲得性肺炎是由肺炎鏈球菌引起的(美國(guó))。已經(jīng)報(bào)道在65歲和65歲以上的成年人中疾病的發(fā)病率是60病例/100.000。這種疾病的病例致死率從對(duì)于兩歲或更年幼的那些的1.4%增加到在80歲或更年長(zhǎng)的那些中的20.6%。由流行性感冒和肺炎球菌引起的疾病在一起成為導(dǎo)致65歲及以上的人的第五大死亡原因。在這個(gè)年齡組中，可歸因于這些病原體的死亡率超過90%。菌血癥發(fā)生在約25-30%的患有肺炎的患者中。菌血癥的總死亡率是約20%，但是在更年長(zhǎng)的人中可以高達(dá)60%。在1998年，可歸因于侵入性肺炎球菌性疾病的所有死亡的51%發(fā)生在超過65歲的年齡組中。在美國(guó)，肺炎球菌是造成所有細(xì)菌性腦膜炎病例中13%-19%的原因。估計(jì)每年有3，000-6，000肺炎球菌性腦膜炎病例發(fā)生。1/4的患有肺炎球菌性腦膜炎的患者也患有肺炎。臨床癥狀、脊柱液體指數(shù)和神經(jīng)并發(fā)癥與膿性細(xì)菌腦膜炎的其它形式類似(綜述于EpidemiologyandPreventionofVaccine-PreventableDiseases,7thEdition_SecondPrinting,ThePinkBook)。在兒童中，肺炎球菌是急性中耳炎的常見原因，并且在-55%的中耳吸出物中檢測(cè)得到。到12個(gè)月齡時(shí)，62%的兒童已經(jīng)至少有一次急性中耳炎的發(fā)作。中耳感染是美國(guó)兒科出診最頻繁的原因，每年導(dǎo)致2千萬的出診。肺炎球菌性中耳炎的并發(fā)癥可以包括乳突炎和腦膜炎。在<2周歲的兒童中，沒有已知位點(diǎn)感染的菌血癥是最常見的侵入性臨床表現(xiàn)，在這個(gè)年齡組中，約占侵入性疾病的70%。在小于2周歲的兒童中，菌血癥性肺炎占侵入性肺炎球菌性疾病的12%-16%。隨著侵入性Hib疾病的下降，肺炎鏈球菌已經(jīng)成為美國(guó)小于5周歲的兒童中細(xì)菌性腦膜炎最主要的原因。小于1周歲的兒童具有最高的肺炎球菌性腦膜炎的發(fā)病率，約為10病例/100，000人口。在小于5周歲的兒童中，肺炎球菌性疾病的負(fù)擔(dān)是明顯的。估計(jì)每年發(fā)生17，000例侵入性疾病，其中13，000是沒有已知感染位點(diǎn)的菌血癥，并且約700是腦膜炎。估計(jì)每年有200個(gè)兒童死于侵入性肺炎球菌性疾病。即使不考慮侵入性疾病，估計(jì)每年有5百萬例的急性中耳炎發(fā)生在小于5周歲的兒童中°(綜述于EpidemiologyandPreventionofVaccine-PreventableDiseases,7版，第二次印刷，ThePinkBook)。肺炎鏈球菌感染的確定診斷通常依賴于從血液或其它正常無菌的身體部位對(duì)生物的分離。還可進(jìn)行測(cè)試以檢測(cè)體液中莢膜多糖抗原。青霉素是治療的選擇藥物。但是因?yàn)閺V譜的抗菌的抗性，成功進(jìn)行抗感染治療已經(jīng)變得越來越困難。對(duì)青霉素的抗性正在增加，并且根據(jù)最近的報(bào)道，其在美國(guó)達(dá)到了25%{Whitney,C.等，2000}?？勾蟓h(huán)內(nèi)酯的菌株的比率達(dá)到了20%{Hyde,Τ.等，2001}。抗菌劑的應(yīng)用與肺炎鏈球菌對(duì)@內(nèi)酰胺和大環(huán)內(nèi)酯的抗性的增加具有高度相關(guān)性{McCormick,Α.等，2003}。然而，甚至用有效的抗生素治療(敏感菌株)，侵入性疾病的病例致死率在發(fā)達(dá)國(guó)家中高達(dá)平均10%，并且對(duì)于某些血清型，在更年長(zhǎng)的患者中和在菌血癥或腦膜炎的病例中可以更高(高達(dá)80%)。因此，仍然需要有效的治療以預(yù)防或改善肺炎球菌(spneumoococcal)性感染。疫苗不僅能預(yù)防鏈球菌引起的感染，而且更特殊地預(yù)防或改善宿主組織(例如，在鼻咽中)的建群，由此減少上呼吸道感染和其它化膿性感染，諸如中耳炎的發(fā)病率。消除侵入性疾病-肺炎、菌血癥和腦膜炎以及膿毒癥將是減少急性感染發(fā)病率和生物攜帶的直接后果。能夠顯示交叉保護(hù)作用的疫苗將對(duì)于預(yù)防或改善由所有其它鏈球菌物種，即組A、B、C和G的引起感染是有用的，所述交叉保護(hù)作用是針對(duì)大多數(shù)導(dǎo)致人感染的肺炎鏈球菌菌株的。疫苗可包含全部各種不同抗原?？乖膶?shí)例是被完全滅活或減毒的生物體、這些生物體/組織的亞組分、蛋白質(zhì)，或者，它們最簡(jiǎn)單的形式-肽?？乖€可以糖基化的蛋白質(zhì)或肽的形式被免疫系統(tǒng)所識(shí)別，而且還可是或者包含多糖或脂質(zhì)?？梢允褂枚屉模?yàn)槔缂?xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)識(shí)別通常形式短至8-11個(gè)氨基酸長(zhǎng)的肽且與主要組織相容性復(fù)合體(MHC)結(jié)合的抗原。B-細(xì)胞可識(shí)別4-5個(gè)氨基酸短的線性表位以及三維結(jié)構(gòu)(構(gòu)象表18位)。為了獲得持續(xù)不變的抗原特異性免疫應(yīng)答，需要用佐劑引發(fā)涉及免疫系統(tǒng)所有細(xì)胞的免疫級(jí)聯(lián)反應(yīng)。主要地，佐劑是作用于所謂的抗原呈遞細(xì)胞(APCs)，但不局限于其作用形式。這些細(xì)胞通常首先遇到抗原，然后將加工過或未修飾過的抗原呈遞于免疫效應(yīng)細(xì)胞上。還可涉及中間細(xì)胞類型。只有具有適當(dāng)特異性的效應(yīng)子細(xì)胞可在生產(chǎn)性免疫應(yīng)答中被激活。佐劑還可局部保留抗原以及共注射的其它因子。此外，佐劑可用作其它免疫細(xì)胞的化學(xué)引誘物或可局部的和/或全身性地用作免疫系統(tǒng)的刺激劑。早在1911年，就開始嘗試開發(fā)有效的肺炎球菌疫苗。然而，隨著青霉素在19世紀(jì)40年代的出現(xiàn)，對(duì)所述疫苗的興趣下降，直到觀察到盡管用抗生素治療仍舊有很多患者死亡。到60年代末期，再次嘗試開發(fā)多價(jià)疫苗。首個(gè)肺炎球菌疫苗包含來自14個(gè)不同類型肺炎球菌細(xì)菌的純化的莢膜多糖抗原。在1983年，23價(jià)的多糖疫苗(PPV2;3)得到許可并且取代了不再生產(chǎn)的14價(jià)疫苗。PPV23包含來自23個(gè)類型的肺炎球菌細(xì)菌的多糖抗原，所述細(xì)菌導(dǎo)致88%的菌血癥的肺炎球菌性疾病。此外，對(duì)于一些占菌血癥疾病另外8%的莢膜類型，交叉反應(yīng)性發(fā)生。在美國(guó)可得到兩種多糖疫苗(Pneumovax23，Merck，和Pnu-Immune23，Wyeth-Lederle)。兩種疫苗都包含25μg的每種抗原/劑量并且包括苯酚或硫柳汞作為防腐劑。在2000年，首個(gè)肺炎球菌性綴合疫苗(PCV7，Prevnar)在美國(guó)得到許可。其包括與已知為CRM197的白喉毒素的非毒性變體綴合的肺炎鏈球菌的7個(gè)血清型G、9V、14、19F、23F、18C和6B)的純化的莢膜多糖。在1978-1994年間，在小于6周歲的兒童中，包括在Prevnar中的所述血清型導(dǎo)致86%的菌血癥，83%的腦膜炎和65%的急性中耳炎(綜述于EpidemiologyandPreventionofVaccine-PreventableDiseases,7thEdition-SecondPrinting,ThePinkBook)。正在開發(fā)包含肺炎鏈球菌的9和11個(gè)血清型的另外的肺炎球菌多糖綴合物疫苗。將所述疫苗進(jìn)行肌內(nèi)施用。在施用4劑量的ft~evnar疫苗后，實(shí)際上所有健康的嬰兒形成針對(duì)包含在疫苗中的所有7種血清型的抗體。Prevnar也已經(jīng)顯示在包括患有鐮形細(xì)胞疾病和HIV感染的那些的嬰兒和兒童中具有免疫原性。在大臨床實(shí)驗(yàn)中，Prevnar顯示減少了由疫苗血清型引起的侵入性疾病和減少了由包括不在疫苗中的血清型的所有的血清型引起的侵入性疾病。與未接種疫苗的兒童相比，接受I^revnar的兒童具有更少的急性中耳炎發(fā)作并且經(jīng)歷更少的鼓膜造孔術(shù)管放置。目前尚不知道在I^revnar后的保護(hù)延續(xù)時(shí)間。用I^revnar進(jìn)行的免疫減少了疫苗血清型的鼻咽攜帶率，而總攜帶率未受影響。不幸的是，其已經(jīng)顯示減少了血清型的再分配，即，用Prevnar沒有覆蓋的菌株對(duì)疫苗血清型進(jìn)行替代{Pelton,S.等，2003}。推薦將肺炎球菌性疫苗常規(guī)地施用于i.，所有的兒童，所述疫苗作為常規(guī)兒童時(shí)期(shildhood)免疫程序表的一部分，ii.，65歲及65歲以上的成年人以及iii.，具有正常免疫系統(tǒng)并患有慢性疾病的大于2歲的人，所述慢性疾病包括心血管疾病、肺病、糖尿病、醇中毒、硬化，或腦脊髓液體滲漏。在過了中年的群體中，肺炎球菌疫苗的目標(biāo)組和流行性感冒疫苗組重疊。這些疫苗可以在相同的時(shí)間不同的部位給藥，而不會(huì)增加副作用。甚至在用有效的抗生素治療時(shí)，在高風(fēng)險(xiǎn)個(gè)體中(具有潛在疾病-主要是病毒性呼吸感染、無免疫應(yīng)答)觀察到高致死率。MAb方法靶向具有嚴(yán)重疾病的患者并且提供進(jìn)行細(xì)菌清除的立即免疫增強(qiáng)。通過調(diào)理作用，細(xì)菌在噬菌細(xì)胞中被殺死并且沒有被抗生素溶解在血液中。這種機(jī)制可以有助于去除使敗血癥患者的臨床狀況惡化的毒素(諸如肺炎球19菌溶血素和其它的細(xì)胞毒素)的釋放。在單克隆抗體生產(chǎn)技術(shù)中的最近進(jìn)展提供產(chǎn)生人抗體試劑和再引入抗體療法的方式，從而避免與血清療法關(guān)聯(lián)的毒性。免疫球蛋白是具有非常多種分類的抗菌蛋白，可以將其用于預(yù)防和治療正在出現(xiàn)的感染性疾病。針對(duì)許多種不同的微生物，抗體療法已經(jīng)顯示是有效的，在{Burnie，J.等，1998}中綜述。雖然已經(jīng)顯示莢膜特異性抗體是高度保護(hù)性的，但是仍不清楚這些血清型特異性抗體防護(hù)疾病的濃度為何，并且就在最近，變得清楚的是這些抗體的調(diào)理活性和親和力是比濃度更關(guān)鍵的保護(hù)決定子。毫無疑問，在針對(duì)肺炎球菌性疾病的戰(zhàn)斗中，蛋白質(zhì)綴合的疫苗是對(duì)amarmatorium的重大的新的增加，但是疫苗包含有限量的肺炎球菌性血清型，并且考慮到足夠的生態(tài)壓力，由非疫苗血清型引起的替代疾病仍然是現(xiàn)實(shí)的威脅，特別是在具有非常高的疾病負(fù)擔(dān)的區(qū)域中。在過去十年中，一些肺炎球菌蛋白質(zhì)的免疫原性和保護(hù)能力已經(jīng)在動(dòng)物模型中有所描述，并且目前正在探索這些以開發(fā)基于常見物種的蛋白質(zhì)的疫苗。這些蛋白質(zhì)是肺炎球菌表面蛋白質(zhì)A(PspA，{McDaniel,L.等，1991}；{Roche,H.等，2003})，肺炎球菌表面粘附素A(PsaA，{Talkington，D.等，1996})，膽堿結(jié)合蛋白質(zhì)A(CbpA，{Rosenow,C.等1997})，LytB氨基葡糖苷酶(glucosaminidase)，LytC溶菌酶，PrtA絲氨酸蛋白酶，PhtA(三聯(lián)組氨酸A)和肺炎球菌疫苗抗原A(PvaA){ffizemann,Τ.等，2001}；{Adamou，J.等，2001}。在革蘭氏陽性生物的表面上顯示的某些蛋白質(zhì)或酶是有效促成發(fā)病機(jī)理的因素，并且可以涉及由這些病原引起的疾病過程。這些蛋白質(zhì)經(jīng)常涉及與宿主組織的直接相互作用或涉及conceiling來自宿主防御機(jī)制的細(xì)菌表面{Navarre，W.等，1999}。在這點(diǎn)上，肺炎鏈球菌不是例外。一些表面蛋白的特征在于作為毒力因子，所述毒力因子對(duì)于肺炎球菌病原性是重要的，在{Jedrzejas，Μ.，2001}中綜述。如果這些蛋白質(zhì)的抗體能夠提供對(duì)人類更好的保護(hù)，它們能夠提供新的、基于蛋白質(zhì)的肺炎球菌疫苗的來源以用在結(jié)合或替代更傳統(tǒng)的莢膜多糖疫苗中。作為潛在疫苗的抗原的一些上述蛋白質(zhì)以及許多在{DiGuilmi，Α.等，2002}中綜述的另外的候選者的應(yīng)用主要是得自基于鑒別的容易性或獲得的機(jī)會(huì)進(jìn)行選擇的結(jié)果。需要以更全面的方式鑒定肺炎鏈球菌的相關(guān)抗原。本發(fā)明人開發(fā)了一種方法用于鑒定、分離和產(chǎn)生來自具體病原體，特別是來自金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)禾口表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)的超免疫血清反應(yīng)性抗原(W002/059148)。不過，由于生物學(xué)特性、致病功能和遺傳背景的差異，肺炎鏈球菌與葡萄球菌菌株是顯著不同的。重要的是，用于鑒定來自肺炎鏈球菌的抗原的血清選擇與應(yīng)用于金黃色葡萄球菌篩選的血清選擇是不同的。為此目的收集三種主要類型的人血清。首先，針對(duì)肺炎鏈球菌的鼻咽攜帶，檢測(cè)年齡小于45周歲且優(yōu)選家庭中有幼兒的健康成人。大部分幼兒是肺炎鏈球菌的帶菌者，且就其家庭成員而言他們被認(rèn)為是一接觸源?；谙嚓P(guān)資料，保護(hù)性(建群中和)抗體有可能存在于非肺炎鏈球菌帶菌者的被暴露的個(gè)體中(在家庭中具有高攜帶率的兒童)。為了選擇相應(yīng)的血清來源，用細(xì)菌裂解物和培養(yǎng)物上清蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)抗肺炎鏈球菌IgG和IgA抗體水平的一系列ELISA。在基于基因組的抗原鑒定中包括來自高效價(jià)非帶菌者的血清。用于人血清選擇的這種方法基本上與針對(duì)金黃色葡萄球菌的方法明顯不同，其中攜帶或非攜帶狀態(tài)不能與抗體水平聯(lián)系起來。其次，以相同方式表征和選擇患有侵入性肺炎球菌性疾病的恢復(fù)期患者的血清樣品。還從患有侵入性疾病的個(gè)體中獲得包含縱向收集的樣品的第三組血清，且主要將其用于證實(shí)的目的。這種收集的主要價(jià)值是可以在發(fā)病(diase)(prae)之前，在發(fā)作(急性)時(shí)和在恢復(fù)過程中(恢復(fù)期)中遵循抗原特異性抗體水平中的變化。后一組幫助選擇表位，其在疾病過程中誘導(dǎo)抗體，并在疾病之前誘導(dǎo)抗體缺失。兩個(gè)細(xì)菌物種肺炎鏈球菌和金黃色葡萄球菌自身的基因組顯示出了許多重要的差異。肺炎鏈球菌的基因組含大約2.16Mb，而金黃色葡萄球菌含2.85Mb。它們的平均GC含量分別為39.7和33%且大約30-45%的編碼基因在這兩個(gè)病原體之間不是共有的。此外，這兩個(gè)細(xì)菌物種繁殖需要不同的生長(zhǎng)條件和培養(yǎng)基。肺炎鏈球菌是嚴(yán)格的人類病原體，而還發(fā)現(xiàn)金黃色葡萄球菌可感染一系列溫血?jiǎng)游铩Ｏ挛闹刑峁┝丝捎伤龅膬煞N病原體造成的一系列最主要的疾病。金黃色葡萄球菌主要引起醫(yī)院感染、機(jī)會(huì)感染膿皰病、濾泡炎、膿腫、癤子、被感染的傷口、心內(nèi)膜炎、腦膜炎、膿毒性關(guān)節(jié)炎、肺炎、骨髓炎、皮膚燙傷綜合征(SSS)、中毒性休克綜合征。肺炎鏈球菌主要引起群落獲得性感染上呼吸道感染(咽炎、中耳炎)和下呼吸道感染(肺炎)以及菌血癥、膿毒病和腦膜炎。通過隨機(jī)鳥槍法測(cè)序策略來確定命名為TIGR4的肺炎鏈球菌莢膜血清型4分離物的完全基因組序列(GenBank登錄號(hào)AE005672；見www.tigr.org/tigrscripts/CMR2/CMRHomePage.spl)。該臨床分離物來自Kongsvinger，Norway的一位30歲男性患者的血液，并且在小鼠模型的感染中具有高度侵入性和毒力。構(gòu)成本發(fā)明基礎(chǔ)的問題是提供用于開發(fā)藥物諸如針對(duì)肺炎鏈球菌感染的疫苗的方法。更具體而言，此問題是提供可用于所述藥物制備的來自肺炎鏈球菌的一套有效、相關(guān)和全面的核酸分子或超免疫血清反應(yīng)性抗原。因此，本發(fā)明提供了編碼超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的分離的核酸分子，該核酸包含選自由下列各項(xiàng)組成的組中的核酸序列a)與選自kqIDNo1，101-144的核酸分子具有至少70%序列同一性的核酸分子b)與a)的核酸分子互補(bǔ)的核酸分子，c)包含a)或b)的核酸分子的至少15個(gè)連續(xù)堿基的核酸分子，d)在嚴(yán)緊雜交條件下與a)、b)或c)的核酸分子退火的核酸分子，e)若非遺傳密碼的簡(jiǎn)并性，與a)、b)、c)或d)中所定義的核酸分子雜交的核酸分子。依照本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案，序列同一性至少是80%，優(yōu)選至少95%，尤其是100%。此外，本發(fā)明提供了編碼超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的分離的核酸分子，該核酸包含選自由下列各項(xiàng)組成的組的核酸序列a)與選自kqIDNo2_6、8、10-16、18_23、25-31、34、36、38-42、44、47_48、51、53、55-62、64、67、71-76、78-79、81-94、96-100的核酸分子具有至少96%的序列同一性的核酸分子，b)與a)的核酸分子互補(bǔ)的核酸分子，c)包含a)或b)的核酸分子的至少15個(gè)連續(xù)堿基的核酸分子，d)在嚴(yán)緊雜交條件下與a)、b)或C)的核酸分子退火的核酸分子，e)若非遺傳密碼的簡(jiǎn)并性，與a)、b)、C)或d)中所定義的核酸雜交的核酸分子。根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供了包含核酸序列的分離的核酸分子，所述核酸序列選自由下列各項(xiàng)組成的組a)選自SeqIDNo9、17、24、32、37、43、52、54、65_66、70、80的核酸分子。b)與a)的核酸互補(bǔ)的核酸分子，c)若非遺傳密碼的簡(jiǎn)并性，與a)、b)、C)或d)中所定義的核酸雜交的核酸分子。優(yōu)選地，核酸分子是DNA或RNA。依照本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，核酸分子分離自基因組DNA，尤其是來自肺炎鏈球菌的基因組DNA。依照本發(fā)明，提供了含有按照本發(fā)明任一方面的核酸分子的載體。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述載體適用于由按照本發(fā)明的核酸分子編碼的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的重組表達(dá)。本發(fā)明還提供了含有按照本發(fā)明的所述載體的宿主細(xì)胞。根據(jù)另一方面，本發(fā)明進(jìn)一步提供了包含由按照本發(fā)明的核酸分子編碼的氨基酸序列的超免疫血清反應(yīng)性抗原。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，氨基酸序列(多肽)選自由kqIDNo145，245-288組成的組中。在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，氨基酸序列(多肽)選自由kqIDNol46_150、152、154-160、162-167、169-175、178、180、182-186、188、191-192、195、197、199-206、208、211、215-220、222-223、225-238、240-244組成的組中。在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，氨基酸序列(多肽)選自由kqIDNo153、161、168、176、181、187、196、198、209-210、214、224組成的組中。根據(jù)另一方面，本發(fā)明提供了超免疫血清反應(yīng)性抗原的片段，其選自由下述組成的組中包含表1“預(yù)測(cè)的免疫原性氨基酸”和“已鑒定的免疫原性區(qū)域的定位”欄的氨基酸序列的肽；表2的血清反應(yīng)性表位，尤其是含以下氨基酸的肽SeqIDNo145的第4_11位、35-64位、66-76位、101-108位、111-119位和57-114位；SeqIDNo146的第5-27位、32-64位、92-102位、107-113位、119-125位、133-139位、148-162位、177-187位、195-201位、207-214位、241-251位、2M-269位、285-300位、302-309位、317-324位、332-357位、365-404位、411-425位、443-463位、470-477位、479-487位、506-512位、515-520位、532-547位、556-596位、603-610位、616-622位、624-629位、636-642位、646-665位、667-674位、687-692位、708-720位、734-739位、752-757位、798-820位、824-851位、856-865位和732-763位；SeqIDNo147的第14-21位、36-44位、49-66位、102-127位、162-167位、177-196位、45-109位和145-172位；SeqIDNo148的第17-35位、64-75位、81-92位、100-119位、125-172位、174-183位、214-222位、230-236位、273-282位、287-303位、310-315位、331-340位、392-398位、412-420位、480-505位、515-523位、525-546位、553-575位、592-598位、603-609位、617-625位、631-639位、644-651位、658-670位、681-687位、691-704位、709-716位、731-736位、739-744位、750-763位、774-780位、784-791位、799-805位、809-822位、859-870位、880-885位、907-916位、924-941位、22943-949位、973-986位、1010-1016位、1026-1036位、1045-1054位、1057-1062位、1082-1088位、1095-1102位、1109-1120位、1127-1134位、1140-1146位、1152-1159位、1169-1179位、1187-1196位、1243-1251位、1262-1273位、1279-1292位、1306-1312位、1332-1343位、1348-1364位、1379-1390位、1412-1420位、1427-1436位、1458-1468位、1483-1503位、1524-1M9位、1574-1588位、1614-1619位、1672-1685位、1697-1707位、1711-1720位、1738-1753位、1781-1787位、1796-1801位、1826-1843位、132-478位、508-592位和1753-1810位JeqIDNo149的第15-43位、49_55位、71-77位、104-110位、123-130位、162-171位、180-192位、199-205位、219-227位、246-2M位、264-270位、279-287位、293-308位、312-322位、330-342位、349-356位、369-377位、384-394位、401-406位、416-422位、432-439位、450-460位、464-474位、482-494位、501-508位、521-529位、536-546位、553-558位、568-574位、584-591位、602-612位、616-626位、634-646位、653-660位、673-681位、688-698位、705-710位、720-726位、736-749位、833-848位、1-199位、200-337位、418-494位和549-647位；SeqIDNo150的第9-30位、65-96位、99-123位、170-178位和1-1位JeqIDNo151的第7-32位、34-41位、96-106位、127-136位、154-163位、188-199位、207-238位、272-279位、306-312位、318-325位、341-347位、353-360位、387-393位、399-406位、434-440位、452-503位、575-580位、589-601位、615-620位、635-640位、654-660位、674-680位、696-701位、710-731位、1-548位和660-691位；SeqIDNo152的第4-19位、35-44位、48-59位、77-87位、93-99位、106-111位、130-138位、146-161位和78-84位JeqIDNo153的第24-30位、36-43位、64-86位、93-99位、106-130位、132-145位、148-165位、171-177位、189-220位、230-249位、251-263位、293-300位、302-312位、323-329位、338-356位、369-379位、390-412位和179-193位feqIDNo154的第30-39位、61-67位、74-81位、90-120位、123-145位、154-167位、169-179位、182-197位、200-206位、238-244位、267-272位和230-265位；SeqIDNo155的第14-20位、49-65位、77-86位和2-68位JeqIDNo156的第4_9位、26_；35位、42-48位、53-61位、63-85位、90-101位、105-111位、113-121位、129-137位、140-150位、179-188位、199-226位、228-237位、248-255位、259-285位、299-308位、314-331位、337-343位、353-364位、410-421位、436-442位和110-144位；SeqIDNo157的第36-47位、55-63位、94-108位、129-134位、144-158位、173-187位、196-206位、209-238位、251-266位、270-285位、290-295位、300-306位、333-344^,346-354位、366-397位、404-410位、422-435位、439-453位、466-473位、515-523位、529-543位、554-569位、571-585位、590-596位、607-618位、627-643位、690-696位、704-714位、720-728位、741-749位、752-767位、780-799位、225-247位和480-507位；SeqIDNo158的第16-25位、36-70位、80-93位、100-106位和78-130位；SeqIDNo159的第18-27位、41-46位、50-57位、65-71位、79-85位、93-98位、113-128位、144-155位、166-178位、181-188位、201-207位、242-262位、265-273位、281-295位、303-309位、318-327位和36-64位；SeqIDNo160的第7-29位、31-44位、50-59位、91-96位、146-153位、194-201位、207-212位、232-238位、264-278位、284490位、296-302^,326-353位、360-370位、378-384位、400-405位、409-418位、420-435位、442-460位、499-506位、529-534位、556-562位、564-576位、644-651位、677-684位、687-698位、736-743位、759-766位、778-784位、23808-814位、852-858位、874-896位、920-925位、929-935位、957-965位、1003-1012位、1021-1027位、1030-1044位、1081-1087位、1101-1111位、1116-1124位、1148-1159位、1188-1196位、1235-1251位、1288-1303位、1313-1319位、1328-1335位、1367-1373位、1431-1437位、1451-1458位、1479-1503位、1514-1521位、1530-1540位、1545-1552位、1561-1568位、1598-1605位、1617-1647位、1658-1665位、1670-1676位、1679-1689位、1698-1704位、1707-1713位、1732-1738位、1744-1764位、1-70位、1M-189位、922-941位、1445-1462位和1483-1496位feqIDNo161的第6-51位、81-91位、104-113位、U6-137位、150-159位、164-174位、197-209位、215-224位、229-235位、256-269位、276-282位、307-313位、317-348位、351-357位、376-397位、418-437位、454-464位、485-490位、498-509位、547-555位、574-586位、602-619位和452-530位JeqIDNo162的第25-31位、39-47位、49-56位、99-114位、121-127位、159-186位、228440位、253-269位、271-279位、303-315位、365-382位、395-405位、414-425位、438-453位和289-384位；SeqIDNo163的第9-位、41-47位、49-位、68-78位、108-114位、117-122位、132-140位、164-169位、179-186位、193-199位、206-213位、244-251位、267-274位、289-294位、309-314位、327-333位、209-249位和沘6-336位JeqIDNo164的第9-位、53-67位、69-82位、87-93位、109-117位、172-177位、201-207位、220-227位、242-247位、262-268位、305-318位、320-325位和286-306位；SeqIDNo165的第4-10位、26-39位、47-58位、63-73位、86-96位、98-108位、115-123位、137-143位、148-155位、160-176位、184-189位、194-204位、235440位、254-259位、272-278位和199-283位；SeqIDNo166的第4-26位、33-39位、47-53位、59-65位、76-83位、91-97位、104-112位、118-137位、155-160位、167-174位、198-207位、242-268位、273-279位、292-315位、320-332位、345-3M位、358-367位、377-394位、403-410位、424-439位、445-451位、453-497位、511-518位、535-570位、573-589位、592-601位、604-610位和202-242位；SeqIDNo167的第8-30位、36-45位、64-71位、76-82位、97-103位、105-112位、134-151位、161-183位、211-234位、253-268位、270-276位、278-284位、297-305位、309-315位、357-362位、366-372位、375-384位、401-407位、409-416位、441-455位、463-470位、475-480位、490-497位、501-513位、524-537位、552-559位、565-576位、581-590位、592-600位、619-625位、636-644位、646-656位和316-419位；SeqIDNo168的第4-17位、52-58位、84-99位、102-110位、114-120位、124-135位、143-158位、160-173位、177-196位、201-216位、223-250位、259-267位、269-275位和1-67位JeqIDNo169的第6-46位、57-67位、69-80位、82-133位、137-143位、147-168位、182-187位、203-209位、214-229位、233-242位、246-280位和53-93位JeqIDNo170的第7-40位、50-56位、81-89位、117-123位、202-209位、213-218位、223-229位、248-261位、264-276位、281-288位、303-308位、313-324位、326-332位、340-346位、353-372^,434-443位、465-474位、514-523位、556-564位、605-616位、620-626位、631-636位、667-683位、685-699位、710-719位、726-732位、751-756位、760-771位、779-788位、815-828位、855-867位、869-879位、897-902位、917-924位、926-931位、936-942位、981-1000位、1006-1015位、1017-1028位、1030-1039位、1046-1054位、1060-1066位、1083-1092位、1099-1112位、1122-1130位、1132-1140位、1148-1158位、1161-1171位、1174-1181位、1209-1230位、1236-1244位、1248-1254位、1256-1267位、1269-1276位、1294-1299位、1316-1328位、1332-1354位、1359-1372位、1374-1380位、1384-1390位、1395-1408位、1419-1425位、1434-1446位、1453-1460位、1465-1471位、1474-1493位、1505-1515位、1523-1537位、1547-1555位、1560-1567位、1577-1605位、1633-1651位、1226-1309位、1455-1536位和1538-1605位JeqIDNo171的第4-10位、31-39位、81-88位、106-112位、122-135位、152-158位、177-184位、191-197位、221-227位、230-246位、249-255位、303-311位、317-326位、337-344位、346-362位、365-371位、430-437位、439-446位、453-462位、474-484位和449-467位feqIDNo172的第9-15位、24-；35位、47-55位、122-128位、160-177位、188-196位、202-208位、216-228位、250-261位、272-303位、318-324位、327-339位、346-352位、355-361位、368-373位、108-218位和344-376位；SeqIDNo173的第6-14位、17-48位、55-63位、71-90位、99-109位、116-124位、181-189位、212-223位、232-268位、270-294位、297-304位、319-325位、340-348位、351-370位、372-378位、388-394位、406-415位、421-434位和177-277位；SeqIDNo174的第21-39位、42-61位、65-75位、79-85位、108-115位和11-38位；SeqIDNo175的第4-17位、26-39位、61-76位、103-113位、115-122位、136-142位、158-192位、197-203位、208-214位、225-230位、237-251位和207-225位；SeqIDNo176的第5-11位、27-36位、42-53位、62-70位、74-93位、95-104位、114-119位、127-150位、153-159位、173-179位、184-193位、199-206位、222-241位、248-253位、257-280位、289-295位、313-319位、322-342位、349-365位、368-389位、393-406位、408-413位、426-438位、447-461位、463-470位、476-495位、532-537位、543-550位和225-246位；SeqIDNo177的第4-29位、68-82位、123-130位、141-147位、149-157位、178-191位、203-215位、269-277位、300-307位、327-335位、359-370位、374-380位、382-388位、393-400位、410-417位、434-442位、483-492位、497-503位、505-513位、533-540位、564-569位、601-607位、639-647位、655-666位、693-706位、712-718位、726-736位、752-758位、763-771位、774-780位、786-799位、806-812位、820-828位、852-863位、884-892位、901-909位、925-932位、943-948位、990-996位、1030-1036位、1051-1059位、1062-1068位、1079-1086位、1105-1113位、1152-1162位、1168-1179位、1183-1191位、1204-1210位、1234-1244位、1286-1295位、1318-1326位、1396-1401位、1451-1460位、1465-1474位、1477-1483位、1488-1494位、1505-1510位、1514-1521位、1552-1565位、1593-1614位、1664-1672位、1677-1685位、1701-1711位、1734-1745位、1758-1770位、1784-1798位、1840-1847位、1852-1873位、1885-1891位、1906-1911位、1931-1939位、1957-1970位、1977-1992位、2014-2020位、2026-2032位、2116-2134位、1-348位、373-490位、573-767位、903-1043位、1155-1198位、1243-1482位、1550-1595位、1682-1719位、1793-1921位和2008-2110；SeqIDNo178的第10_；35位、39-52位、107-112位、181-188位、2洸_236位、238-253位、258-268位、275-284位、296-310位、326-338位、345-368位、380-389位、391-408位、410-418位、420-429位、444-456位、489-505位、573-588位、616-623位、637-643位、726-739位、741-767位、785-791位、793-803位、830-847位、867-881位、886-922位、949-956位、961-980位、988-1004位、1009-1018位、1027-1042位、1051-1069位、1076-1089位、1108-1115位、1123-1135位、1140-1151位、1164-1179位、1182-1191位、1210-1221位、1223-1234位、1242-1250位、1255-1267位、1281-U92位、1301-1307位、251315-1340位、1348-1355位、1366-1373位、1381-1413位、1417-1428位、1437-1444位、1453-1463位、1478-1484位、1490-1496位、1498-1503位、1520-1536位、1538-1546位、1548-1570位、1593-1603位、1612-1625位、1635-1649位、1654-1660位、1670-1687位、1693-1700位、1705-1711位、1718-1726位、1729-1763位、1790-1813位、1871-1881位、1893-1900位、1907-1935位、1962-1970位、1992-2000位、2006-2013位、2033-2039位、2045-2051位、2055-2067位、2070-2095位、2097-2110位、2115-2121位、2150-2171位、2174-2180位、2197-2202位、2206-2228位和1526-1560位；SeqIDNo179的第4-17位、35-48位、54-76位、78-107位、109-115位、118-127位、134-140位、145-156位、169-174位、217-226位、232-240位、256-262位、267-273位、316-328位、340-346位、353-360位、402-409位、416-439位、448-456位、506-531位、540-546位、570-578位、586-593位、595-600位、623-632位、662-667位、674-681位、689-705位、713-724位、730-740位、757-763位、773-778位、783-796位、829-835位、861-871位、888-899位、907-939位、941-955位、957-969位、986-1000位、1022-1028位、1036-1044位、1068-1084位、1095-1102位、1118-1124位、1140-1146位、1148-1154位、1168-1181位、1185-1190位、1197-1207位、1218-1226位、1250-1270位、1272-1281位、1284-1296位、1312-1319位、1351-1358位、1383-1409位、1422-1428位、1438-1447位、1449-1461位、1482-1489位、1504-1510位、1518-1527位、1529-1537位、1544-1551位、1569-1575位、1622-1628位、1631-1637位、1682-1689位、1711-1718位、1733-1740位、1772-1783位、1818-1834位、1859-1872位、1-64位和128-495位；SeqIDNo180的第8-28位、32-37位、62-69位、119-125位、137-149位、159-164位、173-189位、200-205位、221-229位、240-245位、258-265位、268-276位、287-293位、296-302位、323-329位和1-95位；SeqIDNo181的第9-18位、25-38位、49-63位、65-72位、74-81位、94-117位、131-137位、139-146位、149-158位、162-188位、191-207位、217-225位、237-252位、255-269位、281-293位、301-326位、332-342位、347-354位、363-370位、373-380位、391-400位、415-424位、441-447位和75-107位JeqIDNo182的第4-24位、64-71位、81-87位、96-116位、121-128位、130-139位、148-155位、166-173位、176-184位、203-215位、231-238位、243-248位、256-261位、280-286位、288-306位、314-3位和67-148位feqIDNo183的第4-10位、19-37位、46-52位、62-81位、83-89位、115-120位、134-139位、141-151位、168-186位、197-205位、209-234位、241-252位、322-335位、339-345位、363-379位、385-393位、403-431位、434-442位、447-454位、459-465位、479-484位、487-496位和404-420位JeqIDNo184的第10-35位、46-66位、71-77位、84-93位、96-122位、138-148位、154-172位、182-213位、221-233位、245-263位、269-275位、295-301位、303-309位、311-320位、3M-336位、340-348位、351-359位、375-381位和111-198位feqIDNo185的第14-25位、30-42位、47-61位、67-75位、81-91位、98-106位、114-122位、124-135位、148-193位、209-227位和198-213JeqIDNo186的第5-18位、45-50位、82-90位、97-114位、116-136位、153-161位、163-171位、212-219位、221-227位、240-249位、267-281位、311-317位、328-337位、375-381位、390-395位、430-436位、449-455位、484-495位、538-543位、548-5位、556-564位、580-586位、596-602位和493-606位feqIDNo187的第9-25位、28-34位、37-44位、61-68位、75-81位、88-96位、98-111位、119-133位、138-150位、152-163位、168-182位、186-194位、200-205位、216-223位、236-245位、257-264位、279-287位、293-304位、311-318位、325-330位、340-346位、353-358位、365-379位、399-409位、444-453位和303-391位；SeqIDNo188的第16-36位、55-61位、66-76位、78-102位、121-130位、134-146位、150-212位、221-239位、255-276位、289-322位、3四-357位和四-59位JeqIDNo189的第8-27位、68-74位、77-99位、110-116位、124-141位、171-177位、202-217位、221-228位、259-265位、275-290位、293-303位、309-325位、335-343位、345-351位、365-379位、384-394位、406-414位、423-437位、452-465位、478-507位、525-534位、554-560位、611-624位、628-651位、669-682位、742-747位、767-778位、782-792位、804-812位、820-836位、79-231和359-451位；SeqIDNo190的第5-28位、39-45位、56-62位、67-74位、77-99位、110-117位、124-141位、168-176位、200-230位、237-244位、268-279348-362位、370-376495-504位、529-541位、287-299位、304-326位、329-335位、位、420-429位、466-471位、479-489位、位、598-604位、622-630位、637-658位、位、379-384位、390-406位、545-553位、561-577672-680位、682-688位、690-696位、698-709位、712-719位、724-736位、738-746位、759-769位、780-786位、796-804位、813-818位、860-877位、895-904位、981-997位、1000-1014位、1021-1029位、1-162位、206-224位、2M-350位、414-514位和864-938位；SeqIDNo191的第4-11位、19-49位、56-66位、68-101位、109-116位、123-145位、156-165位、177-185位、204-221位、226-234位、242-248位、251-256位、259-265位、282-302位、307-330^,340-349位、355-374位、377-383位、392-400位、422-428位、434-442位、462-474位和266-322位feqIDNo192的第14-43位、45-57位、64-74位、80-87位、106-127位、131-142位、145-161位、173-180位、182-188位、203-210位、213-219位、221-243位、245-2位、304-311位、314-320位、342-348位、3M-365位、372-378位、394-399位、407-431位、436-448位、459-465位、470-477位、484-490位、504-509位、531-537位、590-596位、611-617位、642-647位、723-734位、740-751位、754-762位、764-774位、782-797位、807-812位、824-831位、838-845位、877-885位、892-898位、900-906位、924-935位、940-946位、982-996位、1006-1016位、1033-1043位、1051-1056位、1058-1066位、1094-1108位、1119-11位、1129-1140位、1150-1157位、1167-1174位、1176-1185位、1188-1201位、1209-1216位、1220-1228位、1231-1237位、1243-1248位、1253-1285位、1288-1297位、1299-1307位、1316-1334位、1336-1343位、1350-1359位、1365-1381位、1390-1396位、1412-1420位、1427-1439位、1452-1459位、1477-1484位、1493-1512位、1554-1559位、1570-1578位、1603-1608位、1623-1630位、1654-1659位、1672-1680位、1689-1696位、1705-1711位、1721-1738位、1752-1757位、1773-1780位、1817-1829位、1844-1851位、1856-1863位、1883-1895位、1950-1958位、1974-1990位、172-354位、384-448位、464-644位、648-7位和1357-1370位JeqIDNo193的第8-27位、68-74位、77-99位、110-116位、124-141位、169-176位、201-216位、220-227位、258-264位、274-289位、292-302位、308-324位、334-342位、344-350位、364-372位、377-387位、399-407位、416-429位、445-458位、471-481位、483-500位、518-527位、547-553位、604-617位、621-644位、662-675位、767-778位、809-816位、15-307位、350-448位和496-620位；SeqIDNo194的第4-17位、24-29位、53-59位、62-84位、109-126位、159-164位、189-204位、208-219位、244-249位、274-290位、292-302位、308-324位、334-；342位、344-350位、378-389位、391-397位、401-409位、424-432位、447-460位、470-479位、490-504位、521-529位、538-544位、549-555位、570-577位、583-592位、602-608位、615-630位、635-647位、664-677位、692-698位、722-731位、733-751位、782-790位、793-799位、56-267位、337-似6位和495-601位JeqIDNo195的第12-22位、49-59位、77-89位、111-121位、136-148位、177-186位、207-213位、217-225位、227-253位、259-274位、296-302位、328-333位、343-3M位、374-383位、424-446位、448-457位、468-480位、488-502位、507-522位、544-550位、553-560位、564-572位、587-596位、604-614位、619-625位、629-635位、638-656位、662-676位、680-692位、697-713位、720-738位、779-786位、833-847位、861-869位、880-895位、897-902位、911-917位、946-951位、959-967位、984-990位、992-1004位、1021-1040位、1057-1067位、1073-1080位和381-403位feqIDNo196的第4-10位、26-31位、46-56位、60-66位、70-79位、86-94位、96-102位、109-118位、132-152位、164-187位、193-206位、217-224位和81-149位；SeqIDNo197的第4-21位、26-37位、48-60位、71-82位、109-117位、120-128位、130-136位、142-147位、181-187位、203-211位、216-223位、247-255位、257-284位、316-325位、373-379位、395-400位、423-435位、448-456位、479-489位、512-576位、596-625位、641-678位、680-688位、692-715位和；346-453位JeqIDNo198的第10-16位、25-31位、34-56位、58-69位、71-89位、94-110位、133-176位、186-193位、208-225位、240-250位、259-266位、302-307^,335-341位、376-383位、410-416位和316-407位JeqIDNo199的第1H9位、42_56位、60-75位、82_88位、95-110位、116-126位、132-143位、145-160位、166-172位、184-216位和123-164位；SeqIDNo200的第11-29位、54-63位、110-117位、139-152位、158-166位、172-180位、186-193位、215-236位、240-251位、302-323位、330-335位、340-347位、350-366位、374-381位和252-299位；SeqIDNo201的第18-27位、35-42位、50-56位、67-74位、112-136位、141-153位、163-171位、176-189位、205-213位、225-234位、241-247位、253-258位、269481位、288-298位、306-3位、3洸-3；34位、355-369位、380-387位和沘9-320位feqIDNo202的第7-15位、19-41位、56-72位、91-112位、114-122位、139-147位、163-183位、196-209位、258-280位、326-338位、357-363位、391-403位、406-416位和360-378位；SeqIDNo203的第11-18位、29-41位、43-49位、95-108位、142-194位、204-212位、216-242位、247-256位、264-273位和136-149位；SeqIDNo204的第18-24位、33-40位、65-79位、89-102位、113-119位、130-137位、155-161位、173-179位、183-203位、205-219位、223-231位、245-261位、267-274位、296-306位、311-321位、330-341位、344-363位、369-381位、401-408位、415-427位、437-444位、453-464位、472-478位、484-508位、517-524位、526-532位、543-548位和59-180位；SeqIDNo205的第5-13位、52-65位、67-73位、97-110位、112-119位、134-155位和45-177位JeqIDNo206的第6-位、34-43位、57-67位、75-81位、111-128位、132-147位、155-163位、165-176位、184-194位、208-216位、218-229位、239-252位、271-278位、328-334位、363-376位、381-388位、426-473位、481-488位、492-498位、507-513位、536-546位、564-582位、590-601位、607-623位、148-269位、420-450位和610—648位；SeqIDNo207的第4-12位、20-38位、69-75位、83-88位、123-128位、145-152位、154-161位、183-188位、200-213位、245-250位、266-272位、306-312位、332-339位、357-369位、383-389位、395-402位、437-453位、455-470位、497-503位和1-112位；SeqIDNo208的第35-59位、74-86位、111-117位、122-137位和70-154位；SeqIDNo209的第26-42位、54-61位、65-75位、101-107位、123-130位、137-144位、148-156位、164-172位、177-192位、213-221位、231-258位和157-249位JeqIDNo210的第四_38位、61-67位、77-87位、94-100位、105-111位、118-158位和1-97位；SeqIDNo211的第7-21位、30-48位、51-58位、60-85位、94-123位、134-156位、160-167位、169-183位、186-191位、216-229位、237-251位、257-267位、272-282位、287-298位和220-243位；SeqIDNo212的第6-29位、34-47位、56-65位、69-76位、83-90位、123-134位、143-151位、158-178位、197-203位、217-235位、243-263位、303-309位、320-333位、338-348位、367-373位、387-393位、407-414位、416-427位、441-457位、473-482位、487-499位、501-509位、514-520位、530-535位、577-583位、590-602位、605-612位、622-629位、641-670位、678-690位、37-71位和238-307位；SeqIDNo213的第7-40位、121-132位、148-161位、196-202位、209-215位、221-235位、248-255位、271-280位、288-295位、330-339位、395-409位、414-420位、446-451位、475-487位、556-563位、568-575位、580-586位、588-595位、633-638位、643-648位、652-659位、672-685位、695-700位、710-716位、737-742位、749-754位、761-767位、775-781位、796-806位、823-835位、850-863位、884-890位、892-900位、902-915位、934-941位和406-521位；SeqIDNo214的第9-18位、24-46位、51-58位、67-77位、85-108位、114-126位、129-137位、139-146位、152-165位、173-182位、188-195位、197-204位、217-250位、260-274位、296-313位、343-366位、368-384位、427-434位、437-446位、449-455位、478-484位、492-506位、522-527位、562-591位、599-606位、609-618位、625-631位、645-652位和577-654位feqIDNo215的第13-20位、26-37位、41-53位、56-65位、81-100位、102-114位、118-127位、163-188位、196-202位、231-238位、245-252位、266-285位、293-298位、301-306位和19-78位feqIDNo216的第10-23位、32-42位、54-66位、73-91位、106-113位、118-127位、139-152位、164-173位、198-207位、210-245位、284-300位、313-318位、330-337位、339-346位、354-361位、387-393位、404-426位、429-439位、441-453位、467-473位、479-485位、496-509位、536-544位、551-558位、560-566位、569-574位、578-588位、610-615位、627-635位、649-675位、679-690位、698-716位、722-734位、743-754位、769-780位、782-787位和480-550位；SeqIDNo217的第6-39位、42-50位、60-68位、76-83位、114-129位、147-162位、170-189位、197-205位、217-231位、239-248位、299-305位、338-344位、352-357位、371-377位、380-451位、459-483位、491-499位、507-523位、537-559位、587-613位、625-681位、689-729位、737-781位、785-809位、817-865位、873-881位、889-939位、951-975位、983-1027位、1031-1055位、1063-1071位、1079-1099位、1103-1127位、1151-1185位、1197-1261位、1269-1309位、1317-1333^,1341-1349位、1357-1465位、1469-1513位、1517-1553位、1557-1629位、1637-1669位、1677-1701位、1709-1725位、1733-1795位、1823-1849位、1861-1925位、1933-1973位、1981-2025位、2029-2053位、2061-2109位、2117-2125位、2133-2183位、2195-2219位、2227-2271位、2275-2299位、2307-2315位、292323-2343^,2347-2371位、2395-2429位、2441-2529位、2537-2569位、2577-2601位、2609-2625位、2633-2695位、2699-2737位、2765-2791位、2803-2867位、2889-2913位、2921-2937位、2945-2969位、2977-2985位、2993-3009位、3023-3045位、3073-3099位、3111-3167位、3175-3215位、3223-3267位、3271-3295位、3303-3351位、3359-3367位、3375-3425位、3437-3461位、3469-3513位、3517-3541位、3M9-3557位、3565-3585位、3589-3613位、3637-3671位、3683-3747位、3755-3795位、3803-3819位、3827-3835位、3843-3951位、3955-3999位、4003-4039位、4043-4115位、4123-4143位、4147-4171位、4195-4229位、4241-4305位、4313-4353位、4361-4377位、4385-4393位、4401-4509位、4513-4557位、4561-4597位、4601-4718位、4749-4768位、74-171位、452-559位和2951-3061位feqIDNo218的第16-22位、30-51位、70-111位、117-130位、137-150位、171-178位、180-188位、191-196位和148-181位feqIDNo219的第6-19位、21-46位、50-56位、80-86位、118-126位、167-186位、189-205位、211-242位、244-267位、273-286位、290-297位、307-316位、320-341位和34-60位JeqIDNo220的第5-位、33-43位、48-54位、58-63位、78-83位、113-120位、122-128位、143-152位、157-175位、185-192位、211-225位、227-234位、244-256位、270-281位、284-290位、304-310位、330-337位、348-355位、362-379位、384-394位、429-445位、450-474位、483-490位、511-520位、537-546位、548-5位、561-586位、590-604位、613-629位、149-186位、285-431位和573-659位JeqIDNo221的第546位、49-59位、61-67位、83-91位、102-111位、145-157位、185-192位、267-272位、279-286位、292-298位、306-312位、134-220位、235H位和254-280位；SeqIDNo222的第5-19位、72-79位、83-92位、119-124位、140-145位、160-165位、167-182位、224-232位、240-252位、259-270位、301-310位、313-322位、332-343位、347-367位、384-398位、416-429位、431-446位、454-461位和1-169位；SeqIDNo223的第8-17位、26-31位、56-62位、75-83位、93-103位、125-131位、135-141位、150-194位、205-217位、233-258位、262-268位、281-286位和127-168位JeqIDNo224的第6-12位、69-75位、108-115位、139-159位、176-182位、194-214位和46-161位；SeqIDNo225的第6-13位、18-27位、39-48位、51-59位、66-73位、79-85位、95-101位、109-116位、118-124位、144-164位、166-177位、183-193位、197-204位、215-223位、227-236位、242-249位、252-259位、261-270位、289-301位、318-325位和12-58位；SeqIDNo226的第4-10位、26-32位、48-60位、97-105位、117-132位、138-163位、169-185位、192-214位、219-231位、249-261位、264-270位、292-308位、343-356位、385-392位、398-404位、408-417位、4；35-441位和M-50位JeqIDNo227的第10-40位、42-48位、51-61位、119-1位和1-118位；SeqIDNo2的第5-17位、40-58位、71-83位、103-111位、123-140位、167-177位、188-204位和116-1位JeqIDNo2的第4-9位、11-50位、57-70位、112-123位、127-138位和64-107位；SeqIDNo230的第9-39位、51-67位和1-101位JeqIDNo231的第5-14位、17-25位、28-46位、52-59位、85-93位、99-104位、111-120位、122-131位、140-148位、158-179位、187-197位、204-225位、271-283位、285-293位和139-155位JeqIDNo232的第42-70位、73-90位、92-108位、112-127位、152-164位、166-172位、181-199位、201-210位、219-228位、247-274位、295-302位、322-334位、336-346位、353-358位、396-414位、419-425位、432-438位、462-471位、518-523位、531-536位、561-567位、576-589位、594-612位、620-631位、665-671位、697-710位、718-731位、736-756位、765-771位、784-801位和626-653位JeqIDNo233的第8-28位、41-51位、53-62位、68-74位、79-85位、94-100位、102-108位、114-120位、130-154位、156-162位、175-180位、198-204位、206-213位、281-294位、308-318位、321-339位、362-368位、381-386位、393-399位、407-415位和2-13位JeqIDNo234的第4-39位、48-65位、93-98位、106-112位、116-129位和10-36位；SeqIDNo235的第25-32位、35-50位、66-71位、75-86位、90-96位、123-136位、141-151位、160-179位、190-196位、209-215位、222-228位、235-242位、257-263位、270-280位和209-247位；SeqIDNo236的第5-29位、31-38位、50-57位、62-75位、83-110位、115-132位、168-195位、197-206位、216-242位、249-258位、262469位、333-340位、342-350位、363-368位、376-392位、400-406位、410-421位、423-430位、436-442位、448-454位、460-466位、471-476位、491-496位、511-516位、531-536位、551-556位、571-576位、585-591位、599-605位、27-70位、219-293位、441-504位和512-584位；SeqIDNo237的第4-12位、14-34位、47-75位、83-104位、107-115位、133-140位、148-185位、187-196位、207-212位、224-256位、258-265位、281-287位、289-296位、298-308位、325-333位、345-355位、365-371位、382-395位、424-435位、441-457位、465-472位、483-491位、493-505位、528-534位、536-546位、552-558位、575-584位、589-600位、616-623位和576-591位；SeqIDNo238的第4-76位、78-89位、91-1位、142-148位、151-191位、195-208位、211-223位、226440位、256-277位、279-285位、290-314位、317-323位、358-377位、381-387位、391-396位、398-411位、415-434位、436-446位、454-484位、494-512位、516-523位、538-552位、559-566位、571-577位、579-596位、599-615位、620-627^,635-644位、694-707位、720-734位、737-759位、761-771位和313-329位；SeqIDNo239的第7-38位、44-49位、79-89位、99-108位、117-123位、125-132位、137-146位、178-187位、207-237位、245-255位、322-337位、365-387位、398-408位、445-462位、603-608位、623-628位、644-650位、657-671位、673-679位和111-566位；SeqIDNo240的第6-20位、22-35位、39-45位、58-64位、77-117位、137-144位、158-163位、205-210位、218-2位、2四-236位、239-251位、263-277位、299-307位、323-334位、353-384位、388-396位、399-438位、443-448位、458-463位、467-478位、481-495位、503-509位、511-526位、559-576位、595-600位、612-645位、711-721位、723-738位、744-758位、778-807位和686-720位；SeqIDNo241的第10-33位、35-41位、72-84位、1四-138位、158-163位、203-2位、243-252位、258-264位、279-302位、322-329位、381-386位、401-406位、414-435位和184-385位；SeqIDNo242的第4-9位、19-24位、41-47位、75-85位、105-110位、113-146位和45-62位；SeqIDNo243的第4-25位、52-67位、117-1M位、131-146位、173-180位、182-191位、195-206位、215-221位、229-236位、245-252位、258-279位、286-291位、293-302位、314-320位、327-336位、341-353位、355-361位、383-389位和1-285位feqIDNo244的第14-32位、38-50位、73-84位、93-105位、109-114位和40-70位；SeqIDNo245的第5_26位和22-34位feqIDNo246的第23-位和13-39位JeqIDNo247的第8_14位和21-34位feqIDNo248的第4-13位、20-位、44-50位、59-74位和41-69位feqIDNo249的第4-9位、19-42位、48-59位、71-83位和57-91位JeqIDNo250的第4_14位和10-28位；SeqIDNo251的22-位、32-42位、63-71位、81-111位、149-156位、158-167位、172-180位、182-203位、219-229位和27-49位；SeqIDNo252的第17-27位和23-32位；SeqIDNo253的第18-24位和28-38位；SeqIDNo254的第9_15位和13-27位；SeqIDNo255的第13-22位和18-位JeqIDNo256的第1746位和2-11位feqIDNo257的第4-33位和16-32位；SeqIDNo258的第4-10位、37-43位、54-84位、92-127位和15-62位JeqIDNo259的第4-14位、20-32位、35-60位、69-75位、79-99位、101-109位、116-140位和124-136位；SeqIDNo260的第2-13位；SeqIDNo261的第4-13位、沘-42位和42-57位JeqIDNo262的第4-14位、27-44位和14_；35位JeqIDNo263的第4-12位和1-27位；SeqIDNo264的第4-18位、39-45位、47-74位和35-66位；SeqIDNo265的第8-20位、43-77位和17-36位JeqIDNo266的第4_30位、35-45位、51-57位和35-49位；SeqIDNo267的第4-24位、49-57位和15-34位；SeqIDNo268的第4-22位和8-27位JeqIDNo269的第13-25位、32-59位、66-80位和21-55位JeqIDNo270的第4-10位、24-33位、35-42位、54-65位、72-82位、98-108位和15-30位；SeqIDNo271的第8-19位和17-47位JeqIDNo272的第12-18位、40-46和31-52位JeqIDNo273的第4-20位、35-78位、83-102位、109-122位和74-86位；SeqIDNo274的第7-17位、21-41位、46-63位和2-20位；SeqIDNo275的第30-37位和2-33位；SeqIDNo276的第4-13位、17-25位和1-15位JeqIDNo277的第17-31位、44-51位和20-51位JeqIDNo278的第20-30位和5_23位feqIDNo279的第13_33位、48-71位和92-110位JeqIDNo280的第4-9位、50-69位、76-88位、96-106位、113-118位和12-34位JeqIDNo281的第4-24位和6-26位；SeqIDNo282的第7-26位和14-30位；SeqIDNo283的第9-39位、46-68位、75-82位、84-103位和洸-44位JeqIDNo284的第4_30位、33-107位和58-84位JeqIDNo285的第4-12位和9-51位JeqIDNo286的第12-18位、29-37位和6-37位JeqIDNo沘7的第4-21位、33-52位、64-71位和16-37位feqIDNo288的第9-19位和2-30位；SeqIDNo245的第20-37位；SeqIDNo246的第8-27位；SeqIDNo247的第10-27位JeqIDNo248的第42-59位和52-69位JeqIDNo249的第63-80位和74-91位；SeqIDNo250的第11-28位；SeqIDNo251的第28-49位；SeqIDNo252的第15-32位JeqIDNo253的第4-20位JeqIDNo254的第10-27位JeqIDNo255的第17-；34位JeqIDNo256的第1-18位feqIDNo257的第16-33位JeqIDNo258的第16-36位、30-49位和43-62位JeqIDNo259的第122-139位JeqIDNo260的1-18位JeqIDNo261的第41-58位JeqIDNo262的第15_；35位JeqIDNo263的第2-27位feqIDNo265的第18-36位feqIDNo266的第；34_51位feqIDNo268的第9-27位；SeqIDNo269的第22-47位；SeqIDNo271的第18-36位和29-47位；SeqIDNo272的第32-52位feqIDNo273的第72-89位JeqIDNo274的第3-20位；SeqIDNo275的第3-21位和15-33位feqIDNo276的第1-18位JeqIDNo278的第6-23位JeqIDNo279的第93-110位JeqIDNo280的第13_；34位JeqIDNo281的第7-26位和9-位JeqIDNo282的第16-33位JeqIDNo283的第27-44位JeqIDNo284的第67-84位JeqIDNo285的第10-33位和洸_50位feqIDNo286的第7_25位和19-37位JeqIDNo287的第17-37位feqIDNo288的第3-20位和13-30位；SeqIDNo145的第62-80位和75-93位feqIDNo147的第92-108位JeqIDNo148的第32332-349位、177-200位和1755-1777位；SeqIDNo149的第109-133位、149-174位、260-285位和460-485位；SeqIDNo150的第26-47位和42-64位；SeqIDNo151的第22-41位、35-54位、115-130位、306-325位、401-420位和454-478位JeqIDNo155的第22-45位；SeqIDNo160的第156-174位、924-940位、1485-1496位、1447-1462位和1483-1498位JeqIDNo161的第457-475位JeqIDNo163的第302-325位JeqIDNo164的第沘8_305位JeqIDNo165的第M4-266位和洸0_282位JeqIDNo166的第204-225位和220-241位JeqIDNo167的第324-345位、340-361位、356-377位、372-393位和388-408位；SeqIDNo168的第39-64位JeqIDNo169的第54-76位和70-92位；SeqIDNo170的第1227-1247位、1539-1559位、1554-1574位、1569-1589位、1584-1604位、1242-1262位、1272-1292位、1287-1308位、1456-1477位、1472-1494位、1488-1510位和1505-1526位feqIDNo172的第；351_368位JeqIDNo173的第179-200位、195-216位、211-232位、227-248位和243-263位；SeqIDNo174的第13-37位；SeqIDNo175的第208-224位；SeqIDNo177的第42-64位、59-81位、304-328位、323-348位、465-489位、968-992位、1399-1418位、1412-1431位和2092-2111位JeqIDNo178的第1528-1547位和1541-1560位；SeqIDNo179的第184-200位、367-388位、382-403位、409-4位、425-444位和438-457位feqIDNo180的第27-50位和45-67位feqIDNo183的第114-131位和405-419位；SeqIDNo184的第113_1；34位、1四_150位、145-166位、161-182位和177-198位JeqIDNo186的第495-515位JeqIDNo187的第346-358位JeqIDNo190的第208-2位JeqIDNo192的第178-194位、202-223位、217-238位、288-308位和1355-1372位；SeqIDNo194的第57-78位；SeqIDNo197的第347-369位、364-386位、381-403位、398-420位、415-437位和432-452位；SeqIDNo198的第；347-372位JeqIDNo199的第147-163位feqIDNo200的第洸3-288位；SeqIDNo202的第361-377位feqIDNo204的第82-104位、99-121位、116-138位、133-155位和150-171位JeqIDNo205的第110-130位和125-145位JeqIDNo206的第613-631位、6洸-644位和196-213位；SeqIDNo208的第78-100位、95-117位、112-134位和1四-151位JeqIDNo209的第158-180位、175-197位、192-214位、209-231位和2洸_248位JeqIDNo210的第30-50位、45-65位和60-79位feqIDNo213的第431-455位和450-474位；SeqIDNo214的第579-601位、596-618位、613-635位和630-653位；SeqIDNo217的第920-927位、98-119位、114_1；35位、130-151位、146-167和162-182位；SeqIDNo219的第36-59位；SeqIDNo220的第194-216位和381-404位JeqIDNo221的第236-251位和255-279位JeqIDNo222的第80-100位和141-164位；SeqIDNo223的第128-154位；SeqIDNo224的第82-100位、95-116位和111-134位JeqIDNo227的第55-76位、71-92位和87-110位feqIDNo2的第91-106位；SeqIDNo230的第74-96位JeqIDNo231的第140-157位feqIDNo233的第4-13位；SeqIDNo236的第41-65位和499-523位JeqIDNo239的第122-146位、191-215位、288-313位、445-469位和511_5；35位JeqIDNo241的第347-368位feqIDNo242的第46-61位feqIDNo243的第15-37位、32-57位、101-121位、115_1；35位、138-158位、152-172位、220-242位和236-258位。本發(fā)明還提供了產(chǎn)生按照本發(fā)明的肺炎鏈球菌超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的方法，所述方法包括在適當(dāng)?shù)谋磉_(dá)系統(tǒng)中表達(dá)按照本發(fā)明的一個(gè)或多個(gè)核酸分子。此外，本發(fā)明提供了用于產(chǎn)生表達(dá)按照本發(fā)明的肺炎鏈球菌超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的細(xì)胞的方法，所述方法包括用按照本發(fā)明的載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞。依照本發(fā)明，提供了含有本發(fā)明中所定義的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段或本發(fā)明中所定義的核酸分子的藥物組合物，尤其是疫苗。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，藥物組合物還包含免疫刺激物質(zhì)，優(yōu)選選自包含下列各項(xiàng)的組中聚陽離子聚合物，尤其是聚陽離子肽；免疫刺激性脫氧核苷酸(ODNs)；含至少兩個(gè)賴氨酸-亮氨酸-賴氨酸基序的肽，尤其是KLKLLLLLKLK；神經(jīng)活性化合物，尤其是人生長(zhǎng)激素；清蛋白，弗氏完全或不完全佐劑或它們的組合。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，免疫刺激物質(zhì)是聚陽離子聚合物與免疫刺激性脫氧核苷酸的組合或含至少兩個(gè)賴氨酸-亮氨酸-賴氨酸基序的肽和免疫刺激性脫氧核苷酸的組I=IO在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，聚陽離子聚合物是聚陽離子肽，尤其是多精氨酸。依照本發(fā)明，提供了按照本發(fā)明的核酸分子或按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段在制備藥物制劑，尤其是制備針對(duì)肺炎鏈球菌感染的疫苗中的應(yīng)用。同此還提供了至少與按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的選擇性部分結(jié)合的抗體或至少其有效部分。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體是單克隆抗體。在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體的有效部分包含F(xiàn)ab片段。在另一優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體是嵌合抗體。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體是人源化抗體。本發(fā)明還提供了生產(chǎn)按照本發(fā)明的抗體的雜交瘤細(xì)胞系。此外，本發(fā)明提供了生產(chǎn)按照本發(fā)明的抗體的方法，其特征在于以下步驟通過對(duì)所述動(dòng)物施用按照本發(fā)明中所定義的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段在非人動(dòng)物體內(nèi)引發(fā)免疫應(yīng)答，·從所述動(dòng)物中去除含抗體的體液，并通過將所述含抗體的體液進(jìn)行進(jìn)一步的純化步驟生產(chǎn)該抗體。因此，本發(fā)明還提供了生產(chǎn)按照本發(fā)明的抗體的方法，其特征在于以下步驟通過對(duì)所述動(dòng)物施用按照本發(fā)明中所定義的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段在非人動(dòng)物體內(nèi)引發(fā)免疫應(yīng)答，·從所述動(dòng)物體內(nèi)取出脾臟或脾細(xì)胞，·產(chǎn)生所述脾臟或脾細(xì)胞的雜交瘤細(xì)胞，·選擇并克隆對(duì)所述超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段特異的雜交瘤細(xì)胞，·通過培養(yǎng)所述被克隆的雜交瘤細(xì)胞和任選進(jìn)一步的純化步驟生產(chǎn)抗體。依照以上方法提供或生產(chǎn)的抗體可用于制備治療或預(yù)防肺炎鏈球菌感染的藥物。依照另一方面，本發(fā)明提供了與按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段結(jié)合的拮抗劑。所述能與按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段結(jié)合的拮抗劑可用包含以下步驟的方法進(jìn)行鑒定a)在能提供響應(yīng)候選拮抗劑與所述超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的結(jié)合的可檢測(cè)信號(hào)的組分的存在下，將按照本發(fā)明的分離的或固定的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段與候選的拮抗劑在允許所述候選拮抗劑結(jié)合所述超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的條件下接觸，并b)檢測(cè)響應(yīng)拮抗劑與超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段結(jié)合所產(chǎn)生的信號(hào)的存在或不存在。能降低或抑制按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段與其相互作用配偶體之間的相互作用活性的拮抗劑可通過包含以下步驟的方法進(jìn)行鑒定a)提供按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其超免疫片段，b)提供針對(duì)所述超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的相互作用配偶體，尤其是按照本發(fā)明的抗體，c)使所述的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段與所述的相互作用配偶體相互作用以形成相互作用復(fù)合物，d)提供候選拮抗劑，e)允許候選拮抗劑和所述的相互作用復(fù)合物之間發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng)，f)確定候選拮抗劑是否抑制或降低了超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段與相互作用配偶體之間的相互作用活性。按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段可用于分離和/或純化和/或鑒定所述超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的相互作用配偶體。本發(fā)明還提供了體外診斷涉及按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段表達(dá)的疾病的方法，所述方法包括測(cè)定編碼所述的按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的核酸序列的存在或按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的存在。本發(fā)明還提供了體外診斷細(xì)菌感染，尤其是肺炎鏈球菌感染的方法，所述方法包括分析編碼所述的按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的核酸序列的存在或按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的存在。此外，本發(fā)明提供了按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段在生產(chǎn)結(jié)合所述超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的肽中的應(yīng)用，其中的肽是抗促成素(anticaline)。本發(fā)明還提供了按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段在制備功能性核酸中的應(yīng)用，其中的功能性核酸選自包含適體(aptamer)和spiegelmer的組中。按照本發(fā)明的核酸分子也可用于制備功能性核糖核酸，其中的功能性核糖核酸選自包含核酶、反義核酸和siRNA的組中。本發(fā)明有利地提供了一套有效、相關(guān)且全面的分離的核酸分子以及它們編碼的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段，使用來自多個(gè)人血漿庫的抗體制劑和來自肺炎鏈球菌基因組的表面表達(dá)文庫將它們從肺炎鏈球菌中鑒定出來。因此，本發(fā)明滿足了對(duì)在用于制備抗體和用于鑒定有效針對(duì)肺炎鏈球菌感染的化合物的程序中有用的的肺炎鏈球菌抗原、疫苗、診斷劑和產(chǎn)品的廣泛需求。有效的疫苗應(yīng)由蛋白質(zhì)或多肽組成，它們可由所有菌株表達(dá)并能誘導(dǎo)高親和力的、豐富的抗肺炎鏈球菌細(xì)胞表面組分的抗體。所述的抗體應(yīng)是用于調(diào)理作用的IgGl和/或IgG3，以及用于中和粘附和毒素作用的任何IgG亞型和IgA?；瘜W(xué)定義的疫苗一定確實(shí)優(yōu)于全細(xì)胞疫苗(減毒的或滅活的)，因?yàn)榭沙ヅc人組織交叉反應(yīng)或抑制調(diào)理作用的肺炎鏈球菌組分，而且可選擇誘發(fā)保護(hù)性抗體和/或保護(hù)性免疫反應(yīng)的個(gè)別蛋白質(zhì)。已應(yīng)用于本發(fā)明的方法是以肺炎球菌蛋白質(zhì)或肽與人血清中存在抗體之間的相互作用為基礎(chǔ)的。由人免疫系統(tǒng)產(chǎn)生且存在于人血清中的針對(duì)肺炎鏈球菌的抗體是抗原性蛋白質(zhì)體內(nèi)表達(dá)以及它們的免疫原性的指征。此外，使用預(yù)選擇的血清庫通過細(xì)菌表面展示表達(dá)文庫鑒定的抗原性蛋白質(zhì)在用單獨(dú)選擇或產(chǎn)生的血清進(jìn)行的第二輪和第三輪篩選中被加工。由此本發(fā)明提供了一套有效的、相關(guān)的、全面的肺炎球菌抗原作為藥物組合物，尤其是預(yù)防肺炎鏈球菌感染的疫苗。在用于鑒定按照本發(fā)明的一組全面的抗原的抗原鑒定程序中，用數(shù)個(gè)血清庫或血漿組分或含其它集合抗體的體液(抗體庫)篩選了至少兩個(gè)不同的細(xì)菌表面表達(dá)文庫?？贵w庫來自血清樣品集合，已針對(duì)肺炎鏈球菌的抗原性化合物對(duì)所述集合進(jìn)行了檢測(cè)，諸如全細(xì)胞提取物和培養(yǎng)物上清蛋白質(zhì)等。優(yōu)選地，使用兩種不同的血清集合1.用非常穩(wěn)定的抗體所有組分(repertoire)正常成人，臨床健康人群，他們是非帶菌者且克服了先前的遭遇或目前正攜帶肺炎鏈球菌但無急性疾病和癥狀的人群，2.由于致病生物體的存在而具有急性誘發(fā)抗體，患者具有不同表現(xiàn)的急性疾病(例如，肺炎鏈球菌咽炎、肺炎、菌血癥、腹膜炎、腦膜炎和膿毒癥)。血清必須與多個(gè)肺炎球菌特異性抗原反應(yīng)，以便被認(rèn)為是超免疫的和因此與用于本發(fā)明的篩選方法相關(guān)。用于本發(fā)明中時(shí)，表達(dá)文庫應(yīng)可以表達(dá)所有潛在的抗原，例如，來自肺炎鏈球菌所有分泌性蛋白質(zhì)和表面蛋白質(zhì)的抗原。對(duì)于在細(xì)菌宿主膜上的兩個(gè)選定外膜蛋白(LamB和!^huA)，細(xì)菌宿主的重組文庫將代表細(xì)菌表面展示文庫，所述細(xì)菌宿主的重組文庫展示一組(全部)的肺炎鏈球菌的表達(dá)的肽序列{Georgiou,G.,1997}；{Etz,H.等，2001}。使用重組表達(dá)文庫的優(yōu)勢(shì)之一在于鑒定的超免疫血清反應(yīng)性抗原可通過表達(dá)被篩選和選擇的克隆的編碼序列即刻產(chǎn)生，而無需另外的重組DNA技術(shù)或克隆步驟，所述篩選和選擇的克隆表達(dá)超免疫血清反應(yīng)性抗原。用一輪或多輪另外的篩選進(jìn)一步分析根據(jù)本發(fā)明所述程序鑒定的一組全面的抗原。因此利用了針對(duì)選定的被鑒定為具免疫原性的肽的單個(gè)抗體制劑或多個(gè)抗體。依照優(yōu)選的實(shí)施方案，用于第二輪篩選的單獨(dú)抗體制劑來自肺炎鏈球菌急性感染患者，尤其是顯示出抗體效價(jià)高于一定最低水平的患者，例如抗體效價(jià)高于被測(cè)試人(患者或健康個(gè)體)血清的80個(gè)百分點(diǎn)，優(yōu)選高于90個(gè)百分點(diǎn)，尤其是高于95個(gè)百分點(diǎn)。在第二輪篩選中應(yīng)用所述的高效價(jià)單獨(dú)抗體制劑可以高選擇性地鑒定來自肺炎鏈球菌的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段。在全面的篩選步驟之后，如果不能表達(dá)于原核表達(dá)系統(tǒng)中則可表達(dá)為重組蛋白或體外翻譯產(chǎn)物的選定抗原性蛋白或者已被鑒定的抗原性肽(合成產(chǎn)生)，在第二輪篩選中用巨大的人血清集合(最小150健康和患者血清)通過一系列ELISA和蛋白質(zhì)印跡測(cè)定進(jìn)行檢測(cè)評(píng)估其免疫原性。重要的是單獨(dú)的抗體制劑(也可以是選定的血清)可以從來自第一輪的所有具備希望的候選者篩選鑒定所有超免疫血清反應(yīng)性抗原的最有潛力的候選者。因此，在第二輪篩選中應(yīng)優(yōu)選至少10種單獨(dú)的抗體制劑(即，來自感染選定病原體的至少10名不同個(gè)體的抗體制劑(例如血清))用于鑒定這些抗原。當(dāng)然，還有可能利用少于10種的單獨(dú)制劑，不過，利用少數(shù)單獨(dú)抗體制劑得到的步驟的選擇性可能不是最佳的。另一方面，如果給定的超免疫血清反應(yīng)性抗原(或其抗原性片段)被至少10種單獨(dú)的抗體制劑所識(shí)別，優(yōu)選至少30種，尤其是至少50種單獨(dú)的抗體制劑識(shí)別，超免疫血清反應(yīng)性抗原鑒定的選擇性對(duì)于進(jìn)行正確的鑒定而言也已足夠。當(dāng)然，超免疫血清反應(yīng)性可用盡可能多的單獨(dú)制劑進(jìn)行檢測(cè)(例如，多于100或甚至多于1000)。因此，按照本發(fā)明方法的超免疫血清反應(yīng)性抗體制劑的相關(guān)部分應(yīng)優(yōu)選至少10種，更優(yōu)選至少30種，尤其是至少50種單獨(dú)的抗體制劑。備選地(或聯(lián)合的)超免疫血清反應(yīng)性抗原還可用第二輪篩選中所用所有單獨(dú)抗體制劑的至少20%、優(yōu)選至少30%、尤其是至少40%進(jìn)行鑒定。依照本發(fā)明的優(yōu)選的實(shí)施方案，從其中制備出用于第二輪篩選的單獨(dú)抗體制劑的血清(或自身被用作抗體制劑)是根據(jù)其針對(duì)肺炎鏈球菌的效價(jià)(例如，針對(duì)這種病原體的制劑，諸如裂解物、細(xì)胞壁組分和重組蛋白)進(jìn)行選擇的。優(yōu)選地，當(dāng)整個(gè)生物體(總裂解物或全細(xì)胞)被用作ELISA中的抗原時(shí)，選擇總IgA效價(jià)高于2000U的、尤其是高于4000U的和/或IgG效價(jià)高于5000U、尤其是高于12000U的那些生物體(U=單位，在給定稀釋度下的OD4tl5nm讀數(shù)計(jì)算而得)。人免疫系統(tǒng)所產(chǎn)生且存在于人血清中的針對(duì)鏈球菌的抗體是抗原性蛋白質(zhì)體內(nèi)表達(dá)及其免疫原性的指征。血清抗體對(duì)線性表位的識(shí)別可能是以短到4-5個(gè)氨基酸長(zhǎng)的序列為基礎(chǔ)的。當(dāng)然這并不一定意味著這些短肽能在體內(nèi)產(chǎn)生所述的給定抗體。為此進(jìn)一步在動(dòng)物內(nèi)(主要是在小鼠內(nèi))檢測(cè)所限定表位、多肽和蛋白質(zhì)在體內(nèi)誘發(fā)針對(duì)選定蛋白質(zhì)的抗體的能力。優(yōu)選的抗原定位于細(xì)胞表面或被分泌且因而易于到達(dá)細(xì)胞外。預(yù)期將抗細(xì)胞壁蛋白質(zhì)的抗體用于多個(gè)目的抑制粘附、干擾營(yíng)養(yǎng)獲得、抑制免疫逃避以促進(jìn)吞噬作用(Hornef,M等)。針對(duì)被分泌蛋白質(zhì)的抗體在對(duì)其毒素或毒性組分功能的中和作用中是有利的。還已知的是細(xì)菌通過分泌蛋白質(zhì)相互交流。中和針對(duì)這些蛋白質(zhì)的抗體可阻斷鏈球菌物種之間或之內(nèi)的生長(zhǎng)促進(jìn)通訊。證實(shí)了生物信息分析(信號(hào)序列、細(xì)胞壁定位信號(hào)、跨膜結(jié)構(gòu)域)對(duì)評(píng)估細(xì)胞表面定位或分泌作用非常有用。實(shí)驗(yàn)方法包括分離具有相應(yīng)表位的抗體和來自人血清的蛋白質(zhì)，并在小鼠中產(chǎn)生針對(duì)通過細(xì)菌表面展示篩選所選定的(多)肽的免疫血清。然后將這些血清作為以下檢測(cè)的試劑用于第三輪篩選中在不同條件下生長(zhǎng)的肺炎鏈球菌的細(xì)胞表面染色(FACS或顯微鏡觀察)，測(cè)定中和能力(毒素、粘附)以及促進(jìn)調(diào)理作用和胞噬作用(體外吞噬作用檢測(cè))。為此目的，細(xì)菌大腸桿菌克隆被直接注射入小鼠中，采集免疫血清并在相關(guān)的體外試驗(yàn)中檢測(cè)功能性的調(diào)理或中和抗體?；蛘?，使用肽或蛋白質(zhì)作為底物，可以從人或小鼠血清中純化特異性抗體。宿主針對(duì)肺炎鏈球菌的防衛(wèi)性主要依賴于調(diào)理吞噬殺傷作用機(jī)制。通過接種疫苗誘發(fā)調(diào)理型和中和型的高親和力抗體可幫助先天的免疫系統(tǒng)清除細(xì)菌和毒素。這使得按照本發(fā)明的方法成為鑒定肺炎球菌抗原性蛋白質(zhì)的最適工具。皮膚和黏膜是抗鏈球菌入侵的強(qiáng)大屏障。不過，一旦皮膚或黏膜破裂，非適應(yīng)性的細(xì)胞防衛(wèi)第一道防線通過補(bǔ)體和巨噬細(xì)胞、尤其是多形核白細(xì)胞(PMNs)開始聯(lián)合作用。可以認(rèn)為這些細(xì)胞是清除入侵細(xì)菌的基石。由于肺炎鏈球菌起初是胞外病原體，所以主要的抗鏈球菌適應(yīng)性反應(yīng)來自免疫系統(tǒng)的體液防衛(wèi)裝備且通過三種主要的機(jī)制介導(dǎo)調(diào)理作用的促進(jìn)、毒素中和作用和粘附的抑制?，F(xiàn)認(rèn)為調(diào)理作用尤為重要，因?yàn)樗怯行У耐淌勺饔盟枰?。為了進(jìn)行有效的調(diào)理，微生物的表面必須用抗體和補(bǔ)體因子包被以便PMNs通過受體識(shí)別IgG分子的Fc片段或活化的C3b。經(jīng)調(diào)理作用后，鏈球菌被吞噬并處死。結(jié)合細(xì)菌細(xì)胞表面特異性抗原的抗體作為配體用于附著PMNs并促進(jìn)胞噬作用。預(yù)期與粘附素和其它細(xì)胞表面蛋白結(jié)合的非常相似的抗體可中和粘附作用并預(yù)防建群。本發(fā)明所提供的抗原的選擇因此非常適于鑒定在動(dòng)物模型或人中導(dǎo)致針對(duì)感染的保護(hù)的那些抗原。依照本文所用的抗原鑒定方法，特別是如下所述，本發(fā)明可令人驚訝的提供肺炎鏈球菌的一套全面的新核酸和新的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段。根據(jù)某一方面，本發(fā)明特別涉及編碼超免疫血清反應(yīng)性抗原且具有序列表kqIDNo:1-144,289-303中所列出序列的核苷酸序列以及序列表^^IDNo145-288和304-318所列出的代表超免疫血清反應(yīng)性抗原的相應(yīng)編碼氨基酸序列。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，提供的核酸分子其全長(zhǎng)展示出與^^IDNo1，101-144所列核苷酸序列具有70%的同一性。最高度優(yōu)選的核酸包含了全長(zhǎng)與kqIDNo1,101-144所列的核酸分子具有至少80%或至少85%同一性的區(qū)域。在這點(diǎn)上，特別優(yōu)選全長(zhǎng)與上述序列具有至少90%、91%、92%、93%、94%、95%或96%同一性的核酸分子。而且，高度優(yōu)選至少具有97%同一性的那些核酸分子，特別高度優(yōu)選至少98%和至少99%的同一性，更優(yōu)選至少99%或99.5%，特別優(yōu)選100%的同一性的那些。此外，在這方面優(yōu)選的實(shí)施方案是編碼超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段(多肽)的核酸，所述的超免疫血清反應(yīng)性抗原或片段(多肽)保持與由序列^^IDNo1，101-144所列的所述核酸編碼的成熟多肽基本上相同的生物學(xué)功能或活性。正如本領(lǐng)域已知且此處所用的，如通過比較這些序列確定的，同一性是兩個(gè)或多個(gè)多肽序列或者兩個(gè)或多個(gè)多核苷酸序列之間的關(guān)系。在本領(lǐng)域內(nèi)，同一性也意味著多肽或多核苷酸序列之間的序列相關(guān)程度，情形可能是通過在所述序列行與行之間進(jìn)行比對(duì)確定的?？扇菀椎赜?jì)算同一性。雖然存在許多方法可以檢測(cè)兩個(gè)多核苷酸或兩個(gè)多肽序列之間的同一性，但此術(shù)語對(duì)技術(shù)熟練人員而言是眾所周知的(如，SequenceAnalysisinMolecularBiology,vonHeinje,G.，AcademicPress，1987)。優(yōu)選的測(cè)定同一性的方法是對(duì)其進(jìn)行設(shè)計(jì)以可以給出待測(cè)序列之間最大的匹配程度。將確定同一性的方法編成了計(jì)算機(jī)程序。測(cè)定兩個(gè)序列之間同一性的優(yōu)選計(jì)算機(jī)程序法包括，但不局限于，GCG軟件包{Devereux,J.等，1984}、BLASTP、BLASTN禾口FASTA{Altschul，S.等，1990}。依照本發(fā)明的另一方面，提供了展示出與kqIDNo2_6、8、10-16、18_23、25_31、34、36、38-42、44、47-48、51、53、55-62、64、67、71-76、78-79、81-94、96-100所列出的核酸序列具有至少96%同一性的核酸分子。依照本發(fā)明的另一方面，提供了與kqIDNo9、17、對(duì)、32、37、43、52、54、65_66、70,80所列出的核酸序列相同的核酸分子。按照本發(fā)明的核酸分子可作為與上文所述第一個(gè)備選核酸至少基本上互補(bǔ)的第二個(gè)備選的核酸分子。用于此處時(shí)，互補(bǔ)意味著核酸鏈通過Watson-Crick堿基配對(duì)原則與第二條核酸鏈的堿基配對(duì)?；旧匣パa(bǔ)用于此處時(shí)意味著堿基配對(duì)并非存在于各自鏈的所38有堿基之間，而是剩余一定數(shù)目或百分比的不配對(duì)堿基或錯(cuò)配堿基。正確配對(duì)的堿基百分率優(yōu)選至少70%，更優(yōu)選80%，還更優(yōu)選90%，最優(yōu)選高于90%的任一百分率。應(yīng)提及的是認(rèn)為70%比例的堿基匹配時(shí)是同源的且認(rèn)為具此程度匹配堿基的雜交是嚴(yán)緊的。此類嚴(yán)CurrentProtocolsinMolecularBiology(JohnWileyandSons,he.，1987)。更具體而言，雜交條件可以如下·例如，在5XSSPE、5XDenhardt，s試劑、0.1%SDS、100g/mL剪切DNA中于68°C進(jìn)行雜交在0.2XSSC、0.1%SDS中于42°C進(jìn)行中度嚴(yán)緊洗滌在0.1XSSC、0.1%SDS于68°C進(jìn)行高嚴(yán)緊性洗滌。GC含量為50%的基因組DNA的Tm近似96°C。相對(duì)于1%的錯(cuò)配而言，Tm下降約1°C。此外，本文所述的任何另外的雜交條件原則上也是適用的。當(dāng)然，編碼與本發(fā)明所鑒定分子相同的多肽分子的所有核酸序列分子都包含在給定編碼序列的任何內(nèi)容內(nèi)，因?yàn)榭梢詫⑦z傳密碼的簡(jiǎn)并性直接應(yīng)用于明確測(cè)定的且編碼給定多肽分子的所有可能性核酸分子，即使所述的簡(jiǎn)并核酸分子的數(shù)目可能是高的也是如此。這還可適用于給定多肽的片段，只要該片段編碼的多肽適用于疫苗接種即可，例如作為主動(dòng)或被動(dòng)疫苗。按照本發(fā)明的核酸分子可作為第三個(gè)備選的核酸分子，它包含如上所述的依照本發(fā)明的核酸分子的的第一和第二備選核酸分子的一段至少15個(gè)堿基的序列。優(yōu)選地，所述堿基形成連續(xù)的堿基序列。不過，由許多堿基分隔開的兩個(gè)或多個(gè)部分組成的序列也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。這種核酸可以優(yōu)選地由來自此處公開的序列的至少20個(gè)，甚至更優(yōu)選的至少30個(gè)，尤其地至少50個(gè)的連續(xù)堿基組成。可以根據(jù)計(jì)劃了的應(yīng)用領(lǐng)域(例如，作為(PCR)引物、探針、捕獲分子(例如在(DNA)芯片上)，等)，容易地對(duì)適當(dāng)長(zhǎng)度進(jìn)行優(yōu)化。優(yōu)選的核酸分子包含一個(gè)或多個(gè)預(yù)測(cè)的免疫原性的氨基酸序列的至少連續(xù)15個(gè)堿基部分，所述預(yù)測(cè)的免疫原性的氨基酸序列是在表1和2中列出的序列，尤其是具有超過10分，優(yōu)選地，超過20分，尤其地超過25分的表2中的序列。特別優(yōu)選的是包含在本申請(qǐng)的序列方案中的任何序列的DNA序列中的連續(xù)部分的核酸，所述連續(xù)部分與公開的肺炎鏈球菌菌株TIGR4的基因組({Tettelin，H.等，2001}；GenBank登錄號(hào)AE005672)和/或任何其它公開的肺炎鏈球菌基因組序列或其部分，特別是菌株R6({Hoskins，J.等.，2001}；GenBank登錄AE007317)相比，其顯示1個(gè)或更多，優(yōu)選地多于2個(gè)，尤其多于5個(gè)的不相同核酸殘基。特別優(yōu)選的不相同核酸殘基是導(dǎo)致不相同氨基酸殘基的殘基。優(yōu)選地，與上述公開的肺炎鏈球菌對(duì)應(yīng)物相比，核酸序列編碼具有至少1個(gè)，優(yōu)選地至少2個(gè)，優(yōu)選地至少3個(gè)不同氨基酸殘基的多肽。還優(yōu)選這種分離的多肽，其是此處，例如在序列表中所述的具有至少6個(gè)、7個(gè)或8個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì)的片段(或整個(gè)蛋白質(zhì))，并且可以被這些核酸編碼。按照本發(fā)明的核酸分子也可用作第四個(gè)備選的核酸分子，它在嚴(yán)緊雜交條件下與符合上述第一、第二和第三備選方案的任一本發(fā)明核酸分子退火。嚴(yán)緊雜交條件通常是本文所述的條件。最后，按照本發(fā)明的核酸分子可用作第五個(gè)備選的核酸分子，若非遺傳密碼的簡(jiǎn)并性，與符合上述第一、第二、第三和第四備選方案的任一本發(fā)明核酸分子的任一核酸分子雜交。此類核酸分子是指優(yōu)選地按照本發(fā)明的核酸編碼按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的這一事實(shí)。此類核酸分子可特別用于檢測(cè)按照本發(fā)明的核酸分子并從而診斷單獨(dú)的微生物諸如肺炎鏈球菌以及涉及此類微生物的任何疾病或疾病狀況。優(yōu)選地，雜交可在與上述第四個(gè)備選方案相關(guān)的所述嚴(yán)緊條件下發(fā)生或完成。用于本文時(shí)，核酸分子通常指任何核糖核酸分子或脫氧核糖核酸分子，它們可以是未修飾的RNA或DNA或修飾過的RNA或DNA。因此，例如，本文所用的核酸分子尤其是指單鏈和雙鏈DNA、作為單鏈和雙鏈RNA混合物的DNA以及作為單鏈和雙鏈區(qū)域混合物的RNA,含有DNA和RNA的雜交分子，所述雜交分子可以是單鏈或更典型地是雙鏈或三鏈的，或單鏈和雙鏈區(qū)域的混合物。此外，用于本文時(shí)，核酸分子涉及包含RNA或DNA或兼有RNA和DNA二者的三鏈區(qū)域。在這種區(qū)域內(nèi)的鏈可能來自同一分子或來自不同的分子。這些區(qū)域可包含所有的一個(gè)或多個(gè)分子，但更通常是只涉及某些分子的一個(gè)區(qū)域。三螺旋區(qū)域的分子之一常常是寡核苷酸。用于本文時(shí)，術(shù)語核酸分子包括含有一個(gè)或多個(gè)修飾堿基的上述DNA或RNA。因此，由于穩(wěn)定性或其它原因而其主鏈被修飾的DNA或RNA是如同本文提及術(shù)語時(shí)所指的“核酸分子”。此外，含稀有堿基諸如肌苷，或修飾的堿基，諸如三苯甲基化堿基的DNAs或RNAs是該術(shù)語用于本文時(shí)所指的核酸分子，它們只是其中的兩個(gè)例子。應(yīng)該理解的是為了達(dá)到許多本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的有益的目的而對(duì)DNA和RNA進(jìn)行了多種類型的修飾。術(shù)語核酸分子用于本文時(shí)包含化學(xué)、酶促或代謝修飾形式的核酸分子以及病毒和細(xì)胞的DNA和RNA特性的化學(xué)形式，其中包括簡(jiǎn)單和復(fù)雜細(xì)胞。術(shù)語核酸分子還包含常常稱為寡核苷酸的短核酸分子。“多核苷酸”和“核酸”或“核酸分子”在此常常交換使用。本發(fā)明中所提供的核酸分子還涵蓋許多單獨(dú)的片段，長(zhǎng)于和短于肺炎鏈球菌編碼區(qū)序列表中所列出的核酸分子序列，它們可通過標(biāo)準(zhǔn)的克隆方法產(chǎn)生。為了達(dá)到獨(dú)特性，片段必須有足夠長(zhǎng)度以將其與其它已知的核酸序列區(qū)分開來，通過將任何選定的肺炎鏈球菌片段與諸如GenBank等計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)庫中的核苷酸序列進(jìn)行比較可最方便地進(jìn)行確定。此外，可以對(duì)本發(fā)明所涵蓋的核酸分子和多肽進(jìn)行修飾。例如，可以進(jìn)行不會(huì)影響核酸所編碼的多肽的核苷酸替代，因此編碼超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的任何核酸分子都包含在本發(fā)明范圍內(nèi)。而且，利用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)諸如標(biāo)準(zhǔn)的克隆技術(shù)，可以將編碼本發(fā)明所提供的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的任何核酸分子與任何所需的調(diào)節(jié)序列進(jìn)行功能型連接以產(chǎn)生融合蛋白，所述調(diào)節(jié)序列無論是肺炎鏈球菌調(diào)節(jié)序列或異源的調(diào)節(jié)序列，異源前導(dǎo)序列、異源標(biāo)記序列或異源編碼序列。本發(fā)明的核酸分子可以是通過克隆獲得或通過化學(xué)合成技術(shù)產(chǎn)生或二者聯(lián)合方法獲得的RNA形式諸如mRNA或cRNA或DNA形式，其包括例如cDNA和基因組DNA。所述DNA可以是三鏈、雙鏈或單鏈的。單鏈DNA可以是編碼鏈，也稱為有義鏈，或者可以是非編碼鏈，也稱為反義鏈。本發(fā)明還涉及本文上述核酸分子的變體，它們編碼具有序列表中所列出的推斷肺炎鏈球菌的氨基酸序列的超免疫血清反應(yīng)性抗原和其片段的片段、類似物及衍生物。核酸分子變體可以是天然存在的變體，諸如天然存在的等位基因變體，或者其可以是非天然存在的變體。通過誘變技術(shù)，包括應(yīng)用于核酸分子、細(xì)胞或生物體的那些誘變技術(shù)，可以制備核酸分子的這些非天然存在變體在這方面的變體中，變體是通過核苷酸替代、缺失或添加而不同于上述核酸分子的變體。所述替代、缺失或添加可涉及一個(gè)或多個(gè)核苷酸。所述變體可以在編碼區(qū)內(nèi)或非編碼區(qū)內(nèi)或二者內(nèi)都有所改變。在編碼區(qū)中的改變可以產(chǎn)生保守或非保守性氨基酸替代、缺失或添加。優(yōu)選的是編碼具有序列表中所提肺炎鏈球菌序列的變體、類似物、衍生物或片段或者片段的變體、類似物或衍生物的核酸分子，其中數(shù)個(gè)、一些、5-10個(gè)、1-5個(gè)、1-3個(gè)、2個(gè)、1個(gè)或無氨基酸以任一組合形式被替代、缺失或添加。其中尤其優(yōu)選沉默替代、添加和缺失，它們不改變序列表中所列肺炎鏈球菌多肽的特征和活性。在這點(diǎn)上還特別優(yōu)選保守性替代。按照本發(fā)明的肽和片段還包括修飾的表位以及編碼所述修飾表位的核酸序列，所述修改的表位中優(yōu)選根據(jù)在例如{ToUrdot，S等，2000}中公開的原則對(duì)給定表位的一個(gè)或兩個(gè)氨基酸進(jìn)行修飾或替代。清楚的是，通過提高、保留或至少不顯著阻礙所述表位的T細(xì)胞活化能力的氨基酸交換從而也將衍生自本發(fā)明表位的表位還包括在按照本發(fā)明的表位范圍內(nèi)。因此，本發(fā)明的表位還覆蓋了不包含肺炎鏈球菌來源的原始序列但觸發(fā)相同的或優(yōu)選提高的T細(xì)胞應(yīng)答的表位。將這些表位稱為“不規(guī)則變化的”，它們需要具有對(duì)MHC/HLA分子相似的或優(yōu)選更大的親合力，還需要具有以相似或優(yōu)選更強(qiáng)的方式刺激T細(xì)胞受體(TCR)定向于原始表位的能力。不規(guī)則變化表位可通過合理的設(shè)計(jì)獲得，SPJn{Rammensee，H.等，1999}所述，考慮各個(gè)殘基對(duì)結(jié)合MHC/HLA的貢獻(xiàn)，聯(lián)合與TCR潛在相互作用的殘基的系統(tǒng)性交換并用定向針對(duì)原始表位的T細(xì)胞檢測(cè)得到的序列。這樣的設(shè)計(jì)對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是可能的而無需過多的實(shí)驗(yàn)。另一可能性包括用定向針對(duì)原始表位的T細(xì)胞篩選肽庫。優(yōu)選的方式是合成肽庫的定位掃描。這種方法已詳述于{Hemmer，B.等，1999}和本文所給定文獻(xiàn)中。作為對(duì)本發(fā)明來源氨基酸序列表示的表位或不規(guī)則變化表位的備選方案，還可以應(yīng)用模擬這些表位的物質(zhì)，例如“肽模擬物”或“反-逆-肽(retro-inverso-p印tides)”。設(shè)計(jì)改良表位的另一方面是用增加其刺激T細(xì)胞能力的物質(zhì)進(jìn)行它們的配制或修飾。這些包括T輔助細(xì)胞表位、脂質(zhì)或脂質(zhì)體或在W001/78767中所述的優(yōu)選修飾。增加表位的T細(xì)胞刺激能力的另一方式是將它們與免疫刺激物質(zhì)配制在一起，所述免疫刺激物質(zhì)例如細(xì)胞因子或趨化因子如白介素_2、-7、-12、-18，I類和II類干擾素(IFN)，尤其是γ-IFN、GM-CSF、α-TNF、flt3配體及其它。正如本文關(guān)于本發(fā)明核酸分子檢測(cè)所另外討論的，例如，上述本發(fā)明核酸分子可用作針對(duì)RNA、cDNA和基因組DNA的雜交探針以分離編碼本發(fā)明多肽的全長(zhǎng)cDNAs和基因組克隆，以及分離與本發(fā)明核酸分子具有高度序列相似性的其它基因的cDNA和基因組克隆。這種探針通常包含至少15個(gè)堿基。優(yōu)選地，這種探針具有至少20個(gè)、至少25個(gè)或至少30個(gè)堿基，還可能具有至少50個(gè)堿基。尤其優(yōu)選的探針具有至少30個(gè)堿基，和具有50個(gè)或少于50個(gè)的堿基，諸如30、35、40、45或50個(gè)堿基。例如，本發(fā)明核酸分子的編碼區(qū)可通過用已知的DNA序列合成寡核苷酸探針篩選有關(guān)的文庫而被分離。然后將具有與本發(fā)明基因序列互補(bǔ)的序列的已標(biāo)記寡核苷酸用于篩41選cDNA、基因組DNA或mRNA文庫以確定探針與文庫中的哪一個(gè)成員雜交。正如本文關(guān)于核酸分子試驗(yàn)所進(jìn)一步討論的，其中，可以將本發(fā)明的核酸分子和多肽用作試劑和材料用于研發(fā)疾病，尤其是人的疾病的治療和診斷的方法?？梢詫⒐押塑账嵝问降谋景l(fā)明核酸分子用于本文所述方法中，但優(yōu)選用于PCR，以確定此處鑒定的肺炎鏈球菌基因是否全部或部分在受感染組織諸如血液中存在和/或轉(zhuǎn)錄。公認(rèn)的，還可將這種序列用于診斷病原體已達(dá)到的感染階段和感染類型。為此目的和其它目的，可以使用包含至少按照本發(fā)明的核酸之一的陣列?？梢詫凑毡景l(fā)明的核酸分子用于檢測(cè)核酸分子和包含這些核酸的生物體或樣品。優(yōu)選這種檢測(cè)是用于診斷的，更優(yōu)選用于診斷涉及或與肺炎鏈球菌的存在或豐度有關(guān)的疾病。通過用各種技術(shù)在DNA水平上檢測(cè)按照本發(fā)明的任何核酸分子，可以確認(rèn)感染了肺炎鏈球菌的真核生物(此處也稱“個(gè)體”)，特別是哺乳動(dòng)物，尤其是人?？梢垣@得用于將肺炎鏈球菌從其它生物體中辨別出來的優(yōu)選核酸分子候選物。本發(fā)明提供了診斷由肺炎鏈球菌感染引起的疾病的方法，包括從分離或來自個(gè)體的樣品中測(cè)定具有序列表中所列出的核酸分子序列的核酸分子表達(dá)水平的增加。使用任何本領(lǐng)域眾所周知的任一核酸分子定量方法，諸如，例如，PCR、RT-PCR、核糖核酸酶保護(hù)、RNA印跡、其它的雜交方法以及本文所述的陣列，可以對(duì)核酸分子的表達(dá)進(jìn)行測(cè)量。用于本文時(shí)，分離是指“人為的”將其從自身的天然狀態(tài)中隔離出來，S卩，如果它存在于自然界中，那么已經(jīng)將它已改變或從其最初的環(huán)境中移去，或二者兼具。當(dāng)該術(shù)語用于此處時(shí)，例如，在其天然狀態(tài)下天然存在于活的生物體內(nèi)的天然存在的核酸分子或多肽不是“分離的”，但從其天然狀態(tài)共存物質(zhì)中分離出來的相同核酸分子或多肽是“分離的”。例如，作為分離的一部分或分離后，這種核酸分子可與其它核酸分子，諸如DNA連接，以形成融合蛋白，用于誘變，和用于在宿主細(xì)胞中進(jìn)行增殖和表達(dá)。可以將分離的核酸分子，單獨(dú)的或與其它核酸分子諸如載體結(jié)合，引入培養(yǎng)物或完整生物體的宿主細(xì)胞內(nèi)。該術(shù)語用于此處時(shí)，當(dāng)引入培養(yǎng)物或完整生物體的宿主細(xì)胞中時(shí)，這種DNA仍然是分離的，因?yàn)樗鼈儗⒉粫?huì)處于其天然存在形式或環(huán)境中。同樣，核酸分子和多肽可存在于組合物中，諸如培養(yǎng)基制劑、將核酸分子或多肽引入例如細(xì)胞中的溶液、進(jìn)行化學(xué)或酶促反應(yīng)的組合物或溶液中，例如，所述組合物不是天然存在的組合物且其中保留了在術(shù)語用于本文時(shí)所具有的意義中的分離的核酸分子或多肽。按照本發(fā)明的核酸可化學(xué)合成?；蛘?，所述核酸可用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法分離自肺炎鏈球菌。依照本發(fā)明的另一方面，用本文所述的抗原鑒定方法提供了一套全面的、新的超免疫血清反應(yīng)性抗原和其片段。在本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案中，提供了含有此處所述任一核酸分子編碼的氨基酸序列的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段。在本發(fā)明的另一優(yōu)選實(shí)施方案中，提供了所含氨基酸序列選自由kqIDNo145、2M_288所表示多肽序列的組中的一組新的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段。在本發(fā)明另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，提供了所含氨基酸序列選自由kqIDNo146-150、152、巧4-160、162-167、169-175、178、180、182-186、188、191-192、195、197、199-206、208、211、215-220、222-223、225-238、240-244組成的組中所示多肽序列的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段。在本發(fā)明更優(yōu)選的實(shí)施方案中，提供了所含氨基酸序列選自由kqIDNo153、161、168、176、181、187、196、198、209-210、214、2M組成的組中所示多肽序列的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段。本發(fā)明中所提供的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段包括序列表中所列出的任何多肽以及與序列表中所提出多肽具有至少70%同一性的多肽，優(yōu)選與序列表中所提出多肽具有至少80%或85%的同一性、更優(yōu)選與序列表中所提出多肽具有至少90%的相似性(更優(yōu)選至少90%的同一性)、還更優(yōu)選與序列表中所提出多肽具有至少95%、96%、97%、98%、99%或99.5%的相似性(更優(yōu)選至少95%、96%、97%、98%、99%或99.5%的同一性)的多肽，還包括該多肽的部分，所述多肽具有這種部分的多肽，即通常含至少4個(gè)氨基酸，更優(yōu)選至少8個(gè)，還更優(yōu)選至少30個(gè)，更優(yōu)選至少50個(gè)氨基酸，諸如4、8、10、20、30、35、40、45或50個(gè)氨基酸。本發(fā)明還涉及這些超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的片段、類似物和衍生物。術(shù)語“片段”、“衍生物”和“類似物”在涉及其氨基酸序列列于序列表中的抗原時(shí)，指基本上保持與所述超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段相同或相似的生物學(xué)功能或活性的多肽。超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的片段、衍生物或類似物可能是1)其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基被保守或不保守氨基酸殘基替代(優(yōu)選保守的氨基酸殘基)且這種替代的氨基酸殘基可以或不可以由該遺傳密碼編碼，或幻其中一個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基包含替代基團(tuán)，或3)其中成熟的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段與另一化合物融合，諸如增加超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段半壽期的化合物(例如，聚乙二醇)，或4)其中附加的氨基酸與成熟的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段融合，諸如前導(dǎo)序列或分泌序列或用于純化成熟的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的序列或前蛋白質(zhì)序列。認(rèn)為這種片段、衍生物和類似物在來自本發(fā)明教導(dǎo)的那些本領(lǐng)域技術(shù)人員的范圍內(nèi)。本發(fā)明還涉及不同肺炎鏈球菌分離株的抗原?；诒疚墓_的核酸和氨基酸序列，可以容易地分離這些同源物。迄今為止，已辨別在超過40個(gè)血清組中的超過90個(gè)的血清型，并且這種分型的基礎(chǔ)是特異于血清型的抗血清。因此任何抗原的存在都可針對(duì)每一種血清型來確定。此外，還可能按照針對(duì)S.pyogenes的sic基因所述，確定各種血清型中特殊抗原的可變性(Hoe，N等，2001)。各種血清型對(duì)不同肺炎球菌感染的影響在不同年齡組和地理區(qū)域內(nèi)是變化的{Gray,B.等，1979}；{Gray,B.等，1986}；{Orange,M.等，1993}，￠:EpidemiologyandPreventionofVaccine-PreventableDiseases中綜述，第七片反，第二次印刷，ThePinkBook)。一個(gè)重要的方面是，在各種臨床菌株中，預(yù)期最有價(jià)值的保護(hù)性抗原是保守的。在本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，有關(guān)這方面的是序列表中列舉的超免疫血清反應(yīng)性抗原，其變體、類似物、衍生物和片段，以及片段的變體、類似物和衍生物。此外，含有這種超免疫血清反應(yīng)性抗原、其變體、類似物、衍生物和片段以及片段的變體、類似物和衍生物的融合多肽也包括在本發(fā)明中。使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，包括用于產(chǎn)生和表達(dá)編碼融合蛋白的重組多核酸的標(biāo)準(zhǔn)重組技術(shù)，可以容易地制備這種融合多肽和蛋白質(zhì)以及編碼它們的核酸分子。優(yōu)選的變體是那些通過保守氨基酸替代從參照株系改變而來的變體。所述替代是用相似特性的另一氨基酸替代多肽中給定的氨基酸。典型地，認(rèn)為脂肪族氨基酸丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸中的相互替代；羥基殘基絲氨酸和蘇氨酸之間的交換，酸性殘基天冬氨酸和谷氨酸之間的交換，酰胺殘基天冬酰胺和谷氨酰胺之間的替換，堿性殘基賴氨酸和精氨酸之間的交換以及芳香族殘基苯丙氨酸和酪氨酸之間的替代是保守性替代。在這方面還特別優(yōu)選的是具有序列表中列舉的任一多肽的氨基酸序列的變體、類似物、衍生物和片段以及片段的變體、類似物和衍生物，其中數(shù)個(gè)、一些、5-10個(gè)、1-5個(gè)、1-3個(gè)、2個(gè)、1個(gè)或無氨基酸殘基以任何組合方式被替代、缺失或添加。其中特別優(yōu)選的是不改變本發(fā)明多肽特征和活性的沉默替代、添加和缺失。在這點(diǎn)上還特別優(yōu)選的是保守性替代。最優(yōu)選的是具有序列表中所列舉氨基酸序列而且無替代的多肽。本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段優(yōu)選以分離的形式提供，且優(yōu)選純化至均一。也屬于本發(fā)明優(yōu)選的實(shí)施方案的是含有具有序列表中所列舉氨基酸序列的多肽片段以及序列表中所列舉多肽的變體和衍生物片段的多肽。在這方面所述片段是具有與部分而非所有上述超免疫血清反應(yīng)性抗原和它的片段以及變體或衍生物、類似物及其片段完全相同的氨基酸序列的多肽。這種片段可以是“獨(dú)立的”，即，并非其它氨基酸或多肽的一部分或與它們相融合，或者它們可包含于較大的多肽中形成其中的一部分或區(qū)域。在本發(fā)明的這方面還優(yōu)選的是通過本發(fā)明多肽的結(jié)構(gòu)或功能特征表征的片段，即，含有本發(fā)明多肽的α-螺旋和α-螺旋形成區(qū)域、β-折疊和β-折疊形成區(qū)域、轉(zhuǎn)角和轉(zhuǎn)角形成區(qū)域、卷曲和卷曲形成區(qū)域、親水性區(qū)域、疏水性區(qū)域、α兩性分子區(qū)域、β兩性分子區(qū)域、柔性區(qū)域、表面形成區(qū)域、底物結(jié)合區(qū)域和高抗原性指示區(qū)的片段以及這些片段的組合。優(yōu)選的區(qū)域是介導(dǎo)本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段活性的那些區(qū)域。在這點(diǎn)上最優(yōu)選的是具有本發(fā)明超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的化學(xué)、生物學(xué)或其它活性的片段，包括那些具有相似的活性或改良的活性或具有減少的不理想活性的片段。特別優(yōu)選的是含酶受體或結(jié)構(gòu)域的片段，其賦予肺炎鏈球菌生存所必需的功能或在人體內(nèi)引發(fā)疾病的能力。還優(yōu)選的多肽片段是包括或含有動(dòng)物，尤其是人中的抗原性或免疫原性決定子的那些多肽片段。將抗原性片段定義為本身可作為抗原或當(dāng)作為半抗原時(shí)可制備抗原的鑒定的抗原片段。因此，顯示出一個(gè)或(對(duì)于較長(zhǎng)片段而言)只有一些氨基酸交換的抗原或抗原片段也能用于本發(fā)明，條件是具有氨基酸交換的所述片段的抗原能力并未在交換時(shí)嚴(yán)重受損，即，適合于在接種這種抗原并且用來自個(gè)體血清的單獨(dú)抗體制劑進(jìn)行鑒定的個(gè)體中激發(fā)適當(dāng)?shù)拿庖邞?yīng)答。這種超免疫血清反應(yīng)性抗原片段的優(yōu)選實(shí)例選自由下列組成的組中包含表1“預(yù)測(cè)的免疫原性氨基酸”和“已鑒定的免疫原性區(qū)域的定位”欄的氨基酸序列的肽；表2的血清反應(yīng)性表位，尤其是含以下氨基酸的肽SeqIDNo145的第4_11位、35_64位、66_76位、101-108位、111-119位和57-114位；SeqIDNo146的第5-27位、32-64位、92-102位、107-113位、119-125位、133-139位、148-162位、177-187位、195-201位、207-214位、241-251位、254-269位、285-300位、302-309位、317-324位、332-357位、365-404位、411-425位、443-463位、470-477位、479-487位、506-512位、515-520位、532-547位、556-596位、603-610位、616-622位、624-629位、636-642位、646-665位、667-674位、687-692位、708-720位、734-739位、752-757位、798-820位、824-851位、856-865位和732-763位；SeqIDNo147的第14—21位、36-44位、49-66位、102-127位、162-167位、44177-196位、45-109位和145-172位；SeqIDNo148的第17-35位、64-75位、81-92位、100-119位、125-172位、174-183位、214-222位、230-236位、273-282位、287-303位、310-315位、331-340位、392-398位、412-420位、480-505位、515-523位、525-546位、553-575位、592-598位、603-609位、617-625位、631-639位、644-651位、658-670位、681-687位、691-704位、709-716位、731-736位、739-744位、750-763位、774-780位、784-791位、799-805位、809-822位、859-870位、880-885位、907-916位、924-941位、943-949位、973-986位、1010-1016位、1026-1036位、1045-1054位、1057-1062位、1082-1088位、1095-1102位、1109-1120位、1127-1134位、1140-1146位、1152-1159位、1169-1179位、1187-1196位、1243-1251位、1262-1273位、1279-1292位、1306-1312位、1332-1343位、1348-1364位、1379-1390位、1412-1420位、1427-1436位、1458-1468位、1483-1503位、1524-1M9位、1574-1588位、1614-1619位、1672-1685位、1697-1707位、1711-1720位、1738-1753位、1781-1787位、1796-1801位、1826-1843位、132-478位、508-592位和1753-1810位JeqIDNo149的第15-43位、49-55位、71-77位、104-110位、123-130位、162-171位、180-192位、199-205位、219-227位、246-2M位、264-270位、279-287位、293-308位、312-322位、330-342位、349-356位、369-377位、384-394位、401-406位、416-422位、432-439位、450-460位、464-474位、482-494位、501-508位、521-529位、536-546位、553-558位、568-574位、584-591位、602-612位、616-626位、634-646位、653-660位、673-681位、688-698位、705-710位、720-726位、736-749位、833-848位、1-199位、200-337位、418-494位和549-647位；SeqIDNo150的第9-30位、65-96位、99-123位、170-178位和1-1位JeqIDNo151的第7-32位、34-41位、96-106位、127-136位、154-163位、188-199位、207-238位、272-279位、306-312位、318-325位、341-347位、353-360位、387-393位、399-406位、434-440位、452-503位、575-580位、589-601位、615-620位、635-640位、654-660位、674-680位、696-701位、710-731位、1-548位和660-691位；SeqIDNo152的第4-19位、35-44位、48-59位、77-87位、93-99位、106-111位、130-138位、146-161位和78-84位JeqIDNo153的第24-30位、36-43位、64-86位、93-99位、106-130位、132-145位、148-165位、171-177位、189-220位、230-249位、251-263位、293-300位、302-312位、323-329位、338-356位、369-379位、390-412位和179-193位；SeqIDNo154的第30-39位、61-67位、74-81位、90-120位、123-145位、154-167位、169-179位、182-197位、200-206位、238-244位、267-272位和230-265位；SeqIDNo155的第14-20位、49-65位、77-86位和2_68位JeqIDNo156的第4_9位、26_；35位、42-48位、53-61位、63-85位、90-101位、105-111位、113-121位、129-137位、140-150位、179-188位、199-226位、228-237位、248-255位、259-285位、299-308位、314-331位、337-343位、353-364位、410-421位、436-442位和110-144位；SeqIDNo157的第36-47位、55-63位、94-108位、129-134位、144-158位、173-187位、196-206位、209-238位、251-266位、270-285位、290-295位、300-306位、333-344^,346-354位、366-397位、404-410位、422-435位、439-453位、466-473位、515-523位、529-543位、554-569位、571-585位、590-596位、607-618位、627-643位、690-696位、704-714位、720-728位、741-749位、752-767位、780-799位、225-247位和480-507位；SeqIDNo158的第16-25位、36-70位、80-93位、100-106位和78—130位；SeqIDNo159的第18—27位、41-46位、4550-57位、65-71位、79-85位、93-98位、113-128位、144-155位、166-178位、181-188位、201-207位、242-262位、265-273位、281-295位、303-309位、318-327位和36-64位；SeqIDNo160的第7-位、31-44位、50-59位、91-96位、146-153位、194-201位、207-212位、232-238位、264-278位、284490位、296-302位、326-353位、360-370位、378-384位、400-405位、409-418位、420-435位、442-460位、499-506位、529-534位、556-562位、564-576位、644-651位、677-684位、687-698位、736-743位、759-766位、778-784位、808-814位、852-858位、874-896位、920-925位、929-935位、957-965位、1003-1012位、1021-1027位、1030-1044位、1081-1087位、1101-1111位、1116-1124位、1148-1159位、1188-1196位、1235-1251位、1288-1303位、1313-1319位、1328-1335位、1367-1373位、1431-1437位、1451-1458位、1479-1503位、1514-1521位、1530-1540位、1545-1552位、1561-1568位、1598-1605位、1617-1647位、1658-1665位、1670-1676位、1679-1689位、1698-1704位、1707-1713位、1732-1738位、1744-1764位、1-70位、154-189位、922-941位、1445-1462位和1483-1496位feqIDNo161的第6-51位、81-91位、104-113位、U6-137位、150-159位、164-174位、197-209位、215-224位、229-235位、256-269位、276-282位、307-313位、317-348位、351-357位、376-397位、418-437位、454-464位、485-490位、498-509位、547-555位、574-586位、602-619位和452-530位JeqIDNo162的第25-31位、39-47位、49-56位、99-114位、121-127位、159-186位、228440位、253-269位、271-279位、303-315位、365-382位、395-405位、414-425位、438-453位和289-384位；SeqIDNo163的第9-位、41-47位、49-位、68-78位、108-114位、117-122位、132-140位、164-169位、179-186位、193-199位、206-213位、244-251位、267-274位、289-294位、309-314位、327-333位、209-249位和286-336位；SeqIDNo164的第9-28位、53-67位、69-82位、87-93位、109-117位、172-177位、201-207位、220-227位、242-247位、262-268位、305-318位、320-325位和286-306位；SeqIDNo165的第4-10位、26-39位、47-58位、63-73位、86-96位、98-108位、115-123位、137-143位、148-155位、160-176位、184-189位、194-204位、235440位、254-259位、272-278位和199-283位；SeqIDNo166的第4-26位、33-39位、47-53位、59-65位、76-83位、91-97位、104-112位、118-137位、155-160位、167-174位、198-207位、242-268位、273-279位、292-315位、320-332位、345-3M位、358-367位、377-394位、403-410位、424-439位、445-451位、453-497位、511-518位、535-570位、573-589位、592-601位、604-610位和202-242位；SeqIDNo167的第8-30位、36-45位、64-71位、76-82位、97-103位、105-112位、134-151位、161-183位、211-234位、253-268位、270-276位、278-284位、297-305位、309-315位、357-362位、366-372位、375-384位、401-407位、409-416位、441-455位、463-470位、475-480位、490-497位、501-513位、524-537位、552-559位、565-576位、581-590位、592-600位、619-625位、636-644位、646-656位和316-419位；SeqIDNo168的第4-17位、52-58位、84-99位、102-110位、114-120位、124-135位、143-158位、160-173位、177-196位、201-216位、223-250位、259-267位、269-275位和1-67位feqIDNo169的第6-46位、57-67位、69-80位、82-133位、137-143位、147-168位、182-187位、203-209位、214-229位、233-242位、246-280位和53-93位JeqIDNo170的第7-40位、50-56位、81-89位、117-123位、202-209位、213-218位、223-229位、248-261位、264-276位、281-288位、303-308位、313-324位、326-332位、340-346位、353-372^,434-443位、465-474位、514-523位、556-564位、605—616620-626位、631-636位、667-683位、685-699760-771位、779-788位、815-828位、855-867位、位、710-719位、726-732位、751-756位、位、869-879位、897-902位、917-924位、926-931位、936-942位、981-1000位、1006-1015位、1017-1028位、1030-1039位、1046-1054位、1060-1066位、1083-1092位、1099-1112位、1122-1130位、1132-1140位、1148-1158位、1161-1171位、1174-1181位、1209-1230位、1236-1244位、1248-1254位、1256-1267位、1269-1276位、1294-1299位、1316-1328位、1332-1354位、1359-1372位、1374-1380位、1384-1390位、1395-1408位、1419-1425位、1434-1446位、1453-1460位、1465-1471位、1474-1493位、1505-1515位、1523-1537位、1547-1555位、1560-1567位、1577-1605位、1633-1651位、1226-1309位、1455-1536位和1538-1605位JeqIDNo171的第4-10位、31-39位、81-88位、106-112位、122-135位、152-158位、177-184位、191-197位、221-227位、230-246位、249-255位、303-311位、317-326位、337-344位、346-362位、365-371位、430-437位、439-446位、453-462位、474-484位和449-467位JeqIDNo172的第9-15位、24-；35位、47-55位、122-1位、160-177位、188-196位、202-208位、216-228位、250-261位、272-303位、318-324位、327-339位、346-352位、355-361位、368-373位、108-218位和344-376位JeqIDNo173的第6-14位、17-48位、55-63位、71-90位、99-109位、116-124位、181-189位、212-223位、232-268位、270-294位、297-304位、319-325位、340-348位、351-370位、372-378位、388-394位、406-415位、421-434位和177-277位；SeqIDNo174的第21-39位、42-61位、65-75位、79-85位、108-115位和11-38位；SeqIDNo175的第4-17位、26-39位、61-76位、103-113位、115-122位、136-142位、158-192位、197-203位、208-214位、225-230位、237-251位和207-225位；SeqIDNo176的第5-11位、27-36位、42-53位、62-70位、74-93位、95-104位、114-119位、127-150位、153-159位、173-179位、184-193位、199-206位、222-241位、248-253位、257-280位、289-295位、313-319位、322-342位、349-365位、368-389位、393-406位、408-413位、426-438位、447-461位、463-470位、476-495位、532-537位、543-550位和225-246位；SeqIDNo177的第4-29位、68-82位、123-130位、141-147位、149-157位、178-191位、203-215位、269-277位、300-307位、327-335位、359-370位、374-380位、382-388位、393-400位、410-417位、434-442位、483-492位、497-503位、505-513位、533-540位、564-569位、601-607位、639-647位、655-666位、693-706位、712-718位、726-736位、752-758位、763-771位、774-780位、786-799位、806-812位、820-828位、852-863位、884-892位、901-909位、925-932位、943-948位、990-996位、1030-1036位、1051-1059位、1062-1068位、1079-1086位、1105-1113位、1152-1162位、1168-1179位、1183-1191位、1204-1210位、1234-1244位、1286-1295位、1318-1326位、1396-1401位、1451-1460位、1465-1474位、1477-1483位、1488-1494位、1505-1510位、1514-1521位、1552-1565位、1593-1614位、1664-1672位、1677-1685位、1701-1711位、1734-1745位、1758-1770位、1784-1798位、1840-1847位、1852-1873位、1885-1891位、1906-1911位、1931-1939位、1957-1970位、1977-1992位、2014-2020位、2026-2032位、2116-2134位、1-348位、373-490位、573-767位、903-1043位、1155-1198位、1243-1482位、1550-1595位、1682-1719位、1793-1921位和2008-2110；SeqIDNo178的第10_；35位、39-52位、107-112位、181-188位、2洸_236位、238-253位、258-268位、275-284位、296-310位、326-338位、345-368位、380-389位、391-408位、410-418位、420-429位、444-456位、489-505位、573-588位、616-623位、637-643位、726-739位、741-767位、785-791位、793-803位、830-847位、867-881位、886-922位、949-956位、961-980位、988-1004位、1009-1018位、1027-1042位、1051-1069位、1076-1089位、1108-1115位、1123-1135位、1140-1151位、1164-1179位、1182-1191位、1210-1221位、1223-1234位、1242-1250位、1255-1267位、1281-U92位、1301-1307位、1315-1340位、1348-1355位、1366-1373位、1381-1413位、1417-1428位、1437-1444位、1453-1463位、1478-1484位、1490-1496位、1498-1503位、1520-1536位、1538-1546位、1548-1570位、1593-1603位、1612-1625位、1635-1649位、1654-1660位、1670-1687位、1693-1700位、1705-1711位、1718-1726位、1729-1763位、1790-1813位、1871-1881位、1893-1900位、1907-1935位、1962-1970位、1992-2000位、2006-2013位、2033-2039位、2045-2051位、2055-2067位、2070-2095位、2097-2110位、2115-2121位、2150-2171位、2174-2180位、2197-2202位、2206-2228位和1526-1560位；SeqIDNo179的第4-17位、35-48位、54-76位、78-107位、109-115位、118-127位、134-140位、145-156位、169-174位、217-226位、232-240位、256-262位、267-273位、316-328位、340-346位、353-360位、402-409位、416-439位、448-456位、506-531位、540-546位、570-578位、586-593位、595-600位、623-632位、662-667位、674-681位、689-705位、713-724位、730-740位、757-763位、773-778位、783-796位、829-835位、861-871位、888-899位、907-939位、941-955位、957-969位、986-1000位、1022-1028位、1036-1044位、1068-1084位、1095-1102位、1118-1124位、1140-1146位、1148-1154位、1168-1181位、1185-1190位、1197-1207位、1218-1226位、1250-1270位、1272-1281位、1284-1296位、1312-1319位、1351-1358位、1383-1409位、1422-1428位、1438-1447位、1449-1461位、1482-1489位、1504-1510位、1518-1527位、1529-1537位、1544-1551位、1569-1575位、1622-1628位、1631-1637位、1682-1689位、1711-1718位、1733-1740位、1772-1783位、1818-1834位、1859-1872位、1-64位和128-495位；SeqIDNo180的第8-28位、32-37位、62-69位、119-125位、137-149位、159-164位、173-189位、200-205位、221-229位、240-245位、258-265位、268-276位、287-293位、296-302位、323-3位禾口1-95位；SeqIDNo181的第9-18位、25-38位、49-63位、65-72位、74-81位、94-117位、131-137位、139-146位、149-158位、162-188位、191-207位、217-225位、237-252位、255-269位、281-293位、301-326位、332-342位、347-354位、363-370位、373-380位、391-400位、415-424位、441-447位和75-107位；SeqIDNo182的第4-位、64-71位、81-87位、96-116位、121-1位、130-139位、148-155位、166-173位、176-184位、203-215位、231-238位、243-248位、256-261位、280-286位、288-306位、314-329位和67-148位；SeqIDNo183的第4-10位、19-37位、46-52位、62-81位、83-89位、115-120位、134-139位、141-151位、168-186位、197-205位、209-234位、241-252位、322-335位、339-345位、363-379位、385-393位、403-431位、434-442位、447-454位、459-465位、479-484位、487-496位和404-420位JeqIDNo184的第10-35位、46-66位、71-77位、84-93位、96-122位、138-148位、154-172位、182-213位、221-233位、245-263位、269-275位、295-301位、303-309位、311-320位、324-336位、340-348位、351-359位、375-381位和111-198位JeqIDNo185的第14-25位、30-42位、47-61位、67-75位、81-91位、98-106位、114-122位、124-135位、148-193位、209-227位和198-213；SeqIDNo186的第5-18位、45-50位、82-90位、97-114位、116-136位、153-161位、163-171位、212-219位、221-227位、240-249位、267-281位、311-317位、328-337位、375-381位、390-395位、430-436位、449-455位、484-495位、538-543位、548-554位、556-564位、580-586位、596-602位和493-606位；SeqIDNo187的第9-25位、28-34位、37-44位、61-68位、75-81位、88-96位、98-111位、119-133位、138-150位、152-163位、168-182位、186-194位、200-205位、216-223位、236-245位、257-264位、279-287位、293-304位、311-318位、325-330^,340-346位、353-358位、365-379位、399-409位、444-453位和303-391位JeqIDNo188的第16-36位、55-61位、66-76位、78-102位、121-130位、134-146位、150-212位、221-239位、255-276位、289-322位、3四_357位和29-59位；SeqIDNo189的第8-27位、68-74位、77-99位、110-116位、1M-141位、171-177位、202-217位、221-228位、259-265位、275-290位、293-303位、309-325^,335-343位、345-351位、365-379位、384-394位、406-414位、423-437位、452-465位、478-507位、525-534位、554-560位、611-624位、628-651位、669-682位、742-747位、767-778位、782-792位、804-812位、820-836位、79-231和359-451位JeqIDNo190的第5-位、39-45位、56-62位、67-74位、77-99位、110-117位、124-141位、168-176位、200-230位、237-244位、268-279位、287-299位、304-326位、329-335位、348-362位、370-376位、379-384位、390-406位、420-429位、466-471位、479-489位、495-504位、5四_541位、545-553位、561-577位、598-604位、622-630位、637-658位、672-680位、682-688位、690-696位、698-709位、712-719位、724-736位、738-746位、759-769位、780-786位、796-804位、813-818位、860-877位、895-904位、981-997位、1000-1014位、1021-1029位、1-162位、206-224位、254-350位、414-514位和864-938位；SeqIDNo191的第4-11位、19-49位、56-66位、68-101位、109-116位、123-145位、156-165位、177-185位、204-221位、226-234位、242-248位、251-256位、259-265位、282-302位、307-330^,340-349位、355-374位、377-383位、392-400位、422_似8位、4；34_442位、462-474位和266-322位feqIDNo192的第14-43位、45-57位、64-74位、80-87位、106-127位、131-142位、145-161位、173-180位、182-188位、203-210位、213-219位、221-243位、245-2M位、304-311位、314-320位、342-348位、354-365位、372-378位、394-399位、407-431位、436-448位、459-465位、470-477位、484-490位、504-509位、531-537位、590-596位、611-617位、642-647位、723-734位、740-751位、754-762位、764-774位、782-797位、807-812位、824-831位、838-845位、877-885位、892-898位、900-906位、924-935位、940-946位、982-996位、1006-1016位、1033-1043位、1051-1056位、1058-1066位、1094-1108位、1119-1126位、1129-1140位、1150-1157位、1167-1174位、1176-1185位、1188-1201位、1209-1216位、1220-1228位、1231-1237位、1243-1248位、1253-1285位、1288-1297位、1299-1307位、1316-1334位、1336-1343位、1350-1359位、1365-1381位、1390-1396位、1412-1420位、1427-1439位、1452-1459位、1477-1484位、1493-1512位、1554-1559位、1570-1578位、1603-1608位、1623-1630位、1654-1659位、1672-1680位、1689-1696位、1705-1711位、1721-1738位、1752-1757位、1773-1780位、1817-1829位、1844-1851位、1856-1863位、1883-1895位、1950-1958位、1974-1990位、172-354位、384-448位、464-644位、648-7位和1357-1370位JeqIDNo193的第8-27位、68-74位、77-99位、110-116位、124-141位、169-176位、201-216位、220-227位、258-264位、274-289位、292-302位、308-324位、334-342位、344-350位、364-372位、377-387位、399-407位、416-429位、445-458位、471-481位、483-500位、518-527位、547-553位、604-617位、621-644位、662-675位、767-778位、809-816位、15-307位、350-448位和496-620位JeqIDNo194的第4-17位、24-29位、53-59位、62-84位、109-126位、159-164位、189-204位、208-219位、244-249位、274-290位、292-302位、308-324^,334-342位、344-350位、378-389位、391-397位、401-409位、4M-432位、447-460位、470-479位、490-504位、521-529位、538-544位、549-555位、570-577位、583-592位、602-608位、615-630^,635-647位、664-677位、692-698位、722-731位、733-751位、782-790位、793-799位、56-267位、337-426位和495-601位；SeqIDNo195的第12-22位、49-59位、77-89位、111-121位、136-148位、177-186位、207-213位、217-225位、227-253位、259-274位、296-302位、328-333位、343-354位、374-383位、424-446位、448-457位、468-480位、488-502位、507-522位、544-550位、553-560位、564-572位、587-596位、604-614位、619-625位、629-635位、638-656位、662-676位、680-692位、697-713位、720-738位、779-786位、833-847位、861-869位、880-895位、897-902位、911-917位、946-951位、959-967位、984-990位、992-1004位、1021-1040位、1057-1067位、1073-1080位和381-403位；SeqIDNo196的第4-10位、26-31位、46-56位、60-66位、70-79位、86-94位、96-102位、109-118位、132-152位、164-187位、193-206位、217-224位和81-149位JeqIDNo197的第4-21位、26-37位、48-60位、71-82位、109-117位、120-128位、130-136位、142-147位、181-187位、203-211位、216-223位、247-255位、257-284位、316-325位、373-379位、395-400位、423-435位、448-456位、479-489位、512-576位、596-625位、641-678位、680-688位、692-715位和346-453位；SeqIDNo198的第10-16位、25-31位、34-56位、58-69位、71-89位、94-110位、133-176位、186-193位、208-225位、240-250位、259-266位、302-307位、335-；341位、376-383位、410-416位和316-407位；SeqIDNo199的第11-29位、42-56位、60-75位、82-88位、95-110位、116-126位、132-143位、145-160位、166-172位、184-216位和123-164位feqIDNo200的第11-位、54-63位、110-117位、139-152位、158-166位、172-180位、186-193位、215-236位、240-251位、302-323位、330-335位、340-347位、350-366位、374-381位和252-299位；SeqIDNo201的第18-27位、35-42位、50-56位、67-74位、112-136位、141-153位、163-171位、176-189位、205-213位、225-234位、241-247位、253-258位、269-281位、288-298位、306-324位、326-334位、355-369位、380-387位和289-320位；SeqIDNo202的第7-15位、19-41位、56-72位、91-112位、114-122位、139-147位、163-183位、196-209位、258180位、326-338位、357-363位、391-403位、406-416位和360-378位JeqIDNo203的第11-18位、29-41位、43-49位、95-108位、142-194位、204-212位、216-242位、247-256位、264-273位和136-149位JeqIDNo204的第18-24位、33-40位、65-79位、89-102位、113-119位、130-137位、155-161位、173-179位、183-203位、205-219位、223-231位、245-261位、267-274位、296-306位、311-321位、330-341位、344-363位、369-381位、401-408位、415-427位、437-444位、453-464位、472-478位、484-508位、517-524位、526-532位、543-548位和59—180位；SeqIDNo205的50第5-13位、52-65位、67-73位、97-110位、112-119位、134-155位和45-177位；SeqIDNo206的第6-28位、34-43位、57-67位、75-81位、111-128位、132-147位、155-163位、165-176位、184-194位、208-216位、218-229位、239-252位、271-278位、328-334位、363-376位、381-388位、426-473位、481-488位、492-498位、507-513位、536-546位、564-582位、590-601位、607-623位、148-269位、420-450位和610-648位；SeqIDNo207的第4_12位、20-38位、69-75位、83-88位、123-128位、145-152位、154-161位、183-188位、200-213位、245-250位、266-272位、306-312位、332-339位、357-369位、383-389位、395-402位、437-453位、455-470位、497-503位和1-112位；SeqIDNo208的第35-59位、74-86位、111-117位、122-137位和70-154位feqIDNo209的第洸-42位、54-61位、65-75位、101-107位、123-130位、137-144位、148-156位、164-172位、177-192位、213-221位、231-258位和157-249位；SeqIDNo210的第29-38位、61-67位、77-87位、94-100位、105-111位、118-158位和1-97位；SeqIDNo211的第7-21位、30-48位、51-58位、60-85位、94-123位、134-156位、160-167位、169-183位、186-191位、216-229位、237-251位、257-267位、272-282位、287-298位和220-243位；SeqIDNo212的第6-29位、34-47位、56-65位、69-76位、83-90位、123-134位、143-151位、158-178位、197-203位、217-235位、243-263位、303-309位、320-333位、338-348位、367-373位、387-393位、407-414位、416-427位、441-457位、473-482位、487-499位、501-509位、514-520位、530-535位、577-583位、590-602位、605-612位、622-629位、641-670位、678-690位、37-71位和238-307位JeqIDNo213的第7-40位、121-132位、148-161位、196-202位、209-215位、221-235位、248-255位、271-280位、288-295446-451位、475-487位、556-563位、568-575643-648位、652-659位、672-685位、695-700761-767位、775-781位、796-806位、823-835位、330-339位、395-409位、414-420位、位、580-586位、588-595位、633-638位、位、710-716位、737-742位、749-754位、位、850-863位、884-890位、892-900位、902-915位、934-941位和406-521位JeqIDNo214的第9-18位、24-46位、51-58位、67-77位、85-108位、114-126位、129-137位、139-146位、152-165位、173-182位、188-195位、197-204位、217-250位、260-274位、296-313位、343-366位、368-384位、427-434位、437-446位、449-455位、478-484位、492-506位、522-527位、562-591位、599-606位、609-618位、625-631位、645-652位和577-654位feqIDNo215的第13-20位、26-37位、41-53位、56-65位、81-100位、102-114位、118-127位、163-188位、196-202位、231-238位、245-252位、266-285位、293-298位、301-306位和19-78位feqIDNo216的第10-23位、32-42位、54-66位、73-91位、106-113位、118-127位、139-152位、164-173位、198-207位、210-245位、284-300位、313-318位、330-337位、339-346位、354-361位、387-393位、404-426位、429-439位、441-453位、467-473位、479-485位、496-509位、536-544位、551-558位、560-566位、569-574位、578-588位、610-615位、627-635位、649-675位、679-690位、698-716位、722-734位、743-754位、769-780位、782-787位和480-550位；SeqIDNo217的第6-39位、42-50位、60-68位、76-83位、114-129位、147-162位、170-189位、197-205位、217-231位、239-248位、299-305位、338-344位、352-357位、371-377位、380-451位、459-483位、491-499位、507-523位、537-559位、587-613位、625-681位、689-729位、737-781位、785-809位、817-865位、873-881位、889-939位、951-975位、983-1027位、1031-1055位、1063-1071位、1079-1099位、1103-11271197-1261位、1269-1309位、1317-1333位、1341-1349位、1357-1465位、1637-1669位、1933-1973位、2195-2219位、2395-2429位、2699-2737位、2977-2985位、3223-3267位、3469-3513位、3683-3747位、4003-4039位、4313-43531517-15531823-18492117-21252323-23432609-26252921-29373111-31673375-34253589-36133843-39514195-4229位、1557-1629位、1861-1925位、2133-2183位、2347-2371位、26334695位、29454969位、3175-3215位、3437-3461位、3637-3671位、3955-3999位、4241-4305位、1677-1701位、1981-2025位、2227-2271位、2441-2529位、2765-2791位、2993-3009位、3271-3295位、3517-3541位、3755-3795位、4043-4115位、4361-4377位、1709-1725位、2029-2053位、2275-2299位、2537-2569位、28034867位、3023-3045位、3303-3351位、3549-3557位、3803-3819位、4123-4143位、4385-4393位、1151-1185位、1469-1513位、1733-1795位、2061-2109位、2307-2315位、25774601位、2889-2913位、3073-3099位、3359-3367位、3565-3585位、3827-3835位、4147-4171位、4401-4509位、位、位、位、位、位、位、位、位、位、位、位、位、4513-4557位、4561-4597位、4601-4718位、4749-4768位、74-171位、452-559位和2951-3061位feqIDNo218的第16-22位、30-51位、70-111位、117-130位、137-150位、171-178位、180-188位、191-196位和148-181位；SeqIDNo219的第6-19位、21-46位、50-56位、80-86位、118-126位、167-186位、189-205位、211-242位、244-267位、273-286位、290-297位、307-316位、320-341位和34-60位JeqIDNo220的第5-位、33-43位、48-54位、58-63位、78-83位、113-120位、122-128位、143-152位、157-175位、185-192位、211-225位、227-234位、244-256位、270-281位、284490位、304-310位、330-337位、348-355位、362-379位、384-394位、429-445位、450-474位、483-490位、511-520位、537-546位、548-554位、561-586位、590-604位、613-629位、149-186位、285-431位和573-659位JeqIDNo221的第546位、49-59位、61-67位、83-91位、102-111位、145-157位、185-192位、267-272位、279-286位、292-298位、306-312位、134-220位、235H位和254-280位；SeqIDNo222的第5-19位、72-79位、83-92位、119-124位、140-145位、160-165位、167-182位、224-232位、240-252位、259-270位、301-310位、313-322位、332-343位、347-367位、384-398位、416-429位、431-446位、454-461位和1-169位；SeqIDNo223的第8-17位、26-31位、56-62位、75-83位、93-103位、125-131位、135-141位、150-194位、205-217位、233-258位、262-268位、281-286位和127-168位feqIDNo224的第6-12位、69-75位、108-115位、139-159位、176-182位、194-214位和46-161位；SeqIDNo225的第6-13位、18-27位、39-48位、51-59位、66-73位、79-85位、95-101位、109-116位、118-124位、144-164位、166-177位、183-193位、197-204位、215-223位、227-236位、242-249位、252-259位、261-270位、289-301位、318-325位和12-58位；SeqIDNo226的第4-10位、26-32位、48-60位、97-105位、117-132位、138-163位、169-185位、192-214位、219-231位、249-261位、264-270位、292-308位、343-356位、385-392位、398-404位、408-417位、4；35-441位和M-50位JeqIDNo227的第10-40位、42-48位、51-61位、119-1位和1-118位feqIDNo2的第5-17位、40-58位、71-83位、103-111位、123-140位、167-177位、188-204位和116-1位feqIDNo2的第4-9位、11-50位、57-70位、112-123位、127-138位和64-107位JeqIDNo230的第9-39位、51-67位52和1-101位JeqIDNo231的第5-14位、17-25位、28-46位、52-59位、85-93位、99-104位、111-120位、122-131位、140-148位、158-179位、187-197位、204-225位、271-283位、285-293位和139-155位JeqIDNo232的第42-70位、73-90位、92-108位、112-127位、152-164位、166-172位、181-199位、201-210位、219-228位、247-274位、295-302位、322-334位、336-346位、353-358位、396-414位、419-425位、432-438位、462-471位、518-523位、531-536位、561-567位、576-589位、594-612位、620-631位、665-671位、697-710位、718-731位、736-756位、765-771位、784-801位和626-653位feqIDNo233的第8-28位、41-51位、53-62位、68-74位、79-85位、94-100位、102-108位、114-120位、130-154位、156-162位、175-180位、198-204位、206-213位、281-294位、308-318位、321-339位、362-368位、381-386位、393-399位、407-415位和2-13位；SeqIDNo234的第4-39位、48-65位、93-98位、106-112位、116-129位和10-36位；SeqIDNo235的第25-32位、35-50位、66-71位、75-86位、90-96位、123-136位、141-151位、160-179位、190-196位、209-215位、222-228位、235-242位、257-263位、270-280位和209-247位；SeqIDNo236的第5-29位、31-38位、50-57位、62-75位、83-110位、115-132位、168-195位、197-206位、216-242位、249-258位、262-269位、333-340位、342-350位、363-368位、376-392位、400-406位、410-421位、423-430位、436-442位、448-454位、460-466位、471-476位、491-496位、511-516位、531-536位、551-556位、571-576位、585-591位、599-605位、27-70位、219-293位、441-504位和512-584位；SeqIDNo237的第4-12位、14-34位、47-75位、83-104位、107-115位、133-140位、148-185位、187-196位、207-212位、224-256位、258-265位、281-287位、289-296位、298-308位、325-333位、345-355位、365-371位、382-395位、424-435位、441-457位、465-472位、483-491位、493-505位、528-534位、536-546位、552-558位、575-584位、589-600位、616-623位和576-591位；SeqIDNo238的第4-76位、78-89位、91-1位、142-148位、151-191位、195-208位、211-223位、226440位、256-277位、279-285位、290-314位、317-323位、358-377位、381-387位、391-396位、398-411位、415-434位、436-446位、454-484位、494-512位、516-523位、538-552位、559-566位、571-577位、579-596位、599-615位、620-627位、635-644位、694-707位、720-734位、737-759位、761-771位和313-329位；SeqIDNo239的第7-38位、44-49位、79-89位、99-108位、117-123位、125-132位、137-146位、178-187位、207-237位、245-255位、322-337位、365-387位、398-408位、445-462位、603-608位、623-628位、644-650位、657-671位、673-679位和111-566位；SeqIDNo240的第6-20位、22-35位、39-45位、58-64位、77-117位、137-144位、158-163位、205-210位、218-2位、2四-236位、239-251位、263-277位、299-307位、323-334位、353-384位、388-396位、399-438位、443-448位、458-463位、467-478位、481-495位、503-509位、511-526位、559-576位、595-600位、612-645位、711-721位、723-738位、744-758位、778-807位和686-720位；SeqIDNo241的第10-33位、35-41位、72-84位、129-138位、158-163位、203-226位、243-252位、258-264位、279-302位、322-329位、381-386位、401-406位、414-435位和184-385位；SeqIDNo242的第4-9位、19-24位、41-47位、75-85位、105-110位、113-146位和45-62位；SeqIDNo243的第4-25位、52-67位、117-1M位、131-146位、173-180位、182-191位、195-206位、215-221位、229-236位、245-252位、258-279位、286-291位、293-302位、314-320位、327-336位、341-353位、355-361位、383-389位和1-285位JeqIDNo244的第14-32位、38-50位、73-84位、93-105位、109-114位和40-70位；SeqIDNo245的第5-位和22-34位JeqIDNo246的第23-位和13-39位JeqIDNo247的第8_14位和21-34位；SeqIDNo248的第4-13位、20-29位、44-50位、59-74位和41-69位；SeqIDNo249的第4-9位、19-42位、48-59位、71-83位和57-91位feqIDNo250的第4-14位和10-28位；SeqIDNo251的22-28位、32-42位、63-71位、81-111位、149-156位、158-167位、172-180位、182-203位、219-2位和27-49位JeqIDNo252的第17-27位和23-32位JeqIDNo253的第1844位和沘_38位JeqIDNo254的第9-15位和13-27位JeqIDNo255的第13-22位和18-位JeqIDNo256的第1746位和2-11位；SeqIDNo257的第4-33位和16-32位JeqIDNo258的第4-10位、37-43位、54-84位、92-127位和15-62位JeqIDNo259的第4-14位、20-32位、35-60位、69-75位、79-99位、101-109位、116-140位和1M-136位；SeqIDNo洸0的第2-13位；SeqIDNo261的第4-13位、28-42位和42-57位；SeqIDNo262的第4-14位、27-44位和14-35位；SeqIDNo263的第4-12位和1-27位JeqIDNo264的第4_18位、39_45位、47_74位和；35_66位;SeqIDNo265的第8_20位、43-77位和17-36位JeqIDNo266的第4_30位、35-45位、51-57位和；35-49位JeqIDNo267的第4-24位、49-57位和15-34位feqIDNo268的第4-22位和8-27位feqIDNo269的第13-25位、32-59位、66-80位和21-55位feqIDNo270的第4-10位、24-33位、35-42位、54-65位、72-82位、98-108位和15-30位；SeqIDNo271的第8-19位和17-47位；SeqIDNo272的第12-18位、40-46和31-52位；SeqIDNo273的第4-20位、35-78位、83-102位、109-122位和74-86位JeqIDNo274的第7-17位、21-41位、46-63位和2-20位；SeqIDNo275的第30-37位和2-33位；SeqIDNo276的第4-13位、17-25位和1-15位；SeqIDNo277的第17-31位、44-51位和20-51位；SeqIDNo278的第20-30位和5-23位JeqIDNo279的第13-33位、48-71位和92-110位;SeqIDNo280的第4-9位、50-69位、76-88位、96-106位、113-118位和12-34位JeqIDNo281的第4-24位和646位JeqIDNo282的第746位和14-30位JeqIDNo283的第9-39位、46-68位、75-82位、84-103位和26-44位；SeqIDNo284的第4-30位、33-107位和58-84位；SeqIDNo285的第4-12位和9-51位；SeqIDNo286的第12-18位、29-37位和6-37位；SeqIDNo287的第4-21位、33-52位、64-71位和16-37位；SeqIDNo288的第9-19位和2-30位JeqIDNo245的第20-37位JeqIDNo246的第8-27位JeqIDNo247的第10-27位JeqIDNo248的第42-59位和52-69位feqIDNo249的第63-80位和74-91位JeqIDNo250的第1H8位JeqIDNo251的第沘_49位JeqIDNo252的第15-32位JeqIDNo253的第4-20位JeqIDNo2的第10-27位JeqIDNo255的第17_；34位JeqIDNo256的第1-18位JeqIDNo257的第16-33位JeqIDNo258的第16-36位、30-49位和43-62位feqIDNo259的第122-139位；SeqIDNo260的1-18位JeqIDNo261的第41-58位JeqIDNo262的第15_；35位JeqIDNo263的第2-27位JeqIDNo265的第18-36位JeqIDNo266的第；34_51位feqIDNo268的第9-27位JeqIDNo269的第22-47位JeqIDNo271的第18-36位和29-47位JeqIDNo272的第32-52位JeqIDNo273的第72-89位JeqIDNo274的第3-20位JeqIDNo275的第3-21位和15-33位feqIDNo276的第1-18位feqIDNo278的第6-23位JeqIDNo279的第93-110位JeqIDNo280的第13_；34位feqIDNo281的第7-位和9-位feqIDNo282的第16-33位feqIDNo283的第27-44位JeqIDNo284的第67-84位JeqIDNo285的第10-33位和洸_50位feqIDNo286的第7-25位和19-37位；SeqIDNo287的第17-37位；SeqIDNo288的第3-20位和13-30位feqIDNo145的第62-80位和75-93位JeqIDNo147的第92-108位；SeqIDNo148的第332-349位、177-200位和1755-1777位；SeqIDNo149的第109-133位、149-174位、260-285位和460-485位feqIDNo150的第洸-47位和42-64位；SeqIDNo151的第22-41位、35-54位、115-130位、306-325位、401-420位和454-478位；SeqIDNol55的第22-45位feqIDNo160的第156-174位、9M-940位、1485-1496位、1447-1462位和1483-1498位feqIDNo161的第457-475位JeqIDNol63的第302-325位feqIDNo164的第沘8_305位JeqIDNo165的第244-266位和洸0-282位feqIDNo166的第204-225位和220-241位；SeqIDNo167的第324-345位、340-361位、356-377位、372-393位和388-408位；SeqIDNo168的第39-64位；SeqIDNo169的第54-76位和70-92位；SeqIDNo170的第1227-1247位、1539-1559位、1554-1574位、1569-1589位、1584-1604位、1242-1262位、1272-1292位、1287-1308位、1456-1477位、1472-1494位、1488-1510位和1505-1526位JeqIDNo172的第；351_368位JeqIDNo173的第179-200位、195-216位、211-232位、227-248位和243-263位；SeqIDNo174的第13-37位；SeqIDNo175的第208-224位；SeqIDNo177的第42-64位、59-81位、304-328位、323-348位、465-489位、968-992位、1399-1418位、1412-1431位和2092-2111位；SeqIDNo178的第1528-1547位和1541-1560位；SeqIDNo179的第184-200位、367-388位、382-403位、409-4位、425-444位和438-457位JeqIDNo180的第27-50位和45-67位；SeqIDNo183的第114-131位禾Π405-419位；SeqIDNo184的第113-134位、129-150位、145-166位、161-182位和177-198位；SeqIDNo186的第495-515位；SeqIDNo187的第；346-358位JeqIDNo190的第208-2M位feqIDNo192的第178-194位、202-223位、217-238位、288-308位和1355-1372位JeqIDNo194的第57-78位JeqIDNo197的第347-369位、364-386位、381-403位、398-420位、415-437位和432-452位；SeqIDNo198的第347-372位；SeqIDNo199的第147-163位；SeqIDNo200的第263-288位；SeqIDNo202的第361-377位feqIDNo204的第82-104位、99-121位、116-138位、133-155位和150-171位JeqIDNo205的第110-130位和125-145位JeqIDNo206的第613-631位、626-644位和196-213位；SeqIDNo208的第78-100位、95-117位、112-134位和129-151位；SeqIDNo209的第158-180位、175-197位、192-214位、209-231位和226-248位JeqIDNo210的第30-50位、45-65位和60-79位feqIDNo213的第431-455位和450-474位；SeqIDNo214的第579-601位、596-618位、613-635位和630-653位；SeqIDNo217的第920-927位、98-119位、114_1；35位、130-151位、146-167和162-182位；SeqIDNo219的第36-59位；SeqIDNo220的第194-216位和381-404位JeqIDNo221的第236-251位和255-279位JeqIDNo222的第80-100位和141-164itl；SeqIDNo223的第128-1M位JeqIDNo224的第82-100位、95-116位和111-134位feqIDNo227的第55-76位、71-92位和87-110位JeqIDNo229的第91-106位；SeqIDNo230的第74-96位；SeqIDNo231的第140-157位；SeqIDNo233的第4-13位；SeqIDNo236的第41-65位和499-523位；SeqIDNo239的第122-146位、191-215位、288-313位、445-469位和511-5；35位JeqIDNo241的第347-368位JeqIDNo242的第46-61位feqIDNo243的第15-37位、32-57位、101-121位、115_1；35位、138-158位、152-172位、220-242位和236-258位，以及含所述序列的至少6個(gè)、優(yōu)選8個(gè)以上、尤其是10個(gè)以上氨基酸以及優(yōu)選地不超過70、50、40、20、15、11個(gè)氨基酸的片段。所有這些片段個(gè)別地且各自獨(dú)立的形成本發(fā)明的優(yōu)選方面。用一組具有至少10個(gè)氨基酸長(zhǎng)且有1個(gè)氨基酸重疊的肽通過分析蛋白質(zhì)抗原的完整序列可鑒定具體抗原的所有線性超免疫血清反應(yīng)性片段。隨后，用已表達(dá)的全長(zhǎng)蛋白質(zhì)或其結(jié)構(gòu)域多肽通過分析與超免疫血清在一起的蛋白質(zhì)抗原可鑒定非線性表位。假如蛋白質(zhì)的獨(dú)特結(jié)構(gòu)域足以形成不依賴于其天然蛋白質(zhì)的3D結(jié)構(gòu)，分析與超免疫血清在一起的相應(yīng)重組或合成產(chǎn)生的結(jié)構(gòu)域多肽可鑒定多結(jié)構(gòu)域蛋白質(zhì)的個(gè)別結(jié)構(gòu)域內(nèi)的構(gòu)象表位。對(duì)于那些其中的結(jié)構(gòu)域具有線性表位以及構(gòu)象表位的抗原而言，可以利用對(duì)應(yīng)于線性表位的肽進(jìn)行的競(jìng)爭(zhēng)性實(shí)驗(yàn)確認(rèn)構(gòu)象表位的存在。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明還尤其涉及編碼上述片段的核酸分子、與編碼所述片段的核酸分子雜交的核酸分子、尤其是那些在嚴(yán)緊條件下雜交的核酸分子以及用于擴(kuò)增編碼所述片段的核酸分子的核酸分子，諸如PCR引物。在這些方面，如上所討論的，優(yōu)選的核酸分子是與優(yōu)選片段相應(yīng)的那些核酸分子。本發(fā)明還涉及含有核酸分子或本發(fā)明的核酸分子的載體、用本發(fā)明載體遺傳改造過的宿主細(xì)胞和用重組技術(shù)生產(chǎn)超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段?？梢詫⒍喾N表達(dá)載體用于表達(dá)按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段。通常，在宿主中適于維持、增殖或表達(dá)核酸從而表達(dá)多肽的任何載體都可用于這方面的表達(dá)。依照本方面的這一方面，載體可以是，例如，質(zhì)粒載體、單鏈或雙鏈?zhǔn)删w載體、單鏈或雙鏈RNA或DNA病毒載體。本文所公開的起始質(zhì)?？缮藤?gòu)獲得、可公眾獲得或可通過常規(guī)應(yīng)用眾所周知的已發(fā)表方法從可獲得的質(zhì)粒進(jìn)行構(gòu)建。在某些方面，載體中優(yōu)選的是用于表達(dá)本發(fā)明的核酸分子和超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的那些載體。宿主細(xì)胞中的核酸構(gòu)建體可以常規(guī)方式用于生產(chǎn)由所述重組序列編碼的基因產(chǎn)物。或者，可以通過傳統(tǒng)的肽合成儀合成性產(chǎn)生本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段。成熟蛋白質(zhì)可在適當(dāng)啟動(dòng)子的調(diào)控下表達(dá)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞、酵母、細(xì)菌或其它細(xì)胞中。使用來自本發(fā)明DNA構(gòu)建體的RNA，還可將無細(xì)胞翻譯體系應(yīng)用于生產(chǎn)這些蛋白質(zhì)?？蓪?duì)宿主細(xì)胞進(jìn)行遺傳改造以引入核酸分子并表達(dá)本發(fā)明的核酸分子。適當(dāng)宿主的代表性實(shí)例包括細(xì)菌細(xì)胞，諸如鏈球菌(str印tococci)、葡萄球菌(staphylococci)、大腸桿菌(E.coli)、鏈霉菌(Sti^ptomyces)和枯草芽孢桿菌(Bacillussubtillis)細(xì)胞；真菌細(xì)胞，諸如酵母細(xì)胞和曲霉菌(Aspergillus)細(xì)胞；昆蟲細(xì)胞，諸如果蠅S2和SpodopteraSf9細(xì)胞；動(dòng)物細(xì)胞，諸如CH0、C0S、Hela、C127、3T3、BHK、293和Bowes黑素瘤細(xì)胞；和植物細(xì)胞。本發(fā)明還提供了生產(chǎn)肺炎鏈球菌超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的方法，所述方法包括從宿主細(xì)胞表達(dá)由本發(fā)明所提供的核酸分子編碼的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段。本發(fā)明還提供了生產(chǎn)表達(dá)肺炎鏈球菌超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的細(xì)胞的方法，所述方法包括用按照本發(fā)明的載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染合適的宿主細(xì)胞從而使被轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染的細(xì)胞表達(dá)由包含在所述載體中的核酸編碼的多肽。多肽可以以修飾過的形式，諸如融合蛋白進(jìn)行表達(dá)，而且不僅可包含分泌信號(hào)，還可包含附加的異源功能區(qū)域。因此，例如，可以將附加氨基酸的區(qū)域，尤其是帶電荷氨基酸，加入多肽的N-或C-末端以便在純化期間或隨后的操作和貯存期間提高其在宿主細(xì)胞中的穩(wěn)定性和持久性。此外，可以將區(qū)域加入多肽中以促進(jìn)純化。這些區(qū)域可在該多肽最終制備步驟前進(jìn)行去除。其中，在多肽中添加肽部分產(chǎn)生分泌物或排泄物以提高穩(wěn)定性或促進(jìn)純化是本領(lǐng)域中熟知和常規(guī)的技術(shù)。優(yōu)選的融合蛋白包含來自免疫球蛋白且對(duì)溶解或純化多肽有效的異源區(qū)段。例如，EP-A-O464533(加拿大副本2045869)公開了含免疫球蛋白分子恒定區(qū)多個(gè)部分以及另一蛋白質(zhì)或其部分的融合蛋白。在藥物開發(fā)中，例如，為了高通量篩選檢測(cè)的目的將蛋白質(zhì)與抗體Fc部分融合以鑒定拮抗劑。參閱，例如，{Bermett，D.等，1995}禾Π{Johanson,K.等，199。肺炎鏈球菌超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段可通過眾所周知的方法從重組細(xì)胞培養(yǎng)物中進(jìn)行回收和純化，所述方法包括硫酸銨或乙醇沉淀、酸提取、陰離子或陽離子交換層析、磷酸纖維素層析、疏水相互作用層析、羥磷灰石層析和外源凝集素層析。按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段可通過化學(xué)合成以及生物技術(shù)手段產(chǎn)生。后者包括用含有按照本發(fā)明的核酸的載體轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞并在本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的條件下培養(yǎng)已被轉(zhuǎn)染或已被轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞。生產(chǎn)方法還可包括純化步驟以純化或分離待制備的多肽。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述載體是按照本發(fā)明的載體。按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段可用于檢測(cè)樣品中的某種或幾種生物體，所述樣品含這些生物體或其來源多肽。優(yōu)選地，這種檢測(cè)是用于診斷的，更優(yōu)選用于疾病的診斷，最優(yōu)選用于診斷與革蘭氏陽性細(xì)菌，尤其是選自包含鏈球菌、葡萄球菌和乳酸球菌(lactococci)的組中細(xì)菌的存在或多度相關(guān)或有聯(lián)系的疾病。更優(yōu)選地，微生物選自包含無乳鏈球菌(Streptococcusagalactiae)、化月農(nóng)鏈球菌(Streptococcuspyogenes)和變異鏈球菌(Str印tococcusmutans)的組，尤其是所述微生物為化膿鏈球菌。本發(fā)明還涉及診斷檢測(cè)法諸如用于檢測(cè)本發(fā)明超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段在細(xì)胞和組織中水平的定量和診斷檢測(cè)中，其包括正常和異常水平的測(cè)定。因而，例如，依照本發(fā)明用于檢測(cè)較正常對(duì)照組織樣品而言過量表達(dá)的多肽的診斷檢測(cè)法可用于檢測(cè)感染的存在，例如，和識(shí)別正被感染的生物體?？捎糜诖_定宿主來源樣品中多肽水平的檢測(cè)技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的。這些檢測(cè)方法包括放射免疫檢測(cè)法、競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合檢測(cè)法、蛋白質(zhì)印跡分析和ELISA檢測(cè)法。其中，ELISA是常常優(yōu)選的。ELISA檢測(cè)最初包括制備特異于所述多肽的抗體，優(yōu)選單克隆抗體。此外，通常制備與所述單克隆抗體結(jié)合的報(bào)道抗體。所述報(bào)道抗體附著于可檢測(cè)試劑諸如放射性試劑、熒光試劑或酶促試劑，諸如辣根過氧化物酶。按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段還可用于陣列的目的或連同陣列使用。更具體而言，可將至少一個(gè)按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段固定于支持物上。所述支持物典型地包含各種超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段，憑此通過使用一種或數(shù)種按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段和/或不同的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段可建立多樣性。這種陣列的特征性質(zhì)，以及一般而言任何陣列的特征性質(zhì)，是將獨(dú)特的多肽固定于所述支持物或其表面的獨(dú)特的或預(yù)定區(qū)域或位置。因此，陣列的獨(dú)特位CN102174534A說明書42/92頁置或區(qū)域的任一活性可與具體的多肽相關(guān)。固定于支持物上的不同超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的數(shù)目可以從少到10個(gè)到數(shù)千個(gè)不同的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段之間變化。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，每cm2的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的密度少到每cm210個(gè)肽/多肽到每cm2至少400個(gè)不同的肽/多肽，且更具體地是每cm2至少1000個(gè)不同的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段。這種陣列的制備是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，例如，描述于美國(guó)專利5，744，309。陣列優(yōu)選地包含一個(gè)平面、多孔或非多孔且具有至少第一個(gè)表面的固體支持物。將如本文所公開的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段固定于所述的表面上。優(yōu)選的支持物材料尤其是玻璃或纖維素。用于本文所述任一診斷應(yīng)用中的陣列也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。除了按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段之外，還可以將按照本發(fā)明的核酸分子用于上述陣列的產(chǎn)生中。本申請(qǐng)也適用于抗體構(gòu)成的陣列，優(yōu)選地，所述抗體尤其是本文所述的單克隆抗體。另一方面，本發(fā)明涉及指向按照本發(fā)明的任一超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段、衍生物或其片段的抗體。本發(fā)明包括，例如，單克隆和多克隆抗體、嵌合的、單鏈的和人源化的抗體，以及Fab片段或Fab表達(dá)文庫的產(chǎn)物。在本發(fā)明范圍內(nèi)的是所述抗體可以是嵌合的，即，其不同部分來源自不同物種或至少各自的序列取自不同的物種。針對(duì)相應(yīng)于本發(fā)明序列的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段產(chǎn)生的抗體可通過將超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段直接注射入動(dòng)物中或通過將超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段施用于動(dòng)物，優(yōu)選非人動(dòng)物而獲得。然后由此獲得的抗體與超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段自身結(jié)合。以這種方式，即使只編碼超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的片段的序列也可用于產(chǎn)生結(jié)合完整天然超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的抗體。然后，將所述的抗體用于從表達(dá)那些超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的組織中分離超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段。為了制備單克隆抗體，可以使用本領(lǐng)域已知的提供以連續(xù)細(xì)胞系培養(yǎng)產(chǎn)生的抗體的任何技術(shù)。(如，最初在{K0hler，G.等，1975}中所述的。)用于產(chǎn)生單鏈抗體的所述技術(shù)(美國(guó)專利號(hào)4，946，778)可適用于生產(chǎn)針對(duì)按照本發(fā)明免疫原性超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的單鏈抗體。此外，可以將轉(zhuǎn)基因小鼠，或其它生物體諸如其它哺乳動(dòng)物用于表達(dá)針對(duì)按照本發(fā)明的免疫原性超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的人源化抗體?；蛘?，噬菌體展示技術(shù)或核糖體展示可應(yīng)用于選擇對(duì)超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段具結(jié)合活性的抗體基因，它們可來自為具有相應(yīng)靶抗原而篩選的人淋巴細(xì)胞的PCR擴(kuò)增ν-基因的全部組分或來自天然的文庫{McCafferty，J.等1990}；{Marks,J.等，1992}。還可以通過鏈的改組來提高這些抗體的親合力{ClaCkS0n，T.等，1991}。如果存在兩個(gè)抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域，每個(gè)結(jié)構(gòu)域可直接針對(duì)不同表位-被稱為“雙特異性的”抗體。可以將上述抗體應(yīng)用于分離或鑒定表達(dá)超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的克隆或通過將抗體附著于固體支持物上進(jìn)行親和層析分離和/或純化來純化本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段。因此，特別地，可將針對(duì)本發(fā)明超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的抗體應(yīng)用于抑58制和/或治療感染，特別是細(xì)菌感染，尤其是由肺炎鏈球菌引起的感染。超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段包括形成本發(fā)明的具體的一個(gè)方面的抗原性、表位性或免疫學(xué)等價(jià)衍生物。用于本文時(shí)，術(shù)語“抗原等價(jià)衍生物”涵蓋被某些抗體特異性識(shí)別的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段或其等價(jià)物，在所述抗體針對(duì)按照本發(fā)明的蛋白質(zhì)或超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段產(chǎn)生后，其干擾了病原體和哺乳動(dòng)物宿主之間的相互作用。用于本文時(shí)，術(shù)語“免疫學(xué)等價(jià)衍生物”涵蓋肽或其等價(jià)物，當(dāng)將它們用于適當(dāng)制劑中以在脊椎動(dòng)物中產(chǎn)生抗體時(shí)，所述抗體發(fā)揮了干擾病原體和哺乳動(dòng)物宿主之間相互作用的功能?？蓪⒊庖哐宸磻?yīng)性抗原及其片段，諸如抗原性或免疫學(xué)等價(jià)衍生物或它們的融合蛋白用作抗原來免疫小鼠或其它動(dòng)物諸如大鼠或雞。融合蛋白可為超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段提供穩(wěn)定性。所述抗原可以例如通過偶聯(lián)與例如牛血清白蛋白(BSA)或匙孔血藍(lán)蛋白(KLH)的免疫原性載體蛋白聯(lián)合?；蛘撸嗫截愃龅鞍踪|(zhì)或超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段或抗原性或免疫學(xué)等價(jià)的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的抗原性肽對(duì)于提高免疫原性而言可具有足夠的抗原性，從而避免了載體的使用。優(yōu)選地，對(duì)抗體或其衍生物進(jìn)行修飾使其在個(gè)體中的免疫原性降低。例如，如果所述個(gè)體是人，最優(yōu)選對(duì)抗體進(jìn)行人源化，其中將雜交瘤衍生抗體的互補(bǔ)性決定區(qū)移植入人的單克隆抗體內(nèi)，例如如{Jones,P.等，1986}或{Tempest,P.等，1991}所述。本發(fā)明的多核苷酸在遺傳免疫中的應(yīng)用優(yōu)選地采用合適的運(yùn)送方法，諸如將質(zhì)粒DNA直接注射入肌肉中、運(yùn)送與特定的蛋白質(zhì)載體復(fù)合的DNA、DNA與磷酸鈣共沉淀、將DNA封裝入各種形式的脂質(zhì)體中、微粒轟擊{Tang,D.等，1992}，{Eisenbraun,Μ.等，1993}以及用克隆的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體進(jìn)行體內(nèi)感染{Seeger，C.等，1984}。另一方面，本發(fā)明涉及與按照本發(fā)明的任一超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段結(jié)合的肽，以及制備這種肽的方法，其中該方法的特征在于按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的應(yīng)用，且基本的步驟是本領(lǐng)域技術(shù)人員所已知的。可以使用依照現(xiàn)有技術(shù)的方法諸如噬菌體展示或核糖體展示產(chǎn)生這些肽。在噬菌體展示的情形下，基本上肽庫是以噬菌體的形式產(chǎn)生的，且將此類文庫與靶分子接觸，所述靶分子在本情形中是按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段。隨后從各自的反應(yīng)液中除去與靶分子結(jié)合的肽，優(yōu)選地，除去作為與靶分子結(jié)合的復(fù)合物的肽。本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的是，結(jié)合特征，至少一定程度上，取決于具體實(shí)現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)安排，諸如鹽濃度等。將以較高的親和力或較大的力與靶分子結(jié)合的那些肽從文庫中未結(jié)合的成員中分離出來后，以及任選的同樣在將靶分子從靶分子和肽的復(fù)合物中移去后，可以隨后對(duì)相應(yīng)的肽進(jìn)行特征鑒定。在特征鑒定前，可諸如，例如通過增殖編碼肽的噬菌體，任選地進(jìn)行擴(kuò)增步驟。所述特征鑒定，優(yōu)選地包括對(duì)靶結(jié)合肽進(jìn)行測(cè)序?；旧?，所述的肽不局限于其長(zhǎng)度，不過，優(yōu)選地以相應(yīng)的方法獲得長(zhǎng)度為大約8-20個(gè)氨基酸的肽。文庫的大小可以介于大約IO2-IOw種不同的肽，優(yōu)選地IO8-IO15種不同的肽，但并不局限于此。結(jié)合超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的靶的具體形式是特別在德國(guó)專利申請(qǐng)DE19742706中所述的所謂“抗促成素”(anticalines)。另一方面，本發(fā)明涉及與按照本發(fā)明的任一超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段相互作用的的功能性核酸，以及制備這種功能性核酸的方法，其中該方法的特征在于按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的應(yīng)用，而基本的步驟則是本領(lǐng)域技術(shù)人員所已知的。功能性核酸優(yōu)選為適體和spiegelmers。適體是單鏈或雙鏈且特異與靶分子相互作用的D-核酸。適體的制備和選擇參見，例如歐洲專利EP0533838所述的。基本上采用了以下步驟。首先，提供核酸的混合物，即，可能的適體，其中每一核酸典型地包含數(shù)個(gè)、優(yōu)選至少8個(gè)連續(xù)的隨機(jī)核苷酸的區(qū)段。此混合物隨后與靶分子接觸，從而諸如基于與候選混合物相比，該混合物對(duì)靶分子增加的親和力或?qū)ζ涓蟮牧?，所述核酸與靶分子結(jié)合。結(jié)合的核酸(一個(gè)或多個(gè)分子)隨后從留下的混合物中分離出來。任選地，使用例如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)擴(kuò)增由此獲得的核酸。這些步驟可重復(fù)數(shù)次結(jié)果得到具有特異結(jié)合靶分子的增加的比率核酸的混合物，然后任選地從中選擇最終結(jié)合的核酸。將這些特異性結(jié)合的核酸稱為適體。顯而易見在產(chǎn)生或鑒定個(gè)體混合物的適體樣品的方法的任一階段，都可用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)測(cè)定核酸序列?？赏ㄟ^例如引入產(chǎn)生的適體的為本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的限定的化學(xué)基團(tuán)使適體穩(wěn)定，這也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。這樣的修飾可以，例如，存在于在核苷酸的糖基部分2’位置處引入氨基。目前將適體用作治療劑。不過，可以將由此選擇或產(chǎn)生的適體用于靶分子的確認(rèn)和/或用于藥物開發(fā)，優(yōu)選地，以小分子為基礎(chǔ)的藥物開發(fā)的前導(dǎo)物質(zhì)，這也在本發(fā)明的范圍內(nèi)。這事實(shí)上是通過競(jìng)爭(zhēng)性試驗(yàn)完成的，其中候選藥物通過從靶分子和適體的復(fù)合物中替代出適體而抑制靶分子和適體之間的相互作用，假設(shè)各個(gè)候選藥物可特異性抑制靶分子和適體之間的相互作用，且如果相互作用是特異性的，所述的候選藥物將，至少原則上，適于封閉靶分子并因此降低其在含所述靶分子的相應(yīng)體系中的生物利用度或活性。然后，可以將由此獲得的小分子進(jìn)一步的衍生化和修飾以使其物理、化學(xué)、生物學(xué)和/或醫(yī)學(xué)特性，諸如毒性、特異性、生物降解性和生物利用度優(yōu)化。Spiegelmer及其產(chǎn)生或制備是基于相似的原理。spiegelmer的制備描述于國(guó)際專利申請(qǐng)WO98/08856。Spiegelmer是L-核酸，這意味著它們是由L-核苷酸而非象適體那樣由D-核苷酸組成的。Spiegelmer的特征在于它們?cè)谏飳W(xué)體系中具有非常高的穩(wěn)定性，并且與適體相比，特異性地與它們所針對(duì)的靶分子相互作用。在spiegelmer產(chǎn)生過程中，建立了一群異源D-核酸，將所述的那群異源D-核酸與靶分子的光學(xué)對(duì)映體接觸，在本情形中其是例如按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的天然存在L-對(duì)映體的D-對(duì)映體。隨后，分離不與靶分子的光學(xué)對(duì)映體相互作用的那些D-核酸。但是分離那些與靶分子的光學(xué)對(duì)映體相互作用的那些D-核酸，對(duì)其任選地進(jìn)行鑒定和/或測(cè)序并隨后基于獲自D-核酸的核酸序列信息合成相應(yīng)的L-核酸。這些L-核酸與天然存在的靶分子而非其光學(xué)對(duì)映體特異相互作用，所述L-核酸在序列方面與和上述的與靶分子的光學(xué)對(duì)映體相互作用的D-核酸相同。與適體產(chǎn)生方法類似，也可能數(shù)次重復(fù)各個(gè)步驟并因此富集與靶分子的光學(xué)對(duì)映體特異性相互作用的那些核酸。另一方面，本發(fā)明涉及與按照本發(fā)明的任何核酸分子相互作用的功能性核酸，以及用于制備所述功能性核酸的方法，其中該方法的特征在于使用了按照本發(fā)明的核酸分子及其相應(yīng)序列且基本步驟是本領(lǐng)域技術(shù)人員所已知的。功能性核酸優(yōu)選地是核酶、反義寡核苷酸和siRNA。核酶是具有催化活性的核酸，其優(yōu)選地由基本上包括兩部分的RNA組成。第一部分顯示出催化活性，而第二部分負(fù)責(zé)與靶核酸的特異性相互作用，在本情形中所述靶核酸是編碼按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的核酸。基于靶核酸與核酶第二部分之間的相互作用，典型地通過雜交和在兩條雜交鏈上基本上互補(bǔ)的堿基序列的Watson-Crick堿基配對(duì)，可活化催化活性部分，這意味著如果所述核酶的催化活性是磷酸二酯酶活性，那么它在分子內(nèi)或分子間催化靶核酸。隨后，靶核酸可以進(jìn)一步降解，這最終導(dǎo)致了靶核酸以及來源自所述靶核酸的蛋白質(zhì)的降解。核酶、其用途和設(shè)計(jì)原則是本領(lǐng)域技術(shù)人員所已知的，并且例描述于{Doherty,Ε.等，2001}和{Lewin,Α.等，2001}。用于藥物制備及作為診斷劑的反義寡核苷酸的活性和設(shè)計(jì)分別基于相似的作用模式?；旧?，反義寡核苷酸的雜交基于與靶RNA的堿基互補(bǔ)，優(yōu)選地與mRNA的堿基互補(bǔ)，從而激活RNaseH。RNaseH被磷酸二酯和硫代磷酸酯二者偶聯(lián)的DNA激活。不過，磷酸二酯偶聯(lián)的DNA被細(xì)胞核酸酶快速降解，而硫代磷酸酯偶聯(lián)的DNA則不會(huì)。這些抗性、非天然存在的DNA衍生物在與RNA雜交后，不抑制RNaseH。換而言之，反義多核苷酸只在作為DNARNA雜交復(fù)合物時(shí)是有效的。這類反義寡核苷酸的實(shí)例特別地參見美國(guó)專利US5，849，902和US5，989，912。換言之，基于靶分子的核酸序列，即，在本案例中是針對(duì)按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的核酸分子，其或來自相應(yīng)核酸序列原則上可從中推導(dǎo)出來的靶蛋白，或通過了解象這樣的核酸序列，特別是mRNA，可基于堿基互補(bǔ)的原則設(shè)計(jì)適當(dāng)?shù)姆戳x寡核苷酸。特別優(yōu)選的是具有硫代磷酸酯的短序列的反義寡核苷酸(3-9個(gè)堿基)?；罨?xì)菌RNaseH需要最少3個(gè)DNA堿基，而活化哺乳動(dòng)物RNaseH需要最少5個(gè)堿基。在這些嵌合寡核苷酸中，存在形成RNaseH底物的中心區(qū)，兩側(cè)是由不形成RNaseH底物的修飾過的核苷酸組成的雜交“臂”。嵌合寡核苷酸的雜交“臂”可由諸如2'-0-甲基或2'-氟代進(jìn)行修飾。備選的方案是在所述的臂中使用磷酸甲酯或氨基磷酸酯鍵。在本發(fā)明實(shí)踐中有效的反義寡核苷酸的另外的實(shí)施方案是P-甲氧基寡核苷酸、部分的P-甲氧基寡脫氧核糖核苷酸或P-甲氧基寡核苷酸。對(duì)于本發(fā)明而言特別相關(guān)和有效的是如以上提及的兩個(gè)美國(guó)專利中所更具體描述的那些反義寡核苷酸。這些寡核苷酸包含非天然存在的5'-3'-連接核苷酸。更確切的說，寡核苷酸具有兩種類型的核苷酸2'-脫氧硫代磷酸酯，它激活RNaseH，以及2'-修飾的核苷酸，它不激活RNaseH。2'-已修飾的核苷酸之間的鍵可以是磷酸二酯、硫代磷酸酯或P-乙氧基磷酸二酯。RNaseH的活化是通過含介于3_5個(gè)之間的2’脫氧硫代磷酸酯核苷酸的連續(xù)RNaseH-活化區(qū)域激活細(xì)菌的RNaseH以及含介于5_10個(gè)之間的2'-脫氧硫代磷酸酯核苷酸的連續(xù)RNaseH-活化區(qū)激活真核的、尤其是哺乳動(dòng)物的RNaseH而完成的。防止降解的保護(hù)作用是通過形成5'和3'末端堿基高度核酸酶抗性以及任選地通過安置3'末端封閉基團(tuán)而完成。更具體而言，所述的反義寡核苷酸包含-5'末端和-3'末端；和從位點(diǎn)11-59的獨(dú)立選自由2’-修飾的磷酸二酯核苷酸和2’-修飾的P-烷氧基磷酸三酯核苷酸組成的組中的5'-3'-連接核苷酸；且其中5'-末端核苷附著于3-10個(gè)連續(xù)硫代磷酸酯連接脫氧核糖核苷酸的RNaseH-活化區(qū)域，且其中所述寡核苷酸的3'_末端選自由反向的脫氧核糖核苷酸、1-3個(gè)硫代磷酸酯2’-修飾核糖核苷酸的連續(xù)序列、生物素基團(tuán)和P-烷氧基磷酸三酯核苷酸組成的組中。還可使用其中不是5'末端核苷附著于RNaseH-活化區(qū)而是3'末端核苷如上所述附著于RNaseH-活化區(qū)的反義寡核苷酸。此外，5'末端選自不同于所述寡核苷酸3‘末端的具體基團(tuán)。按照本發(fā)明的核酸以及超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段可用作或用于制備藥物組合物，尤其是疫苗。優(yōu)選地將所述的藥物組合物、優(yōu)選地將疫苗用于預(yù)防或治療由肺炎鏈球菌引起、涉及或相關(guān)的疾病。在此范圍內(nèi)，本發(fā)明的另一方面涉及在個(gè)體、尤其是哺乳動(dòng)物內(nèi)引起免疫應(yīng)答的方法，它包括用按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段或其片段或變體接種個(gè)體，足以產(chǎn)生抗體以保護(hù)所述個(gè)體不受感染，尤其是鏈球菌感染，最具體而言是肺炎鏈球菌感染。本發(fā)明的另一方面涉及在個(gè)體中誘發(fā)免疫應(yīng)答的方法，它包括，通過基因治療或其它方法運(yùn)送功能性編碼超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段或其片段或變體的核酸，以便在體內(nèi)表達(dá)超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段或其片段或變體，從而誘導(dǎo)免疫應(yīng)答產(chǎn)生抗體或細(xì)胞介導(dǎo)的T細(xì)胞應(yīng)答，所述T細(xì)胞是產(chǎn)生細(xì)胞因子的T細(xì)胞或細(xì)胞毒性T細(xì)胞，以保護(hù)所述的個(gè)體免受疾病的侵襲，無論該疾病是已存在于個(gè)體內(nèi)的或未存在其中的。施用基因的一個(gè)方式是將其包被在顆?；蚱渌镔|(zhì)上加速進(jìn)入所需細(xì)胞中。本發(fā)明的另一方面涉及免疫學(xué)組合物，所述組合物在引入能在其中誘發(fā)免疫應(yīng)答的宿主時(shí)，在該宿主中誘發(fā)免疫應(yīng)答，其中的組合物包含編碼和表達(dá)按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的抗原的重組DNA。免疫學(xué)應(yīng)答可用于治療或預(yù)防，且可采用抗體免疫性或細(xì)胞免疫性的形式，諸如由CTL或CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生的免疫性。本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段或其片段可與輔助蛋白質(zhì)融合，所述輔助蛋白質(zhì)自身可不產(chǎn)生抗體，但能穩(wěn)定所述第一種蛋白質(zhì)并產(chǎn)生具有免疫原性和保護(hù)特性的融合蛋白。這種融合的重組蛋白質(zhì)優(yōu)選進(jìn)一步包含抗原性輔助蛋白，諸如谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(GST)或半乳糖苷酶，以及穩(wěn)定蛋白質(zhì)并有利于其產(chǎn)生和純化的相對(duì)大的輔助蛋白。此外，輔助蛋白在提供免疫系統(tǒng)全身性刺激的意義上可用作佐劑。輔助蛋白可附著于第一種蛋白質(zhì)的氨基或羧基末端。此外，本發(fā)明提供了在肺炎鏈球菌感染的動(dòng)物模型的所述遺傳免疫接種實(shí)驗(yàn)中使用所需的核酸分子或其特殊片段的方法。這種片段對(duì)于鑒定能引起預(yù)防或治療免疫應(yīng)答的蛋白質(zhì)表位是特別有效的。此方法可隨后從成功抵抗或清除感染所必需的動(dòng)物器官內(nèi)產(chǎn)生特殊意義的單克隆抗體，用于哺乳動(dòng)物、尤其是人體內(nèi)肺炎鏈球菌感染預(yù)防劑或治療方法的研發(fā)。超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段可作為抗原用于宿主的疫苗接種從而產(chǎn)生特異抗體保護(hù)宿主抵抗細(xì)菌入侵，例如，通過阻斷細(xì)菌在受損傷組織的粘附。組織損傷的實(shí)例包括由例如病毒感染(例如呼吸器官的，諸如流行性感冒)、機(jī)械、化學(xué)或熱損傷或留置裝置的植入造成的皮膚或結(jié)締組織以及粘膜組織的傷口，或在粘膜諸如口腔、乳腺、尿道或陰道中的傷口。本發(fā)明還包括含與適當(dāng)載體在一起的免疫原性重組蛋白質(zhì)的疫苗制劑。由于蛋白質(zhì)可在胃中分解，因此優(yōu)選胃腸外地施用，包括，例如，皮下、肌肉內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮內(nèi)、鼻內(nèi)或透過皮膚施用。適于胃腸外施用的制劑包括水性和非水性無菌注射液，它們可包含抗氧化劑、緩沖液、抑菌劑和使制劑與個(gè)體的體液，優(yōu)選地血液等滲的溶質(zhì)；以及可包含懸浮劑或增稠劑在內(nèi)的水性和非水性無菌懸浮液。制劑可以單位劑量或多劑量包裝出現(xiàn)，例如，封62裝在安瓿和小瓶中，且可以凍干狀態(tài)儲(chǔ)存，只需在臨用前立即加入無菌液態(tài)載體即可。疫苗制品還可包括用于增強(qiáng)制品免疫原性的佐劑體系，諸如水包油體系和本領(lǐng)域已知的其它體系。劑量取決于疫苗的特異活性且可用常規(guī)實(shí)驗(yàn)方便的測(cè)定。按照另一方面，本發(fā)明涉及包含了本發(fā)明所提供針對(duì)肺炎鏈球菌的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的藥物組合物。這種藥物組合物可包含針對(duì)肺炎鏈球菌的一個(gè)，優(yōu)選地至少兩個(gè)或更多的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段。任選地，所述的肺炎鏈球菌超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段還可與針對(duì)其它病原體的抗原組合于聯(lián)合藥物組合物中。優(yōu)選地，所述的藥物組合物是用于預(yù)防或治療由肺炎鏈球菌和/或其它病原體引起的感染的疫苗，針對(duì)所述病原體的抗原已包含于該疫苗中。按照另一方面，本發(fā)明涉及包含如上述鑒定針對(duì)肺炎鏈球菌的編碼超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的核酸分子的藥物組合物。這種藥物組合物可包含編碼針對(duì)肺炎鏈球菌的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的一個(gè)或多個(gè)核酸分子。任選地，這種編碼超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的肺炎鏈球菌核酸分子還可與編碼針對(duì)其它病原體的抗原的核酸分子組合于聯(lián)合型藥物組合物中。優(yōu)選地，所述的藥物組合物是用于預(yù)防或治療由肺炎鏈球菌和/或其它病原體引起的感染的疫苗，針對(duì)所述病原體的抗原已包含于該疫苗中。所述藥物組合物可包含任何適當(dāng)?shù)妮o助物質(zhì)，諸如緩沖物質(zhì)、穩(wěn)定劑或另外的活性成分，尤其是已知與藥物組合物和/或疫苗產(chǎn)生有聯(lián)系的成分。對(duì)于按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原、其片段或其編碼核酸分子而言優(yōu)選的載體和/或賦形劑是用于進(jìn)一步刺激免疫應(yīng)答產(chǎn)生超免疫血清反應(yīng)性抗原、其片段或其編碼核酸分子的免疫刺激化合物。優(yōu)選地，在按照本發(fā)明的藥用制劑中的免疫刺激化合物選自聚陽離子物質(zhì)，尤其是聚陽離子肽、免疫刺激核酸分子，優(yōu)選地免疫刺激脫氧核苷酸、明礬、弗氏完全佐劑、弗氏不完全佐劑、神經(jīng)活性化合物，尤其是人生長(zhǎng)激素，或它們的組合物的組中。也在本發(fā)明范圍內(nèi)的是，藥物組合物、尤其是疫苗，除了包含按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原、其片段和/或其編碼核酸分子之外還包含具有生物學(xué)或藥學(xué)活性的其它化合物。優(yōu)選地，所述疫苗組合物包含至少一種聚陽離子肽。按照本發(fā)明使用的聚陽離子化合物可能是顯示出符合WO97/30721的特征性作用的任何聚陽離子化合物。優(yōu)選的聚陽離子化合物選自堿性多肽、有機(jī)聚陽離子、堿性聚氨基酸或它們的混合物。這些聚氨基酸應(yīng)具有至少4個(gè)氨基酸殘基的鏈長(zhǎng)(W097/30721)。尤其優(yōu)選的是類似聚賴氨酸、聚精氨酸和多肽的物質(zhì)或它們的混合物，所述多肽在8個(gè)以上氨基酸的范圍內(nèi)、尤其是20個(gè)以上氨基酸殘基的范圍內(nèi)包含20%以上、尤其是50%以上的堿性氨基酸。其它優(yōu)選的聚陽離子和它們的藥物組合物參見WO97/30721(例如，聚乙烯亞胺)和WO99/38528。優(yōu)選地，這些多肽包含介于20-500個(gè)之間的氨基酸殘基，尤其是介于30-200個(gè)之間的殘基。這些聚陽離子化合物可通過化學(xué)或重組方法產(chǎn)生或可來自天然來源。陽離子(多)肽還可以是具有如綜述{Ganz，Τ.，1999}中所述的抗菌特性。這些(多)肽可以是原核的或動(dòng)物的或植物來源的或可化學(xué)或重組產(chǎn)生的(W002/13857)。肽還可以屬于防衛(wèi)素類型(W002/13857)。這些肽的序列可發(fā)現(xiàn)于，例如，以下網(wǎng)址的抗菌的序列數(shù)據(jù)庫http://www.bbcm.univ.trieste.it/tossi/pag2.html這種宿主防御肽或防御工具也是按照本發(fā)明的聚陽離子聚合物的優(yōu)選形式的。通常，將允許作為優(yōu)選地由APC(包括樹狀細(xì)胞)介導(dǎo)的適應(yīng)性免疫系統(tǒng)活化(或下調(diào))終產(chǎn)物的化合物用作聚陽離子聚合物。在本發(fā)明中尤其優(yōu)選用作聚陽離子物質(zhì)的是cathelicidin來源的抗微生物肽或其衍生物(國(guó)際專利申請(qǐng)WO02/13857，并入本文作為參考)，尤其是來源于哺乳類cathelicidin,優(yōu)選地來自人、?；蛐∈蟮目刮⑸镫摹Ｌ烊粊碓吹木坳栯x子化合物包括HIV-REV或HIV-TAT(衍生的陽離子肽、觸角(antennapedia)肽、脫乙酰殼多糖或幾丁質(zhì)的其它衍生物)或通過生化或重組產(chǎn)生的來源于這些肽或蛋白質(zhì)的其它肽。其它優(yōu)選的聚陽離子化合物是cathelin或cathelin的相關(guān)或衍生物質(zhì)。例如，小鼠的cathelin是具有氨基酸序列NH2_RLAGLLRKGGEKIGEKLKKIGOKIKNFFQKLVPQPE-C00H的肽。相關(guān)的或衍生的cathelin物質(zhì)包含cathelin序列的全部或具有至少15-20個(gè)氨基酸殘基的部分。衍生可包括用不在20個(gè)標(biāo)準(zhǔn)氨基酸之內(nèi)的氨基酸進(jìn)行的對(duì)天然氨基酸的替代或修飾。此外，可將更多的陽離子殘基引入所述cathelin分子中。這些cathelin分子優(yōu)選地與抗原組合。這些cathelin分子令人驚訝地顯示出也可有效的作為抗原的佐劑而無需添加另外的佐劑。因此可能利用這種cathelin分子作為疫苗制劑中的有效佐劑，可以有或沒有另外的免疫活化物質(zhì)。可依照本發(fā)明使用的另一優(yōu)選的多陽離子物質(zhì)是含有由3-7個(gè)疏水氨基酸組成的接頭隔開的至少2個(gè)KLK-基序的合成肽(國(guó)際專利申請(qǐng)W002/3M51，并入本文作為參考)。本發(fā)明的藥物組合物可進(jìn)一步包含免疫刺激核酸。免疫刺激核酸是，例如，含有核酸的中性或人造CpG，所述核酸是來自非脊椎動(dòng)物的核酸短序列或者是在某一堿基段含非甲基化的胞嘧啶-鳥嘌呤雙核苷(CpG)的短寡核苷酸形式(ODNs)(例如，參見WO96/02555)?；蛘?，也可優(yōu)選地將如WO01/93903中所述基于肌苷和胞苷的核酸或含脫氧肌苷和/或脫氧尿苷殘基的脫氧核酸(參見WO01/93905和PCT/EP02/05448，并入本文作為參考)用作本發(fā)明的免疫刺激核酸。優(yōu)選地，不同免疫刺激核酸的混合物可按照本發(fā)明使用。也屬于本發(fā)明范圍的是任一上述聚陽離子化合物與任一上述免疫刺激核酸組合。優(yōu)選地，這種組合是根據(jù):W001/93905、WO02/32451、WO01/54720、WO01/93903、WO02/13857和PCT/EP02/05448以及奧地利專利申請(qǐng)A1924/2001所述，將這些文獻(xiàn)并入本文作為參考。另外或備選的這種疫苗組合物除了包含按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段以及它們的編碼核酸之外，還可包含神經(jīng)活性的化合物。優(yōu)選地，神經(jīng)活性的化合物是人生長(zhǎng)因子，例如在WO01/24822中所述的。同樣優(yōu)選的是，神經(jīng)活性的化合物與上述任一聚陽離子化合物和/或免疫刺激核酸組合。在另一方面，本發(fā)明涉及藥物組合物。這種藥物組合物是，例如，本文所述的疫苗。藥物組合物還是包含以下任一種化合物或其組合的藥物組合物按照本發(fā)明的核酸分子、按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段、按照本發(fā)明的載體、按照本發(fā)明的細(xì)胞、按照本發(fā)明的抗體、按照本發(fā)明的功能性核酸以及按照本發(fā)明的結(jié)合肽諸如抗促成素、按本文所述篩選的任何激動(dòng)劑和拮抗劑。與之有關(guān)的是可將任何這些化合物與未滅菌或滅菌載體諸如適于施用于受試者的藥用載體組合使用，以供細(xì)胞、組織或器官使用，。這些組合物包括，例如，培養(yǎng)基添加劑或治療有效量的本發(fā)明超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段和藥用載體或賦形劑。這些載體可包括，但不局限于鹽、緩沖鹽、右旋糖、水、甘油、乙醇及它們的組合。該制劑應(yīng)與施用模式相配。藥物組合物可以任一有效的、方便的形式施用，其中特別包括，例如，通過局部、口、肛門、陰道、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、肌肉內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)、氣管內(nèi)或皮內(nèi)途徑施用。在治療中或作為預(yù)防藥，可以將活性試劑作為可注射組合物，例如，作為無菌水性分散液，優(yōu)選地，作為等滲的無菌水性分散液，施用于個(gè)體?；蛘呓M合物可配置成局部應(yīng)用的制劑，例如以藥膏、霜、洗液、眼膏、滴眼液、滴耳液、漱口劑、浸漬敷料和縫合線和氣霧劑形式，且可包含合適的常規(guī)添加劑，包括，例如，防腐劑、幫助藥物滲透的溶劑以及在藥膏和霜中的潤(rùn)膚劑。這種局部制劑還可包含適合的常規(guī)載體，例如霜或軟膏基質(zhì)、以及用于洗液的乙醇或油醇。這種載體組成可占制劑重量的約-約98%，更通常的是組成高達(dá)制劑重量的約80%。除了上述治療之外，通?？梢詫⒈景l(fā)明組合物用作傷口處理劑以防止細(xì)菌粘附于傷口組織中暴露的基質(zhì)蛋白質(zhì)上，且可作為抗生素預(yù)防療法的另一備選方案或與其結(jié)合使用于牙科治療的預(yù)防性應(yīng)用中。疫苗組合物便利的是以可注射形式存在。可以使用常規(guī)的佐劑以增強(qiáng)免疫應(yīng)答。疫苗接種的適當(dāng)單位劑量是0.05-5μg抗原/kg體重，優(yōu)選地，施用這種劑量1-3次且間隔1-3周。采用指定的劑量范圍，應(yīng)不會(huì)觀察到本發(fā)明化合物的毒理學(xué)副作用，如果有就將停止它們施用于適當(dāng)個(gè)體。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及診斷和藥物包裝和試劑盒，其包含了填充有一種或多種本發(fā)明上述組合物成分的一個(gè)或多個(gè)容器。所述成分可以有效量、劑量、制劑或組合存在。與這種容器相關(guān)的是管理制藥的政府機(jī)構(gòu)規(guī)定形式的說明書、藥品或生物產(chǎn)品的用途或銷售，反映出制藥機(jī)構(gòu)同意該產(chǎn)品的應(yīng)用或銷售針對(duì)人進(jìn)行施用。與本發(fā)明有關(guān)的且涉及本文所述用途，諸如，例如，藥物組合物或疫苗的應(yīng)用的任何疾病具體而言是由鏈球菌，更優(yōu)選地由肺炎鏈球菌引起、連接或相關(guān)的疾病或疾病狀況。與此有關(guān)應(yīng)注意的是肺炎鏈球菌包含本文所述那些菌株在內(nèi)的數(shù)個(gè)菌株。涉及依照本發(fā)明待預(yù)防和/或治療與細(xì)菌感染相關(guān)、由其引起或與其有聯(lián)系的疾病除了包括細(xì)菌性咽炎之外，還包括人的中耳炎、肺炎、菌血癥、腦膜炎、腹膜炎和膿毒癥。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及利用按照本發(fā)明的任一超免疫血清反應(yīng)性抗原或核酸的篩選方法。象這樣的篩選方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的，且可對(duì)其進(jìn)行設(shè)計(jì)以篩選激動(dòng)劑或拮抗劑。優(yōu)選地，在抑制或阻礙按照本發(fā)明的任一超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段與相互作用配偶體的結(jié)合的情況下篩選拮抗劑。這種相互作用配偶體可以是天然存在的相互作用配偶體或非天然存在的相互作用配偶體。本發(fā)明還提供了篩選化合物的方法以鑒定化合物，所述化合物增強(qiáng)(激動(dòng)劑)或阻斷(拮抗劑)本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段或核酸分子的功能，諸如它們與結(jié)合分子的相互作用。篩選方法可涉及高通量。例如，為了篩選激動(dòng)劑或拮抗劑，分別按照本發(fā)明的核酸分子和核酸的相互作用配偶體可能是合成的反應(yīng)混合物、細(xì)胞區(qū)室，諸如膜、細(xì)胞被膜或細(xì)胞壁，或它們中任一種的制劑，可從表達(dá)結(jié)合本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的分子的細(xì)胞中制備它們。在可能是激動(dòng)劑或拮抗劑的候選分子缺乏或存在的條件下，將所述制劑與標(biāo)記的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段一起溫育。候選分子與結(jié)合分子結(jié)合的能力反映在被標(biāo)記配體的結(jié)合有所下降。無故結(jié)合的分子，即，不誘發(fā)超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的功能性作用的分子，最有可能是好的拮抗劑?？珊芎媒Y(jié)合且引起與超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段相同或非常接近的功能作用的分子是良好的激動(dòng)劑。潛在激動(dòng)劑和拮抗劑功能作用可通過，例如，在候選分子與細(xì)胞或適當(dāng)細(xì)胞制劑相互作用后測(cè)定報(bào)道體系的活性來檢測(cè)，且將此效用與本發(fā)明超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段或所引起作用與超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段相同的分子的效用進(jìn)行比較。這方面可用的報(bào)道體系包括但不局限于轉(zhuǎn)換成產(chǎn)物的比色分析的標(biāo)記底物、對(duì)超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段功能活性中的變化作出響應(yīng)的報(bào)道基因以及本領(lǐng)域已知的結(jié)合試驗(yàn)。檢測(cè)拮抗劑的另一實(shí)例是一種競(jìng)爭(zhēng)性試驗(yàn)，所述試驗(yàn)在適于進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)性抑制試驗(yàn)的條件下將本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段和具有結(jié)合膜的結(jié)合分子、重組結(jié)合分子、天然底物或配體或底物或配體模擬物的可能拮抗劑結(jié)合?？梢詫?duì)超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段進(jìn)行標(biāo)記，諸如放射性或比色分析化合物標(biāo)記，從而可準(zhǔn)確測(cè)定與結(jié)合分子結(jié)合或轉(zhuǎn)換成產(chǎn)物的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的分子數(shù)目以評(píng)估可能的拮抗劑的效力?？赡苄缘霓卓箘┌ㄅc本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段結(jié)合并從而抑制或消除其活性的小有機(jī)分子、肽、多肽和抗體?？赡艿霓卓箘┻€可以是結(jié)合于結(jié)合分子的同一位點(diǎn)且不會(huì)誘導(dǎo)產(chǎn)生本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的功能活性的小有機(jī)分子、肽，諸如緊密相連的蛋白質(zhì)或抗體等多肽。可能的拮抗劑包括結(jié)合并占據(jù)超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的結(jié)合位點(diǎn)因此阻礙其與細(xì)胞結(jié)合分子結(jié)合從而抑制正常生物學(xué)活性的小分子。小分子的實(shí)例包括但不局限于小的有機(jī)分子、肽或肽類似分子。其它的可能性拮抗劑包括反義分子(參見{Okano，H.等，1991}；0LIG0DE0XYNUCLE0TIDESASANTISENSEINHIBITORSOFGENEEXPRESSION;CRC出版社，BocaRation,FL(1988)，對(duì)這些分子的描述)。優(yōu)選的可能性拮抗劑包括本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的衍生物。用于本文時(shí)，按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段的活性是它們與其任一相互作用配偶體結(jié)合的能力或與自身的或任何相互作用配偶體結(jié)合的這種能力的程度。在某一具體方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段、核酸分子或抑制劑在干預(yù)病原體和被造成感染后遺癥的哺乳動(dòng)物宿主之間最初的物理學(xué)相互作用中的應(yīng)用。具體而言本發(fā)明的分子可用于i)防止肺炎鏈球菌對(duì)位于粘膜表面的哺乳動(dòng)物胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)以及留置裝置或傷口處的胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)的粘附；ii)封閉介于哺乳動(dòng)物胞外基質(zhì)蛋白質(zhì)和細(xì)菌蛋白質(zhì)之間并介導(dǎo)組織損傷或侵入的阻斷的細(xì)菌粘連；iii)或?qū)е旅庖叻烙奶颖?；iv)阻斷除了通過留置裝置植入或通過其它外科技術(shù)之外的方式，例如通過抑制營(yíng)養(yǎng)獲得引起的感染中發(fā)病的正常進(jìn)程?？梢詫⒈疚乃峁┑母鱾€(gè)DNA編碼序列用于抗菌化合物的探索和開發(fā)中?？梢詫⒈磉_(dá)后的編碼蛋白質(zhì)用作抗菌藥物篩選的靶目標(biāo)。此外，可以將編碼所述編碼蛋白質(zhì)氨基末端區(qū)域的DNA序列或相應(yīng)mRNA的aiine-Delgarno或其它翻譯促進(jìn)序列用于構(gòu)建反義序列以控制目的編碼序列的表達(dá)。可以將拮抗劑和激動(dòng)劑用于，例如，抑制鏈球菌，尤其是肺炎鏈球菌引起的疾病，諸如膿毒癥。另一方面，本發(fā)明涉及親和力裝置，所述的親和力裝置包括至少一種支持材料和附著在支持材料上的任一按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段。由于按照本發(fā)明的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段對(duì)其靶細(xì)胞或靶分子或其相互作用配偶體的特異性，如果符合結(jié)合條件，超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段可從應(yīng)用到支持材料的任一種樣品中選擇性的除去它們的相互作用配偶體。所述樣品可以是生物學(xué)或醫(yī)學(xué)樣品，包括但不局限于，發(fā)酵液、細(xì)胞碎片、細(xì)胞制劑、組織制劑、器官制劑、血液、尿、淋巴液、液體等。超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段可以共價(jià)或非共價(jià)方式附著于基質(zhì)上。合適的支持材料對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員是已知的，并且可選自包含纖維素、硅、玻璃、鋁、順磁珠、淀粉和葡聚糖的組。通過以下圖、實(shí)施例和序列表對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了進(jìn)一步的舉例說明，其中可見更多的特征、實(shí)施方案和優(yōu)勢(shì)。應(yīng)理解這些實(shí)施例只是以例證方式給出而不是對(duì)內(nèi)容的局限。與本發(fā)明有關(guān)圖1顯示了肺炎鏈球菌特異性人血清的特性。圖2顯示了來自肺炎鏈球菌血清型4的小片段基因組文庫LSPn-70的特性。圖3顯示了使用生物素化的人IgGs通過MACS選擇細(xì)菌細(xì)胞。圖4顯示了用鑒定的抗原進(jìn)行基因分布研究的實(shí)例。圖5顯示了在不同年齡組中和在肺炎球菌性疾病過程中的表位特異性抗體水平的實(shí)例。圖6顯示通過流式細(xì)胞計(jì)用表位特異性抗血清染色的細(xì)胞表面的實(shí)例。圖7顯示在體外試驗(yàn)中測(cè)定由選定的表位誘導(dǎo)的抗體的殺菌活性。圖8顯示了用選定的肺炎鏈球菌抗原進(jìn)行的主動(dòng)免疫在鼠致死率膿毒癥模型中的保護(hù)作用。圖9顯示了用選定的肺炎鏈球菌抗原產(chǎn)生的血清進(jìn)行的被動(dòng)免疫在鼠致死率膿毒癥模型中的保護(hù)作用。圖10顯示了對(duì)在SP2216抗原中的保護(hù)性結(jié)構(gòu)域進(jìn)行的鑒定。圖11顯示了由保護(hù)性抗原誘導(dǎo)的抗體對(duì)不同肺炎鏈球菌血清型的交叉反應(yīng)性。圖12顯示了天然SP2216變體的氨基酸序列的對(duì)比。圖13顯示了天然SP1732變體的氨基酸序列的對(duì)比。圖14顯示了天然SP2190變體的氨基酸序列的對(duì)比。表1顯示了用基因組肺炎鏈球菌文庫和人血清進(jìn)行的所有篩選的概況。表2顯示了用人血清進(jìn)行的表位血清學(xué)分析的總結(jié)。表3顯示了針對(duì)50個(gè)肺炎鏈球菌菌株中已鑒定抗原的基因分布分析概況。表4顯示了表面染色和殺菌活性測(cè)量的概況。本說明書中可提及的圖詳述如下。圖1顯示了通過免疫測(cè)試檢測(cè)的關(guān)于抗肺炎鏈球菌抗體的人血清的鑒定。將制備自肺炎鏈球菌血清型4莢膜陰性突變株的總細(xì)菌裂解物或培養(yǎng)物上清液部分用作包被抗原，通過標(biāo)準(zhǔn)ELISA來測(cè)量總抗-肺炎鏈球菌IgG和IgA抗體水平。以三個(gè)不同的血清稀釋度對(duì)來自具有侵入性疾病且正在恢復(fù)期的患者的97個(gè)血清樣品或者來自沒有肺炎鏈球菌鼻咽攜帶的健康成人的50個(gè)血清進(jìn)行分析。以(A)具有細(xì)菌裂解物的患者血清和(B)具有培養(yǎng)物上清液蛋白質(zhì)的健康成人血清顯示典型實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。將數(shù)據(jù)表示為ELISA單位(IgA10.OOOx,IgG50，000)，所述ELISA單位在檢測(cè)的線性范圍內(nèi)在血清稀釋度上通過在405nm處的吸光度計(jì)算。選擇和集中來自兩個(gè)供體組的2x5的血清通過細(xì)菌表面展示進(jìn)行抗原鑒定。圓圈指示包括在兩個(gè)患者庫(PSPn3-IgG，-IgA和PSPn7-IgG)和兩個(gè)健康者庫(NSPn4-IgG，-IgA和NSPn5_IgG)中的選定的血清。(C)通過ELISA在預(yù)選擇的血清上進(jìn)行免疫印跡分析以確保有關(guān)蛋白質(zhì)抗原的多重免疫反應(yīng)性。顯示了使用總細(xì)菌裂解物進(jìn)行的代表性實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，所述總細(xì)菌裂解物制備自肺炎鏈球菌血清型4莢膜陰性突變株和在5.000稀釋度的患者的血清。未經(jīng)選擇，將低效價(jià)血清包括進(jìn)去作為陰性對(duì)照。Mw:分子量標(biāo)記。(D)通過FACS進(jìn)行肺炎鏈球菌血清型4莢膜陰性突變株的表面染色以比較抗體與表面定位抗原的結(jié)合。以不同的濃度(0.5%-5%)使用人血清。顯示了以0.5%終濃度使用的患者血清的代表性數(shù)據(jù)。用FITC標(biāo)記的抗人IgGFab檢測(cè)信號(hào)并且用計(jì)算機(jī)程序CELLQuest對(duì)其進(jìn)行分析。(E)顯示了介于使用總細(xì)菌裂解物通過ELISA測(cè)量的IgG效價(jià)和用血清IgGs對(duì)整個(gè)活體肺炎鏈球菌進(jìn)行的表面染色之間的相關(guān)性。將IgG效價(jià)表示為ELISA單位，而將表面染色表示為通過計(jì)算機(jī)程序CELLQuest計(jì)算的染色細(xì)菌的平均熒光。圖2㈧顯示了肺炎鏈球菌類型4小片段基因組文庫，LSPn-70的片段大小分布。測(cè)序后，對(duì)609個(gè)隨機(jī)選擇克隆序列進(jìn)行修整以消除載體殘基，并對(duì)具有多種基因組片段大小的克隆數(shù)目進(jìn)行作圖。(B)顯示了肺炎鏈球菌染色體(按照TIGR4基因組數(shù)據(jù))上LSPn-70的同一套隨機(jī)測(cè)序克隆的分布圖解。圓圈表示與所注解ORF匹配的序列而矩形代表在+/+或者+/_方向上與非編碼染色體序列完全匹配的克隆。菱形標(biāo)出了具有嵌合序列的所有克隆的位置。堿基對(duì)中的數(shù)字間隔標(biāo)示于環(huán)形基因組上用于定位。在圖的底部給出了文庫中多個(gè)克隆組分配的數(shù)目和百分比。圖3㈧顯示了用生物素化人IgG進(jìn)行的MACS選擇。用IOyg生物素化的IgG(PSPn3-IgG，純化自人血清)篩選pMAL9.1中的LSPn-70文庫。作為陰性對(duì)照，在用于篩選的文庫細(xì)胞中不添加血清。針對(duì)各輪選擇均顯示了在第一和第二輪洗脫后選擇的細(xì)胞數(shù)(分別是上行和下行)。(B)顯示了通過細(xì)菌表面展示根據(jù)用人血清IgG庫(PSPn7-IgG，4yg/yl)進(jìn)行的免疫印跡分析而選擇的特異性克隆(1-26)的反應(yīng)性，所述人血清以13，000的稀釋度用于MACS的選擇。作為負(fù)荷對(duì)照，還用15，000稀釋度的超免疫兔血清且直接針對(duì)平臺(tái)蛋白(platformprotein)LamB的抗體分析相同的印跡。LB，來自表達(dá)LamB且無外源肽插入的克隆的提取物。圖4(A)顯示用于分析基因分布研究的肺炎鏈球菌的臨床分離株的不同血清型的圖示。(B)顯示用相應(yīng)的寡核苷酸進(jìn)行的對(duì)SP1604的基因分布的PCR分析。預(yù)計(jì)的PCR片段的大小是470bp。在A下列舉的1-50，肺炎鏈球菌菌株臨床分離物；_，未加入基因組DNA；+，來自肺炎鏈球血清型4的基因組DNA，將其用作文庫構(gòu)建的模板。圖5顯示在肺炎球菌性疾病過程中對(duì)表位特異性人血清IgG抗體水平的ELISA測(cè)量。從患有侵入性肺炎球菌疾病的患者中，縱向地收集疾病發(fā)生前(前)，急性期和恢復(fù)期的三個(gè)血清樣品。顯示了用兩組來自不同患者的血清進(jìn)行的代表性實(shí)驗(yàn)，所述血清是如所指示的與表示已鑒定抗原SP0069、SP0082、SP0117、SP1175、SP1937、SP2190和SP2216的月太反應(yīng)的(A)P1147和(B)P1150。使生物素標(biāo)記的肽與在200x和1.OOOx稀釋度的人血清樣品反應(yīng)，并且將數(shù)據(jù)表示為ELISA單位。圖6顯示通過流式細(xì)胞計(jì)檢測(cè)結(jié)合肺炎鏈球菌細(xì)胞表面的特異性抗體。在圖5A中將免疫前小鼠血清和針對(duì)肺炎鏈球菌血清型4裂解物產(chǎn)生的多克隆血清與肺炎鏈球菌菌株血清型4一起溫育并用流式細(xì)胞計(jì)進(jìn)行分析。對(duì)照顯示二次抗體對(duì)肺炎鏈球菌細(xì)胞表面的非特異結(jié)合水平。圖5B柱狀圖顯示，與針對(duì)平臺(tái)蛋白LamB的對(duì)照血清相比，由于抗-SP2216、抗-SP0117、抗-SP04M和抗-CRF1992抗體的特異性結(jié)合而使熒光增強(qiáng)。圖7顯示如體外殺傷試驗(yàn)所確定的表位特異性抗體的殺菌活性。對(duì)免疫血清的殺傷活性的測(cè)量與適當(dāng)?shù)膶?duì)照血清平行進(jìn)行，并相對(duì)適當(dāng)?shù)膶?duì)照血清進(jìn)行計(jì)算。將數(shù)據(jù)表示為殺傷的百分比，即由于抗體的存在而導(dǎo)致的細(xì)菌集落形成單位(cfu)的減少，所述抗體在用肺炎鏈球菌裂解物產(chǎn)生的超免疫(HI)多克隆小鼠血清中(A)，在用表達(dá)于LamB平臺(tái)蛋白中的SPOl17表位產(chǎn)生的免疫血清中(B)，以及在用表達(dá)于!^huA平臺(tái)蛋白的SP1287表位產(chǎn)生的小鼠免疫血清中(C)。對(duì)照血清代表免疫前血清(PI)，用大腸桿菌克隆表達(dá)并且不攜帶源于肺炎鏈球菌的表位的Lamb或!^huA誘導(dǎo)的血清。將肺炎鏈球菌血清型4細(xì)胞與小鼠吞噬細(xì)胞一起培育60分鐘，并且通過接種在血瓊脂平板后計(jì)算集落形成單位來對(duì)存活細(xì)菌進(jìn)行定量。圖8顯示通過在小鼠致死率模型中用選定的肺炎鏈球菌抗原進(jìn)行的主動(dòng)免疫來獲得的保護(hù)作用。用克隆自血清型4肺炎鏈球菌菌株并用血清型6B菌株激發(fā)的重組抗原免疫C3H小鼠(每個(gè)測(cè)試組10個(gè))。在激發(fā)后2-3周監(jiān)控存活狀況。A用SP0368、SP0667、SP2190和SP2216抗原免疫小鼠并用IO4集落形成單位的細(xì)菌靜脈內(nèi)地激發(fā)小鼠。將未免疫的小鼠用作陰性對(duì)照，而將I3SpA(SPOin)用作陽性對(duì)照。B用SP2190和SP2216抗原免疫小鼠，并用IO5的集落形成單位的細(xì)菌對(duì)其進(jìn)行腹膜內(nèi)地激發(fā)。將用PBS注射的小鼠或僅用佐劑(CFA/IFA)免疫的模擬試驗(yàn)用作陰性對(duì)照，而將I3SpA(SP0117)用作陽性對(duì)照。C用SP0498和SP1732抗原免疫小鼠并用IO5集落形成單位的細(xì)菌對(duì)其進(jìn)行腹膜內(nèi)地激發(fā)。將用PBS注射的小鼠用作陰性對(duì)照，而將I^spA(SP0117)用作陽性對(duì)照。圖9顯示在小鼠致死率模型中通過用選定的肺炎鏈球菌抗原產(chǎn)生的超免疫小鼠血清進(jìn)行的被動(dòng)免疫而獲得的保護(hù)。在用IO5集落形成單位的肺炎鏈球菌血清型6B細(xì)菌進(jìn)行腹膜內(nèi)激發(fā)兩小時(shí)前，對(duì)C3H小鼠(每組10只)腹膜內(nèi)地施用小鼠血清。激發(fā)后3周監(jiān)控存活狀況。提供150μ1用SP2190或SP2216產(chǎn)生的免疫血清，并補(bǔ)充以150μ1血清，所述血清來自首次實(shí)驗(yàn)的小鼠而非來自接受100μ1的每種抗-SP2190、抗-SP2216免疫血清和ΙΟΟμΙ來自首次實(shí)驗(yàn)的小鼠血清的小鼠。將陰性對(duì)照用來自PBS注射的、未注射的(未用過的)或非免疫CFA/IFA注射的小鼠的300μ1血清進(jìn)行處理。圖10顯示對(duì)在SP2216抗原中的保護(hù)性結(jié)構(gòu)域進(jìn)行的鑒定。A:SP2216的圖示說明通過inSilico(結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè))分析預(yù)測(cè)的兩個(gè)亞結(jié)構(gòu)域和通過細(xì)菌表面展示鑒定的表位的定位(灰色條紋和箭頭)。B用重組SP2216抗原全長(zhǎng)、N-端或C端結(jié)構(gòu)域?qū)3H小鼠(每個(gè)測(cè)試組10只)進(jìn)行免疫，并通過腹膜內(nèi)施予IO5集落形成單位的肺炎鏈球菌血清型6B菌株對(duì)其進(jìn)行激發(fā)。激發(fā)后2-3周監(jiān)控存活狀況。將非免疫的(注射CFA/IFA佐劑的)小鼠作為陰性對(duì)照，而將I3SpA(SP0117)作為陽性對(duì)照。圖11是通過分析不同的肺炎鏈球菌血清型顯示的抗體的交叉反應(yīng)性。用制備自代表48個(gè)不同血清型的肺炎鏈球菌的60個(gè)臨床分離株的細(xì)菌裂解物以及使用用克隆自血清型4菌株的SP1732、SP2190和SP2216重組抗原產(chǎn)生的血清進(jìn)行免疫印跡分析以測(cè)試抗體的交叉反應(yīng)性。將關(guān)于7個(gè)不同血清型(泳道1-7)的結(jié)果顯示為取自完整分析的數(shù)據(jù)。Mw分子量標(biāo)記。圖12顯示在肺炎鏈球菌的不同臨床分離株中表達(dá)的天然SP2216變體中檢測(cè)的氨基酸交換。通過DNA測(cè)序分析來自代表47個(gè)不同肺炎鏈球菌血清型的47株臨床分離株的SP2216基因。顯示了那些相對(duì)于公開的TIGR4基因組序列具有氨基酸交換的血清型的翻譯的氨基酸序列。圖13顯示了在表達(dá)于肺炎鏈球菌的不同臨床分離株中的天然SP1732變體中檢測(cè)到的氨基酸交換。通過DNA測(cè)序分析了代表6個(gè)主要肺炎鏈球菌血清型(4，6B，9V，18C，19F，23F)的6個(gè)不同臨床分離株的SP1732基因。顯示了那些相對(duì)于公開的TIGR4(血清型4)基因組序列具有氨基酸交換的血清型的翻譯的氨基酸序列。圖14顯示了在表達(dá)于肺炎鏈球菌的不同臨床分離株中的天然SP2190變體中檢測(cè)到的氨基酸交換。通過DNA測(cè)序分析了代表7個(gè)主要肺炎鏈球菌血清型G，6B，9V，14，18C，19F，23F)的7個(gè)不同臨床分離株的SP2190基因。顯示了那些相對(duì)于公開的TIGR4(血清型4)基因組序列具有氨基酸交換的血清型的翻譯的氨基酸序列。由于缺失在一些基因中間部分的序列信息，單獨(dú)顯示N-端和C端的氨基酸對(duì)比。A:N-端氨基酸序列；B:C-端氨基酸序列。表1用細(xì)菌表面展示鑒定的免疫原性蛋白質(zhì)。A，用NSPn4-IgA(362)鑒定在fhuA中的300bp文庫，B，用NSPn4_IgG(832)鑒定在fhuA中的300bp文庫，C，用NSPn5-IgG(872)鑒定在fhuA中的300bp文庫，D，用PSPn3-IgA(361)鑒定的在fhuA中的300bp文庫，E，用PSPn3_IgG(575)鑒定的在fhuA中的300bp文庫，F(xiàn)，用PSPn7-IgG(795)鑒定在fhuA中的300bp文庫，G，用NSPn4_IgA(1043)鑒定IamB中的70bp文庫，H，用NSPn4_IgG(9)鑒定在IamB中的70bp文庫，I，用NSPn5-IgG(527)鑒定在IamB中的70bp文庫，K，用PSPn3_IgA(1121)鑒定在IamB中的70bp文庫，L，用PSPn3-IgG(1242)鑒定的在IamB中的70bp文庫，M，用PSPn7_IgG(514)鑒定的在IamB中的70bp文庫；*長(zhǎng)于5個(gè)氨基酸的抗原序列的預(yù)測(cè)用程序ANTIGENIC{Kolaskar，Α.等，1990}進(jìn)行。表2關(guān)于人血清的表位血清學(xué)。顯示了代表用個(gè)別人血清選定表位的個(gè)別合成肽的免疫反應(yīng)性。反應(yīng)性范圍是模式/灰色編碼；白色_(<50U)，淺灰色+(50-119U)，深灰色++(120-199U)，黑色+++(200-500U)以及垂直交叉++++(>500U)。在背景校正后從OD4tl5nm的讀數(shù)和血清稀釋度計(jì)算ELISA單位(U)。S表示由所有反應(yīng)性的總和(所有+數(shù)目的相加)計(jì)算的得分；測(cè)量Pl至P13血清是高效價(jià)的，并且來自患有侵入性肺炎疾病的患者而附至NlO血清來自具有高抗-肺炎鏈球菌效價(jià)的健康成人。S代表評(píng)分。免疫反應(yīng)性的總和是-=0;+=1；++=2；+++=3和++++=4。在從和至欄中給出按照TIGR4菌株的基因組注釋的合成肽在抗原開放閱讀框(ORF)中的定位，分別指示第一個(gè)和最后一個(gè)氨基酸殘基。肽名稱在注釋的開放閱讀框SPOl17中存在的SPOl17.1-7；在SP0408的備選的開放閱讀框中的可能的新的開放閱讀框，ARF0408.1；在完整的SPO129中的可能的新開放閱讀框，CRFO129.1。表3肺炎鏈球菌菌株中的基因分布。用特異于相應(yīng)抗原編碼基因的寡核苷酸通過PCR檢測(cè)圖4A中所示的50個(gè)肺炎鏈球菌菌株。對(duì)一個(gè)選定PCR片段的PCR片段進(jìn)行測(cè)序以證實(shí)正確DNA片段的擴(kuò)增。*，與肺炎鏈球菌TIGR4(血清型4)相比，在血清型14菌株中的氨基酸替代的數(shù)目。#，因?yàn)榛虿淮嬖谟谘逍?4菌株中而用于測(cè)序的備選菌株。表4抗原性表位的表面定位和表位特異性抗體的功能性通過使用用具有質(zhì)粒的大腸桿菌克隆免疫產(chǎn)生的小鼠血清以圖6所述和顯示的方法測(cè)試45個(gè)肺炎鏈球菌抗原的表面定位，所述質(zhì)粒編碼與肺炎鏈球菌肽融合的平臺(tái)蛋白！^!!^或冊(cè)仏。將數(shù)據(jù)歸納于標(biāo)記為FACS的欄中。如實(shí)施例的圖7所顯示，將非常相同的免疫試劑用在體外殺傷實(shí)驗(yàn)中，并將通過FACS測(cè)試為陽性的所有抗原表示在PK(吞噬殺傷)欄中。陰性結(jié)果，+:在所有進(jìn)行的試驗(yàn)中不是一直都為陽性，++和+++是相對(duì)于對(duì)照試劑一直都為陽性。實(shí)施例實(shí)施例1基于人血清的抗肺炎鏈球菌抗體的特征鑒定和選擇，抗體篩選試劑的制備實(shí)驗(yàn)過程酶聯(lián)免疫測(cè)定法(ELISA).用稀釋于包被緩沖液(0.IM碳酸鈉pH9.2)的5_10μg/ml總蛋白包被ELISA平板(Maxisorb,Millipore)。在PBS-BSA中制備了三種血清的稀釋液(2，000X、10，000X、50，000X)。按照制造商的推薦(稀釋度1，000X)使用高特異性的辣根過氧化物酶(HRP)-偶聯(lián)的抗人IgG或抗人IgA二抗(SouthernBiotech)0基于自動(dòng)ELISA讀數(shù)儀(TECANSUNRISE)的OD4tl5nm讀數(shù)通過檢測(cè)底物(ABTQ向顯色產(chǎn)物的轉(zhuǎn)換從而對(duì)抗原-抗體復(fù)合物進(jìn)行定量。細(xì)菌抗原提取物的制備總細(xì)菌裂解產(chǎn)物將細(xì)菌過夜生長(zhǎng)于THBCTodd-HewittBroth)中，通過反復(fù)凍融循環(huán)進(jìn)行裂解溫育于干冰/乙醇混合物中直至凍結(jié)(1分鐘)，然后融解于37°C(5分鐘)重復(fù)3次。隨后進(jìn)行超聲波降解并通過離心收集上清(3，500rpm,15分鐘，4°C)。培養(yǎng)物上清液通過離心除去細(xì)菌后，通過將1份上清液與3份無水乙醇(abs.ethanol)混合用冰冷的乙醇沉淀過夜培養(yǎng)的細(xì)菌培養(yǎng)物上清液并于_20°C溫育過夜。通過離心收集沉淀(2，600g，15分鐘)。將干的沉淀或者溶解于PBS以備ELISA，或者溶解于尿素和SDS樣品緩沖液中以備SDS-PAGE和免疫印跡。用Bradford測(cè)試法檢測(cè)樣品的蛋白質(zhì)濃度。免疫印跡法從體外培養(yǎng)的肺炎鏈球菌血清型4無莢膜突變菌株中制備總細(xì)菌裂解物和培養(yǎng)物上清樣品。用BiofcidMini-Protean3Cell電泳系統(tǒng)通過SDS-PAGE分離10-25μg總蛋白/泳道并將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)到硝酸纖維素膜(ECL，AmershamPharmacia)上。在5%的牛奶中過夜封閉后，加入2，000倍稀釋的人血清，并將HRPO標(biāo)記的抗人IgG用于檢測(cè)。細(xì)菌表面染色流式細(xì)胞術(shù)分析進(jìn)行如下。肺炎鏈球菌血清型4無莢膜突變菌株在Todd-Hewitt肉湯中生長(zhǎng)過夜直到早期穩(wěn)定期。收集細(xì)胞并在Hanks平衡鹽溶液(HBSQ中洗滌兩次并基于00600歷的讀數(shù)將細(xì)胞密度調(diào)整到在10(^1HBSS中約IXIO6CFU,所述HBSS具有0.5%BSA。與人血清于0.5%和2%的最終濃度一起在4°C溫育60分鐘后，通過在過量HBSS，0.5%BSA中離心洗去未結(jié)合的抗體。對(duì)于檢測(cè)，將用熒光素(FITC)標(biāo)記的山羊抗人IgG二抗(F(ab’)2特異性片段與細(xì)胞一起在4°C溫育30分鐘。洗滌細(xì)胞后，用2%多聚甲醛固定細(xì)胞。用BectonDickinsonFACScan流式細(xì)胞儀檢測(cè)表面染色抗體并用計(jì)算機(jī)程序CELLQuest進(jìn)一步分析數(shù)據(jù)。純化抗體以用于基因組篩選?；诤Y選步驟中所用血清集合的總抗鏈球菌效價(jià)選擇來自患者以及健康組的5份血清。通過將熱滅活血清與全部大腸桿菌細(xì)胞(DH5ci，用pHIEll轉(zhuǎn)化，在與細(xì)菌表面展示所用相同的條件下生長(zhǎng))一起溫育去除抗大腸桿菌蛋白質(zhì)的抗體。依照制造商的說明書(UltraLinkImmobilizedProteinG,Pierce)通過蛋白G親和層析從收集的消耗血清中產(chǎn)生高度富集的IgG制品。IgA抗體也是通過親和層析利用固定于鏈霉親和素-瓊脂糖(GIBCOBRL)上的生物素標(biāo)記抗人IgA(S0UthernBiotech)進(jìn)行純化。通過SDS-PAGE、蛋白質(zhì)印跡、ELISA和蛋白質(zhì)濃度檢測(cè)檢查消耗和純化的效率。結(jié)果由人免疫系統(tǒng)產(chǎn)生并存在于人血清中的抗肺炎鏈球菌的抗體是抗原性蛋白質(zhì)的體內(nèi)表達(dá)及其免疫原性的指征。這些分子對(duì)于鑒定如本發(fā)明中所述方法中的個(gè)別抗原是必需的，所述鑒定是基于特異性抗鏈球菌抗體與相應(yīng)的肺炎鏈球菌肽或蛋白質(zhì)的相互作用。為了研究相關(guān)的抗體集合，由下列個(gè)體中收集人血清I.患有侵入性肺炎鏈球菌感染的恢復(fù)期患者，諸如肺炎、菌血癥和腦膜炎(通過醫(yī)學(xué)微生物學(xué)試驗(yàn)顯示肺炎鏈球菌是起因)的患者，II.取樣時(shí)沒有帶菌的健康成人。肺炎鏈球菌建群和感染是常見的，并且作為來自以往接觸的天然免疫的結(jié)果呈現(xiàn)抗體。通過一系列的免疫測(cè)試對(duì)來自患者的97份血清樣品和來自健康成人的50份血清的抗肺炎鏈球菌抗體進(jìn)行特征鑒定。利用兩種不同的抗原制品，諸如由肺炎鏈球菌血清型4無莢膜突變菌株制備的細(xì)菌總提取物和培養(yǎng)物上清液蛋白質(zhì)，通過ELISA進(jìn)行基本的特征鑒定。我們分析無莢膜株是一個(gè)重要的方面，因?yàn)槲覀儽苊饬擞裳逍吞禺愋缘呢S富抗莢膜多糖抗體產(chǎn)生的反應(yīng)性。最近報(bào)道了不僅IgG，而且IgA血清抗體也能夠通過PMNs的FcRlII受體識(shí)別并且促進(jìn)調(diào)理作用{PhiIlips-Quagllata,J等，2000}；(Shibuya，Α.等，2000)。IgA抗體的基本作用是中和作用，主要是在粘膜表面。血清IgA的水平反映二聚體分泌型IgA的性質(zhì)、數(shù)量和特異性。為此不僅對(duì)血清收集物分析抗鏈球菌IgG，還分析IgA水平。在ELISA分析中，利用高度特異性的第二試劑檢測(cè)來自諸如IgG和IgA的高度親和性類型的抗體，但是避免IgM。IgM抗體的產(chǎn)生發(fā)生于初級(jí)適應(yīng)性體液反應(yīng)期間，并且導(dǎo)致低親和性的抗體，而IgG和IgA抗體已經(jīng)進(jìn)行過親和性突變，并在抵抗或預(yù)防疾病中更有價(jià)值。在給定的稀釋度中比較抗體效價(jià)，其中反應(yīng)是線性的(圖IA和1B.)?；贗gG和IgA針對(duì)兩種復(fù)合抗原性混合物的反應(yīng)性對(duì)血清進(jìn)行分級(jí)，選擇最高的通過免疫印跡作進(jìn)一步測(cè)試。這種分析確認(rèn)預(yù)選擇血清針對(duì)多種肺炎球菌蛋白的高度抗體反應(yīng)性，特別是在與未選擇的低效價(jià)血清進(jìn)行比較時(shí)(圖1C)。血清的ELISA分級(jí)還與相同肺炎鏈球菌株的表面染色十分關(guān)聯(lián)(圖ID和1E)，這提示通過ELISA檢測(cè)的多數(shù)抗體與表面抗原相對(duì)應(yīng)。這種廣泛的抗體特征鑒定方法已經(jīng)導(dǎo)致抗肺炎球菌超免疫血清的清楚鑒定。將來自患者和健康供體組的2x5份選擇的血清合并以便進(jìn)一步富集豐富的抗體，但仍然具有不同個(gè)體的抗體集合的表現(xiàn)。通過親和層析從合并的血清中純化IgG和IgA抗體，并除去大腸桿菌反應(yīng)性抗體以避免細(xì)菌表面展示篩選中的背景。實(shí)施例2肺炎鏈球菌的高度隨機(jī)且框架選定的小片段基因組DNA文庫的產(chǎn)生實(shí)驗(yàn)步驟鏈球菌基因組DNA的制備。將來自凍存穿刺斜面的肺炎鏈球菌血清型4(臨床分離物，用傳統(tǒng)血清型進(jìn)行分型)接種于50mlTodd-HewittBroth培養(yǎng)基中并在37°C通風(fēng)振蕩培養(yǎng)18小時(shí)。隨后收獲培養(yǎng)基，以l，600xg離心15分鐘并去上清。細(xì)菌沉淀用PBS洗3次并小心重懸于0.5ml溶菌酶溶液(100mg/ml)中。加入0.Iml的10mg/ml熱處理RNaseA和20U的RNaseTl，小心混和并將此溶液在37°C保溫1小時(shí)。加入0.2ml的20%SDS溶液和0.Iml的蛋白酶K(10mg/ml)后將此試管在55°C溫育過夜。隨后加入1/3體積的飽和NaCl并將該溶液在4°C溫育20分鐘。在微量離心管中沉淀提取物(13，OOOrpm)并將上清液轉(zhuǎn)移至新管中。用Wi0H/CHC13/IAAQ5241)和CHC13/IAAQ41)抽提該溶液。通過加入0.6倍體積的異丙醇于室溫沉淀DNA，用消毒的巴斯德移液管從所述溶液中將DNA纏繞在上面并轉(zhuǎn)移入含80%冰凍乙醇的試管中。通過以10-12，OOOxg離心沉淀回收DNA，隨后進(jìn)行空氣干燥并溶于ddH20中。小基因組DNA片段的制備。將基因組DNA片段用杯狀洞角超聲波儀(裝備了BB5杯狀洞角的BandelinSonoplusUV2200超聲波儀，10秒脈沖，100%功率輸出)機(jī)械切割成大小150_300bp之間的片段或通過溫和的DNaseI處理(Novagen)切割成大小50_70bp范圍內(nèi)的片段。觀察到當(dāng)將DNA斷裂成150-300bp大小范圍內(nèi)的片段時(shí)，超聲波降解法產(chǎn)生了密集得多的片段大小分布。不過，盡管DNA廣泛暴露于超聲波誘導(dǎo)的流體力學(xué)剪切力中，并不能有效和可重復(fù)地實(shí)現(xiàn)隨后的片段大小減小。所以，利用Novagen的鳥槍裂解試劑盒通過溫和的DNaseI處理獲得50_70bp大小的片段。制備試劑盒所提供的DNaseI的120稀釋液并在胞(12存在的條件下于60μ1的體積中在20°C消化5分鐘以確保酶的雙鏈切割。用2μ1的0.5MEDTA終止反應(yīng)并在2%TAE-瓊脂糖凝膠上評(píng)估片段化效率。此處理導(dǎo)致基因組DNA全部斷裂成近似50-70bp的片段。隨后在存在每種dNTP100μM的條件下用T4DNA聚合酶將片段末端補(bǔ)平以保證末端的有效對(duì)齊。片段可立即用于連接反應(yīng)或凍存于_20°C備用。載體的描述。在pASK-IBA主鏈{Skerra，A.，1994}上構(gòu)建載體pMAL4.31，用卡那霉素抗性基因調(diào)換內(nèi)酰胺酶(bla)基因。此外將bla基因克隆入多克隆位點(diǎn)。編碼成熟β-內(nèi)酰胺酶的序列之前有ompA的前導(dǎo)序列以使其能有效分泌穿過細(xì)胞質(zhì)膜。而且編碼成熟β-內(nèi)酰胺酶的頭12個(gè)氨基酸的序列(間隔序列)接著ompA前導(dǎo)肽序列之后以避免序列直接在前導(dǎo)肽酶切割位點(diǎn)之后融合，因?yàn)?，例如，此區(qū)域的正電荷氨基酸簇會(huì)減少或完全破壞穿越細(xì)胞質(zhì)膜的遷移{KajaVa，A.等，2000}。SmaI限制性位點(diǎn)是用于文庫插入的。用于回收選定片段的上游FseI位點(diǎn)和下游NotI位點(diǎn)在SmaI位點(diǎn)兩側(cè)。所述的三個(gè)限制性位點(diǎn)在編碼所述的12個(gè)氨基酸間隔序列的序列之后插入，插入方式是bla基因轉(zhuǎn)錄于-1閱讀框架中，導(dǎo)致在NotI位點(diǎn)之后15bp產(chǎn)生了一個(gè)終止密碼子。+Ibp插入恢復(fù)了blaORF從而產(chǎn)生了β內(nèi)酰胺酶蛋白并隨之獲得了氨芐青霉素抗性。通過將IamB基因克隆入pEHl的多克隆位點(diǎn)構(gòu)建載體pMAL9.l{Hashemzadeh-Bonehi,L.等，1998}。隨后，在第巧4位氨基酸之后將含限制位點(diǎn)FseI、SmaI和NotI的序列插入IamB中。此插入的閱讀框架以此方式構(gòu)建，即，通過用FseI和NotI消化從質(zhì)粒pMAL4.31切下框架選定的DNA片段進(jìn)行轉(zhuǎn)移產(chǎn)生了IamB的連續(xù)閱讀框架以及各自的插入片段。通過將btuB基因克隆入pEHl的多克隆位點(diǎn)構(gòu)建載體pMALlO.1。隨后，在第236位氨基酸之后將含限制位點(diǎn)FseIJbaI和NotI的序列插入btuB中。此插入的閱讀框架以此方式選擇，即，通過用FseI和NotI消化從質(zhì)粒pMAL4.31切下框架選定的DNA片段進(jìn)行轉(zhuǎn)移產(chǎn)生了btuB的連續(xù)閱讀框架以及各自的插入片段。通過將fhuA基因克隆入pEHl的多克隆位點(diǎn)構(gòu)建載體pHIEll。隨后，在第405位氨基酸之后將含限制位點(diǎn)FseIJbaI和NotI的序列插入fhuA中。此插入的閱讀框架以此方式選擇，即，通過用FseI和NotI消化從質(zhì)粒pMAL4.31切下框架選定的DNA片段進(jìn)行轉(zhuǎn)移產(chǎn)生了fhuA的連續(xù)閱讀框架以及各自的插入片段。對(duì)于框架選擇的文庫克隆和評(píng)估。將肺炎鏈球菌基因組DNA片段連接入載體PMAL4.31的SmaI位點(diǎn)中。將重組DNA通過電穿孔進(jìn)入DHlOB電感受態(tài)大腸桿菌細(xì)胞(GIBC0BRL)并將轉(zhuǎn)化子鋪于補(bǔ)充了卡那霉素(50μg/ml)和氨芐青霉素(50μg/ml)的LB瓊脂上。平板在37°C溫育過夜并收集菌落進(jìn)行大量DNA提取。貯藏并保留一個(gè)有代表性的平板以便收集菌落供菌落PCR分析和大規(guī)模測(cè)序。最初用簡(jiǎn)單菌落PCR檢測(cè)確定大致的片段大小分布以及插入效率。結(jié)合插入位點(diǎn)的完整性以及框架選擇的精確性(3n+l準(zhǔn)則)由測(cè)序數(shù)據(jù)評(píng)估片段的精確大小。有關(guān)細(xì)菌表面展示的文庫克隆和評(píng)估。用限制性酶FseI和NotI從含肺炎鏈球菌文庫的pMAL4.31載體上切下基因組DNA片段。隨后將全部片段群轉(zhuǎn)移入已用FseI和NotI消化的質(zhì)粒PMAL9.1(LamB)或pHIEllO^huA)。利用這兩種識(shí)別8bp富含GC序列的限制性酶，在各個(gè)平臺(tái)載體中保持PMAL4.31載體中選定的閱讀框架。然后通過電穿孔將所述質(zhì)粒文庫轉(zhuǎn)化入大腸桿菌DH5ci細(xì)胞中。將細(xì)胞鋪于補(bǔ)充了50μg/ml卡那霉素的大LB瓊脂平板上并以產(chǎn)生清晰可見單菌落的密度在37°C培養(yǎng)過夜。隨后將細(xì)胞從這些平板表面刮下，用新鮮LB培養(yǎng)基漂洗并以等份試樣貯存于-80°C以備文庫篩選。結(jié)果用于框架選擇的文庫。在pMAL4.31載體中產(chǎn)生了大小分別約為70和300bp的兩個(gè)文庫(LSPn70和LSPn300)。對(duì)于每個(gè)文庫而言，大約1μgpMAL4.31質(zhì)粒DNA和50ng片段化的肺炎鏈球菌基因組DNA的連接和隨后的轉(zhuǎn)化在框架選擇后產(chǎn)生了4χ105-2χ106個(gè)克隆。為了評(píng)估文庫的隨機(jī)性，對(duì)大約600個(gè)隨機(jī)選擇的LSPn70克隆進(jìn)行測(cè)序。生物信息分析顯示這些克隆中只有極少的克隆出現(xiàn)了一次以上。另外，還顯示出90%的克隆大小落在大小25-100bp之間的范圍內(nèi)，平均大小為52bp(圖2)。幾乎所有序列都遵從3n+l原則，顯示出所有克隆均為正確的框架選擇。細(xì)菌表面展示文庫。大腸桿菌表面的肽展示要求將來自LSPn文庫的插入片段從框架選擇載體PMAL4.31轉(zhuǎn)移至展示質(zhì)粒pMAL9.1(LamB)或pHIEll(FhuA)。用FseI和NotI限制酶切割基因組DNA片段而5ng插入片段與0.1μg質(zhì)粒DNA連接并隨后轉(zhuǎn)化入DH5α細(xì)胞產(chǎn)生了2-5χ106個(gè)克隆。將克隆從LB平板上刮下并凍存而無需進(jìn)一步擴(kuò)增。實(shí)施例3用細(xì)菌表面展示基因文庫和人血清鑒定來自肺炎鏈球菌的高免疫原性肽序列實(shí)驗(yàn)步驟MACS篩選。將來自給定文庫的約2.切108個(gè)細(xì)胞在補(bǔ)充了50μg/ml卡那霉素的5mlLB培養(yǎng)基中于37°C生長(zhǎng)2小時(shí)。通過加入ImMIPTG30分鐘誘導(dǎo)表達(dá)。用新鮮的LB培養(yǎng)基漂洗細(xì)胞兩次并將大約MlO7個(gè)細(xì)胞重懸于100μ1LB培養(yǎng)基中并轉(zhuǎn)移至Eppendorf管中。將純化自血清的10μg生物素化的人Ig(iS加入細(xì)胞中并將此懸浮液在4°C溫和搖動(dòng)溫育過夜。加入900μ1LB培養(yǎng)基，將懸浮液混和并隨后在4°C于6，OOOrpm離心10分鐘(對(duì)于IgA篩選而言，使用10μg的純化IgA并用生物素化的抗人IgG二抗捕捉它們)。用ImlLB漂洗細(xì)胞一次，然后重懸于100μ1LB培養(yǎng)基中。加入10μ1與鏈霉親和素偶聯(lián)的MACS微珠(MiltenyiBiotech,Germany)并在4°C繼續(xù)溫育20分鐘。之后加入900μ1LB培養(yǎng)基并將MACS微珠細(xì)胞懸浮液加到固定于磁鐵上且已平衡好的MS柱(MiltenyiBiotech,Germany)上。(所述MS柱通過用Iml70%乙醇洗滌一次和^iilLB培養(yǎng)基洗滌兩次進(jìn)行平衡。)隨后用:3mlLB培養(yǎng)基洗柱三次。去除磁鐵后，用^iilLB培養(yǎng)基洗脫細(xì)胞。用3mlLB培養(yǎng)基洗柱后，將2ml洗脫液再次加到同一柱上并重復(fù)洗滌和洗脫步驟。第三次進(jìn)行上樣、洗滌和洗脫操作，產(chǎn)生最終的洗脫液ani。第二輪篩選如下進(jìn)行。通過離心收集最終的洗脫液中的細(xì)胞并重懸于補(bǔ)充了50μg/ml卡那霉素的1mlLB培養(yǎng)基中。將培養(yǎng)物在37°C溫育90分鐘隨后用ImMIPTG誘導(dǎo)30分鐘。隨后收集細(xì)胞，用ImlLB培養(yǎng)基洗滌一次并重懸于10μ1LB培養(yǎng)基中。再次加入10μg生物素化的人IgG并將懸浮液在4°C溫和搖動(dòng)溫育過夜。所有其它步驟完全與第一輪篩選相同。將兩輪篩選后的細(xì)胞鋪于補(bǔ)充有50μg/ml卡那霉素的LB瓊脂平板上并于37°C培養(yǎng)過夜。通過測(cè)序和蛋白質(zhì)印跡分析評(píng)估選定的克隆。將選定的克隆在37°C于補(bǔ)充有50μg/ml卡那霉素的:3mlLB培養(yǎng)基中培養(yǎng)過夜以便用標(biāo)準(zhǔn)方法制備質(zhì)粒DNA。在MWG(Germany)上或與TIGR(U.S.A.)協(xié)作完成測(cè)序。為了進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析，用10%SDS-PAGE分離大約10_20μg總細(xì)胞蛋白并印HybondCII(AmershamPharmaciaBiotech,England)±。ffit^J15，000人血清作為一抗和15，000稀釋的偶聯(lián)至HRP的抗人IgG或IgA抗體作為二抗檢測(cè)LamB或FhuA融合蛋白。用ECL檢測(cè)試劑盒(AmershamPharmaciaBiotech,England)進(jìn)行檢測(cè)?；蛘?，用兔抗i^huA或兔抗LamB多克隆免疫血清作為一抗與偶聯(lián)至HRP的相應(yīng)二抗聯(lián)合進(jìn)行融合蛋白的檢測(cè)。結(jié)果使用生物素化的Igs通過磁性活化細(xì)胞分選術(shù)(MACQ篩選細(xì)菌表面展示文庫。用來自患者血清或健康人血清的生物素化人IgGs和IgA集合篩選pMAL9.1中的LSPn70文庫和pHIEll中的LSPn300文庫(參閱實(shí)施例1從人血清制備抗體)。如在實(shí)驗(yàn)步驟下所述完成選擇步驟。圖3A顯示了用LSPn-70文庫和PSPn3-IgGs進(jìn)行篩選的一個(gè)代表性的實(shí)例。正如從MACS篩選的第一輪選擇后的菌落數(shù)中可見的，最終回收到的細(xì)胞總數(shù)從hlO7個(gè)細(xì)胞急劇下降到大約切104個(gè)細(xì)胞，而不加入抗體進(jìn)行的選擇則顯示下降到大約^clO3個(gè)細(xì)胞(圖3A)。第二輪之后，用PSPn3-Ig(iS回收到相似數(shù)目的細(xì)胞，而當(dāng)不加入來自人血清的IgG時(shí)回收到的細(xì)胞少于10個(gè)，這清楚地證明了選擇依賴于肺炎鏈球菌特異性抗體。為了評(píng)估篩選的效果，隨機(jī)挑選26個(gè)選定的克隆并進(jìn)行使用篩選性IgG合并物(PSPn7)的免疫印跡分析(圖3B)。此分析表明約90%的選定克隆顯示出對(duì)存在于相關(guān)血清中的抗體的反應(yīng)性而表達(dá)無肺炎鏈球菌特異性插入片段的LamB的對(duì)照菌株則不與同一種血清反應(yīng)。通常，觀察到的反應(yīng)比例在35-90%范圍內(nèi)。菌落PCR分析顯示所有的選定克隆都含有預(yù)期大小范圍內(nèi)的插入片段。隨后對(duì)大量隨機(jī)挑選的克隆(600-1200個(gè)克隆/每次篩選)進(jìn)行測(cè)序，鑒定出用于篩選的人血清抗體特異地識(shí)別的基因和相應(yīng)的肽或蛋白質(zhì)序列。特定克隆被選擇的頻率至少在部分程度上反映了用于選擇的血清中識(shí)別該克隆所呈遞表位的特異抗體的豐度和/或親和力。在這方面令人吃驚的是，來自某些ORF(例如SP2216，SP0117,SP0641,SP2136，SP2190，SP0107，SP0082)的克隆被選擇次數(shù)超過100次，證明了它們的高度免疫原性特性。表1總結(jié)了獲自所有12個(gè)已進(jìn)行篩選的資料。表1中給出的所有克隆都已通過用來自單個(gè)克隆的全細(xì)胞提取物進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡分析證實(shí)以顯示與各個(gè)篩選中所用人血清集合的指征反應(yīng)性。正如從表1中可見的，將鑒定的ORF的獨(dú)特區(qū)域鑒定為免疫原性的，因?yàn)榇笮〔欢ǖ牡鞍踪|(zhì)片段通過平臺(tái)蛋白質(zhì)展示在表面上。更值得關(guān)注的是，通過細(xì)菌表面展示篩選所鑒定的大部分基因編碼附著于肺炎鏈球菌表面和/或被分泌的蛋白質(zhì)。這與肺炎鏈球菌毒性中表面附著或分泌蛋白質(zhì)的預(yù)期作用是一致的。實(shí)施例4用個(gè)體人血清對(duì)高度免疫原性肽序列的反應(yīng)性的評(píng)估。實(shí)驗(yàn)步驟肽合成利用標(biāo)準(zhǔn)F-moc化學(xué)法在Rink酰胺樹脂(P^)Chem,Tubingen,Germany)上用SyroII合成儀(Multisyntech，ffitten,Germany)小規(guī)模地合成肽(^ig樹脂，平行的至多288個(gè))。在裝配序列后，用Fmoc-印silon-氨基己酸(作為接頭)和生物素(Sigma，St.Louis,MO；像正常的氨基酸一樣進(jìn)行活化)延伸所述肽。用93%TFA，5%三乙基硅烷和2%水作用一小時(shí)將肽從樹脂上切下。真空下干燥肽并由乙腈/水(11)凍干三次。通過在ReflexIIIMALDI-TOF(Bruker，BremenGermany)進(jìn)行質(zhì)譜分析來檢驗(yàn)正確物質(zhì)的存在。使用所述肽而不需要進(jìn)一步純化。酶聯(lián)免疫測(cè)定法(ELISA)按照制造商的說明以10μg/ml的濃度將生物素標(biāo)記的肽(于N端)涂布于鏈霉親合素ELISA平板(EXICON)上。依照制造商的建議(稀釋度1，000χ)使用高特異性的辣根過氧化物酶(HRP)-偶聯(lián)的抗人IgG二抗(SouthernBiotech)0于兩種血清稀釋液，200X和1，000X中對(duì)血清進(jìn)行測(cè)試。人工涂布后，通過Gemini160ELISA機(jī)器人(TECAN)以嵌入式ELISA讀取器(GENIOS，TECAN)對(duì)肽平板進(jìn)行處理和分析。分析中包括大約110名患者和60名健康成人血清。在選定克隆的生物信息分析之后，設(shè)計(jì)并合成相應(yīng)的肽。如果表位具有超過26個(gè)氨基酸殘基，就制備重疊肽。用N末端生物素標(biāo)簽合成所有的肽并將其用作鏈霉親和素包被的ELISA平板上的包被試劑。分析分兩步進(jìn)行。首先，基于它們對(duì)個(gè)別血清的反應(yīng)性選擇肽，所述個(gè)別血清包括在用于制備供細(xì)菌表面展示的IgG和IgA篩選試劑的血清集合內(nèi)。對(duì)于2M個(gè)肽的血清反應(yīng)性的總結(jié)顯示于表2中，所述肽代表來自以20份用于抗原鑒定的人血清(代表5種血清的4種不同集合)進(jìn)行分析的基因組篩選的肺炎鏈球菌表位。通過基于陽性血清數(shù)目和反應(yīng)程度對(duì)每種肽計(jì)算的分值對(duì)肽進(jìn)行比較。所述的肽的范圍包括高度反應(yīng)性和廣泛反應(yīng)性的肽至弱陽性的肽。在最具有反應(yīng)性的肽中包括已知的抗原，其中一些還在有關(guān)鼻咽攜帶或膿毒癥的動(dòng)物攻擊模型中起保護(hù)作用(例如I^spA/SPOin，絲氨酸蛋白酶/SP0641，組氨酸三聯(lián)蛋白/SP117Q。未呈現(xiàn)陽性反應(yīng)的肽不包括在進(jìn)一步更詳細(xì)的研究中。其次，針對(duì)顯示出對(duì)篩選血清具有特異的高反應(yīng)性的肽檢測(cè)來自侵入性肺炎球菌病患者或來自健康成人和兒童的大量非預(yù)選個(gè)體血清。在疾病期間通過利用三份系列血清樣品對(duì)血清轉(zhuǎn)化測(cè)試高度陽性的肽，所述血清樣品從侵入性肺炎球菌病患者中縱向收集，第一份在疾病發(fā)生前(pre)，第二份在疾病的急性期(發(fā)病5天之內(nèi))而第三份在疾病的恢復(fù)期(發(fā)病后>3周)。兩個(gè)不同患者的兩次代表性ELISA實(shí)驗(yàn)得以顯示，展示出血清轉(zhuǎn)化為多種肽，提示表位特異性抗體水平在疾病發(fā)生前是低的，并在急性期和恢復(fù)期中得以誘導(dǎo)(圖5)。顯示這種抗體模式的抗原對(duì)于開發(fā)疫苗特別有價(jià)值(例如SP2216，SP2109,SP1175,SP0117,SP0082)。實(shí)施例5用鑒定自肺炎鏈球菌的高度免疫原性蛋白質(zhì)進(jìn)行的基因分布研究。實(shí)驗(yàn)步驟通過PCR進(jìn)行肺炎球菌抗原的基因分布研究。理想的疫苗抗原應(yīng)是存在于該疫苗所指向的所有或絕大部分靶生物體菌株內(nèi)的抗原。為了確定編碼已鑒定的肺炎鏈球菌抗原的基因是否普遍存在于肺炎鏈球菌菌株內(nèi)，用特異于目的基因的引物對(duì)一系列獨(dú)立的肺炎鏈球菌分離株進(jìn)行PCR。如圖4A中所示，獲得覆蓋了最頻繁出現(xiàn)于患者中的血清型的肺炎鏈球菌分離株。如果有可能覆蓋所有的已鑒定免疫原性表位，就針對(duì)所有已鑒定的ORF設(shè)計(jì)作為引物的寡核苷酸序列，產(chǎn)生大約1，OOObp的產(chǎn)物。如實(shí)施例2中所述制備所有的肺炎鏈球菌菌株的基因組DNA。按制造商的說明書(Invitrogen，TheNetherlands)用Taq聚合酶(IU)、200nMdNTPs、寡核苷酸各IOpMol和試劑盒在25μ1反應(yīng)體積內(nèi)進(jìn)行PCR。作為標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行30個(gè)循環(huán)(Ix5分鐘，95°C，30x:30秒95°C，30秒56°C，30秒72°C，Ix4分鐘.720C)，除非條件需修改以適合個(gè)別引物對(duì)。結(jié)果通過PCR檢測(cè)編碼免疫原性蛋白質(zhì)的所有已鑒定基因是否存在于50個(gè)不同的肺炎鏈球菌菌株中(圖4A)。作為一個(gè)實(shí)例，圖4B顯示了對(duì)于SP1604而言所有指定50個(gè)菌株的PCR反應(yīng)。正如明顯可見的，基因存在于所有被分析的菌株中。對(duì)來自類型14菌株的PCR片段進(jìn)行測(cè)序顯示，與肺炎鏈球菌類型4菌株相比，414bp中有6bp是不同的，導(dǎo)致這兩個(gè)分離株中三個(gè)氨基酸的差異。對(duì)于總共50個(gè)被分析基因中，有31個(gè)存在于所有被測(cè)試的菌株中，而9個(gè)基因在被測(cè)試的50個(gè)菌株中的10個(gè)以上菌株中缺乏(表幻。幾個(gè)基因(SP0667，SP0930)顯示出大小的差異且不存在于所有的分離菌株中。某些基因顯示出了大小的變化，但卻在所有被測(cè)菌株中都是保守的。對(duì)產(chǎn)自一種菌株的PCR片段進(jìn)行測(cè)序并隨后與類型4菌株比較證實(shí)了正確DNA片段的擴(kuò)增并顯示了表3中所指出的序列差異程度。重要的是，許多已鑒定抗原的序列和大小在所有菌株中都是很保守的且因此是預(yù)防肺炎球菌感染的新疫苗候選物。實(shí)施例6從來自肺炎鏈球菌并展示于大腸桿菌表面的高度免疫原性蛋白質(zhì)/肽所免疫的小鼠中獲得的免疫血清的鑒定。實(shí)驗(yàn)步驟從小鼠中產(chǎn)生免疫血清將含有編碼與肺炎鏈球菌肽融合的平臺(tái)蛋白的質(zhì)粒的大腸桿菌克隆在補(bǔ)充有5(^8/!111卡那霉素的1^培養(yǎng)基中于371培養(yǎng)。110稀釋過夜培養(yǎng)物，培養(yǎng)至0D_為0.5并用0.2mMIPTG誘導(dǎo)2小時(shí)。將沉淀的細(xì)菌細(xì)胞懸浮于PBS緩沖液中并在冰上通過超聲波降解法破裂，產(chǎn)生粗細(xì)胞提取物。根據(jù)OD6tltl測(cè)量值，將相當(dāng)于切107個(gè)細(xì)胞的等分試樣靜脈注射入NMRI小鼠中，2周后加強(qiáng)免疫一次。第二次注射1周后提取血清。通過肽ELISA測(cè)量表位特異的抗體水平?？乖捏w外表達(dá)通過免疫印跡檢測(cè)體外培養(yǎng)的肺炎鏈球菌血清型4的抗原表達(dá)。測(cè)試不同的生長(zhǎng)培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件以便檢測(cè)總裂解產(chǎn)物和細(xì)菌培養(yǎng)上清液中抗原的存在。當(dāng)檢測(cè)到相應(yīng)于預(yù)計(jì)的分子量和電泳遷移率的特定條帶時(shí)認(rèn)為表達(dá)得到確認(rèn)。細(xì)胞表面染色流式細(xì)胞術(shù)分析如下進(jìn)行。細(xì)菌在根據(jù)免疫印跡顯示導(dǎo)致抗原表達(dá)的培養(yǎng)條件下生長(zhǎng)。細(xì)胞在Hanks平衡鹽溶液(HBSQ中洗兩次并將細(xì)胞密度調(diào)整到在100μ1HBSS,0.5%BSA中大約為1X106CFU。與50-100倍稀釋的小鼠抗血清一起在4°C溫育30-60分鐘后，在過量HBSS，0.5%BSA中通過離心洗去未結(jié)合抗體。將用熒光素(FITC)特異標(biāo)記的山羊抗小鼠二抗(F(ab’)2片段與細(xì)胞一起在4°C保溫30-60分鐘。漂洗細(xì)胞后，用2%多聚甲醛固定細(xì)胞。用BectonDickinsonFACScan流式細(xì)胞儀檢測(cè)被結(jié)合的抗體并用計(jì)算機(jī)軟件CELLQuest進(jìn)一步分析數(shù)據(jù)。陰性對(duì)照血清包括小鼠免疫前血清和用制備自IPTG誘導(dǎo)的大腸桿菌細(xì)胞的裂解產(chǎn)物產(chǎn)生的小鼠多克隆血清，所述大腸桿菌是用編碼基因IamB或fhuA且無肺炎鏈球菌基因組插入片段的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的。殺菌(殺傷)試驗(yàn)將小鼠巨噬細(xì)胞(RAWM6.7或P388.Dl)和細(xì)菌溫育并通過菌落計(jì)數(shù)測(cè)定60分鐘后可存活細(xì)菌的損失。簡(jiǎn)而言之，細(xì)菌用Hanks平衡鹽溶液(HBSS)洗兩次并將細(xì)胞密度調(diào)整到在50μ1HBSS中大約1X105CFU。將細(xì)菌與小鼠血清(高達(dá)25%)和豚鼠補(bǔ)體(高達(dá)5%)以總體積ΙΟΟμΙ于4°C保溫60分鐘。將預(yù)調(diào)理的細(xì)菌與巨噬細(xì)胞(小鼠細(xì)胞系RAW264.7或P388.Dl；每100μ1為2Χ106個(gè)細(xì)胞)以120的比例混合并于37°C旋轉(zhuǎn)搖床上500rpm保溫。將各樣品的等分試樣稀釋于無菌水中并室溫溫育5分鐘以裂解巨噬細(xì)胞。然后將系列稀釋液鋪到Todd-HewittBroth瓊脂平板上。將平板在37°C溫育過夜，并用Coimtermat閃射計(jì)數(shù)器(IULInstruments)對(duì)菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)。對(duì)照血清包括小鼠免疫前血清和用制備自IPTG誘導(dǎo)的大腸桿菌的裂解產(chǎn)物產(chǎn)生的小鼠多克隆血清，所述大腸桿菌是用含有基因IamB或fhuA而無肺炎鏈球菌基因組插入片段的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的。結(jié)果抗原的體外表達(dá)。通過利用針對(duì)抗大腸桿菌克隆產(chǎn)生的血清在體外分析肺炎鏈球菌血清類型4中的抗原蛋白質(zhì)的表達(dá)，所述大腸桿菌克隆含有編碼與肺炎鏈球菌肽融合的平臺(tái)蛋白的質(zhì)粒。首先，利用大腸桿菌克隆通過肽ELISA和/或免疫印跡測(cè)定特異性抗體的存在，所述大腸桿菌克隆表達(dá)包埋于LamB或!^huA平臺(tái)蛋白中的給定表位。然后，使用制備自肺炎鏈球菌血清型4菌株的總細(xì)菌裂解物和培養(yǎng)上清液通過免疫印跡分析陽性血清(數(shù)據(jù)未顯示)。這種分析是確定蛋白質(zhì)是否全部表達(dá)的第一個(gè)步驟，并且如果是，在該生長(zhǎng)條件下，從而通過FACS分析評(píng)價(jià)多肽的表面表達(dá)?；谖墨I(xiàn)數(shù)據(jù)分析，不是所有的蛋白都在體外條件下表達(dá)。肺炎鏈球菌的細(xì)胞表面染色。隨后，細(xì)菌表面對(duì)于一些抗原性蛋白的可接近性通過基于流式細(xì)胞計(jì)的測(cè)試進(jìn)行證實(shí)。鏈球菌與未免疫的血清以及由肺炎鏈球菌裂解物或具有質(zhì)粒的大腸桿菌克隆產(chǎn)生的多克隆血清一起進(jìn)行溫育，所述質(zhì)粒編碼與肺炎鏈球菌肽融合的平臺(tái)蛋白，隨后用熒光標(biāo)記的二抗進(jìn)行檢測(cè)。如在圖6A中顯示的，由肺炎鏈球菌的裂解物產(chǎn)生的抗血清包含針對(duì)表面組分的抗體，肺炎鏈球菌血清型4細(xì)胞群體的熒光的明顯改變證實(shí)了這一點(diǎn)。對(duì)于針對(duì)許多已鑒定的肺炎球菌抗原的肽所產(chǎn)生的多克隆血清，觀察到了肺炎鏈球菌血清型4細(xì)胞的相似細(xì)胞表面染色(圖6B和表4)。在一些情況中，如通過柱狀圖(圖6B)的兩個(gè)峰的檢測(cè)指示的，細(xì)菌的亞群沒有被染色。這種現(xiàn)象可能是在細(xì)菌生長(zhǎng)過程中基因產(chǎn)物的差異表達(dá)、由其它表面分子或血漿蛋白質(zhì)導(dǎo)致的不充足的抗體水平或?qū)贵w結(jié)合的部分抑制的結(jié)果。體外殺菌活性。調(diào)理吞噬殺傷是宿主對(duì)胞外細(xì)菌，諸如肺炎鏈球菌的防衛(wèi)體系的基礎(chǔ)。如果由特殊抗原誘導(dǎo)的抗體能夠與活化的補(bǔ)體組分(Obi)結(jié)合，結(jié)合針對(duì)細(xì)菌抗原的抗體的細(xì)胞表面是易受調(diào)理素作用的并且由吞噬細(xì)胞(巨噬細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞)誘導(dǎo)殺傷(殺菌)。已經(jīng)顯示在體外試驗(yàn)中測(cè)量的人血清的抗-肺炎球菌殺菌活性可以與接種疫苗的個(gè)體的體內(nèi)保護(hù)作用具有相關(guān)性{Romero-Steiner，S.等，1999}。在圖7中顯示的實(shí)例和在表4中顯示的總結(jié)表示了用相應(yīng)表位在小鼠中產(chǎn)生的抗原特異性抗體測(cè)量的殺菌活性。按照這些數(shù)據(jù)，一些新的肺炎球菌抗原誘導(dǎo)了功能性抗體(例如SP0082，SP2216，SP2136，SP0454，SP0069，SP0369等)。重要的是，證實(shí)了眾所周知的保護(hù)性肺炎球菌抗原，PspA(SP0117)在非常相同的試驗(yàn)中是強(qiáng)陽性的。這些實(shí)驗(yàn)證實(shí)了生物信息預(yù)測(cè)，即許多蛋白質(zhì)因它們的信號(hào)肽序列而被輸出，此外顯示了它們存在于肺炎鏈球菌血清型4的細(xì)胞表面上。它們還證實(shí)對(duì)于由具有功能特性的人抗體的識(shí)別，這些蛋白質(zhì)是可獲得的，并且使它們成為對(duì)于開發(fā)針對(duì)肺炎球菌性疾病的疫苗有價(jià)值的候選物。實(shí)施例7對(duì)誘導(dǎo)保護(hù)性免疫應(yīng)答的肺炎球菌抗原的鑒定實(shí)驗(yàn)方法重組肺炎球菌蛋白質(zhì)的表達(dá)基因/DNA片段的克隆使用基因特異性引物通過PCR從肺炎鏈球菌(菌株T4，莢膜型4)的基因組中擴(kuò)增目標(biāo)基因/DNA片段。除了基因特異性部分以外，所述引物還具有協(xié)助擴(kuò)增的PCR產(chǎn)物定向克隆的限制性酶切位點(diǎn)。所述引物的基因退火(特異性)部分在長(zhǎng)度上的范圍介于15-M個(gè)堿基之間。用適當(dāng)?shù)南拗菩悦赶@得PCR產(chǎn)物并將其克隆在pET28b(+)載體上(N0VAGEN)。一旦證實(shí)了重組質(zhì)粒包含目標(biāo)基因，對(duì)作為表達(dá)宿主的大腸桿菌BL21stai·細(xì)胞(INVITR0GEN)進(jìn)行轉(zhuǎn)化。對(duì)這些細(xì)胞進(jìn)行優(yōu)化以有效地表達(dá)目標(biāo)基因。表汰和鈍化蛋白質(zhì)培養(yǎng)具有重組質(zhì)粒的大腸桿菌BL21star細(xì)胞直到在所需培養(yǎng)體積中達(dá)到對(duì)數(shù)期。一旦達(dá)到0.8的OD6tltlnm，用ImM的IPTG于37°C誘導(dǎo)培養(yǎng)物3小時(shí)。通過離心收獲所述細(xì)胞，通過凍融結(jié)合的方法裂解，隨后用‘Bug-buster，N0VAGEN’分裂細(xì)胞。通過離心，將裂解物分離成可溶的部分(上清液)和不可溶的部分(沉淀)。取決于蛋白質(zhì)的定位，隨后采用不同的純化策略。如果蛋白是在可溶的部分，通過使上述上清液與Ni-Agarose珠(Ni-NTA-Agarose，QIAGEN)結(jié)合來進(jìn)行蛋白質(zhì)的純化。由于在表達(dá)蛋白的C端或者N端或者兩端的五組氨酸(HIS)的存在，當(dāng)其它的污染蛋白質(zhì)被洗滌緩沖液從柱上洗滌下來時(shí)，其與Ni-agarose結(jié)合。用IOOmMimmidazole洗脫所述蛋白質(zhì)并且濃縮所述洗脫物，通過Bradford分析蛋白質(zhì)的濃度并通過PAGE和蛋白質(zhì)印跡檢查進(jìn)行檢測(cè)。如果所述蛋白質(zhì)存在于不可溶的部分中，將沉淀溶解在包含8M尿素的緩沖液中。使用上述的相同的材料和方法在變性條件下(在包含8M尿素的緩沖液中)進(jìn)行純化。濃縮洗脫物并以逐步方式進(jìn)行透析以去除所有的尿素。通過SDS-PAGE檢測(cè)所述蛋白質(zhì)并通過Bradford方法測(cè)量濃度。動(dòng)物保護(hù)研究使用雌性小鼠C3H(HeNHsd；A,B,C，D:agouti，野生型，自交)。主動(dòng)免疫皮下注射50yg的重組蛋白并用完全弗氏佐劑(CFA)輔助。在第14和第觀天，用相同量的蛋白加強(qiáng)免疫動(dòng)物兩次，但用不完全弗氏佐劑(IFA)輔助。將眾所周知的保護(hù)性抗原I^pA(SP0117)用作陽性對(duì)照，而將未免疫的(PBS或者CFA/IFA佐劑注射的)小鼠用作陰性對(duì)照。使用相應(yīng)的重組蛋白通過ELISA在第35-38天測(cè)量抗體效價(jià)，并測(cè)定其在200.00-1.000.000范圍內(nèi)(終點(diǎn)效價(jià))。被動(dòng)免疫在腹膜內(nèi)接種肺炎鏈球菌之前2小時(shí)，用150-300μ1小鼠血清對(duì)首次實(shí)驗(yàn)的小鼠進(jìn)行腹膜內(nèi)免疫。細(xì)菌激發(fā)制備肺炎鏈球菌的血清型6Β的冷凍甘油貯存物并用于所有的實(shí)驗(yàn)。通過0D600nm測(cè)量測(cè)定適當(dāng)估計(jì)的細(xì)胞數(shù)量。為了確定存在于制備自冷凍甘油貯存培養(yǎng)物的接種物中的真正存活的細(xì)胞數(shù)量，使用6個(gè)系列稀釋度通過接種在平板上確定集落形成單位。通過在鼠尾靜脈內(nèi)地注射或者腹膜內(nèi)地注射IO4-IO8細(xì)菌/小鼠。在激發(fā)后，通過監(jiān)控存活率2-3周來測(cè)量免疫的保護(hù)性效果并以％的動(dòng)物總數(shù)(10/組)中表示。結(jié)果在本發(fā)明中，確定了由細(xì)菌表面展示鑒定的6個(gè)不同肺炎球菌抗原在小鼠膿毒癥/致死率模型中具有保護(hù)作用。用代表SP2190、SP2216和SP0667蛋白的重組抗原進(jìn)行的免疫獲得了最佳保護(hù)水平，而SP0368、SP1732和SP0498顯示了較低的保護(hù)水平(圖8)。如已經(jīng)通過被動(dòng)血清轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)所證實(shí)的，抗體介導(dǎo)了保護(hù)性作用(圖9)。相對(duì)于來自陰性對(duì)照組的小鼠，接受特異性抗-SP2190和抗-SP2216抗體的首次實(shí)驗(yàn)的小鼠免于死亡。重要的是，如已經(jīng)在圖9中顯示的，這些抗原的組合導(dǎo)致了提高的保護(hù)。與用100μ1的每種特異性抗血清(補(bǔ)充以100μ1的首次實(shí)驗(yàn)的血清)的血清治療相比，用150μ1的由重組SP2190或重組SP2216產(chǎn)生的免疫血清(補(bǔ)充以150μ1首次實(shí)驗(yàn)的血清)進(jìn)行的被動(dòng)免疫導(dǎo)致了較低水平的存活率。這些實(shí)驗(yàn)強(qiáng)烈支持這些抗原的組合在針對(duì)肺炎球菌的疾病的接種中具有有益的效果。由于用于免疫的抗原來自血清型4菌株，并且激發(fā)菌株是血清型6Β的，這些實(shí)驗(yàn)證實(shí)了所述抗原是交叉保護(hù)性的。所述SP2216，SP2190和SP1732重組蛋白在從侵入性肺炎球菌性疾病中恢復(fù)的患者，以及在那些接觸肺炎球菌的健康個(gè)體(在家庭中的兒童)的血清中檢測(cè)到了最高水平的抗體(數(shù)據(jù)未顯示)。在細(xì)菌表面展示篩選中鑒定的最頻繁的抗原是SP2216蛋白。具體的目的是比較由人抗體選擇的這種蛋白質(zhì)(N-端氨基酸序列)或者未選擇的這種蛋白質(zhì)(C-端氨基酸序列)的亞結(jié)構(gòu)域的保護(hù)性(圖10Α)。用兩種不同的結(jié)構(gòu)域(作為重組抗原表達(dá)的)免疫后，變得顯而易見的是SP2216蛋白的免疫原性部分具有保護(hù)性潛能，而未被選擇的結(jié)構(gòu)域是無效的并且可與陰性對(duì)照相當(dāng)(圖10Β)?；谠搶?shí)驗(yàn)，由細(xì)菌表面展示檢測(cè)的表位鑒定了細(xì)菌蛋白的保護(hù)性表位和區(qū)域并且可以將這種信息用于隨機(jī)設(shè)計(jì)基于本發(fā)明所述的抗原的亞單位的疫苗。實(shí)施例8確定保護(hù)性抗原的序列保守性實(shí)驗(yàn)方法免疫印跡總細(xì)菌裂解物和培養(yǎng)上清液樣品制備自體外生長(zhǎng)的肺炎鏈球菌菌株。將代表48種不同血清型的60個(gè)(臨床分離株)包括在本研究中。使用BioRadMini-Protean3Cell電泳系統(tǒng)通過SDS-PAGE分離大約25μg總蛋白質(zhì)/泳道，并將蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜(ECL,AmershamPharmacia)上。在5%牛奶中封閉過夜后，將用來自血清型4菌株的重組蛋白SP2216、SP1732和SP2190(并將SP0117/PspA作為內(nèi)對(duì)照)免疫產(chǎn)生的超免疫小鼠血清以5，OOOx稀釋度加入，并使用HRPO標(biāo)記的抗-小鼠IgG進(jìn)行檢測(cè)。DNA測(cè)序使用校正聚合酶Expand(ROCHE)通過PCR擴(kuò)增來自肺炎鏈球菌(血清型4、6B、9V、14、18C、19F和23F)的基因組DNA的SP1732、SP2190和SP22126基因。使用長(zhǎng)度介于27-31個(gè)堿基的基因特異性引物來擴(kuò)增整個(gè)開放閱讀框。將獲得的PCR產(chǎn)物克隆到pCR2.1-TOPO載體(Invitrogen)。在確證(MWG)序列之前，使用QIAprep小量制備試劑盒toiagen)純化重組質(zhì)粒DNA。除了所述7個(gè)血清型外，通過PCR擴(kuò)增來自其它41個(gè)不同血清型的SP2216基因，并對(duì)純化的PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。結(jié)果鑒定誘導(dǎo)抗體的保守抗原對(duì)于開發(fā)有效疫苗是關(guān)鍵的，所述抗體與不同的臨床分離株具有交叉反應(yīng)性。其與靶向肺炎球菌性疾病的基于蛋白的疫苗尤其相關(guān)，因?yàn)榉窝祖溓蚓?肺炎球菌)的超過90個(gè)的不同血清型與人類感染相關(guān)聯(lián)。在完全分析中，確定了由全部來自血清型4的菌株的SP2216、SP2190和SP1732誘導(dǎo)的抗體與在免疫印跡分析中測(cè)試的所有不同的血清型具有廣泛的交叉反應(yīng)性(圖11)。顯著地，顯示電泳遷移率變化(指示不同大小)的SP2190抗原保持了抗體反應(yīng)性，強(qiáng)烈支持優(yōu)勢(shì)免疫表位是保守的。與此相對(duì)地，我們檢測(cè)到了與抗-PspA抗體較低的交叉反應(yīng)性，這與在這種抗原的免疫原性氨基酸序列中已知的差異是一致的。為了直接解決鑒定的保護(hù)性抗原在肺炎鏈球菌的不同血清型中是否是保守的這一問題，對(duì)SP2216、SP1732和SP2190基因進(jìn)行了DNA序列分析。SP2216和SP1732是高度保守的，僅檢測(cè)到少數(shù)幾個(gè)氨基酸變化。對(duì)來自代表47個(gè)不同肺炎鏈球菌血清型的47個(gè)不同臨床分離株的SP22W基因進(jìn)行測(cè)序，并僅在分析菌株的其中兩個(gè)中檢測(cè)到了僅一個(gè)氨基酸交換(圖12)。在大多數(shù)分析的菌株(6個(gè)中的4個(gè))中檢測(cè)到了SP1732基因的一個(gè)或兩個(gè)氨基酸交換(圖13)。如在圖14中顯示的，所述2190抗原在相應(yīng)基因的氨基酸序列中顯示了巨大的變異性。由于插入和缺失，很難計(jì)算在不同SP2190變體中的精確的氨基酸同源性，但是可以估計(jì)其在介于約60和90%之間。但是，基于圖8，9和11表現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)，氨基酸同一性對(duì)于誘導(dǎo)交叉反應(yīng)性和交叉保護(hù)性抗體是足夠的。參考文獻(xiàn)Adamou,J.，等Q001).InfectImmun69:949_58。Altschul,S.，等(1990).TournalofMolecularBiology215:403_10。Bennett,D.，等(1995).TMolRecognit8:52_8。Brown,J.，等Q001).InfectImmun69:6702_6。Burnie,J.，等(1998).TAntimicrobChemother41:319_22。Clackson,T.，等(1991).Nature352:624_8。Devereux,J.，等(1984).Nucleicacidsresearch12:387_95。DiGuiImi,Α.，等(2002).EMBORep3:728-34.Doherty,Ε.，等(2001)·AnnuRevBiophysBiomolStruct30:457-4750Eisenbraun，Μ.，等(1993).DNACellBiol12:791-7。EpidemiologyandPreventionofVaccine-PreventabIeDiseases,7thEdition-SecondPrinting(ThePinkBook).ThePinkBookispublishedbytheCentersforDiseaseControlandPrevention,U.S.DepartmentofHealthandHumanServices。Etz,H.，等QOOl).J.Bacteriol183:6924_35。Ganz,Τ.(1999).Science286:420-421。Georgiou,G.(1997).NatureBiotechnoloRY15:29-34。Gray,B.，等(1979).JInfectDis140:979-83。Gray，B.，等(1986).PediatrInfectDis5:201-7。Hashemzadeh-Bonehi，L.，等(1998).MolMicrobiol30:676-678。Hausdorff，W.，等Q001)·Lancet357:950_2。Heinje,vonG.(1987)e.g.SequenceAnalysisinMolecularBiology,AcedimicPressHemmer,B.，等(1999).NatMed5:1375-82。Hoe,N.，等Q001).JInfectDis183:633_9。Hornef，M.，等Q002)·NatImmunol3:1033-40。Hoskins,J.，等QOOl).JBacteriol183:5709-17。Hyde,T.，等(2001).JAMA286:1857-62。82Jedrzejas,M.(2001).MicrobiolMolBiolRev65187-207。Johanson,K.，等(1995).TBiolChem270:9459-71Jones,P.，等(1986).Nature321:522_5。Kajava,Α.，等(2000).TBacteriol182:2163_9。Kohler,G.，等(1975).Nature256:495_7。Kolaskar,A.，等(1990).FEBSLett276172-4。Lewin，A·，等(2001).TrendsMolMed7:221-8。Marks，J.，等(1992).Biotechnology(NY)10:779-83。McCafferty,J.，等(1990).Nature348:552-40McCormick,Α.，等(2003).NatMed9:424-30。McDaniel,L.，等(1991).InfectImmun59:222_8。Navarre,W.，等(1999).MicrobiolMolBiolRev63174-229Okano,H.，等(1991).TNeurochem56:560_7。OligodeoxynucleotidesasAntisenseInhibitorsofGeneExpression；CRCPress,BocaTation,FL(1988)foradescriptionofthesemoleculesOrange,Μ.,等(1993).PediatrInfectDisJ12244-6Pelton,S.，等(2003).Vaccine21:1562-71。Phillips-Quagliata,J.，等Q000)·TImmunol165:2544_55。Rammensee,H.，等(1999).Immunogenetics50:213_9。Roche,H.，等Q003).InfectImmun711033-41.Romero-Steiner,S.，等(1999).ClinInfectDis29:281_8。Rosenow,C.，等(1997).MolMicrobiol25:819_29。Seeger,C.，等(1984).ProcNatlAcadSciUSA81:5849_52。Shibuya,A.，等(2000).NatureImmunology1:441-6。Skerra,Α.(1994).Gene151:131_5。Talkington,D.，等(1996).MicrobPathog2117-22。Tang,D.，等(1992).Nature356152-4。iTempest,P.，等(1991).BiotechnoloRY(NY)9:266-71。Tettelin,H.，等Q001).Science293:498_506。Tourdot,S.，等(2000).Eur.丁Immunol30:3411-21。Whitney,C.，等Q000).NEngI.丁Med3431917-24。Wiley,J.(1987)CurrentProtocolsinMolecularBiology。ffizemann,T.，等(2001).InfectImmun69:1593-8。表1通過細(xì)菌表面展示鑒定的免疫原性蛋白質(zhì)權(quán)利要求1.一種編碼超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的分離的核酸分子，所述核酸分子包含選自由下列各項(xiàng)組成的組中的核酸序列a)與選自kqIDNo1，101-144的核酸分子具有至少70%序列同一性的核酸分子。b)與a)的核酸分子互補(bǔ)的核酸分子，c)包含a)或b)的核酸分子的至少15個(gè)連續(xù)堿基的核酸分子，d)在嚴(yán)緊雜交條件下與a)、b)或c)的核酸分子退火的核酸分子，e)如果沒有遺傳密碼的簡(jiǎn)并性，與a)、b)、c)或d)中所定義的核酸分子雜交的核酸分子。2.按照權(quán)利要求1的分離的核酸分子，其中序列同一性是至少80%，優(yōu)選至少95%，尤其是100%。3.一種編碼超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的分離的核酸分子，所述核酸分子包含選自由下列各項(xiàng)組成的組中的核酸序列a)與選自SeqIDNo2_6、8、10-16、18-23、25_31、；34、36、38-42、44、47-48、51、53、55-62、64、67、71-76、78-79、81-94、96-100的核酸分子具有至少96%的序列同一性的核酸分子，b)與a)的核酸分子互補(bǔ)的核酸分子，c)包含a)或b)的核酸分子的至少15個(gè)連續(xù)堿基的核酸分子，d)在嚴(yán)緊雜交條件下與a)、b)或c)的核酸分子退火的核酸分子，e)如果沒有遺傳密碼的簡(jiǎn)并性，與a)、b)、c)或d)中所定義的核酸雜交的核酸分子。4.一種包含核酸序列的分離的核酸分子，所述核酸序列選自由下列各項(xiàng)組成的組中a)選自SeqIDNo9、17、M、32、37、43、52、54、65_66、70、80的核酸分子，b)與a)的核酸互補(bǔ)的核酸分子，c)如果沒有遺傳密碼的簡(jiǎn)并性，與a)、b)、c)或d)中所定義的核酸雜交的核酸分子。5.按照權(quán)利要求1、2、3或4任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述核酸是DNA。6.按照權(quán)利要求1、2、3、4或5任一項(xiàng)的核酸分子，其中所述核酸是RNA。7.按照權(quán)利要求1-5任一項(xiàng)的分離的核酸分子，其中所述核酸分子分離自基因組DNA，尤其是來自肺炎鏈球菌(S.pneumoniae)的基因組DNA。8.包括按照權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的核酸分子的載體。9.按照權(quán)利要求8的載體，其中所述載體適合于由按照權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的核酸分子編碼的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的重組表達(dá)。10.一種包括按照權(quán)利要求8或9的載體的宿主細(xì)胞。11.一種包括由按照權(quán)利要求1、2、5、6或7任一項(xiàng)的核酸分子編碼的氨基酸序列的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段，其中所述氨基酸序列選自由kqIDNo145,245-288組成的組中。12.一種包括由按照權(quán)利要求3、5、6或7任一項(xiàng)的核酸分子編碼的氨基酸序列的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段，其中所述氨基酸序列選自由kqIDNo146-150,152,154-160，162-167，169-175，178，180，182-186，188，191-192，195，197，199-206，208，211，215-220，222-223，225-238，240-242，244組成的組中。13.—種包括由按照權(quán)利要求4、5、6或7任一項(xiàng)的核酸分子編碼的氨基酸序列的超免疫血清反應(yīng)性抗原及其片段，其中所述氨基酸序列選自由kqIDNo153，161，168，176，181，187，196，198，209-210，214，224組成的組中。14.一種超免疫血清反應(yīng)性抗原的片段，其選自由如下肽組成的組中包含表2“預(yù)測(cè)的免疫原性氨基酸”和“已鑒定的免疫原性區(qū)域的定位”欄的氨基酸序列的肽；表2的血清反應(yīng)性表位，尤其是含以下氨基酸的肽SeqIDNo145的第4_11位、35_64位、66_76位、101-108位、111-119位和57-114位；SeqIDNo146的第5-27位、32-64位、92-102位、107-113位、119-125位、133-139位、148-162位、177-187位、195-201位、207-214位、241-251位、2M-269位、285-300位、302-309位、317-324位、332-357位、365-404位、411-425位、443-463位、470-477位、479-487位、506-512位、515-520位、532-547位、556-596位、603-610位、616-622位、624-629位、636-642位、646-665位、667-674位、687-692位、708-720位、734-739位、752-757位、798-820位、824-851位、856-865位和732-763位；SeqIDNo147的第14-21位、36-44位、49-66位、102-127位、162-167位、177-196位、45-109位和145-172位；SeqIDNo148的第17-35位、64-75位、81-92位、100-119位、125-172位、174-183位、214-222位、230-236位、273-282位、287-303位、310-315位、331-340位、392-398位、412-420位、480-505位、515-523位、525-546位、553-575位、592-598位、603-609位、617-625位、631-639位、644-651位、658-670位、681-687位、691-704位、709-716位、731-736位、739-744位、750-763位、774-780位、784-791位、799-805位、809-822位、859-870位、880-885位、907-916位、924-941位、943-949位、973-986位、1010-1016位、1026-1036位、1045-1054位、1057-1062位、1082-1088位、1095-1102位、1109-1120位、1127-1134位、1140-1146位、1152-1159位、1169-1179位、1187-1196位、1243-1251位、1262-1273位、1279-1292位、1306-1312位、1332-1343位、1348-1364位、1379-1390位、1412-1420位、1427-1436位、1458-1468位、1483-1503位、1524-1M9位、1574-1588位、1614-1619位、1672-1685位、1697-1707位、1711-1720位、1738-1753位、1781-1787位、1796-1801位、1826-1843位、132-478位、508-592位和1753-1810位JeqIDNo149的第15-43位、49_55位、71-77位、104-110位、123-130位、162-171位、180-192位、199-205位、219-227位、246-2M位、264-270位、279-287位、293-308位、312-322位、330-342位、349-356位、369-377位、384-394位、401-406位、416-422位、432-439位、450-460位、464-474位、482-494位、501-508位、521-529位、536-546位、553-558位、568-574位、584-591位、602-612位、616-626位、634-646位、653-660位、673-681位、688-698位、705-710位、720-726位、736-749位、833-848位、1-199位、200-337位、418-494位和549-647位；SeqIDNo150的第9-30位、65-96位、99-123位、170-178位和1-1位feqIDNo151的第7-32位、34-41位、96-106位、127-136位、154-163位、188-199位、207-238位、272-279位、306-312位、318-325位、341-347位、353-360位、387-393位、399-406位、434-440位、452-503位、575-580位、589-601位、615-620位、635-640位、654-660位、674-680位、696-701位、710-731位、1-548位和660-691位；SeqIDNo152的第4-19位、35-44位、48-59位、77-87位、93-99位、106-111位、130-138位、146-161位和78-84位JeqIDNo153的第24-30位、36-43位、64-86位、93-99位、106-130位、132-145位、148-165位、171-177位、189-220位、230-249位、251-263位、293-300位、302-312位、323-329位、338-356位、369-379位、390-412位和179-193位；SeqIDNo154的第30-39位、61-67位、74-81位、90-120位、123-145位、154-167位、169-179位、182-197位、200-206位、238-244位、267-272位和230-265位；SeqIDNo155的第14-20位、49-65位、77-86位和2_68位JeqIDNo156的第4_9位、26_；35位、42-48位、53-61位、63-85位、90-101位、105-111位、113-121位、129-137位、140-150位、179-188位、199-226位、228-237位、248-255位、259-285位、299-308位、314-331位、337-343位、353-364位、410-421位、436-442位和110-144位；SeqIDNo157的第36-47位、55-63位、94-108位、129-134位、144-158位、173-187位、196-206位、209-238位、251-266位、270-285位、290495位、300-306位、333-344位、346-354位、366-397位、404-410位、422-435位、439-453位、466-473位、515-523位、529-543位、554-569位、571-585位、590-596位、607-618位、627-643位、690-696位、704-714位、720-728位、741-749位、752-767位、780-799位、225-247位和480-507位；SeqIDNo158的第16-25位、36-70位、80-93位、100-106位和78-130位；SeqIDNo159的第18-27位、41-46位、50-57位、65-71位、79-85位、93-98位、113-128位、144-155位、166-178位、181-188位、201-207位、242-262位、265-273位、281-295位、303-309位、318-327位和36-64位；SeqIDNo160的第7-29位、31-44位、50-59位、91-96位、146-153位、194-201位、207-212位、232-238位、264-278位、284490位、296-302位、326-353位、360-370位、378-384位、400-405位、409-418位、420-435位、442-460位、499-506位、529-534位、556-562位、564-576位、644-651位、677-684位、687-698位、736-743位、759-766位、778-784位、808-814位、852-858位、874-896位、920-925位、929-935位、957-965位、1003-1012位、1021-1027位、1030-1044位、1081-1087位、1101-1111位、1116-1124位、1148-1159位、1188-1196位、1235-1251位、1288-1303位、1313-1319位、1328-1335位、1367-1373位、1431-1437位、1451-1458位、1479-1503位、1514-1521位、1530-1540位、1545-1552位、1561-1568位、1598-1605位、1617-1647位、1658-1665位、1670-1676位、1679-1689位、1698-1704位、1707-1713位、1732-1738位、1744-1764位、1-70位、154-189位、922-941位、1445-1462位和1483-1496位；SeqIDNo161的第6-51位、81-91位、104-113位、U6-137位、150-159位、164-174位、197-209位、215-224位、229-235位、256-269位、276-282位、307-313位、317-348位、351-357位、376-397位、418-437位、454-464位、485-490位、498-509位、547-555位、574-586位、602-619位和452-530位JeqIDNo162的第25-31位、39-47位、49-56位、99-114位、121-127位、159-186位、228440位、253-269位、271-279位、303-315位、365-382位、395-405位、414-425位、438-453位和289-384位；SeqIDNo163的第9-位、41-47位、49-位、68-78位、108-114位、117-122位、132-140位、164-169位、179-186位、193-199位、206-213位、244-251位、267-274位、289-294位、309-314位、327-333位、209-249位和286-336位；SeqIDNo164的第9-28位、53-67位、69-82位、87-93位、109-117位、172-177位、201-207位、220-227位、242-247位、262-268位、305-318位、320-325位和286-306位；SeqIDNo165的第4-10位、26-39位、47-58位、63-73位、86-96位、98-108位、115-123位、137-143位、148-155位、160-176位、184-189位、194-204位、235440位、254-259位、272-278位和199-283位；SeqIDNo166的第4-26位、33-39位、47-53位、59-65位、76-83位、91-97位、104-112位、118-137位、155-160位、167-174位、198-207位、242-268位、273-279位、292-315位、320-332位、345-3M位、358-367位、377-394位、403-410位、4M-439位、445-451位、453-497位、511-518位、535-570位、573-589位、592-601位、604-610位和202-242位；SeqIDNo167的第8-30位、36-45位、64-71位、76-82位、97-103位、105-112位、134-151位、161-183位、211-234位、253-268位、270-276位、278-284位、297-305位、309-315位、357-362位、366-372位、375-384位、401-407位、409-416位、441-455位、463-470位、475-480位、490-497位、501-513位、524-537位、552-559位、565-576位、581-590位、592-600位、619-625位、636-644位、646-656位和316-419位；SeqIDNo168的第4-17位、52-58位、84-99位、102-110位、114-120位、124-135位、143-158位、160-173位、177-196位、201-216位、223-250位、259-267位、269-275位和1-67位feqIDNo169的第6-46位、57-67位、69-80位、82-133位、137-143位、147-168位、182-187位、203-209位、214-229位、233-242位、246-280位和53-93位feqIDNo170的第7-40位、50-56位、81-89位、117-123位、202-209位、213-218位、223-229位、248-261位、264-276位、281-288位、303-308位、313-324位、326-332位、340-346位、353-372^,434-443位、465-474位、514-523位、556-564位、605-616位、620-626位、631-636位、667-683位、685-699位、710-719位、726-732位、751-756位、760-771位、779-788位、815-828位、855-867位、869-879位、897-902位、917-924位、926-931位、936-942位、981-1000位、1006-1015位、1017-1028位、1030-1039位、1046-1054位、1060-1066位、1083-1092位、1099-1112位、1122-1130位、1132-1140位、1148-1158位、1161-1171位、1174-1181位、1209-1230位、1236-1244位、1248-1254位、1256-1267位、1269-1276位、1294-1299位、1316-1328位、1332-1354位、1359-1372位、1374-1380位、1384-1390位、1395-1408位、1419-1425位、1434-1446位、1453-1460位、1465-1471位、1474-1493位、1505-1515位、1523-1537位、1547-1555位、1560-1567位、1577-1605位、1633-1651位、1226-1309位、1455-1536位和1538-1605位JeqIDNo171的第4-10位、31-39位、81-88位、106-112位、122-135位、152-158位、177-184位、191-197位、221-227位、230-246位、249-255位、303-311位、317-326位、337-344位、346-362位、365-371位、430-437位、439-446位、453-462位、474-484位和449-467位JeqIDNo172的第9-15位、24-；35位、47-55位、122-128位、160-177位、188-196位、202-208位、216-228位、250-261位、272-303位、318-324位、327-339位、346-352位、355-361位、368-373位、108-218位和344-376位JeqIDNo173的第6-14位、17-48位、55-63位、71-90位、99-109位、116-124位、181-189位、212-223位、232-268位、270-294位、297-304位、319-325位、340-348位、351-370位、372-378位、388-394位、406-415位、421-434位和177-277位；SeqIDNo174的第21-39位、42-61位、65-75位、79-85位、108-115位和11-38位；SeqIDNo175的第4-17位、26-39位、61-76位、103-113位、115-122位、136-142位、158-192位、197-203位、208-214位、225-230位、237-251位和207-225位；SeqIDNo176的第5-11位、27-36位、42-53位、62-70位、74-93位、95-104位、114-119位、127-150位、153-159位、173-179位、184-193位、199-206位、222-241位、248-253位、257-280位、289-295位、313-319位、322-342位、349-365位、368-389位、393-406位、408-413位、426-438位、447-461位、463-470位、476-495位、532-537位、543-550位和225-246位；SeqIDNo177的第4-29位、68-82位、123-130位、141-147位、149-157位、178-191位、203-215位、269-277位、300-307位、327-335位、359-370位、374-380位、382-388位、393-400位、410-417位、434-442位、483-492位、497-503位、505-513位、533-540位、564-569位、601-607位、639-647位、655-666位、693-706位、712-718位、726-736位、752-758位、763-771位、774-780位、786-799位、806-812位、820-828位、852-863位、884-892位、901-909位、925-932位、943-948位、990-996位、1030-1036位、1051-1059位、1062-1068位、1079-1086位、1105-1113位、1152-1162位、1168-1179位、1183-1191位、1204-1210位、1234-1244位、1286-1295位、1318-1326位、1396-1401位、1451-1460位、1465-1474位、1477-1483位、1488-1494位、1505-1510位、1514-1521位、1552-1565位、1593-1614位、1664-1672位、1677-1685位、1701-1711位、1734-1745位、1758-1770位、1784-1798位、1840-1847位、1852-1873位、1885-1891位、1906-1911位、1931-1939位、1957-1970位、1977-1992位、2014-2020位、2026-2032位、2116-2134位、1-348位、373-490位、573-767位、903-1043位、1155-1198位、1243-1482位、1550-1595位、1682-1719位、1793-1921位和2008-2110位feqIDNo178的第10-35位、39-52位、107-112位、181-188位、2洸_236位、238-253位、258-268位、275-284位、296-310位、326-338位、345-368位、380-389位、391-408位、410-418位、420-429位、444-456位、489-505位、573-588位、616-623位、637-643位、726-739位、741-767位、785-791位、793-803位、830-847位、867-881位、886-922位、949-956位、961-980位、988-1004位、1009-1018位、1027-1042位、1051-1069位、1076-1089位、1108-1115位、1123-1135位、1140-1151位、1164-1179位、1182-1191位、1210-1221位、1223-1234位、1242-1250位、1255-1267位、1281-U92位、1301-1307位、1315-1340位、1348-1355位、1366-1373位、1381-1413位、1417-1428位、1437-1444位、1453-1463位、1478-1484位、1490-1496位、1498-1503位、1520-1536位、1538-1546位、1548-1570位、1593-1603位、1612-1625位、1635-1649位、1654-1660位、1670-1687位、1693-1700位、1705-1711位、1718-1726位、1729-1763位、1790-1813位、1871-1881位、1893-1900位、1907-1935位、1962-1970位、1992-2000位、2006-2013位、2033-2039位、2045-2051位、2055-2067位、2070-2095位、2097-2110位、2115-2121位、2150-2171位、2174-2180位、2197-2202位、2206-2228位和1526-1560位；SeqIDNo179的第4-17位、35-48位、54-76位、78-107位、109-115位、118-127位、134-140位、145-156位、169-174位、217-226位、232-240位、256-262位、267-273位、316-328位、340-346位、353-360位、402-409位、416-439位、448-456位、506-531位、540-546位、570-578位、586-593位、595-600位、623-632位、662-667位、674-681位、689-705位、713-724位、730-740位、757-763位、773-778位、783-796位、829-835位、861-871位、888-899位、907-939位、941-955位、957-969位、986-1000位、1022-1028位、1036-1044位、1068-1084位、1095-1102位、1118-1124位、1140-1146位、1148-1154位、1168-1181位、1185-1190位、1197-1207位、1218-1226位、1250-1270位、1272-1281位、1284-1296位、1312-1319位、1351-1358位、1383-1409位、1422-1428位、1438-1447位、1449-1461位、1482-1489位、1504-1510位、1518-1527位、1529-1537位、1544-1551位、1569-1575位、1622-1628位、1631-1637位、1682-1689位、1711-1718位、1733-1740位、1772-1783位、1818-1834位、1859-1872位、1-64位和128-495位；SeqIDNo180的第8-28位、32-37位、62-69位、119-125位、137-149位、159-164位、173-189位、200-205位、221-229位、240-245位、258-265位、268-276位、287-293位、296-302位、323-3位禾口1-95位；SeqIDNo181的第9-18位、25-38位、49-63位、65-72位、74-81位、94-117位、131-137位、139-146位、149-158位、162-188位、191-207位、217-225位、237-252位、255-269位、281-293位、301-326位、332-342位、347-354位、363-370位、373-380位、391-400位、415-424位、441-447位和75-107位；SeqIDNo182的第4-位、64-71位、81-87位、96-116位、121-1位、130-139位、148-155位、166-173位、176-184位、203-215位、231-238位、243-248位、256-261位、280-286位、288-306位、314-329位和67-148位；SeqIDNo183的第4-10位、19-37位、46-52位、62-81位、83-89位、115-120位、134-139位、141-151位、168-186位、197-205位、209-234位、241-252位、322-335位、339-345位、363-379位、385-393位、403-431位、434-442位、447-454位、459-465位、479-484位、487-496位和404-420位JeqIDNo184的第10-35位、46-66位、71-77位、84-93位、96-122位、138-148位、154-172位、182-213位、221-233位、245-263位、269-275位、295-301位、303-309位、311-320位、324-336位、340-348位、351-359位、375-381位和111-198位JeqIDNo185的第14-25位、30-42位、47-61位、67-75位、81-91位、98-106位、114-122位、124-135位、148-193位、209-227位和198-213位；SeqIDNo186的第5-18位、45-50位、82-90位、97-114位、116-136位、153-161位、163-171位、212-219位、221-227位、240-249位、267-281位、311-317位、328-337位、375-381位、390-395位、430-436位、449-455位、484-495位、538-543位、548-554位、556-564位、580-586位、596-602位和493-606位JeqIDNo187的第9_25位、28-34位、37-44位、61-68位、75-81位、88-96位、98-111位、119-133位、138-150位、152-163位、168-182位、186-194位、200-205位、216-223位、236-245位、257464位、279-287位、293-304位、311-318位、325-330位、340-346位、353-358位、365-379位、399-409位、444-453位和303-391位JeqIDNo188的第16-36位、55-61位、66-76位、78-102位、121-130位、134-146位、150-212位、221-239位、255-276位、289-322位、329-357位和29-59位；SeqIDNo189的第8-27位、68-74位、77-99位、110-116位、124-141位、171-177位、202-217位、221-228位、259-265位、275-290位、293-303位、309-325位、335-；343位、345-351位、365-379位、384-394位、406-414位、423-437位、452-465位、478-507位、525-534位、554-560位、611-624位、628-651位、669-682位、742-747位、767-778位、782-792位、804-812位、820-836位、79-231和359-451位；SeqIDNo190的第5-28位、39-45位、56-62位、67-74位、77-99位、110-117位、124-141位、168-176位、200-230位、237-244位、268-279位、287-299位、304-326位、329-335位、348-362位、370-376位、379-384位、390-406位、420-429位、466-471位、479-489位、495-504位、529-541位、545-553位、561-577位、598-604位、622-630位、637-658位、672-680位、682-688位、690-696位、698-709位、712-719位、724-736位、738-746位、759-769位、780-786位、796-804位、813-818位、860-877位、895-904位、981-997位、1000-1014位、1021-1029位、1-162位、206-224位、2M-350位、414-514位和864-938位；SeqIDNo191的第4-11位、19-49位、56-66位、68-101位、109-116位、123-145位、156-165位、177-185位、204-221位、226-234位、242-M8位、251-256位、259-265位、282-302位、307-330位、340-349位、355-374位、377-383位、392-400位、422-428位、434-442位、462-474位和266-322位；SeqIDNo192的第14-43位、45-57位、64-74位、80-87位、106-127位、131-142位、145-161位、173-180位、182-188位、203-210位、213-219位、221-243位、245-2位、304-311位、314-320位、342-348位、3M-365位、372-378位、394-399位、407-431位、436-448位、459-465位、470-477位、484-490位、504-509位、531-537位、590-596位、611-617位、642-647位、723-734位、740-751位、754-762位、764-774位、782-797位、807-812位、824-831位、838-845位、877-885位、892-898位、900-906位、924-935位、940-946位、982-996位、1006-1016位、1033-1043位、1051-1056位、1058-1066位、1094-1108位、1119-11位、1129-1140位、1150-1157位、1167-1174位、1176-1185位、1188-1201位、1209-1216位、1220-1228位、1231-1237位、1243-1248位、1253-1285位、1288-1297位、1299-1307位、1316-1334位、1336-1343位、1350-1359位、1365-1381位、1390-1396位、1412-1420位、1427-1439位、1452-1459位、1477-1484位、1493-1512位、1554-1559位、1570-1578位、1603-1608位、1623-1630位、1654-1659位、1672-1680位、1689-1696位、1705-1711位、1721-1738位、1752-1757位、1773-1780位、1817-1829位、1844-1851位、1856-1863位、1883-1895位、1950-1958位、1974-1990位、172-354位、384-448位、464-644位、648-7位和1357-1370位JeqIDNo193的第8-27位、68-74位、77-99位、110-116位、124-141位、169-176位、201-216位、220-227位、258-264位、274-289位、292-302位、308-324^,334-342位、344-350位、364-372位、377-387位、399-407位、416-429位、445-458位、471-481位、483-500位、518-527位、547-553位、604-617位、621-644位、662-675位、767-778位、809-816位、15-307位、350-448位和496-620位；SeqIDNo194的第4-17位、24-29位、53-59位、62-84位、109-126位、159-164位、189-204位、208-219位、244-249位、274-290位、292-302位、308-324位、334-342^,344-350位、378-389位、391-397位、401-409位、424-432位、447-460位、470-479位、490-504位、521-529位、538-544位、549-555位、570-577位、583-592位、602-608位、615-630^,635-647位、664-677位、692-698位、722-731位、733-751位、782-790位、793-799位、56-267位、337-似6位和495-601位feqIDNo195的第12-22位、49-59位、77-89位、111-121位、136-148位、177-186位、207-213位、217-225位、227-253位、259-274位、296-302位、328-333位、343-3M位、374-383位、424-446位、448-457位、468-480位、488-502位、507-522位、544-550位、553-560位、564-572位、587-596位、604-614位、619-625位、629-635位、638-656位、662-676位、680-692位、697-713位、720-738位、779-786位、833-847位、861-869位、880-895位、897-902位、911-917位、946-951位、959-967位、984-990位、992-1004位、1021-1040位、1057-1067位、1073-1080位和381-403位feqIDNo196的第4-10位、26-31位、46-56位、60-66位、70-79位、86-94位、96-102位、109-118位、132-152位、164-187位、193-206位、217-224位和81-149位；SeqIDNo197的第4-21位、26-37位、48-60位、71-82位、109-117位、120-128位、130-136位、142-147位、181-187位、203-211位、216-223位、247-255位、257-284位、316-325位、373-379位、395-400位、423-435位、448-456位、479-489位、512-576位、596-625位、641-678位、680-688位、692-715位和；346-453位JeqIDNo198的第10-16位、25-31位、34-56位、58-69位、71-89位、94-110位、133-176位、186-193位、208-225位、240-250位、259-266位、302-307^,335-341位、376-383位、410-416位和316-407位；SeqIDNo199的第1H9位、42-56位、60-75位、82-88位、95-110位、116-126位、132-143位、145-160位、166-172位、184-216位和123-164位feqIDNo200的第11-29位、54-63位、110-117位、139-152位、158-166位、172-180位、186-193位、215-236位、240-251位、302-323位、330-335位、340-347位、350-366位、374-381位和252-299位；SeqIDNo201的第18-27位、35-42位、50-56位、67-74位、112-136位、141-153位、163-171位、176-189位、205-213位、225-234位、241-247位、253-258位、269-281位、288-298位、306-3位、3洸-3；34位、355-369位、380-387位和沘9-320位JeqIDNo202的第7-15位、19-41位、56-72位、91-112位、114-122位、139-147位、163-183位、196-209位、258-280位、326-338位、357-363位、391-403位、406-416位和360-378位；SeqIDNo203的第11-18位、29-41位、43-49位、95-108位、142-194位、204-212位、216-242位、247-256位、264-273位和136-149位；SeqIDNo204的第18-24位、33-40位、65-79位、89-102位、113-119位、130-137位、155-161位、173-179位、183-203位、205-219位、223-231位、245-261位、267-274位、296-306位、311-321位、330-341位、344-363位、369-381位、401-408位、415-427位、437-444位、453-464位、472-478位、484-508位、517-524位、526-532位、543-548位和59-180位；SeqIDNo205的第5-13位、52-65位、67-73位、97-110位、112-119位、134-155位和45-177位JeqIDNo206的第6-位、34-43位、57-67位、75-81位、111-128位、132-147位、155-163位、165-176位、184-194位、208-216位、218-229位、239-252位、271-278位、328-334位、363-376位、381-388位、426-473位、481-488位、492-498位、507-513位、536-546位、564-582位、590-601位、607-623位、148-269位、420-450位和610-648位；SeqIDNo207的第4-12位、20-38位、69-75位、83-88位、123-128位、145-152位、154-161位、183-188位、200-213位、245-250位、266-272位、306-312位、332-339位、357-369位、383-389位、395-402位、437-453位、455-470位、497-503位和1-112位JeqIDNo208的第；35_59位、74-86位、111-117位、122-137位和70-154位feqIDNo209的第洸-42位、54-61位、65-75位、101-107位、123-130位、137-144位、148-156位、164-172位、177-192位、213-221位、231-258位和157-249位JeqIDNo210的第四_38位、61-67位、77-87位、94-100位、105-111位、118-158位和1-97位；SeqIDNo211的第7-21位、30-48位、51-58位、60-85位、94-123位、134-156位、160-167位、169-183位、186-191位、216-229位、237-251位、257-267位、272-282位、287-298位和220-243位；SeqIDNo212的第6-29位、34-47位、56-65位、69-76位、83-90位、123-134位、143-151位、158-178位、197-203位、217-235位、243-263位、303-309位、320-333位、338-348位、367-373位、387-393位、407-414位、416-427位、441-457位、473-482位、487-499位、501-509位、514-520位、530-535位、577-583位、590-602位、605-612位、622-629位、641-670位、678-690位、37-71位和238-307位；SeqIDNo213的第7-40位、121-132位、148-161位、196-202位、209-215位、221_2；35位、248-255位、271-280位、288495位、330-339位、395-409位、414-420位、446-451位、475-487位、556-563位、568-575位、580-586位、588-595位、633-638位、643-648位、652-659位、672-685位、695-700位、710-716位、737-742位、749-754位、761-767位、775-781位、796-806位、823-835位、850-863位、884-890位、892-900位、902-915位、934-941位和406-521位；SeqIDNo214的第9-18位、24-46位、51-58位、67-77位、85-108位、114-126位、129-137位、139-146位、152-165位、173-182位、188-195位、197-204位、217-250位、260-274位、296-313位、343-366位、368-384位、427-434位、9437-446位、449-455位、478-484位、492-506位、522-527位、562-591位、599-606位、609-618位、625-631位、645-652位和577-654位feqIDNo215的第13-20位、26-37位、41-53位、56-65位、81-100位、102-114位、118-127位、163-188位、196-202位、231-238位、245-252位、266-285位、293-298位、301-306位和19-78位JeqIDNo216的第10-23位、32-42位、54-66位、73-91位、106-113位、118-127位、139-152位、164-173位、198-207位、210-245位、284-300位、313-318位、330-337位、339-346位、354-361位、387-393位、404-426位、429-439位、441-453位、467-473位、479-485位、496-509位、536-544位、551-558位、560-566位、569-574位、578-588位、610-615位、627-635位、649-675位、679-690位、698-716位、722-734位、743-754位、769-780位、782-787位和480-550位；SeqIDNo217的第6-39位、42-50位、60-68位、76-83位、114-129位、147-162位、170-189位、197-205位、217-231位、239-248位、299-305位、338-344位、352-357位、371-377位、380-451位、459-483位、491-499位、507-523位、537-559位、587-613位、625-681位、689-729位、737-781位、785-809位、817-865位、873-881位、889-939位、951-975位、983-1027位、1031-1055位、1063-1071位、1079-1099位、1103-1127位、1151-1185位、1197-1261位、1269-1309位、1317-1333位、1341-1349位、1357-1465位、1677-1701位、1981-2025位、2227-2271位、2441-2529位、2765-2791位、2993-3009位、3271-3295位、3517-3541位、3755-3795位、4043-4115位、4361-43774513-4557位、4561-4597位、4601-4718位、4749-4768位、74-171位、452-559位和2951-3061位feqIDNo218的第16-22位、30-51位、70-111位、117-130位、137-150位、171-178位、180-188位、191-196位和148-181位；SeqIDNo219的第6-19位、21-46位、50-56位、80-86位、118-126位、167-186位、189-205位、211-242位、244-267位、273-286位、290-297位、307-316位、320-341位和34-60位JeqIDNo220的第5-位、33-43位、48-54位、58-63位、78-83位、113-120位、122-128位、143-152位、157-175位、185-192位、211-225位、227-234位、244-256位、270-281位、284490位、304-310位、330-337位、348-355位、362-379位、384-394位、429-445位、450-474位、483-490位、511-520位、537-546位、548-554位、561-586位、590-604位、613-629位、149-186位、285-431位和573-659位JeqIDNo221的第546位、49-59位、61-67位、83-91位、102-111位、145-157位、185-192位、267-272位、279-286位、292-298位、306-312位、134-220位、235H位和254-280位feqIDNo222的第5-19位、72-79位、83-92位、119-1M位、140-145位、160-165位、167-182位、224-232位、240-252位、259-270位、301-310位、313-322位、1517-15531823-18492117-21252323-23432609-26252921-29373111-31673375-34253589-36133843-39514195-4229位、1557-1629位、1861-1925位、2133-2183位、2347-2371位、26334695位、29454969位、3175-3215位、3437-3461位、3637-3671位、3955-3999位、4241-4305位、1637-1669位、1933-1973位、2195-2219位、2395-2429位、2699-2737位、29774985位、3223-3267位、3469-3513位、3683-3747位、4003-4039位、4313-4353位、1709-1725位、2029-2053位、2275-2299位、2537-2569位、28034867位、3023-3045位、3303-3351位、3549-3557位、3803-3819位、4123-4143位、4385-4393位、1469-1513位、位、1733-1795位、位、2061-2109位、位、2307-2315位、位、25774601位、位、2889-13位、位、3073-3099位、位、3359-3367位、位、3565-3585位、位、3827-3835位、位、4147-4171位、位、4401-4509位、332-343位、347-367位、384-398位、416-429位、431-446位、454-461位和1-169位；SeqIDNo223的第8-17位、26-31位、56-62位、75-83位、93-103位、125-131位、135-141位、150-194位、205-217位、233-258位、262-268位、281-286位和127-168位JeqIDNo224的第6-12位、69-75位、108-115位、139-159位、176-182位、194-214位和46-161位；SeqIDNo225的第6-13位、18-27位、39-48位、51-59位、66-73位、79-85位、95-101位、109-116位、118-124位、144-164位、166-177位、183-193位、197-204位、215-223位、227-236位、242-249位、252-259位、261-270位、289-301位、318-325位和12-58位；SeqIDNo226的第4-10位、26-32位、48-60位、97-105位、117-132位、138-163位、169-185位、192-214位、219-231位、249-261位、264-270位、292-308位、343-356位、385-392位、398-404位、408-417^,435-441位和24-50位；SeqIDNo227的第10-40位、42-48位、51-61位、119-1位和1-118位；SeqIDNo2的第5-17位、40-58位、71-83位、103-111位、123-140位、167-177位、188-204位和116-1位JeqIDNo2的第4-9位、11-50位、57-70位、112-123位、127-138位和64-107位JeqIDNo230的第9-39位、51-67位和1-101位feqIDNo231的第5-14位、17-25位、28-46位、52-59位、85-93位、99-104位、111-120位、122-131位、140-148位、158-179位、187-197位、204-225位、271-283位、285-293位和139-155位JeqIDNo232的第42-70位、73-90位、92-108位、112-127位、152-164位、166-172位、181-199位、201-210位、219-228位、247-274位、295-302位、322-334位、336-346位、353-358位、396-414位、419-425位、432-438位、462-471位、518-523位、531-536位、561-567位、576-589位、594-612位、620-631位、665-671位、697-710位、718-731位、736-756位、765-771位、784-801位和626-653位feqIDNo233的第8-28位、41-51位、53-62位、68-74位、79-85位、94-100位、102-108位、114-120位、130-154位、156-162位、175-180位、198-204位、206-213位、281-294位、308-318位、321-339位、362-368位、381-386位、393-399位、407-415位和2-13位；SeqIDNo234的第4-39位、48-65位、93-98位、106-112位、116-129位和10-36位；SeqIDNo235的第25-32位、35-50位、66-71位、75-86位、90-96位、123-136位、141-151位、160-179位、190-196位、209-215位、222-228位、235-242位、257-263位、270-280位和209-247位；SeqIDNo236的第5-29位、31-38位、50-57位、62-75位、83-110位、115-132位、168-195位、197-206位、216-242位、249-258位、262-269位、333-340位、342-350位、363-368位、376-392位、400-406位、410-421位、423-430位、436-442位、448-454位、460-466位、471-476位、491-496位、511-516位、531-536位、551-556位、571-576位、585-591位、599-605位、27-70位、219-293位、441-504位和512-584位；SeqIDNo237的第4-12位、14-34位、47-75位、83-104位、107-115位、133-140位、148-185位、187-196位、207-212位、224-256位、258-265位、281-287位、289-296位、298-308位、325-333位、345-355位、365-371位、382-395位、424-435位、441-457位、465-472位、483-491位、493-505位、528-534位、536-546位、552-558位、575-584位、589-600位、616-623位和576-591位；SeqIDNo238的第4-76位、78-89位、91-1位、142-148位、151-191位、195-208位、211-223位、226440位、256-277位、279-285位、290-314位、317-323位、358-377位、381-387位、391-396位、398-411位、415-434位、436-446位、454-484位、494-512位、516-523位、538-552位、559-566位、571-577位、579-596位、599-615位、620-627^,635-644位、694-707位、720-734位、737-759位、761-771位和313-3位JeqIDNo239的第7-38位、44-49位、79-89位、99-108位、117-123位、125-132位、137-146位、178-187位、207-237位、245-255位、322-337位、365-387位、398-408位、445-462位、603-608位、623-628位、644-650位、657-671位、673-679位和111-566位；SeqIDNo240的第6-20位、22-35位、39-45位、58-64位、77-117位、137-144位、158-163位、205-210位、218-2位、2四-236位、239-251位、263-277位、299-307位、323-334位、353-384位、388-396位、399-438位、443-448位、458-463位、467-478位、481-495位、503-509位、511-526位、559-576位、595-600位、612-645位、711-721位、723-738位、744-758位、778-807位和686-720位；SeqIDNo241的第10-33位、35-41位、72-84位、1四-138位、158-163位、203-2位、243-252位、258-264位、279-302位、322-329位、381-386位、401-406位、414-435位和184-385位；SeqIDNo242的第4-9位、19-24位、41-47位、75-85位、105-110位、113-146位和45-62位；SeqIDNo243的第4-25位、52-67位、117-1M位、131-146位、173-180位、182-191位、195-206位、215-221位、229-236位、245-252位、258-279位、286-291位、293-302位、314-320位、327-336位、341-353位、355-361位和383-389位；SeqIDNo244的第14-32位、38-50位、73-84位、93-105位、109-114位和40-70位；SeqIDNo245的第5-26位和22-34位；SeqIDNo246的第23-28位和13-39位；SeqIDNo247的第8-14位和21-34位；SeqIDNo248的第4-13位、20-29位、44-50位、59-74位和41-69位；SeqIDNo249的第4-9位、19-42位、48-59位、71-83位和57-91位JeqIDNo250的第4-14位和10-28位；SeqIDNo251的22-28位、32-42位、63-71位、81-111位、149-156位、158-167位、172-180位、182-203位、219-2位和27-49位feqIDNo252的第17-27位和23-32位；SeqIDNo253的第18-24位和沘_38位feqIDNo254的第9-15位和13-27位JeqIDNo255的第13-22位和18-29位；SeqIDNo256的第17_26位和2-11位；SeqIDNo257的第4-33位和16-32位；SeqIDNo258的第4-10位、37-43位、54-84位、92-127位和15-62位feqIDNo259的第4-14位、20-32位、35-60位、69-75位、79-99位、101-109位、116-140位和124-136位feqIDNo260的第2-13位JeqIDNo261的第4-13位、28-42位和42-57位JeqIDNo262的第4-14位、27-44位和14_；35位JeqIDNo263的第4-12位和1-27位；SeqIDNo264的第4-18位、39-45位、47-74位和35-66位；SeqIDNo265的第8-20位、43-77位和17-36位JeqIDNo266的第4-30位、35-45位、51-57位和；35_49位JeqIDNo267的第4-24位、49-57位和15-34位feqIDNo268的第4-22位和8-27位JeqIDNo269的第13-25位、32-59位、66-80位和21-55位JeqIDNo270的第4_10位、24-33位、35-42位、54-65位、72-82位、98-108位和15-30位feqIDNo271的第8-19位和17-47位JeqIDNo272的第12-18位、40-46和31-52位JeqIDNo273的第4-20位、35-78位、83-102位、109-122位和74-86位JeqIDNo274的第7-17位、21-41位、46-63位和2-20位JeqIDNo275的第30-37位和2_33位JeqIDNo276的第4_13位、17-25位和1-15位；SeqIDNo277的第17-31位、44-51位和20-51位；SeqIDNo278的第20-30位和5-23位JeqIDNo279的第13-33位、48-71位和92-110位JeqIDNo280的第4-9位、50-69位、76-88位、96-106位、113-118位和12-34位；SeqIDNo281的第4-24位和6-位JeqIDNo282的第746位和14-30位JeqIDNo283的第9_39位、46-68位、75-82位、84-103位和洸-44位JeqIDNo沘4的第4_30位、33-107位和58_8412位JeqIDNo285的第4-12位和9-51位JeqIDNo286的第12-18位、29-37位和6-37位JeqIDNo287的第4-21位、33-52位、64-71位和16-37位feqIDNo288的第9-19位和2-30位feqIDNo245的第20-37位JeqIDNo246的第8-27位JeqIDNo247的第10-27位JeqIDNo248的第42_59位和52_69位JeqIDNo249的第63-80位和74-91位JeqIDNo250的第1H8位JeqIDNo251的第沘_49位feqIDNo252的第15-32位JeqIDNo253的第4-20位JeqIDNo254的第10-27位JeqIDNo255的第17-；34位JeqIDNo256的第1-18位JeqIDNo257的第16-33位feqIDNo258的第16-36位、30-49位和43-62位JeqIDNo259的第122-139位feqIDNo260的1-18位JeqIDNo261的第41-58位JeqIDNo262的第15_；35位feqIDNo263的第2-27位feqIDNo265的第18-36位feqIDNo266的第；34_51位feqIDNo268的第9-27itl；SeqIDNo269的第22-47位JeqIDNo271的第18-36位和四_47位JeqIDNo272的第32-52位JeqIDNo273的第72-89位JeqIDNo274的第3-20位JeqIDNo275的第3-21位和15-33位；SeqIDNo276的第1-18位；SeqIDNo278的第6-23位；SeqIDNo279的第93-110位JeqIDNo280的第13_；34位JeqIDNo281的第746位和9-位JeqIDNo282的第16-33位JeqIDNo283的第27-44位feqIDNo284的第67-84位feqIDNo285的第10-33位和洸_50位JeqIDNo286的第7_25位和19-37位JeqIDNo287的第17-37位JeqIDNo288的第3-20位和13-30位feqIDNo145的第62-80位和75-93位feqIDNo147的第92-108位JeqIDNo148的第332-349位、177-200位和1755-1777位；SeqIDNo149的第109-133位、149-174位、260-285位和460-485位feqIDNo150的第洸-47位和42-64位feqIDNo151的第22-41位、35巧4位、115-130位、306-325位、401-420位和454-478位；SeqIDNo155的第22-45位；SeqIDNo160的第156-174位、924-940位、1485-1496位、1447-1462位和1483-1498位；SeqIDNo161的第457-475位JeqIDNo163的第302-325位feqIDNo164的第沘8_305位feqIDNo165的第244-266位和260-282位JeqIDNo166的第204-225位和220-241位JeqIDNo167的第324-345位、340-361位、356-377位、372-393位和388-408位JeqIDNo168的第39-64位JeqIDNo169的第54-76位和70-92位feqIDNo170的第1227-1247位、1539-1559位、1554-1574位、1569-1589位、1584-1604位、1242-1262位、1272-1292位、1287-1308位、1456-1477位、1472-1494位、1488-1510位和1505-1526位JeqIDNo172的第；351_368位JeqIDNo173的第179-200位、195-216位、211-232位、227-248位和243-263位；SeqIDNo174的第13-37位；SeqIDNo175的第208-224itl；SeqIDNo177的第42-64位、59-81位、304-3位、323-348位、465-489位、968-992位、1399-1418位、1412-1431位和2092-2111位；SeqIDNo178的第1528-1547位和1541-1560位；SeqIDNo179的第184-200位、367-388位、382-403位、409-4位、425-444位和438-457位；SeqIDNo180的第27-50位和45-67位；SeqIDNo183的第114-131位和405-419位；SeqIDNo184的第113-134位、1四_150位、145-166位、161-182位和177-198位feqIDNo186的第495-515位feqIDNo187的第346-358位feqIDNo190的第208-224位；SeqIDNo192的第178-194位、202-223位、217-238位、288-308位和1355-1372位；SeqIDNo194的第57-78位；SeqIDNo197的第347-369位、364-386位、381-403位、398-420位、415-437位和432-452位JeqIDNo198的第；347_372位；Seq13IDNo199的第147-163位JeqIDNo200的第洸3-288位feqIDNo202的第361-377位；SeqIDNo204的第82-104位、99-121位、116-138位、133-155位和150-171位；SeqIDNo205的第110-130位和125-145位JeqIDNo206的第613-631位、6洸_644位和196-213位feqIDNo208的第78-100位、95-117位、112-134位和1四_151位；SeqIDNo209的第158-180位、175-197位、192-214位、209-231位和226-248位JeqIDNo210的第30-50位、45-65位和60-79位JeqIDNo213的第431-455位和450-474位JeqIDNo214的第579-601位、596-618位、613_6；35位和630-653位JeqIDNo217的第920-927位、98-119位、114-1；35位、130-151位、146-167和162-182位；SeqIDNo219的第36-59位；SeqIDNo220的第194-216位和381-404位；SeqIDNo221的第236-251位和255-279位feqIDNo222的第80-100位和141-164位feqIDNo223的第128-154位；SeqIDNo224的第82-100位、95-116位和111-134位JeqIDNo227的第55-76位、71-92位和87-110位JeqIDNo229的第91-106位JeqIDNo230的第74-96位；SeqIDNo231的第140-157位；SeqIDNo233的第4-13位；SeqIDNo236的第41-65位和499-523位JeqIDNo239的第122-146位、191-215位、288-313位、445-469位和511-535位JeqIDNo241的第347-368位JeqIDNo242的第46-61位JeqIDNo243的第15-37位、32-57位、101-121位、115-135位、138-158位、152-172位、220-242位和236-258位。15.一種制備按照權(quán)利要求11-14任一項(xiàng)的肺炎鏈球菌超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的方法，其包括表達(dá)按照權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)所述的核酸分子。16.一種制備表達(dá)按照權(quán)利要求11-14任一項(xiàng)的肺炎鏈球菌超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的細(xì)胞的方法，其包括用按照權(quán)利要求8或權(quán)利要求9的載體轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染適當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞。17.一種藥物組合物，尤其是疫苗，其包括按照權(quán)利要求11-14任何一項(xiàng)定義的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段或按照權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的核酸分子。18.按照權(quán)利要求17的藥物組合物，尤其是疫苗，其特征在于其還包含免疫刺激物質(zhì)，優(yōu)選選自包含下列各項(xiàng)的組中聚陽離子聚合物，尤其是聚陽離子肽，免疫刺激性脫氧核苷酸(ODNs)，含有至少兩個(gè)賴氨酸-亮氨酸-賴氨酸基序的肽，神經(jīng)活性化合物，尤其是人生長(zhǎng)激素，明礬，弗氏完全或不完全佐劑或它們的組合。19.按照權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的核酸分子或按照權(quán)利要求11-14任一項(xiàng)的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段在制備藥物制劑，尤其是制備針對(duì)肺炎鏈球菌感染的疫苗中的應(yīng)用。20.一種抗體，或至少其有效部分，其結(jié)合于按照權(quán)利要求11-14任一項(xiàng)的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的至少選擇性部分。21.按照權(quán)利要求20的抗體，其中所述抗體是單克隆抗體。22.按照權(quán)利要求20或21的抗體，其中所述有效部分包括Fab片段。23.按照權(quán)利要求20-22任一項(xiàng)的抗體，其中所述抗體是嵌合抗體。24.按照權(quán)利要求20-23任一項(xiàng)的抗體，其中所述抗體是人源化的抗體。25.一種雜交瘤細(xì)胞系，其產(chǎn)生按照權(quán)利要求20-24的任一項(xiàng)的抗體。26.一種制備按照權(quán)利要求20的抗體的方法，其特征在于如下步驟通過對(duì)動(dòng)物施用按照權(quán)利要求11-14任一項(xiàng)所定義的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段在非人動(dòng)物中引發(fā)免疫應(yīng)答，從所述動(dòng)物中去除含抗體的體液，和通過將所述含抗體的體液進(jìn)行進(jìn)一步的純化步驟生產(chǎn)該抗體。27.一種制備按照權(quán)利要求21的抗體的方法，其特征在于以下步驟通過對(duì)動(dòng)物施用按照權(quán)利要求12-15任一項(xiàng)所定義的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段在非人動(dòng)物中引發(fā)免疫應(yīng)答，從所述動(dòng)物中取出脾臟或脾細(xì)胞，產(chǎn)生所述脾臟或脾細(xì)胞的雜交瘤細(xì)胞，選擇并克隆對(duì)所述超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段特異的雜交瘤細(xì)胞，通過培養(yǎng)所述克隆的雜交瘤細(xì)胞和任選進(jìn)一步的純化步驟生產(chǎn)抗體。28.按照權(quán)利要求20-M任一項(xiàng)的抗體在制備治療或預(yù)防肺炎鏈球菌感染的藥物中的應(yīng)用。29.一種拮抗劑，其結(jié)合于按照權(quán)利要求11-14任一項(xiàng)的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段。30.一種鑒定拮抗劑的方法，所述拮抗劑能夠結(jié)合于按照權(quán)利要求11-14任一項(xiàng)的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段，所述方法包括a)在存在能提供響應(yīng)候選拮抗劑與所述超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的結(jié)合的可檢測(cè)信號(hào)的組分的條件下，將分離的或固定的按照權(quán)利要求11-14的任一項(xiàng)的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段與候選的拮抗劑在允許所述候選拮抗劑結(jié)合所述超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的條件下接觸；和b)檢測(cè)響應(yīng)該拮抗劑與超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段結(jié)合所產(chǎn)生的信號(hào)的存在或缺失。31.一種鑒定拮抗劑的方法，所述拮抗劑能降低或抑制按照權(quán)利要求11-14任一項(xiàng)的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段與其相互作用配偶體之間的相互作用活性，所述方法包括a)提供按照權(quán)利要求11-14任一項(xiàng)的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其超免疫片段，b)提供相互作用配偶體，其針對(duì)所述超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段，尤其是按照權(quán)利要求20-M任一項(xiàng)的抗體，c)使所述的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段與所述的相互作用配偶體相互作用以形成相互作用復(fù)合物，d)提供候選拮抗劑，e)允許所述候選拮抗劑和所述的相互作用復(fù)合物之間發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)性反應(yīng)，f)確定所述候選拮抗劑是否抑制或降低了所述超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段與所述相互作用配偶體之間的相互作用活性。32.按照權(quán)利要求11-14任一項(xiàng)的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段在分離和/或純化和/或鑒定所述超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的相互作用配偶體中的應(yīng)用。33.一種體外診斷疾病的方法，所述疾病涉及按照權(quán)利要求11-14任一項(xiàng)的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的表達(dá)，所述方法包括確定按照權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的編碼所述超免疫血清反應(yīng)性抗原和片段的核酸序列的存在或按照權(quán)利要求11-14任一項(xiàng)的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的存在。34.一種體外診斷細(xì)菌感染，尤其是肺炎鏈球菌感染的方法，所述方法包括分析按照權(quán)利要求1-7任一項(xiàng)的編碼所述的超免疫血清反應(yīng)性抗原及片段的核酸序列的存在或按照權(quán)利要求11-14任一項(xiàng)的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的存在。35.按照權(quán)利要求11-14任一項(xiàng)的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段在產(chǎn)生結(jié)合于所述超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的肽中的應(yīng)用，其中所述肽選自包含抗促成素的組中。36.按照權(quán)利要求11-14任一項(xiàng)的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段在制備功能性核酸中的應(yīng)用，其中的功能性核酸選自包含適體和spiegelmers的組中。37.按照權(quán)利要求11-14任一項(xiàng)的核酸分子在制備功能性核糖核酸中的應(yīng)用，其中功能性核糖核酸選自包含核酶、反義核酸和siRNA的組中。全文摘要本發(fā)明公開了編碼超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段的分離的核酸分子以及來自肺炎鏈球菌的超免疫血清反應(yīng)性抗原或其片段，分離這種抗原的方法及其具體應(yīng)用。文檔編號(hào)A61K39/00GK102174534SQ20111004234公開日2011年9月7日申請(qǐng)日期2004年4月15日優(yōu)先權(quán)日2003年4月15日發(fā)明者A·邁因克,E·納吉,M·漢納,S·德瓦陶伊,U·施蒂爾施奈德申請(qǐng)人:英特塞爾股份公司